專利名稱：一種桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖同步生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明專利涉及到從桑白皮中提取桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖的方法，屬于天然產(chǎn)物的提取分離純化領(lǐng)域，包括提取、過(guò)濾、大孔樹脂、離子交換樹脂的分離等相關(guān)技術(shù)。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為桑白皮具有瀉肺平喘，利水消腫的功效，主治肺熱咳喘、水腫脹滿尿少、面目肌膚浮腫等。藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)桑白皮具有降血糖、降血壓、抗病毒、利尿等作用。古代本草如《名醫(yī)別錄》、《大明本草》均記載其治消渴，單用即有效。其主要活性成分是黃酮類、多糖和生物堿類化合物。桑白皮黃酮類化學(xué)成分結(jié)構(gòu)中均連有異戊烯基，具有降血壓、降血糖、抗HIV活性、抗菌、抗癌等作用。I-脫氧野尻霉素(DNJ)是存在于桑白皮中的一種多 羥基哌啶類生物堿，因其可以抑制α -葡萄糖苷酶抑制活性，進(jìn)而具有降血糖、抗病毒等的活性?，F(xiàn)代藥理研究表明桑白皮的多糖類同樣具有降血糖作用。目前，對(duì)桑白皮黃酮類、生物堿的制備方法的專利較多，如申請(qǐng)?zhí)枮?006101116444. 3,01113191. 8,201110289949. 4、201210057847. 4的專利等，但本發(fā)明專利公開的一種采用稀醇提取，經(jīng)樹脂同時(shí)提取分離桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖，有效避免了單一提取所帶來(lái)的資源浪費(fèi)，提高了桑白皮的綜合利用率，降低了桑白皮深加工的成本。同時(shí)制備方法更為簡(jiǎn)便，實(shí)用，易于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種從桑白皮中提取制備的桑白皮總黃酮、總生物堿和總多糖提取物。本發(fā)明還提供一種同時(shí)提取、分離、制備桑白皮總黃酮、總生物堿和總多糖提取物的方法。本發(fā)明所述原料桑白皮來(lái)源?？粕僦参锷?Morus alba L.)的干燥根皮。作為提取桑白皮總黃酮、總生物堿和總多糖的原料，可以是市售桑白皮飲片，也可以是此植物的莖、葉、根皮等任意部位，其中優(yōu)選的藥材部位為干燥根皮。通過(guò)用乙醇提取、稀醇上樣、樹脂串聯(lián)分離、濃乙醇洗脫，簡(jiǎn)化工藝過(guò)程，提高產(chǎn)品總黃酮、總生物堿及總多糖含量，降低成本的一種大孔樹脂、離子交換樹脂純化桑白皮總黃酮、總生物堿的方法。本發(fā)明是依次通過(guò)如下方法步驟來(lái)實(shí)現(xiàn)的(I)原料的制備凈選新鮮桑白皮藥材，將原料桑白皮粉碎至1(Γ40目待用；(2)原料的處理第一次加入8倍桑白皮重量的60%的乙醇先浸泡2 3 h，微沸狀態(tài)下保溫I h，第二次用6倍量60%醇微沸狀態(tài)下保溫I h，提取兩次，合并提取液；(3)回收乙醇將提取液減壓回收乙醇至O. Γ0. 2 g生藥/mL濃度；(4)趁熱過(guò)濾將濃縮至適當(dāng)濃度的提取液過(guò)30(Γ400目濾袋，濾除部分雜質(zhì)；(5)樹脂分離將濾液通過(guò)裝有ΡΙΡ0-01號(hào)大孔樹脂及732強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂的2節(jié)高壓串聯(lián)樹脂；(6)洗脫先用10 BV水洗脫2節(jié)串聯(lián)樹月旨，再分別用6BV 80%的乙醇洗脫大孔樹脂柱、O. 5 mol/L氨水洗脫離子交換柱；(7)回收分別將乙醇、氨水洗脫液及通過(guò)2節(jié)高壓串聯(lián)樹脂后的未吸附液減壓回收得濃縮液；(8)冷凍干燥將減壓回收的濃縮液置_20°C冷凍過(guò)夜后，冷凍干燥成粉末，可得含量為60%以上的總黃酮，40%以上的總生物堿及50%以上的總多糖；(9)成品入庫(kù)將總黃酮、總生物堿及總多糖分裝于雙層塑料袋中，置于干燥處保存。本發(fā)明質(zhì)量控制方法可包括以下含量測(cè)定方法中的一種或幾種I.總黃酮精密稱取桑根酮C對(duì)照品適量(約3mg),置于IOmL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密吸取桑根酮C對(duì)照品溶液0.0，1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL，置加有鎂粉300 mg的具塞刻度試管中。將試管置冷水浴(15 °C左右)中，緩慢滴加濃HCL 3 mL,并不時(shí)振搖試管。最后加甲醇補(bǔ)足至10 mL,搖勻，置沸水浴中加熱60 min,取 出，迅速冷卻至室溫，于481 nm處測(cè)定吸光度。以桑根酮C對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密稱取桑白皮總黃酮提取物樣品各3份，每份IOmg,置于10 mL容量瓶中，力口甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述樣品溶液2 mL置加有鎂粉300 mg的具塞刻度試管中。將試管置冷水浴(15 °C左右)中，緩慢滴加濃HCL 3 mL，并不時(shí)振搖試管。最后加甲醇補(bǔ)足至10 mL，搖勻，置沸水浴中加熱60 min，取出，迅速冷卻至室溫，于481 nm處測(cè)定吸光度，外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。2.桑根酮 C、D色譜條件色譜柱YMC-Pack ODS-AQ (5 μ m, 250 mm X 4. 6 mm);流動(dòng)相甲醇-O. 2% 甲酸水(68:32);流速1. O mL.min-1 ;檢測(cè)波長(zhǎng):283 nm ;柱溫30°C。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密量取對(duì)照品溶液5、10、15、20、25 PL依次進(jìn)樣，測(cè)定各色譜峰峰面積，以峰面積值縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(ug)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。含量測(cè)定精密稱取3批桑白皮總黃酮提取物樣品各3份，每份10mg，置于IOmL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。作為桑根酮含量測(cè)定的供試品溶液。精密吸取上述供試品溶液10 μ ，注入色譜液相儀，測(cè)定各色譜峰峰面積，計(jì)算含量。3.總生物堿精密稱取I-脫氧野尻霉素(DNJ)對(duì)照品適量(約3 mg)，置于IOmL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密吸取I-脫氧野尻霉素(DNJ)對(duì)照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5. O mL，精密加入2%的雷氏銨鹽溶液3 mL，渦旋10 s,置冰浴中放置1.5 ho以3500 r ·η η-1離心10 min,棄去上清液,用水洗漆沉淀至洗脫液至無(wú)色，沉淀用10 mL 70%丙酮溶液溶解，以3500 r *min-l離心5 min,取上清液于523 nm處測(cè)定其吸光度。精密稱取桑白皮總生物堿提取物樣品各3份，每份10 mg,置于10 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。3500 r ·πι η-1離心10 min,取上清液，精密量取上清液5mL于10 mL離心管，精密加入2%的雷氏銨鹽溶液3 mL，渦旋10 s,置冰浴中放置1.5 h。以3500 r ·η η-1離心10 min,棄去上清液,用水洗漆沉淀至洗脫液至無(wú)色,沉淀用10 mL70%丙酮溶液溶解，以3500 r -min-l離心5 min，取上清液于523 nm處測(cè)定其吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。4. I-脫氧野尻霉素(DNJ)含量測(cè)定色譜條件色譜柱YMC-PackODS-AQ (5 μ m, 250 mm X 4.6 mm);流動(dòng)相甲醇-O. 1%冰醋酸水溶液(65:35);流速1. O mL.min-1 ;檢測(cè)波長(zhǎng):265 nm ;柱溫30 °C。標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制柱前衍生化處理20 °C下，DNJ和過(guò)量的熒光試劑FMOC-Cl在pH 8. 5的硼酸鹽緩沖液中反應(yīng)20 min，生成熒光產(chǎn)物DNJ-FM0C。精密吸取各藥材提取液0.2 mL，置于2 mL離心管中，分別依次加入0.4 mL硼酸鹽緩沖液(pH 8.5),0.2 mL10 mmol*L-l FMOC-Cl的乙腈溶液，立即混勻，20 °C恒溫水浴箱中反應(yīng)20 min，加入Imol*L-l甘氨酸50 PL中和剩余的衍生化試劑FMOC-Cl，再加入體積分?jǐn)?shù)為1%的冰醋酸溶液，定容至I mL，混勻，濾過(guò)，即得各藥材供試液。取重蒸水0.2 mL，依上法制備空白供試液。精密吸取DNJ標(biāo)準(zhǔn)品溶液10、20、50、100、200 μ ，分別依次加入0.4 mL硼酸鹽緩沖液(pH 8. 5),0. 2 mL 10 mmol.L-1 FM0C-C1 的乙腈溶液，立即混勻，20 °C反應(yīng) 20 min,加入O. 1%冰醋酸水溶液補(bǔ)足至1.0 mL，混勻，濾過(guò)，依法進(jìn)行測(cè)定。以DNJ進(jìn)樣量為橫坐 標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。含量測(cè)定精密稱取3批桑白皮總生物堿提取物樣品各3份，每份10mg，置于IOmL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻。以上法衍生處理后，精密吸取衍生后溶液10PL，注入色譜液相儀，測(cè)定各色譜峰峰面積，計(jì)算含量。5.總多糖精密稱取葡萄糖對(duì)照品適量(約100 mg),置于IOOmL量瓶中，加純水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密吸取葡萄糖對(duì)照品溶液0.0，O. 1,0.2,0.4,0.6,0.8mL，置加10 mL具塞刻度試管中，用純水補(bǔ)足至I mL，精密加入I mL 5%苯酚試液，搖勻，迅速加入5. O mL濃硫酸，搖勻后置于40 °C水浴中加熱15 min，取出，迅速冷卻至室溫，于490 nm處測(cè)定吸光度。以葡萄糖對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。精密稱取桑白皮總多糖提取物樣品各3份，每份10 mg,置于10 mL容量瓶中，加純水溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取上述樣品溶液I mL，精密加入I mL 5%苯酚試液，搖勻，迅速加入5. O mL濃硫酸，搖勻后置于40 °C水浴中加熱15 min，取出，迅速冷卻至室溫，于490 nm處測(cè)定吸光度，外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量。
具體實(shí)施例方式以下將通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但這些實(shí)施例僅是說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明范圍的任何限制。實(shí)施例I將原料桑白皮100 g粉碎至1(Γ40目，以60%醇為提取溶劑，第一次加入O. 8 kg60%醇先浸泡疒3 h，微沸狀態(tài)下保溫I h，第二次加入O. 6 kg 60%醇微沸狀態(tài)下保溫I h，合并兩次提取液。將提取液減壓濃縮至800 mL。過(guò)3(ΚΓ400目濾袋，得到澄清濾液。濾液先通過(guò)裝有ΡΙΡ0-01號(hào)大孔樹脂的高壓柱，再通過(guò)732強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂高壓柱后，收集通過(guò)兩節(jié)高壓柱后的未吸附液。上樣量為原料(重量g):樹脂(重量g)=l:l時(shí)，完成上樣，流速為l/10BV/min。先用10 BV水沖兩串根聯(lián)柱，后分別用6 BV 80%的乙醇洗脫大孔樹脂柱、O. 5mol/L氨水洗脫離子交換柱。再分別回收乙醇、氨水洗脫液及通過(guò)兩節(jié)高壓串聯(lián)樹脂未吸附液，干燥后分別得到桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖。實(shí)施例2將原料桑白皮I kg粉碎至1(Γ40目，以60%醇為提取溶劑，第一次加入8 kg 60%醇先浸泡疒3 h，微沸狀態(tài)下保溫I h，第二次加入6 kg 60%醇微沸狀態(tài)下保溫I h，合并兩次提取液。將提取液減壓濃縮至8 L0過(guò)3(ΚΓ400目濾袋，得到澄清濾液。濾液先通過(guò)裝有ΡΙΡ0-01號(hào)大 孔樹脂的高壓柱，再通過(guò)732強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂高壓柱后，收集通過(guò)兩節(jié)高壓柱后的未吸附液。上樣量為原料(重量g):樹脂(重量g)=l:l時(shí)，完成上樣，流速為l/10BV/min。先用10 BV水沖兩串根聯(lián)柱，后分別用6 BV 80%的乙醇洗脫大孔樹脂柱、
O.5mol/L氨水洗脫離子交換柱。再分別回收乙醇、氨水洗脫液及通過(guò)兩節(jié)高壓串聯(lián)樹脂未吸附液，干燥后分別得到桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖。實(shí)施例3將原料桑白皮10 kg粉碎至1(Γ40目，以60%醇為提取溶劑，第一次加入80 kg60%醇先浸泡2 3h，微沸狀態(tài)下保溫lh，第二次加入60 kg 60%醇微沸狀態(tài)下保溫lh，合并兩次提取液。將提取液減壓濃縮至80 L0過(guò)3(ΚΓ400目濾袋，得到澄清濾液。濾液先通過(guò)裝有ΡΙΡ0-01號(hào)大孔樹脂的高壓柱，再通過(guò)732強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂高壓柱后，收集通過(guò)兩節(jié)高壓柱后的未吸附液。上樣量為原料(重量g):樹脂(重量g)=l:l時(shí)，完成上樣，流速為l/10BV/min。先用10 BV水沖兩串根聯(lián)柱，后分別用6 BV 80%的乙醇洗脫大孔樹脂柱、
O.5mol/L氨水洗脫離子交換柱。再分別回收乙醇、氨水洗脫液及通過(guò)兩節(jié)高壓串聯(lián)樹脂未吸附液，干燥后分別得到桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖。
權(quán)利要求
1.一種桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖同步生產(chǎn)工藝，其特征在于將桑白皮粉碎至1(Γ40目，粉碎過(guò)細(xì)影響放料，第一次加入8倍桑白皮重量的60%的乙醇先浸泡2 3 h，微沸狀態(tài)下保溫I h，第二次加入6倍量60%醇微沸狀態(tài)下保溫I h，提取兩次，然后合并提取液，將提取液減壓回收乙醇至O. Γ0. 2 g生藥/mL濃度。將此濃縮液過(guò)30(Γ400目濾袋后，濾液通過(guò)裝有PIPO-Ol號(hào)大孔樹脂及732強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂的2節(jié)高壓串聯(lián)樹脂。上樣量為原料(重量g):樹脂(重量g) =1:1時(shí)，完成上樣，流速為l/10BV/min。先用10 BV水洗脫2節(jié)串聯(lián)樹脂，后分別用6BV 80%的乙醇洗脫大孔樹脂柱、O. 5mol/L氨水洗脫離子交換柱。再分別將乙醇、氨水洗脫液及通過(guò)2節(jié)高壓串聯(lián)樹脂后的未吸附液減壓回收得濃縮液后再冷凍干燥。分別得到桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖粗品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖同步生產(chǎn)工藝，其特征是所述提取液減壓回收乙醇至O. Γ0. 2 g生藥/mL濃度，是將提取液在真空度O. 06 Mpa O. lOMpa、溫度60 V 70 °C條件下濃縮至O. I 0.2 g生藥/mL為止，得濃縮液。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖同步生產(chǎn)工藝，其特征是所述洗脫液及未吸附液減壓在真空度O. 06 Mpa O. lOMpa、溫度70 XT 80 °C條件下濃縮至初體積的20%為止，得濃縮液。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖同步生產(chǎn)工藝，其特征是所述冷凍干燥是將濃縮液在冷凍干燥機(jī)真空度小于20pa，冷凍溫度-45°C -60°C條件下干燥殆盡，得到桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖粗品。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖同步生產(chǎn)工藝，其特征是所述桑白皮總黃酮產(chǎn)品純度大于60%、總生物堿純度大于40%、總多糖純度大于50%。
全文摘要
一種桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖生產(chǎn)工藝，其特征在于，包括下述工藝步驟將桑白皮粉碎至10~40目，粉碎過(guò)細(xì)影響放料，第一次加入8倍桑白皮重量的60%的乙醇，微沸狀態(tài)下保溫1 h，第二次加入6 倍量60% 醇微沸狀態(tài)下保溫1 h，提取兩次，然后合并提取液，將提取液減壓回收乙醇至0.1~0.2 g生藥/mL濃度。將此濃縮液過(guò)300~400目濾袋，將濾液通過(guò)裝有PIPO-01號(hào)大孔樹脂及732強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂的2節(jié)高壓串聯(lián)樹脂。先用10 BV水洗脫2節(jié)串聯(lián)樹脂，后分別用6 BV 80%的乙醇洗脫大孔樹脂柱、0.5mol/L氨水洗脫離子交換柱。再分別將乙醇、氨水洗脫液及通過(guò)2節(jié)高壓串聯(lián)樹脂后的未吸附液減壓回收得濃縮液后再冷凍干燥。分別得到桑白皮總黃酮、總生物堿及總多糖粗品。本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單、快捷、廉價(jià)、無(wú)毒，是一種綠色生產(chǎn)方法。
文檔編號(hào)A61P9/12GK102872203SQ20121042568
公開日2013年1月16日 申請(qǐng)日期2012年10月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月30日
發(fā)明者李衛(wèi)民, 袁曉, 周東斌, 段志濤 申請(qǐng)人:廣州牌牌生物科技有限公司