專(zhuān)利名稱(chēng)：一種沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于獸藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
沃尼妙林是新一代截短側(cè)耳素類(lèi)半合成抗生素，屬二萜烯類(lèi)，與泰妙菌素屬同一類(lèi)藥物，是動(dòng)物專(zhuān)用抗生素，主要用于防治豬、牛、羊及家禽的支原體病和革蘭氏陽(yáng)性菌感染。沃尼妙林的作用機(jī)制是在核糖體水平上抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，高濃度時(shí)也抑制RNA的合成。主要是抑菌，高濃度時(shí)也殺菌?？咕V廣，對(duì)G+和G-菌有效，對(duì)霉形體屬和螺旋體屬高度有效。沃尼妙林的藥動(dòng)學(xué)特征是吸收快、吸收率高、藥效好、生物利用度高，但有效血藥濃度維持時(shí)間短，藥物消除較快，休藥期為Id。沃尼妙林的普通制劑，如預(yù)混劑，用藥后在血 液及組織中均勻分布，沒(méi)有靶向性，且藥物進(jìn)入血液循環(huán)后，要與蛋白結(jié)合，經(jīng)受多種酶、組織、器官的代謝和排泄等，只有少量藥物能夠達(dá)到靶部位。如果要提高靶區(qū)的藥物濃度，就必須增加劑量，這不僅增加成本，造成藥物的浪費(fèi)，也增大了藥物的毒副作用和藥物在體內(nèi)的殘留，增加了產(chǎn)生耐藥性的可能性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，從而增加其水溶性，延長(zhǎng)藥物的有效作用時(shí)間，增加其穩(wěn)定性和靶向性，減少臨床用藥次數(shù)。為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟I)配制濃度為25mg/ml的NaHCO3溶液；2)配制檸檬酸緩沖液；3)空白脂質(zhì)體的制備稱(chēng)取O. 3質(zhì)量份的磷脂和O. I質(zhì)量份的膽固醇，加入無(wú)水乙醇于60 70°C水浴中溶解，揮散乙醇成膜后，加入同溫的檸檬酸緩沖液20份，60 70°C水浴中攪拌水化IOmin,后在30 60°C下攪拌40 50min,充分水化后補(bǔ)加蒸懼水至20份，所得脂質(zhì)體溶液通過(guò)微孔濾膜過(guò)濾整粒；4)稱(chēng)取沃尼妙林原粉加入乙醇中攪拌至充分溶解，制成濃度為3mg/ml的沃尼妙林藥液；5)主動(dòng)載藥依次取沃尼妙林藥液、NaHCO3溶液加入到空白脂質(zhì)體中混勻，70°C水浴中保溫20min，隨后立即用冷水降溫，得脂質(zhì)體粗品；6)低溫高速離心處理步驟5)所得粗品，制得沃尼妙林脂質(zhì)體。步驟2)中檸檬酸緩沖液的pH為3. O 6. O。步驟3)中微孔濾膜的孔徑為O. 8 μ m。步驟5)中沃尼妙林藥液、NaHCO3溶液和空白脂質(zhì)體的體積比是1:1:4。步驟6)中低溫高速離心的溫度為4°C,轉(zhuǎn)速為15000r/min,離心時(shí)間20min。
步驟6)中經(jīng)低溫高速離心處理后的精制沃尼妙林脂質(zhì)體經(jīng)濃縮，真空凍干，制得沃尼妙林脂質(zhì)體凍干制劑。沃尼妙林脂質(zhì)體經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理之后，4°C保存，而凍干制劑可常溫保存，不僅保存時(shí)間長(zhǎng)，而且便于運(yùn)輸。脂質(zhì)體是將藥物包封于類(lèi)脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而形成的微型泡囊體，利用脂質(zhì)體可以和細(xì)胞膜融合的特點(diǎn)，將藥物送入細(xì)胞內(nèi)部。脂質(zhì)體具有類(lèi)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，進(jìn)入體內(nèi)主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬而激活機(jī)體自身的免疫功能，并改變包封藥物的體內(nèi)分布，使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中積蓄，從而提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量和降低藥物的毒性。脂質(zhì)體的特點(diǎn)是具有靶向性和淋巴定向性，緩釋作用，降低藥物毒性，提高穩(wěn)定性。本發(fā)明通過(guò)制備N(xiāo)aHCO3溶液、檸檬酸緩沖液、空白脂質(zhì)體和沃尼妙林藥液，主動(dòng)載 藥制備沃尼妙林脂質(zhì)體，該方法簡(jiǎn)單易行，所需設(shè)施簡(jiǎn)單，原料易取，在實(shí)際生產(chǎn)中容易實(shí)施。通過(guò)將沃尼妙林制成脂質(zhì)體的形式，提高其在水中的溶解度，延長(zhǎng)該藥物在體內(nèi)的有效作用時(shí)間，增加其穩(wěn)定性和靶向性，降低毒副作用，減少臨床用藥次數(shù)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)說(shuō)明實(shí)施例I本實(shí)施例沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟I)配制濃度為25mg/ml的NaHCO3溶液；2)配制pH為6. O的檸檬酸緩沖液；3)空白脂質(zhì)體的制備稱(chēng)取O. 3質(zhì)量份的磷脂和O. I質(zhì)量份的膽固醇，加入無(wú)水乙醇于60°C水浴中溶解，揮散乙醇成膜后，加入同溫的檸檬酸緩沖液20份，60°C水浴中攪拌水化lOmin，后在30°C下攪拌50min，充分水化后補(bǔ)加蒸餾水至20份，所得脂質(zhì)體溶液通過(guò)微孔濾膜過(guò)濾整粒；4)稱(chēng)取沃尼妙林原粉加入乙醇中攪拌至充分溶解，制成濃度為3mg/ml的沃尼妙林藥液；5)主動(dòng)載藥按體積比為1:1:4的比例依次取沃尼妙林藥液、NaHCO3溶液加入到空白脂質(zhì)體中混勻，70°C水浴中保溫20min，隨后立即用冷水降溫，得脂質(zhì)體粗品；6)在4°C, 15000r/min轉(zhuǎn)速條件下低溫高速離心處理步驟5)所得粗品20min,制得沃尼妙林脂質(zhì)體。實(shí)施例2本實(shí)施例沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟I)配制濃度為25mg/ml的NaHCO3溶液；2)配制pH為4. 5的檸檬酸緩沖液；3)空白脂質(zhì)體的制備稱(chēng)取O. 3質(zhì)量份的磷脂和O. I質(zhì)量份的膽固醇，加入無(wú)水乙醇于64°C水浴中溶解，揮散乙醇成膜后，加入同溫的檸檬酸緩沖液20份，64°C水浴中攪拌水化IOmin,后在45°C下攪拌45min,充分水化后補(bǔ)加蒸懼水至20份,所得脂質(zhì)體溶液通過(guò)微孔濾膜過(guò)濾整粒；
4)稱(chēng)取沃尼妙林原粉加入乙醇中攪拌至充分溶解，制成濃度為3mg/ml的沃尼妙林藥液；5)主動(dòng)載藥按體積比為1:1:4的比例依次取沃尼妙林藥液、NaHCO3溶液加入到空白脂質(zhì)體中混勻，70°C水浴中保溫20min，隨后立即用冷水降溫，得脂質(zhì)體粗品；6)在4°C, 15000r/min轉(zhuǎn)速條件下低溫高速離心處理步驟5)所得粗品20min,制得沃尼妙林脂質(zhì)體。實(shí)施例3本實(shí)施例沃尼妙林脂質(zhì)體的制備 方法，包括以下步驟I)配制濃度為25mg/ml的NaHCO3溶液；2)配制pH為3. O的檸檬酸緩沖液；3)空白脂質(zhì)體的制備稱(chēng)取O. 3質(zhì)量份的磷脂和O. I質(zhì)量份的膽固醇，加入無(wú)水乙醇于70°C水浴中溶解，揮散乙醇成膜后，加入同溫的檸檬酸緩沖液20份，70°C水浴中攪拌水化lOmin，后在60°C下攪拌40min，充分水化后補(bǔ)加蒸餾水至20份，所得脂質(zhì)體溶液通過(guò)微孔濾膜過(guò)濾整粒；4)稱(chēng)取沃尼妙林原粉加入乙醇中攪拌至充分溶解，制成濃度為3mg/ml的沃尼妙林藥液；5)主動(dòng)載藥按體積比為1:1:4的比例依次取沃尼妙林藥液、NaHCO3溶液加入到空白脂質(zhì)體中混勻，70°C水浴中保溫20min，隨后立即用冷水降溫，得脂質(zhì)體粗品；6)在4°C，15000r/min轉(zhuǎn)速條件下低溫高速離心處理步驟5)所得粗品20min，制得沃尼妙林脂質(zhì)體。包封率檢測(cè)將沃尼妙林脂質(zhì)體溶液取Iml于離心管中，經(jīng)過(guò)4 °C低溫15000r/min離心50min處理之后，取O. 5ml上清液，使用高效液相色譜測(cè)定，作為游離的沃尼妙林C ；另O. 5ml沉淀作為總的沃尼妙林C總，然后包封率=(C總-C游)/C總X 100%。三個(gè)實(shí)施例包封率統(tǒng)計(jì)表
Γ 實(shí)施例I實(shí)施例2實(shí)施例3-
包封率_85%_包封率_90%_包封率_82%臨床實(shí)驗(yàn)河南省某個(gè)豬場(chǎng)，經(jīng)過(guò)臨床癥狀診斷、實(shí)驗(yàn)診斷等手段已確診發(fā)生豬支原體肺炎的病豬群體，臨床癥狀表現(xiàn)明顯，咳嗽，流鼻涕，食欲減退等，實(shí)驗(yàn)室診斷為支原體，從病豬群中隨機(jī)挑選100頭，公母兼有，所挑選的豬個(gè)體重和精神狀態(tài)差不多，分成四組，實(shí)施例1、2、3所制成的沃尼妙林脂質(zhì)體和市售沃尼妙林(湖北武漢頂輝化工有限公司)進(jìn)行治療，本制劑按4ml/kg注射,結(jié)果記錄如下治療情況統(tǒng)計(jì)表
權(quán)利要求
1.一種沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包括以下步驟 O配制濃度為25mg/ml的NaHCO3溶液； 2)配制檸檬酸緩沖液； 3)空白脂質(zhì)體的制備稱(chēng)取O.3質(zhì)量份的磷脂和O. I質(zhì)量份的膽固醇，加入無(wú)水乙醇于60 70°C水浴中溶解，揮散乙醇成膜后，加入同溫的檸檬酸緩沖液20份，60 70°C水浴中攪拌水化IOmin,后在30 60°C下攪拌40 50min,充分水化后補(bǔ)加蒸懼水至20份,所得脂質(zhì)體溶液通過(guò)微孔濾膜過(guò)濾整粒； 4)稱(chēng)取沃尼妙林原粉加入乙醇中攪拌至充分溶解,制成濃度為3mg/ml的沃尼妙林藥液； 5)主動(dòng)載藥依次取沃尼妙林藥液、NaHCO3溶液加入到空白脂質(zhì)體中混勻，70°C水浴中保溫20min，隨后立即用冷水降溫，得脂質(zhì)體粗品； 6)低溫高速離心處理步驟5)所得粗品，制得沃尼妙林脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟2)中檸檬酸緩沖液的pH為3.0 6. O。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟3)中微孔濾膜的孔徑為0.8μπι。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟5)中沃尼妙林藥液、NaHCO3溶液和空白脂質(zhì)體的體積比是1:1:4。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟6)中低溫高速離心的溫度為4°C,轉(zhuǎn)速為15000r/min,離心時(shí)間20min。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟6)中經(jīng)低溫高速離心處理后的精制沃尼妙林脂質(zhì)體經(jīng)濃縮，真空凍干，制得沃尼妙林脂質(zhì)體凍干制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種沃尼妙林脂質(zhì)體的制備方法，包括以下步驟1)配制NaHCO3溶液；2)配制檸檬酸緩沖液；3)空白脂質(zhì)體的制備取磷脂和膽固醇加入無(wú)水乙醇于水浴中溶解，揮散乙醇成膜后加入檸檬酸緩沖液，充分水化后，所得脂質(zhì)體溶液通過(guò)微孔濾膜過(guò)濾整粒；4)取沃尼妙林原粉加入乙醇中溶解制成沃尼妙林藥液；5)主動(dòng)載藥依次取沃尼妙林藥液、NaHCO3溶液加入到空白脂質(zhì)體中混勻，得脂質(zhì)體粗品；6)低溫高速離心處理步驟5)所得粗品，制得沃尼妙林脂質(zhì)體。本發(fā)明通過(guò)制備空白脂質(zhì)體和主動(dòng)載藥，制得包封率高，臨床效果好的沃尼妙林脂質(zhì)體，該方法簡(jiǎn)單易行，增加藥物在水中溶解度、有效作用時(shí)間、穩(wěn)定性及靶向性。
文檔編號(hào)A61K31/22GK102846548SQ20121031846
公開(kāi)日2013年1月2日 申請(qǐng)日期2012年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月31日
發(fā)明者吳紅云, 郭俊清, 李建正, 董曉盈 申請(qǐng)人:鄭州后羿制藥有限公司