專利名稱：顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及神經染色技術，具體地說是一種顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法。
背景技術：
肛提肌為位于骨盆深部血管神經叢下方和坐骨直腸窩上方的薄層肌肉組織，肛提肌病變是引起盆底功能障礙性疾病(包括尿失禁，盆腔器官脫垂，大便失禁，慢性盆腔疼痛)等臨床疾病的主要原因，明確肛提肌內的神經分布有助于發(fā)現導致肛提肌病變的神經源性疾病的發(fā)病機制，減少微創(chuàng)盲法穿刺術對肛提肌內神經主干損傷的機會，降低由于肛提肌神經損傷引起的相關并發(fā)癥。
由于肛提肌的位置特殊、組成復雜(肛提肌由恥骨直腸肌、恥骨尾骨肌和髂骨尾骨肌組成的不規(guī)則形肌肉，部分恥骨直腸肌與男性尿道或女性尿道和陰道周圍的括約肌融合)，對肛提肌及其支配神經肌肉內外走行的研究困難大。目前，解剖學研究中對肛提肌的研究較少，很多學者試圖采用大體解剖、影像學、免疫組化、構建動物模型等研究方法對肛提肌內的神經來源和神經分布方式進行深入闡述。大體解剖過程中由于存在損傷小的神經分支、小的神經分支與細小血管和筋膜分辨不清、解剖過程中引起解剖部位的神經血管位置發(fā)生偏移等缺陷，因此針對肛提肌內神經的大體解剖學研究的結果常存在差異；影像學研究雖能客觀反映肌肉組織形態(tài)，卻無法顯示肌肉組織內的神經走行方向；免疫組化和免疫熒光技術僅能顯示標本局部斷層的細節(jié)，無法勾勒出標本的整體形態(tài)和標本內部的神經走向；構建動物模型時即使用與人類組織結構最為相近的猿類哺乳動物，也無法完全等同于人類的組織結構和神經分布。同時上述研究方法均不能在不破壞標本完整性的情況下，整體顯示肛提肌內神經的立體分布狀態(tài)。由于肛提肌與尿道、陰道、直腸和肛管等內臟器官關系密切，多數婦產科、泌尿外科和肛腸外科的臨床學者誤把肛提肌當做內臟肌肉，而不是全是骨骼肌組成的一部分，同時由于相關專業(yè)的臨床學者欠缺解剖學神經染色方法方面的專業(yè)知識，而經典基礎解剖學研究中針對肛提肌及其支配神經的研究較少。雖然Sihler神經染色方法是一種比較經典的研究骨骼肌內部神經分布的解剖學染色方法，但該方法也只主要用于體表骨骼肌(包括四肢和胸腹肌肉)內神經分布的研究。至今未有采用sihler神經染色方法針對肛提肌內神經分布研究的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，該方法能在不破壞標本完整性的情況下，準確地獲得肛提肌內神經的分布圖像。為實現上述目的，本發(fā)明提供的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法為采用sihler神經染色方法對人體肛提肌標本內的神經進行染色；制作空心透光的硅膠模型，在硅膠模型內部放置背景光源；將完成神經染色的肛提肌標本放在硅膠模型外表面，在背景光源照射下用照相機采集肛提肌內神經分布的立體形態(tài)影像；將完成神經染色的肛提肌標本放在解剖顯微鏡下，在解剖顯微鏡下沿著肛提肌內神經主干追溯神經的走行方向，觀察鏡下標本內神經間連接的微細結構，并用連接于顯微鏡上的圖像采集系統(tǒng)記錄。本發(fā)明提供的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法可以使肛提肌呈透明狀態(tài)而肛提肌內的神經呈紫藍色，進而在背景光源的映射下，達到完整顯示肛提肌內神經分布狀態(tài)的目的，為明確人體肛提肌內神經的走行分布規(guī)律提供有效的研究方法。本發(fā)明提供的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法具有以下積極效果
I、可以從不同的角度觀察、準確的了解肛提肌內神經分支的位置和神經主干及神經末梢的分布規(guī)律，為解剖學、生理學和臨床醫(yī)學的相關研究提供準確的肛提肌內神經分布的
理論基礎。 2、明確肛提肌內的神經分布規(guī)律對于了解肛提肌的功能、進行肛提肌內神經肌電圖的研究，發(fā)展創(chuàng)新盆底微創(chuàng)神經手術具有重要的指導意義。3、進一步了解產傷，肌肉萎縮等生理病理變化對肛提肌及肌肉內神經的影響，為減少、延緩和治療產傷，肛提肌萎縮等生理病理性改變導致的盆底器官脫垂等疾病提供研究基礎。4、為探討由于肛提肌功能及結構異常引起的泌尿道、生殖道和腸道功能的異常的發(fā)病機制提供解剖學依據。
具體實施例方式以下通過一具體實施例進一步說明本發(fā)明。首先，對人體肛提肌標本內的神經進行染色包括以下步驟
I、收集新鮮尸體標本。2、福爾馬林固定采用濃度為10%的福爾馬林溶液浸泡固定骨盆標本4 8周，每周更換福爾馬林溶液一次。3、標本取材去除盆腔臟器，沿骨盆內側壁完整切除盆底肌肉和軟組織，解剖出肛提肌標本。4、軟化褪色將標本浸泡入濃度為3%的KOH溶液中軟化褪色2 3周，每周更換KOH溶液一次，直至標本呈透明或半透明狀。另外，所采用的每IOOml的KOH溶液中用標準滴定管加入3滴濃度為3%的雙氧水。5、脫鈣將標本浸泡入Sihler I溶液中2 4周，每周更換Sihler I溶液一次，直至脫鈣導致的標本渾濁再次變得透明或半透明。6、染色將標本浸泡入Sihler II溶液中3 4周，每周更換Sihler II溶液一次，直至標本被染成深紫色。7、脫色將標本浸入Sihler I溶液中2 4小時,每小時在解剖顯微鏡下觀察，直至肌肉呈淡紫色，神經纖維呈藍紫色，細小神經末梢清晰可辨。8、中和將標本浸入濃度為O. 05%的碳酸鋰溶液I 2小時，每半小時更換一次碳酸鋰溶液，直至浸泡液無明顯變色，神經纖維染色加深。9、純化將標本依次浸入40%、60%、80%和100%甘油溶液中各24小時，使染色的肌肉顏色變淡，神經纖維在透光照射下顯示的更加清晰。10透明將已完成神經染色的標本用100%甘油浸泡保存，使標本的透明度得到改善和加強。上述所采用的Sihler I溶液由I體積的冰醋酸，I體積的甘油和6體積1%水合氯醛水溶液組成；上述所采用的Sihler II溶液由I體積Ehrlich氏蘇木精，I體積的甘油和6體積1%水合氯醛水溶液組成。另外，在進行上述各操作步驟前，均需要用流水沖洗標本上的浸泡液。完成上述步驟后，即可進行以下采集大體和解剖顯微鏡下的圖像的工作
(I )、制作空心透光硅膠模型，模型的外表面為曲面，如球面或拋物面，模型為半球形或近似于半球形，在硅膠模型內部放置背景光源，背景光源采用白熾燈，將完成神經染色的肛
提肌標本放在硅膠模型表面，在背景光源照射下用照相機采集肛提肌內神經分布的立體形態(tài)影像，照相機采用單反數碼照相機。(2)、將完成神經染色的肛提肌放在解剖顯微鏡下，在解剖顯微鏡下沿著肛提肌內神經主干追溯神經的走行方向，觀察鏡下標本內神經間連接的微細結構，并用連接于顯微鏡上的圖像采集系統(tǒng)記錄。完成以上工作后，即可了解肛提肌內神經分布和走行的整體特點，繪制出肛提肌內的神經分布圖，并應用于臨床以及解剖和生理等基礎研究中。
權利要求
1.顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，其特征在于包括以下步驟采用sihler神經染色方法對人體肛提肌標本內的神經進行染色；制作空心透光的硅膠模型，在硅膠模型內部放置背景光源；將完成神經染色的肛提肌標本放在硅膠模型外表面，在背景光源照射下用照相機采集肛提肌內神經分布的立體形態(tài)影像；將完成神經染色的肛提肌標本放在解剖顯微鏡下，在解剖顯微鏡下沿著肛提肌內神經主干追溯神經的走行方向，觀察鏡下標本內神經間連接的微細結構，并用連接于顯微鏡上的圖像采集系統(tǒng)記錄。
2.根據權利要求I所述的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，其特征在于對人體肛提肌標本內的神經進行染色包括以下步驟 (I)、用濃度為10%的福爾馬林固定人體骨盆標本，沿骨盆內側壁完整解剖出肛提肌標本； (2 )、將肛提肌標本浸泡入濃度為3%的KOH溶液中軟化褪色，直至標本呈透明或半透明狀； (3)、將肛提肌標本浸泡入SihlerI溶液中脫鈣，直至脫鈣導致的標本渾濁再次變得透明或半透明； (4)、將肛提肌標本浸泡入SihlerII溶液中染色，直至標本被染成深紫色； (5)、將肛提肌標本浸入SihlerI溶液中脫色，直至神經纖維呈藍紫色，細小神經末梢清晰可辨； (6)、將肛提肌標本浸入濃度為0.05%的碳酸鋰溶液中完成中和過程，直至浸泡液無明顯變色，神經纖維染色加深； (7)、將肛提肌標本依次浸入40%、60%、80%和100%甘油溶液中進行純化； (8)、將已完成神經染色的標本用100%甘油浸泡保存。
3.根據權利要求2所述的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(I)中，采用福爾馬林溶液浸泡固定骨盆標本4 8周，每周更換一次福爾馬林溶液。
4.根據權利要求2所述的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(2)中，每IOOml的KOH溶液中用標準滴定管加入3滴濃度為3%的雙氧水，肛提肌標本浸泡入KOH溶液中軟化褪色2 3周，每周更換KOH溶液一次。
5.根據權利要求2所述的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(3)中，肛提肌標本浸泡入Sihler I溶液中2 4周,每周更換Sihler I溶液一次。
6.根據權利要求2所述的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(4)中，肛提肌標本浸泡入Sihler II溶液中3 4周,每周更換Sihler II溶液一次。
7.根據權利要求2所述的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(5)中，肛提肌標本浸入Sihler I溶液中2 4小時，每半小時更換Sihler I溶液一次。
8.根據權利要求2所述的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(6)中，肛提肌標本浸入碳酸鋰溶液I 2小時，每半小時更換碳酸鋰溶液一次。
9.根據權利要求2所述的顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，其特征在于在所述步驟(7)中肛提肌標本依次浸入40%、60%、80%和100%甘油溶液中各24小時。
全文摘要
顯示及采集人體肛提肌內神經分布圖像的方法，包括以下步驟采用sihler神經染色方法對肛提肌標本內的神經進行染色；制作空心透光的硅膠模型，在硅膠模型內部放置背景光源；將完成神經染色的肛提肌標本放在硅膠模型外表面，在背景光源照射下用照相機采集肛提肌內神經分布的立體形態(tài)影像；將完成神經染色的肛提肌標本放在解剖顯微鏡下，在解剖顯微鏡下沿著肛提肌內神經主干追溯神經的走行方向，觀察鏡下標本內神經間連接的微細結構，并用連接于顯微鏡上的圖像采集系統(tǒng)記錄。本發(fā)明提供的方法可以使肛提肌呈透明狀態(tài)而肛提肌內的神經呈紫藍色，進而在背景光源的映射下，達到完整顯示肛提肌內神經分布狀態(tài)的目的。
文檔編號A61B19/00GK102805664SQ20121030731
公開日2012年12月5日 申請日期2012年8月27日 優(yōu)先權日2012年8月27日
發(fā)明者王文艷, 衛(wèi)兵, 張妤, 范懿雋, 周曉 申請人:王文艷