專利名稱：防控刺參腐皮綜合征的植物源緩釋型復(fù)方抗菌劑制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明為一種防控刺參腐皮綜合征的植物源緩釋型復(fù)方抗菌劑制備方法。
背景技術(shù)：
刺參屬于棘皮動物門，海參綱,刺參科。自然分布在我國渤海、黃海等水域。是我國20多種食用海參中質(zhì)量最好的一種。刺參具有極高的食用及藥用價值，由于消費(fèi)者對其價值的認(rèn)可，市場空間巨大，市場價格一直居高不下。刺參養(yǎng)殖業(yè)是近幾年的投資熱點(diǎn)，成為我國北方沿海水產(chǎn)養(yǎng)殖的新興支柱產(chǎn)業(yè)。養(yǎng)殖產(chǎn)地主要集中在山東、遼寧和河北3??；近年北參南養(yǎng)的態(tài)勢也已形成。伴隨著刺參集約化養(yǎng)殖規(guī)模的迅速擴(kuò)大和技術(shù)、管理滯后，病害問題也日趨嚴(yán)重。刺參腐皮綜合征(又稱化皮病)是刺參養(yǎng)殖過程中的主要病害，是由細(xì)菌原發(fā)或繼發(fā)性感 染引起，典型癥狀是皮膚表面不同程度的發(fā)白潰爛，直至死亡。此病波及面廣，傳染性強(qiáng)，死亡率極高，在池塘養(yǎng)殖及室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖尤為突出。已分離到的病原有黃海希瓦氏菌Shewanella marfla ν 、燦爛弧菌 Vibrio splendidus、假交替單胞菌 Psoudoal teromonas
哈維氏弧菌 KiArio AarFeja'和惡臭假單胞菌^putida 等。此病的病原專一性不強(qiáng)，原發(fā)和繼發(fā)感染均有。針對腐皮綜合征的防治藥物仍以消毒劑、抗生素及其它化學(xué)藥劑為主?？股匾桩a(chǎn)生殘留，嚴(yán)重影響到產(chǎn)品質(zhì)量安全，同時由于耐藥菌株的出現(xiàn)，使病害越來越不好控制。濫用消毒劑會污染環(huán)境并對刺參造成應(yīng)激。植物源中草藥資源豐富，成分復(fù)雜，不會使病原菌產(chǎn)生抗藥性，除抗病外兼具促生長、改善生物品質(zhì)等多種生理功能。尤其是根據(jù)中醫(yī)藥配伍基本理論，中草藥組合使用，可以充分發(fā)揮不同中草藥之間的互補(bǔ)協(xié)同作用，提高療效，使藥物效應(yīng)最大化。已檢索到的防控刺參腐皮綜合征的專利有申請?zhí)?00810012641. 3 “治療刺參細(xì)菌性化皮病的復(fù)方中草藥制劑”；申請?zhí)?00910017176. 7 “刺參腐皮綜合征的抗菌免疫雙效復(fù)方中草藥”。我國的植物源中草藥種類繁多，藥性多變。結(jié)合中醫(yī)藥配伍理論，廣泛的加以篩選試驗(yàn)，可以使豐富的藥用植物資源得到充分利用，增加對刺參抗病藥物的選擇。刺參底棲性生活，口小，攝食緩慢溫和，餌料為小顆粒。目前在刺參養(yǎng)殖上口服使用的中草藥抗菌藥大都是粉碎然后混在常規(guī)飼料中投喂。植物性中草藥比重一般較輕，在水中下沉慢，由于刺參攝食緩慢，到達(dá)底部，被刺參吃掉還要一段時間，這期間藥物成分大部分溶失在水中，使刺參吃不到足夠的藥物劑量，這也是在生產(chǎn)上，普遍反應(yīng)中草藥起效慢的原因之一。選用成本低的緩釋材料，設(shè)計(jì)簡便易行的制作工藝也是刺參抗病藥物劑型上亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決上述存在的問題，提供一種成本低、效果好的防控刺參腐皮綜合征的植物源緩釋型復(fù)方抗菌劑制備方法。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的制備過程如下
I.按2:1:1:1的重量比分別稱取訶子、石榴皮、丹參、丁香混合粉碎至100目，粉碎后加入上述4種中草藥總重量5倍的水浸泡2h，煎煮Ih后，制成中草藥液。2.天然斜發(fā)沸石按上述4種中草藥總重量的10%取料，將天然斜發(fā)沸石粉碎至80目作為緩釋載體，加入到剛剛煎煮完的中草藥液中，攪拌均勻，吸附2h。3.再加入上述4種中草藥總重量的5%面粉攪拌，形成粘稠物質(zhì)，封閉沸石孔隙。4.把上述制得的粘稠物質(zhì)在托盤上攤薄，80°C烘干，最后粉碎過60目篩，即為最終產(chǎn)品。使用方法將上訴粉末狀藥劑摻入刺參常規(guī)飼料中混勻，投喂。
使用劑量每日以刺參體重O. 1%的重量將緩釋型復(fù)方抗菌劑混勻在日常投喂的飼料中。療程癥狀輕時，連續(xù)使用5 7d ;發(fā)病嚴(yán)重，連續(xù)使用7 10d。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)
(O充分調(diào)研刺參腐皮綜合征的發(fā)病原因及流行病學(xué)規(guī)律，以黃海希瓦氏菌為模式測試菌，兼顧其它不同地域來源致病菌，使藥物更具用廣譜適用性。(2)依據(jù)刺參腐皮綜合征的癥狀及病理學(xué)特征，查找中醫(yī)藥典籍，以抑菌性能為主要藥理學(xué)指標(biāo)，結(jié)合調(diào)節(jié)免疫、活血化瘀、收斂、促傷口愈合、誘食性、毒性、成本低廉等性能特點(diǎn)，選用大量植物源中草藥進(jìn)行單味、組方的藥效學(xué)試驗(yàn)。(3)本發(fā)明復(fù)方中草藥配伍合理，充分發(fā)揮了藥物之間的協(xié)同互補(bǔ)作用，顯著優(yōu)于單方配方中的訶子、石榴皮具有很強(qiáng)的抑菌作用，同時具有收斂作用，有助于刺參化皮部位的愈合；丹參除抑菌外，具活血化瘀、促進(jìn)組織修復(fù)再生、提高免疫力的功能；丁香是藥食同源的植物，除抑菌、消炎抗腫外，有助于潰瘍面愈合、促進(jìn)食物消化，其香味使其兼具誘食劑的功能，遮蓋其它藥物的苦澀味。(4)復(fù)方的最小抑菌濃度顯著小于各單味藥單獨(dú)使用的最小抑菌濃度，保證療效的前提下，減少了藥物使用量，降低了使用成本。(5)采用沸石及面粉做為緩釋及粘結(jié)材料，制作工藝簡單，成本低廉，同時兼具沸石和面粉的營養(yǎng)功能；緩釋劑型的應(yīng)用可減少藥物浪費(fèi)，縮短療程，起效快，不延誤病情。(6)選用的中草藥及緩釋載體綠色、無毒副作用、不產(chǎn)生抗藥性、易得、價格低，臨床應(yīng)用中使成活率及治愈率分別達(dá)到90%、85% ;可替代或減少抗生素及消毒劑的使用，對提高無公害苗種生產(chǎn)水平、保證食品安全、維護(hù)生態(tài)環(huán)境、促進(jìn)刺參養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展具重要意義。
具體實(shí)施例方式以北方習(xí)見的刺參腐皮綜合征病原菌一黃海希瓦氏菌為模式測試菌，篩選40種植物源中草藥，測定抑菌圈大小；選擇抑菌效果好的中草藥做最小抑菌濃度試驗(yàn)；進(jìn)行復(fù)配，再做正交試驗(yàn)；選擇最佳復(fù)方，做最小抑菌濃度試驗(yàn)，利用該復(fù)方對其它已報(bào)道的刺參腐皮綜合征病原菌進(jìn)行最小抑菌濃度試驗(yàn)；測試刺參對該復(fù)方制劑的毒性反應(yīng)；最后進(jìn)行臨床治療驗(yàn)證。一、植物源中草藥的抗菌實(shí)驗(yàn)I.測試用模式菌株的準(zhǔn)備。黃海希瓦氏菌是北方沿海引起刺參腐皮綜合征的主要致病菌，由大連海洋大學(xué)水生動物病害實(shí)驗(yàn)室提供。菌種取回后接種到2216E固體培養(yǎng)基活化，28 °C培養(yǎng)48 h后挑選單菌落接種于液體2216E中，培養(yǎng)16 20 h，再用無菌海水(鹽度為28)將菌懸液均稀釋至I XlO7 CFU/ ml備用。2.中草藥選擇及制備
在充分調(diào)研刺參腐皮綜合征的發(fā)病原因及病理學(xué)特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，查找中醫(yī)藥典籍，以抑菌性能為主要藥理指標(biāo),結(jié)合調(diào)節(jié)免疫、活血化瘀、收斂、促傷口愈合、誘食性、成本低廉等特點(diǎn)，選用40種植物源中草藥進(jìn)行試驗(yàn)，分別是金銀花 、訶子、黃連、連翹、白頭翁、大青葉、川芎、大黃、龍膽草、冰片、秦皮、蒲公英、牡丹皮、赤芍 、烏梅、茵陳、石榴皮、穿心蓮、紫花地丁、黃芩、青蒿、黃柏、苦楝皮、夏枯草、金櫻子、苦參、毛冬青、虎杖、艾葉、知母、魚腥草、丁香、桅子、厚樸、馬鞭草、馬齒莧、丹參、吳茱萸、十大功勞和地錦草。使用小型粉碎機(jī)粉碎后稱取5 g中草藥,加入100 ml蒸懼水浸泡Ih后用大火加熱至沸騰，小火熬制30 min，8層紗布過濾，再加水50ml微沸煎煮20 min,合并所得藥液濃縮至IOml，使其終濃度為
0.5 g /mL。濃縮后的各種中草藥分別裝入25 mL比色管，121°C滅菌20min，4°C冰箱內(nèi)保存待用。用打孔機(jī)將定性濾紙打成直徑為6mm的小圓紙片，放入培養(yǎng)皿后包好，121°C滅菌20min，置干燥箱內(nèi)50°C烘干備用。在超凈工作臺中將滅菌濾紙片用無菌鑷子放入到含有中藥液的滅菌離心管(lml)，每個離心管放紙片10張。30min后將紙片放到無菌干燥培養(yǎng)皿中攤開，待紙片干燥后立即裝入無菌離心管中，置于冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?.紙片瓊脂擴(kuò)散法測定抑菌圈
在超凈工作臺中用無菌移液器吸取菌液(I XlO7 CFU/ ml)0. Iml于9cm2216E瓊脂平板上，用涂布棒均勻涂布，蓋好培養(yǎng)皿待平板表面稍干用滅菌鑷子以無菌操作方法取出含藥紙片貼在涂布有細(xì)菌的平板培養(yǎng)基表面，每個培養(yǎng)皿可放置3張藥片。每種藥片作3個重復(fù)。貼片時輕輕按壓，使藥片與培養(yǎng)基密切接觸。完成后將培養(yǎng)皿放在28°C的恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)2(T24h，觀察結(jié)果，見表I。由結(jié)果看出，訶子、牡丹皮、石榴皮、金櫻子、丹參和丁香6味中草藥的效果較好，其余中草藥的抑菌效果較差。其中訶子和石榴皮的抑菌效果最好，表現(xiàn)為強(qiáng)抑菌作用；牡丹皮、金櫻子、丹參和丁香的效果次之，表現(xiàn)為中等抑菌作用。表I 40種中草藥對黃海西瓦氏菌的體外抑菌效果
權(quán)利要求
1.一種防控刺參腐皮綜合征的植物源緩釋型復(fù)方抗菌劑制備方法，其特征在于，制備過程如下 a、按2:1:1:1的重量比分別稱取訶子、石榴皮、丹參、丁香混合粉碎至100目，粉碎后加入上述4種中草藥總重量5倍的水浸泡2h，煎煮Ih后，制成中草藥液； b、天然斜發(fā)沸石按上述4種中草藥總重量的10%取料，將天然斜發(fā)沸石粉碎至80目作為緩釋載體，加入到剛剛煎煮完的中草藥液中，攪拌均勻，吸附2h; c、再加入上述4種中草藥總重量的5%面粉攪拌，形成粘稠物質(zhì),封閉沸石孔隙； d、把上述制得的粘稠物質(zhì)在托盤上攤薄，80°C烘干，最后粉碎過60目篩，即為最終產(chǎn)品。
全文摘要
一種防控刺參腐皮綜合征的植物源緩釋型復(fù)方抗菌劑制備方法，訶子、石榴皮、丹參、丁香按重量比2:1:1:1取料，以藥物重量的10%斜發(fā)沸石粉和5%面粉為緩釋粘結(jié)材料制成，優(yōu)點(diǎn)是藥物具用廣譜性，對致刺參化皮的常見病原菌均有良好效果；中草藥之間配伍合理，充分發(fā)揮了藥物之間的協(xié)同互補(bǔ)作用，顯著優(yōu)于單方,加之采用沸石及面粉做為緩釋及粘結(jié)材料，制作工藝簡單，成本低廉，同時兼具沸石和面粉的營養(yǎng)功能；臨床應(yīng)用中成活率及治愈率分別可達(dá)到90%、85%；可替代或減少抗生素及消毒劑的使用，對提高無公害苗種生產(chǎn)水平、保證食品安全、維護(hù)生態(tài)環(huán)境、促進(jìn)刺參養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展具重要意義。
文檔編號A61K36/61GK102805763SQ20121028268
公開日2012年12月5日 申請日期2012年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月10日
發(fā)明者王維新, 侯文久, 楊鳳影, 蘇暢 申請人:遼寧醫(yī)學(xué)院