一種治療艾滋病的地榆提取物及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種治療艾滋病的地榆提取物及其制備方法，所述地榆提取物主要含有沒(méi)食子酸、鞣花酸、可水解鞣質(zhì)、縮合鞣質(zhì)。本發(fā)明提取物對(duì)R5嗜性和X4嗜性的艾滋病毒具有極佳的抑制活性及極低的細(xì)胞毒性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種治療艾滋病的地榆提取物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種地榆提取物及其制備方法，具體涉及一種治療艾滋病的地榆提取物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]地偷為薔薇科植物地偷Sanguisorba officinalis L.或長(zhǎng)葉地偷Sanguisorba officinalis L.var.1ongifolia(Bert.)Yiiet Li 的干燥根,其性微寒、苦、潘、酸，歸肝、胃、 大腸經(jīng)，有涼血止血、解毒斂瘡之功效。
[0003]地榆的化學(xué)成分研究主要集中在鞣質(zhì)類(lèi)、三萜及三萜皂苷類(lèi)、黃酮及留體類(lèi)化合物，其中以鞣質(zhì)和三萜及三萜皂苷類(lèi)含量最高。鞣質(zhì)被認(rèn)為是其發(fā)揮收斂止血作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。
[0004]鞣質(zhì)(Tannins)又稱(chēng)單寧，是存在于植物體內(nèi)的一類(lèi)結(jié)構(gòu)較復(fù)雜的多酚類(lèi)化合物。K Frendenberg于1920年按照鞋質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)特征將其分為可水解鞋質(zhì) (hydrolysable tannin)和縮合鞋質(zhì)(condensed tannin)兩大類(lèi)?？伤庑|(zhì)，即沒(méi)食子酸酯類(lèi)多酚，是多元醇與沒(méi)食子酸或與沒(méi)食子酸有生源關(guān)系的酚酸所形成的酯，其分子內(nèi)具有酯鍵或苷鍵，在稀酸、稀堿或酶的作用下易水解，產(chǎn)生多元醇和小分子類(lèi)酚酸，根據(jù)其水解產(chǎn)物的不同，分為沒(méi)食子鞋質(zhì)(gallotannin)和鞋花鞋質(zhì)(ellagitannin)兩大類(lèi)?？s合鞣質(zhì)，即聚黃烷醇類(lèi)多酚，是由兒茶素或沒(méi)食子酸兒茶素等黃烷-3-醇類(lèi)化合物以碳-碳鍵聚合而形成的化合物，不被酸所水解，通常三聚體以上才具有鞣質(zhì)的性質(zhì)。
[0005]艾滋病自1981年被首次發(fā)現(xiàn)以來(lái)一直以驚人的速度在全球蔓延，至今人類(lèi)仍然沒(méi)有找到治愈艾滋病的有效方法。當(dāng)前，對(duì)艾滋病的研究主要集中在預(yù)防HIV-1感染疫苗的開(kāi)發(fā)和對(duì)艾滋病患者病情的控制。AIDS是由人免疫缺陷病毒(HIV)感染引起。通常認(rèn)為 HIV作用的主要靶細(xì)胞為淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞，經(jīng)吸附、融合過(guò)程后進(jìn)入宿主細(xì)胞。在 1996年證實(shí)，趨化因子受體CXCR4和CCR5是HIV-1進(jìn)入的共受體。由此，以趨化因子受體為靶點(diǎn)的抗HIV藥物成為研究的新熱點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供地榆在制備抗艾滋病毒藥物中的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種治療艾滋病的地榆提取物；
[0008]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供所述地榆提取物的制備方法；
[0009]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供所述地榆提取物在制備抗艾滋病毒藥物中的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0011]一種治療艾滋病的地榆提取物，由地榆經(jīng)溶劑提取得到，其特征在于，提取物中主要含有:沒(méi)食子酸、鞣花酸、可水解鞣質(zhì)、縮合鞣質(zhì)。
[0012]一種治療艾滋病的地榆提取物，由地榆經(jīng)溶劑提取得到，其特征在于，提取物中主要含有:沒(méi)食子酸0-15%、鞣花酸0-8%、可水解鞣質(zhì)2-20%、縮合鞣質(zhì)1_70%，百分比是指重量百分比。
[0013]優(yōu)選的，所述地榆提取物中，主要含有沒(méi)食子酸4-10%、鞣花酸2-6%、可水解鞣質(zhì) 4-15%、縮合鞣質(zhì) 30-70%。
[0014]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述地榆提取物中，主要含有沒(méi)食子酸6-8%、鞣花酸3-5%、可水解鞣質(zhì)4-12%、縮合鞣質(zhì)45-65%。
[0015]優(yōu)選的，所述地榆提取物中，主要含有沒(méi)食子酸0.1_2%、鞣花酸0.1-1.5%、可水解鞣質(zhì)4-6%、縮合鞣質(zhì)1-20%。
[0016]所述溶劑包括水或有機(jī)溶劑，有機(jī)溶劑選自:①芳香烴類(lèi):苯、甲苯、二甲苯等
脂肪烴類(lèi):戊烷、己烷、辛烷等；③脂環(huán)烴類(lèi):環(huán)己烷、環(huán)己酮、甲苯環(huán)己酮等；④鹵化烴類(lèi): 氯苯、二氯苯、二氯甲烷等；⑤醇類(lèi):甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇等；⑥醚類(lèi):乙醚、環(huán)氧丙烷等；⑦酯類(lèi):醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丙酯等；⑧酮類(lèi):丙酮、甲基丁酮、甲基異丁酮等；⑨ 二醇衍生物:乙二醇單甲醚、乙二醇單乙醚、乙二醇單丁醚等；⑩其他:乙腈、吡啶、苯酚等。
[0017]所述地榆提取物選自由地榆經(jīng)相應(yīng)溶劑提取得到的如下提取物:地榆水提取物、 地榆乙醇提取物、地榆水提取物或乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯萃取得到的乙酸乙酯萃取物、地榆水提取物或乙醇提取物經(jīng)正丁醇萃取得到的正丁醇萃取物、地榆水提取物或乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯、正丁醇依次萃取得到的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物、和/或地榆水提取物或乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯或正丁醇萃取后的水層留余物；
[0018]所述地榆提取物進(jìn)一步優(yōu)選為地榆乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯萃取得到的乙酸乙酯萃取物、地榆乙醇提取物經(jīng)正丁醇萃取得到的正丁醇萃取物或地榆乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯、正丁醇依次萃取得到的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。
[0019]本發(fā)明所述地榆提取物由如下方法制備:
[0020]地榆藥材用水或乙醇提取，提取物進(jìn)一步經(jīng)乙酸乙酯、正丁醇依次萃取或分別萃取即得乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及水層留余物。
[0021]本發(fā)明所述地榆提取物優(yōu)選由如下方法制備:
[0022]取地榆藥材，用水或30-80%乙醇提取，提取液濃縮后即得水提取物或乙醇提取物；水提取物或乙醇提取物進(jìn)一步經(jīng)乙酸乙酯、正丁醇依次萃取或分別萃取即得乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及水層留余物；
[0023]所述乙醇提取方法為浸潰、回流或超聲提??；
[0024]所述的水提取方法為:浸潰或煎煮；
[0025]所述提取溶劑用量為8-10體積倍，提取次數(shù)為1-3次；
[0026]所述濃縮優(yōu)選減壓濃縮；
[0027]所述萃取次數(shù)優(yōu)選為3-5次；
[0028]所述乙醇的濃度優(yōu)選50-80% ；
[0029]本發(fā)明所述地榆提取物可按照常規(guī)工藝加入常規(guī)輔料制成茶劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋制劑、控釋制劑、口服液、滴丸或納米制劑，也可與其他相關(guān)藥物配伍使用。
[0030]本發(fā)明所述地榆或其提取物在制備抗艾滋病毒藥物中的應(yīng)用。
[0031]優(yōu)選的，所述艾滋病毒為R5嗜性或X4嗜性艾滋病毒。
[0032]為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)，需在制備這些劑型時(shí)加入藥學(xué)可接受的輔料，例如:填充劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等；崩解劑包括:淀粉、預(yù)膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等；潤(rùn)滑劑包括:硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等；助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等；粘合劑包括，淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等；甜味劑包括:糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矯味劑包括:甜味劑及各種香精；防腐劑包括:尼泊金類(lèi)、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類(lèi)、 苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等；基質(zhì)包括:PEG6000，PEG4000，蟲(chóng)蠟等。
[0033]本發(fā)明所述可水解鞣質(zhì)含量以水解后沒(méi)食子酸和鞣花酸含量(不包含游離的沒(méi)食子酸和鞣花酸)之和計(jì)算。
[0034]本發(fā)明提取物對(duì)R5嗜性和X4嗜性的艾滋病毒具有極佳的抑制活性及極低的細(xì)胞毒性。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0035]圖1地榆水提取物對(duì)艾滋病毒ADA和HXB2以及水皰性口炎病毒假病毒VSV的抑制作用
[0036]圖2地榆水層留余物對(duì)艾滋病毒ADA和HXB2以及水皰性口炎病毒假病毒VSV的抑制作用
[0037]圖3地榆乙酸乙酯萃取物I對(duì)艾滋病毒ADA和HXB2以及水皰性口炎病毒假病毒 VSV的抑制作用
[0038]圖4地榆正丁醇萃取物II 對(duì)艾滋病毒ADA和HXB2以及水皰性口炎病毒假病毒VSV 的抑制作用
【具體實(shí)施方式】
[0039]實(shí)施例1
[0040]地榆藥材粗粉100g，用10倍水(V/W)煎煮提取2次，每次I小時(shí)，合并兩次提取液，減壓濃縮至干，得地榆水提物13.7g。
[0041]實(shí)施例2
[0042]地榆藥材粗粉lOOOg，用10倍量(V/W)的60%乙醇超聲提取2次，每次I小時(shí)，合并兩次提取液，減壓濃縮至無(wú)醇味后，分別先后用乙酸乙酯、正丁醇各萃取3次，得到3個(gè)極性不同的萃取物:乙酸乙酯萃取物-1 (ETOAC-1)I0.2g、正丁醇萃取物-1 (BUOH-1) 18.4g 及水層留余物(DW) 59.3g。
[0043]實(shí)施例3
[0044]地榆藥材粗粉100g，用10倍量(V/W)的60%乙醇回流提取2次，每次I小時(shí)，合并兩次提取液，減壓濃縮至無(wú)醇味，得60%醇提物12.5g ;醇提物經(jīng)乙酸乙酯萃取5次，合并萃取物，減壓回收至干，即得地榆乙酸乙酯萃取物-1I (ETOAC-1I)。
[0045]實(shí)施例4
[0046]地榆藥材粗粉100g，用10倍量水(V/W)煎煮3次，每次1.5小時(shí)，合并兩次提取液， 減壓濃縮至干，得地榆水提物；水提物經(jīng)正丁醇萃取5次，合并萃取物，減壓回收至干，即得地榆正丁醇萃取物-1I (BUOH-1I)0
[0047] 實(shí)施例5地榆提取物鞣質(zhì)類(lèi)成分含量測(cè)定
[0048]I地榆提取物中沒(méi)食子酸、鞣花酸和可水解鞣質(zhì)的含量測(cè)定
[0049]1.1實(shí)驗(yàn)材料與試劑
[0050]水提物:由實(shí)施例1制備；
[0051]乙酸乙酯萃取物-1、正丁醇萃取物-1和水層留余物:由實(shí)施例2制備；
[0052]乙酸乙酯萃取物-11:由實(shí)施例3制備；
[0053]正丁醇萃取物-11:由實(shí)施例4制備；
[0054]鞋花酸(美國(guó)Sigma公司，純度>98%)；
[0055]沒(méi)食子酸(美國(guó)Sigma公司，純度>98%)
[0056]1.2實(shí)驗(yàn)方法
[0057]1.2.1對(duì)照品溶液的制備
[0058]精密稱(chēng)取鞣花酸對(duì)照品5.22mg置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋定容至刻度，搖勻，0.45iim微孔濾膜過(guò)濾后，為鞣花酸對(duì)照品儲(chǔ)備液(208.g/mL)。精密量取該對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇稀釋?zhuān)渲瞥蓾舛确謩e為5.22、10.44、20.88、41.76、62.64、83.52、 125.28 u g/mL的鞣花酸對(duì)照品系列溶液。
[0059]精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸對(duì)照品5.0Omg置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋定容至刻度，搖勻，0.45 iim微孔濾膜過(guò)濾后，為沒(méi)食子酸對(duì)照品儲(chǔ)備液(200 ii g/mL)。精密量取該對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇稀釋?zhuān)渲瞥蓾舛葹榉謩e為5、10、20、30、40、50、60、80ii g/mL的沒(méi)食子酸對(duì)照品系列溶液。
[0060]1.2.2供試品溶液的制備
[0061]水解前樣品的制備:稱(chēng)取地榆水提物5mg、乙酸乙酯萃取物I和II各2mg、正丁醇萃取物I和II各3mg、水層留余物5mg，置于5mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，
0.45 微孔濾膜過(guò)濾，即得。
[0062]水解后樣品的制備:稱(chēng)取地榆水提物5mg、乙酸乙酯萃取物I和II各2mg、正丁醇萃取物I和II各3mg、水層留余物5mg，置于5mL棕色小瓶，加入0.5mL2.0moI/L鹽酸溶液， 密封，95°C下酸解8h，結(jié)束酸解后，冷卻至室溫，加入甲醇超聲30min，轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中， 甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45um微孔濾膜過(guò)濾，即得。
[0063]1.2.3HPLC分析色譜條件以及樣品的測(cè)定
[0064]色譜柱:UltimateAQ-C18 色譜柱(5 U m, 4.6*250mm,美國(guó) Welch 公司)。
[0065]流動(dòng)相:以乙腈和0.2%甲酸-水為流動(dòng)相，乙腈濃度Omin (5%)-1Omin (15%) -25mi n (25%) -35min (30%) -45min (90%);流速 lmL/min ;進(jìn)樣量 20 y L ;檢測(cè)波長(zhǎng) 254nm。
[0066]將上述制備的對(duì)照品與供試品溶液，分別按照上述HPLC色譜分析條件進(jìn)行分析。 以外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法計(jì)算各供試品溶液酸解前后沒(méi)食子酸和鞣花酸含量?？伤怊焚|(zhì)含量= (水解后沒(méi)食子酸含量+水解后鞣花酸含量)_(水解前沒(méi)食子酸含量+水解前鞣花酸含量)。 即可水解鞣質(zhì)以水解前后的沒(méi)食子酸和鞣花酸之和計(jì)。
[0067]1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0068]各樣品含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。
[0069]表1地榆提取物中可水解鞣質(zhì)含量[0070]
【權(quán)利要求】
1.地榆在制備抗艾滋病毒藥物中的應(yīng)用。
2.一種治療艾滋病的地榆提取物，由地榆經(jīng)溶劑提取得到，其特征在于，提取物中主要含有:沒(méi)食子酸、鞣花酸、可水解鞣質(zhì)、縮合鞣質(zhì)。
3.如權(quán)利要求2所述的地榆提取物，其特征在于所述地榆提取物中，主要含有:沒(méi)食子酸0-15%、鞣花酸0_8%、可水解鞣質(zhì)2-20%、縮合鞣質(zhì)1-70%。
4.如權(quán)利要求2所述的地榆提取物，其特征在于所述地榆提取物中，主要含有:沒(méi)食子酸4-10%、鞣花酸2-6%、可水解鞣質(zhì)4-15%、縮合鞣質(zhì)30-70%。
5.如權(quán)利要求2所述的地榆提取物，其特征在于所述地榆提取物中，主要含有:沒(méi)食子酸0.1-2%、鞣花酸0.1-1.5%、可水解鞣質(zhì)4-6%、縮合鞣質(zhì)1-20%。
6.如權(quán)利要求2-5任一項(xiàng)所述的地榆提取物，其特征在于所述地榆提取物選自地榆水提取物、地榆乙醇提取物、地榆水提取物或乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯萃取得到的乙酸乙酯萃取物、地榆水提取物或乙醇提取物經(jīng)正丁醇萃取得到的正丁醇萃取物、地榆水提取物或乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯、正丁醇依次萃取得到的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物、和/或地榆水提取物或乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯或正丁醇萃取后的水層留余物。
7.如權(quán)利要求6所述的地榆提取物，其特征在于所述地榆提取物選自地榆乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯萃取得到的乙酸乙酯萃取物或地榆乙醇提取物經(jīng)正丁醇萃取得到的正丁醇萃取物或地榆乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯、正丁醇依次萃取得到的乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。
8.如權(quán)利要求2-5任一項(xiàng)所述地榆提取物的制備方法，其特征在于所述地榆提取物由如下方法制備:取地榆藥材，用水或30-80%乙醇按常規(guī)方法提取，提取液減壓濃縮后所得提取物進(jìn)一步經(jīng)乙酸乙酯或正丁醇萃取，或依次經(jīng)乙酸乙酯、正丁醇萃取，制得萃取物，所述萃取物即為地榆提取物。
9.如權(quán)利要求2-7任一 項(xiàng)所述地榆提取物在制備抗艾滋病毒藥物中的應(yīng)用。
10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述艾滋病毒為R5嗜性或X4嗜性艾滋病毒。
【文檔編號(hào)】A61K36/739GK103565970SQ201210268764
【公開(kāi)日】2014年2月12日 申請(qǐng)日期:2012年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月31日
【發(fā)明者】陳建萍, 劉利, 陳志偉, 王冬梅, 楊得坡, 梁建國(guó), 鄭驍 申請(qǐng)人:陳建萍, 劉利