專利名稱：一種靈芝多糖的高效純化技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靈芝多糖的濃縮分離方法，得到的靈芝多糖純度>60%，產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用與保健品、功能食品、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
二、背景技術(shù)
靈芝(Ganoderma I ucidum)是一種營養(yǎng)、保健價值極高的大型擔(dān)子菌。自古以來，靈芝就被認(rèn)為是吉祥、富貴、美好和長壽的象征，有“仙草”和“瑞草”之稱，中華傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)長期以來一直視之為滋補(bǔ)強(qiáng)身、固本扶正的珍貴中草藥。迄今為止，我們已從靈芝中分離得到150多種化合物，可分為多糖類、三萜類、核苷類、呋喃類、生物堿類、氨基酸蛋白質(zhì)類、甾醇類、無機(jī)離子、有機(jī)鍺等十幾類物質(zhì)，多糖具有抗腫瘤生長，減少化療毒副作用，鎮(zhèn)靜安神，提高機(jī)體免疫力，強(qiáng)心，降血脂血壓，保護(hù)肝臟，降血糖，抗氧化及抗衰老等作用。大量研究報告顯示靈芝多糖是靈芝主要生物活性成分，靈芝的各種藥效與靈芝多糖的活性和含量密切相關(guān)，而且靈芝多糖已經(jīng)成為衡量靈芝產(chǎn)品質(zhì)量優(yōu)劣的最重要指標(biāo)之一。靈芝多糖是由肽多糖、葡萄糖、雜多糖等多糖均一體組成的混合物，是靈芝中的主要有效成分?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明靈芝多糖有許多重要的生理功能(I)免疫調(diào)節(jié)功能；(2)抗腫瘤作用；⑶防止衰老；⑷降低血糖、血脂作用；(6)抗血栓抗血凝作用；(5)消除自由基等，在醫(yī)藥保健品開發(fā)等許多領(lǐng)域都具有廣闊的開發(fā)前景，而且靈芝多糖的保健功能已經(jīng)成為目前保健食品及藥品的研究焦點(diǎn)。靈芝多糖的純化可以按分子大小和形狀進(jìn)行分級(如分級沉淀，分子篩等)，也可按分子所帶電荷的性質(zhì)進(jìn)行分級(如電泳，離子交換層析等)。分級沉淀只能用來初步純化，所制備樣品純度較低，而分子篩、電泳、離子交換層析等一般處理量少、濃縮時間長、成本高、不適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。自20世紀(jì)60年代研制成功高滲透性的膜后，超濾技術(shù)迅速發(fā)展起來并已成功的從實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用到大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，其目標(biāo)物質(zhì)收率高、生物活性保護(hù)好、能耗低，適于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
技術(shù)問題本發(fā)明的目的是提供一種靈芝多糖的濃縮分離方法，該方法克服了蒸發(fā)濃縮和大量乙醇沉淀對多糖活性和大量有機(jī)溶劑引入的缺點(diǎn)。同時該方法簡便，易得，靈芝多糖無毒、安全和高活性。所提取的靈芝多糖得率、純度較高，可廣泛應(yīng)用與保健品、功能食品、生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。技術(shù)方案靈芝多糖的濃縮分離方法，步驟如下①稱取靈芝子實(shí)體粉，加入28倍純水混勻，利用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，功率為680W提取17min，抽濾去除靈芝殘?jiān)?；②提取液?jīng)0. 2 i! m微濾除去包含有機(jī)膠體、機(jī)械顆粒的雜質(zhì)；
③微濾后的透過液進(jìn)行超濾處理，料液用蠕動泵輸送到超濾膜，膜的截留分子量為50kDa，膜面積為0. lm2，表面作切相流動，收集濾過液，截留液回流到儲液罐中，當(dāng)料液濃縮至四分之一體積時，結(jié)束超濾過程；超濾時，溫度為35 V ;操作壓力進(jìn)口壓力為0. 82bar,出口壓力為 0. 68bar?？缒翰預(yù)P 為 0. 75bar ；④濃縮液用4倍體積乙醇沉淀，乙醇濃度為95%，凍干后稱重，得一種靈芝多糖粗品，該靈芝多糖粗品的純度為61. 32%。多糖含量的測定方法采用硫酸苯酚法，精密稱取靈芝子實(shí)體粉2g，分別采用熱水浸提和超聲波提取工藝，抽濾去除濾渣，將濾液定溶到250ml容量瓶中，搖勻。精密吸取樣液0. 5ml，置15ml試管中，并用蒸懼水補(bǔ)至2ml,分別加入1111161%苯酹和5ml濃硫酸,搖勻，30°C水浴20min,冷卻后在490nm處測定吸光值A(chǔ)。以105°C下烘干至恒重的葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。有益效果 本發(fā)明與傳統(tǒng)的蒸發(fā)濃縮方法相比得到的靈芝多糖純度高、時間短，并且有利于簡化后續(xù)的純化工藝，同時起到了濃縮和初步分離的作用。在靈芝多糖的開發(fā)應(yīng)用中，分離提取是最關(guān)鍵的步驟之一，它不僅影響著產(chǎn)品的純度，還與產(chǎn)品的活性價值有著密切的相關(guān)性。目前多糖在制備過程中，大多通過蒸發(fā)方式對提取液進(jìn)行濃縮，即便是采用真空濃縮，溫度也要超過60°C，非真空蒸發(fā)方式溫度更高，長時間加熱不僅對產(chǎn)品感官品質(zhì)有影響，而且對多糖生物活性也有影響。針對上述情況，本發(fā)明采用了對多糖提取液采用微濾結(jié)合超濾的濃縮分離技術(shù)。提取液經(jīng)0. 2 y m微濾除去有機(jī)膠體、機(jī)械顆粒等雜質(zhì)。料液用蠕動泵輸送到膜表面作切相流動，收集濾過液，截留液回流到儲液罐中，當(dāng)料液濃縮至至四分之一左右，結(jié)束超濾過程。料液先過截流分子量為IOOkD的超濾膜，透過液再依次過50kDa、30kDa、10kDa、3kDa、IkDa(膜面積為0.1m2)的超濾膜，如錯誤！未找到引用源。所示。濃縮液用四倍體積乙醇沉淀，用4500r/min離心15min,棄去上清液,沉淀分別用無水乙醇、丙酮、乙醚洗漆三次后，冷凍干燥。根據(jù)各組分質(zhì)量選擇超濾膜孔徑大小。實(shí)驗(yàn)條件為溫度35°C;操作壓力進(jìn)口壓力為 0. 82bar,出口壓力為 0. 68bar。跨膜壓差A(yù)P = (0. 82+0. 68)/2 = 0. 75bar。在對超濾膜孔徑選擇的基礎(chǔ)上，確定了靈芝多糖超濾分離的最佳條件摸的孔徑50KDa，操作溫度35°C;操作壓力進(jìn)口壓力為0. 82bar，出口壓力為0. 68bar?？缒翰預(yù)P=(0. 82+0. 68)/2 = 0. 75bar。經(jīng)過超濾后靈芝多糖的純度達(dá)到了 61. 32% (圖2、表I)。此外，IL提取液用微濾結(jié)合超濾的方法比真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮節(jié)約50%時間，大大簡化了靈芝多糖的濃縮、純化過程。表I蒸發(fā)濃縮和超濾濃縮制備多糖純度比較
濃縮方式多糖純度(％)
_]真空旋轉(zhuǎn)蒸52.6
0.2 微濾+50KD 超濾_69A1_本發(fā)明克服了傳統(tǒng)加熱濃縮時間長，多糖純度低，產(chǎn)品品質(zhì)差等缺點(diǎn)，本工藝具有選擇性高、操作時間短、溶劑消耗量少、有效成分純度高等優(yōu)點(diǎn)，所得到了靈芝多糖純度高，安全、無毒，產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。
四

圖I是超濾分離工藝流程圖2是靈芝多糖的超濾膜選擇
五具體實(shí)施例方式靈芝購于江蘇南通安惠生物科技有限公司實(shí)施例I :真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮靈芝多糖①稱取20克靈芝子實(shí)體粉，加入560ML純水混勻，用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(浙江寧波新芝公司；型號JY98-III超聲波細(xì)胞粉碎機(jī))680W提取17min，抽濾去除靈芝殘?jiān)谑褂眯D(zhuǎn)蒸發(fā)設(shè)備將濾液濃縮至140ML ；③邊攪拌邊緩緩向濃縮液中加入560ML的95%乙醇，4°C下醇沉12h，用4500rpm離心15min，棄去上清液，沉淀分別用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌三次，冷凍干燥得靈芝粗多糖粉末，粗多糖純度為52.6%。實(shí)施例2 :超濾濃縮分離靈芝粗多糖①稱取20克靈芝子實(shí)體粉，加入560ML純水混勻，用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)(浙江寧波新芝公司；型號JY98-III超聲波細(xì)胞粉碎機(jī))680W提取17min，抽濾去除靈芝殘?jiān)虎谔崛∫航?jīng)0. 2 y m微濾除去有機(jī)膠體、機(jī)械顆粒等雜質(zhì)。③微濾后的透過液進(jìn)行超濾處理，料液用蠕動泵輸送到膜(50kDa，膜面積為
0.Im2)表面作切相流動，收集濾過液，截留液回流到儲液罐中，當(dāng)料液濃縮至四分之一體積左右，結(jié)束超濾過程。濃縮液用4倍體積乙醇沉淀(95%)，凍干后稱重，得一種靈芝多糖粗品，純度為69. 11%。
采用本發(fā)明與傳統(tǒng)熱水提取方法相比，靈芝多糖的純度提高31%。
權(quán)利要求
1.一種靈芝多糖粗品，其特征如下 它是由靈芝子實(shí)體粉末采用超聲波提取，提取液微濾、超濾、濃縮、乙醇沉淀、冷凍干燥得到一種靈芝多糖粗品，其純度為61. 32%。
2.一種制備權(quán)利要求I所述的靈芝多糖粗品的方法，其特征是由下列步驟組成 ①稱取靈芝子實(shí)體粉，加入28倍純水混勻，利用超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，功率為680W提取17min,抽濾去除靈芝殘洛； ②提取液經(jīng)0.2 y m微濾除去包含有機(jī)膠體、機(jī)械顆粒的雜質(zhì)； ③微濾后的透過液進(jìn)行超濾處理，料液用蠕動泵輸送到超濾膜，膜的截留分子量為50kDa，膜面積為0. lm2，表面作切相流動，收集濾過液，截留液回流到儲液罐中，當(dāng)料液濃縮至四分之一體積時，結(jié)束超濾過程；超濾時，溫度為35°C ;操作壓力進(jìn)口壓力為0. 82bar,出口壓力為0. 68bar?？缒翰預(yù) P為0. 75bar ； ④濃縮液用4倍體積乙醇沉淀，乙醇濃度為95%，凍干后稱重，得一種靈芝多糖粗品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種靈芝多糖微濾結(jié)合超濾的高效綠色純化技術(shù)。以超聲波提取的靈芝多糖溶液為實(shí)驗(yàn)材料，提取液經(jīng)0.2μm微濾除去有機(jī)膠體、機(jī)械顆粒等雜質(zhì)。微濾后的透過液進(jìn)行超濾處理，料液用蠕動泵輸送到膜(50kDa，膜面積為0.1m2)表面作切相流動，收集濾過液，截留液回流到儲液罐中，當(dāng)料液濃縮至四分之一體積左右，結(jié)束超濾過程，4倍體積乙醇沉淀(95％)，凍干后稱重。實(shí)驗(yàn)條件為溫度35℃；操作壓力進(jìn)口壓力為0.82bar，出口壓力為0.68bar。跨膜壓差ΔP＝(0.82+0.68)/2＝0.75bar。經(jīng)過超濾后靈芝多糖的純度達(dá)到了61.32％，大大簡化了靈芝多糖的濃縮及進(jìn)一步的純化過程。所得的靈芝多糖可廣泛用于藥品和保健食品的基料。
文檔編號A61P3/10GK102718881SQ20121021973
公開日2012年10月10日 申請日期2012年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月29日
發(fā)明者安辛欣, 方勇, 楊文建, 林德祥, 胡秋輝, 董艷紅, 趙立艷, 辛志宏, 鄭惠華, 陳坤, 陳貴堂 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué), 南京財(cái)經(jīng)大學(xué)