專利名稱：萱草花提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥的提取物及其制備方法，特別涉及萱草花提取物及其制備方法。
背景技術(shù)：
萱草花，即黃花菜(Hemerocallis citrina Baroni)，又名“金針菜”、“一日百合”， 俗稱“忘憂草”，屬百合科萱草屬多年生草本植物植物，在我國(guó)各地多有種植，明代李時(shí)珍在 《本草綱目》中稱其有安神醒腦、增智寬胸、美容養(yǎng)血、解熱消毒、除煩通乳之功效?，F(xiàn)代研究萱草花具有補(bǔ)腦健智、化瘀止血、通絡(luò)止痛、抗菌消炎等功效，它具有增強(qiáng)免疫力、活血化瘀、保肝抗炎、抗菌抗病毒、抑制腫瘤、清除氧自由基和抑菌作用等多種功能。其具有豐富的營(yíng)養(yǎng)成份，主要化學(xué)成分有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物，還有多種維生素、生物堿、苷、黃酮類、胡蘿卜素、揮發(fā)油、鞣質(zhì)以及無(wú)機(jī)礦物鈣、磷，以黃酮類化合物為主要成分，可以藥食兩用，鑒于黃酮類化合物具有保肝抗炎、鎮(zhèn)定補(bǔ)腦、延緩衰老抗抑郁等多種生理活性功效，黃酮類化合物的研究日益引起人們的關(guān)注。為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用萱草花這種藥食兩用的植物，萱草花的總黃酮的提取工藝是值得研究和開(kāi)發(fā)的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開(kāi)一種萱草花提取物制備方法；本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開(kāi)萱草花提取物的指紋圖譜檢測(cè)方法。本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明所述萱草花提取物的制備方法，包括如下步驟步驟1 萱草花乙醇60°C以下提??；步驟2 乙醇提取液過(guò)大孔樹(shù)脂柱；步驟3 回收乙醇得萱草花提取物。所述步驟1中優(yōu)選萱草花乙醇30°C以下提??；所述步驟1中萱草花乙醇提取為30°C以下浸提或滲漉；優(yōu)選的，步驟1浸提加入乙醇的量為藥材的6-12體積倍，乙醇為60% -95%乙醇； 最優(yōu)選為70%乙醇；優(yōu)選的，步驟1浸提時(shí)間為18-48小時(shí)；優(yōu)選的，步驟1乙醇浸提，濾過(guò)，濾渣再加入乙醇，浸泡，濾過(guò)；合并濾液；步驟1進(jìn)一步優(yōu)選為將萱草花中加入8體積倍的70%乙醇，300C以下浸泡24小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用，濾渣再加入8體積倍的70%乙醇，300C以下浸泡24小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液；所述步驟1 滲漉的方法為用70%乙醇作溶劑，30°C以下浸漬24小時(shí)，30°C以下以每分鐘l_3ml的速度滲漉，收集滲漉液。步驟2優(yōu)選的，乙醇提取液液過(guò)大孔樹(shù)脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用20% -95%乙醇洗脫2-6倍柱體積；步驟2優(yōu)選的，大孔樹(shù)脂柱為AB-8大孔樹(shù)脂柱；乙醇洗脫液的濃度為 55% -65%。步驟2優(yōu)選的，乙醇冷浸液過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇。本發(fā)明還包括用所述萱草花提取物作為藥物活性成分制成的任何一種藥物制劑。 可以按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，例如膠囊劑、片劑、顆粒劑、散劑、口服液、丸劑等制劑。本發(fā)明進(jìn)一步提供萱草花提取物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟步驟1 萱草花乙醇在60°C以下提取，得乙醇提取液；步驟2 乙醇提取液過(guò)大孔樹(shù)脂柱；步驟3 回收乙醇得萱草花提取物。步驟4 萱草花提取物HPLC指紋圖譜檢測(cè)。所述步驟1中優(yōu)選萱草花乙醇30°C以下提取；所述步驟1 萱草花乙醇提取為30°C以下浸提或滲漉；優(yōu)選的，步驟1浸提加入乙醇的量為藥材的6-12體積倍，乙醇為60% -95%乙醇； 最優(yōu)選為70%乙醇；優(yōu)選的，步驟1浸提時(shí)間為18-48小時(shí)；優(yōu)選的，步驟1乙醇浸提，濾過(guò)，濾渣再加入乙醇，浸泡，濾過(guò)；合并濾液；步驟1進(jìn)一步優(yōu)選為將萱草花中加入8體積倍的70%乙醇，300C以下浸泡24小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用，濾渣再加入8體積倍的70%乙醇，300C以下浸泡24小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液；所述步驟1 滲漉的方法為用70%乙醇作溶劑，30°C以下浸漬24小時(shí)，30°C以下以每分鐘l_3ml的速度滲漉，收集滲漉液。步驟2優(yōu)選的，乙醇提取液液過(guò)大孔樹(shù)脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用 20% -95%乙醇洗脫2-6倍柱體積；步驟2優(yōu)選的，大孔樹(shù)脂柱為AB-8大孔樹(shù)脂柱；乙醇洗脫液的濃度為 55% -65%。步驟2優(yōu)選的，乙醇冷浸液過(guò)AB-8大孔樹(shù)脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用60%乙醇洗脫3倍柱體積，回收乙醇。本發(fā)明還提供萱草花提取物的HPLC指紋圖譜檢測(cè)方法色譜條件C18色譜柱，流動(dòng)相甲醇-水(0. 5%冰醋酸)梯度洗，0. 5-1. SmL/mirT1， 檢測(cè)波長(zhǎng)200-300nm，柱溫20-30°C ；所述甲醇-水(0.5%冰醋酸)梯度洗脫的條件為第 0-20min 甲醇為20%，0. 5%的冰醋酸水溶液為80% ；第20_30min 甲醇為30%，0. 5%的冰醋酸水溶液為70% ；第30-70min 甲醇為30%，0. 5%的冰醋酸水溶液為70% ；第70min 到最后甲醇為80%，0. 5%的冰醋酸水溶液為20% ；對(duì)照品溶液的制備稱取蘆丁，加甲醇制成對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取萱草花提取物粉末，加甲醇超聲提取，靜置，取上清液濾過(guò)，取濾液，即得。
檢測(cè)方法吸取對(duì)照品、供試品溶液，進(jìn)樣檢測(cè)。對(duì)照品溶液的制備方法優(yōu)選為稱取蘆丁，加甲醇制成每ImL含0. 2176mg的溶液， 搖勻，即得；供試品溶液的制備方法優(yōu)選為精密稱取樣品粉末2g，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，超聲處理30分鐘，甲醇補(bǔ)足損失的重量，靜置放冷，取上清液，0. 22 μ m微孔濾膜濾過(guò)，取濾液，即得。所述指紋圖譜包括12個(gè)共有特征峰，以3號(hào)為蘆丁為參照峰，相對(duì)保留時(shí)間及相對(duì)峰面積分別為1號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0. 232，相對(duì)峰面積為0. 051 0. 278 ；2號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為0. 936，相對(duì)峰面積為0. 020-0. 212 ；4號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為1. 039，相對(duì)峰面積為0. 023-0. 041 ；5號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為1. 079，相對(duì)峰面積為0. 008-0. 178 ；，6號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為1. 095，相對(duì)峰面積為0. 005-0. 029 ；7號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為1. 115，相對(duì)峰面積為0. 045-0. 367 ；8號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為1. 135，相對(duì)峰面積為0. 049-0. 269 ；9號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為1. 159，相對(duì)峰面積為0. 004-0. 023 ；10號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為1. 171，相對(duì)峰面積為0. 003-0. 014 ；11號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為1. 218，相對(duì)峰面積為0. 012-0. 062 ；12號(hào)峰相對(duì)保留時(shí)間為1. 326，相對(duì)峰面積為0. 002-0. 313?，F(xiàn)有技術(shù)采用乙醇回流法提取濃縮的藥材溶液在DlOl柱分離之前會(huì)有大量脂溶性雜質(zhì)析出，粘稠難以上柱。本發(fā)明萱草花提取物制備方法中發(fā)現(xiàn)采用乙醇冷浸，雜質(zhì)少， 特別是水溶性雜質(zhì)較少，大生產(chǎn)時(shí)浸漬藥液不會(huì)因放置產(chǎn)生沉淀而堵塞大孔樹(shù)脂柱子，極大的減少了對(duì)樹(shù)脂的污染，利于樹(shù)脂的再生利用，經(jīng)濟(jì)適用，并且突破以往冷浸比加熱提取有效成分會(huì)減少的認(rèn)識(shí)，提取效率高，不僅經(jīng)濟(jì)并有高效率，適于大生產(chǎn)。本發(fā)明所提供的萱草花的指紋圖譜檢測(cè)方法，是通過(guò)大量具體創(chuàng)造性試驗(yàn)篩選后得到，分析方法穩(wěn)定可靠有效，為萱草花的鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制提供了依據(jù)。實(shí)驗(yàn)例1紫外分光光度法檢測(cè)總黃酮含量1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液和萱草提取液分別按實(shí)驗(yàn)方法顯色后，在波長(zhǎng)400 600nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液顯色后在510nm處有最大吸收，萱草提取液顯色在此波長(zhǎng)下也有吸收，實(shí)驗(yàn)選用510nm為測(cè)定波長(zhǎng)。2供試品溶液的制備精密稱取制劑(由實(shí)施例1制備)20mg，置IOmL量瓶中，加30%乙醇至刻度，超聲處理IOmin,即得。3對(duì)照品溶液的制備精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，加甲醇制成每ImL含0. 2mg的溶液，搖勻，即得。4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0. 5ml，Iml，2ml，3ml，4ml，5ml，6ml，分別置25ml量瓶中，各加水至6. Oml，加5 %亞硝酸鈉溶液Iml，混勻，放置6分鐘，加10 %硝酸鋁溶液Iml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)試劑為空白，在 510nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為 Y = 13. 65X+0. 0128，r = 0. 9997，結(jié)果表明蘆丁濃度在 0. 004026 0. 048312mg/ml 與吸光度具有良好的線性關(guān)系。
5測(cè)定方法取供試品溶液1ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加水至 6. 0ml”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含蘆丁的濃度，計(jì)算，即得。6方法學(xué)考察結(jié)果6. 1精密度試驗(yàn)按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法對(duì)批號(hào)為20110530的藥材處理得供試液，UV法進(jìn)行測(cè)定， 一份樣品連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果見(jiàn)表1，RSD為0. 16%。表1精密度試驗(yàn)結(jié)果
測(cè)定次數(shù)吸光度吸光度平均值RSD%10. 552220. 550030. 55150. 551350. 1640. 550750. 552260. 55156. 2穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一樣品溶液，每隔10分鐘測(cè)定一次吸光度，樣品在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好，結(jié)果見(jiàn)表2。表2穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
測(cè)定時(shí)間(min)吸光度吸光度平均值RSD%00. 61950. 63491. 20100. 6306200. 6376300. 6376400. 6412500. 6403600. 6376結(jié)果顯示，樣品在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD值為1. 20%。6. 3重現(xiàn)性試驗(yàn)，按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法對(duì)批號(hào)20110530的樣品進(jìn)行測(cè)定，共測(cè)定6份，結(jié)果見(jiàn)表 3。表3重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.萱草花提取物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟 步驟1 萱草花乙醇在60°C以下提取，得乙醇提取液；步驟2 乙醇提取液過(guò)大孔樹(shù)脂柱； 步驟3 回收乙醇得萱草花提取物。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟1中乙醇的體積百分濃度為60%-95%。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于步驟1的提取方法為30°C以下浸提或滲漉。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟1的提取方法為用70%乙醇浸提。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟1的提取方法為用70%乙醇以每分鐘 l-3ml的速度滲漉。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于乙醇提取液過(guò)大孔樹(shù)脂柱，蒸餾水洗至流出液透明，用20% -95%乙醇洗脫2-6倍柱體積。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于大孔樹(shù)脂柱為AB-8大孔樹(shù)脂柱；乙醇洗脫液的濃度為55% -65%。
8.萱草花提取物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟 步驟1 萱草花乙醇在60°C以下提取，得乙醇提取液；步驟2 乙醇提取液過(guò)大孔樹(shù)脂柱； 步驟3 回收乙醇得萱草花提取物； 步驟4 萱草花提取物HPLC指紋圖譜檢測(cè)。
9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于萱草花提取物HPLC指紋圖譜檢測(cè)方法包括如下步驟色譜條件C18色譜柱，流動(dòng)相甲醇-0. 5%冰醋酸的水溶液梯度洗，0. 5-1. SmL/mirT1， 檢測(cè)波長(zhǎng)200-300nm，柱溫20_30°C ；所述甲醇-0. 5%冰醋酸的水溶液梯度洗脫的條件為 第0-20min 甲醇為20%，0. 5%的冰醋酸水溶液為80% ；第20_30min 甲醇為30%，0. 5% 的冰醋酸水溶液為70 % ；第30-70min 甲醇為30 %，0. 5 %的冰醋酸水溶液為70 % ；第70min 到最后甲醇為80%，0. 5%的冰醋酸水溶液為20% ；對(duì)照品溶液的制備稱取蘆丁，加甲醇制成對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取萱草花提取物粉末，加甲醇超聲提取，靜置，取上清液濾過(guò)，取濾液，即得。檢測(cè)方法吸取對(duì)照品、供試品溶液，進(jìn)樣檢測(cè)。
10.萱草花提取物HPLC指紋圖譜檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括如下步驟色譜條件C18色譜柱，流動(dòng)相甲醇-0. 5%冰醋酸的水溶液梯度洗，0. 5-1. SmL/mirT1， 檢測(cè)波長(zhǎng)200-300nm，柱溫20_30°C ；所述甲醇-0. 5%冰醋酸水溶液梯度洗脫的條件為第 0-20min 甲醇為20%，0. 5%的冰醋酸水溶液為80% ；第20_30min 甲醇為30%，0. 5%的冰醋酸水溶液為70% ；第30-70min 甲醇為30%，0. 5%的冰醋酸水溶液為70% ；第70min 到最后甲醇為80%，0. 5%的冰醋酸水溶液為20% ；對(duì)照品溶液的制備稱取蘆丁，加甲醇制成對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取萱草花提取物粉末，加甲醇超聲提取，靜置，取上清液濾過(guò)，取濾液，即得。檢測(cè)方法吸取對(duì)照品、供試品溶液，進(jìn)樣檢測(cè)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了萱草花提取物的制備方法，該方法包括萱草花乙醇低溫提取、乙醇提取液過(guò)大孔樹(shù)脂柱、回收乙醇得萱草花提取物等步驟，本發(fā)明方法成本低、效率高，適于大生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K36/896GK102488819SQ20111041082
公開(kāi)日2012年6月13日 申請(qǐng)日期2011年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月12日
發(fā)明者倪健, 朱陵群, 鄒憶懷 申請(qǐng)人:倪健