專利名稱：高純度凝血酶原復(fù)合物制品干熱病毒滅活過程中的保護(hù)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，是幾種和幾組高純度凝血酶原復(fù)合物制品(四種凝血因子II、VII、IX、X比活均彡3. 5IU/mg)在100°C、30min干熱病毒滅活過程，可有效防止制品中主要作用凝血因子IX及凝血因子II、VII、X失活的保護(hù)劑。具體而言，高純度凝血酶原復(fù)合物中加入0. -8%海藻糖或/和0. -8%組氨酸，干熱病毒滅活過程中可有效保護(hù)凝血因子IX及凝血因子II、VII、X的活性。
背景技術(shù)：
人凝血酶原復(fù)合物(ProthrombinComplex Concentrate, PCC)，又稱凝血因子 IX 復(fù)合物，是由健康人混合血漿制備成的凍干血漿蛋白制品，除含有凝血因子IX外，還含有其他依賴維生素K合成的凝血因子II、VII、X。20世紀(jì)50年代PCC開始制備并用于臨床， 目前該制品除用于乙型血友病、有抗凝血因子VII的甲型血友病外，還廣泛用于由肝臟疾病、維生素K缺乏所引起的凝血因子水平低下而導(dǎo)致的出血癥及替代新鮮冰凍血漿逆轉(zhuǎn)香豆素類抗凝劑過量而導(dǎo)致的各種出血性疾病，隨著PCC臨床適應(yīng)癥的擴(kuò)大，其使用量也在逐年增加。自PCC用于臨床治療以來，不斷有臨床輸注后導(dǎo)致血栓形成并發(fā)癥的報(bào)道，主要包括彌散性血管內(nèi)凝血、靜脈血栓、肺水腫及致死性心肌梗塞等。雖然PCC導(dǎo)致血栓形成的確切原因目前還未完全闡明，但動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)揭示，制品中含有激活激肽釋放酶原、高分子量激肽原、磷脂以及接觸因子等都可能促使血栓形成，因此，高純度PCC制品，其他雜質(zhì)蛋白含有較少，可有效降低血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。當(dāng)前國(guó)內(nèi)成型PCC制品，凝血因子II、VII、IX、X 的比活性大多在0. 3-1. 0IU/mg之間，雜蛋白所含比例相對(duì)較大，在一定程度上增加了血栓副反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率。PCC由健康人血漿制備而成，但不能排除乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV)、艾滋病毒(HIV)、人嗜T細(xì)胞病毒(HTLV)等傳染的可能，因此在制備過程中必須有病毒滅活或去除的方法。2002年5月，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局《血液制品去除/滅活病毒技術(shù)方法及驗(yàn)證指導(dǎo)原則》中明確規(guī)定凝血因子類制品生產(chǎn)過程中應(yīng)有特定的能去除/滅活脂包膜和非脂包膜病毒的方法，可采用一種或多種方法聯(lián)合去除/滅活病毒。10(TC、30min 干熱病毒滅活法對(duì)脂包膜和非脂包膜病毒均有滅活效果，該病毒滅活方法通常在制品凍干后進(jìn)行，操作簡(jiǎn)便，可控性強(qiáng)，被很多生產(chǎn)廠家采用，但制品在100°C高溫條件處理，有效活性蛋白易失活變性，因此在干熱病毒滅活過程中，制品需加一定量的保護(hù)劑對(duì)活性蛋白進(jìn)行保護(hù)。高純度PCC，凝血因子純度較高，蛋白含量相對(duì)較少，對(duì)保護(hù)劑的要求則更為苛刻， 至今未見對(duì)高純度PCC干熱病毒滅活過程保護(hù)劑的研究，此外，也未見海藻糖或/和組氨酸用于PCC干熱病毒滅活過程保護(hù)劑的報(bào)道
發(fā)明內(nèi)容
要解決的技術(shù)問題為了減少高純度PCC在干熱病毒滅活過程中凝血因子的活性損失，提高制品活性回收率，本發(fā)明提供幾種和幾組高純度PCC干熱病毒滅活過程的保護(hù)劑，100°C、30min干熱病毒滅活處理對(duì)凝血因子II、VII、IX、X有較好的保護(hù)效果，其中凝血因子IX活性收率均 > 74%。技術(shù)方案本發(fā)明以高純度PCC為實(shí)驗(yàn)材料，通過冷凍干燥、干熱病毒滅活(100°C、30min)、 活性測(cè)定、對(duì)比試驗(yàn)，獲得2種和8組高純度PCC干熱病毒滅活處理的保護(hù)劑，具體步驟如下a)高純度PCC制備健康人混合血漿2_4°C離心去除冷沉淀，以血漿上清為原料，利用擴(kuò)張床技術(shù)制備高純度PCC。將收集的洗脫液用所含0. OlM檸檬酸鈉、0. 5% NaCl, pH7. 0超濾緩沖液在超濾濃縮系統(tǒng)中超濾、脫鹽、濃縮并活性測(cè)定，獲得高純PCC實(shí)驗(yàn)材料。上述制備的高純度PCC組成特征為
權(quán)利要求
1.海藻糖或/組氨酸用作高純度凝血酶原復(fù)合物干熱病毒滅活保護(hù)劑，海藻糖含量為 0. 1% _8%，組氨酸含量為0. -8%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述海藻糖或/組氨酸用作高純度凝血酶原復(fù)合物干熱病毒滅活保護(hù)劑，其特征在于凝血酶原復(fù)合物四種凝血因子II、VII、IX、X比活均彡3. 5IU/mg。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述海藻糖或/組氨酸用作高純度凝血酶原復(fù)合物干熱病毒滅活保護(hù)劑，其特征在于保護(hù)劑中還含有0-10%甘氨酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述海藻糖或/組氨酸用作高純度凝血酶原復(fù)合物干熱病毒滅活保護(hù)劑，其特征在于保護(hù)劑中還含有檸檬酸鈉、NaCl —種或兩種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述海藻糖或/組氨酸用作高純度凝血酶原復(fù)合物干熱病毒滅活保護(hù)劑，其特征在于保護(hù)劑中還含有檸檬酸鈉、NaCl —種或兩種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述海藻糖或/組氨酸用作高純度凝血酶原復(fù)合物干熱病毒滅活保護(hù)劑，同樣適用于其他各類凝血酶原復(fù)合物制品。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，是一種高純度凝血酶原復(fù)合物制品(四種凝血因子II、VII、IX、X比活均≥3.5IU/mg蛋白)在100℃，30min干熱病毒滅活過程，可有效防止制品中主要作用凝血因子IX及其他凝血因子II、VII、X失活的保護(hù)劑。本發(fā)明的保護(hù)劑是指海藻糖或/和組氨酸，還含有常用的甘氨酸、檸檬酸鈉和NaCl中的兩種或三種。試驗(yàn)表明，高純度凝血酶原復(fù)合物只要含有0.1％-8％海藻糖或/和0.1％-8％組氨酸，就可以在100℃，30min干熱病毒滅活過程中有效地保護(hù)凝血因子IX及凝血因子II、VII、X的活性。因此本發(fā)明可用作高純度凝血酶原復(fù)合物干熱病毒滅活過程中的保護(hù)劑。
文檔編號(hào)A61K47/26GK102416171SQ201110400499
公開日2012年4月18日 申請(qǐng)日期2011年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月6日
發(fā)明者何琦, 喻洪躍, 曹海軍, 李長(zhǎng)清, 狄姍姍, 趙紅衛(wèi), 邱家山, 黃亮 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院輸血研究所, 中藍(lán)晨光化工研究設(shè)計(jì)院有限公司, 四川大學(xué), 成都英德生物工程有限公司