專利名稱：基因釋放型支架及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種醫(yī)療器械技術(shù)領(lǐng)域的支架及其制備方法，具體地說(shuō)，是一種基因釋放型支架及其制備方法。
背景技術(shù)：
人體生理管道或管腔狹窄，尤其是血管和消化道腔道良、惡性狹窄或梗阻是臨床上常見(jiàn)的嚴(yán)重病癥。除了外科手術(shù)切除、放療和化療方法外，常用的介入治療手段主要有球囊擴(kuò)張(主要對(duì)于良性狹窄)和支架置入。其中支架置入是相當(dāng)重要的治療手段，能有效提高患者的生命質(zhì)量，延長(zhǎng)生存時(shí)間。臨床上的支架植入是基于介入手術(shù)，在人體內(nèi)梗阻或狹窄的生理管路部位放置一根金屬或其他材料制成的管狀物，憑借支架的機(jī)械力來(lái)抵抗管壁組織的狹窄，使得病變管路重新開(kāi)放，恢復(fù)其原有的生理功能。當(dāng)前用于治療狹窄的支架主要有裸金屬支架、覆膜支架和藥物洗脫支架。其中藥物洗脫支架由于具有積極的治療作用，因此受到了廣泛的親睞和應(yīng)用。藥物洗脫支架的優(yōu)勢(shì)在于其在植入人體生理管路后除了能夠通過(guò)機(jī)械擴(kuò)張力來(lái)使狹窄的生理管路重新開(kāi)放之外，還能直接釋放化學(xué)藥物到病變的狹窄部位，達(dá)到積極治療疾病的作用。但目前幾乎所有藥物洗脫支架荷載和釋放的藥物均為小分子的化學(xué)藥物?；蛩幬锸切滦偷木哂袠O大應(yīng)用前景的一類大分子藥物，其具備高效率的治療作用和可穩(wěn)定遺傳的優(yōu)點(diǎn)。一旦基因藥物進(jìn)入目標(biāo)靶細(xì)胞后，可以指導(dǎo)轉(zhuǎn)錄蛋白來(lái)治療疾病，或者使疾病基因沉默而不體現(xiàn)出疾病的性狀，或者修復(fù)病變的基因。除了常見(jiàn)的遺傳疾病外，許多其他臨床上多發(fā)性的常見(jiàn)疾病已經(jīng)被證實(shí)與遺傳物質(zhì)相關(guān)，如人類罹患的實(shí)體惡性腫瘤60%以上同基因突變有關(guān)。心血管領(lǐng)域的狹窄如冠狀動(dòng)脈狹窄和其他局部疾病也被證實(shí)與遺傳物質(zhì)突變有關(guān)，這些疾病以及生理管路良/惡性腫瘤都可以通過(guò)基因藥物來(lái)進(jìn)行治療。因此，具有釋放基因藥物的支架具有極大的臨床優(yōu)勢(shì)和廣闊的應(yīng)用價(jià)值。經(jīng)過(guò)對(duì)現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)的檢索發(fā)現(xiàn)
中國(guó)專利200610129600. 3本發(fā)明公開(kāi)了一種載藥或載基因支架的制備方法，其先將支架表面進(jìn)行預(yù)處理，包括濺射或電鍍金、固定高分子。然后將藥物或基因分子在支架表面固化。該發(fā)明在支架上穩(wěn)定連接網(wǎng)狀大分子骨架，通過(guò)網(wǎng)狀分子共價(jià)連接糖類、肽類及抗體分子，通過(guò)網(wǎng)狀分子靜電吸附基因分子和轉(zhuǎn)染介導(dǎo)分子。其不足之處在于該支架的制備過(guò)程復(fù)雜，其利用巰基烷醇與藥物或基因的吸附來(lái)實(shí)現(xiàn)載藥，并采用乙醇溶液進(jìn)行固定，其載藥量較低，且無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)基因釋放速率進(jìn)行控制。中國(guó)專利200510080065. 2的發(fā)明專利公開(kāi)了一種生物可降解性基因釋放血管內(nèi)支架，由高分子支架材料和原癌基因c-myc的反義核苷酸序列制成，其中高分子材料選自聚乳酸、聚己內(nèi)酯和L-乳酸/乙交酯共聚物中的兩種或三種；原癌基因c-myc的反義核苷酸序列為acgttgaggggcat。其不足之處在于該支架通過(guò)生物可降解的高分子材料來(lái)負(fù)載基因，其負(fù)載量很??；其所載的基因?yàn)槁慊颍溥M(jìn)入目標(biāo)細(xì)胞和在目標(biāo)細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率很低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能荷載并控制釋放基因藥物的基因釋放型支架及其制備方法。本發(fā)明的支架通過(guò)先在其金屬表面經(jīng)過(guò)吸附作用涂覆底物層，該底物層由多層的聚電解質(zhì)組成，底物層的最表面帶正電荷，再利用基因帶負(fù)電荷這一性質(zhì)，將基因通過(guò)靜電作用吸附在金屬表面。通過(guò)重復(fù)交替地吸附正/負(fù)電荷的生物可降解聚陽(yáng)離子載體和基因，達(dá)到在金屬支架表面形成一定厚度的基因藥物層。本發(fā)明的基因釋放型支架在植入人體管腔后，能機(jī)械性地?cái)U(kuò)張梗阻或狹窄的管腔，同時(shí)其基因藥物層中的聚陽(yáng)離子逐漸降解，造成基因?qū)拥耐呓?，釋放出基因藥物層中包載的基因，在病變部位的目標(biāo)靶細(xì)胞表達(dá)，達(dá)到局部治療管腔疾病的作用。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
本發(fā)明涉及一種基因釋放型支架，由裸金屬支架、底物層和載基因涂層組成，底物層為兩層或兩層以上，由底物聚陰離子載體層和底物聚陽(yáng)離子載體層交替組成；載基因涂層為兩層或兩層以上，由生物可降解聚陽(yáng)離子載體層和基因?qū)咏惶娼M成；以上各層之間以靜電吸引力相互結(jié)合。優(yōu)選的，所述基因?qū)佑苫?、基因?fù)合物中的一種或兩種組成。優(yōu)選的，所述基因復(fù)合物由基因與聚陽(yáng)離子載體載體組成。優(yōu)選的，所述聚陽(yáng)離子基因載體為聚乙烯亞胺、聚乙烯胺、聚乙烯吡啶、聚賴氨酸、 聚精氨酸、殼聚糖、幾丁質(zhì)、聚陽(yáng)離子脂質(zhì)、聚乙烯亞胺衍生物、聚乙烯胺衍生物、聚乙烯吡啶衍生物、聚賴氨酸衍生物、聚精氨酸衍生物、殼聚糖衍生物、幾丁質(zhì)衍生物、聚陽(yáng)離子脂質(zhì)衍生物中的一種或幾種。優(yōu)選的，所述基因?yàn)镈NA、質(zhì)粒DNA、小環(huán)DNA、RNA、SiRNA、寡聚核苷酸中的一種或幾種。優(yōu)選的，所述底物聚陰離子載體為聚丙烯酸、聚苯乙烯磺酸、聚乙烯磺酸、聚乙烯磷酸、海藻酸、聚丙烯酰胺、透明質(zhì)酸、聚磷酸、聚硅酸、聚丙烯酸衍生物、聚苯乙烯磺酸衍生化物、聚乙烯磺酸衍生物、聚乙烯磷酸衍生物、海藻酸衍生物、聚丙烯酰胺衍生物、透明質(zhì)酸衍生物、聚磷酸衍生物、聚硅酸衍生物中的一種或幾種。優(yōu)選的，所述底物聚陽(yáng)離子載體為聚乙烯亞胺、聚乙烯胺、聚乙烯吡啶、殼聚糖、聚賴氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸、幾丁質(zhì)、聚組氨酸中的一種或幾種。優(yōu)選的，所述生物可降解聚陽(yáng)離子載體為聚胺酯、聚酰胺、聚磷酰胺、聚胺酯衍生物、聚酰胺衍生物、聚磷酰胺衍生物中的一種或幾種。本發(fā)明還涉及一種制備上述的基因釋放型支架的方法，包括以下步驟
(1)底物聚陰離子載體溶液的制備將底物聚陰離子載體溶解于氯化鈉溶液或PH3 10的緩沖液中，制得的溶液中聚陰離子載體的濃度為0. 01 μ g/mL 100mg/mL ；
(2)底物聚陽(yáng)離子載體溶液的制備將底物聚陽(yáng)離子載體溶解于氯化鈉溶液或pH3 10的緩沖液中，制得的溶液中底物聚陽(yáng)離子載體濃度為0. 01 μ g/mL 100mg/mL ；
(3)生物可降解聚陽(yáng)離子載體溶液制備將生物可降解聚陽(yáng)離子載體溶解于pH2 7 的緩沖液中，制得的溶液中生物可降解聚陽(yáng)離子載體的濃度在0. 01 μ g/mL 300mg/mL之
5間；
(4)基因溶液的制備將基因溶解于pH1 10的緩沖液中，制得的溶液中基因濃度在 Ο.ΟΙμ g/mL 500mg/mL之間，或繼續(xù)加入相對(duì)于基因質(zhì)量0 1000倍量的聚陽(yáng)離子載體， 漩渦混合均勻；
(5)將裸金屬支架在步驟(1)的底物聚陰離子載體溶液中浸漬0.1 30分鐘，取出用去離子水或緩沖液漂洗0. 1 30分鐘，置于步驟(2)的底物聚陽(yáng)離子載體溶液中浸漬0. 1 30分鐘，取出再用去離子水或緩沖液漂洗0. 1 30分鐘；
(6 )重復(fù)步驟(5 )0 50次，重新置于步驟(1)的底物聚陰離子載體溶液中浸漬0. 1 30分鐘，取出后再用去離子水或醋酸鈉緩沖液漂洗0. 1 30分鐘，制得含有底物層的金屬支架；
(7)將步驟(6)中制得的含有底物層的金屬支架置于步驟(3)的生物可降解聚陽(yáng)離子載體溶液中浸漬0. 1 30分鐘，取出用去離子水或緩沖液漂洗0. 1 30分鐘，置于步驟(4) 的基因溶液中浸漬0. 1 30分鐘，取出再用去離子水或醋酸鈉緩沖液漂洗0. 1 30分鐘；
(8)重復(fù)步驟(7)0 1000次，將支架取出在氮?dú)饬飨鲁馗稍镏辽?2小時(shí)，即得基因釋放型支架。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有的有益效果為
1、與現(xiàn)有支架相比，基因釋放型支架在通過(guò)機(jī)械力擴(kuò)張狹窄腔道的同時(shí)，能釋放抗基因藥物，達(dá)到高效治療疾病的作用。2、本發(fā)明的基因釋放型支架通過(guò)控制基因涂層中生物可降解聚陽(yáng)離子載體的降解速率來(lái)控制基因的釋放速度，具有良好的可控性。3、選擇合適的生物可降解聚陽(yáng)離子載體作為基因?qū)拥妮d體還可以實(shí)現(xiàn)刺激響應(yīng)性釋放基因藥物，也即實(shí)現(xiàn)快速釋放。4、本發(fā)明的制備方法采用溶液浸漬法，操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定可控，適合于規(guī)模化生產(chǎn)。


圖1是本發(fā)明的基因釋放型支架的表面結(jié)構(gòu)示意圖2為本發(fā)明的基因釋放型支架的基因藥物釋放過(guò)程示意圖； 其中，1、裸金屬支架，2、底物層，3、載基因涂層，4、底物聚陰離子載體層，5、底物聚陽(yáng)離子載體層，6、生物可降解聚陽(yáng)離子載體層，7、基因?qū)印?br> 具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例做詳細(xì)的說(shuō)明實(shí)施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和過(guò)程，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于下述的實(shí)施例。實(shí)施例1
如圖1、2所示，本發(fā)明由裸金屬支架1、底物層2和載基因涂層3組成，底物層2由2層底物聚陰離子載體層4 (聚丙烯酸層)和1層底物聚陽(yáng)離子載體層5 (聚乙烯亞胺層)交替組成，載基因涂層3由3層生物可降解聚陽(yáng)離子載體6 (聚胺酯)和3層基因?qū)? (質(zhì)粒DNA 層)交替組成，以上各層之間以靜電吸引力相互結(jié)合。
制備方法包括以下步驟
(1)聚丙烯酸溶液的制備將聚丙烯酸溶解于氯化鈉溶液中，制得的溶液中聚丙烯酸的濃度為^g/mL ；
(2)聚乙烯亞胺溶液的制備將聚乙烯亞胺溶解于氯化鈉溶液中，制得的溶液中聚乙烯亞胺濃度為lmg/mL ；
(3)聚胺酯溶液制備將聚胺酯溶解于pH5的醋酸鈉緩沖液中，制得的溶液中聚胺酯的濃度為lmg/mL ；
(4)基因溶液的制備將基因溶解于pH7的醋酸鈉緩沖液中，制得的溶液中基因濃度為 100 μg/mL ；
(5)將裸金屬支架在步驟(1)的聚丙烯酸溶液中浸漬5分鐘，取出用去離子水漂洗5分鐘，置于步驟(2)的聚乙烯亞胺溶液中浸漬5分鐘，取出再用去離子水漂洗5分鐘；
(6)重復(fù)步驟(5)1次，重新置于步驟(1)的聚丙烯酸溶液中浸漬5分鐘，取出后再用去離子水漂洗5分鐘，制得含有底物層的金屬支架；
(7)將步驟(6)中制得的含有底物層的金屬支架置于步驟(3)的聚胺酯溶液中浸漬5 分鐘，取出用醋酸鈉緩沖液漂洗5分鐘，置于步驟(4)的基因溶液中浸漬5分鐘，取出再用去離子水或醋酸鈉緩沖液漂洗5分鐘；
(8)重復(fù)步驟(7X3次，將支架取出在氮?dú)饬飨鲁馗稍?2小時(shí)，即得基因釋放型支架。實(shí)施例2
如圖1、2所示，本發(fā)明由裸金屬支架1、底物層2和載基因涂層3組成，底物層2由16 層底物聚陰離子載體層4 (聚苯乙烯磺酸層)和15層底物聚陽(yáng)離子載體層5 (聚乙烯亞胺層)交替組成，載基因涂層3由20層生物可降解聚陽(yáng)離子載體層6 (聚胺酯)和20層基因?qū)?交替組成，以上各層之間以靜電吸引力相互結(jié)合，基因?qū)佑苫蚝突驈?fù)合物共同組成，基因復(fù)合物由基因(DNA)與聚陽(yáng)離子脂質(zhì)組成。制備方法包括以下步驟
(1)聚苯乙烯磺酸溶液的制備將聚苯乙烯磺酸溶解于氯化鈉溶液中，制得的溶液中聚苯乙烯磺酸的濃度為1. 5mg/mL ；
(2)聚賴氨酸溶液的制備將聚賴氨酸溶解于氯化鈉溶液中，制得的溶液中聚賴氨酸濃度為 1. 5mg/mL ；
(3)聚胺酯溶液制備將聚胺酯溶解于pH5. 5的醋酸鈉緩沖液中，制得的溶液中聚胺酯的濃度為ang/mL ；
(4)基因溶液的制備將基因溶解于pH7. 2的醋酸鈉緩沖液中，制得的溶液中基因濃度為100 μ g/mL，繼續(xù)加入相對(duì)于基因質(zhì)量100倍量的聚陽(yáng)離子脂質(zhì)，漩渦混合均勻；
(5)將裸金屬支架在步驟(1)的聚苯乙烯磺酸溶液中浸漬5分鐘，取出用去離子水漂洗 5分鐘，置于步驟(2)的聚賴氨酸溶液中浸漬5分鐘，取出再用去離子水漂洗5分鐘；
(6)重復(fù)步驟(5)15次，重新置于步驟(1)的聚苯乙烯磺酸溶液中浸漬5分鐘，取出后再用去離子水漂洗5分鐘，制得含有底物層的金屬支架；
(7)將步驟(6)中制得的含有底物層的金屬支架置于步驟(3)的聚胺酯溶液中浸漬5 分鐘，取出用醋酸鈉緩沖液漂洗5分鐘，置于步驟(4)的基因溶液中浸漬5分鐘，取出再用去離子水或醋酸鈉緩沖液漂洗5分鐘；(8)重復(fù)步驟(7) 20次，將支架取出在氮?dú)饬飨鲁馗稍?4小時(shí)，即得基因釋放型支
^K O實(shí)施例3
如圖1、2所示，本發(fā)明由裸金屬支架1、底物層2和載基因涂層3組成，底物層2由1層底物聚陰離子載體層4 (聚丙烯酰胺和聚乙烯磷酸的混合層)和1層底物聚陽(yáng)離子載體層5 (幾丁質(zhì)和聚精氨酸的混合層)交替組成，載基因涂層3由1層生物可降解聚陽(yáng)離子載體層 6 (聚磷酰胺)和1層基因?qū)?交替組成，以上各層之間以靜電吸引力相互結(jié)合，基因?qū)佑苫蚝突驈?fù)合物共同組成，基因復(fù)合物由基因(SiRNA)與聚乙烯胺以及聚乙烯吡啶組成。制備方法包括以下步驟
(1)聚丙烯酰胺和聚乙烯磷酸的混合溶液的制備將聚丙烯酰胺和聚乙烯磷酸溶解于 PH3的醋酸鈉緩沖液溶液中，制得的溶液中聚丙烯酰胺和聚乙烯磷酸的濃度為lOOmg/mL ；
(2)幾丁質(zhì)和聚精氨酸混合溶液的制備將幾丁質(zhì)和聚精氨酸溶解于pH3的醋酸鈉緩沖液溶液中，制得的溶液中幾丁質(zhì)和聚精氨酸濃度為lOOmg/mL ；
(3)聚磷酰胺溶液制備將聚磷酰胺溶解于pH2的醋酸鈉緩沖液中，制得的溶液中聚胺酯的濃度為300mg/mL ；
(4)基因溶液的制備將基因(SiRNA)溶解于pH1的醋酸鈉緩沖液中，制得的溶液中基因濃度為500mg/mL，繼續(xù)加入相對(duì)于基因質(zhì)量1000倍量的聚乙烯胺和聚乙烯吡啶，漩渦混合均勻；
(5)將裸金屬支架在步驟(1)的聚丙烯酰胺和聚乙烯磷酸的混合溶液中浸漬30分鐘， 取出用去離子水漂洗5分鐘，置于步驟(2)的幾丁質(zhì)和聚精氨酸混合溶液中浸漬30分鐘， 取出再用去離子水漂洗5分鐘；制得含有底物層的金屬支架；
(6)將步驟(5)中制得的含有底物層的金屬支架置于步驟(3)的聚磷酰胺溶液中浸漬 30分鐘，取出用醋酸鈉緩沖液漂洗5分鐘，置于步驟(4)的基因溶液中浸漬30分鐘，取出再用去離子水或醋酸鈉緩沖液漂洗5分鐘；
(7)將支架取出在氮?dú)饬飨鲁馗稍?4小時(shí)，即得基因釋放型支架。實(shí)施例4
如圖1、2所示，本發(fā)明由裸金屬支架1、底物層2和載基因涂層3組成，底物層2由51 層底物聚陰離子載體層4 (透明質(zhì)酸的衍生物層)和50層底物聚陽(yáng)離子載體層5 (聚乙烯吡啶層)交替組成，載基因涂層3由1000層生物可降解聚陽(yáng)離子載體層6 (聚酰胺的衍生物) 和1000層基因?qū)?交替組成，以上各層之間以靜電吸引力相互結(jié)合，基因?qū)佑苫蚝突驈?fù)合物共同組成，基因復(fù)合物由基因(寡聚核苷酸)與聚精氨酸的衍生物組成。制備方法包括以下步驟
(1)透明質(zhì)酸的衍生物溶液的制備將透明質(zhì)酸的衍生物溶解于PHlO的磷酸鹽緩沖液中，制得的溶液中透明質(zhì)酸的衍生物的濃度為0. Olyg/mL ；
(2)聚乙烯吡啶溶液的制備將聚乙烯吡啶溶解于pHIO的磷酸鹽緩沖液中，制得的溶液中聚乙烯吡啶濃度為0. 01 μ g/mL ；
(3)聚酰胺的衍生物溶液制備將聚酰胺的衍生物溶解于pH7的醋酸鈉緩沖液中，制得的溶液中聚酰胺的衍生物的濃度為0. 01 y g/mL ；
(4)基因溶液的制備將基因(寡聚核苷酸)溶解于pH10的醋酸鈉緩沖液中，制得的溶液中基因濃度為0. 01 μ g/mL，繼續(xù)加入相對(duì)于基因質(zhì)量10倍量的聚精氨酸的衍生物，漩渦混合均勻；
(5)將裸金屬支架在步驟(1)的透明質(zhì)酸的衍生物溶液中浸漬0.1分鐘，取出用去離子水漂洗5分鐘，置于步驟(2)的聚乙烯吡啶溶液中浸漬0. 1分鐘，取出再用去離子水漂洗5 分鐘；
(6)重復(fù)步驟(5)50次，重新置于步驟(1)的透明質(zhì)酸的衍生物溶液中浸漬0. 1分鐘， 取出后再用去離子水漂洗5分鐘，制得含有底物層的金屬支架；
(7)將步驟(6)中制得的含有底物層的金屬支架置于步驟(3)的聚酰胺的衍生物溶液中浸漬0. 1分鐘，取出用醋酸鈉緩沖液漂洗5分鐘，置于步驟(4)的基因溶液中浸漬0. 1分鐘，取出再用去離子水或醋酸鈉緩沖液漂洗5分鐘；
(8)重復(fù)步驟(7)1000次，將支架取出在氮?dú)饬飨鲁馗稍?4小時(shí)，即得基因釋放型支架。
權(quán)利要求
1.一種基因釋放型支架，由裸金屬支架、底物層和載基因涂層組成，其特征在于，底物層為兩層或兩層以上，由底物聚陰離子載體層和底物聚陽(yáng)離子載體層交替組成；載基因涂層為兩層或兩層以上，由生物可降解聚陽(yáng)離子載體層和基因?qū)咏惶娼M成；以上各層之間以靜電吸引力相互結(jié)合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因釋放型支架，其特征在于，所述基因?qū)佑苫?、基因?fù)合物中的一種或兩種組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因釋放型支架，其特征在于，所述基因復(fù)合物由基因與聚陽(yáng)離子載體組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基因釋放型支架，其特征在于，所述聚陽(yáng)離子基因載體為聚乙烯亞胺、聚乙烯胺、聚乙烯吡啶、聚賴氨酸、聚精氨酸、殼聚糖、幾丁質(zhì)、聚陽(yáng)離子脂質(zhì)、聚乙烯亞胺衍生物、聚乙烯胺衍生物、聚乙烯吡啶衍生物、聚賴氨酸衍生物、聚精氨酸衍生物、 殼聚糖衍生物、幾丁質(zhì)衍生物、聚陽(yáng)離子脂質(zhì)衍生物中的一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2 4中任一項(xiàng)所述的基因釋放型支架，其特征在于，所述基因?yàn)?DNA、質(zhì)粒DNA、小環(huán)DNA、RNA、SiRNA、寡聚核苷酸中的一種或幾種。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因釋放型支架，其特征在于，所述底物聚陰離子載體為聚丙烯酸、聚苯乙烯磺酸、聚乙烯磺酸、聚乙烯磷酸、海藻酸、聚丙烯酰胺、透明質(zhì)酸、聚磷酸、 聚硅酸、聚丙烯酸衍生物、聚苯乙烯磺酸衍生化物、聚乙烯磺酸衍生物、聚乙烯磷酸衍生物、 海藻酸衍生物、聚丙烯酰胺衍生物、透明質(zhì)酸衍生物、聚磷酸衍生物、聚硅酸衍生物中的一種或幾種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因釋放型支架，其特征在于，所述底物聚陽(yáng)離子載體為聚乙烯亞胺、聚乙烯胺、聚乙烯吡啶、殼聚糖、聚賴氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸、幾丁質(zhì)、聚組氨酸中的一種或幾種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因釋放型支架，其特征在于，所述生物可降解聚陽(yáng)離子載體為聚胺酯、聚酰胺、聚磷酰胺、聚胺酯衍生物、聚酰胺衍生物、聚磷酰胺衍生物中的一種或幾種。
9.一種制備如權(quán)利要求1所述的基因釋放型支架的方法，其特征在于，包括以下步驟(1)底物聚陰離子載體溶液的制備將底物聚陰離子載體溶解于氯化鈉溶液或PH3 10的緩沖液中，制得的溶液中聚陰離子載體的濃度為0. 01 μ g/mL 100mg/mL ；(2)底物聚陽(yáng)離子載體溶液的制備將底物聚陽(yáng)離子載體溶解于氯化鈉溶液或pH3 10的緩沖液中，制得的溶液中底物聚陽(yáng)離子載體濃度為0. 01 μ g/mL 100mg/mL ；(3)生物可降解聚陽(yáng)離子載體溶液制備將生物可降解聚陽(yáng)離子載體溶解于pH2 7 的緩沖液中，制得的溶液中生物可降解聚陽(yáng)離子載體的濃度在0. 01 μ g/mL 300mg/mL之間；(4)基因溶液的制備將基因溶解于pH1 10的緩沖液中，制得的溶液中基因濃度在 Ο.ΟΙμ g/mL 500mg/mL之間，或繼續(xù)加入相對(duì)于基因質(zhì)量0 1000倍量的聚陽(yáng)離子載體， 漩渦混合均勻；(5)將裸金屬支架在步驟(1)的底物聚陰離子載體溶液中浸漬0.1 30分鐘，取出用去離子水或緩沖液漂洗0. 1 30分鐘，置于步驟(2)的底物聚陽(yáng)離子載體溶液中浸漬0. 1 30分鐘，取出再用去離子水或緩沖液漂洗0. 1 30分鐘；(6 )重復(fù)步驟(5 )0 50次，重新置于步驟(1)的底物聚陰離子載體溶液中浸漬0. 1 30分鐘，取出后再用去離子水或醋酸鈉緩沖液漂洗0. 1 30分鐘，制得含有底物層的金屬支架；(7)將步驟(6)中制得的含有底物層的金屬支架置于步驟(3)的生物可降解聚陽(yáng)離子載體溶液中浸漬0. 1 30分鐘，取出用去離子水或緩沖液漂洗0. 1 30分鐘，置于步驟(4) 的基因溶液中浸漬0. 1 30分鐘，取出再用去離子水或醋酸鈉緩沖液漂洗0. 1 30分鐘；(8)重復(fù)步驟(7)0 1000次，將支架取出在氮?dú)饬飨鲁馗稍镏辽?2小時(shí)，即得基因釋放型支架。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種基因釋放型支架及其制備方法。該支架由裸金屬支架、底物層和載基因涂層組成，底物層由兩層或兩層以上的底物聚陰離子載體層和聚陽(yáng)離子載體層交替組成，載基因涂層由兩層或兩層以上的生物可降解聚陽(yáng)離子載體層和基因?qū)咏惶娼M成，各層之間以靜電吸引力相互結(jié)合。其制備方法采用溶液浸漬法，通過(guò)重復(fù)交替地將金屬支架浸漬在聚陽(yáng)離子載體溶液和基因溶液中，實(shí)現(xiàn)在支架表面交替涂覆載體層和基因?qū)?。本發(fā)明的支架用于荷載一切帶負(fù)電荷的基因(包括DNA和RNA)，實(shí)現(xiàn)緩釋或速釋基因藥物；在植入人體后，其不僅能機(jī)械性地?cái)U(kuò)張狹窄管路，還能向病變管壁組織方向釋放治療基因藥物，用于治療人體生理管路的良性或惡性狹窄疾病。
文檔編號(hào)A61L31/10GK102441192SQ20111029298
公開(kāi)日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2011年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月30日
發(fā)明者沈園園, 榮浩鈞, 郭圣榮, 陳偉巒, 雷磊 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)