專利名稱：一種續(xù)斷總皂苷的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物續(xù)斷中活性成分的提取方法，尤其是涉及一種續(xù)斷總皂苷的提取方法。
背景技術(shù)：
續(xù)斷為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷Dipsacus asperoides. Y. Cheng et Τ. M. Ai的干燥根，它具有補(bǔ)肝益腎，續(xù)接筋骨，抗骨質(zhì)疏松，止血安胎等功效，臨床上主要用于治療腰膝酸軟、跌打損傷、骨折、腰椎骨質(zhì)增生、先兆性流產(chǎn)和習(xí)慣性流產(chǎn)等，其主要活性成分是三萜皂苷。近代研究表明續(xù)斷中主要化學(xué)成分有皂苷類、環(huán)烯醚萜類、生物堿、揮發(fā)油、蔗糖、甾醇、鈣、鐵、鎂、錳、鋅、銅等微量元素及少量苷元。目前已從續(xù)斷中分離出20多種皂苷，其中三萜皂苷中以3-0- α -L一吡喃阿拉伯糖常春藤皂苷元一觀一 0 — β — D —吡喃葡萄糖(1 一 6) — β — D —吡喃葡萄糖酯苷(川續(xù)斷皂苷VI，Asperosaponin VI)含量最高。傳統(tǒng)的續(xù)斷總皂苷的提取方法通常是，取續(xù)斷藥材烘干后粉碎，用乙醇回流提取三次，每次回流時(shí)間2小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇近干，加水形成混懸液，用正丁醇萃取3-5次，合并正丁醇萃取液，減壓回收正丁醇至蒸干，加水溶解后再加石油醚脫脂，脫脂后的水溶液濃縮析出沉淀物，洗滌、干燥得續(xù)斷總皂苷提取物。名稱為“續(xù)斷總皂苷及其提取方法和應(yīng)用”的發(fā)明專利申請(qǐng)(200710031558. 6)公開(kāi)了一種續(xù)斷總皂苷的提取方法，取續(xù)斷藥材，用6-10倍量的40-90%乙醇或水提取3次， 每次1-3小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇液到無(wú)乙醇味，加水稀釋成每毫升含0. 2 1. 5g藥材的溶液，靜置12 36小時(shí)，取上清液，濾過(guò)，濾液加入到DlOl或其它大孔樹(shù)脂的層析柱上，循環(huán)吸附2 3次，用3 6倍量柱體積的0. 5 5. 0%堿液洗脫，再用 3 6倍量柱體積的水洗脫至中性，棄去兩次洗脫液，再用3 8倍量柱體積的50% 95% 乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮干燥得總皂苷。該方法提取工藝繁瑣，生產(chǎn)成本高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種續(xù)斷總皂苷的提取方法，能夠克服現(xiàn)有的提取方法使用大量有機(jī)溶劑，工藝繁瑣，生產(chǎn)成本高，污染環(huán)境等缺陷，是一種工藝簡(jiǎn)單、易工業(yè)化生產(chǎn)， 可顯著降低生產(chǎn)成本和更為環(huán)保的續(xù)斷總皂苷的提取方法。本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
一種續(xù)斷總皂苷的提取方法，其特征在于取續(xù)斷粉碎成粗粉，加質(zhì)量濃度為90%以上的乙醇加熱回流2-4次或加熱回流1小時(shí)后再循環(huán)回流至提取液近無(wú)色，合并提取液，濃縮回收乙醇至無(wú)乙醇味，濃縮液加水適量，加熱溶解后過(guò)濾；濾液用石油醚脫脂，靜置分出水相，析出沉淀，過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加乙醇加熱溶解后，回收乙醇，干燥，即得續(xù)斷總皂苷提取物。所述的方法具體包括以下步驟(1)取續(xù)斷藥材烘干、粉碎成粗粉，加3 15倍量90%以上濃度的乙醇回流提取2-4 次，回流時(shí)間每次0. 5-4小時(shí)，或加熱回流1小時(shí)后再循環(huán)回流至提取液近無(wú)色，合并提取液，濃縮至無(wú)乙醇味，濃縮液加10倍量以下的水，加熱20°C -90°C溶解，過(guò)濾，得濾液；
(2)濾液中加石油醚，混合均勻，30°C 60°C保溫?cái)嚢?0 60分鐘，靜置1小時(shí)以上， 放出下層液，析出沉淀，過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加乙醇加熱溶解后回收乙醇，干燥，即得續(xù)斷總皂苷提取物。所述的方法總皂苷占提取物百分含量大于等于50. 0%，川續(xù)斷皂苷VI (C47H76O18)占提取物含量大于等于30. 0%。所述的續(xù)斷粗粉為10 80目，優(yōu)選10 30目。本發(fā)明方法通過(guò)乙醇回流提取液濃縮，加水形成提取物的水溶液，過(guò)濾后以石油醚脫酯，不再經(jīng)過(guò)其他有機(jī)溶劑萃取，其純度不低于用傳統(tǒng)工藝提取的總皂苷提取物。步驟(2)中石油醚加入量為濾液重量的0. 5 5倍量。所述的石油醚的沸程為60°C 90°C。步驟(2)中所述的乙醇質(zhì)量濃度為15%以上。本發(fā)明的續(xù)斷總皂苷的提取方法，工藝較傳統(tǒng)的提取工藝簡(jiǎn)單，在提取過(guò)程中不再采用正丁醇萃取，簡(jiǎn)化了提取的步驟，生產(chǎn)化工藝簡(jiǎn)單，降低生產(chǎn)能耗，減少有毒有機(jī)溶劑(正丁醇)的使用，達(dá)到更環(huán)保的目的，提取出的續(xù)斷總皂苷的純度與使用正丁醇萃取后制得的續(xù)斷總皂苷的純度基本一致，藥效學(xué)研究比較表明無(wú)顯著性差異。根據(jù)本發(fā)明方法的提取物中，總皂苷占提取物質(zhì)量百分含量為大于等于50. 0%，川續(xù)斷皂苷VI占提取物質(zhì)量百分含量大于等于30. 0%。下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。本發(fā)明的保護(hù)范圍并不以具體實(shí)施方式
為限，而是由權(quán)利要求加以限定。


圖1本發(fā)明續(xù)斷總皂苷提取工藝制得的總皂苷HPLC圖譜。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
取續(xù)斷藥材烘干、粉碎成10 80目粗粉。取續(xù)斷粗粉80kg，分別加入90%濃度的乙醇200L、150L、150L，分別于80 °C回流提取三次，提取時(shí)間分別為2、2、0. 5小時(shí)，合并提取液，濃縮回收乙醇至無(wú)醇味，加20L水加熱80°C溶解，過(guò)濾，得濾液；濾液加40L石油醚(沸程60 90°C)攪拌均勻，35°C保溫?cái)嚢?0分鐘脫酯，靜置4小時(shí)，分層后放出下層水溶液， 析晶，過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加20%濃度的乙醇32kg加熱溶解后回收乙醇，干燥，得總皂苷8. Okgo所得提取物中，續(xù)斷總皂苷的重量百分含量為84.7%，川續(xù)斷皂苷VI占提取物含量為75. 8%ο 實(shí)施例2
4取續(xù)斷藥材烘干、粉碎成30 60目粗粉。取續(xù)斷粗粉80kg，加無(wú)水乙醇200L、150L、 150L，分別于78°C回流提取三次，提取時(shí)間分別為3、2、1小時(shí)，合并提取液，濃縮回收乙醇至無(wú)醇味，加40L水加熱70°C溶解，過(guò)濾，得濾液；濾液加80L石油醚(沸程60 90°C )攪拌均勻，45°C保溫?cái)嚢?5分鐘脫酯，靜置8小時(shí)，分層后放出下層水溶液，析晶，過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加35%濃度的乙醇32kg加熱溶解后回收乙醇，干燥，得總皂苷8. Okgo所得提取物中，續(xù)斷總皂苷的重量百分含量為92.9%，川續(xù)斷皂苷VI占提取物含量為81. 4%ο 實(shí)施例3
取續(xù)斷藥材烘干、粉碎成30 80目粗粉。續(xù)斷粗粉80kg，加91%濃度的乙醇300L、 200L、150L，分別于80 °C回流提取三次，提取時(shí)間分別為3、2、2小時(shí)，合并提取液，濃縮回收乙醇至無(wú)醇味，加80L水加熱55°C溶解，過(guò)濾，得濾液；濾液加160L石油醚(沸程60 90°C)攪拌均勻，55°C保溫?cái)嚢?5分鐘脫酯，靜置10小時(shí)，分層后放出下層水溶液，析晶， 過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加50%濃度的乙醇30kg加熱溶解后回收乙醇，干燥，得總皂苷 11. 2kgo所得提取物中，續(xù)斷總皂苷的重量百分含量為89.5%。川續(xù)斷皂苷VI占提取物含量為79. 7%ο 實(shí)施例4
取續(xù)斷藥材烘干、粉碎成30 80目粗粉。續(xù)斷粗粉80kg，加擬％濃度的乙醇400L、 200L、200L，分別于78 °C回流提取三次，提取時(shí)間分別為3、2、2小時(shí)，合并提取液，濃縮回收乙醇至無(wú)醇味，加120L水加熱45°C溶解，過(guò)濾，得濾液；濾液加MOL石油醚(沸程60 90°C)攪拌均勻，60°C保溫?cái)嚢?5分鐘脫酯，靜置12小時(shí)，分層后放出下層水溶液，析晶， 過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加70%濃度的乙醇22kg加熱溶解后回收乙醇，干燥，得總皂苷 10.4kg。所得提取物中，續(xù)斷總皂苷的重量百分含量為92. 9%，川續(xù)斷皂苷VI占提取物含量為 80. 3%ο 實(shí)施例5
取續(xù)斷藥材烘干、粉碎成10 30目粗粉。續(xù)斷粗粉80kg，加95%濃度乙醇400L、300L、 300L，分別于78 °C回流提取三次，提取時(shí)間分別為3、2、2小時(shí)，合并提取液，濃縮回收乙醇至無(wú)醇味，加160L水加熱30°C溶解，過(guò)濾，得濾液；濾液加320L石油醚(沸程60 90°C) 攪拌均勻，50°C保溫?cái)嚢?0 60分鐘脫酯，靜置12小時(shí)，分層后放出下層水溶液，析晶， 過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加95%濃度的乙醇18kg加熱溶解后回收乙醇，干燥，得總皂苷 9. 0kg。所得提取物中，續(xù)斷總皂苷的重量百分含量為95.5%。川續(xù)斷皂苷VI占提取物含量為 81. 8% ο 實(shí)施例6取續(xù)斷藥材烘干、粉碎成10 30目粗粉。續(xù)斷粗粉80kg，加94%濃度的乙醇500L、 500L、200L，分別于78 °C回流提取三次，提取時(shí)間分別為4、3、2小時(shí)，合并提取液，濃縮回收乙醇至無(wú)醇味，加80L水加熱55°C溶解，過(guò)濾，得濾液；濾液加120L石油醚(沸程60 90°C)攪拌均勻，40°C保溫?cái)嚢?0分鐘脫酯，靜置12小時(shí)，分層后放出下層水溶液，析晶， 過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加95%濃度的乙醇20kg加熱溶解后回收乙醇，干燥，得總皂苷 11. 9kgo所得提取物中，續(xù)斷總皂苷的重量百分含量為91.7%。川續(xù)斷皂苷VI占提取物含量為 80. 5%ο 實(shí)施例7
取續(xù)斷藥材烘干、粉碎成10 30目粗粉。續(xù)斷粗粉80kg，加92%濃度的乙醇640L， 加熱回流1小時(shí)后，在回流的情況下邊放提取液邊補(bǔ)充濃縮回收的乙醇，如此循環(huán)提取6小時(shí)至提取液近無(wú)色。濃縮提取液至無(wú)乙醇味，加80L水加熱55°C溶解，過(guò)濾，得濾液； 濾液加120L石油醚(沸程60 90°C)攪拌均勻，45°C保溫?cái)嚢?0分鐘脫酯，靜置12小時(shí)，分層后放出下層水溶液，析晶，過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加95%濃度的乙醇20kg加熱溶解后回收乙醇，干燥，得總皂苷11. 0kg。所得提取物中，續(xù)斷總皂苷的重量百分含量為90.4%。川續(xù)斷皂苷VI占提取物含量為 76. 5%ο 實(shí)施例8
藥效學(xué)試驗(yàn)續(xù)斷總皂苷提取物對(duì)維甲酸所致大鼠骨質(zhì)疏松的影響取大鼠80只，按體重隨機(jī)分為8組，一組作為正常對(duì)照組，給予0. 5%CMC-Na,其余7組大鼠均給予維甲酸70mg/kg，以制備骨質(zhì)疏松模型，在這7組大鼠中，1組作為模型對(duì)照組給予0. 5%CMC-Na, 3組分別給予傳統(tǒng)工藝提取制得的續(xù)斷總皂苷高0. 4g/kg、中0. 2 g/kg和低0. Ig/kg3個(gè)劑量作為陽(yáng)性對(duì)照組，其余3組分別給予本發(fā)明工藝制得的續(xù)斷總皂苷高 0. 4g/kg、中0. 2 g/kg和低0. lg/kg 3個(gè)劑量。動(dòng)物同時(shí)灌胃維甲酸及藥物2周后，停服維甲酸，繼續(xù)給藥2周，于停藥后第二天將大鼠處死，解剖雙側(cè)股骨，左側(cè)股骨用于測(cè)定骨重系數(shù)、骨礦密度、骨灰含量和骨鈣、骨磷，右側(cè)股骨用于作病理組織學(xué)檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表1 一 4。表1本品對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠骨重系數(shù)和骨灰含量的影響(Z 士S) (n=10)
表 權(quán)利要求
1.一種續(xù)斷總皂苷的提取方法，其特征在于取續(xù)斷粉碎成粗粉，加90%以上濃度的乙醇加熱回流2-4次，或加熱回流1小時(shí)后再循環(huán)回流至提取液近無(wú)色，合并提取液，濃縮回收乙醇至無(wú)乙醇味，濃縮液加水適量，加熱溶解后過(guò)濾；濾液用石油醚脫脂，靜置分出水相， 析出沉淀，過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加乙醇加熱溶解后回收乙醇，干燥，即得續(xù)斷總皂苷提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的續(xù)斷總皂苷的提取方法，其特征在于所述的方法具體包括以下步驟(1)取續(xù)斷藥材烘干、粉碎成粗粉，加3 15倍量90%以上濃度的乙醇回流提取2-4 次，回流時(shí)間每次0. 5-4小時(shí)，或加熱回流1小時(shí)后再循環(huán)回流至提取液近無(wú)色，合并提取液，濃縮至無(wú)乙醇味，濃縮液加10倍量以下的水，加熱20°C -90°C溶解，過(guò)濾，得濾液；(2)濾液中加入石油醚，混合均勻，30°C 60°C保溫?cái)嚢?0 60分鐘，靜置1小時(shí)以上，放出下層液，析出沉淀，過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加乙醇加熱溶解后回收乙醇，干燥，即得續(xù)斷總皂苷提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的續(xù)斷總皂苷的提取方法，其特征在于所述的續(xù)斷粗粉為10目 80目。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的續(xù)斷總皂苷的提取方法，其特征在于所述的石油醚加入量為濾液重量的0. 5 5倍量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的續(xù)斷總皂苷的提取方法，其特征在于所述的石油醚的沸程為60°C 90°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的續(xù)斷總皂苷的提取方法，其特征在于續(xù)斷總皂苷粗品所加的乙醇質(zhì)量濃度為15%以上。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的續(xù)斷總皂苷的提取方法，其特征在于續(xù)斷總皂苷提取物中，總皂苷占提取物百分含量大于等于50. 0%，川續(xù)斷皂苷VI占提取物含量大于等于 30. 0%。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種續(xù)斷總皂苷的提取方法，取續(xù)斷粉碎成粗粉，加乙醇加熱回流數(shù)次，或加熱回流1小時(shí)后再循環(huán)回流至提取液近無(wú)色，合并提取液，回收乙醇至無(wú)乙醇味，加水適量，加熱溶解后過(guò)濾；濾液用石油醚萃取脫脂，靜置分出水相，析出沉淀，過(guò)濾得續(xù)斷總皂苷粗品，粗品加乙醇加熱溶解后回收乙醇，干燥，即得續(xù)斷總皂苷提取物。本發(fā)明方法提取工藝簡(jiǎn)單，在提取過(guò)程中不再采用正丁醇萃取，省略多次萃取步驟，簡(jiǎn)化了提取工藝，降低生產(chǎn)成本，減少有毒有機(jī)溶劑(正丁醇)的使用，易工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K36/185GK102204943SQ20111014013
公開(kāi)日2011年10月5日 申請(qǐng)日期2011年5月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月27日
發(fā)明者張龍清, 方肖慶, 胡獻(xiàn)躍, 金靈華, 黃秀清 申請(qǐng)人:浙江迪耳藥業(yè)有限公司