專利名稱：遍地金有效部位的抗抑郁作用及應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中草藥技術領域，具體地說是涉及到中藥遍地金有效部位的提取分離，更具體地說，涉及到遍地金有效部位的抗抑郁作用及應用。
背景技術：
抑郁癥是一種最普遍的精神疾病，在西方工業(yè)發(fā)達國家終身抑郁癥的發(fā)病率在 6% 8%之間。隨著社會經濟的發(fā)展和競爭壓力的加劇、抑郁癥狀的發(fā)生率和抑郁癥患病率將會越來越高，特別在城市人群中有明顯上升。中國的抗抑郁藥物市場的總體規(guī)模還相當小，并且占醫(yī)藥市場總額的比例很低。目前，中國的抑郁癥發(fā)病率為4. 6 %，和世界水平相當，考慮到精神類疾病呈上升趨國即將進入老齡化社會，抗抑郁藥物市場的潛力會相當大。抗抑郁藥市場巨大，而抗抑郁中藥制劑并不多。目前研究的較深入，抗抑郁效果較好的中藥要數藤黃科金絲桃屬植物，但作為制劑上市方面，國外僅有為數不多的貫葉連翹類制劑上市，國內基本尚無此屬植物藥的成品制劑上市。遍地金(Hypericum wightianum)是藤黃科金絲桃屬植物，又名對葉草、對月草 (四川、云南)、螞蟻草，全草入藥，具有重要的藥用價值。其主要成分有苯并二蒽類、黃酮及間苯三酚類等，遍地金在我國西南地區(qū)貯量較大，遍地金具有與貫葉連翹相似的化學成分， 含有金絲桃素及類似物質，有抗抑郁作用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的之一是提供遍地金的有效部位，目的之二是提供該有效部位的方法，目的之三是提供該有效部位的作用及用途。通過對遍地金的脫脂，然后用含醇量為0-80%的水與甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇配成的水醇液提取，濃縮液用樹脂柱層析分離，對各分離部位進行抗抑郁藥效學篩選，發(fā)現了抗抑郁效果較好的一分離組分。在具體的實施例中發(fā)現該組分可以顯著縮短懸尾實驗中小鼠的不動時間及強迫游泳實驗中小鼠的不動時間，可以明顯抑制利血平所致小鼠體溫降低，顯著增加小鼠獲得性無助實驗中的逃避次數，這些充分顯示，該組分的抗抑郁效果較好。本發(fā)明發(fā)現的遍地金經一定的提取分離方法制備的有效組分，具有明顯的抗抑郁作用，可以用于制備抗抑郁制劑，或用于研究該組分內的具體化合物，開發(fā)抗抑郁單體化合物制劑。
具體實施例方式(一 )遍地金有效部位的制備方法(1)將遍地金干燥藥材粉碎，按常規(guī)方法脫脂，用脫脂后的藥材用含醇量為 0-80%的水與甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇配成的水醇液提取，將浸膏中加入2-5倍量的乙醇進行沉淀。
(2)濾除浸膏中的醇沉淀物后，將濾液濃縮成濃縮液。(3)濃縮液用樹脂柱層析分離，先用水沖洗掉雜質，再用含醇量10-95%的水醇液梯度洗脫，合并洗脫液，濃縮，減壓干燥得有效部位。( 二)通過小鼠懸尾實驗、小鼠強迫游泳實驗、利血平所致體溫下降實驗、獲得性無助實驗，證實遍地金的該分離部位具有明顯的抗抑郁作用，可以采用本領域公知的方法制成各種劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑等，用于抗抑郁癥的治療，或者可以用于研究該組分內的具體化合物，開發(fā)抗抑郁單體化合物制劑。下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。下面描述的實施例僅用于更好的闡述本發(fā)明，而不是用來限制本發(fā)明的范圍。實施例1 遍地金分離組分的制備將遍地金干燥藥材2kg粉碎，用6倍量石油醚脫脂，用6倍量的80%乙醇回流提取2h，回流溫度88-90°C，提取3次，過濾，合并提取液。減壓回收溶劑，得總提物浸膏，將浸膏中加入3倍量的乙醇，濾除浸膏中的醇沉淀物后，將濾液濃縮成濃縮液，濃縮液用D-101 型大孔樹脂進行分離，用0-95 %的乙醇梯度洗脫，各梯度為水、30 %乙醇、50 %乙醇、70 %乙醇、95%乙醇，去除水部分，將其它部分收集合并洗脫液減壓回收溶劑，殘留物真空干燥，得量41. 5g，即為該分離部分。實施例2 遍地金分離組分小鼠懸尾實驗(1)試驗動物KM小鼠，雄性，體重(20士2)g。(2)陽性對照藥鹽酸氟西汀膠囊。(3)雄性昆明小鼠18_22g，140只，隨機分為14組，每組10只動物，分別為正常對照組、氟西汀組及受試藥大、中、小劑量組。各組動物灌胃給藥，正常對照組給予等量生理鹽水灌胃。各組小鼠每天灌胃1次，連續(xù)7天，飲食飲水不限。于末次給藥后lh，將小鼠距尾尖2cm處粘水平木板上(距地面高60cm)，兩面用板擋住小鼠視線，適應Imin后記錄5min 內累積不動時間。結果用t檢驗，兩兩對比。結果顯示，與常水組比較，水提取物大劑量組有極顯著性差異(P <0.01)，水提取物中、小劑量組、正丁醇提取物大、中、小劑量組、合成劑I大、中劑量組有顯著性差異(P < 0. 05)。與陽性藥組比較，水提取物大劑量組有顯著性差異(P < 0. 01)，各給藥組間無顯著性差異，各給藥組各劑量之間比較無顯著性差異。提示A (水層)、B (正丁醇層)各個劑量，可以顯著減少小鼠懸尾不動時間，有較好的改善小鼠行為絕望抑郁狀態(tài)，且作用優(yōu)于陽性藥。實施例3、遍地金分離組分的強迫游泳實驗(1)試驗動物=KM小鼠，雄性，體重(20士2)g。(2)陽性對照藥鹽酸氟西汀膠囊。(3)實驗方法雄性昆明小鼠，2346g，140只，隨機分為14組，每組10只動物，分別為正常對照組、氟西汀組及受試藥大、中、小劑量組。各組動物灌胃給藥，正常對照組給予等量生理鹽水灌胃。各組小鼠每天灌胃1次，連續(xù)7天，末次給藥前禁食不禁水16h。末次灌胃后lh，將小鼠放入玻璃水缸中游泳(水深10cm，水溫23士2°C )，適應^iin后記錄細in內游泳累積不動的時間。結果用t檢驗，兩兩對比。結果顯示與常水組比較，水提取物大、中劑量組、正丁醇提取物大、中劑量組、乙酸乙酯提取物大、小劑量組有極顯著性意義
4(P < 0. 01)，合成劑I大、中劑量組有顯著性意義(P < 0. 05)。與陽性藥組比較，各給藥組無顯著性差異，各給藥組各劑量之間比較無顯著性差
已提示A(水層)、B(正丁醇層)大、中劑量，C(乙酸乙酯)大、小劑量，可以顯著減少小鼠游泳不動時間，有較好的改善小鼠行為絕望抑郁狀態(tài)，且作用優(yōu)于陽性藥。實施例4 遍地金分離組分抑制利血平所致體溫下降實驗(1)試驗動物KM小鼠，雄性，體重(20士2)g。(2)陽性對照藥鹽酸氟西汀膠囊。利血平注射液上海復旦復華藥業(yè)有限公司，批號040901。(3)實驗方法雄性昆明小鼠140只，隨機分為14組，每組10只動物，分別為正常對照組、氟西汀組及受試藥大、中、小劑量組。各組動物灌胃給藥，正常對照組給予等量生理鹽水灌胃。各組小鼠每天灌胃1次，連續(xù)7天，飲食飲水不限。于末次灌胃給藥前，用電子體溫計測定小鼠肛溫作為正常體溫值，測體溫后即刻腹腔注射利血平注射液5mg · kg-1，計時Ih灌胃給藥，給藥Ih后再次測定各組小鼠肛溫，記錄給藥前后體溫差值。結果用t檢驗， 兩兩對比。結果顯示，上述各劑量及陽性藥與常水組比較，對利血平所致小鼠體溫降低無顯著影響。利血平引起體溫降低主要是干擾了去甲腎上腺素(NA)的功能，提示各提取物及化合物抗抑郁作用可能與體內去甲腎上腺素表達無關。實施例5 遍地金分離組分抑制阿樸嗎啡所致體溫下降實驗(1)試驗動物KM小鼠，雄性，體重(20士2)g。(2)陽性對照藥鹽酸氟西汀膠囊。實驗方法昆明小鼠140只，雌雄各半，隨機分為14組，每組10只動物，分別為正常對照組、氟西汀組及受試藥大、中、小劑量組。各組動物灌胃給藥，正常對照組給予等量生理鹽水灌胃。各組每天灌胃1次，連續(xù)7天，飲食飲水不限。于末次灌胃給藥后30min測定各組小鼠肛溫1次，藥后Ih皮下注射阿樸嗎啡16mg · kg-1，于皮下注射阿樸嗎啡后30min 用電子體溫計測定各組小鼠肛溫1次，記錄給藥前后體溫差值。結果用t檢驗，兩兩對比。結果顯示，與常水組比較，陽性藥能顯著升高阿撲嗎啡所致小鼠體溫降低(P < 0. 01)，各篩選藥物劑量組對體溫降低均無顯著影響；與陽性藥組比較，A、B各個劑量及C 中劑量差異有顯著性意義。阿樸嗎啡為多巴胺(DA)受體激動劑，能直接刺激突觸后的多巴胺受體，提示各提取物及化合物抗抑郁作用可能與體內多巴胺受體的功能無關。實施例6 遍地金分離組分的獲得性無助實驗(1)試驗動物=Wistar大鼠，雄性，體重QOO士20) g。(2)陽性對照藥鹽酸氟西汀膠囊。(3)試驗器材大鼠穿梭箱(自制)有兩室，每室30CmX20CmX30Cm，中間通路 7cmX7cm，可以人為開閉，箱底為不銹鋼柵條，條間距1cm，兩室柵條可以分別通電，其中一室與刺激器接通時，另一室為安全室。電刺激器(自制)；交流電變壓器；萬用電表；秒表；電鈴。(4)實驗方法=Wista雄性大鼠208只，隨機分為14組，每組8只動物，分別為正常對照組、氟西汀組及受試藥大、中、小劑量組。遍地金提取物灌胃小劑量組、中劑量組、 大劑量組、鹽酸氟西汀膠囊組給藥，正常對照組給予等量生理鹽水灌胃。第1天，進行不可逃避的電休克，將穿梭箱的中間通路關閉，將大鼠放入箱內，通過底部的金屬柵條接受 0. 8mAX 15s的足部電流刺激，每分鐘1次，15s/次，共進行60次，總刺激時間為15min。第 2天各組大鼠開始灌胃給藥，連續(xù)7天，進食進水不限。末次給藥后Mh，進行條件回避試驗，將動物放入穿梭箱內適應^，然后進行試驗，條件刺激為鈴聲，非條件刺激為足部電流刺激(0. 8mA)，在鈴聲3s后開始刺激，當動物逃到安全室停止鈴聲和刺激，如未能逃避則刺激達30s時停止，每分鐘1次，共進行30次，刺激間隔為27s。如果在鈴聲開始的3s內逃到安全室即回避成功，記錄30次刺激內成功回避的次數。結果用t檢驗，兩兩對比。結果顯示，A(水層)大、中、小劑量組大鼠成功逃避次數與常水組比較顯著增加，均有顯著性意義 (分別？<0.011<0.051<0.01) ；B(正丁醇層)中、小劑量組大鼠成功逃避次數與常水組比較顯著增加，均有顯著性意義(均P <0.05) ；C(乙酸乙酯)中、小劑量組大鼠成功逃避次數與常水組比較顯著增加，均有顯著性意義(均P <0.05)；各劑量組與陽性藥組比較，差異無顯著性意義；各給藥劑量組之間無顯著性差異。 試驗提示，A(水層)B(正丁醇層)、C(乙酸乙酯)中、小劑量可以顯著增加大鼠成功逃避次數，有較好的改善大鼠學習無助抑郁狀態(tài)，且作用優(yōu)于陽性藥。
權利要求
1.一種中藥遍地金的有效部位的提取方法，其特征具體描述如下述步驟(1)將藥材粉碎后，按常規(guī)方法脫脂。(2)脫脂后的藥材用含醇量為(Γ80%的水與甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇配成的水醇液提取。(3)提取液經過濾常壓、減壓或薄膜蒸發(fā)濃縮成浸膏。(4)將浸膏中加入2-5倍量的乙醇進行沉淀。(5)濾除浸膏中的醇沉淀物后，將濾液濃縮成濃縮液。(6)濃縮液用樹脂柱層析分離，先用水沖洗掉雜質，再用含醇量10-95%的水醇液梯度洗脫，合并洗脫液，濃縮，減壓干燥得有效部位。
2.根據權利要求1所述的常規(guī)方法脫脂，脫脂溶劑采用石油醚、乙醚、汽油或其混合液。
3.根據權利要求1的遍地金的有效部位，用于抗抑郁癥的治療。
4.根據權利要求1的遍地金的有效部位，用于制備抗抑郁藥物原料和制劑中的應用。
5.如權利要求3所述的應用，其特征在于，用于分離單體化合物，研究具體化合物的抗抑郁效果和新藥開發(fā)。
6.根據權利要求3的遍地金的有效部位在制備抗抑郁藥物中的應用，其特征在于，所述的遍地金的有效部位的原料是遍地金全草、全草的地上部分或其它部位中的一種。
全文摘要
通過對遍地金的脫脂，然后用含醇量為0-80％的水與甲醇、乙醇、丙醇或正丁醇配成的水醇液提取，濃縮液用樹脂柱層析分離，對各分離部位進行抗抑郁藥效學篩選，發(fā)現了抗抑郁效果較好的一分離組分。在具體的實施例中發(fā)現該組分可以顯著縮短懸尾實驗中小鼠的不動時間及強迫游泳實驗中小鼠的不動時間，可以明顯抑制利血平所致小鼠體溫降低，顯著增加小鼠獲得性無助實驗中的逃避次數。遍地金經一定的提取分離方法制備的有效組分，具有明顯的抗抑郁作用，可以用于制備抗抑郁制劑，或用于研究該組分內的具體化合物，開發(fā)抗抑郁單體化合物制劑。
文檔編號A61K36/185GK102204941SQ20111013007
公開日2011年10月5日 申請日期2011年5月19日 優(yōu)先權日2011年5月19日
發(fā)明者劉媛, 夏超, 孫興華, 張桂森, 石金城, 祁超 申請人:南京工業(yè)大學, 江蘇恩華藥業(yè)股份有限公司, 江蘇省藥物研究所有限公司