專利名稱：四磨湯制劑的多指標(biāo)成分同時(shí)測(cè)定及其指紋圖譜構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種四磨湯制劑的多指標(biāo)成分同時(shí)測(cè)定方法，以及四磨湯制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法。
背景技術(shù)：
四磨湯中藥方包括木香、枳殼、烏藥和檳榔四味藥材。該方具有順氣降逆，消積止痛功效，可用于嬰幼兒乳食內(nèi)滯證(證見腹脹、腹痛、啼哭不安、厭食納差、腹瀉或便秘)，中老年氣滯、食積癥(證見脘腹脹滿、腹痛、便秘)，以及腹部手術(shù)后促進(jìn)腸胃功能的恢復(fù)。此外，還有文獻(xiàn)報(bào)道其用于治療新生兒黃疸、胃食管返流、病毒性腸炎、便秘型腸易激綜合征和中毒性腸麻痹等疾病的成功病例?，F(xiàn)有技術(shù)中，根據(jù)四磨湯中藥方，已制得多種劑型的四磨湯制劑。通常的制備工藝一般為將四味原藥材采用水蒸氣蒸餾法提取芳香水，芳香水富集揮發(fā)油后直接備用或包合后備用，再將藥渣用水提醇沉得水提液，水提液可濃縮干燥得干膏粉，將上述芳香水或揮發(fā)油，以及水提液或干膏粉，選擇合適的輔料，即制備成口服液、滴丸、乳化劑、膠囊、軟膠囊、片劑、顆粒劑等多種劑型。例如，中國(guó)專利94110842. 2 (公開號(hào)CN1106288)公開了一種四磨湯口服液。其采用中藥檳榔10 25%、木香10 25%、枳殼20 30%、烏藥20 30%，取上述藥材飲片提取芳香性成分，另存；將藥渣加水煎煮，合并濾液，濃縮，加乙醇靜置，濾取清液，減壓回收乙醇，加水煮沸，過濾去渣，濾液中加入芳香性成分水液及適量輔料、濾過、分裝、滅菌即得。四磨湯包括檳榔、木香、枳殼和烏藥，所含成分復(fù)雜多樣。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，木香主要成分包括萜類、生物堿、留體和氨基酸，枳殼主要成分包括黃酮苷、烯烴和生物堿，烏藥主要成分包括萜類和生物堿，檳榔主要成分包括生物堿、鞣質(zhì)和氨基酸。但四磨湯口服液現(xiàn)有的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為部頒標(biāo)準(zhǔn)WS-10040(ZD-0040)_2002該標(biāo)準(zhǔn) “鑒別”項(xiàng)采用TLC法對(duì)木香和檳榔進(jìn)行鑒別取四磨湯口服液成品，用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取， 經(jīng)前處理后制備成供試品溶液；對(duì)照藥材用適宜有機(jī)溶劑提取，經(jīng)前處理后制備成對(duì)照藥材溶液；供試品溶液和對(duì)照藥材溶液點(diǎn)板于硅膠G薄層板，采用適宜展開劑展開，顯色劑顯色，進(jìn)行藥材鑒別?！昂繙y(cè)定”項(xiàng)采用高效液相色譜法測(cè)定指標(biāo)性成分柚皮苷含量用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇醋酸(38 62)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm。四磨湯口服液成品經(jīng)Dltll型大孔吸附樹脂柱洗脫，收集洗脫液，制備成供試品溶液；取柚皮苷對(duì)照品制備成對(duì)照品溶液；采用外標(biāo)法計(jì)算柚皮苷含量。該標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)其他有效成分進(jìn)行定量檢測(cè)，存在一定局限性，不能全面反映中藥產(chǎn)品的質(zhì)量水平。指紋圖譜技術(shù)是新發(fā)展的中藥質(zhì)量控制方法。但通常的指紋圖譜停留在指紋性鑒別或整體相似度的評(píng)價(jià)，注重宏觀特征，對(duì)于微觀特征如具體色譜峰化學(xué)信息和物質(zhì)含量沒有較好體現(xiàn)。多指標(biāo)成分同時(shí)測(cè)定聯(lián)合指紋圖譜技術(shù)是進(jìn)一步發(fā)展的質(zhì)量控制方法，其結(jié)合譜效學(xué)研究手段和分離技術(shù)明確中藥主要有效成分(或主要有效成分群)，確定指紋圖譜重點(diǎn)監(jiān)控的指標(biāo)成分。多指標(biāo)同時(shí)測(cè)定聯(lián)合指紋圖譜技術(shù)既注重宏觀特征，又監(jiān)控多個(gè)有效成分的含量，可實(shí)現(xiàn)微觀和宏觀的有機(jī)結(jié)合，符合中醫(yī)藥整體、宏觀、復(fù)雜的特點(diǎn)，可從整體上評(píng)價(jià)和控制中藥制劑的質(zhì)量，是中藥現(xiàn)代化關(guān)鍵技術(shù)之一。對(duì)于四磨湯制劑，亟需建立檢測(cè)方法，構(gòu)建多指標(biāo)成分同時(shí)測(cè)定聯(lián)合指紋圖譜技術(shù)，以更全面準(zhǔn)確的監(jiān)控四磨湯制劑的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有的四磨湯制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法所檢測(cè)的有效成分單一，不能全面反應(yīng)四磨湯制劑質(zhì)量的缺陷，而提供一種四磨湯制劑多指標(biāo)成分同時(shí)測(cè)定方法，以及四磨湯制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法。本發(fā)明通過譜效學(xué)方法以及分離純化技術(shù)，確定了指紋圖譜需監(jiān)控的主要指標(biāo)成分，即去甲異波爾定、異柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和山梨酸鉀。進(jìn)一步經(jīng)實(shí)驗(yàn)摸索， 最終建立了一種專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便，且穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性和加樣回收率均良好的檢測(cè)方法，從而首次建立了科學(xué)合理的四磨湯制劑的多指標(biāo)成分指紋圖譜。本發(fā)明的四磨湯制劑多指標(biāo)成分同時(shí)測(cè)定方法包括如下步驟將四磨湯制劑的供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜法檢測(cè)，即可；所述的高效液相色譜法的色譜條件為色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為體積百分比0. 1 %的甲酸水溶液， 洗脫梯度如表1所示，檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm。表權(quán)利要求
1. 一種四磨湯制劑多指標(biāo)成分同時(shí)測(cè)定方法，其特征在于其包括如下步驟將四磨湯制劑的供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜法檢測(cè)，即可；所述的高效液相色譜法的色譜條件為 色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為體積百分比0. 的甲酸水溶液，洗脫梯度如表1所示； 表1時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相(v/v%)0至3 55 15%流動(dòng)相A和85 95%流動(dòng)相B3-5 至 20 25線性梯度改變至15 40%流動(dòng)相A和60 85%流動(dòng)相B20-25 至 32 37線性梯度改變至85 100%流動(dòng)相A和0 15%流動(dòng)相B32~37至40以上， 較佳的至40 5085~100%流動(dòng)相A和0~15%流動(dòng)相B檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的四磨湯制劑主要由下述重量份數(shù)的原藥材制得100份木香、50 150份枳殼、50 150份烏藥和50 150份檳榔。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的四磨湯制劑為由下述方法制得的四磨湯制劑將原藥材經(jīng)水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)性成分，與藥渣經(jīng)水提醇沉提取的水提物， 按現(xiàn)有常規(guī)方法制成口服液、滴丸、乳化劑、膠囊、片劑或顆粒劑。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的四磨湯制劑的供試品溶液按下述方法制得當(dāng)所述的四磨湯制劑為四磨湯口服液時(shí)，直接將四磨湯口服液用微孔濾膜過濾，濾液不經(jīng)稀釋，或經(jīng)稀釋至原體積100倍以下，即為供試品溶液；當(dāng)所述的四磨湯制劑為除四磨湯口服液外的其他劑型時(shí)，將溶有四磨湯制劑的溶液經(jīng)超聲處理，冷卻，之后用微孔濾膜過濾，濾液即為供試品溶液。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的高效液相色譜法檢測(cè)的進(jìn)樣量為 2 50 μ L，較佳的為5 20 μ L。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的高效液相色譜法檢測(cè)的柱溫為15 500C，較佳的為20 40°C ；和/或，所述的高效液相色譜法檢測(cè)的流速為0. 5 1. 5mL/min, 較佳的為0. 8 1. 2mL/min。
7.如權(quán)利要求1或6所述的方法，其特征在于所述的十八烷基硅烷鍵合硅膠柱為 Venusil XBP-C18 柱或 Agilent ZORBAX SB-C18 柱。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述的十八烷基硅烷鍵合硅膠柱的徑長(zhǎng)規(guī)格為 4. 6mm X 250mm 或 4. 6mm X 150mm。
9.如權(quán)利要求7或8所述的方法，其特征在于所述的洗脫梯度如表2所示；表2
10. 一種四磨湯制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于其包括如下步驟采用如權(quán)利要求1 9任一項(xiàng)所述的方法檢測(cè)四磨湯制劑，再采用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件，模擬生成四磨湯制劑指紋圖譜。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種四磨湯制劑多指標(biāo)成分同時(shí)測(cè)定方法將四磨湯制劑的供試品溶液進(jìn)行高效液相色譜法檢測(cè)，即可；色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為體積百分比0.1％的甲酸水溶液，采用梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為283nm。本發(fā)明還公開了四磨湯制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法采用該測(cè)定方法進(jìn)行檢測(cè)，再經(jīng)計(jì)算機(jī)模擬，即可得四磨湯制劑指紋圖譜。本發(fā)明的測(cè)定方法操作簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)、且具有優(yōu)異的穩(wěn)定性、精密度、重現(xiàn)性和加樣回收率，可較全面的檢測(cè)四磨湯制劑中多種主要有效成分，從而獲得科學(xué)合理的四磨湯制劑指紋圖譜，完整、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)四磨湯制劑的有效性、安全性、穩(wěn)定性和質(zhì)量均一性。
文檔編號(hào)A61P1/14GK102221590SQ201110074548
公開日2011年10月19日 申請(qǐng)日期2011年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月25日
發(fā)明者劉東文, 劉令安, 易躍能, 楊華, 王長(zhǎng)虹, 程雪梅, 鄧義德 申請(qǐng)人:湖南漢森制藥股份有限公司