專利名稱：一種高血壓肝陽上亢證大鼠模型的制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，本發(fā)明涉及一種高血壓肝陽上亢證大鼠模型的制備方法，該模型用于治療高血壓肝陽上亢證中藥的篩選及藥效評價。
背景技術：
高血壓是最常見心血管病之一，全球患者超6億，我國02年調(diào)查 達I. 6億，并快速增長，需要長期治療。高血壓病是以動脈血壓增高為主要臨床表現(xiàn)的疾病。傳統(tǒng)中醫(yī)理論中并無“血壓”的概念，目前較為公認的說法為古代文獻記載的“眩暈”等證部分應相當于現(xiàn)代的高血壓病的表現(xiàn)。多年來，眾多學者致力于心腦血管病的研究，探索研究多種高血壓中醫(yī)證候動物模型，包括陰虛型、陽虛型、陰陽兩虛型、實火型、肝陽上亢型、血瘀型等。肝陽上亢證為高血壓常見證型。有研究表明，高血壓屬肝陽上亢證者占87%以上。肝陽上亢證以腎水虧于下，水不涵木，而致肝陽偏亢或肝陽絕對亢盛為主要病機，多見于高血壓病，而高血壓肝陽上亢證其主要病理生理基礎為外周交感一腎上腺髓質(zhì)功能偏亢。目前對相關證型的動物模型尚在探索中，本發(fā)明建立了一種用于治療高血壓肝陽上亢證中藥篩選及藥效評價的高血壓肝陽上亢證動物模型的制備方法。通過此法制備的模型大鼠出現(xiàn)血壓升高、面溫升高、抓力下降、自主活動增多、尖叫、咬人、同籠打斗等行為學變化，即表現(xiàn)出中醫(yī)肝陽上亢之“面部烘熱”、“腰膝酸軟”、“躁動不安”、“躁狂易怒”、“毛發(fā)干枯”等證侯；血管調(diào)節(jié)因子方面，出現(xiàn)RAAS系統(tǒng)功能亢奮，AngIKPRL和ALD含量均升高，cGRP水平下降，TXB2/6-k-PGFla 平衡破壞。中醫(yī)認為，附子辛、甘，大熱之品，入心、腎、脾經(jīng)，具有助陽補火之功效，“其性走而
不守”(《本草綱目》)；干姜性熱，味辛，溫中散寒，“干姜......守而不走”，“附子無姜不
熱”，二者相須為用。肉桂性熱，味辛、甘，“通血脈，理疏不足，宣導百藥”，又有補火助陽之效，三者聯(lián)合應用，所致的肝陽上亢證較單味附子湯顯效更快更持久。故在高血壓動物模型的基礎上，聯(lián)合復方附子湯可制備高血壓肝陽上亢證動物模型。目前在現(xiàn)代藥理學對模型的篩選主要集中在生化指標方面，而本發(fā)明以中醫(yī)證侯特征性指標為主要指標進行模型的制備，可為高血壓肝陽上亢證中藥篩選及藥效評價提供更可靠的模型。肝陽上亢證常出現(xiàn)面部烘熱、急躁易怒、心悸失眠等肝陽亢盛之證侯，同時伴有腰膝酸軟、頭重腳輕、脈弦或弦細數(shù)等肝腎陰虛為一般證侯。選用面部溫度來量化“面部烘熱”，用抓力量化“腰膝酸軟”，用自主活動量化“躁動不安”，用眩暈時間及血壓來量化“眩暈”，用一般行為觀察的等級計數(shù)(以分級統(tǒng)計，I級為捉持頸部時尖叫、驚跳，II為捉持頸部時咬人，III級提尾時尖叫、驚跳甚至咬人或同籠頻繁打斗)來顯示“狂躁易怒”；“腎，其華在發(fā)”，肝陽上亢實為腎陰不制陽，故也觀察毛發(fā)色澤。肝陽上亢模型大鼠在一定程度上均表現(xiàn)出面溫升高、抓力下降、自主活動增多、眩暈時間延長、尖叫、咬人、同籠打斗等行為學變化及收縮壓升高。因此，一般體征(毛發(fā)干枯、無光澤，尖叫、易怒、不易抓取、同籠打斗、撕咬)、面溫、抓力、自主活動、血壓可以作為肝陽上亢證中醫(yī)證侯特征性指標。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是建立一種用于治療高血壓肝陽上亢證中藥篩選及藥效評價的高血壓肝陽上亢證模型的制備方法。為了解決上述技術問題，本發(fā)明通過以下技術方案實現(xiàn)在高血壓大鼠模型的基礎上連續(xù)灌服0. 5 2. Og/ml的復方附子湯(含麻黃堿0 6. Omg/ml)，2 6周后制成高血壓肝陽上亢證大鼠模型。其中高血壓大鼠模型可以是自發(fā)性高血壓大鼠(SHR大鼠)、腎性高血壓大鼠或是SD大鼠連續(xù)灌服I. O %鹽水后造成的聞血壓大鼠。模型篩選指標為高血壓肝陽上亢證中醫(yī)證侯的特征性指標，主要為一般體征(毛發(fā)干枯、無光澤，尖叫、易怒、不易抓取、同籠打斗、撕咬)、面溫、抓力、自主活動、血壓。
具體實施例方式實施例I
I實驗材料與儀器I. I造模藥附子湯為附子(090702，四川)、肉桂(030127，廣西)、干姜(090606，浙江)按I : I : I比例制成的水提液，濃度為lg/ml。以上各味藥材經(jīng)鑒定，附子為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的子根加工品，干姜為姜科植物Zingiberofficinale Rose.的干燥根莖，肉桂為樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl.的干燥樹皮。麻黃堿，純度99% (解放軍第八醫(yī)院提供)，食鹽(090605，浙江鹽業(yè)集團公司)。1.2動物SD大鼠，雄性，180-220g，20只，由浙江省實驗動物中心提供，合格證號SCXK (浙)20080033。1.3儀器CODA多通道無創(chuàng)傷大鼠尾動脈血壓儀，美國Kent Scienfic公司；YLS-I多功能大鼠自主活動記錄儀、YLS-13A大小鼠抓力測定儀，山東省醫(yī)學科學院設備供應維修站；8877紅外線非接觸式額溫量測器，北京東方海匯電子技術有限責任公司；LP123電子天平，常熟市衡器廠2實驗方法2. I造模篩選出收縮壓120mmHg以下的SD大鼠20只，隨機分成2組正常對照組、模型對照組每組10只。造模第I周，每天灌服濃度為lg/ml的復方附子湯(含麻黃堿
3.25mg/ml);第2周至4周，每天灌服復方附子湯(含麻黃堿5. 00mg/ml),灌胃容積均為lml/100g，并自由飲用1%鹽水。同時，正常給予蒸餾水，灌胃容積為lml/100g，持續(xù)4周。2.2測定指標于造模后14d、28d觀察大鼠一般體征(性情變化，以分級統(tǒng)計，I級為尖叫，II級為不易抓取、驚跳，III級咬人、同籠打斗)。于造模第7d、14d、21d、28d時測定自主活動、抓力、面部溫度、血壓。造模末期，禁食IOh后采血，采用放免法測定腎素(PRL)、血管緊張素II (AngII)、醛固酮(ALD)、心鈉素(ANP)、降鈣素相關基因肽(cGRP)、內(nèi)皮素(ET)。2.3統(tǒng)計分析計量資料數(shù)據(jù)以X±s表示，組間比較采用t-test檢驗；計數(shù)資料米用X2檢驗。3實驗結(jié)果3.1 —般體征正常對照組大鼠皮毛干爽光滑，活潑、易動、精神狀態(tài)良好，模型對照組大鼠毛發(fā)干枯、無光澤，尖叫、易怒、不易抓取、同籠打斗、撕咬(P<0.01)。表I大鼠一般體征的觀察士S，n=10)
權利要求
1.一種高血壓肝陽上亢證大鼠模型的制備方法，其特征在于在高血壓大鼠模型的基礎上連續(xù)灌服0. 5 2. Og/ml的復方附子湯(含麻黃堿0 6. Omg/ml)，2 6周后制成高血壓肝陽上亢證大鼠模型。
2.根據(jù)權利要求I一種高血壓肝陽上亢證大鼠模型的制備方法，其特征是高血壓大鼠模型可以是自發(fā)性高血壓大鼠(SHR大鼠)、腎性高血壓大鼠或是SD大鼠灌服連續(xù)灌服I.0%鹽水后造成的高血壓大鼠。
3.根據(jù)權利要求I一種高血壓肝陽上亢證大鼠模型的制備方法，其特征是復方附子湯制備方法為取附子干姜肉桂=I I 1，浸泡0.5 2.0小時，取5 12倍劑量水煎煮I 3次，加入適量麻黃堿混合后濃縮至濃度為0. 5 2. Og/ml (含麻黃堿0 .6. Omg/ml)。
4.根據(jù)權利要求I一種高血壓肝陽上亢證大鼠模型的制備方法，其特征是復方附子湯(含麻黃堿0 6. Omg/ml)灌服時間為2 6周。
5.根據(jù)權利要求I一種高血壓肝陽上亢證大鼠模型的制備方法，其特征是模型篩選指標主要為一般體征(毛發(fā)干枯、無光澤，尖叫、易怒、不易抓取、同籠打斗、撕咬)、面溫、抓力、自主活動、血壓。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于高血壓肝陽上亢證中藥篩選及藥效評價的高血壓肝陽上亢證模型的制備方法。在高血壓大鼠模型的基礎上連續(xù)灌服0.5～2.0g/ml的復方附子湯(含麻黃堿0～6.0mg/ml)，2～6周后制成高血壓肝陽上亢證大鼠模型。針對高血壓肝陽上亢證的中醫(yī)證侯，將一般體征、面溫、抓力、自主活動、血壓作為高血壓肝陽上亢證主要特征性指標。
文檔編號A61K31/137GK102641510SQ20111003864
公開日2012年8月22日 申請日期2011年2月16日 優(yōu)先權日2011年2月16日
發(fā)明者呂圭源, 李巍, 蘇潔, 陳寧, 陳素紅 申請人:溫州醫(yī)學院