專利名稱：含有攀援魚藤的局部組合物以及治療皮膚的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及含有攀援魚藤(“Derris”)提取物的局部組合物以及使用此種組合物來治療、逆轉和/或預防皮膚損傷或皮膚老化的跡象(包括皮膚中的細紋和皺紋)的方法。
背景技術：
面部皺紋(無論是細小的表面紋路還是更深的褶皺)的逐漸產(chǎn)生是累積的皮膚損傷和皮膚老化的早期跡象，這可以是內(nèi)在的和/或由外部因素引起或加速的。例如，皮膚的提早老化和皺紋形成可通過下列被加速過度暴露于太陽和其它的損傷性元素，過度活躍的面部表情肌肉，經(jīng)常使用煙草產(chǎn)品，不良的營養(yǎng)或皮膚病癥。下列是可見的變化，其可以相組合而刻畫出較不希望的外觀細小的表面皺紋發(fā)展為更深的褶皺，由于重復的皮膚折疊而深化面部表情，以及隨著成熟而產(chǎn)生的深的褶皺?？墒褂脭?shù)種侵入性的技術，其中物質被注射或植入到皮膚的區(qū)域中，其暫時地削弱肌肉或者作為皮膚體積的填充劑起作用。然而，侵入性的技術通常是有風險的并且需要醫(yī)師的監(jiān)督或協(xié)助，這可以是不方便和昂貴的， 而非侵入性的處理在歷史上僅獲得了最小限度的成功。無論面部褶皺的原因是什么，用于減少或去除這些問題的安全有效的處理極難實現(xiàn)。皮膚彈性對于補救皮膚損傷或皮膚老化(例如松弛，減少的皮膚緊實度和年輕外觀)和改善細紋和皺紋的出現(xiàn)是關鍵的。彈性蛋白使所有的這些成為可能，彈性蛋白是這樣的蛋白聚合物其像橡皮筋一樣起作用，重復地拉伸和收縮而不遭受任何損傷。彈性蛋白聚合物是通過彈性蛋白原單體的交聯(lián)形成的。雖然有多至五種能夠催化此過程的酶，不清楚所述交聯(lián)確切地是如何被調控的。這些酶之一，賴氨酰氧化酶樣1( “L0XL1”)，被發(fā)現(xiàn)是彈性蛋白聚合物更新的關鍵性調控因子，彈性蛋白聚合物是向結締組織(包括皮膚)提供彈性特性的細胞外基質組分。Liu和同事報道了 LOXLl對于重塑彈性蛋白纖維是關鍵的。Liu預測了此酶被細胞外基質蛋白腓骨蛋白-5征募到彈性蛋白的位點。根據(jù)Liu，LOXLl然后引發(fā)彈性蛋白原單體(TE)整合為更大的聚合物。 Liu發(fā)現(xiàn)了 LOXLl是防止組織(例如動脈和肺)中與年齡相關的彈性喪失所必需的(Liu 等人(2004)Elasticfiber homeostasis requires lysyl oxidase-like 1 protein. NatGenet. 36(2) :178-82)。相信彈性蛋白不在青春期后產(chǎn)生，青春期以后組織中彈性蛋白聚合物的維持是由彈性蛋白聚合物的更新(例如“抗彈性蛋白酶”)和降解(例如彈性蛋白酶)的活性的競爭調控的。隨著人老化，發(fā)生所述競爭性活性中的不平衡，這引起含有彈性蛋白的組織中彈性的喪失。皮膚中這種彈性的喪失可表現(xiàn)為皮膚表面的皺紋。雖然調控彈性蛋白的更新和降解(例如“抗彈性蛋白酶”和彈性蛋白酶活性)的確切機制是未知的，酶賴氨酰氧化酶樣 1( “L0XL1”)被報道是“抗彈性蛋白酶”因子，其能夠通過彈性蛋白原單體的聚合而介導彈性蛋白纖維的更新(見例如Kagan等人(2003) J. Cell. Biochem. 88:660-672;和Li等人 (2004) Nat. Genet. 36 178-182)。L0XL1因此是組織中彈性蛋白聚合物更新的關鍵性調節(jié)因子，所述彈性蛋白聚合物向結締組織(包括皮膚)提供彈性特性。因此，起作用以增加L0XL1 轉錄和/或翻譯或者L0XL1活性的試劑被相信增加“抗彈性蛋白酶”活性，促進彈性蛋白纖維的更新，并引起含有彈性蛋白的組織(例如皮膚)彈性的改善。Noblesse等人報道了 LOXLl存在于正常皮膚和皮膚等同模型(SE) 二者的真皮和表皮中。賴氨酰氧化酶樣(LOXL)的超微結構定位顯示出其與彈性蛋白陽性材料相關聯(lián)。 研究人員假設的是LOXL可能在彈性纖維形成中起作用(Noblesse E，等人(2004)Lysyl oxidase-like and lysyl oxidase are present in the dermis and epidermis of a skin equivalent and in human skin and are associated to elastic fibers. J Invest Dermatol. 122(3):621-30)。Pascual和同事報道了彈性蛋白合成的標記物(包括L0XL1)的水平隨著年齡以顯著白勺禾呈度M少(Pascual，等人(2008) Down—regulation of lysyl oxydase-like in aging and venous insufficiency. Histol Histopathol. 23(2):179-86)。美國專利公開號2005/0188427 (Li和Liu)描述了治療具有與彈性纖維喪失相關的狀況(例如松弛或有皺紋的皮膚)的受試者的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的L0XL1增強劑。所述L0XL1增強劑據(jù)稱是L0XL1多肽或其活性片段，或者編碼 L0XL1多肽的核酸或其活性片段。所述L0XL1增強劑還據(jù)稱包括通過其中描述的篩選方法所鑒別出的小分子或其它治療性化合物。鈣神經(jīng)素是參與活化的T細胞核因子(“NFAT”)(轉錄因子)的活化的蛋白磷酸酶。NFAT轉錄因子的活化刺激參與鈣運輸和發(fā)炎反應的T細胞。鈣神經(jīng)素在皮膚中的表達隨著年齡內(nèi)在地隨時間增加。局部的鈣神經(jīng)素抑制劑(例如他克莫司軟膏，其作為PROTOPIC 商業(yè)上可得)被用于治療特應性皮炎，這是通常用局部類固醇治療的濕疹性皮膚疾病。他克莫司軟膏(作為PR0T0PIC 商業(yè)上可得)被報道抑制鈣神經(jīng)素，這引起抑制抗原特異性的T細胞活化和抑制炎性細胞因子釋放(見例如Beker sky等人，2001，J. Am. Acad. Dermatol. 441: S17-S27)。Furue等人報道了他克莫司軟膏被用作特應性皮炎發(fā)炎的一線治療。(見例如Furue，等人(2006)Dermatol. Ther. 19:118-26)。另一種商業(yè)上可得的鈣神經(jīng)
素抑制劑是吡美莫司，其在商業(yè)上可以霜劑獲得并且在商業(yè)上作為ELIDEI/K:而以霜劑的
形式出售。觀察到了炎癥對于皮膚的外觀可具有有害影響。發(fā)炎之后觀察到了皮膚中的色素不足和色素過度。(見Ruiz-Maldonado等人(1997) kmin Cutan Med Surg. 16(1) :36-43 Jomita等人(1989)Dermatologica. 179Suppl 1 49-53)。Holland等人觀察到了某些患有發(fā)炎的痤瘡損傷的患者也顯示出了皮膚的痤瘡疤痕。(見Holland等人 Semin Cutan Med Surg. 2005Jun ； 24 (2) 79-83) Pillai 等人報道了發(fā)炎和其所引起的活性氧物質(R0Q的累積在體內(nèi)人類皮膚的內(nèi)在和光老化中起重要作用。Pillai等人報道了發(fā)炎進一步活化各種基質降解性金屬蛋白酶的轉錄，從而引起異常的基質降解和非功能性基質組分的累積。Pillai等人觀察到了發(fā)炎和ROS引起對細胞蛋白，脂質和碳水化合物的氧化性損傷，其在真皮和表皮分隔中累積，從而促成光老化的病因學。Pillai等人列出了許多用于防止由UV發(fā)起的這一反應級聯(lián)引起的光損傷的策略，這包括通過物理和化學防曬劑防止UV穿透到皮膚中；使用抗炎化合物(例如環(huán)氧酶抑制劑，細胞因子產(chǎn)生的抑制劑) 來防止/減少炎癥；通過抗氧化劑來清除和猝滅R0S;抑制嗜中性彈性蛋白酶的活性以防止細胞外基質損傷和基質金屬蛋白酶(MMPs)的活化，以及抑制MMP表達(例如通過類視黃醇)和活性(例如通過天然和合成的抑制劑)(見Pillai，等人(2005) Int J Cosmet Sci. Feb;27(1):17-34)。Thornfeldt等人建議，利用治療粘膜皮膚病況(包括老化)的醫(yī)師推薦的活性成分的皮膚護理方案應更加關注逆轉和防止慢性炎癥。Thornfeldt報道了慢性炎癥似乎與許多可預防的和可治療的皮膚疾病和病況(例如可見的皮膚老化)緊密相關。Thornfeldt陳述道，粘膜皮膚炎癥作為許多全身性和粘膜皮膚疾病(包括外因性老化)的最終共同的途徑已在分子和細胞水平上被建立了。(見 Thornfe 1 dt，CIU2008) J. Cosmet. Dermatol. 7 78-82)。Bissett等人報道了長期暴露于亞紅斑劑量的紫外(UV)輻射的白化無毛小鼠展現(xiàn)出真皮細胞構成(包括炎性細胞)的增加。在一個實驗中，Bissett觀察到了局部的氫化可的松，布洛芬和萘普生在白化無毛小鼠中保護抵抗UVB輻射誘導的可見皺紋形成，腫瘤形成和組織學改變。在另一個實驗中，Bissett觀察到了氫化可的松和萘普生在白化無毛小鼠中有效抵抗UVA輻射誘導的可見皮膚松弛和組織學改變。研究者假設的是這些數(shù)據(jù)暗示了炎癥在慢性光損傷中的作用。(見Bissett，等人(1990) Photodermatol. Photoimmunol. Photomed. 7:153-8)。糖胺聚糖(GAGs)是長的非分支聚合物，其是由重復的二糖單元形成的，所述二糖單元包含各種己糖胺，己糖或己糖醛酸部分以及它們的硫酸鹽。通常，GAG的每個二糖單元是由己糖胺部分(例如D-葡糖胺或D-半乳糖胺)或其硫酸鹽，以及己糖(例如半乳糖) 或己糖醛酸部分(例如，D-葡醣醛酸或L-艾杜糖醛酸)，或者它們的硫酸鹽組成的。在皮膚中所通常觀察到的GAG包括透明質酸，某些軟骨素硫酸鹽，和硫酸皮膚素。此外，在皮膚中觀察到了少量的肝素和硫酸乙酰肝素。GAG被認為是細胞外基質的重要組分。GAG可被共價連接至蛋白以形成蛋白聚糖。蛋白聚糖存在于所有的哺乳動物組織(包括皮膚)中，并且被認為促成所述組織的生長、保存和修復。已報道了 GAG和蛋白聚糖參與皮膚機械特性中與年齡相關的改變，這包括組織水合和回彈性方面的改變。(見Carrino等人，Arch Biochem Biophys. 2000Jan 1 ； 373 (1) :91-101 ； Vogel 等人，Z Gerontol. 1994May-Jun； 27 (3) 182-5 ； Lanir 等人，J Biomech Eng. 199(Feb ； 112 (1) 63_9)。透明質酸這種糖胺聚糖還被報道負責皮膚的水合， 營養(yǎng)交換和保護抵抗自由基損傷。(見Wiest等人J Dtsch DermatolGes. 2008Mar ； 6 (3) 17 6-80;Bert 等人Biorheology. 1998May-Jun； 35 (3) :211-9)。Wiest 等人報道了，在臨床研究中重復注射透明質酸后，顯示出彈性和充盈度方面的增加。還報道了，隨著皮膚老化，GAG合成下降并且皮膚中總體的GAG含量隨時間減少。(例如Smith等人，J. Invest. Dermatol.， 1962，39，第 347-350 頁；Fleischmajer 等人，Biochim. Biophys. Acta, 1972，279，第 265-275 頁；或 Longa s 等人，Carbohydr. Res.，1987，159，第 127-136 頁)。攀援魚藤(“Derris”)是木質藤本，其通常被發(fā)現(xiàn)遍及東南亞(包括泰國)而生長。特別地，攀援魚藤是具有盤繞習性的攀登分枝灌木。其全年維持它的葉子并且被分類為常青、多年生植物。攀援魚藤屬于豆科植物科，并且在英語中通常被稱作“Jewel Vine”， 而通常在泰語中已知為“Thaowanprieng”或“Tao-wan-priang”。已報道了許多泰國的民間應用，包括對于疼痛緩解，利尿劑，肌肉僵硬/疼痛的應用。(見Chuakul等人，Medicinal Plants in Thailand, Vol II, Bangkok Thai land:Mahidol University,1997)。Chuakul等人還報道了攀援魚藤可賦予許多有益的藥理學特性，例如抗細菌，抗組胺和降血壓活性。此外，還報道了攀援魚藤提取物可顯示出類花生酸，髓過氧化物和白細胞三烯B(4) 的體外活性，這些是與炎癥相關的活性(見例如，Laupattaraka sem等人^)04)Planta Med. 70:496-501 和 Laupattarakasem，等人 Q003)J Ethnopharmaco 1. 85:207-15)。在大鼠后爪腫脹測試中，當腹膜內(nèi)施用時攀援魚藤提取物被報道有活性，但是當經(jīng)口施用時沒有產(chǎn)生顯著的效果。(見 Laupattarakasem，等人 Q003)J Ethnopharmacol. 85 207-15)。迄今為止，攀援魚藤作為人類皮膚的局部治療而用于抗老化目的的活性是未知的。仍存在對于減少老化跡象的化妝品組合物的需求，所述老化跡象包括松弛，減少的彈性，細紋和皺紋(特別是在面部、頸部、手等的皮膚上)。因此，本發(fā)明的目的在于提供改善的組合物和使用方法，以改善皮膚的外觀，包括通過減少細紋和皺紋的出現(xiàn)。發(fā)明_既述令人驚訝地發(fā)現(xiàn)了攀援魚藤的提取物在減少，逆轉，減輕和/或預防由減少的皮膚彈性引起的皮膚老化跡象中是有效的，這包括細紋和/或皺紋的出現(xiàn)，深度或嚴重性，皮膚松弛和皮膚中相關的老化跡象。通常，所述組合物和方法可用于處理通常在人類中發(fā)現(xiàn)的、與彈性纖維喪失相關的任何皮膚狀況。相信這些益處(至少部分地)產(chǎn)生自所述提取物刺激L0XL-1的產(chǎn)生，抑制鈣神經(jīng)素活性和/或刺激GAG的合成的能力。攀援魚藤提取物因此可通過這三種獨立的機制中的至少一種而潛在地減少老化的跡象，例如皺紋形成，皮膚變色和減少的彈性。基于這一發(fā)現(xiàn)，一個實施方案提供了用于向皮膚提供抗老化益處的方法，所述方法包括向皮膚區(qū)域應用化妝品上可接受的媒介中的局部組合物，其中所述皮膚區(qū)域的特征在于一種或多種皮膚老化的跡象，例如皺紋，細紋，皮膚松弛，萎縮，喪失皮膚彈力或充盈度，或喪失皮膚著色或色調；其中所述組合物包含含量有效向皮膚提供抗老化益處的攀援魚藤提取物。此類皮膚老化跡象包括而不限于下列(a)治療，減少和/或預防細紋或皺紋，(b)減少毛孔大小，(c)改善皮膚厚度，豐滿度和/或緊固度；(d)改善皮膚柔韌度和/或柔軟性；(e)改善皮膚色調，光澤和/或澄清度；(f)改善前膠原和/或膠原產(chǎn)生；(g)改善彈性蛋白的維持和重塑； (h)改善皮膚質地和/或促進重質構化；(i)改善皮膚屏障修復和/或功能；(j)改善皮膚輪廓的外觀；(k)恢復皮膚光彩和/或明亮度；(1)補充皮膚中必需的營養(yǎng)和/或組成成分；(m)改善由老化和/或更年期而降低的皮膚外觀；(η)改善皮膚水分和/或水合；(ο)改善(例如，增加和/或防止喪失)皮膚彈性和/或彈力；
(ρ)減少色素斑點的出現(xiàn)；(q)治療，減少和/或預防皮膚松弛；和/或(r)治療，減少和/或預防斑駁的皮膚外觀。本發(fā)明的一個方面提供了用于預防，治療或減輕皮膚中的皺紋或細紋的方法，所述方法包括向有需要的皮膚局部應用包含攀援魚藤提取物和化妝品上可接受的媒介的組合物。本發(fā)明的另一個方面提供了用于向皮膚提供抗老化益處的局部組合物，所述組合物包含含量有效向皮膚提供抗老化益處的攀援魚藤提取物和化妝品上可接受的媒介。所述局部組合物可以是洗液，霜劑，凝膠或泡沫的形式。通過參考下面的發(fā)明詳述，將更好地理解本發(fā)明的這些和其它方面。


圖1顯示了 GAG的合成作為向人成纖維細胞施用的攀援魚藤提取物的濃度的函數(shù)。發(fā)明詳述在下面的發(fā)明描述中，將理解本文中所使用的術語具有其在本領域中通常的和習慣的涵義，除非另行說明。本文中所提及的所有重量百分比都以總組合物的“％按重量”或 “%wt”的形式給出，這是指向皮膚應用之前，在加入任何載體、溶劑、潤滑劑或其它組分之后總制劑的重量百分比，除非另行說明。令人驚訝地發(fā)現(xiàn)了攀援魚藤提取物能夠刺激LOXLl的活性和/或表達，抑制鈣神經(jīng)素活性和刺激GAG的合成。LOXLl是維持和重塑皮膚中的彈性蛋白所需的必需的酶。相信LOXLl活性的增加促進彈性蛋白纖維的更新并產(chǎn)生皮膚彈性的改善。鈣神經(jīng)素在皮膚中的表達隨著年齡內(nèi)在地隨時間增加。相信鈣神經(jīng)素與炎癥相關，所述炎癥對于皮膚的外觀可具有有害的影響。抑制鈣神經(jīng)素被期待提供減少炎癥對皮膚老化的貢獻。GAG是細胞外基質的組分并且提供更年輕的皮膚特征性的機械特性(例如改善的彈性)以及提供改善的皮膚水合。較老的皮膚中GAG含量的減少可能是較老的皮膚在美學上顯得劣于較年輕皮膚的原因。相信刺激GAG的合成可提供提供緩解不希望的皮膚老化特征或延遲其出現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的包含攀援魚藤提取物的局部組合物通過這三種獨立機制中的至少一種而減少老化的跡象，例如皺紋形成，皮膚變色和減少的彈性。術語“皺紋”或“皺紋形成”是指細小皺紋形成和粗皺紋形成二者。細小皺紋形成或細紋是指皮膚表面上的淺表紋和皺紋。粗皺紋形成是指深溝，特別是面部和眼睛周圍的深紋/皺紋，這包括表情紋，例如眉間紋和皺紋，抬頭紋和皺紋，魚尾紋和皺紋，法令紋及木偶紋和皺紋。抬頭紋和皺紋是指前額皮膚上的淺表紋和/或深溝。魚尾紋和皺紋是指眼睛區(qū)域周圍的皮膚上的淺表紋和/或深溝。木偶紋和皺紋是指嘴周圍皮膚上的淺表紋和/或深溝?？删图y路的數(shù)目、長度和深度評估皺紋。皮膚變色包括離散的色素沉著(其通常已知為色素斑點或“老年斑”)和斑駁的色素沉著。離散的色素沉著是更深的色素的明顯的均一區(qū)域并且可顯示為皮膚上的棕色斑點或雀斑。斑駁的色素沉著是在大小和形狀方面比離散的色素沉著更大且更不規(guī)則的暗色斑點。斑駁的色素沉著的區(qū)域傾向于隨著日光照射而變得更深。
皮膚的彈性是指皮膚在變形后重獲其原始形狀和大小的能力的彈性和彈力。皮膚的彈性可通過能夠通過拉伸或擠壓皮膚引起變形的掐捏測試來評估。鑒于這些和其它發(fā)現(xiàn)，料想包含攀援魚藤提取物的局部組合物可用于對抗皮膚損傷和皮膚老化的跡象，這包括減少細紋和皺紋，色素斑點，皮膚松弛，喪失彈性，斑駁的皮膚外觀以及皮膚中相關的老化跡象。料想的是，包含攀援魚藤提取物的局部組合物可被應用于任何皮膚表面，包括但不限于面部、頸部和/或手的皮膚。本發(fā)明提供了用于局部應用的組合物，其包含有效量的攀援魚藤提取物以治療、 逆轉、減輕和/或預防皮膚損傷或皮膚老化的跡象。此類益處包括而不限于下列(a)治療，減少和/或預防細紋或皺紋，(b)減少毛孔大小，(c)改善皮膚厚度，豐滿度和/或緊固度；(d)改善皮膚的柔韌度和/或柔軟性；(e)改善皮膚色調，光澤和/或澄清度；(f)改善前膠原和/或膠原生產(chǎn)；(g)改善彈性蛋白的維持和重塑； (h)改善皮膚質地和/或促進重質構化；(i)改善皮膚屏障修復和/或功能；(j)改善皮膚輪廓的外觀；(k)恢復皮膚光彩和/或明亮度；(1)補充皮膚中必需的營養(yǎng)和/或組成成分；(m)改善由老化和/或更年期而降低的皮膚外觀；(η)改善皮膚水分和/或水合；(ο)增加皮膚彈性和/或彈力；(ρ)減少色素斑點的出現(xiàn)；
(q)治療，減少和/或預防皮膚松弛；和/或(r)治療，減少和/或預防斑駁的皮膚外觀。本發(fā)明的組合物可被應用于需要處理的皮膚。即，患有任意上述特性的缺乏或喪失的皮膚或者將從任意上述皮膚特性的改善受益的皮膚。備選地，本發(fā)明的組合物可被應用于任何皮膚表面(優(yōu)選面部、頸部、胸部和/或手的皮膚)以防止任意前述特性的不足或喪失。在某些優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法針對的是預防、治療和/或減輕皮膚中的細紋和/或皺紋。在這種情形中，所述組合物被應用于需要所述治療的皮膚，這是指具有皺紋和/或細紋的皮膚。優(yōu)選地，所述組合物被直接應用于細紋和/或皺紋。所述組合物和方法適于處理任何皮膚表面上(包括而不限于，面部、頸部和/或手的皮膚)的細紋和/或皺紋。本發(fā)明的一個組分是源自攀援魚藤植物的植物組分，優(yōu)選直接源自攀援魚藤植物。所述植物組分可以是純的形式，半純的形式，或未純化的形式。所述攀援魚藤植物組分可以是通過溶劑提取而獲得的提取物的形式。優(yōu)選地，所述攀援魚藤植物組分是通過有機溶劑提取而獲得的。特別地，可使用極性有機溶劑。更優(yōu)選地，所述攀援魚藤植物組分是通過含水有機溶劑提取獲得的。合適的有機溶劑包括但不限于醇(例如甲醇，乙醇，丙醇，丁醇等)；乙二醇；醚 (例如二乙醚，二丙醚等)；酯(例如乙酸丁酯，乙酸乙酯等)；酮(例如丙酮，乙基甲基酮等)；有機酸包括乙酸等；二甲亞砜；乙腈；異丙醇；二氯甲烷；氯仿；己烷；二甲苯； 石油醚；其它有機溶劑；以及它們的組合。其它合適的溶劑包括水，生理鹽水，磷酸緩沖液和磷酸緩沖鹽水等。溶劑提取包括從含有所需組成成分的攀援魚藤植物收集原料，例如種子，針葉，葉子，根，皮，球果，蓮，根狀莖，愈傷組織細胞，原生質體，器官和器官系統(tǒng)，以及分生組織。優(yōu)選地，所述提取物可從攀援魚藤植物的莖獲得。在某些實施方案中，從攀援魚藤植物收集的原料可被干燥以減少原料的水含量?？赏ㄟ^許多不同的手段來干燥所述原料，例如風干，烘干，在真空下旋轉蒸發(fā)或凍干。在優(yōu)選的實施方案中，所述原料包含干燥的攀援魚藤植物的莖。簡要地，有機溶劑提取方法包括使用有機溶劑清洗和提取所述原料?？墒褂锰崛C器來進行溶劑提取，如本領域中所熟知的。在某些實施方案中，將攀援魚藤植物材料研磨為小的顆粒大小，然后通過可測量的加注機，經(jīng)過原料入口將其放入提取機器中。所述植物原料被推進器推到提取機器中，所述推進器緩慢地將植物原料向前移動?？赏ㄟ^廢料排放出口頂部的溶劑入口將溶劑加入機器中。由于重力和平衡方面的差異，溶劑流向原料入口， 浸泡原料并從溶劑入口的相反一側流出。因為原料和溶劑持續(xù)地以相反的方向相對于彼此移動，原料被持續(xù)地浸在含有低濃度提取物的溶液中。作為平衡的結果，可通過持續(xù)地相對于低濃度溶液提取植物材料而實現(xiàn)植物組成成分的高產(chǎn)率。使用了適于提取植物組成成分的提取時間，通常約1-12小時是合適的，且更優(yōu)選為約2-8小時，最優(yōu)選為約3-6小時。提取的溫度為約25°C -90°C，優(yōu)選約35°C _70°C，更優(yōu)選約50°C-60°C。然后精細過濾所收集的提取物以去除碎片，并且其可被直接使用，或者被濃縮(例如通過蒸餾所述溶劑或通過其它常規(guī)的過程)。所述提取物活性成分的溶液可在真空下被旋轉蒸發(fā)或被凍干。典型的提取物活性成分含量為約25%以上，優(yōu)選50%以上，且所述提取物還可以粉末的形式被提供，包括凍干的粉末。類似地，含水有機溶劑提取包括起初從含有所需組成成分的植物收集原料(例如植物的種子，針葉，葉子，根，皮，球果，蓬，根狀蓬，愈傷組織細胞，原生質體，器官和器官系統(tǒng)，以及分生組織)，其可被研磨為小的顆粒大小。將經(jīng)研磨的植物材料浸泡在酸性或堿性的含水溶液中(取決于所需提取物在酸性或堿性(basic)條件下的溶解度和穩(wěn)定性)。對于在酸性條件下提取，將酸(例如鹽酸或硫酸)加入水中，例如以約3%(w/v)的濃度。對于在堿性條件下提取，可向水中加入堿(例如氫氧化鈉或碳酸鈉)。提取時間和提取溫度通常與在上面描述的有機溶劑提取方法中所使用的相似。優(yōu)選地，攀援魚藤提取物是通過用水、乙醇或其混合物提取攀援魚藤的莖而獲得的。優(yōu)選的溶劑系統(tǒng)將包含約10% (按體積)至約90% (按體積)的乙醇和約10% (按體積) 至約90% (按體積)的水。更通常地，所述溶劑系統(tǒng)將包含約25% (按體積)至約75% (按體積)的乙醇和約25% (按體積)至約75% (按體積)的水。用包含約45% (按體積)至約55% (按體積)的乙醇和約45% (按體積)至約55% (按體積)的水的溶劑系統(tǒng)獲得了特別好的結果，其中優(yōu)選的是乙醇和水50:50混合物(按體積)。
然后收集所述提取物并精細過濾以去除碎片?？上蛩鎏崛∥镏屑尤雺A試劑(例如氨)或酸化試劑(例如硫酸)以通過調節(jié)PH來中和所述溶液，這取決于所收集的提取物的酸性或堿性?？芍苯邮褂盟龊崛∥?，將其濃縮或干燥。備選地，然后可向經(jīng)中和的溶液中加入有機溶劑以將所述提取物從含水相轉移到有機相。此類有機溶劑的示例包括但不限于乙醇，異丙醇，丁醇，戊醇，己醇和ニ甲苯。包含溶解在有機溶劑中的經(jīng)轉移的提取物活性成分的提取物可被直接使用，作為濃縮物使用，或被干燥。提取物活性成分的溶液可在真空下被旋轉蒸發(fā)或被凍干。所述提取物可作為液體或固體被提供，優(yōu)選以干燥的粉末形式，包括凍干的粉末。合適的提取方法在下列中被公開PCT公開W003/079816(描述了用于制備具有高含量番茄紅素的番茄提取物的方法)，W004/014404(描述了用于制備松果菊提取物的方法)和W004/014958(描述了提取松果菊根的多糖)，所有這些都在此以其全部通過引用而并入。含有不同組成成分的不同植物可與攀援魚藤植物物質混合并一起提取。這種混合提取的方法可優(yōu)選被用提取含有的組成成分在用于提取的溶劑(例如乙醇)中具有與攀援魚藤中的組成成分相似的溶解度的那些植物。提取物的混合物可被濃縮并儲存在適當?shù)娜軇┲?。根?jù)本發(fā)明的組合物可被配制為用于局部應用的各種形式并且將包含約0. 0001% (按重量)至約90%(按重量)的攀援魚藤提取物。在此范圍中，相信所述組合物將刺激LOXLl 的活性和/或表達，抑制鈣神經(jīng)素活性，和/或刺激GAG的合成。所述組合物可包含約 0. 001% (按重量)至約25% (按重量)的攀援魚藤提取物。優(yōu)選地，所述組合物包含約0.01% (按重量)至約10% (按重量)的攀援魚藤提取物。在優(yōu)選的范圍內(nèi)，所述組合物可包含的攀援魚藤提取物在約0. 1%，0. 25%，0. 5%，0. 75%或1% (按重量)直至5%，7. 5%或10% (按重量) 的總組合物的范圍內(nèi)。上述量是指攀援魚藤提取物的“有活性的量”。術語“有活性的量”是指不含稀釋劑、溶劑或為了體積而加入的任何其它成分吋，攀援魚藤提取物的量。向皮膚提供特定抗老化益處的“有效的量”或“有效量”是指當應用足以在皮膚老化的特定表現(xiàn)方面提供臨床上可測量的改善的時間吋，在皮膚老化的特定表現(xiàn)方面提供臨床上可測量的改善所需的提取物的“有活性的量”。在另ー個實施方案中，如本文中所使用的攀援魚藤提取物也包括“合成的”提取物，即已知攀援魚藤植物組分和/或組成成分的各種組合，所述已知攀援魚藤植物組分和/ 或組成成分被組合以基本上模擬天然來源的攀援魚藤植物提取物的組成和/或活性。最優(yōu)選地，所述合成的提取物與天然的攀援魚藤植物材料具有基本上相同數(shù)目的活性組分。合成的提取物與天然攀援魚藤植物材料之間的活性物質的數(shù)值發(fā)生率的對應也可被描述為 “百分比共同性”。合成的提取物與植物或天然提取物的化學組成具有約50%或更多的共同性。換言之，合成的提取物具有在植物或天然提取物中發(fā)現(xiàn)的活性成分的約50%或更多。 更優(yōu)選地，合成提取物的化學組成與植物或天然提取物的化學組成具有約70%或更多的共同性。最佳地，合成的提取物與植物或天然提取物的化學組成具有約90%或更多的共同性。所述組合物可以被配制為各種產(chǎn)品形式，例如洗液，霜劑，乳菜，噴霧，氣溶膠，餅， 軟膏，精華，凝膠，膏劑，貼劑，筆，濕巾，面膜，棒，泡沫，酏劑，濃縮物等，特別是用于局部施用。優(yōu)選地，所述組合物被配制為洗液，霜劑，軟膏，凝膠和棒。更優(yōu)選地，所述組合物被配制為洗液或霜劑。此外，可通過電離子透入法而實現(xiàn)靶向遞送和/或滲透的提高。前述產(chǎn)品形式將優(yōu)選地包含乳劑和除所述提取物和媒介之外的ー種或多種成分，例如在皮膚上具有有益效果的ー種或多種成分。所述組合物可包括化妝品上可接受的媒介。此類媒介可采取本領域中已知的任何適于向皮膚應用的形式，并且可包括水(例如去離子水)；植物油；礦物油；酷，例如棕櫚酸辛酷，肉豆蔻酸異丙酯和棕櫚酸異丙酯；醚，例如ニ辛基醚和異山梨醇ニ甲醚；醇，例如乙醇和異丙醇；脂肪醇，例如鯨蠟醇，鯨蠟硬脂醇，硬脂醇和聯(lián)苯醇；異鏈烷烴，例如異辛烷，異十二烷和十六烷；硅油，例如環(huán)甲基聚硅氧烷，ニ甲基聚硅氧烷，ニ甲基聚硅氧烷交聯(lián)聚合物，聚硅氧烷和它們的衍生物，優(yōu)選經(jīng)有機修飾的衍生物；烴油，例如礦物油，礦脂， 異二十烷和聚異丁烯；多元醇，例如丙ニ醇，甘油，丁ニ醇，戊ニ醇和己ニ醇；蠟，例如蜂蠟和植物蠟；或者前述的任何組合或混合物。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包含化妝品上可接受的媒介(稀釋劑或載體)，這是指其與人類皮膚相客。所述組合物可包含含水相，油相，醇，有機硅相或它們的混合物。所述化妝品上可接受的媒介可包含乳剤。合適的乳劑的非限制性實例可包括油包水乳剤，水包油乳剤，水包有機硅乳剤，有機硅包水乳剤，水包蠟乳剤，水包油包水三重乳劑等，其具有霜劑，凝膠或微乳劑的外觀。所述乳劑可包括乳化剤，例如非離子，陰離子或兩性的表面活性剤。所述乳劑的油相優(yōu)選具有一種或多種有機化合物，這包括潤滑劑；保濕劑(例如丁ニ醇，丙ニ醇，甲基葡糖醇聚醚-20和甘油)；其它水可分散的或水溶性組分，包括增稠劑例如硅酸鎂鋁或羥基烷基纖維素；膠凝劑，例如高MW聚丙烯酸，即卡波姆934;以及它們的混合物。所述乳劑可具有一種或多種能夠乳化組合物中存在的各種組分的乳化剤。適合用于所述油相中的化合物包括而不限干，植物油；酷，例如棕櫚酸辛酷，肉豆蔻酸異丙酯和棕櫚酸異丙酯；醚，例如ニ辛基醚；脂肪醇，例如鯨蠟醇，硬脂醇和山崳醇； 異鏈烷烴，例如異辛烷，異十二烷和異十六烷；硅油，例如ニ甲基聚硅氧烷，環(huán)有機硅和聚硅氧烷；烴油，例如礦物油，礦脂，異二十烷和聚異丁烯；天然或合成的蠟；等等。合適的疏水性烴油可以是飽和的或不飽和的，具有脂肪族的特征以及可以是直鏈或支鏈的或含有脂環(huán)或芳香環(huán)。含油相可由単一的油或不同油的混合物構成。烴油包括具有6-20個碳原子、更優(yōu)選10-16個碳原子的那些。代表性的烴包括癸烷，十二烷，十四烷，十三烷，和C8_2(1異鏈烷烴。鏈烷烴可從Exxon獲得，在IS0PARS商標之下，以及從PermethylCorporation獲得。此外，C8_2Q鏈烷烴(例如Permethyl Corporation制造的C12異鏈烷(異十二烷)，具有的商品名為Permethyl 99ATM)也被料想是合適的。各種商業(yè)上可得的Q6異鏈烷，例如異十六烷(具有商品名Permethyl RTM)也是合適的。優(yōu)選的揮發(fā)性烴的實例包括聚癸烷，例如異十二烷和異癸烷，包括例如Permethyl-99A (Presperse Inc.)；和C7-C8至C12-C15異鏈烷，例如可從Exxon Chemicals獲得的Isopar系列。代表性的烴溶劑是異十二烷。油相可包含一種或多種蠟，這包括例如稻麩蠟，巴西棕櫚蠟，ouricurry wax,小燭樹蠟，蒙丹蠟，甘蔗蠟，石蠟，聚乙烯蠟，F(xiàn)ischer-Tropsch蠟，蜂蠟，微晶蠟，有機硅蠟，氟化的賭，以及它們的任意組合。
非限制性的乳化劑包括乳化性蠟，乳化性多羥基醇，聚醚多元醇，聚醚，多元醇的單酯或ニ酷，乙ニ醇硬脂酸單酷，單硬脂酸甘油酷，ニ硬脂酸甘油酷，含有有機硅的乳化剤， 大豆固醇，脂肪醇例如鯨蠟醇，丙烯酸酷，脂肪酸例如硬脂酸，脂肪酸鹽，以及它們的混合物。優(yōu)選的乳化劑包括大豆固醇，鯨蠟醇，硬脂酸，乳化性蠟，丙烯酸酷，含有有機硅的乳化劑以及它們的混合物。可被用于本發(fā)明的組合物中的其它具體的乳化劑包括但不限干，下列的ー種或多種例如，山梨坦酯；聚甘油-3- ニ異硬脂酸酯；Cich3ci烷基丙烯酸酯交聯(lián)聚合物；二甲基聚硅氧烷PEG-7異硬脂酸酷，丙烯酰胺共聚物；礦物油；山梨坦單硬脂酸酷， 山梨坦三硬脂酸酷，山梨坦倍半油酸酷，山梨坦單油酸酯；甘油酷，例如單硬脂酸甘油酯和單油酸甘油酯；聚氧乙烯酚類，例如聚氧乙烯辛基酚和聚氧乙烯壬基酚；聚氧乙烯醚，例如聚氧乙烯鯨蠟基醚和聚氧乙烯硬脂醇醚；聚氧乙烯乙ニ醇酯；聚氧乙烯山梨坦酯；ニ甲聚硅氧烷共聚醇；聚甘油酷，例如聚甘油-3-ニ異硬脂酸酯；甘油月桂酸酷；硬脂醇聚醚_2， 硬脂醇聚醚-10和硬脂醇聚醚-20。其它的乳化劑在INCI成分字典和手冊，第11版2006 中提供，其公開在此通過引用而并入。這些乳化劑通常將以下列量存在于所述組合物中約0. 001%至約10% (按重量)， 特別是約0. 01%至約5% (按重量)的量，更優(yōu)選約0. 1%至約3% (按重量)。所述油相可包含一種或多種揮發(fā)性和/或非揮發(fā)性硅油。揮發(fā)性有機硅包括環(huán)形和線性的揮發(fā)性ニ甲基硅氧烷有機硅。在一個實施方案中，所述揮發(fā)性有機硅可包括環(huán)ニ甲聚硅氧烷，這包括四聚體(D4)，五聚體(M)和六聚體(D6)環(huán)甲基聚硅氧烷，或者其混合物?？商貏e提及的是揮發(fā)性環(huán)甲基聚硅氧烷-六甲基環(huán)三硅氧烷，八甲基-環(huán)四硅氧烷，和十甲基-環(huán)五硅氧烷。合適的ニ甲聚硅氧烷可從Dow Corning獲得，名稱為Dow Corning 200 液體，且具有的粘度范圍為約0.65至600000厘沲或更高。合適的非極性、揮發(fā)性液體硅油在美國專利號4，781，917中公開，在此以其全部通過引用而并入。其它的揮發(fā)性有機硅材料被描述于iTodd等人，“Volatile Silicone Fluids for Cosmetics, "Cosmetics and Toiletries, 91:27-32 (1976)中，其在此以其全部通過引用而并入。線性的揮發(fā)性有機硅通常在25°C時具有的粘度小于約5厘沲，而環(huán)形有機硅在25°C 時具有的粘度小于約10厘沲。各種粘度的揮發(fā)性有機硅的實例包括Dow Corning 200， Dow Corning244, Dow Corning 245, Dow Corning 344 禾ロ Dow Corning 345, (DowCorning Corp.) ； SF-1204 和 SF-1202 硅油(G. Ε. Silicones)，GE 7207 和 7158 (General Electric Co.)；以及SWS-03314(SWS SiliconesCorp.) 0線性、揮發(fā)性有機硅包括低分子量聚ニ甲基硅氧烷化合物，例如六甲基ニ硅氧烷，八甲基三硅氧烷，十甲基四硅氧烷和十二甲基五硅氧烷。非揮發(fā)硅油將通常包含聚烷基硅氧烷，聚芳基硅氧烷，聚烷基芳基硅氧烷，或它們的混合物。聚ニ甲基硅氧烷是優(yōu)選的非揮發(fā)性硅油。所述非揮發(fā)性硅油在25°C時，將通常具有的粘度為約10至約60，000厘沲，優(yōu)選約10至約10，000厘沲，更優(yōu)選約10至約500 厘沲；且在大氣壓カ下的沸點大于250°C。非限制性的實例包括ニ甲基聚硅氧烷(ニ甲聚硅氧烷)，苯基三甲基聚硅氧烷，和ニ苯基ニ甲聚硅氧烷。揮發(fā)性和非揮發(fā)硅油可任選地以各種官能團進行取代，例如烷基，芳基，氨基，乙烯基，羥基，鹵代烷基，烷基芳基，以及丙烯酸酷基團?？捎梅请x子表面活性劑(乳化劑)使有機硅包水乳劑乳化，例如聚ニ有機硅氧烷-聚氧化烯構造塊共聚物，這包括美國專利號4，122，029中所描述的那些，其公開在此通過引用而并入。這些乳化劑通常包含聚ニ有機硅氧烷主鏈(通常是聚ニ甲基硅氧烷)， 具有包含-(EO)m-和/或-(PO)n-基團的側鏈，其中EO是乙烯氧基且PO為1，2-丙烯氧基，所述側鏈通常用氫或低級烷基(例如，Cp6，通常為C1J加帽或封端。其它合適的有機硅包水乳化劑被公開于美國專利號6，685，952中，其公開在此通過引用而并入。商業(yè)上可得的有機硅包水乳化劑包括可從Dow Corning獲得的那些，交易名稱為3225C和 5225CF0RMULATI0N AID;有機硅 SF-1528，可從 General Electric 獲得；ABIL EM 90 和 EM 97，可從 Goldschmidt Chemical Corporation (Hopewell，VA)獲得；以及 SILWET 乳化劑系列，由 OSI Specialties (Danbury，CT)出售。有機硅包水乳化劑的實例包括但不限于ニ甲基聚硅氧烷PEG10/15交聯(lián)聚合物， ニ甲基聚硅氧烷共聚醇，鯨蠟基ニ甲基聚硅氧烷共聚醇，PEG-15月桂基ニ甲基聚硅氧烷交聯(lián)聚合物，月桂基甲基聚硅氧烷交聯(lián)聚合物，環(huán)甲基聚硅氧烷和ニ甲基聚硅氧烷共聚醇，ニ 甲基聚硅氧烷共聚醇(和)辛酸/癸酸甘油三酷，聚甘油-4異硬脂酸酯(和)鯨蠟基ニ甲基聚硅氧烷共聚醇(和)月桂酸己酷，和ニ甲基聚硅氧烷共聚醇(和)環(huán)戊硅氧烷。有機硅包水乳化劑的優(yōu)選實例包括但不限于PEG/PPG-18/18 ニ甲聚硅氧烷(商品名稱5225C，Dow Corning)，PEG/PPG-19/19 ニ甲聚硅氧烷(商品名稱 BY25_337，Dow Corning)，鯨蠟基 PEG/ PPG-10/1 ニ甲聚硅氧烷(商品名稱 Abil EM-90，Goldschmidt Chemical Corporation), PEG-12 ニ甲聚硅氧烷(商品名稱 SF 1288, General Electric)，月桂基 PEG/PPG-18/18 甲基聚硅氧烷(商品名稱5200F0RMULATI0N AID，Dow Corning)，PEG-12 ニ甲聚硅氧烷交聯(lián)聚合物(商品名稱9010和9011有機硅弾性體摻合物，Dow Corning)，PEG-IO ニ甲聚硅氧烷交聯(lián)聚合物(商品名稱KSG-20，Siin-Etsu)，ニ甲聚硅氧烷PEG-10/15交聯(lián)聚合物(商品名稱KSG-210，Shin-Etsu)和ニ甲基聚硅氧烷PEG-7異硬脂酸酷。所述有機硅包水乳化劑通常將以下列量存在于所述組合物中約0. 001%至約10% (按重量)，特別是約0. 01%至約5% (按重量)的量，更優(yōu)選1% (按重量)以下。所述乳劑的含水相可包括一種或多種其它的溶劑，這包括低級醇，例如乙醇、異丙醇等。所述揮發(fā)性溶劑也可以是化妝品上可接受的酯例如乙酸丁酯或乙酸乙酯；酮，例如丙酮或乙基甲基酮；等等。所述含油相將通常構成約10%至約99%，優(yōu)選約20%至約85%，更優(yōu)選約30%至約 70% (按重量)，基于所述乳劑的總重量，而含水相將通常構成約1%至約90%，優(yōu)選約5%至約 70%，更優(yōu)選約20%至約60% (按重量)的總乳剤。所述含水相將通常包含約25%至約100%， 更優(yōu)選約50%至約95% (按重量)的水。所述組合物可包括脂質體。脂質體可包含其它添加劑或物質和/或可被修飾以在施用后更特異性地到達或保留在位點處。在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物包含的攀援魚藤提取物可具有的pH為約1至約8。在某些實施方案中，所述組合物的pH將是酸性的，即小于7. 0，且優(yōu)選將在約2至約 7之間，更優(yōu)選在約3. 5至約5. 5之間。所述組合物可任選地包含其它美容或皮膚活性成分和/或賦形劑。優(yōu)選地，所述其它的美容活性成分和賦形劑不是強的氧化劑并且不具有強的氧化潛力。更優(yōu)選地，所述組合物不包括有機或無機的過氧化物。
合適的其它美容或皮膚活性成分和賦形劑包括，例如填充劑，精油，乳化性試劑， 抗氧化劑，抗炎劑，表面活性剤，成膜劑，螯合劑，膠凝劑，增稠劑，潤滑剤，保濕劑(例如，丁 ニ醇，丙ニ醇，甲基葡糖醇聚醚-20和甘油)，濕潤劑，維生素，礦物質，成形劑，粘性和/或流變性修飾劑，防曬劑，角質軟化劑，退色劑，類視黃醇，激素化合物，α-羥基酸，α-酮酸， 抗分枝桿菌劑，抗真菌劑，抗微生物劑，抗病毒劑，止痛劑，脂質化合物，抗過敏劑，Hl或Η2 抗組胺劑，抗炎劑，抗刺激物，抗腫瘤藥，免疫系統(tǒng)加強劑，免疫系統(tǒng)抑制劑，抗痤瘡劑，麻酔劑，防腐剤，驅蟲劑，皮膚冷卻化合物，皮膚保護劑，皮膚滲透增強劑，去角質劑，潤滑剤，香料，著色劑(包括色素和珠光劑)，退色劑，去色素劑，PH調節(jié)劑，防腐劑(例如，DMDM乙內(nèi)酰服/碘代丙炔基碳酸丁酷)，穩(wěn)定劑，藥劑，光穩(wěn)定劑，中和劑(例如三乙醇胺)以及它們的混合物。除了前述之外，本發(fā)明的化妝品組合物可含有用于治療皮膚病癥的任何其它活性成分或化合物。著色劑可包括例如，有機和無機色素和珠光劑。合適的無機色素包括但不限于氧化鈦，氧化鋯和氧化鈰，以及氧化鋅，氧化鐵，氧化鉻和鐵藍。合適的有機色素包括鋇，鍶，鈣和鋁色淀以及碳黒。合適的珠光劑包括用氧化鈦，氧化鐵或天然色素涂覆的云母?？杉尤敫鞣N填充劑和其它組分。填充劑通常以約0重量％至約20重量％(基于組合物的總重量)，優(yōu)選約0. 1重量％至約10重量％的量存在。合適的填充劑包括滑石，ニ氧化硅，硬脂酸鋅，云母，高嶺土，尼龍(特別是orgasol)粉末，聚乙烯粉末，Tef lon，淀粉，氮化硼，共聚物微球，例如 Expancel (Nobel Industries), Polytrap (Dow Corning)以及有機硅樹脂微珠(Tospearl，來自 Toshiba)。在本發(fā)明的一個實施方案中，包含攀援魚藤提取物的組合物可包括皮膚活性成分，例如但不限于植物成分，角質軟化劑，去屑劑，角蛋白形成細胞增殖增強劑，膠原酶抑制劑，弾性蛋白酶抑制劑，退色劑，抗炎劑，類固醇，抗痤瘡劑，抗氧化劑，水楊酸，水楊酸鹽，和晩期糖化作用終產(chǎn)物(AGE)抑制劑。在具體的實施方案中，所述組合物可包含至少ー種其它的植物成分，例如植物提取物，精油或植物本身。合適的植物成分包括而不限于來自下列的提取物印度冷杉、兒茶、 寬葉榆綠木、Asmundajaponica、印楝、紫鉚、紫礦屬、雪松、余甘子、孟加拉榕樹、洋甘草、冬青、總狀土木香、Ligusticum chiangxiong、女貞、粗糠柴、牛油果、海巴戟、辣木、補血草、夾竹桃、補骨脂、烏蕨、紅果欖仁、番茄糖脂，以及它們的混合物。所述組合物可包含具有抗老化益處的其它活性成分，所料想的是以這種組合可獲得協(xié)同的改善。其它合適的抗老化成分包括而不限于例如某些植物成分(例如紫鉚提取物)，硫代ニ丙酸(TDPA)，類視黃醇，羥酸(包括α-羥酸和β-羥酸)，水楊酸，水楊酸鹽和
羥乙酸。合適的羥酸包括，例如羥乙酸，乳酸，蘋果酸，酒石酸，檸檬酸，2-羥基烴酸，苦杏仁酸，水楊酸及其烷基衍生物，包括5 —正辛酰水楊酸，5-正十二酰水楊酸，5-正癸酰水楊酸， 5-正辛基水楊酸，5-正庚基氧基水楊酸，4-正庚基氧基水楊酸和2-羥基-3-甲基苯甲酸或其烷氧基衍生物，例如2-羥基-3-甲基氧基苯甲酸。示例性的類視黃醇包括而不限于維A酸(例如，全反式或13-順式)及其衍生物， 視黃醇(維生素Α)及其酷，例如視黃醇棕櫚酸酷，視黃醇乙酸酯和視黃醇丙酸酷，以及它們的鹽。
在另ー個實施方案中，本發(fā)明的局部組合物還可包括下列的ー種或多種皮膚滲透增強劑，潤滑剤，皮膚豐盈劑，光學漫射劑，防曬劑，去角質劑和抗氧化劑。潤滑劑提供增強皮膚光滑性和減少細紋和粗皺紋的出現(xiàn)的功能性益處。實例包括肉豆蔻酸異丙酷，礦脂，羊毛脂酸異丙酷，有機硅(例如甲基聚硅氧烷，ニ甲基聚硅氧烷)， 油，礦物油，脂肪酸酷，鯨蠟醇乙基己酸酷，C12_15烷基苯酸酷，異硬脂酸異丙酷，ニ聚體ニ亞油酸ニ異丙酷，或它們的任何混合物。所述潤滑劑可優(yōu)選地以約0. lwt%至約50wt%的組合物的總重量存在。皮膚豐盈劑作為皮膚的膠原增強劑。合適的且優(yōu)選的皮膚豐盈劑的實例是棕櫚酰寡肽。其它的皮膚豐盈劑是膠原和/或其它糖胺聚糖(GA(i)增強劑。當存在吋，所述皮膚豐盈劑可構成約0. lwt%至約20wt%的組合物的總重量。光學漫射劑是改變皮膚的表面視光學的顆粒，其引起例如紋和皺紋的視覺模糊和柔化。可用于本發(fā)明中的光學漫射劑的實例包括但不限于，氮化硼，云母，尼龍，聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)，聚氨酯粉末，絹云母，ニ氧化硅，有機硅粉末，滑石，聚四氟乙烯，ニ氧化鈦， 氧化鋅，或它們的任何混合物。當存在吋，所述光學漫射劑可以約0. 01wt%至約20wt%的組合物的總重量存在。還可包括保護皮膚免受紫外線損傷的防曬劑。優(yōu)選的防曬劑是具有廣譜UVB和 UVA保護的那些，例如氰雙苯丙烯酸辛酷，阿伏苯宗(Parsol 1789)，甲氧肉桂酸辛酷，水楊酸辛酷，氧苯酮，胡莫柳酷，ニ苯甲酮，樟腦衍生物，氧化鋅以及ニ氧化鈦。當存在吋，所述防曬劑可構成約0. 01wt%至約70wt%的所述組合物。合適的去角質劑包括例如，α羥酸，β羥酸，氧雜酸，氧雜ニ酸，以及它們的衍生物，例如它們的酷，酐和鹽。優(yōu)選的去角質劑是羥乙酸。當存在吋，所述去角質劑可構成約 0. lwt%至約80wt%的所述組合物?？寡趸瘎┑淖饔锰貏e是從皮膚上清除自由基，以保護皮膚避免環(huán)境的攻擊者?？杀挥糜诒景l(fā)明的組合物中的抗氧化劑的實例包括具有酚羥基官能的化合物，例如抗壞血酸及其衍生物/酷；α-羥酸；β -胡蘿卜素；兒茶素；姜黃素；阿魏酸衍生物(例如阿魏酸乙酷，阿魏酸鈉)；沒食子酸衍生物(例如，沒食子酸丙酯)；番茄紅素；還原酸；迷迭香酸；鞣酸；四氫姜黃色素；生育酚及其衍生物(例如生育酚乙酸酷)；尿酸；或它們的任何混合物。其它合適的抗氧化劑是具有一個或多個巰基官能(-SH)(以還原或非還原的形式)的那些，例如谷胱甘肽，硫辛酸，硫羥乙酸，和其它含巰基化合物。所述抗氧化劑可以是無機的，例如亞硫酸氫鹽，焦亞硫酸鹽，亞硫酸鹽類，或者含有硫的其它無機鹽和酸。本發(fā)明的組合物可包含的抗氧化劑優(yōu)選為約0. 001wt%至約10wt%，更優(yōu)選約0. 01wt%至約5wt%的所述組合物的總重量。提供了減少皮膚損傷或老化的可見跡象(例如皮膚中的細紋、皺紋、斑點和皮膚變色的出現(xiàn))的方法，所述方法包括向有需要的個體的皮膚局部應用有效量的攀援魚藤提取物。所述方法提供了刺激L0XL-1活性(例如増加L0XL-1的表達)，抑制鈣神經(jīng)素活性，和/ 或刺激GAG的合成。還提供了治療皮膚弾性降低的癥狀的方法，所述方法包括向有需要的個體的皮膚局部應用有效量的攀援魚藤提取物。通常，攀援魚藤提取物是以包含化妝品上可接受的媒介組合物的形式提供的，化妝品上可接受的媒介是指與向人類皮膚應用相容(例如安全)的媒介。降低的皮膚彈性被認為是由于皮膚中弾性蛋白纖維的喪失。所述方法提供了維持皮膚完整性并減少細紋和皺紋的出現(xiàn)，例如減少細紋和皺紋的深度，改善皮膚色調和顯色， 減少皮膚松弛和萎縮，改善的弾力和充盈度(這是指皮膚密度或墊層，并且可通過緩動皮膚且觀察多少組織上升而被評估)。宿主通?；加羞@些癥狀中的ー種或多種。所述組合物對于細紋和皺紋的形成或出現(xiàn)的作用可被定性地評估(例如通過視覺檢查)，或被定量地評估(例如通過顯微鏡或計算機輔助的，對皺紋形態(tài)的測量)。優(yōu)選地，皺紋形態(tài)被定量地分析，例如，測量了皺紋的數(shù)目，深度，長度，面積，體積和/或寬度/単位面積的皮膚。所述組合物理想地増加皮膚中的LOXLl活性，抑制鈣神經(jīng)素并刺激皮膚成纖維細胞中的GAG合成?？梢员景l(fā)明的組合物改善或治療的皮膚損傷包括降低的皮膚彈性的任何跡象(例如細紋和/或皺紋)，脆弱或變薄的皮膚，松弛的皮膚，缺乏光彩的皮膚，疲乏的皮膚，干燥的皮膚，皮膚敏感，黑眼圈，浮腫的皮膚，不規(guī)則的皮膚色素沉著以及黒斑病。向皮膚局部應用本發(fā)明的組合物可增強和改善皮膚的美學外觀。這種方法可特別用于治療皮膚的光老化和內(nèi)在老化的跡象，這包括細紋和皺紋，皮膚色調和顯色，皮膚松弛和萎縮，擴大的毛孔，皮膚變薄，減少的弾力和充盈度。向皮膚局部應用本發(fā)明的組合物可增強和改善皮膚的美學外觀，在其它改善中， 這特別是通過減少皮膚脆弱性；防止和逆轉彈性蛋白的劣化；防止皮膚萎縮；促迸/加速細胞更新；改善皮膚緊實度/豐滿度；改善皮膚質地；減少細紋和皺紋的長度和/或深度；防止細紋和皺紋的形成；改善皮膚色調；增強皮膚厚度；恢復皮膚光彩；使疲乏的跡象最小化；減少皮膚干燥；減少皮膚瘙癢；減少皮膚發(fā)紅；減少對于化學、機械或輻射影響的敏感性；減少皮膚潮紅和臉紅的傾向；減少眶周眼睛區(qū)域中的黑圈和浮腫；減少前額上的眉間紋和嘴周圍的笑紋；增加細胞增殖；減少物理創(chuàng)傷后可見的淤傷的程度和/或持續(xù)時間；減少斑點和不規(guī)則的皮膚色素沉著；治療或減輕黒斑病；治療或減輕皮膚色素過度；治療或減輕毛囊炎和向內(nèi)生長的毛結(hair bumps)以及剃須后切口和刺激；治療或減輕皮炎，銀屑病和與急性、亞急性或亞慢性炎癥有關或由其引起的其它皮膚病況；以及增強總體的皮膚健康。本發(fā)明還提供用于治療老化皮膚的方法，這是通過在受影響的區(qū)域上局部應用包含本發(fā)明的組成的組合物，應用的時間段足以減少、治療或減輕皮膚弾性減少的皮膚病學跡象。在一個實施方案中，是治療皮膚(例如面部、頸部、手上的皮膚)皺紋的方法，所述方法包括向皺紋局部應用包含攀援魚藤提取物的化妝品組合物，所應用的有效量和時間足以減少皺紋的嚴重性和深度。在另ー個實施方案中，是防止皮膚(例如面部、頸部、手上的皮膚)損傷的方法，所述方法包括以延遲皮膚損傷或皮膚老化的有效量向未損傷的皮膚局部應包含攀援魚藤提取物的化妝品組合物。所述皮膚損傷可包括，例如細紋和皺紋的形成，色素斑點，皮膚松弛， 彈性的喪失和斑駁的皮膚外觀。在另ー個實施方案中，是治療皮膚(例如面部或頸部上的皮膚)松弛的方法，所述方法包括向松弛的皮膚局部應用包含攀援魚藤提取物的化妝品組合物，所應用的有效量和時間足以降低松弛的程度。在另ー個實施方案中，是治療薄皮膚的方法，所述方法包括向薄皮膚局部應用包含攀援魚藤提取物的化妝品組合物，所應用的有效量和時間足以增厚所述皮膚?！氨∑つw”意在包括由時序性老化，更年期或光損傷引起的變薄的皮膚。在ー些實施方案中，所述治療是對于男性中的薄皮膚，而其它的實施方案治療女性(更年期前或更年期后)中的薄皮膚，因為相信在男性和女性中(特別是在不同生命階段的女性中)皮膚隨著年齢變薄是不同的?？深A防性地采用本發(fā)明的方法來預先阻止老化，包括在未表現(xiàn)出皮膚老化跡象的患者中，最常見的是在年齡為25歲以下的個體中。所述方法也可以逆轉或治療老化的跡象 (一旦顯現(xiàn))，如在年齡超過25歲的患者中所常見的。所述組合物可被應用于皮膚足以改善皮膚的美學外觀的時間段。每天可將所述組合物應用于皮膚1次，2次，3次，4次，5次，6次或更多次，只要是實現(xiàn)所希望的結果所需的。治療方案可包括每天應用、進行至少一周，至少兩周，至少四周，至少八周，或至少十二周。備選地，治療方案可包括向皮膚長期應用所述組合物。所述方法包括治療與內(nèi)在皮膚老化和由暴露于外部損傷引起的皮膚老化二者相關的皮膚變化。料想所述方法可用于治療 UV損傷的皮膚。
實施例實施例1.攀援魚藤(“Derris”)提取物的制備攀援魚藤的莖被用于提取。將250g攀援魚藤的莖斬碎為大約5cm長的塊并于 60° C、在電爐中干燥2-3天。用溶劑(Et0H/H2050/50v/v)提取經(jīng)干燥的材料三次。例如， 1升所述溶劑可被用于在37° C下、以150rpm提取12hrs。在旋轉蒸發(fā)儀中，在真空濃縮下、于40-50° C去除揮發(fā)性化合物(即乙醇)。例如，三升的總提取物在蒸餾的最后被減少至150ml并用純浄水稀釋至1500ml，且允許其在 4° C下被放置12hrs。然后離心稀釋液以去除殘渣和不可溶的物質。然后使溶液經(jīng)受用己烷じ1 0.5體積)進行的提取以去除可能的痕量毒素(例如殺蟲劑)。例如，在分液漏斗中用750ml的己烷處理1500ml的提取溶液。將所述過程重復2次。丟棄己烷層并保留含水層用于進ー步的提取步驟。通過取樣和凍干檢查了均相溶液中的干物質含量。之后，將木炭加入脫脂的溶液中以對其脫色和除臭。以10% (按重量)VS溶液的總干物質含量加入木炭。例如，對于含有 170g總干物質含量的1500ml溶液，需要加入17g的木炭，隨后在50° C下攪拌lhr，并通過濾紙進行雙重過濾。然后，用水飽和的正丁醇(3x 0.5體積)進行提取而使所述溶液分級。例如，對于 1500ml經(jīng)脫色的澄清溶液，制備2250ml水飽和的丁醇并分為三部分，每部分750ml。然后在分液漏斗中用這些部分處理所述經(jīng)脫色的澄清溶液三次。如果分層不清楚，則允許分離繼續(xù)進行10-12小時并可在最后用熱空氣稍稍加熱。將丁醇提取物匯集到一起，加入水(相同的體積)并在真空下、在旋轉蒸發(fā)儀上使溶液濃縮。當蒸餾停止吋，再次加入水并使混合物再次濃縮。然后第三次重復所述過程并凍干。通過在真空下進行旋轉蒸發(fā)而濃縮含水層，以去除丁醇。當蒸餾停止時，凍干含水溶液。所獲得的干燥粉末為“提取物”。如說明書的其它部分所述的，有可能對這ー提取過程進行修飾和調整，特別是在擴大至更大的體積用于生產(chǎn)的過程中。實施例2 LOXLl活性的刺激使用熒光素酶-報告物系統(tǒng)研究了施用攀援魚藤提取物對于人成纖維細胞中 LOXLl的表達的影響。載體構建，轉染和表達分離LOXLl基因的啟動子區(qū)域井根據(jù)生產(chǎn)商的說明將其克隆到PGL3熒光酶報告物質粒(Promega)中。使用LipofectAMINE LTX試劑 (Invitrogen)，根據(jù)生產(chǎn)商的指導，將L0XLl/pGL3載體和對照載體pRL-NULL (ftOmega)共轉染到人成纖維肉瘤系HTI080中。允許經(jīng)轉染的細胞恢復Mh。然后用含有各種濃度的攀援魚藤提取物的新鮮培養(yǎng)基替代所述培養(yǎng)基，并將經(jīng)轉染的細胞再培養(yǎng)Mh。隨后用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)清洗培養(yǎng)物并使其暴露于100 μ 1細胞裂解緩沖液/25cm2培養(yǎng)物面積，并在室溫下輕柔搖動30min。然后，將含有細胞裂解物的培養(yǎng)瓶立即置于-80° C。 確定報告物活性根據(jù)生產(chǎn)商的說明(Diml-Luciferase 報告物測定系統(tǒng)，
Promega)確定了報告基因螢火蟲熒光素酶的活性。簡要地，相對于編碼第二個熒光素酶基因(來自海腎)的對照載體，確定了所述報告基因的活性。比較了來自測試和對照培養(yǎng)物的基因的相對活性，用于確定調控序列活性的修飾百分比。結果因為pGL3載體缺少必要的啟動子區(qū)域來調控熒光素酶基因，此基因的表達是由所克隆的調控元件控制的，在此例中是LOXLl基因的調控元件。在一式三份的測試中， 發(fā)現(xiàn)加入0. 004wt%的攀援魚藤提取物以50%増加報告基因的表達(p<0. 05，與媒介對照相比)，表明LOXLl基因的調控元件的増加的表達。因此，攀援魚藤被顯示是LOXLl表達的正調控因子，暗示著對于彈性蛋白更新的繼發(fā)效應。實施例3:鈣神經(jīng)素活性的抑制使用了離體磷酸酶測定來評價攀援魚藤提取物調節(jié)鈣神經(jīng)素活性的能力。離體磷酸酶測定使用DiFMUP (6,8- ニ氟_7_羥基_4_甲基香豆素磷酸鹽)磷酸酶測定(見例如，Wegner等人，2007，Methods Mol. Biol. 365 61-69，在此以其全部通過引用而并入)來監(jiān)測對于鈣神經(jīng)素活性的調節(jié)。DiFMUP的去磷酸化引起形成高度熒光和穩(wěn)定的產(chǎn)物Di4MU。向反應緩沖液中加入不同濃度的提取物，所述反應緩沖液通常由下列組成50mM Tris-HCl, pH 7. 4，0. 0125% 牛血清白蛋白(BSA)，0. ImM CaCl，400U/ml 鈣調蛋白和ImM NiCl。將反應緩沖混合物在37° C下孵育30min。然后加入DiFMU底物至10 μ M的濃度，使混合物返回到37° C再孵育15min。在分光光度計上測定熒光強度。結果發(fā)現(xiàn)攀援魚藤提取物以劑量依賴性的方式抑制鈣神經(jīng)素活性，在1%重量 /體積的濃度時顯示出103%的抑制效果，而在0. 1%濃度時顯示出49%的抑制效果。當以 0.01%重量/體積的濃度進行測試時，攀援魚藤提取物沒有顯示出任何效果?；衔锏腎C5tl 被評估為0. 106%重量/體積。結果表示，局部應用包含攀援魚藤提取物的組合物將引起與炎性皮膚病況相關的癥狀的改善。實施例4:糖胺聚糖合成的測量研究了施用攀援魚藤提取物對于人成纖維細胞中GAG的合成的影響。一般地，Barbosa,等人 ロ00；3)Glycobiology 13:647 一 653 描述了測量糖胺聚糖合成的技木。簡要地，將成纖維細胞鋪板(例如在對孔板中)，并在補充了 10%胎牛血清(FBS)、IxAAS和各種濃度的(即50 μ g/ml, 100 μ g/ml和200 μ g/ml)攀援魚藤提取物的 Dulbecco' s Modified Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中培養(yǎng)。取出培養(yǎng)物的樣品，用PBS清洗細胞并使其胰蛋白酶化(80ml/孔)。使用含有10%FBS和Ix AAS的DMEM(400ml/孔)來滅活胰蛋白酶，將此溶液轉移到1.5mlEppendorf管中并以2000r.p.m.在微量離心機中離心anin。 去除了上清液之后，在56° C下用蛋白酶K(50mg/ml在IOOmM K2HP04pH 8. 0中；400ml/管) 過夜消化細胞。在90° C下，將蛋白酶K滅活lOmin。將所制備的樣品存儲在-20° C，直至根據(jù)生產(chǎn)商的說明用于硫酸化GAG的定量(用Blyscan測定進行)和DNA測量(用PicoGreens 定量分析試劑)。結果將在成纖維細胞樣品中的GAG定量結果與對照樣品(其中培養(yǎng)基不含攀援魚藤提取物)進行了比較，并表示為對照樣品的百分比，如圖1中所示。結果表明攀援魚藤提取物刺激成纖維細胞中GAG的合成。如圖1中所示，隨著提取物的濃度增加，成纖維細胞所合成的GAG的量穩(wěn)定地増加。實施例6 示例性組合物表1中提供了用于向皮膚局部應用的包含攀援魚藤提取物的化妝品組合物。表 權利要求
1.向皮膚提供抗老化益處的方法，所述方法包括向特征在于一種或多種皮膚老化跡象的皮膚區(qū)域應用化妝品上可接受的媒介中的局部組合物，其包含攀援魚藤的提取物，所述提取物的含量有效向皮膚提供抗老化益處。
2.權利要求1的方法，其中所述提取物所存在的量足以增加LOXLl的表達，抑制鈣神經(jīng)素活性或刺激糖胺聚糖合成。
3.權利要求1的方法，其中所述提取物所存在的量為0.0001重量％至90重量％，基于組合物的總重量。
4.權利要求3的方法，其中所述提取物所存在的量為0.001重量％至25重量％，基于組合物的總重量。
5.權利要求4的方法，其中所述提取物所存在的量為0.01重量％至10重量％，基于組合物的總重量。
6.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述一種或多種皮膚老化的跡象包括皺紋和/或細紋。
7.根據(jù)權利要求5的方法，其中所述一種或多種皮膚老化的跡象包括皮膚松弛或萎縮。
8.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述一種或多種皮膚老化的跡象包括皮膚變色。
9.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述一種或多種皮膚老化的跡象包括喪失皮膚彈性。
10.預防，治療或減輕皮膚中的皺紋或細紋的方法，所述方法包括向所述皺紋或細紋局部應用包含攀援魚藤的提取物和化妝品上可接受的媒介的組合物。
11.用于向皮膚提供抗老化益處的局部組合物，其包含 含量有效向皮膚提供抗老化益處的攀援魚藤提取物；和化妝品上可接受的媒介；所述局部組合物是以洗液，霜劑，軟膏，凝膠或棒的形式。
12.權利要求11的組合物，其中所述提取物所存在的量足以增加LOXLl的表達，抑制鈣神經(jīng)素活性，或刺激糖胺聚糖合成。
13.權利要求11的組合物，其中所述提取物所存在的量為0.0001重量％至90重量％， 基于組合物的總重量。
14.權利要求13的組合物，其中述提取物所存在的量為0.001重量％至25重量％，基于組合物的總重量。
15.權利要求14的組合物，其中所述提取物所存在的量為0.01重量％至10重量％，基于組合物的總重量。
16.權利要求11的組合物，其中所述提取物與至少一種其它皮膚活性成分相組合。
17.權利要求11的組合物，其中所述提取物與至少一種其它植物成分相組合。
18.權利要求17的組合物，其中所述其它植物成分包括來自紫鉚的提取物。
全文摘要
提供了用于治療降低的皮膚彈性的癥狀的局部組合物和使用方法，其包含攀援魚藤植物的提取物。這些組合物在皮膚細胞中有效刺激LOXL-1活性，抑制鈣神經(jīng)素活性，并刺激糖胺聚糖的合成，并且可因此減少與年齡相關的皮膚損傷并改善細紋，皺紋，皮膚松弛和皮膚老化和/或皮膚損傷的其它癥狀的外觀。
文檔編號A61K8/97GK102596171SQ201080050791
公開日2012年7月18日 申請日期2010年10月14日 優(yōu)先權日2009年12月4日
發(fā)明者D·S·普特徹林特瑟夫, 羅小純 申請人:雅芳產(chǎn)品公司