專利名稱：一種刺梨多糖的電離輻射防護(hù)新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥有效部位刺梨多糖在電離輻射防護(hù)中的應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng) 域。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤患者是一類接觸射線的特殊人群，目前放射線療法仍然是治療腫瘤的重 要手段，據(jù)報(bào)道，我國約有70%惡性腫瘤患者需要放射線治療。另外，現(xiàn)實(shí)環(huán)境中人們受到 電離輻射的機(jī)會非常多，如天然高輻射地區(qū)生活的居民、經(jīng)常接觸射線的醫(yī)務(wù)工作者、宇航 人員受到的空間輻射、核電站核泄漏事故等。長期過量的電離輻射將導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生一系列 損傷，包括氧化應(yīng)激損傷、造血系統(tǒng)的功能異常、免疫功能障礙及細(xì)胞DNA鏈斷裂、基因突 變、染色體重組、細(xì)胞轉(zhuǎn)化和細(xì)胞死亡等。因此，研究電離輻射損傷防治手段，尋找行之有效 的防治藥物，已引起人們的普遍關(guān)注。對于電離輻射防護(hù)劑的研究始于20世紀(jì)早期，目前，國際上已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了許多對電 離輻射具有防治作用的化學(xué)藥物和生物制劑，主要藥物有巰基類、維生素類、氨基酸類和抗 氧化類。隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)其中的很多藥物對健康細(xì)胞的毒害也較大，并可能誘發(fā) 其他病變。人們期待開發(fā)出療效顯著、毒副作用小的抗電離輻射藥物，于是人們開始重視從 天然產(chǎn)物中尋找。愈來愈多的藥用植物已經(jīng)被證實(shí)具有明顯的電離輻射防護(hù)作用，現(xiàn)在已 發(fā)現(xiàn)的天然藥物抗電離輻射成分主要有多糖類、黃酮類物質(zhì)、多酚類、皂苷類、生物堿、肽類 化合物。刺梨(Rosa roxburghii Tratt.)，為薔薇科植物縹絲花或單瓣縹絲花的果實(shí)，始 載于《本草綱目遺拾》，產(chǎn)于中國，現(xiàn)代研究表明其含有刺梨多糖、刺梨黃酮、Ne、SOD等活 性成分。Janse van Rensburg報(bào)道刺梨提取物的氧化應(yīng)激的保護(hù)作用表現(xiàn)在抗氧化能力 的提高，體內(nèi)谷胱甘肽氧化還原狀態(tài)的改變(Master thesis of Research Repository North-ffestUniversity, South Africa, 2003)；楊江濤等報(bào)道刺梨多糖可以劑量依賴性地 提高衰老小鼠體內(nèi)抗氧化能力[營養(yǎng)學(xué)報(bào)，2008，30 (4) 407-409]；路筱濤報(bào)道刺梨多糖能 夠顯著提高小鼠抗疲勞、耐缺氧、耐高溫及耐低溫的能力，提高小鼠的免疫能力[廣州中醫(yī) 藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，19 (2) :141-142]。電離輻射使組織和細(xì)胞中產(chǎn)生大量活性氧(ROS)，通 過直接和間接作用損傷生物大分子(如DNA，蛋白質(zhì)，脂類等)，引起細(xì)胞死亡和機(jī)體功能喪 失，刺梨多糖具有抗氧化作用，可以通過清除自由基發(fā)揮電離輻射防護(hù)作用。本發(fā)明提供了 刺梨多糖的電離輻射防護(hù)新用途，現(xiàn)有技術(shù)未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供刺梨多糖預(yù)防及治療電離輻射損傷的新用途。本發(fā)明通過細(xì)胞、動(dòng)物水平對刺梨多糖的抗電離輻射活性進(jìn)行反復(fù)驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)結(jié) 果表明刺梨多糖可以抑制6°c。Y射線照射導(dǎo)致的V79細(xì)胞活力喪失，并能提高6°C。γ射線 SGy 一次全身照射昆明種小鼠的活存率，從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明中所述刺梨多糖為從植物中提取的有效部位，經(jīng)測定多糖純度大于90%。刺梨多糖可與藥學(xué)上可接受的載體按本領(lǐng)域已知方法制備成各種藥物組合物，如 片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑等各種固體、液體制劑等；或和其他中藥有效成分組合制成各 種不同的劑型，通過不同的給藥途徑用于預(yù)防及治療電離輻射損傷。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)1.發(fā)現(xiàn)了刺梨多糖新的醫(yī)療用途。2.刺梨多糖作為刺梨的有效部位，天然存在于植物果實(shí)中，來源廣，原料易得，制 備工藝簡單，得率高，成本低，藥用前景廣闊。3.本發(fā)明將成為高效低毒抗電離輻射藥物的有益補(bǔ)充。


圖1刺梨多糖對V79細(xì)胞的細(xì)胞毒性圖2不同濃度的刺梨多糖對6°C0 γ射線5Gy照射的V79細(xì)胞存活率的影響圖3刺梨多糖對6°C。γ射線5Gy照射的V79細(xì)胞凋亡率的影響圖4刺梨多糖對6°C。γ射線SGy照射的昆明小鼠30天存活率的影響
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施案例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明[實(shí)施例一]刺梨多糖對V79細(xì)胞的細(xì)胞毒性檢測細(xì)胞特征中國倉鼠肺成纖維細(xì)胞V79，貼壁生長，倍增時(shí)間12-14小時(shí)。1.培養(yǎng)條件細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM培養(yǎng)液(含10% FBS, 100U/mL青霉素和100U/mL鏈霉素)，37°C、 5% CO2培養(yǎng)箱，2-3天更換培養(yǎng)液，推薦細(xì)胞培養(yǎng)密度l_2X105/mL。2.藥物準(zhǔn)備將刺梨多糖用DMEM培養(yǎng)液溶解，超聲助溶，配置儲存濃度10mg/ml母液備用。3.毒性檢測取對數(shù)生長期V79細(xì)胞(1 X IO5個(gè)/mL)接種于96孔培養(yǎng)板，100 μ L/孔，每孔藥 物100 μ L，使藥物終濃度為2000、1000、500、100、50、25、12. 5μ g/mL(簡稱藥物組)，每濃 度6孔，另設(shè)空白對照組細(xì)胞懸液。于藥物作用48h后每孔中加入CCK-8溶液10 μ L，繼 續(xù)培養(yǎng)4h，于多功能酶標(biāo)儀490nm處測定各孔吸光值。細(xì)胞存活率％ = A實(shí)驗(yàn)組/A正常 組X 100%;同時(shí)在倒置顯微鏡下每日觀察細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果，藥物組細(xì)胞形態(tài)與對照組細(xì)胞 形態(tài)沒有明顯的變化，數(shù)據(jù)用spss 16. O進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，與正常組相比#，P< 0.05。表明， 刺梨多糖在最高濃度lmg/mL以下無明顯細(xì)胞毒性。(見附圖1)[實(shí)施例二]刺梨多糖對6°C。γ射線導(dǎo)致的V79細(xì)胞活力喪失的保護(hù)作用1.不同濃度藥物對V79細(xì)胞的電離輻射防護(hù)作用取對數(shù)生長期V79細(xì)胞(1 X IO5個(gè)/mL)接種于96孔培養(yǎng)板，100 μ L/孔，每孔藥 物100 μ L，使藥物終濃度為400、200、100、50、25、12· 5μ g/mL，每濃度6孔，另設(shè)空白對照 組細(xì)胞懸液、輻照組細(xì)胞懸液。于藥物作用24h后5Gy輻照，照后24h于每孔中加入CCK-8 溶液10 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)4h，于多功能酶標(biāo)儀490nm處測定各孔吸光值。與輻照組相比··#，P< 0. 05 ；##, P < 0. 01。結(jié)果表明，刺梨多糖在12. 5-200 μ g/mL對6°C0 γ射線5Gy照射的 V79細(xì)胞活力喪失呈劑量依賴的保護(hù)作用，對V79細(xì)胞電離輻射防護(hù)的最優(yōu)濃度為200 μ g/mL。(見附圖2)2. Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡取對數(shù)生長期V79細(xì)胞(IX IO6個(gè)/mL)接種于6孔培養(yǎng)板，根據(jù)實(shí)驗(yàn)篩選的結(jié)果 采用200 μ g/mL的刺梨多糖處理細(xì)胞，于藥物作用24h后5Gy輻照，照后24h分別收集正 常組、輻照組和藥物組細(xì)胞，離心lOOOrpm，IOmin,棄上清，用預(yù)冷的PBS洗滌2次后懸浮在 200 μ L Binding Buffer 中，加入 IOyL Annexin V-FITC，輕輕搖勻，室溫避光反應(yīng) 15min， 加入300 μ L Binding Buffei^PSyL PI，然后樣品用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析。結(jié)果表明，正 常組、輻照組、藥物組的細(xì)胞凋亡率分別為5. 21%、38. 94%,8. 36%，刺梨多糖具有明顯降 低電離輻射引起的細(xì)胞凋亡率的作用。(左下限為正常細(xì)胞，右下限為凋亡早期，右上限為 凋亡中晚期，左上限為壞死區(qū))。(見附圖3)[實(shí)施例三]刺梨多糖對6°C。Y射線SGy—次全身照射昆明種小鼠存活率的影響動(dòng)物分組、給藥及照射將雄性昆明種小鼠適應(yīng)環(huán)境后根據(jù)需要分為正常組、照射組、陽性藥組和藥物組， 每組10只。正常組和照射組灌胃給予蒸餾水，藥物組照前灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)6天，陽 性藥組照前24h灌胃給予“523”一次，劑量5mg/kg，給藥后全身一次性照射，劑量為8Gy，照 后連續(xù)觀察30天。結(jié)果表明，刺梨多糖100mg/kg給予小鼠，30天存活率可達(dá)到90%，動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)再次表明刺梨多糖的較強(qiáng)的電離輻射防護(hù)作用。(見表1，附圖4)表1刺梨多糖對6°C。γ射線SGy照射的昆明小鼠30天存活率和存活時(shí)間的影響
權(quán)利要求
刺梨多糖用于細(xì)胞及動(dòng)物電離輻射防護(hù)的實(shí)驗(yàn)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的刺梨多糖具有電離輻射防護(hù)的活性。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用方面在于有效劑量的刺梨多糖可以和一種或多種符合 藥典規(guī)定的其它藥用成分及藥用賦形劑制成制劑，用于電離輻射的預(yù)防和治療。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物制劑，其包括含有 99%的刺梨多糖和99% 的藥用賦形劑及其它可組方的藥物制成口服制劑的劑型。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的口服制劑包括片劑，丸劑，膠囊劑，軟膠囊劑，顆粒劑，混懸 劑，滴丸的任何一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制劑，活性成分為刺梨多糖。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種刺梨多糖的電離輻射防護(hù)新用途。通過水提醇沉的方法，制備刺梨多糖，經(jīng)過細(xì)胞及動(dòng)物的電離輻射防護(hù)實(shí)驗(yàn)，證明刺梨多糖在小于1000μg/mL濃度范圍內(nèi)對V79細(xì)胞無毒性；在12.5-200μg/mL對60Coγ射線導(dǎo)致V79細(xì)胞活力喪失呈劑量依賴的抑制作用；預(yù)防性給予50、100mg/kg可劑量依賴的提高60Coγ射線8Gy照射昆明小鼠的活存率，說明刺梨多糖具有電離輻射防護(hù)的藥用活性。為開發(fā)新的口服途徑給藥的電離輻射防護(hù)藥物奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
文檔編號A61K31/715GK101983633SQ20101055031
公開日2011年3月9日 申請日期2010年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月19日
發(fā)明者張疆莉, 徐萍, 楊春廣, 閻璽慶, 馬素英 申請人:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院