專(zhuān)利名稱(chēng)：一種雨生紅球藻提取物制劑、其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及雨生紅球藻提取物制劑、其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
雨生紅球藻(Haematococcus)是一種單細(xì)胞綠藻，在逆境條件下可積累大量的蝦 青素，被公認(rèn)為自然界天然蝦青素的主要來(lái)源。采用超臨界流體CO2技術(shù)的雨生紅球藻提 取物除富含有天然抗氧化劑蝦青素外，還含有維生素B1、B2、B6、B12、單不飽和脂肪酸、多不 飽和脂肪酸等人體必需的營(yíng)養(yǎng)成分。蝦青素(astaxanthin)是一種紅色的天然類(lèi)胡蘿卜素，具有清除氧自由基的強(qiáng)大 能力，其抗氧化活性是維生素的550倍、類(lèi)胡蘿卜素的10倍，被譽(yù)為“超級(jí)抗氧化劑”(1、 Nakagawa K，Kang S，Park D，et al. Inhibition bybeta carotene and astaxanthin of NADPH dependent mi crosomal phospholipidperoxidation[J]. Nutrit Sci Vitam in， 1997，43，3 345 ；2、Naguib YMA. Antioxidant activities of astaxanthinand related carotenoids[J]. Agric FoodChem，2000，48，1150.)，對(duì)人體絕對(duì)安全(U Nishikawa Y， Minenaka Y，Ichimura Μ. Physiological and biochemical effects of carotenoid beta caroteneand astaxanthin on rat [J].Kashien Daigku Kiya,1997,25 19 ； 2、AquasearchInc Technical Report TR. 3005.001.Haematococcus pluvialis and astaxanthinsafety for human consumption，1999 ;)。動(dòng)物禾口臨床試驗(yàn)研究證明，蟲(chóng)下青 素有增強(qiáng)免疫功能、抑制腫瘤發(fā)生、預(yù)防心血管疾病、防止皮膚衰老、維護(hù)眼睛及中樞神經(jīng) 系統(tǒng)健康等多種生物功能(Tanaka T，Morishita Y，Suzui M，et al. Chemoprevention of mouse urinary bladder carcinogenesisgy naturallyoccurring caroteniod astaxanthin[J]. Carcing Enesis,1994,15(1) :15—19 ；Jyonouchi, et al. 2000)。維生素Bl能促進(jìn)血液循環(huán)、輔助鹽酸制造、血流形成及糖類(lèi)代謝；有助于人體感 知，并使腦功能發(fā)揮最佳狀態(tài)；對(duì)能量代謝、生長(zhǎng)、食欲、學(xué)習(xí)能力均起著積極的作用；幫助 人體抵抗衰老及煙酒對(duì)人體的不利影響。維生素B2是紅細(xì)胞形成、抗體制造及細(xì)胞呼吸作 用及生長(zhǎng)必須的。維生素B6有利于鹽酸合成及脂肪、蛋白質(zhì)的吸收，協(xié)助維持體內(nèi)鈉鉀平 衡，促進(jìn)紅細(xì)胞的形成；另外還有利于解決體內(nèi)水分滯留帶來(lái)的不便，幫助腦和免疫系統(tǒng)發(fā) 揮正常的生理機(jī)能；控制細(xì)胞增長(zhǎng)和分裂的DNA、RNA等遺傳物質(zhì)的合成也離不開(kāi)B6。B6還 可以活化體內(nèi)的許多種酶，并有助于B12的吸收。維生素B12是抗貧血所需的，它可協(xié)助葉 酸調(diào)節(jié)紅細(xì)胞的生成并有利于鐵的利用；而且消化機(jī)能的正常，食物的消化和蛋白質(zhì)的合 成，脂肪和糖類(lèi)的代謝均需要維生素B12。此外B12還有助于防止神經(jīng)損傷，維持生育能力， 促進(jìn)正常的生長(zhǎng)發(fā)育及防止神經(jīng)脫髓鞘的作用。單不飽和脂肪酸具有降血糖作用(施萬(wàn)英，徐甲芬，藺淑賢.單不飽和脂肪酸腸 內(nèi)營(yíng)養(yǎng)制劑(Clucema)用于2型糖尿病[J],中國(guó)臨床營(yíng)養(yǎng)雜志，2004，12 (1) :39_42)；調(diào) 節(jié)血脂作用(王軍波，肖穎，梁學(xué)軍，等.膳食脂質(zhì)對(duì)中老年膽固醇血癥患者血清膽固醇的 影響.衛(wèi)生研究，2000，29(3))及降低膽固醇作用等。多不飽和脂肪酸對(duì)動(dòng)脈血栓形成和血小板功能有明顯影響，防止血栓形成(鐘耀光.功能食品[M].北京化學(xué)工業(yè)出版社， 2004，8 121-128.)。大量實(shí)驗(yàn)表明，多不飽和脂肪酸具有較好的抗癌作用，其能通過(guò)降低膽 固醇水平，抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)；并參與細(xì)胞基因表達(dá)調(diào)控，提高機(jī)體免疫能力，減少腫瘤壞死 因子；多不飽和脂肪酸還能大大增加細(xì)胞膜的流動(dòng)性，有利于細(xì)胞代謝和修復(fù)，阻止腫瘤細(xì) 胞的異常增生(1、鐘耀光.功能食品[M].北京化學(xué)工業(yè)出版社，2004，8 :121-128.2、劉冀 紅，曹偉新.ω-3多不飽和脂肪酸在腫瘤防治中的意義[J].腸外與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)，2004，11(1) 54-56.)。由此可見(jiàn)，雨生紅球藻提取物中含有大量對(duì)人體有益和人體必需的功能成分，其 用于藥品、保健品原料，應(yīng)用前景十分廣闊。文獻(xiàn)報(bào)道的紅球藻提取方法有溶劑法、超臨界法、微波法、超聲法等，而微波法、超 聲法很少用于規(guī)模生產(chǎn)。由于蝦青素油是雨生紅球藻中主要的功效性成分，具有較強(qiáng)抗氧 化性，對(duì)光、熱、氧、濕敏感不穩(wěn)定，因此采用通常溶劑的提取油工藝極易造成氧化變質(zhì)，若 改成低溫浸出法，化學(xué)試劑耗用量較大，油中類(lèi)脂物及伴隨物多給精煉帶來(lái)困難且有溶劑 殘留。國(guó)外利用以蝦青素為主要功效成分的紅球藻提取物制備保健食品及化妝品，其產(chǎn) 品定位主要是眼睛、免疫系統(tǒng)、皮膚保護(hù)、降低密度脂蛋白等方面。目前開(kāi)發(fā)上市的產(chǎn)品主 要有口服制劑(軟膠囊、硬膠囊)、化妝品(唇膏、面部護(hù)理霜、防曬霜、防皺霜)，其功能定 位主要是抗氧化(延緩衰老)、營(yíng)養(yǎng)皮膚、緩解運(yùn)動(dòng)疲勞、降低密度脂蛋白、防止皮膚免受紫 外線(xiàn)損傷等。產(chǎn)品主要以美國(guó)Twinlab公司保健膠囊、美國(guó)Cyanotech公司的Bioastin、美 國(guó) Aquasearch 公司的 Astafactor Sport Formula、曰本 Natureal 公司的 Astacure 系列化 妝品為代表。但是，由于雨生紅球藻提取物中的有效成分蝦青素易氧化，目前已有的雨生紅球 藻提取物口服制劑產(chǎn)品的穩(wěn)定性還有待進(jìn)一步提高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種雨生紅球藻提取物軟膠囊。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述雨生紅球藻提取物軟膠囊的制備方法及用途。本發(fā)明的目的是采用以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的。一方面，本發(fā)明提供一種雨生紅球藻提取物軟膠囊，其內(nèi)容物包括雨生紅球藻提 取物和油相，其中雨生紅球藻提取物中含有的蝦青素與油相的質(zhì)量體積配比(g/mL)為1 10 100，優(yōu)選為1 5 100，更優(yōu)選為1. 5 4. 5 100，最優(yōu)選為2. 5 3. 5 100。優(yōu)選地，所述雨生紅球藻提取物中蝦青素的含量為2 20% (w/w)，優(yōu)選為3 15% (w/w)，更優(yōu)選為 5 10% (w/w)。優(yōu)選地，所述雨生紅球藻提取物是通過(guò)以CO2為萃取介質(zhì)的超臨界流體萃取方法 制備的。優(yōu)選地，所述超臨界流體萃取方法的條件如下溫度為60 80°C，壓力為35 45MPa, CO2流速為15 25L/h,時(shí)間為2 4小時(shí)。優(yōu)選地，所述雨生紅球藻提取物軟膠囊內(nèi)容物中的油相包括雨生紅球藻提取物中 含有的自身油相和外加油相。
優(yōu)選地，所述外加油相為脂溶性食品添加劑。優(yōu)選地，所述外加油相選自芝麻油、大豆油、葵花籽油、花生油、核桃油、紅花籽油、 橄欖油、米糠油、山茶籽油、天然維生素E、辛葵酸甘油酯、脂溶性迷迭香提取物中的一種或 幾種。另一方面，本發(fā)明提供了制備上述軟膠囊的方法，所述方法包括以下步驟1)將 雨生紅球藻提取物與外加油相按配比置于容器中，充入N2，于25°C下超聲25min ；2)于37°C 下恒溫水浴震蕩50min ；3)配制膠液并制成軟膠囊。優(yōu)選地，所述膠液包括按重量百分比計(jì)的以下組成明膠40.5%、甘油19.5%、純 水38. 17%、尼泊金乙酯0. 16%、尼泊金丙酯0. 04%、二氧化鈦0.6%、焦糖色1%、莧菜紅 0. 03%。此外，本發(fā)明還提供了上述軟膠囊在制備用于抗氧化、增強(qiáng)免疫功能、抑制腫瘤發(fā) 生、預(yù)防心血管疾病、防止皮膚衰老、維護(hù)眼睛和中樞神經(jīng)系統(tǒng)健康的藥物或保健品中的用 途。本發(fā)明采用超臨界流體CO2制備的雨生紅球藻提取物，其中含有的活性成分蝦青 素含量較高。可以在該雨生紅球藻提取物中加入外加油相加工成軟膠囊制劑，制劑中的油 相包括雨生紅球藻提取物中自身的油相(提取物中除含有蝦青素外，其余為自身油相)，以 及外加油相兩部分，其中的外加油相采用脂溶性食品添加劑，包括但不局限于辛葵酸甘油 酯、脂溶性迷迭香提取物、芝麻油、大豆油、葵花籽油、花生油、核桃油、紅花籽油、橄欖油、米 糠油、山茶籽油、天然維生素E等中的一種或幾種。本發(fā)明所提供的軟膠囊，其內(nèi)容物雨生 紅球藻提取物具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、緩解疲勞等功能，且穩(wěn)定性高、生物利用度高，而軟膠 囊可避免內(nèi)容物的不良?xì)馕逗涂谖叮苊饬藘?nèi)容物與空氣及光照的接觸，起到了增加穩(wěn)定 性、改善生物利用度的作用，并且所提供的制備工藝便于操作，成本低，便于推廣應(yīng)用。與現(xiàn)有工藝技術(shù)比較，本發(fā)明具有以下突出優(yōu)點(diǎn)和效果超臨界流體CO2法提取天然蝦青素油具有操作簡(jiǎn)單、能耗低、質(zhì)量可控、保護(hù)易氧 化物質(zhì)等特點(diǎn)，適用于藥品、保健食品及食品生產(chǎn)原料加工，可有效避免將藻粉中重金屬、 微生物帶入到提取物中，提取物不存在溶劑殘留問(wèn)題，可生產(chǎn)出高品質(zhì)雨生紅球藻提取物， 滿(mǎn)足藥品、保健食品和普通食品研發(fā)生產(chǎn)需求。本發(fā)明采用的提取方法可使蝦青素的收率 達(dá)到90%以上，同時(shí)還可提取到維生素B” B2, B6, B12、單不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸等 人體必需的營(yíng)養(yǎng)成分。將按上述方法提取的雨生紅球藻提取物制備成軟膠囊，可避免內(nèi)含的蝦青素與空 氣及光接觸，同時(shí)增加油相對(duì)蝦青素的保護(hù)作用，從而有效防止蝦青素被氧化變性，顯著提 高其穩(wěn)定性。此外，本發(fā)明還對(duì)軟膠囊中包含的雨生紅球藻提取物中含有的蝦青素與油相 的質(zhì)量體積配比(g/mL)進(jìn)行了篩選和優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)當(dāng)二者配比為1 5 100，尤其是1.5 4.5 100時(shí)，可以顯著提高軟膠囊中蝦青素的穩(wěn)定性，對(duì)于蝦青素在抗氧化、增強(qiáng)免疫功 能、抑制腫瘤發(fā)生、預(yù)防心血管疾病、防止皮膚衰老、維護(hù)眼睛和中樞神經(jīng)系統(tǒng)健康中的應(yīng) 用有重要意義。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中考察的萃取溫度對(duì)蝦青素轉(zhuǎn)移率影響的曲線(xiàn)。
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圖2為本發(fā)明實(shí)施例1中考察的萃取壓力對(duì)蝦青素轉(zhuǎn)移率影響的曲線(xiàn)。圖3為本發(fā)明實(shí)施例2中考察的蝦青素濃度小于1. 0% (w/v)的樣品濃度-時(shí)間 變化曲線(xiàn)。圖4為本發(fā)明實(shí)施例2中考察的蝦青素濃度在1. 0 5. 0% (w/v)之間的樣品濃 度-時(shí)間變化曲線(xiàn)。圖5為本發(fā)明實(shí)施例2中考察的蝦青素濃度大于5. 0% (w/v)的樣品濃度-時(shí)間 變化曲線(xiàn)。
具體實(shí)施例方式以下參照具體的實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅 用于說(shuō)明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。以下各實(shí)施例中，蝦青素的含量采用以下方法來(lái)測(cè)定采用丙酮對(duì)所制備的雨生紅球藻提取物中游離蝦青素及蝦青素酯進(jìn)行提取，提取 液以丙酮作為空白對(duì)照，通過(guò)吸光度值估算總類(lèi)胡蘿卜素及蝦青素含量。再將一定量的雨 生紅球藻提取物經(jīng)膽留醇酯酶水解，使其中的蝦青素酯水解為游離蝦青素，經(jīng)HPLC液相色 譜儀測(cè)定準(zhǔn)確計(jì)算總蝦青素含量。1)所使用的試劑如下無(wú)水硫酸鈉分析純；十水硫酸鈉分析純；石油醚(60 90°C )分析純；氯仿甲醇(50 50)；丙酮分析純，色譜純；蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma A 9335)含量95% ；Tris-HCl (0. 05M pH 7. 0)配制方法如下準(zhǔn)確稱(chēng)取Tris粉6. 057g溶解于800mL 去離子水中，用稀鹽酸調(diào)PH值至7. 0，將調(diào)好pH值的Tris-HCl轉(zhuǎn)移至IOOOmL容量瓶中，用 純化水定容至刻度搖勻即得；熒光假單胞菌中提取的膽留醇酯酶(Sigma C-9281)，其溶液(20單位/mL)配制 方法如下取100單位/瓶的膽甾醇酯酶，用TriS-HCl (0. 05M pH7. 0)溶解并轉(zhuǎn)移至5mL容 量瓶中，加Tris-HCl稀釋至刻度，搖勻即得。配制好的膽留醇酯酶溶液，根據(jù)每次使用情 況采用微量移液器分裝入適當(dāng)避光容器中，通常以0. 4mL或0. 6mL為單位進(jìn)行分裝，密封 于_20°C保存，在規(guī)定包裝及存儲(chǔ)條件下，有效期為6個(gè)月。2)所使用的儀器如下(1)分光光度計(jì)(GBC UV/VIS 916可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)，生產(chǎn)廠(chǎng)商澳大利亞GBC公 司)；(2)高效液相色譜儀(Agilent 1100型高效液相色譜儀，生產(chǎn)廠(chǎng)商美國(guó)Agilent公 司)。3)供試品溶液的制備(1)樣品溶液①稱(chēng)取所制備的雨生紅球藻提取物約20mg，精密稱(chēng)定。置于25mL 容量瓶中，加少量丙酮輕輕振搖使溶解，加丙酮定容至刻度，搖勻。精密吸取ImL至50mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，搖勻即得。(2)樣品溶液②精密量取所制得樣品溶液①1.5mL，置于IOmL離心管中，加 Tris-HCl 1. OmL，混勻，置37°C水浴中孵育2分鐘，加100 μ L膽甾醇酯酶溶液，混勻，充氮?dú)?15秒排除離心管空氣，用自封口膜將離心管口密封。于37°C水浴中孵育45 50分鐘，每 15分鐘搖動(dòng)一次離心管。加2. OmL石油醚、0. 5g十水硫酸鈉，強(qiáng)力渦流30秒，離心5分鐘 (3500rpm)。移取石油醚層至盛有1. Og無(wú)水硫酸鈉的離心管中。再次加入1. OmL石油醚重 復(fù)提取操作。合并石油醚層至盛有l(wèi).Og無(wú)水硫酸鈉的離心管中，搖勻后靜置，移取石油醚 層至另一離心管，再用2mL石油醚清洗盛無(wú)水硫酸鈉離心管，將石油醚層移入同一離心管， 用氮?dú)獯蹈?，輕輕搖動(dòng)或旋轉(zhuǎn)離心管至樣品完全干燥。用1.5mL氯仿-甲醇(50 50)液 稀釋?zhuān)暿够旌暇鶆?，離心5分鐘(3500rpm)，0. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。(3)標(biāo)準(zhǔn)液精密稱(chēng)取蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品7. 5mg置于25mL棕色容量瓶中，用少量氯仿 溶解，加丙酮定容至刻度，搖勻，制得標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液。精密量取ImL移至IOOmL容量瓶中，加 丙酮定容至刻度，搖勻，即得。4)分光光度法以丙酮溶液作空白，用分光光度計(jì)于474nm處讀取樣品溶液①吸光度，按下式估 算類(lèi)胡蘿卜素和蝦青素含量(其中210為吸光系數(shù)，92%為蝦青素比例系數(shù))
最大吸光值XV (mL)丙酮 類(lèi)胡蘿卜素提取物(mg)=-—-
^rl ^aa ^比,、 類(lèi)胡蘿卜素提取物(mg) χ 100%
類(lèi)胡蘿卜素提取物(％)=-廣口去甘(^-
杵品重f (mg)
’士士\ ’ ，、 類(lèi)胡蘿卜素提取物(mg) χ 92%
蝦青素質(zhì)量百分比(％) = -,----
樣品重I (mg)實(shí)施例1紅球藻提取物的制備本實(shí)施例采用本發(fā)明所提供的超臨界CO2流體萃取方法制備雨生紅球藻提取物， 具體包括以下操作步驟1)雨生紅球藻的破壁A、破壁設(shè)備采用高壓均質(zhì)機(jī)進(jìn)行破壁處理。B、根據(jù)現(xiàn)有高壓均質(zhì)機(jī)處理能力及處理效果，一次藻泥最大處理量為400 500kg(相當(dāng)于3000m2培養(yǎng)系統(tǒng)一次培養(yǎng)所采收的全部藻泥量)。C、控制參數(shù)如表2所示。表2紅球藻紅色孢子破壁工藝控制參數(shù)
權(quán)利要求
一種雨生紅球藻提取物軟膠囊，其內(nèi)容物包括雨生紅球藻提取物和油相，其中雨生紅球藻提取物中含有的蝦青素與油相的質(zhì)量體積配比(g/mL)為1～10∶100，優(yōu)選為1～5∶100，更優(yōu)選為1.5～4.5∶100，最優(yōu)選為2.5～3.5∶100。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的軟膠囊，其特征在于，所述雨生紅球藻提取物中蝦青素的含 量為2 20% (w/w)，優(yōu)選為3 15% (w/w)，更優(yōu)選為5 10% (w/w)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的軟膠囊，其特征在于，所述雨生紅球藻提取物是通過(guò)以 CO2為萃取介質(zhì)的超臨界流體萃取方法制備的；優(yōu)選地，所述超臨界流體萃取方法的條件如 下溫度為60 80°C，壓力為35 45MPa，CO2流速為15 25L/h，時(shí)間為2 4小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的軟膠囊，其特征在于，所述油相包括雨生紅球藻 提取物中含有的自身油相和外加油相。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的軟膠囊，其特征在于，所述外加油相為脂溶性食品添加劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的軟膠囊，其特征在于，所述外加油相選自芝麻油、大豆油、葵 花籽油、辛葵酸甘油酯、花生油、核桃油、紅花籽油、橄欖油、米糠油、天然維生素E、山茶籽 油、脂溶性迷迭香提取物中的一種或幾種。
7.制備權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述軟膠囊的方法，所述方法包括以下步驟1)將雨生紅球藻提取物與外加油相按配比置于容器中，充入N2，于25°C下超聲25min；2)于37°C下恒溫水浴震蕩50min ；3)配制膠液并制成軟膠囊。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，其中所述膠液包括按重量百分比計(jì)的以 下組成明膠40. 5%、甘油19. 5%、純水38. 17%、尼泊金乙酯0. 16%、尼泊金丙酯0. 04%, 二氧化鈦0. 6%、焦糖色1%、莧菜紅0. 03%。
9.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)所述軟膠囊的在制備用于抗氧化、增強(qiáng)免疫功能、抑制腫瘤 發(fā)生、預(yù)防心血管疾病、防止皮膚衰老、維護(hù)眼睛和中樞神經(jīng)系統(tǒng)健康的藥物或保健品中的 用途。
全文摘要
本發(fā)明提供一種雨生紅球藻提取物軟膠囊、其制備方法及用途。本發(fā)明提供的雨生紅球藻提取物軟膠囊的內(nèi)容物包括雨生紅球藻提取物和油相，其中雨生紅球藻提取物中蝦青素的含量為2～20％(w/w)，且雨生紅球藻提取物中含有的蝦青素與油相的質(zhì)量體積配比(g/mL)為1～10∶100。本發(fā)明還提供了制備雨生紅球藻提取物軟膠囊的方法。實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明所提供的雨生紅球藻提取物軟膠囊的穩(wěn)定性明顯優(yōu)于雨生紅球藻提取物及現(xiàn)有產(chǎn)品，對(duì)于蝦青素在抗氧化、增強(qiáng)免疫功能、抑制腫瘤發(fā)生、預(yù)防心血管疾病、防止皮膚衰老、維護(hù)眼睛和中樞神經(jīng)系統(tǒng)健康中的應(yīng)用具有重要意義。
文檔編號(hào)A61K47/42GK101978975SQ20101054832
公開(kāi)日2011年2月23日 申請(qǐng)日期2010年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月16日
發(fā)明者萬(wàn)慶家, 張秋玲, 胡志祥, 龍祥 申請(qǐng)人:云南綠A生物工程有限公司