專利名稱：：系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：缺血性腦血管病(缺血性腦卒中)也稱為腦中風(fēng)，這種病是由于大腦里面的血管突然發(fā)生破裂出血或因血管堵塞造成大腦缺血、缺氧而引起。目前是世界上發(fā)病率、死亡率、致殘率最高的疾病之一，我國平均每12秒就有一人發(fā)生卒中，每21秒就有一人死于卒中，腦卒中在我國已成為第一大死亡原因，嚴(yán)重危害我國中老年人的健康和生命。目前全國現(xiàn)有得過腦卒中后存活下來的人超過700萬，每年腦卒中的直接醫(yī)療費用約400億元人民幣。卒中存活者中約3/4喪失勞動能力，其中重度致殘者約占40%；中風(fēng)后5年間的累積復(fù)發(fā)率約為25%。而目前國內(nèi)外應(yīng)用于治療缺血性腦血管疾病的有效藥物很少，因此深入開展防治缺血性腦血管疾病藥物的研究具有重要意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的制備防治缺血性腦血管疾病的藥物的系列小分子多肽的氨基酸序列為Met-Gln-Cys-Ser-Asn、Met-Gln-Asn-Cys-Ser、Met-Gln-Asn-Ser-Cys、Met-Gln-Ser-Cys-AsnλMet-Gln-Ser-Asn-CysΛMet-Cys-Gln-Asn-SerΛMet-Cys-Gln-Ser-AsnλMet-Cys-Asn-Gln-SerΛMet-Cys-Asn-Ser-GlnΛMet-Cys-Ser-Gln-AsnλMet-Cys-Ser-Asn-GlnΛMet-Asn-Cys-Gln-SerΛMet-Asn-Cys-Ser-GlnλMet-Asn-Gln-Cys-SerΛMet-Asn-Gln-Ser-GlnΛMet-Asn-Ser-Gln-Cys、Met-Asn-Ser-Cys-GlnΛMet-Ser-Cys—Gln—Asn、Met-Ser-Cys-Asn-GlnλMet-Ser-Gln-Cys-AsnΛMet-Ser-Gln-Asn-CysΛMet-Ser-Asn-Gln-Cys或Met-Ser-Asn-Cys-Gln的五月太以及氨基酸序列為Cys-Ser-Asn、Asn-Cys-Ser、Asn-Ser-Cys、Ser-Cys-Asn或Ser-Asn-Cys的三月太。本發(fā)明所述的系列多肽小分子可通過現(xiàn)有的化學(xué)方法合成，其成鹽形式為內(nèi)鹽、堿基鹽或酸根鹽，并按常規(guī)藥劑學(xué)制備工藝制備成注射劑、片劑或膠囊劑等劑型。本發(fā)明所述的系列小分子多肽的純度為90.0%-99.99%，優(yōu)選98.0%-99.5%。本發(fā)明所述的防治缺血性腦血管疾病藥物中，系列小分子多肽的重量百分比為0.1%。_1.0%，輔料的重量百分比為99.99%-99.0%。本發(fā)明所涉及的系列小分子多肽源于單核細(xì)胞移動抑制因子，動物實驗表明這些系列小分子多肽具有改善腦缺血作用，對于治療缺血性腦血管疾病有確切的療效，具備開發(fā)成防治缺血性腦血管疾病藥物的前景。具體實施例方式本發(fā)明實施例提供的制備防治缺血性腦血管疾病的藥物的系列小分子多肽的氨基酸序列為Met-Gln-Cys-Ser-Asn>Met-Gln-Asn-Cys-Ser>Met-Gln-Asn-Ser-CyS、Met-Gln-Ser-Cys-Asn>Met-Gln-Ser-Asn-Cys>Met-Cys-G1n_Asn_Ser、Met-Cys-Gln-Ser-Asn>Met-Cys-Asn-Gln-Ser>Met-Cys-Asn_Ser_G1η、Met-Cys-Ser-Gln-Asn>Met-Cys-Ser-Asn-Gln>Met-Asn_Cys-G1n_Ser、Met-Asn-Cys-Ser-Gln>Met-Asn-Gln-Cys-Ser>Met-Asn_G1n_Ser_G1η、Met-Asn-Ser—Gln—Cys、Met-Asn-Ser-Cys-Gln>Met-Ser-Cys-Gln-Asn>Met-Ser-Cys-Asn-Gln>Met-Ser-Gln-Cys-Asn>Met-Ser-Gln-Asn-Cys>Met-Ser-Asn-Gln-Cys或Met-Ser-Asn-Cys-Gln的五肽以及氨基酸序列為Cys-Ser-Asn、Asn-Cys-Ser、Asn-Ser-Cys、Ser-Cys-Asn或Ser-Asn-Cys的三肽，其成鹽形式為內(nèi)鹽、堿基鹽或酸根鹽。本發(fā)明提供的防治缺血性腦血管疾病的藥物可通過以下實施例所述的方法制備獲得。實施例1取系列小分子多肽原料10克，溶于10000毫升水中，加入亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、鹽酸、枸櫞酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、葡聚糖、乳糖、肌酸醇、PVP、甘油、二甲亞砜、蔗糖、醋酸銨、桔酸丙酯、維生素C、維生素E、卵磷脂、蛋白質(zhì)水解物、硫代硫酸鈉、異抗壞血酸、抗壞血酸鈉、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、丁基羥基茴香醚、丁基羥基甲苯、酒石酸、山梨醇、EDTA和羥丙基β環(huán)糊精等輔料中的一種或幾種，加入0.05%-0.15%活性炭后，過濾，再精濾后分裝于2ml或5ml或IOml或20ml安瓶中熔封，或50ml或IOOml輸液瓶中壓蓋，滅菌、即得。實施例2取系列小分子多肽原料10克，溶于10000毫升水中，加入亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、鹽酸、枸櫞酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、葡聚糖、乳糖、肌酸醇、PVP、甘油、二甲亞砜、蔗糖、醋酸銨、桔酸丙酯、維生素C、維生素E、卵磷脂、蛋白質(zhì)水解物、硫代硫酸鈉、異抗壞血酸、抗壞血酸鈉、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、丁基羥基茴香醚、丁基羥基甲苯、酒石酸、山梨醇、EDTA和羥丙基β環(huán)糊精等輔料中的一種或幾種，加入0.05%-0.15%活性炭后，過濾，再精濾除菌后分裝于lml、5ml或IOml西林瓶中，凍干即得。實施例3取系列小分子多肽原料IOOmg直接滅菌，然后分裝于Iml或2ml或5ml安瓶中熔封，或Iml或2ml或5ml西林瓶中壓蓋即得。實施例4取系列小分子多肽原料100g，粉碎，過篩，加入淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、硫酸鈣、碳酸鈣、碳酸氫鈣、水、乙醇、微晶纖維素、飴糖、明膠、阿拉伯膠、羧甲基纖維素鈉、PVP、羥丙甲基纖維素、聚乙二醇、羧甲基淀粉、可壓性淀粉、滑石粉和硬脂酸鎂等輔料中的一種或幾種，制成顆粒、壓片、包薄膜衣即得。實施例5取小分子多肽原料100g，粉碎，過篩，加入淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、硫酸鈣、碳酸鈣、碳酸氫鈣、水、乙醇、微晶纖維素、飴糖、明膠、阿拉伯膠、羧甲基纖維素鈉、PVP、羥丙甲基纖維素、聚乙二醇、羧甲基淀粉、可壓性淀粉、滑石粉、和硬脂酸鎂等輔料中的一種或幾種，制成顆粒、裝膠囊即得。藥理實驗下面通過藥理實驗說明本發(fā)明藥物的有益效果。用小鼠線栓法制作腦血管疾病模型。本方法為驗證藥物具有防治缺血性腦血管疾病作用的常規(guī)動物實驗方法。用其驗證該系列小分子多肽對實驗性動物腦缺血的保護作用。1、實驗動物采用雄性小鼠，體重20_24g，每組10只/籠群養(yǎng)，共分30組。將小鼠進行分組。2、實驗分組空白組給予與藥物實驗組等量的生理鹽水進行假手術(shù)。模型組給予藥物實驗組等量的生理鹽水進行腦血管疾病再灌注手術(shù)。實驗一組給予五肽Met-Gln-Cys-Ser-Asnl.Omg/kg,實驗二組給予五肽Met-Gln-Asn-Cys-Serl.Omg/kg,實驗三組給予五肽Met-Gln-Asn-Ser-Cysl.Omg/kg,實驗四組給予五肽Met-Gln-Ser-Cys-Asnl.Omg/kg,實驗五組給予五肽Met-Gln-Ser-Asn-Cysl.Omg/kg,實驗六組給予五肽Met-Cys-Gln-Asn-Serl.Omg/kg,實驗七組給予五肽Met-Cys-Gln-Ser-Asnl.Omg/kg,實驗八組給予五肽Met-Cys-Asn-Gln-Serl.Omg/kg,實驗九組給予五肽Met-Cys-Asn-Ser-Glnl.Omg/kg,實驗十組給予五肽Met-Cys-Ser-Gln-Asnl.Omg/kg,實驗^^一組給予五肽Met-Cys-Ser-Asn-Glnl.Omg/kg,實驗十二組給予五肽Met-Asn-Cys-Gln-Serl.Omg/kg,實驗十三組給予五肽Met-Asn-Cys-Ser-Glnl··Omg/kg,實驗十四組給予五肽Met-Asn-Gln-Cys-Serl.Omg/kg實驗十五組給予五肽Met-Asn-Gln-Ser-Glnl.Omg/kg,實驗十六組給予五肽Met-Asn-Ser-Gln-Cysl.Omg/kg,實驗十七組給予五肽Met-Asn-Ser-Cys-Glnl.Omg/kg,實驗十八組給予五肽Met-Ser-Cys-Gln-Asnl.Omg/kg,實驗十九組給予五肽Met-Ser-Cys-Asn-Glnl.Omg/kg,實驗二十組給予五肽Met-Ser-Gln-Cys-Asnl.Omg/kg,實驗二i^一組給予五肽Met-Ser-Gln-Asn-Cysl.Omg/kg,實驗二十二組給予五肽Met-Ser-Asn-Gln-Cysl.Omg/kg,實驗二十三組給予五肽Met-Ser-Asn-Cys-Glnl.Omg/kg,實驗二十四組給予三肽Cys-Ser-Asnl.Omg/kg,實驗二十五組給予三肽Asn-Cys-Serl.Omg/kg,實驗二十六組給予三肽Asn-Ser-Cysl.Omg/kg,實驗二十七組給予三肽Ser-Cys-Asnl.Omg/kg,實驗二十八組給予三肽Ser-Asn-Cysl.Omg/kg。3、實驗方法將小鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，頸正中切口，分離、結(jié)扎右側(cè)頸總動脈近心端、頸外動脈及其分支動脈。分離右側(cè)頸內(nèi)動脈，沿頸內(nèi)動脈向下分離翼顎動脈，根部結(jié)扎該分支。在頸內(nèi)動脈近端備線，遠(yuǎn)端放置動脈夾，頸總動脈分叉處切口，插入4-0尼龍線，栓線進入頸內(nèi)動脈，入顱至大腦前動脈，阻斷大腦中動脈所有血流來源。撤掉動脈夾，扎緊備線，外留Icm長線頭，縫合皮膚。缺血1小時后尾靜脈給藥。繼續(xù)缺血1小時后再灌注。假手術(shù)組除不插線外，其余步驟同上。(1)實驗藥物對小鼠缺血性腦血管疾病再灌注模型腦梗塞面積的影響存活鼠再灌注24小時后，快速斷頭取鼠大腦。在前連和平面切下厚約2mm冠狀腦片，立刻置于2%TTC溶液中，37°C孵育30分鐘。梗塞區(qū)呈現(xiàn)白色，非梗塞區(qū)呈現(xiàn)紅色。用求積儀(C63圖像分析系統(tǒng))測出各區(qū)面積，并計算梗塞區(qū)占整個冠面的百分比。結(jié)果表明模型組的梗塞面積(％)為19.78士3.54##，實驗一組的梗塞面積(％)為9.90士2.65*，實驗二組的梗塞面積(％)為7.90士3.65**，實驗三組的梗塞面積(％)為8.07士1.98**，實驗四組的梗塞面積(％)為7.71士0.25**，實驗五組的梗塞面積(％)為11.44士2.89##，實驗六組的梗塞面積(％)為10.63士3.15*，實驗七組的梗塞面積(％)為12.78士3.03**，實驗八組的梗塞面積(％)為13.26士1.89*，實驗九組的梗塞面積(％)為13.51士2.07*，實驗十組的梗塞面積(％)為11.70士2.18*，實驗i^一組的梗塞面積(%)為11.39士2.34*，實驗十二組的梗塞面積(％)為12.54士3·11*，實驗十三組的梗塞面積(％)為12.35士2.68*，實驗十四組的梗塞面積(％)為12.23士2.37*，實驗十五組的梗塞面積(％)為11.46士2.69*，實驗十六組的梗塞面積(％)為11.87士2.94*，實驗十七組的梗塞面積(％)為10.52士2.85*，實驗十八組的梗塞面積(％)為10.38士2.26*，實驗十九組的梗塞面積(％)為10.03士2.19*，實驗二十組的梗塞面積(％)為9.62士3.28**，實驗二i^一組的梗塞面積(％)為9.27士2.62**，實驗二十二組的梗塞面積(%)為9.46士2.85*，實驗二十三組的梗塞面積(％)為8.84士3.17#，實驗二十四組的梗塞面積(%)為12.69士1.57*，實驗二十五組的梗塞面積(％)為12.88士3.08*，實驗二十六組的梗塞面積(％)為13.17士2.34*，實驗二十七組的梗塞面積(％)為12.93士2.59*，實驗二十八組的梗塞面積(％)為13.28士3.40*。其中，實驗?zāi)Ｐ徒M側(cè)腦組織梗塞面積明顯小于其他，且與各組相比有顯著性差異(P<0.01)。即當(dāng)給予五肽的劑量為1.Og時，對小鼠腦缺血再灌注損傷引起的腦梗塞有顯著保護作用。見表1。表1實驗各組對小鼠腦缺血再灌注的腦梗塞體積的影響(η=0，x±SEM)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與假手術(shù)組比較，##P<0.01；與模型組比較，*P<0.05，**P<0.Ol0權(quán)利要求系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，該系列多肽小分子的氨基酸序列為Met-Gln-Cys-Ser-Asn、Met-Gln-Asn-Cys-Ser、Met-Gln-Asn-Ser-Cys、Met-Gln-Ser-Cys-Asn、Met-Gln-Ser-Asn-Cys、Met-Cys-Gln-Asn-Ser、Met-Cys-Gln-Ser-Asn、Met-Cys-Asn-Gln-Ser、Met-Cys-Asn-Ser-Gln、Met-Cys-Ser-Gln-Asn、Met-Cys-Ser-Asn-Gln、Met-Asn-Cys-Gln-Ser、Met-Asn-Cys-Ser-Gln、Met-Asn-Gln-Cys-Ser、Met-Asn-Gln-Ser-Gln、Met-Asn-Ser-Gln-Cys、Met-Asn-Ser-Cys-Gln、Met-Ser-Cys-Gln-Asn、Met-Ser-Cys-Asn-Gln、Met-Ser-Gln-Cys-Asn、Met-Ser-Gln-Asn-Cys、Met-Ser-Asn-Gln-Cys或Met-Ser-Asn-Cys-Gln的五肽以及氨基酸序列為Cys-Ser-Asn、Asn-Cys-Ser、Asn-Ser-Cys、Ser-Cys-Asn或Ser-Asn-Cys的三肽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的系列多肽小分子通過現(xiàn)有的化學(xué)方法合成，其成鹽形式為內(nèi)鹽、堿基鹽或酸根鹽，并按常規(guī)藥劑學(xué)制備工藝制備成注射劑、片劑或膠囊劑。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的系列小分子多肽的純度為90.0%-99.99%。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的系列小分子多肽的純度為98.0%-99.5%。5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的防治缺血性腦血管疾病藥物中，系列小分子多肽的重量百分比為0.1%。_1.0%，輔料的重量百分比為99.99%-99.0%。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的防治缺血性腦血管疾病藥物的制備方法是取系列小分子多肽原料10克，溶于10000毫升水中，加入亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、鹽酸、枸櫞酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、葡聚糖、乳糖、肌酸醇、PVP、甘油、二甲亞砜、蔗糖、醋酸銨、桔酸丙酯、維生素C、維生素E、卵磷脂、蛋白質(zhì)水解物、硫代硫酸鈉、異抗壞血酸、抗壞血酸鈉、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、丁基羥基茴香醚、丁基羥基甲苯、酒石酸、山梨醇、EDTA和羥丙基β環(huán)糊精輔料中的一種或幾種，加入0.05%-0.15%活性炭后，過濾，再精濾后分裝于2ml或5ml或IOml或20ml安瓶中熔封，或50ml或IOOml輸液瓶中壓蓋，滅菌、即得。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的防治缺血性腦血管疾病藥物的制備方法是取系列小分子多肽原料10克，溶于10000毫升水中，加入亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、鹽酸、枸櫞酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉、葡萄糖、甘露醇、葡聚糖、乳糖、肌酸醇、PVP、甘油、二甲亞砜、蔗糖、醋酸銨、桔酸丙酯、維生素C、維生素E、卵磷脂、蛋白質(zhì)水解物、硫代硫酸鈉、異抗壞血酸、抗壞血酸鈉、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、丁基羥基茴香醚、丁基羥基甲苯、酒石酸、山梨醇、EDTA和羥丙基β環(huán)糊精輔料中的一種或幾種，加入0.05%-0.15%活性炭后，過濾，再精濾除菌后分裝于lml、5ml或IOml西林瓶中，凍干即得。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的防治缺血性腦血管疾病藥物的制備方法是取系列小分子多肽原料IOOmg直接滅菌，然后分裝于Iml或2ml或5ml安瓶中熔封，或Iml或2ml或5ml西林瓶中壓蓋即得。9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的防治缺血性腦血管疾病藥物的制備方法是取系列小分子多肽原料100g，粉碎，過篩，加入淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、硫酸鈣、碳酸鈣、碳酸氫鈣、水、乙醇、微晶纖維素、飴糖、明膠、阿拉伯膠、羧甲基纖維素鈉、PVP、羥丙甲基纖維素、聚乙二醇、羧甲基淀粉、可壓性淀粉、滑石粉和硬脂酸鎂輔料中的一種或幾種，制成顆粒、壓片、包薄膜衣即得。10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的防治缺血性腦血管疾病藥物的制備方法是取小分子多肽原料100g，粉碎，過篩，加入淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、硫酸鈣、碳酸鈣、碳酸氫鈣、水、乙醇、微晶纖維素、飴糖、明膠、阿拉伯膠、羧甲基纖維素鈉、PVP、羥丙甲基纖維素、聚乙二醇、羧甲基淀粉、可壓性淀粉、滑石粉、和硬脂酸鎂輔料中的一種或幾種，制成顆粒、裝膠囊即得。全文摘要本發(fā)明公開了系列多肽小分子在制備防治缺血性腦血管疾病藥物中的應(yīng)用，該系列多肽小分子的氨基酸序列為Met-Gln-Cys-Ser-Asn、Met-Gln-Asn-Cys-Ser、Met-Gln-Asn-Ser-Cys、Met-Gln-Ser-Cys-Asn、Met-Gln-Ser-Asn-Cys、Met-Cys-Gln-Asn-Ser、Met-Cys-Gln-Ser-Asn、Met-Cys-Asn-Gln-Ser、Met-Cys-Asn-Ser-Gln、Met-Cys-Ser-Gln-Asn、Met-Cys-Ser-Asn-Gln、Met-Asn-Cys-Gln-Ser、Met-Asn-Cys-Ser-Gln、Met-Asn-Gln-Cys-Ser、Met-Asn-Gln-Ser-Gln、Met-Asn-Ser-Gln-Cys、Met-Asn-Ser-Cys-Gln、Met-Ser-Cys-Gln-Asn、Met-Ser-Cys-Asn-Gln、Met-Ser-Gln-Cys-Asn、Met-Ser-Gln-Asn-Cys、Met-Ser-Asn-Gln-Cys或Met-Ser-Asn-Cys-Gln的五肽以及氨基酸序列為Cys-Ser-Asn、Asn-Cys-Ser、Asn-Ser-Cys、Ser-Cys-Asn或Ser-Asn-Cys的三肽。本發(fā)明所涉及的系列小分子多肽源于單核細(xì)胞移動抑制因子，動物實驗表明這些系列小分子多肽具有改善腦缺血作用，對于治療缺血性腦血管疾病有確切的療效，具備開發(fā)成防治缺血性腦血管疾病藥物的前景。文檔編號A61K38/06GK101822815SQ20101016472公開日2010年9月8日申請日期2010年4月29日優(yōu)先權(quán)日2010年4月29日發(fā)明者張恩德,黃景華申請人:廣東八加一醫(yī)藥有限公司