專利名稱：黃芪的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及黃芪的用途。
背景技術(shù)：
黃芪為豆科植物黃芪Astragalus membranaceus (Fisch. )Bge的干燥根，該植物主要分布于我國東北、華北和西北等地區(qū)，黃芪屬植物的化學(xué)成分主要為單糖、多糖、皂甙、黃酮、氨基酸和微量元素等；具有增強免疫力、抗疲勞、抗突變、保肝、抑制破骨細胞的作用，能對抗氫化可的松的免疫抑制作用，并能增強巨噬細胞的吞噬功能，促進抗體合成；具有解毒作用，能加強正常心臟收縮，對衰竭的心臟有強心作用，能使冠狀血管和腎臟血管擴張，并使全身末梢血管擴張。內(nèi)毒素(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成部分，是介導(dǎo)系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)綜合癥的主要啟動因子；它本身并不造成機體的嚴重損害，主要通過促使巨噬細胞等釋放大量的細胞因子，這些因子通過自分泌、旁分泌相互聯(lián)系、相互影響，造成病變的發(fā)展。單核/巨噬細胞是一種多功能免疫細胞，在機體的特異性免疫反應(yīng)中起著重要作用；利用內(nèi)毒素誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人單核/巨噬細胞分泌白介素等炎癥因子，通過考察黃芪對人單核/巨噬細胞(THP-I)炎癥因子表達的影響，同時借助炎癥因子抗體芯片檢測黃芪對人單核/巨噬細胞分泌的炎癥因子表達的影響，可探討黃芪抗炎作用的機制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在將黃芪應(yīng)用于制備內(nèi)毒素誘導(dǎo)的炎癥因子調(diào)節(jié)劑。具體為，將黃芪應(yīng)用于制備內(nèi)毒素誘導(dǎo)的炎癥因子調(diào)節(jié)劑，尤其是制備白介素抑制劑，白介素包括白介素-6和白介素-1 β ；以及制備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑。單核/巨噬細胞是一種多功能免疫細胞，在機體的特異性免疫反應(yīng)中起著重要作用。內(nèi)毒素(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成部分，是介導(dǎo)系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)綜合癥的主要啟動因子。LPS本身并不造成機體的嚴重損害，它主要通過促使巨噬細胞等釋放大量的細胞因子，這些因子通過自分泌、旁分泌相互聯(lián)系、相互影響，使病變得以發(fā)展。以LPS作為造模藥物，通過構(gòu)建人單核/巨噬細胞炎癥模型，考察黃芪抗炎作用的機制。結(jié)果顯示，黃芪可顯著抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)單核細胞分泌白介素_6(IL-6)的活性，對內(nèi)毒素誘導(dǎo)單核細胞分泌白介素-1 β (IL-Ιβ)的活性也有一定的抑制作用，同時，對金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白(TIMP-幻表達也有一定的促進作用。這一結(jié)果是對黃芪增強人體免疫力研究的重要補充，為闡明黃芪的抗炎作用機制提供了可能的研究靶點。


圖1為實施例2中，空白對照組、LBS組和LBS+黃芪組的人炎癥抗體因子芯片實驗的檢測結(jié)果
圖2為IL-6and IL-I β表達量的炎癥抗體檢測結(jié)果圖3為ΤΙΜΡ-2表達量的炎癥抗體檢測結(jié)果
具體實施例方式藥品與試劑1、黃芪(自制)，將黃芪藥材分別經(jīng)水回流提取，濃縮，80%乙醇沉淀，制得棕褐色粉末；2、RPMI 1640培養(yǎng)液、高滅活胎牛血清、青、鏈霉素均購自美國Gibco公司；3、苯甲基磺酰氟(PMSF)、蛋白酶抑制劑均購自美國Sigma公司；細菌內(nèi)毒素(LPS) 由SIGMA公司生產(chǎn)，大腸桿菌055 :B5，批號:56H4096 ；4、磷酸鹽緩沖溶液(PBS)自配；細胞培養(yǎng)用水為新鮮三蒸水；其它所用試劑均為分析純；5、人炎癥因子抗體芯片I購自RayBio公司。細胞培養(yǎng)人單核/巨噬細胞(Human acute monocytic leukemia cells，THP-1)購自中科院上海生化細胞所細胞庫。采用RPMI 1640培養(yǎng)液(加入10%牛血清，100U雙抗，)，在37°C， 5% CO2條件下培養(yǎng)。實施例1 LPS介導(dǎo)實驗分組為空白對照組(無LPS)、LPS組和LPS+黃芪組。Control組加入空白培養(yǎng)液，LPS組終末質(zhì)量濃度為lOOng/ml，LPS+黃芪組LPS和黃芪的終末濃度分別為lOOng/ml 和lmg/ml。調(diào)單核細胞密度為1 X IO6個/孔，LPS+黃芪組分別先加入黃芪，15min后再加入LPS。各組在37°C，5% CO2條件下培養(yǎng)18h，收集上清液保存待測。實施例2人炎癥抗體因子芯片實驗根據(jù)抗體芯片試劑盒說明，在25°C條件下將芯片膜用2ml封閉緩沖液孵化lh，移去封閉緩沖液，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑 II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min，棄去多余液體。分別加Iml實施例1所制備的各組上清液于膜的蛋白面，室溫孵化1 2h。傾去樣品液，用洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用細1洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。取出膜，裝入新孔中，將血管生成抗體液用封閉緩沖液稀釋至適當濃度加入孔中。 室溫下孵育池后，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。同上方法準備辣根過氧化物酶稀釋液并與膜接觸，室溫下孵育Ih后，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。經(jīng)化學(xué)發(fā)光，顯影，定影。將膠片用凝膠圖象處理系統(tǒng)分析目地斑點的凈光密度值，計算蛋白表達量。所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標準差 士s)表示，采用SPSS 13. 0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，組間均數(shù)比較用t檢驗，多個樣本均數(shù)比較用單因素方差分析。炎癥因子抗體芯片實驗發(fā)現(xiàn)，與LPS組相比，lmg/ml黃芪+LPS組中IL-I β、IL_6 的表達被顯著抑制(P < 0. 01)，如表1、圖2所示；但對IL-8的表達無明顯影響，結(jié)果表明
4黃芪能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的人單核/巨噬細胞IL-I β、IL-6表達。
表 權(quán)利要求
1.黃芪在制備內(nèi)毒素誘導(dǎo)的炎癥因子調(diào)節(jié)劑方面的應(yīng)用。
2.黃芪在制備白介素抑制劑方面的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求2所述黃芪在制備白介素抑制劑方面的應(yīng)用，其特征在于，所述的白介素為白介素-6。
4.權(quán)利要求2所述黃芪在制備白介素抑制劑方面的應(yīng)用，其特征在于，所述的白介素為白介素。
5.黃芪在制備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及了黃芪的應(yīng)用。選用內(nèi)毒素作為造模藥物，構(gòu)建人單核/巨噬細胞炎癥模型，考察黃芪抗炎作用的機制，結(jié)果顯示，可將黃芪應(yīng)用于制備內(nèi)毒素誘導(dǎo)的炎癥因子調(diào)節(jié)劑，尤其是制備白介素抑制劑，白介素包括白介素-6和白介素-1β；還有制備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑。這一結(jié)果是對黃芪增強人體免疫力研究的重要補充，為闡明黃芪的抗炎作用機制提供了可能的研究靶點。
文檔編號A61K36/481GK102210740SQ20101013870
公開日2011年10月12日 申請日期2010年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月2日
發(fā)明者尚鵬, 裴明 申請人:上海市七寶中學(xué)