專利名稱：Jnk信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的細(xì)胞可滲透性肽抑制劑用于治療慢性或非慢性炎性消化病的應(yīng)用的制作方法
JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的細(xì)胞可滲透性肽抑制劑用于治療慢性 或非慢性炎性消化病的應(yīng)用本發(fā)明涉及蛋白激酶抑制劑用于治療非慢性或慢性炎性消化病的應(yīng)用，更具體 地涉及蛋白激酶C-Jim氨基末端激酶的抑制劑、JNK抑制劑序列、嵌合肽或者編碼它們的 核酸以及包含它們的藥物組合物用于治療非慢性或慢性炎性消化病的應(yīng)用，所述非慢性 或慢性炎性消化病，諸如結(jié)腸炎，包括例如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩結(jié)腸炎、改道性結(jié)腸炎 (diversion colitis)、缺血性結(jié)腸炎、傳染性結(jié)腸炎、暴發(fā)性結(jié)腸炎、化學(xué)性結(jié)腸炎、顯微 鏡性結(jié)腸炎(microscopic colitis)、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎(lymphocytic colitis)和非典型 結(jié)腸炎(atypical colitis)等。消化病的數(shù)量，特別是非慢性和慢性消化病的數(shù)量在最近數(shù)十年中在西方文明 中顯著地增加，并對(duì)它們的公共保健系統(tǒng)提出了相當(dāng)大的挑戰(zhàn)。消化病是關(guān)于胃腸道的 疾病。這包括食道、胃、十二指腸的第一、二、三和四部分、空腸、回腸、回盲腸的復(fù)合體 (ileo-cecal complex)、大腸、(升結(jié)腸、橫結(jié)腸和降結(jié)腸)乙狀結(jié)腸和直腸的疾病。慢 性炎性消化病頻繁發(fā)生并且以結(jié)腸的炎癥為特征，諸如結(jié)腸炎，包括例如潰瘍性結(jié)腸炎 (Colitis ulcerosa)(潰瘍性結(jié)腸炎)、克羅氏癥(MorbusCrohn)(克羅恩病)、改道性結(jié)腸 炎、缺血性結(jié)腸炎、傳染性結(jié)腸炎、暴發(fā)性結(jié)腸炎、化學(xué)性結(jié)腸炎、顯微鏡性結(jié)腸炎、淋巴細(xì) 胞性結(jié)腸炎、膠原性結(jié)腸炎(collageneouscolitis)、未定型結(jié)腸炎和非典型結(jié)腸炎等，其 中潰瘍性結(jié)腸炎(潰瘍性結(jié)腸炎)和克羅氏癥(克羅恩病)代表兩種主要的慢性炎性消化 病和兩種主要類型的炎性腸病?？肆_氏癥和潰瘍性結(jié)腸炎兩者是在最近數(shù)十年當(dāng)中發(fā)生快 速增加的疾病。例如，在德國(guó)估計(jì)約0. 01%至約0. 的人群，即，約100，000中大約10至 100個(gè)人，患有克羅氏癥或潰瘍性結(jié)腸炎。此外，克羅氏癥或潰瘍性結(jié)腸炎每年以約1至約 8發(fā)生率的增加速度發(fā)生。女性稍微更多地受克羅氏癥的影響，而潰瘍性結(jié)腸炎的男性女 性的比例是大約1 1。潰瘍性結(jié)腸和克羅氏癥發(fā)作的高峰年齡是在15和30歲之間。第 二高峰出現(xiàn)在60和80歲之間。潰瘍性結(jié)腸炎是炎性腸病(IBD)的一種形式，作為腸炎的亞型，其是一種腸疾病， 特別是大腸或結(jié)腸的疾病。潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀典型地包括結(jié)腸中特有的潰瘍或瘡口。潰 瘍性結(jié)腸炎通常在直腸中開始并連續(xù)地蔓延進(jìn)入大腸或直腸的近端部分，其中上胃腸道 通常不受影響?；顒?dòng)性疾病的主要癥狀通常是逐漸發(fā)作的混合有血的腹瀉，其中患者典 型地患有痙攣性腹部疼痛(cramplike abdominal pain)。潰瘍性結(jié)腸炎與多種腸外表現(xiàn) (extraintestinal manifestations) 夫(dermatologic rheumatology)、目艮禾口胃 它)相關(guān)。它是間歇性疾病，具有惡化癥狀的周期和相對(duì)無癥狀的周期。雖然潰瘍性結(jié)腸 炎不知道病因，但是有易感性的推測(cè)遺傳組分。此外，假定該病可以在易感性的人中由環(huán)境 因素誘發(fā)。然而，潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀很少自行減小，而是需要治療以變得好轉(zhuǎn)，特別是當(dāng) 疾病轉(zhuǎn)化成為慢性病狀態(tài)的時(shí)候。潰瘍性結(jié)腸炎的治療取決于疾病的程度和分布，并且通常包括用消炎藥、免疫抑 制和靶向免疫反應(yīng)的特定成分的生物療法進(jìn)行治療。在小的或中等的炎性活性的疾病狀 態(tài)(輕度和中度末端結(jié)腸炎)中，一般地，如果疾病限制于直腸，則普通的治療通常包括給予5-氨基水楊酸鹽類，諸如pentasa 或Salofalk ?？蛇x地，可以運(yùn)用使用栓劑或灌腸劑的局 部藥物。另外，可以使用給予包含類固醇的藥物，特別是在急性治療中，所述藥物包括例如 氫化可的松、丁地去炎松(Budenosid)、氯地米松(Beclomethason) (Betnesol )或強(qiáng)的松 (Rectodelt )。在高炎性活性的疾病狀態(tài)中，一般而言，如果潰瘍性結(jié)腸炎蔓延進(jìn)入大腸或 結(jié)腸的近端部分，一般使用應(yīng)用靜脈內(nèi)注射或者直腸或者口服形式給藥，給予糖皮質(zhì)激素 諸如氯地米松(Betnesol )或強(qiáng)的松(Rectodelt )或者它們的衍生物，或者例如給予免疫抑制 劑，諸如，硫唑嘌呤、甲氨喋啉(methothrexat) (MTX)或環(huán)孢霉素Α。在少數(shù)情況下，可以運(yùn) 用使用抗體的抗體療法，例如抗TNF-α (INFLIXIMAB)或抗-⑶4。在嚴(yán)重的慢性病狀態(tài)—— 其對(duì)藥物治療不應(yīng)答——的情況下，結(jié)腸切除術(shù)，即通過手術(shù)部分或完全去除大腸，有時(shí)候 是必須的，并被認(rèn)為是這種情況下的疾病的治愈手段。這些療法一般減少由于潰瘍性結(jié)腸 炎引起的急性發(fā)作的癥狀。然而，這些療法中沒有一種表現(xiàn)對(duì)這種疾病有效和持久的治愈。克羅氏癥或克羅恩病(也稱為局限性腸炎)也是一種重要的慢性炎性消化 病。它是影響整個(gè)腸壁和腸的一種慢性、發(fā)作性、炎性腸病(IBD)的亞型。與潰瘍性結(jié) 腸炎相比，克羅氏癥可以影響整個(gè)胃腸道的任何部分，并且因此，克羅氏癥的癥狀在患 病個(gè)體中不同。該疾病的特征為在稱為跳躍性病變(skip lesion)的癥狀中炎癥區(qū)和 正常區(qū)之間存在界限(lining)。主要的腸胃癥狀是腹部疼痛、腹瀉、便秘、嘔吐以及重 量減輕或增加。克羅氏癥也可以引起胃腸道外的并發(fā)癥，諸如皮疹、關(guān)節(jié)炎和眼睛的炎 癥?？肆_氏癥在北美影響400,000和600,000之間的人(Loftus, Ε. V. ；P. Schoenfeld, W. J. Sandborn(January 2002). “ The epidemiology and natural history of Crohn' s disease in population-based patient cohorts from North America -.a systematic review " . Alimentary Pharmacology&Therapeutics 16(1) :51-60.)。北歐的患病 率估計(jì)范圍為每 100，000 人 27-48 人(Bernstein, Charles N. (July 2006)?！?The Epidemiology of Inflammatory Bowel Disease in Canada:A Population-Based Study" . The American Journal of Gastroenterology 101(7) :1559-1568)。此外，克羅 氏癥往往在十多歲和二十多歲中最初出現(xiàn)，另一個(gè)高峰發(fā)病期在五十多歲到七十多歲，但 是該病可以在任何年齡出現(xiàn)(Hanauer, 乂印1^11 B. (March 1996). “ Inflammatory bowel disease“ . New England Journal of Medicine 334(13) :841-848 ；Gopal,Latha ；Senthil Nachimuthu (2006-05-23). Chrohns Disease, eMedicine)?？肆_氏癥的原因不清楚，但是相 信為與遺傳聯(lián)系的自身免疫性疾病。最高的相對(duì)危險(xiǎn)在兄弟姐妹中出現(xiàn)，稍微更加頻繁地 影響女性，其中吸煙者更可能患克羅氏癥的頻率為三倍。出于使疾病緩解和保持緩解的目 標(biāo)，使用了多種藥物治療。這些藥物治療包括5-氨基水楊酸(5-ASA)制劑(pentasa 膠囊、 Asacol片劑、Lialda片劑、Rowasa保留灌腸劑)、類固醇藥物、服用免疫調(diào)節(jié)劑(諸如，例 如，硫唑嘌呤、巰基嘌呤(6-MP)和甲氨喋啉)以及新的生物藥品諸如，抗-TNA-α抗體(例 如，INFLIXIMAB 和ADALIMUMAB )等等。類似于對(duì)于潰瘍性結(jié)腸炎的以上討論，這些 療法一般減少由于克羅氏癥引起的急性發(fā)作的癥狀。然而，這些療法中沒有一種表現(xiàn)對(duì)克 羅恩病有效和持久的治愈(除了抗-TNF-α之外，然而其顯示增加的副作用風(fēng)險(xiǎn))。其它形式的結(jié)腸炎包括，例如改道性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、傳染性結(jié)腸炎、暴發(fā) 性結(jié)腸炎、化學(xué)性結(jié)腸炎、顯微鏡性結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎、膠原性結(jié)腸炎、未定型結(jié)腸 炎和非典型結(jié)腸炎等。然而，對(duì)于任一的這些疾病，不存在有效和長(zhǎng)時(shí)間持久的治愈而沒有副作用的風(fēng)險(xiǎn)。因此，在本領(lǐng)域中存在提供替代或者改進(jìn)的藥品的現(xiàn)行緊急需要，其允許以 上疾病的新和優(yōu)選改進(jìn)的療法。因此，本發(fā)明的目的是提供替代的或者改進(jìn)的療法，其允許非慢性或慢性(炎性) 消化病的新的和優(yōu)選改進(jìn)的治愈，所述消化病諸如結(jié)腸炎，包括例如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩 結(jié)腸炎、改道性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、傳染性結(jié)腸炎、暴發(fā)性結(jié)腸炎、化學(xué)性疾病、顯微鏡 性結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎和非典型結(jié)腸炎等。該目的通過如下進(jìn)行解決在制備用于治療對(duì)象中的非慢性或慢性炎性消化病的 藥物組合物中應(yīng)用包括長(zhǎng)度小于150個(gè)氨基酸的JNK抑制劑序列。如本文使用的，術(shù)語“非慢性或慢性炎性消化病”一般表示關(guān)于胃腸道的非慢性或 慢性炎性疾病。這包括食道、胃、十二指腸的第一、二、三和四部分、空腸、回腸、回盲腸的復(fù) 合體、大腸、(升結(jié)腸、橫結(jié)腸和降結(jié)腸)乙狀結(jié)腸和直腸的疾病。在這方面優(yōu)選地包括慢 性炎性消化病，該病以結(jié)腸的炎癥為特征，諸如結(jié)腸炎，其包括例如潰瘍性結(jié)腸炎(潰瘍性 結(jié)腸炎)、克羅氏癥(克羅恩病)、改道性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、傳染性結(jié)腸炎、暴發(fā)性結(jié)腸 炎、化學(xué)性結(jié)腸炎、顯微鏡性結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎、膠原性結(jié)腸炎、未定型結(jié)腸炎和非 典型結(jié)腸炎等。本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)這類JNK抑制劑序列適合于治療對(duì)象中的這類慢性或非慢 性炎性消化病。這對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)不是顯而易見的，也沒有被現(xiàn)有技術(shù)暗示，即使一般而言， JNK抑制劑序列根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)是已知的。JNK是“C-Jim氨基末端激酶”的縮寫，其是促分裂原活化蛋白(MAP)激酶的應(yīng) 激激活組的成員。這些激酶涉及控制細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，更一般地說，涉及細(xì)胞對(duì)環(huán)境 刺激的應(yīng)答。應(yīng)答環(huán)境應(yīng)激(environmental stress)和通過若干類別的細(xì)胞表面受體 的參與，JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路被激活。這些細(xì)胞表面受體可以包括細(xì)胞因子受體、蛇形受體 (serpentine)和受體酪氨酸激酶。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，JNK也涉及生物過程，例如致癌性 轉(zhuǎn)化和調(diào)節(jié)對(duì)環(huán)境應(yīng)激的適應(yīng)性應(yīng)答。JNK也與調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相關(guān)，包括免疫細(xì)胞的成熟 和分化，以及影響被免疫系統(tǒng)識(shí)別進(jìn)行破壞的細(xì)胞中的程序性細(xì)胞死亡。這種特有的性質(zhì) 使得JNK信號(hào)傳導(dǎo)成為開發(fā)藥物干涉的有希望的靶標(biāo)。然而，直到現(xiàn)在，JNK抑制劑序列的 藥理學(xué)作用只對(duì)有限數(shù)量的疾病顯示，所述疾病包括若干神經(jīng)障礙諸如缺血性發(fā)作和帕金 森病，其中這些JNK抑制劑序列可以包括上游激酶抑制劑(例如，CEP-1347)、小的化學(xué)JNK 抑制劑(SP600125和AS601245)——其例如通過與蛋白激酶的ATP結(jié)合位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)直接影 響激酶活性、以及JNK與其底物(D-JNKI和I-JIP)之間的相互作用的肽抑制劑(參見，例 如，Kuan 等人，Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders, February 2005, vol. 4，no. 1，pp. 63-67 (5))。在這種情況下，上游激酶抑制劑CEP-1347 (KT7515)是混合譜 系激酶家族的半合成抑制劑。在抑制營(yíng)養(yǎng)停止后原代胚培養(yǎng)物和分化的PC12細(xì)胞中以及 在用1-甲基-4-苯基-四氫吡啶處理的小鼠中的C-Jim氨基末端激酶(JNK)活化的劑量 下，CEP-1347 (KT7515)促進(jìn)神經(jīng)元存活。進(jìn)一步地，觀察到CEP-1347 (KT7515)促進(jìn)培養(yǎng) 的雞胚背根神經(jīng)節(jié)、交感神經(jīng)、睫狀和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的長(zhǎng)期存活(參見，例如，Borasio等人， Neuroreport. 9 (7) 1435-1439，May IIth 1998)。發(fā)現(xiàn)小的化學(xué) JNK 抑制劑 SP600125 降低 C-Jun磷酸化的水平，以防止多巴胺能神經(jīng)元凋亡，并部分恢復(fù)C57BL/6N小鼠中MPTP誘導(dǎo) 的PD中的多巴胺的水平(Wang等人，Neurosci Res. 2004Feb ；48 (2) ；195-202)。這些結(jié)果表明JNK通路是MPTP體內(nèi)的神經(jīng)毒性作用的主要介體，并且抑制JNK的活性可為治療PD提 供新的和有效的策略。小的化學(xué)抑制劑的進(jìn)一步實(shí)例是前述的JNK-抑制劑AS601245。在 腦缺血后，AS601245抑制了 JNK信號(hào)傳導(dǎo)通路，并促進(jìn)細(xì)胞的存活。在體內(nèi)，AS601245對(duì) 在暫時(shí)性全面缺血的沙鼠模型中的海馬CAl神經(jīng)元的延遲損失提供了重要的保護(hù)。這種作 用通過JNK抑制以及因此c-Jim表達(dá)和磷酸化作用進(jìn)行調(diào)節(jié)(參見，例如Carboni等人，J Pharmacol Exp Ther. 2004 Jul ；310(1) 25-32. Epub 2004Feb 26th)。然而，概括以上所述， 顯示的那些JNK抑制劑序列的藥理作用只證明對(duì)有限數(shù)量疾病的可用性，特別是若干神經(jīng) 障礙諸如缺血性發(fā)作和帕金森病。因此，JNK抑制劑序列可以用于治療非慢性或慢性炎性 消化病是令人驚奇的結(jié)果。在本發(fā)明的內(nèi)容中，如以上限定的JNK抑制劑序列可以一般源于人或大鼠IBl序 列，優(yōu)選地源自于由依照SEQ ID NO 102 (描述大鼠的IBlcDNA序列和其預(yù)測(cè)的氨基酸序 列)、SEQ ID N0:103(描述由rIBl基因的外顯子-內(nèi)含子邊界——剪接供體——編碼的大 鼠的IBl蛋白質(zhì)序列)、SEQ ID NO :104(描述智人(Homo sapiens)的IBl蛋白質(zhì)序列)或 SEQ ID N0:105(描述智人的IBl cDNA序列)的序列的任一種限定或編碼的氨基酸序列，更 優(yōu)選地來自于由依照SEQ ID NO: 104 (描述智人的IBl蛋白質(zhì)序列)或SEQ ID NO 105 (描 述智人的IBl cDNA序列)的序列任一種限定或編碼的氨基酸序列，或者來自其任何片段或 者變體。換句話說，JNK抑制劑序列包括人或大鼠IBl序列的片段、變體或者這類片段的變 體。人或大鼠 IB 序列分別由依照 SEQ ID NO 102,SEQ ID NO 103,SEQ ID N0:104 或 SEQ IDNO 105的序列限定或編碼。優(yōu)選地，如本文使用的這種JNK抑制劑序列包括小于150個(gè)氨基酸殘基的總長(zhǎng)度， 優(yōu)選地為5個(gè)到150個(gè)氨基酸殘基的范圍，更優(yōu)選地為10個(gè)到100個(gè)氨基酸殘基，特別更 優(yōu)選地為10個(gè)到75個(gè)氨基酸殘基，和最優(yōu)選地為15個(gè)到50個(gè)氨基酸殘基，例如10個(gè)至 30個(gè)、10個(gè)至20個(gè)或者10個(gè)至15個(gè)氨基酸殘基。更優(yōu)選地，這種JNK抑制劑序列和以上的范圍可以選自任一的上述序列，特別更 優(yōu)選地選自根據(jù)SEQ ID NO 104限定的或者由SEQ ID NO :105編碼的氨基酸序列，特別更 優(yōu)選地為在SEQ ID NO :105的第420和第980位核苷酸之間的區(qū)域中，或者SEQ ID NO 104 的第105和第291位氨基酸之間的區(qū)域中，最優(yōu)選地為在SEQ ID NO 105的第561和647 位核苷酸之間的區(qū)域中，或者SEQ ID NO 104的第152和第180位氨基酸之間的區(qū)域中。根據(jù)具體的實(shí)施方式，如本文使用的JNK抑制劑序列一般結(jié)合JNK和/或抑制至 少一種JNK活性轉(zhuǎn)錄因子的活化，例如c-Jun或ATF2 (分別參見例如SEQ IDNOs 15和16) 或Elkl。同樣地，如本文使用的JNK抑制劑序列優(yōu)選地包括或者由根據(jù)SEQ ID NO :1至4、 13至20和33至100、或者其片段、衍生物或者變體的任一個(gè)的至少一種氨基酸序列組成。 更優(yōu)選地，如本文使用的JNK抑制劑序列可以包含根據(jù)SEQ IDNO :1至4、13至20和33至 100或者其變體、片段、或衍生物的1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或甚至更多個(gè)拷貝的氨基酸序列。如 果以多于一個(gè)拷貝存在，那么如本使用的根據(jù)SEQ ID NO :1至4、13至20和33至100或者 其變體、片段、或衍生物的這些氨基酸序列可在沒有任何連接序列情況下或經(jīng)過連接序列 直接地彼此連接，所述連接序列包括1至10、優(yōu)選1至5個(gè)氨基酸。形成連接序列的氨基酸 優(yōu)選地選自甘氨酸或脯氨酸作為氨基酸殘基。更優(yōu)選地，如本使用的，根據(jù)SEQ IDNO :1至4、13至20和33至100或者其片段、變體或者衍生物的這些氨基酸序列可通過二個(gè)、三個(gè)或 更多個(gè)的脯氨酸殘基的鉸合部彼此分開。如本文使用的JNK抑制劑序列可由L-氨基酸、D-氨基酸或兩者的組合組成。優(yōu) 選地，如本文使用的JNK抑制劑序列包括至少1個(gè)或者甚至2個(gè)D-氨基酸和/或L-氨基 酸，優(yōu)選至少3、4或5個(gè)，更優(yōu)選至少6、7、8或9個(gè)，和甚至更優(yōu)選至少10個(gè)或更多個(gè)D-和 /或L-氨基酸，其中，在如本文使用的JNK抑制劑序列中，D-和/或L-氨基酸可以以模塊 (blockwise)、非模塊或交替的方式排列。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，如本文使用的JNK抑制劑序列可完全地由L-氨基酸組 成。如本文使用的JNK抑制劑序列然后可包括或由根據(jù)SEQ ID NO :1或3的至少一種“天 然的JNK抑制劑序列”組成。在該情況中，術(shù)語“天然的”或“天然的JNK抑制劑序列(一 個(gè)或多個(gè))”是指如本文使用的根據(jù)SEQ ID NO :1或3任一個(gè)的未改變的JNK抑制劑序列， 完全地由L-氨基酸組成。因此，如本文使用的JNK抑制劑序列可包括或者由以下組成至少一種(天然的) 氨基酸序列 NH2-Xnb-Xna-RPTTLXLXXXXXXXQD-Xnb-COOH(L-IB 通用的(s)) [SEQ ID NO :3]禾口 / 或 IB 1XRPTTLXLXXXXXXXQDS/TX (L-IB (通用的))[SEQ IDNO 19]的 JNK 結(jié)合結(jié)構(gòu)域(JBD)。 在該情況下，每一個(gè)X—般表示一個(gè)氨基酸殘基，優(yōu)選地選自任何的(天然)氨基酸殘基。 Xn3 一般表示一種氨基酸殘基，優(yōu)選地選自除了絲氨酸或蘇氨酸之外的任何氨基酸殘基，其 中η (X的重復(fù)數(shù)量)是0或1。此外，每一個(gè)Xnb可選自任何的氨基酸殘基，其中η (X的重復(fù) 數(shù)量)是0-5、5-10、10-15、15-20、20-30或更多，條件是如果Xna的η (X的重復(fù)數(shù)量)是0， 那么Xnb優(yōu)選地在其C-末端不包括絲氨酸或蘇氨酸，以避免絲氨酸或蘇氨酸在該位置。優(yōu) 選地，Xnb代表衍生自SEQ ID NO :1或3的肽殘基的連續(xù)的一段序列(contiguousstretch)。 Xna和xnb可以表示D或L氨基酸。另外，如本文使用的JNK抑制劑序列可以包括或由選自 以下的至少一種(天然)氨基酸序列組成IB1DTYRPKRPTTLNLFPQVPRSQDT(L-IBl) [SEQ ID NO 17]的JNK結(jié)合結(jié)構(gòu)域。更優(yōu)選地，如本文使用的JNK抑制劑序列進(jìn)一步可以包括或由 至少一種(天然)氨基酸序列 NH2-RPKRPTTLNLFPQVPRSQD-COOH(L-IB 1(S)) [SEQ ID NO: 1]組成。此外，如本文使用的JNK抑制劑序列可以包括或由選自以下的至少一種(天然) 氨基酸序列組成IBlL-IBl(sl) (NH2-TLNLFPQVPRSQD_C00H，SEQ ID NO 33) ；L-IB1 (s2) (NH2-TTLNLFPQVPRSQ-C00H, SEQ ID NO 34) ；L-IBl(s3) (NH2-PTTLNLFPQVPRS_C00H， SEQ ID NO 35) ；L-IBl(s4) (NH2-RPTTLNLFPQVPR-C00H, SEQ ID NO 36) ；L-IBl(s5) (NH2-KRPTTLNLFPQVP-C00H, SEQ ID NO 37) ；L-IBl(s6) (NH2-PKRPTTLNLFPQV_C00H， SEQ ID NO 38) ；L-IBl (s7) (NH2-RPKRPTTLNLFPQ-C00H，SEQ ID NO 39) ；L-IBl (s8) (NH2-LNLFPQVPRSQD-C00H, SEQ ID NO 40) ；L-IBl (s9) (NH2-TLNLFPQVPRSQ-COOH， SEQ ID NO 41) ；L-IBl(slO) (NH2-TTLNLFPQVPRS_C00H，SEQ ID NO 42) ；L-IBl(sll) (NH2-PTTLNLFPQVPR-C00H, SEQ ID NO 43) ；L-IBl (sl2) (NH2-RPTTLNLFPQVP_C00H， SEQ ID NO 44) ；L-IBl(sl3) (NH2-KRPTTLNLFPQV_C00H，SEQ ID NO 45) ；L-IBl(sl4) (NH2-PKRPTTLNLFPQ-C00H, SEQ ID NO 46) ；L-IBl (sl5) (NH2-RPKRPTTLNLFP_C00H， SEQ ID NO 47) ；L-IBl (sl6) (NH2-NLFPQVPRSQD_C00H，SEQ ID NO 48) ；L-IBl (sl7) (NH2-LNLFPQVPRSQ-C00H, SEQ ID NO 49) ；L-IBl (sl8) (NH2-TLNLFPQVPRS_C00H， SEQ ID NO 50) ；L-IBl (sl9) (NH2-TTLNLFPQVPR-C00H, SEQ ID NO 51) ；L-IBl (s20)(NH2-PTTLNLFPQVP-C00H, SEQ ID NO 52) ；L-IBl (s21) (NH2-RPTTLNLFPQV-C00H， SEQ ID NO 53) ；L-IBl (s22) (NH2-KRPTTLNLFPQ_COOH，SEQ ID NO 54) ；L-IBl (s23) (NH2-PKRPTTLNLFP-COOH, SEQ ID NO 55) ；L-IBl (s24) (NH2-RPKRPTTLNLF-COOH， SEQ ID NO 56) ；L-IBl (s25) (NH2-LFPQVPRSQD_COOH，SEQ ID NO 57) ；L-IBl (s26) (NH2-NLFPQVPRSQ-COOH, SEQ ID NO 58) ；L-IBl (s27) (NH2-LNLFPQVPRS-COOH， SEQ ID NO 59) ；L-IBl (s28) (NH2-TLNLFPQVPR-COOH, SEQ ID NO 60) ；L-IBl (s29) (NH2-TTLNLFPQVP-COOH, SEQ ID NO 61) ；L-IBl (s30) (NH2-PTTLNLFPQV-COOH， SEQ ID NO 62) ；L-IBl(s31) (NH2-RPTTLNLFPQ_COOH，SEQ ID NO 63) ；L-IBl(s32) (NH2-KRPTTLNLFP-COOH, SEQ ID NO 64) ；L-IBl (s33) (NH2-PKRPTTLNLF_COOH，SEQ ID NO 65)；禾口 L-IBl (s34) (NH2-RPKRPTTLNL_COOH，SEQ ID NO 66)的 JNK 結(jié)合結(jié)構(gòu)域。另外，如本文使用的JNK抑制劑序列可以包括或者由選自以下的至少一種(天 然)氨基酸序列組成IB1 PGTGC⑶TYRPKRPTTLNLFPQVPRSQDT(IB1-長(zhǎng))[SEQID NO 13]的 (長(zhǎng))JNK 結(jié)合結(jié)構(gòu)域(JBD)、IB2IPSPSVEEPHKHRPTTLRLTLGAQDS(IB2-長(zhǎng))[SEQ ID NO 14] 的(長(zhǎng))JNK結(jié)合結(jié)構(gòu)域、c-Jun GAYGYSNPKILKQSMTLNLADPVGNLKPH(c-Jun) [SEQ ID NO 15] 的 JNK結(jié)合結(jié)構(gòu)域、ATF2TNEDHLAVHKHKHEMTLKFGPARNDSVIV(ATF2) [SEQ ID NO 16]的 JNK結(jié) 合結(jié)構(gòu)域(參見，例如，

圖1A-1C)。在該內(nèi)容中，比對(duì)顯示部分保守的8個(gè)氨基酸序列(參 見，例如，圖1A)，而IBl和IB2的JBDs的進(jìn)一步比較顯示兩個(gè)序列之間高度保守的7個(gè)和 3個(gè)氨基酸的兩個(gè)區(qū)段。根據(jù)另一優(yōu)選實(shí)施方式，如本文使用的JNK抑制劑序列可部分地或全部地由D-氨 基酸組成，如上限定的。更優(yōu)選地，由D-氨基酸組成的這些JNK抑制劑序列是上述(天然 的)JNK抑制劑序列的非天然的D逆反(retro-inverso)序列。術(shù)語“逆反序列”是指線性 肽序列的異構(gòu)體，其中序列的方向是相反并且每一個(gè)氨基酸殘基的手性顛倒(參見，例如 Jameson 等人，Nature, 368，744-746 (1994) ；Brady 等人，Nature, 368，692-693 (1994))。結(jié) 合D-對(duì)映體和反向合成的優(yōu)點(diǎn)是在每一個(gè)酰胺鍵中羰基和氨基的位置被交換，同時(shí)在每 一個(gè)α碳處的側(cè)鏈基團(tuán)的位置被保留。除非另外具體說明，假定通過合成相應(yīng)的天然L-氨 基酸序列或肽的逆向的序列或肽，根據(jù)本發(fā)明使用的任何給定L-氨基酸序列或肽可以轉(zhuǎn) 化成為D逆反序列或肽。如本文使用的和如上所定義的D逆反序列具有許多有用的特性。例如，本文使用 的D逆反序列與本文使用的L-氨基酸序列一樣有效地進(jìn)入細(xì)胞，然而，本文使用的D-逆反 序列比相應(yīng)的L-氨基酸序列更穩(wěn)定。因此，如本文使用的JNK抑制劑序列可以包括或者由至少一種根據(jù)氨基酸序列 NH2-Xnb-DQXXXXXXXLXLTTPR-Xna-Xnb-C00H(D-IB1 通用的(s)) [SEQ ID NO 4]和 / 或 XS/ TDQXXXXXXXLXLTTPRX(D-IB(通用))[SEQ ID NO :20]的D逆反序列組成。如在該內(nèi)容中 使用的，X、乂/和乂^是如上所定義的(優(yōu)選地，表示D氨基酸)，其中，Xn1Mt選地表示衍生 自SEQ ID NO :2或4的連續(xù)一段的殘基。另外，如本文使用的JNK抑制劑序列可以包括 或由根據(jù)包括 IB1TDQSRPVQPFLNLTTPRKPRYTD (D-IBl) [SEQ ID NO 18]的 JNK 結(jié)合結(jié)構(gòu)域 (JBD)的氨基酸序列的至少一種D逆反序列組成。更優(yōu)選地，如本文使用的JNK抑制劑序 列可以包括或由根據(jù)氨基酸序列 NH2-DQSRPVQPFLNLTTPRKra-C00H(D-IBl(S)) [SEQ ID NO 2]的至少一種D逆反序列組成。此外，如本文使用的JNK抑制劑序列可以包括或者由根據(jù)如此氨基酸序列的至少一種D逆反序列組成，所述氨基酸序列包括以下序列的JNK結(jié) 合結(jié)構(gòu)域(JBDs) JBlD-IBl (si) (NH2-QPFLNLTTPRKPR-C00H, SEQ ID NO 67) ；D-IB1 (s2) (NH2-VQPFLNLTTPRKP-C00H, SEQ ID NO 68) ；D-IBl(s3) (NH2-PVQPFLNLTTPRK-C00H， SEQ ID NO 69) ；D-IBl (s4) (NH2-RPVQPFLNLTTPR-C00H, SEQ ID NO 70) ；D-IBl(s5) (nh2-srpvqpflnlttp-c00h, seq id no 71) ；d-ibl(s6) (nh2-qsrpvqpflnltt-cooh， SEQ ID NO 72) ；D-IBl (s7) (NH2-DQSRPVQPFLNLT_C00H，SEQ ID NO 73) ；D-IBl (s8) (NH2-PFLNLTTPRKPR-C00H, SEQ ID NO 74) ；D-IBl (s9) (NH2-QPFLNLTTPRKP-C00H， SEQ ID NO 75) ；D-IBl(slO) (NH2-VQPFLNLTTPRK_C00H，SEQ ID NO 76) ；D-IBl(sll) (NH2-PVQPFLNLTTPR-C00H, SEQ ID NO 77) ；D-IBl (sl2) (NH2-RPVQPFLNLTTP-C00H， SEQ ID NO 78) ；D-IBl(sl3) (NH2-SRPVQPFLNLTT_C00H，SEQ ID NO 79) ；D-IBl(sl4) (NH2-QSRPVQPFLNLT-C00H, SEQ ID NO 80) ；D-IBl (s15) (NH2-DQSRPVQPFLNL-COOH， SEQ ID NO 81) ；D-IBl (sl6) (NH2-FLNLTTPRKPR_C00H，SEQ ID NO 82) ；D-IBl (sl7) (NH2-PFLNLTTPRKP-C00H, SEQ ID NO 83) ；D-IBl (sl8) (NH2-QPFLNLTTPRK-C00H， SEQ ID NO 84) ；D-IBl (sl9) (NH2-VQPFLNLTTPR-C00H, SEQ ID NO 85) ；D-IBl (s20) (NH2-PVQPFLNLTTP-C00H, SEQ ID NO 86) ；D-IBl (s21) (NH2-RPVQPFLNLTT-C00H， SEQ ID NO 87) ；D-IBl (s22) (NH2-SRPVQPFLNLT_C00H，SEQ ID NO 88) ；D-IBl (s23) (NH2-QSRPVQPFLNL-C00H, SEQ ID NO 89) ；D-IBl (s24) (NH2-DQSRPVQPFLN-C00H， SEQ ID NO 90) ；D-IBl (s25) (NH2-DQSRPVQPFL_C00H，SEQ ID NO 91) ；D-IBl (s26) (NH2-QSRPVQPFLN-C00H, SEQ ID NO 92) ；D-IBl (s27) (NH2-SRPVQPFLNL-C00H， SEQ ID NO 93) ；D-IBl (s28) (NH2-RPVQPFLNLT_C00H，SEQ ID NO 94) ；D-IBl (s29) (NH2-PVQPFLNLTT-C00H, SEQ ID NO 95) ；D-IBl (s30) (NH2-VQPFLNLTTP-C00H， SEQ ID NO 96) ；D-IBl (s31) (NH2-QPFLNLTTPR_C00H，SEQ ID NO 97) ；D-IBl (s32) (NH2-PFLNLTTPRK-C00H, SEQ ID NO 98) ；D-IBl (s33) (NH2-FLNLTTPRKP_C00H，SEQ ID NO 99)；禾口 D-IBl (s34) (NH2-LNLTTPRKPR_C00H，SEQ ID NO 100)。如本文使用的和如以上公開的JNK抑制劑序列在表1中提供(SEQ ID NO :1_4、 13-20和33-100)。該表提供如本文使用的JNK抑制劑序列的名稱、以及它們的序列標(biāo)識(shí)號(hào)、 它們的長(zhǎng)度以及氨基酸序列。此外，表1分別顯示序列以及它們的通式，例如SEQ ID NO=U 2、5、6、9和11以及SEQ ID NO :3、4、7、8、10和12。表1進(jìn)一步地公開嵌合序列SEQ ID N0: 9-12 和 23-32 (參見以下)、L-IBl 序列 SEQ ID NO 33 至 66 以及 D-IBl 序列 SEQ ID NOs 67 至 100。表 權(quán)利要求
1.包括長(zhǎng)度小于150個(gè)氨基酸的JNK抑制劑序列在制備用于治療對(duì)象中慢性或非慢性 炎性消化病的藥物組合物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的JNK抑制劑序列的應(yīng)用，其中所述JNK抑制劑序列包括范圍 為5至150個(gè)的氨基酸殘基，更優(yōu)選為10至100個(gè)氨基酸殘基，甚至更優(yōu)選為10個(gè)至75 個(gè)氨基酸殘基，和最優(yōu)選范圍為10至50個(gè)的氨基酸殘基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的JNK抑制劑序列的應(yīng)用，其中所述JNK抑制劑序 列結(jié)合c-jim氨基末端激酶(JNK)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的JNK抑制劑序列的應(yīng)用，其中當(dāng)所述JNK抑制劑 序列存在于JNK表達(dá)細(xì)胞時(shí)，所述JNK抑制劑序列抑制至少一種JNK靶向轉(zhuǎn)錄因子的活化。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)所述的JNK抑制劑序列的應(yīng)用，其中所述JNK靶向轉(zhuǎn)錄 因子選自c-Jun、ATF2和Elkl。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的JNK抑制劑序列的應(yīng)用，其中當(dāng)所述肽存在于JNK 表達(dá)細(xì)胞時(shí)，所述JNK抑制劑序列改變JNK作用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的JNK抑制劑序列的應(yīng)用，其中所述JNK抑制劑序 列由L-氨基酸、D-氨基酸或者兩者的組合組成，優(yōu)選包括至少1個(gè)或者甚至2個(gè)，優(yōu)選至 少3、4或5個(gè)，更優(yōu)選至少6、7、8或9個(gè)和甚至更優(yōu)選至少10個(gè)或更多個(gè)D-和/或L-氨 基酸，其中在所述JNK抑制劑序列中所述D-和/或L-氨基酸可以以模塊化、非模塊化或交 替的方式排列。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述JNK抑制劑序列包括由根據(jù)SEQ ID NO :102, SEQ ID NO :103、SEQ ID NO :104 或 SEQ ID NO :105 的任一序列定義或編碼的 人或大鼠IBl序列的片段、變體或者這類片段的變體。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的JNK抑制劑序列的應(yīng)用，其中所述抑制劑序列包 括或由以下組成根據(jù)SEQ ID NO :1至4、13至20和33至100的至少一種氨基酸序列，或 其片段、衍生物或者變體。
10.包括通過共價(jià)鍵連接的至少一個(gè)第一結(jié)構(gòu)域和至少一個(gè)第二結(jié)構(gòu)域的嵌合肽在制 備用于治療對(duì)象中慢性或非慢性炎性消化病的藥物組合物中的應(yīng)用，所述第一結(jié)構(gòu)域包括 運(yùn)輸序列，和所述第二結(jié)構(gòu)域包括在權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)中定義的JNK抑制劑序列。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的嵌合肽的應(yīng)用，其中所述嵌合肽由L-氨基酸、D-氨基酸 或者兩者的組合組成，優(yōu)選包括至少1個(gè)或者甚至2個(gè)，優(yōu)選至少3、4或5個(gè)，更優(yōu)選至少 6、7、8或9個(gè)和甚至更優(yōu)選至少10個(gè)或更多個(gè)D-和/或L-氨基酸，其中所述D-和/或 L-氨基酸在所述嵌合肽中可以以模塊化、非模塊化或交替的方式排列。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的嵌合肽的應(yīng)用，其中所述運(yùn)輸序列包括人免疫缺陷病 毒TAT多肽的氨基酸序列。
13.根據(jù)權(quán)利要求10至12任一項(xiàng)所述的嵌合肽的應(yīng)用，其中所述運(yùn)輸序列包括或由 SEQ ID NO :5、6、7、8、21或22的氨基酸序列組成。
14.根據(jù)權(quán)利要求10至13任一項(xiàng)所述的嵌合肽的應(yīng)用，其中所述運(yùn)輸序列增加所述肽 的細(xì)胞攝取。
15.根據(jù)權(quán)利要求10至14任一項(xiàng)所述的嵌合肽的應(yīng)用，其中所述運(yùn)輸序列指引所述肽 的核定位。
16.根據(jù)權(quán)利要求10至15任一項(xiàng)所述的嵌合肽的應(yīng)用，其中所述嵌合肽包括或由以下 組成SEQ ID NO 9至12和23至32任一的氨基酸序列，或其片段或變體。
17.根據(jù)權(quán)利要求10至15任一項(xiàng)所述的嵌合肽的應(yīng)用，其中所述嵌合肽包括或由以下 組成SEQ ID NO :9或11的氨基酸序列。
18.編碼權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)中定義的JNK抑制劑序列或者權(quán)利要求10至17任一 項(xiàng)中定義的嵌合肽的分離的核酸在制備用于治療對(duì)象中慢性或非慢性炎性消化病的藥物 組合物中的應(yīng)用。
19.包括權(quán)利要求18中定義的所述核酸的載體在制備用于治療對(duì)象中慢性或非慢性 炎性消化病的藥物組合物中的應(yīng)用。
20.包括權(quán)利要求19中定義的所述載體的細(xì)胞在制備用于治療對(duì)象中慢性或非慢性 炎性消化病的藥物組合物中的應(yīng)用。
21.與根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)所述的JNK抑制劑序列或者根據(jù)權(quán)利要求10至17 任一項(xiàng)所述的嵌合肽免疫特異性地結(jié)合的抗體在制備用于治療對(duì)象中慢性或非慢性炎性 消化病的藥物組合物中的應(yīng)用。
22.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述藥物組合物通過選自以下給藥途徑施 用腸胃外途徑，包括靜脈內(nèi)的、肌肉內(nèi)的、皮下的、皮內(nèi)的或者經(jīng)皮的；腸途徑，包括口服 的或者直腸的；局部途徑，包括鼻的或者鼻內(nèi)的；和其它途徑，包括表皮的或者貼劑遞送。
23.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述非慢性或者慢性炎性疾病選自胃腸 道疾病，所述胃腸道疾病包括食道、胃、十二指腸的第一、二和三部分、空腸、回腸、回盲腸 的復(fù)合體、大腸、升結(jié)腸、橫結(jié)腸和降結(jié)腸乙狀結(jié)腸和直腸的疾??；以結(jié)腸的炎癥為特征的 慢性炎性消化病，包括結(jié)腸炎，其選自潰瘍性結(jié)腸炎(潰瘍性結(jié)腸炎)、克羅氏癥(克羅恩 病)、改道性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、傳染性結(jié)腸炎、暴發(fā)性結(jié)腸炎、化學(xué)性結(jié)腸炎、顯微鏡性 結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎、膠原性結(jié)腸炎、未定型結(jié)腸炎和非典型結(jié)腸炎。
24.據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述JNK抑制劑序列和/或嵌合肽的劑量(每 千克體重)在以下的范圍多至lOmmol/kg、優(yōu)選多至lmmol/kg、更優(yōu)選多至lOOymol/kg、 甚至更優(yōu)選多至10 μ mol/kg、甚至更優(yōu)選多至1 μ mol/kg、甚至更優(yōu)選多至lOOnmol/kg、最 優(yōu)選多至50nmol/kg。
25.據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的應(yīng)用，其中所述JNK抑制劑序列和/或嵌合肽的劑量在以 下的范圍約 lpmol/kg 至約 lmmol/kg、約 IOpmol/kg 至約 0. lmmol/kg、約 10pmol/kg 至約 0. 01mmol/kg、約 50pmol/kg 至約 1 μ mol/kg、約 100pmol/kg 至約 500nmol/kg、約 200pmol/ kg 至約 300nmol/kg、約 300pmol/kg 至約 IOOnmol/kg、約 500pmol/kg 至約 50nmol/kg、約 750pmol/kg 至約 30nmol/kg、約 250pmol/kg 至約 5nmol/kg、約 lnmol/kg 至約 1 Onmol/kg> 或者所述值的任兩個(gè)的組合。
全文摘要
本發(fā)明涉及蛋白激酶抑制劑用于治療非慢性或慢性炎性消化病的應(yīng)用，更具體地涉及蛋白激酶c-Jun氨基末端激酶、JNK抑制劑序列、嵌合肽或者編碼它們的核酸以及包含它們的藥物組合物用于治療非慢性或慢性炎性消化病的應(yīng)用，所述疾病諸如結(jié)腸炎，包括例如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、改道性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、傳染性結(jié)腸炎、暴發(fā)性結(jié)腸炎、化學(xué)性結(jié)腸炎、顯微鏡性結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞性結(jié)腸炎和非典型結(jié)腸炎等。
文檔編號(hào)A61K38/04GK102112148SQ200980130065
公開日2011年6月29日 申請(qǐng)日期2009年6月2日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月30日
發(fā)明者C·邦尼 申請(qǐng)人:希根有限責(zé)任公司