專(zhuān)利名稱：：水溶性磷酸單酯衍生物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物學(xué)領(lǐng)域，更具體而言，涉及一類(lèi)具有良好水溶性的磷酸單酯衍生物及其在制備治療腫瘤或與TNFa、CAMP水平相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：癌癥的發(fā)病率正在不斷地上升，已成為嚴(yán)重威脅人類(lèi)生命的常見(jiàn)病，其死亡率在所有疾病中居第2位。隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到細(xì)胞內(nèi)促增殖系統(tǒng)成分的過(guò)度表達(dá)與抑增殖系統(tǒng)成分的缺失是導(dǎo)致細(xì)胞癌變的主要原因，同時(shí)對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡及血管生成等過(guò)程和機(jī)理也在被逐步闡明。由于信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)鍵組分在正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間一般存在較大的差異，這一差異為抗腫瘤藥物研發(fā)的焦點(diǎn)從選擇性低、副作用大、作用于DNA、RNA和微管蛋白等傳統(tǒng)細(xì)胞毒類(lèi)藥物轉(zhuǎn)移到針對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的新型抗腫瘤藥物提供了可靠的理論依據(jù)，靶向這些組分的抗腫瘤藥物比傳統(tǒng)抗腫瘤藥物具有選擇性強(qiáng)、療效好、毒性小等優(yōu)點(diǎn)。導(dǎo)致細(xì)胞癌變的原因是非常復(fù)雜的，到目前為止，人們尚未能完全清楚地闡明其發(fā)病的機(jī)理和機(jī)制，但是許多被證實(shí)與腫瘤細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)的關(guān)鍵酶的發(fā)現(xiàn)，為選擇性作用于特定靶點(diǎn)的新型抗癌藥物的研究開(kāi)發(fā)指明了方向。例如，百時(shí)美施貴寶公司開(kāi)發(fā)的Brivanib是一種口服血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(vascularendothelialgrowthfactorrec印tor，VEGFR)酪氨酸激酶和纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(fibroblast-growthfactorrec印tor，F(xiàn)GFR)通路雙重抑制劑，主要用于防治實(shí)體瘤、結(jié)腸直腸癌和肝癌等疾病(JournalofMedicinalChemistry,2006，49(7):2143-2146;中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?3816201.6);Enzastaurin是由美國(guó)禮來(lái)公司開(kāi)發(fā)的一種雙噴哚馬來(lái)酰亞胺類(lèi)抗癌藥，能選擇性地抑制蛋白激酶C-P(proteinkinaseC_P，PKC-P)(W09517182,1995-06-29)，主要用于防治的神經(jīng)膠質(zhì)瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小細(xì)胞(型)肺癌、前列腺癌、實(shí)體瘤、結(jié)腸直腸癌、乳腺癌和卵巢癌等疾病。天然藥物對(duì)腫瘤防治具有獨(dú)特的效果，可以增強(qiáng)很多耐藥腫瘤細(xì)胞對(duì)常規(guī)化療藥物的敏感性，如染料木黃酮(genistein)類(lèi)似物Triphendiol(W02005/049008,2005-06-02)和Phenoxodiol(中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?7198690.8)，對(duì)肺癌、實(shí)體瘤、子宮癌、前列腺癌、卵巢癌、基底細(xì)胞癌、非白血性白血病、鱗狀細(xì)胞癌、腎癌等疾病有較好的療效(ExpertOpin.Investig.Drugs,2009，18(4):469-479)。此外，"老藥新用"也是目前尋找新藥的另一途徑，如從市場(chǎng)退出的具有嚴(yán)重致畸性的沙利度胺(Thalidomide),目前研究表明其擁有降低TNFa水平和/或提高CAMP水平構(gòu)成治療很多炎癥炎癥、感染性、免疫學(xué)和惡性疾病的用途。來(lái)那度胺(Lenalidomide)和Pomalidomide是沙利度胺的衍生物，降低了沙利度胺的嚴(yán)重不良反應(yīng)，同時(shí)在治療某些難治性疾病方面具有更好的療效，如多發(fā)性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合癥、肺癌、胰腺癌、實(shí)體瘤、腎癌、胃腸癌、結(jié)腸直腸癌、免疫調(diào)節(jié)劑、軟組織肉瘤、移巻曲(核)淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、鐮狀細(xì)胞性貧血、非霍奇金淋巴瘤、骨髓纖維化癥、植物抗宿主病等疾病(Bioorganic3&MedicinalChemistryLetters,1999，9:1625-1630;Bioorganic&MedicinalChemistryLetters，2007，17:5819-5824;中國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?7180299.8)。但是以上這些藥物的水溶性非常差，如Brivanib在pH=6.5的水溶液中不溶，其溶解度小于1Pg/mL，沙利度胺在水中幾乎不溶，其溶解度約為12iig/mL。為了增加藥物的水溶性，可以在藥物的結(jié)構(gòu)中引入親水性基團(tuán)，如來(lái)那度胺和Pomalidomide等在其結(jié)構(gòu)中引入了親水性的氨基，但是它們的水溶性增加不明顯，如來(lái)那度胺的溶解度即使在酸性的水溶液中也只有微溶，其溶解度僅為0.4mg/ml左右，而人體的pH值為7.4左右，呈弱堿性，其溶解度會(huì)更小。由于水溶性較小的藥物，口服給藥后由于藥物的溶解度小導(dǎo)致其溶解速度慢，不利于藥物的吸收，會(huì)導(dǎo)致藥物吸收緩慢、生物利用度較低或達(dá)峰時(shí)間較長(zhǎng)等缺點(diǎn)，嚴(yán)重限制了其臨床應(yīng)用的前景。因此，本領(lǐng)域迫切需要開(kāi)發(fā)抗腫瘤或與TNFa、CAMP水平相關(guān)疾病活性好和水溶性大的藥用化合物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一類(lèi)抗腫瘤或與TNFa、CAMP水平相關(guān)疾病活性好具有良好水溶性的藥用化合物。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，將水溶性差的母體藥物Brivanib、Triphendiol、phenoxodiol、沙利度胺、來(lái)那度胺、Pomalidomide和Enzastaurin制備為磷酸或甲基磷酸前體藥物，其具有良好的水溶性和穩(wěn)定性，在血漿中能被磷酸酯酶迅速水解釋放出母體藥物，因此可以提高藥物的生物利用度，增加療效和減少胃腸道等毒副作用，特別是適合于不宜口服的病人。本發(fā)明提供通式I的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中R選自具有以下結(jié)構(gòu)的基團(tuán)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>或其所有可能的可藥用鹽、晶型、或水合物，其中優(yōu)選的可藥用鹽為鈉、鉀、或鈣鹽，最優(yōu)選的可藥用鹽為鈉鹽。與上述基團(tuán)a—i相X寸應(yīng)的藥物是a禾口c是Brivanib(由Bristol—MyersSquibb公司研發(fā));b和d是Triphendiol和e是Phenoxodiol(由MarshallEdwards公司研發(fā));f、g和h分別是由Celgene公司研發(fā)的沙利度胺、來(lái)那度胺和Pomalidomide;i是由EliLilly公司石開(kāi)發(fā)的Enzastaurin。本發(fā)明還提供通式II的化合物,0、，OH》\0HII其中^選自具有以下結(jié)構(gòu)的基團(tuán)或其所有可能的可藥用鹽、異構(gòu)體、晶型、水合物或溶劑化物。本發(fā)明還提供通式in的化合物R2vO\,O-R，々P\O、0-R2III其中化選自具有以下結(jié)構(gòu)的基團(tuán)或其所有可能的可藥用鹽、異構(gòu)體、晶型、水合物或溶劑化物本發(fā)明還提供通式IV的化合物0、《0《HOO0,,\0HIV其中R,選自具有以下結(jié)構(gòu)的基團(tuán)5或其所有可能的可藥用鹽、異構(gòu)體、晶型、水合物或溶劑化物。優(yōu)選的通式I化合物選自(1)(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_噴哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[1，2_f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-基磷酸；(2)(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-噴哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][l，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二鈉鹽；(3)(3-(l，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉(4)(3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉鹽；及其所有可能的異構(gòu)體、可藥用鹽、晶型、水合物或溶劑化物。本發(fā)明還提供通式I所示化合物合適的可藥用的鹽、水合物或溶劑化物，其中可藥用的鹽包括但并不限于通式I化合物與堿金屬或堿土金屬或質(zhì)子化胺或質(zhì)子化氨基酸等形成金屬或胺鹽，如鋰、鈉、鉀、鎂、鈣、鋇、鋅和鋁鹽。優(yōu)選的鹽為鈉、鉀和鈣鹽。本發(fā)明化合物可與無(wú)機(jī)酸如鹽酸、硫酸、磷酸、亞磷酸、氫溴酸和硝酸所成的鹽以及與各種有機(jī)酸，如馬來(lái)酸、蘋(píng)果酸、延胡索酸、琥珀酸、酒石酸、檸檬酸、乙酸、乳酸、甲磺酸、對(duì)甲苯磺酸、棕櫚酸等所成的鹽。本發(fā)明中的一些化合物可能用水或各種有機(jī)溶劑結(jié)晶或重結(jié)晶，在這種情況下，可能形成各種溶劑化物。本發(fā)明包括那些化學(xué)計(jì)量的溶劑化物，包括水合物，也包括在用低壓升華干燥法制備時(shí)形成的包含可變量水的化合物。本發(fā)明還涉及通式I化合物的各種異構(gòu)體。本發(fā)明化合物的異構(gòu)體包括互變異構(gòu)體、順?lè)串悩?gòu)體、構(gòu)象異構(gòu)體、內(nèi)消旋化合物和具有對(duì)映或非對(duì)映關(guān)系的光學(xué)異構(gòu)體。本發(fā)明中化合物可能以順?lè)串悩?gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體或互變異構(gòu)體的形式存在，本發(fā)明包括其所有存在形式，特別是純異構(gòu)體的形式。不同的異構(gòu)體形式可以以各種常規(guī)的手段與其它形式的異構(gòu)體分離或拆分開(kāi)，或者某種異構(gòu)體可以各種常規(guī)的合成方法或立體專(zhuān)一或不對(duì)稱合成的方法得到。既然通式I化合物是以藥用為目的，可以理解它們最好以純的形式提供，例如至少60%的純度，更合適的75%，更好的85%，最好至少98%的純度(％是指重量百分比)。不純化合物的制備方法可用來(lái)用于藥用組合物中更純的形式。這些不夠純的產(chǎn)物中至少含有1%，更適合的5%，更好的至少10%的如通式I所示的化合物或其可藥用的衍生物。本發(fā)明還提供制備通式I化合物或其可藥用的鹽、水合物或溶劑化物的制備方法，下面針對(duì)通式I亞結(jié)構(gòu)(通式II和通式III)分別加以描述，其中R、&、和!^具有如上所述的定義。1.通式II化合物的制備方法如下在磷酸三甲酯的溶液中，加入&OH。氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰浴下加入三氯氧化磷，室溫下攪拌反應(yīng)4小時(shí)。反應(yīng)完畢后，加入冰水，有固體析出，過(guò)濾得到通式II磷酸化合物。此磷6酸化合物與酸或堿反應(yīng)可以制備通式II可藥用鹽。1)poci3,h20r,0\,0hR，-/\OHRl2)酸或堿n2.通式III化合物的制備方法如下在無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺溶液中，加入R2H和氫化鈉，攪拌30min，依次加入四丁基溴化銨、碘化鉀和磷酸二芐基氯代甲基酯，攪拌反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入水、二氯甲烷萃取得到中間體3。在中間體3的甲醇溶液中，加入10%的鈀/炭。通入氫氣(latm)，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。過(guò)濾除去鈀/炭，減壓蒸干得通式III磷酸化合物。此磷酸化合物與酸或堿反應(yīng)可以制備通式III可藥用鹽。R0OHH+C、0\"NaH磨Ro、"DP,oP\oHR;+。~"^c/\0Bn2)酸或堿23HI通式II和通式III化合物的制備方法可以參考文獻(xiàn)JournalofMedicinalChemistry，2000，43(3):440-448、JournalofMedicinalChemistry,2004，47(1):188-195禾卩Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,2003，13:3669—3672，其中中間體2的制備方法可以參考文獻(xiàn)Tetrahedron,1971，27:3163-3170。通式II和通式111化合物的堿性鹽或酸性鹽可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的常規(guī)技術(shù)制備。關(guān)于制備通式I化合物更詳盡的資料見(jiàn)實(shí)施例。本發(fā)明還提供一種藥用組合物，包含通式I化合物，或其異構(gòu)體、可藥用鹽、水合物或溶劑化物和可藥用輔助劑、稀釋劑或載體。本發(fā)明化合物的藥物組合物，可以以下方面的任意方式施與口服、噴霧吸入、直腸給藥、鼻腔給藥、陰道給藥、局部給藥、非腸道給藥如皮下、靜脈、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、胸骨內(nèi)或顱內(nèi)注射或輸入，或借助一種外植的儲(chǔ)器用藥，其中優(yōu)選靜脈或肌內(nèi)非腸道給藥和口服。本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥。給藥劑型可以是固體劑型、液體劑型。液體劑型可以是真溶液類(lèi)、膠體類(lèi)、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如凍干粉針劑、水針、片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、包合物、埋植劑、貼劑、擦劑等，其中優(yōu)選凍干粉針劑或水針等針劑、片劑和膠囊。另外需要指出，本發(fā)明化合物針對(duì)不同患者的特定使用劑量和使用方法決定于諸多因素，包括患者的年齡，體重，性別，自然健康狀況，營(yíng)養(yǎng)狀況，化合物的活性強(qiáng)度，服用時(shí)間，代謝速率，病癥的嚴(yán)重程度以及診治醫(yī)生的主管判斷。這里優(yōu)選使用劑量介于0.01-100mg/Kg體重/天。必須認(rèn)識(shí)到，通式I化合物的最佳給藥劑量和間隔是由化合物性質(zhì)和諸如給藥的形式、路徑和部位等外部條件決定的，而這一最佳給藥劑量可用常規(guī)的技術(shù)確定。同時(shí)也必7須認(rèn)識(shí)到，最佳的療程，即通式I化合物在額定的時(shí)間內(nèi)每日的劑量，可用本領(lǐng)域內(nèi)公知的方法確定。本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述化合物，或其異構(gòu)體、可藥用鹽、晶型、水合物或溶劑化物在用于制備治療和/或預(yù)防腫瘤和/或降低腫瘤壞死因子a(TNFa)水平和/或提高3'，5'-環(huán)-磷酸腺苷(CAMP)水平相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。所述腫瘤包括但不局限于肝癌、肺癌、腎癌、胃腸癌、實(shí)體瘤、乳腺癌、子宮癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、結(jié)腸直腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、小細(xì)胞肺癌、基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、軟組織肉瘤、多發(fā)性骨髓瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤、非白血性白血病、鐮狀細(xì)胞性貧血、骨髓增生異常綜合癥、移巻曲(核)淋巴細(xì)胞性淋巴瘤等；所述的降低TNFa水平和/或提高CAMP水平相關(guān)疾病包括但不局限于濃毒性休克、濃毒癥、內(nèi)毒素性休克，血液動(dòng)力學(xué)休克和濃毒綜合癥、梗塞后再灌注損傷、瘧疾、分支桿菌感染、腦脊膜炎、牛皮癬、充血性心力衰竭、纖維化疾病、惡病質(zhì)、移植物排斥、癌原性或癌性病癥、哮喘、自身免疫性疾病、AISD的機(jī)會(huì)行感染、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、全身紅斑狼瘡、麻風(fēng)中的ENL、放射損傷、癌原性病癥和高氧性肺泡損傷、植物抗宿主病和骨髓纖維化癥等疾病。本發(fā)明具有以下有益效果本發(fā)明所提供化合物的活性和母體藥物相當(dāng)或更強(qiáng)，特別是水溶性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于母體藥物，可以通過(guò)注射給藥來(lái)避免藥物口服給藥后被胃酸或各種胃腸道酶所破壞、吸收進(jìn)入肝門(mén)靜脈又往往會(huì)受〃肝腸循環(huán)〃、〃首過(guò)效應(yīng)〃的影響，療效低起效慢等缺點(diǎn)，且適合不宜口服的病人。具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。化合物的熔點(diǎn)由RY-1熔點(diǎn)儀測(cè)定，溫度計(jì)未較正。1H-NMR由JNM-ECA-400超導(dǎo)NMR儀測(cè)定，工作頻率"H-NMR400MHz。質(zhì)譜由MicromassZabSpec質(zhì)譜儀測(cè)定。色譜條件(儀器Agilent1100系列高效液相色譜儀(VWD檢測(cè)器)；色譜柱SupelcosilLC-18柱(4.6X250mm，5iim);流動(dòng)相甲醇，10mM磷酸氫二鉀溶液(磷酸調(diào)pH6.8);進(jìn)樣量10iU;流速lml/min)。Carlo-Erba1122型微量元素分析儀。實(shí)施例1(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_吲哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-基磷酸(化合物1)的制備將(R)-l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-噴哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-醇(741mg，2mmol，其制備方法參考文獻(xiàn)JournalofMedicinalChemistry，2006，49(7):2143-2146)加入到40ml的磷酸三甲酯溶液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，冰浴下緩慢加入三氯氧化磷(0.31ml，3.Ommol))，加完后升溫至室溫，攪拌反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢后，加入冰水40ml，攪拌，有固體析出，過(guò)濾，濾餅用水(20mlX2)洗滌，將濾餅溶于20ml溶有碳酸鈉(212mg)的水溶液中，分別用乙酸乙酯(15ml)和乙醚(15ml)萃取，水層用鹽酸酸化pH二l，有固體析出，過(guò)濾，濾餅用水(10mlX2)洗滌，真空干燥過(guò)夜，得到粉末狀固體154mg，收率17.1X，HPLC含量為99.4%。Elementalanalysis:(C19H2。FN406P):Calcd:C，50.67;H，4.48;N，12.44;Found:C，50.49;H，4.56;N，12.52。'HNMlUCDsOD)，S(ppm):1.40(d，J=6.6Hz，3H)，2.41(s，3H)，2.45(s，3H)，4.03-4.28(m，2H)，4.96(m，81H)，6.35(m，1H)，6.96(d，J=7.1Hz，1H)，7.14(d，J=7.lHz，1H)，7.61(s，1H)，7.82(s，1H)。ESI-MS:451.1(M+1)。實(shí)施例2(1)-(1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_吲哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[1，2-f][l，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二鈉鹽(化合物2)的制備步驟l.(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-噴哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二芐酯的制備冰浴氮?dú)獗Ｗo(hù)下，向(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_吲哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[l，2-f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-醇(741mg，2翻l)的無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺(15ml)溶液中加入氫化鈉(48mg，2mmol)，攪拌30分鐘，依次加入四丁基溴化銨(100mg，0.3mmol)、碘化鉀(50mg，0.3mmo1)，緩慢滴加磷酸二節(jié)基氯代甲基酯(978mg，3mmo1)的無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液，攪拌反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)完畢，加入水40ml稀釋、二氯甲烷60ml萃取，用水(30ml)洗滌3次，用無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑。將殘余物用硅膠快速色譜柱純化(環(huán)己烷/乙酸乙酯=16:1，和環(huán)己烷/乙酸乙酯=8:l)，得到455mg粉末狀固體，收率34.5%，熔點(diǎn)59-62°C。'HNMR(DMS0)，S(ppm):1.43(d，J=6.6Hz，3H)，2.34(s，3H)，2.38(s，3H)，4.03-4.28(m，2H)，4.90-5.43(m，7H)，6.35(m，1H)，6.96(d，J=7.1Hz，1H)，7.14-7.40(m，llH)，7.61(s，lH)，7.82(s，lH)。ESI—MS:661.2(M+l)。步驟2.(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-噴哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二鈉鹽的制備向(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-噴哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][l，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二節(jié)酯(661mg，lmmo1)的甲醇(30ml)中，加入10%的鈀/炭(100mg)，通入氫氣(latm)，攪拌反應(yīng)3小時(shí)。通過(guò)硅藻土過(guò)濾除去鈀炭，將濾液用碳酸鈉(101mg，0.95mmo1)的水(10.Oml)溶液，減壓蒸除甲醇，殘余的水溶液用乙醚(5X2ml)萃取，將水溶液凍干的白色固體，真空干燥過(guò)夜，再用乙醚(3X4ml)洗滌，真空干燥，得到白色粉末固體472mg，收率90X，HPLC含量為99.3%。Elementalanalysis:(C20H20FN4Na207P):Calcd:C，45.81;H，3.84;N，10.69;Found:C，45.57;H，4.05;N，10.42。ESI-MS:480.1(M-2Na+l)。實(shí)施例3(3-(l，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉鹽(化合物3)的制備步驟l.(3-(l，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二芐酯的制備采用與實(shí)施例2步驟1類(lèi)似的方法制備，將3-(1，3_二氧代異二氫吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮(2.58g，10.Ommol，該化合物的制備方法參考文獻(xiàn)Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,1999，9:1625-1630)、氫化鈉(240mg，lOmmol)、四丁基溴化銨(500mg，1.5,1)、碘化鉀(250mg，1.5,1)，滴加磷酸二節(jié)基氯代甲基酯(4.89g，15mmo1)反應(yīng)，得到2.26g粉末狀固體，收率41.2%，熔點(diǎn)50-52°C。^NMR(DMS0)，S(ppm):2.11-2.19(m，1H)，2.52—2.69(m，1H)，2.82—2.91(m，1H)，3.02—3.21(m，1H)，4.95—5.48(m，7H)，7.33(m，10H)，7.85-7.99(m，4H)。ESI-MS:549.1(M+l)。步驟2(3-(l，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉鹽的制備9采用與實(shí)施例2步驟2類(lèi)似的方法制備，向(3-(l，3-二氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二芐酯(2.20g，4mmo1)的甲醇(120ml)中，加入10%的鈀/炭(400mg)，通入氫氣(latm)脫除保護(hù)基節(jié)基，再與碳酸鈉(403mg，3.8mmo1)的水(40ml)溶液反應(yīng)，得到白色粉末固體1.36g，收率91.9%，HPLC含量為99.6%。Elementalanalysis:(C14HuN2Na208P):Calcd:C，40.79;H，2.69;N，6.80;Fo皿d:C，40.57;H，2.53;N，6.93。ESI-MS:368.0(M_2Na+l)。實(shí)施例4(3_(4-氨基-1-氧代異二氫吲哚_2-基)_2，6_二氧代哌啶_1_基)甲基磷酸二鈉鹽(化合物4)的制備步驟l.(3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二芐酯的制備采用與實(shí)施例2步驟1類(lèi)似的方法制備，將3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮(2.07g，8.Ommol，該化合物的制備方法參考文獻(xiàn)Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,1999，9:1625-1630)、氫化鈉(192mg，8,1)、四丁基溴化銨(400mg，l.2mmol)、碘化鉀(200mg，1.2mmo1)，滴加磷酸二節(jié)基氯代甲基酯(3.91g，12,1)反應(yīng)，得到1.96g粉末狀固體，收率44.5%。丄匪R(DMS0)，S(卯m):2.00-2.14(m，1H)，2.22-2.49(m，1H)，2.59-2.68(m，1H)，2.83-3.05(m，1H)，4.06-4.28(m，2H)，4.92-5.48(m，9H)，6.81(d，J=7.6Hz，1H)，6.92(d，J=7.6Hz，1H)，7.21(t，J=7.6Hz，1H)，7.33(m，10H)。ESI-MS:550.2(M+l)。步驟2.(3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉鹽的制備采用與實(shí)施例2步驟2類(lèi)似的方法制備，向(3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二芐酯(1.65g，3mmo1)的甲醇(90ml)中，加入10%的鈀/炭(300mg)，通入氫氣(latm)脫除保護(hù)基節(jié)基，再與碳酸鈉(302mg，2.9mmo1)的水(30ml)溶液反應(yīng)，得到白色粉末固體1.36g，收率91.9%，HPLC含量為99.2%。Elementalanalysis:(C14H14N3Na207P):Calcd:C，40.69;H，3.41;N，10.17;Found:C，40.76;H，3.33;N，10.31。ESI-MS:369.1(M-2Na+l)。實(shí)驗(yàn)例5所制化合物的溶解度、在緩沖液和血漿中的研究前藥是指指用化學(xué)方法將有活性的母體藥物轉(zhuǎn)變成無(wú)活性或活性低，在體內(nèi)經(jīng)酶促或非酶促反應(yīng)釋放出原藥而發(fā)揮治療作用的藥物。其中對(duì)于磷酸酯類(lèi)前藥而言，一般在體內(nèi)經(jīng)酶或者化學(xué)水解釋放出母體藥物。同時(shí)基于本發(fā)明的磷酸單酯類(lèi)前藥主要是增加藥物的水溶性，因此，一般在體外考察其在水中的溶解度、緩沖液和血漿中的水解情況。1、所制備化合物在水中的溶解度稱取研成細(xì)粉的待測(cè)樣品，加入10ml容量瓶中，再加入10ml水，每隔5分鐘強(qiáng)力振搖30秒，觀察30分鐘內(nèi)的溶解情況，如無(wú)目視可見(jiàn)的溶質(zhì)顆粒，即視為完全溶解，見(jiàn)表1。表1室溫下所制化合物及其母體藥物在水中的溶解度(mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2、所制備的化合物1和2在磷酸緩沖液和血漿中的水解情況儲(chǔ)備液50iig/ml水溶液人血漿取健康人血(加肝素)，離心，取上清液，分裝冷凍冰箱中備用pH7.4磷酸緩沖液稱取磷酸二氫鉀0.68g，加0.lmol/1氫氧化鈉溶液39.5ml，用水稀釋至100ml方法將人血漿和pH7.4磷酸緩沖液0.8ml分別加入到二個(gè)2ml的塑料管中，放入37t:恒溫水浴中保溫半小時(shí)，加入以上儲(chǔ)備液O.2ml，渦旋20秒，取樣0.lml，繼續(xù)在37。C保溫半小時(shí)。向所取0.lml樣品中力口0.4ml冷凍(_30°C)甲醇，離心3分鐘(4000轉(zhuǎn)/min)，取上清液進(jìn)行HPLC分析。此后分別在0.5，l，2，4和8h分別取樣，后處理同前。不同時(shí)間的化合物面積百分比=不同時(shí)間的積分面積/0時(shí)的積分面積*100%。表2化合物1和2在血漿和磷酸緩沖液中的水解情況化合物l化合物2<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>從表1和表2可以看出，磷酸單酯衍生物在水溶液中具有良好的溶解度，比其相應(yīng)的母體藥物增大1000倍以上，而且在水溶液中穩(wěn)定，在人血漿中能被迅速酶解釋放出母體藥物，由于具有良好的水溶性和穩(wěn)定性，可以制備成注射劑，具有起效快，療效好、副作用小、不受胃腸道影響的優(yōu)點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)例6鼠體內(nèi)移植瘤抑瘤作用的藥理活性評(píng)價(jià)1、實(shí)驗(yàn)材料與方法1.1、動(dòng)物與細(xì)胞株健康清潔級(jí)昆明小鼠，雌雄不限，體重1822g(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)；小鼠肝癌H22(軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所)。1.2、實(shí)驗(yàn)方法1.2.1建立小鼠實(shí)體瘤模型選擇腹腔接種79d，生長(zhǎng)良好的H22肝癌的小鼠，無(wú)菌抽取腹水，以無(wú)菌生理鹽水稀釋成2.5X107個(gè)/mL瘤細(xì)胞懸液，充分混勻，消毒小鼠右前肢腋窩部位，接種于健康小鼠右前肢腋部皮下，每只0.2mL，接種56只。1.2.2動(dòng)物分組及給藥小鼠接種24小時(shí)后隨機(jī)分為7組模型組(生理鹽水)，Brivanib組(30mg/kg)，化合物1和2組分別給藥38和40mg/kg(摩爾數(shù)相當(dāng)于Brivanib30mg/kg)，沙利度胺組(50mg/kg)，化合物4和5組71mg/kg(摩爾數(shù)相當(dāng)于沙利度胺組50mg/kg)，每組8只，每日腹腔注射給藥1次，每次0.15ml/10g體重，連續(xù)給藥7天，由于Brivanib難溶于生理鹽水，按劑量無(wú)法注射給藥，因此采用灌胃給藥。1.2.3計(jì)算抑瘤率接種后第8天，稱體重后處死小鼠，剝離皮下瘤塊，稱重，計(jì)算抑瘤率。抑瘤率=(對(duì)照組瘤重_實(shí)驗(yàn)組瘤重)/對(duì)照組瘤重*100%，結(jié)果見(jiàn)表4。表4對(duì)荷瘤小鼠生長(zhǎng)和腫瘤的影響G±s)組別劑量/mg/kg/d小鼠個(gè)數(shù)小鼠增重/g瘤重抑制率/%模型組—88.05±1.231.85±0.37—Brivanib3086.59±3,031.06±0.40*42.7化合物l3887.77±2.840.42±0,26*77,3化合物24087,06±2.390.45±0.29*75.7沙利度胺5083.70±2.251.52±0.24*17.8化合物37184.08±1.921,46±0.31*21.1化合物47184,76±2.831.3U0.28*29.1注與模型組比較，*P<0.012、對(duì)小鼠體內(nèi)移植性腫瘤H22的影響從表4可知各組對(duì)荷瘤小鼠生長(zhǎng)和腫瘤影響的平均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差，與模型組比較，Brivanib、沙利度胺、化合物1、2、3和4都能顯著抑制H22實(shí)體瘤生長(zhǎng)作用(P<0.01)，其中化合物1(77.3%)和2(75.7%)對(duì)腫瘤的抑制作用大至相當(dāng)，但顯著大于Brivanib(42.7%)，而沙利度胺(17.8%)、化合物3(21.1%)和4(29.1%)對(duì)腫瘤的抑制作用相對(duì)較弱，但是化合物3和4的活性優(yōu)于沙利度胺。化合物1和2的抗腫瘤活性顯著強(qiáng)于其母體藥物Brivanib，化合物3的活性也優(yōu)于其母體藥物沙利度胺，且都具有良好的水溶性，可以作為更好的抗腫瘤藥物。實(shí)驗(yàn)例710mg/瓶規(guī)格，1000支化合物110g甘露醇10g注射用水加至2000ml，其制成IOOO支按實(shí)施例7制劑處方，稱取化合物110g，置容器中，加水1800ml注射用水，并加入甘露醇10g，攪拌至溶解，用0.lmol/LNaOH調(diào)pH至6.67.0，加入針用炭lg，5060°C攪拌30分鐘，脫炭后，加注射用水至2000ml，在無(wú)菌條件下，用0.22ym微孔濾膜過(guò)濾除菌，濾液分轉(zhuǎn)10ml西林瓶中，每瓶2ml，加塞，凍干，充氮?dú)?，壓塞，包裝。1權(quán)利要求下述通式I的化合物，或其可藥用鹽、晶型或水合物其中R選自具有以下結(jié)構(gòu)的基團(tuán)F2009102592703C00011.tif,F2009102592703C00012.tif2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物為(1)(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[1，2_f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-基磷酸；(2)(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚基-5-氧基)_5_甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪_6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二鈉鹽；(3)(3-(1，3-二氧代異二氫吲哚_2-基)-2，6-二氧代哌啶-1-基)甲基磷酸二鈉鹽；(4)(3-(4-氨基-l-氧代異二氫吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二鈉及其可藥用鹽、晶型或水合物。3.根據(jù)權(quán)利要求l-2任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，所述化合物的可藥用鹽為與酸或堿所形成的鹽。4.包含權(quán)利要求l-3任一項(xiàng)所述的化合物的藥物組合物。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其特征在于，該組合物還包含藥學(xué)上可接受的輔料或載體。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的組合物，其特征在于，該組合物為片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、分散劑、糖漿劑、口服液、注射劑或栓劑。7.權(quán)利要求l-6任一項(xiàng)所述的化合物，或其異構(gòu)體、可藥用鹽、晶型、水合物或溶劑化物在用于制備治療和/或預(yù)防腫瘤和/或與腫瘤壞死因子a(TNFa)水平和/或3'，5'-環(huán)磷酸腺苷(CAMP)水平相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明提供通式I的水溶性磷酸單酯衍生物及其所有可能的異構(gòu)體、可藥用鹽、晶型、水合物、溶劑化物以及藥物組合物。本發(fā)明還提供了本發(fā)明化合物在制備腫瘤疾病、降低TNFα水平和/或提高CAMP水平相關(guān)疾病的防治藥物中的應(yīng)用，所述藥物并有良好的水溶性，療效高、起效快并且適合不宜口服給藥的患者。文檔編號(hào)A61P33/00GK101735276SQ200910259270公開(kāi)日2010年6月16日申請(qǐng)日期2009年12月17日優(yōu)先權(quán)日2009年12月17日發(fā)明者孫玉琦,廖國(guó)超,曲昌海,謝寅省申請(qǐng)人:廖國(guó)超