專利名稱：：異甘草素在制備腫瘤放射治療輔助治療藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種從甘草屬植物中提取的異黃酮類化合物一一異甘草素的新用途，特別涉及其作為制備腫瘤放射治療輔助治療藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：惡性肺瘤已成為全球人口第一大致死疾病。隨著科學(xué)的進(jìn)步，現(xiàn)有惡性腫瘤治療方式一一手術(shù)、化療和放射治療等取得了長足進(jìn)步，患者生存率逐步提高，但大部分惡性腫瘤，尤其惡性實體瘤仍無法徹底治愈，成為惡性腫瘤死亡率居高不下的主要原因。放射治療是腫瘤治療的基本手段之一，其應(yīng)用歷史已逾百年。在所有的治愈腫瘤患者中，手術(shù)的相對貢獻(xiàn)度是49%,放療和以放療為主綜合治療的貢獻(xiàn)度是40%，化療和以化療為主綜合治療的貢獻(xiàn)度是11%。同化療一樣，放療還是重要的姑息治療手段。依據(jù)循證醫(yī)學(xué)的資料嚴(yán)格估算，52%的腫瘤患者在其腫瘤治療過程中會接受至少一次放射治療。常規(guī)外照射對各類實體腫瘤的局控率是不相同的，同一病理類型腫瘤放療的有效率也不一致。臨床上將其主要歸因于肺瘤細(xì)胞的內(nèi)在放射抵抗性、放射后胂瘤細(xì)胞加速再增殖、總體腫瘤負(fù)荷和氧合狀態(tài)等因素。據(jù)統(tǒng)計，惡性腫瘤患者中約有70%在其治療的不同階段需要接受放療?，F(xiàn)在常規(guī)采用的放療射線源大致有三類，一類為可釋放出a、P和Y射線的各種放射性同位素60Co、192Ir、226Ra等放射源通過衰變產(chǎn)生的射線；第二類為常壓X射線治療機和各類醫(yī)用加速器產(chǎn)生的高能X射線和高能電子束等設(shè)備；第三類為能產(chǎn)生重離子束的加速器。其中前兩類射線源產(chǎn)生的高能射線多屬低傳能線密度Uinerarenergytransfer,LET)射線，其設(shè)備相對簡單便宜，技術(shù)成熟，已有較長的臨床應(yīng)用歷史，而第三類高LET射線的重離子束，需要大型昂貴的設(shè)備，目前僅在為數(shù)不多的國家處于臨床研究階段，但已有臨床研究結(jié)果表明，高LET重離子束在治療腫瘤方面具有明顯優(yōu)勢。為了更好的克服這些難治性腫瘤，自1980年以來就有學(xué)者嘗試將化療與放療結(jié)合，并且取得了一定的成功。由于放化療的作用機制不同，所以一直有兩種不同的理論在解釋化、放綜合治療所取得的成功。第一種理論是"空間協(xié)同"，即放療作用于局部，而化療減少遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。第二種理論是"放射增敏"，即化放療之間的相互作用產(chǎn)生了協(xié)同的抗腫瘤效應(yīng)，最終提高了放療后的局控。通過近二十余年的研究，發(fā)現(xiàn)這兩種理論都有臨床研究結(jié)果的支持，但仔細(xì)分析即可發(fā)現(xiàn)它們各自的實際適用范圍具有鮮明的特征。如果腫瘤對化療特別敏感(如淋巴瘤)，或者局控非常好(如早期乳癌腫塊切除+術(shù)后放療局控率為90%),那么序貫放化療的效果會非常好，亦即"空間協(xié)同"是綜合治療成功的主因?？墒菍Υ蟛糠制渌[瘤而言，化療的"放射增敏"作用帶來的放療局控提高卻是療效提高的決定因素，惡性膠質(zhì)瘤、頭頸部腫瘤、肺癌、食管癌、胃癌、大腸癌和肛門癌等多種實體瘤治療中同期放化療相比序貫放化療所顯示的生存優(yōu)勢即是明證。放療與化療的綜合治療獲得的生存優(yōu)勢無可質(zhì)疑，但是研究者同時發(fā)現(xiàn)提高的療效與明顯增加的副反應(yīng)相伴而至以肺損傷為例，既往常規(guī)放療的發(fā)生概率不過0~20%,而現(xiàn)在隨著高強度治療方案的使用，發(fā)生率可達(dá)45%~60%，且有部分患者因此死亡。正常組織損傷已經(jīng)成為劑量限制因素，并且降低了生活質(zhì)量調(diào)整后的生存率。損傷產(chǎn)生的主要原因是傳統(tǒng)化療和放療都缺乏治療特異性，在殺滅腫瘤細(xì)胞的同時也殺滅了部分快速分裂的正常細(xì)胞。有鑒于此，尋找到一種"高效、低毒"惡性腫瘤放療輔助治療藥物成為臨床的迫切需求，截至目前，臨床上還未出現(xiàn)可減輕放療的不良反應(yīng)，同時增強放療效果的理想藥物。異甘草素(2,4,4-trihydroxychalcone，isoliquiritigenin)是從甘草屬植物(Glycyrrhiza)分離、純化的異黃酮類化合物，它可通過大孔吸附樹脂技術(shù)和柱層析技術(shù)分離純化[付玉杰，劉曉娜，侯春蓮，等.大孔吸附樹脂分離純化異甘草素的研究.離子交換與吸附.2006年第3期];也可通過全人工方法合成[江南大學(xué).一種異甘草素的合成方法.專利號CN200410065383.7;楊立，沈鳳嘉.甘草素與異甘草素的合成.藥學(xué)學(xué)報，1994年11期]。中科院上海藥物研究所植化研究室對異甘草素的化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)已有詳細(xì)的敘述[黃酮體化合物鑒定手冊[M]，北京科學(xué)出版社，1981]。異甘草素的分子式為C15H1204，結(jié)構(gòu)式如下異甘草素研究表明，異甘草素有很強的藥理活性，對腦缺血-再灌注損傷具有保護作用[異甘草素對小鼠腦缺血-再灌注損傷的保護作用.武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版).2005年第3期]，對宮頸癌細(xì)胞[異甘草素對人宮頸癌細(xì)胞增殖的抑制作用.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志.2005年第6期]和前列腺癌細(xì)胞[異甘草素對人前列腺癌細(xì)胞體外增殖的抑制作用.臨床泌尿外科雜志.2007年第11期)增殖具有抑制作用，誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞[ApoptosisinducedbyisoliquiritigenininhumangastriccancerMGC-803cells.PlantaMed，2001，67(8):754-757.]凋亡，使細(xì)胞周期阻滯于G2/M期[Isoliquiritigenininhibitsthegrowthofprostatecancer.EurUrol,2003，43(5):580-586;Inductionofeel1cyclearrestandp21(CIP1/WAF1)expressioninhumanlungcancercellsbyisoliquiritigenin.CancerLett,2004,207(1):27-35.]，具有抗心律失常[異甘草素抗心律失常作用研究.中藥藥理與臨床.1996年第5期]、保肝[異甘草素對大鼠急性化學(xué)性肝損傷的保護作用.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志.2008年第7期]等作用。盡管異甘草素可抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但其本身抑瘤活性不及現(xiàn)有臨床抗腫瘤藥物，如紫杉醇、順鉑等，因此異甘草素較難成為臨床抗腫瘤藥物。我們發(fā)現(xiàn)，異甘草素在10Pg/ml以下濃度時，并未能殺死腫瘤細(xì)胞，而是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞逆轉(zhuǎn)為正常功能細(xì)胞，喪失繼續(xù)增殖能力[專利異甘草素作為癌分化誘導(dǎo)劑的應(yīng)用.申請?zhí)?00810072917.7]，有一定的腫瘤細(xì)胞靶向性。異甘草素對腫瘤放射治療的影響至今未有報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于避免現(xiàn)有技術(shù)的不足提供一種異甘草素的新用途，即異甘草素作為制備減輕惡性腫瘤放射治療不良反應(yīng)，增強惡性腫瘤放射治療效果的藥物的應(yīng)用，從而為惡性腫瘤放射治療提供了一種新的可供選擇的輔助治療藥物。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為提供了異甘草素作為制備輔助X射線照射治療惡性肺瘤減毒增效的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及了異甘草素作為制備輔助Y射線照射治療惡性腫瘤減毒增效的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及了異甘草素作為制備輔助重離子照射治療惡性腫瘤減毒增效的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的藥物組合物根據(jù)臨床需要，加入相應(yīng)輔料，以片劑、丸劑、顆粒劑、膠嚢、懸浮液、溶液、糖漿、注射劑、霜劑、軟膏、凝膠劑、噴霧劑、口嚼劑或貼劑等制劑形式存在。本發(fā)明所述的惡性月中瘤(malignanttumours)也稱、為癌癥(Cancer),或贅生物(neoplasms),是一類可發(fā)生于機體各部位的約100多種疾病的總稱。世界衛(wèi)生組織將其定義為可迅速超過其正常邊界生長的不正常細(xì)胞，這些細(xì)胞能夠侵襲毗鄰正常部位并播散到其它器官一一這一過程稱作轉(zhuǎn)移(metastasis)，轉(zhuǎn)移是癌癥死亡的主要原因[hup:〃www.who.int]。本發(fā)明所述的異甘草素是從中藥甘草中提取分離獲得或人工方式合成，可采用任何已公開文獻(xiàn)或?qū)＠椒ㄌ崛≈苽?。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明所述的異甘草素采用任何適合的方式，與放射治療聯(lián)合應(yīng)用于患者，可以減輕因放射治療所致局部正常組織損傷癥狀，如組織水腫、炎癥、疼痛、造血功能異常(如白細(xì)胞降低)、腺體功能障礙、致癌等等多種典型不良反應(yīng)癥狀；并可明顯增強放療對腫瘤的殺傷或抑制作用，從而延長患者的無病生存期，改善患者生活質(zhì)量。具體實施例方式以下對本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。實施例1異甘草素對X射線照射腫瘤的減毒增效作用1.1實驗材料異甘草素，購自江西本草天工科技有限公司，純度99.8%(HPLC法測定)。Lewis肺癌細(xì)胞林，購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心(武漢大學(xué)保藏中心)，接種于C57BL/6小鼠右腋部皮下傳代保存。1.2實—驗方法取荷瘤傳代鼠脫頸推處死，固定于板上。用碘酊及酒精消毒動物皮膚，切開皮膚，選擇腫瘤生長良好、無壞死或液化的瘤組織，加入無菌生理鹽水，用組織勻漿器制成含3000萬/ml左右的細(xì)胞懸液，于120只C57BL/6小鼠右后肢腹股溝部位皮下接種上述瘤細(xì)胞懸液0.2ml/只，接種部位皮膚先用碘酊及酒精消毒。接種后10天，選擇已有腫瘤組織生長且長徑大于1cm的小鼠，隨機分為9組，每組12只，分別為荷瘤對照組、單純放療組、順鉑組、異甘草素1mg/kg組、異甘草素10mg/kg組、異甘草素100mg/kg組、異甘草素1mg/kg+放療組、異甘草素10mg/kg+放療組、異甘草素100mg/kg+放療組。分組后放療各組小鼠每日以深部X線治療機照射(Phi1ips公司，德國)，照射劑量2Gy,照射后異甘草素各組小鼠灌胃給予相應(yīng)劑量異甘草素，其余各組灌胃給予等體積蒸餾水。每天一次，連續(xù)5天。于末次照射后24小時，眼眶采血，肝素抗凝，脫頸推處死動物，剝?nèi)×鼋M織稱重，計算抑瘤率。抑瘤率(％)=\給藥組平均瘤重(T)x訓(xùn)對照組平均瘤重(c),根據(jù)各組抑瘤率，按Burgi修正公式[胡志力，溫守功，于人江，等，靈芝菌合劑抗腫瘤及增效減毒作用研究，山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2003;27:466]對聯(lián)合用藥組進(jìn)行療效判斷。即=_聯(lián)合治療組抑瘤率_《—異甘草素組抑瘤率+單純放療組抑瘤率-異甘草素組抑瘤率x單純放療組抑瘤率若q值為0.85~1.15為單純相加，q〉1.15為增強，q<0.85為拮抗。參照Schmid[SchmidW.Themicronucleustest.In:Hollaender，A.(Eds.),ChemicalMutagens,PrinciplesandMethodsforTheirDetection,PlenumPress,NewYork.1976;pp.31.]方案，采用吖咬橙熒光顯色進(jìn)行觀察[胡永寧，猶學(xué)筠，劉蘭女，等.吖咬橙熒光染色在纟效核試驗中的應(yīng)用.腫瘤.1985;5(02):56-59]小鼠骨髓細(xì)胞微核率。脫頸推處死小鼠，分離右側(cè)股骨后以r/。檸檬酸鈉沖洗出骨髓細(xì)胞，吹打均勻后離心(1000gx5min)，棄去上清，細(xì)胞團以剩余液體混勻后涂片。曱醇固定。100|ug/ml(inpH6.8磷酸緩沖液)吖咬橙染色3min,置于pH6.8磷酸緩沖液漂洗3min，加蓋玻片，于40倍物鏡下計數(shù)1000個嗜多染紅細(xì)胞(PCEs)中有微核細(xì)胞數(shù)目。計算微核率，以千分率表示。經(jīng)吖咬橙染色后，細(xì)胞形態(tài)完好，有核細(xì)胞呈黃綠色，PCE顯桔紅色焚光，所含微核為圓形，發(fā)出黃綠色熒光，易于分辨；成熟紅細(xì)胞無熒光，顯示為暗影。小鼠外周血白細(xì)胞DNA損傷測定采用堿性單細(xì)胞電泳分析法(Singlecellmicrogelelectrophoresis(SCGE),或稱cometassay)。這是一種測定單個哺乳動物細(xì)胞DNA損傷的快速、簡便和靈敏的方法[McKelvey-MartinVJ,GreenMH，SchmezerP,Pool-ZobelBL，DeMeoMP,CollinsA.Thesinglecellgelelectrophoresisassay(cometassay):aEuropeanreview.MutatRes.1993;288(1):47-63.]。實驗按Franke等[FrankeSI,PraD,daSilvaJ,etal.PossiblerepairactionofVitaminConDNAdamageinducedbymethylmethanesulfonate,cyclophosphamide,FeS04andCuS04inmousebloodcellsinvivo.MutatRes.2005;583(l):75-84.]方案進(jìn)行。具體內(nèi)容如下在輕微打磨過的載玻片上涂一層0.5%的常炫點瓊脂糖(normalmeltingagarose,NMA),4°C下使其凝固。小鼠肝素抗凝外周血7jul與93ja1低融點瓊脂糖(LMA，0.75%inPBS)在37。C混合均勻，滴在載玻片上。加上蓋玻片后于4。C放置一段時間使其凝固。去掉蓋玻片，再加一層LMA并加蓋玻片，凝固后小心去掉蓋玻片。將包埋了細(xì)胞的載玻片小心置入細(xì)胞裂解液(內(nèi)含1%月桂酰肌氨酸鈉、2.5mol/LNaCl、100mmol/LEDTA-Na2和10mmol/LTris-HCl，pH10，臨用前加入10。/。DMS0和l。/。TritonX-IOO)中，于4°C下放置約l小時。取出載玻片置于水平電泳槽中，加入電泳緩沖液(內(nèi)含1mmo1/LEDTA-Na2和30Ommo1/LNaOH)，放置20分鐘后，調(diào)整緩沖液液面使電壓達(dá)25V，電流達(dá)300mA，電泳20min。電泳完畢，小心將載玻片浸于中和液(0.4mol/LTris-HCl,pH7.5),放置5分鐘，再換新的中和液，同樣放置5分鐘，以排除堿對溴化乙錠染色的干擾。取出后用2(mg/ml溴化乙錠染色，加蓋玻片，并盡快在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察和拍照。熒光顯微鏡下激發(fā)光波長為515-560nm，濾光片波長為590nm。未損傷細(xì)胞的DNA為圓形，而受到損傷的細(xì)胞DNA帶有普星樣尾巴。每只小鼠照片中隨機選用lOO個WBCs,利用CASP軟件對DNA損傷情況進(jìn)行分析。此軟件分析結(jié)果中Olivetailmoment(OTM)與DNA損傷情況呈正相關(guān)，因此采用OTM作為DNA損傷評價指標(biāo)[KoncaK，LankoffA,BanasikA,etal.Across-platformpublicdomainPCimage-analysisprogramforthecometassay.MutatRes.2003;534(1—2):15—20.〗。彗尾重心與彗頭重心距離OTM-彗尾總"A^強度占細(xì)胞總DA^強度的百分率小鼠外周血白細(xì)胞數(shù)采用三分類全自動血細(xì)胞計數(shù)儀測定。以t檢驗進(jìn)行組間統(tǒng)計學(xué)分析。1.3實驗結(jié)果結(jié)果表明(表l)，X射線照射可致小鼠外周血DNA損傷，骨髓微核率明顯升高，外周血白細(xì)胞數(shù)量明顯降低，異甘草素本身對上述指標(biāo)沒有明顯影響，但1-100mg/kg異甘草素可劑量依賴性地抑制^:療所致的外周血DNA損傷、骨髓微核率的增加和外周血白細(xì)胞數(shù)量的下降。表明異甘草素對X射線照射所致機體正常組織損傷有明顯保護作用。腫瘤生長情況表明(表2)，1-100mg/kg異甘草素對體內(nèi)腫瘤生長未見明顯抑制作用，效果不及傳統(tǒng)化療藥順鉑。單純放療對腫瘤生長抑制率可達(dá)48.6%，異甘草素可明顯增強放療的療效，1、10和100mg/kg異甘草素可分別提高放療對腫瘤的抑制率達(dá)58.4%、68.1°/。和70.0。根據(jù)金氏公式計算兩者聯(lián)用的協(xié)同情況[林溪，許建華，柯丹如.姜黃素與阿霉素聯(lián)合用藥的體外抗腫瘤作用.中國藥理學(xué)通報.2000;16(5):522-525],表明1mg/kg異甘草素與放療合用具有相加作用，10和100mg/kg異甘草素與放療合用具有明顯協(xié)同作用。這一結(jié)果說明異甘草素對X射線放療具有明顯增效作用。表l異甘草素對X射線照射致小鼠正常組織損傷的減毒作用外周血白細(xì)胞組別nOTM微核率(%。)數(shù)(lx109L-l)荷瘤對照組122.81±1.243.16±1.247.16±1.24單純放療組1043.2±9.81"31.6±5.98"1.63±0.74"順鉑組1mg/kg1212.4±3.75"10.2±2.71"3.24±1.37"異甘草素1mg/kg122.51±1,103.12±1.367.21±1.08異甘草素10mg/kg122.46±1.032,99±1.137.15±1.36異甘草素100mg/kg122.58±1.183.06±1.077.20±1.19異甘草素1mg/kg+放療1033.7±7.32*25.5±3.79*2.45±0.96*異甘草素10mg/kg+放療1224.8±6.81**17.6±2.81**3.68±1.18**異甘草素100mg/kg+放療1220,9±5.42**15.7±2.69**4.37±1.32**與荷瘤對照組比較"，P復(fù)01。與單純放療組比較*，P<0,05;**,P復(fù)01。表2異甘草素對X射線抑制Lewis肺癌生長的增效作用組別n瘤重(g)抑制(％)q值荷瘤對照組122.57±0.73單純放療組101.32±0.58M48.6順鉑組1mg/kg121.66±0.49"35.4異甘草素1mg/kg122.37±0.707.8異甘草素10mg/kg122.28±0.6911.3異甘草素100mg/kg122.21±0.7214.0異甘草素1mg/kg+放療101.07±0.44*58.41.11異甘草素10mg/kg+放療120,82±0.37**68.11.25異甘草素100mg/kg+放療120.77±0.41**70.01.25與荷瘤對照組比較"，P復(fù)01。與單純放療組比較*，P<0.05;**,P復(fù)01。實施例2:異甘草素對重離子照射腫瘤的增效減毒作用2.1實驗材料異甘草素，購自江西本草天工科技有限公司，純度99.8%(HPLC法測定)。U14宮頸癌細(xì)胞林，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京藥物研究所，接種于昆明種小鼠腹腔傳代保存。2.2實-瞼方法取已接種7天的U14宮頸癌腹水的傳代小鼠，消毒腹部皮腹后用無菌注射器取乳白色腹水，加入5倍體積的注射用生理鹽水稀釋。小鼠120只，消毒右后支腹股溝部位皮膚后，皮下接種上述瘤細(xì)胞懸液O.2ml。接瘤后第10日，選取腫瘤包塊長徑大于1cm小鼠，隨機分為9組，每組12只，分別為荷瘤對照組、單純放療組、順鉑組、異甘草素1mg/kg組、異甘草素10mg/kg組、異甘草素100mg/kg組、異甘草素1mg/kg+放療組、異甘草素10+放療組、異甘草素100mg/kg+放療組。分組后放療各組小鼠每日以中國科學(xué)院近代物理研究所的蘭州重離子加速器(HIRFL)產(chǎn)生12(:6+離子輻照腫瘤部位，引出能量為80MeV/u，采用了射程調(diào)制器來獲得展寬Bragg峰。每次輻照的間隔時間為48h,照射劑量4Gy,連續(xù)輻照3次。每次照射后異甘草素各組小鼠灌胃給予相應(yīng)劑量異甘草素，其余各組灌胃給予等體積蒸餾水。于末次照射后24小時，眼眶采血，肝素抗凝，脫頸推處死動物，剝?nèi)×鼋M織稱重，計算抑瘤率，無菌取脾臟，測定脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力。小鼠脾臟于100目不銹鋼網(wǎng)上用注射器芯仔細(xì)研碎，冰Hanks沖洗后，收集濾過的Hanks液至15ml離心管中。1000rpmx10min，棄上清，加入O.83%氯化銨lml后迅速吹打混勻30s,裂解紅細(xì)胞，加入含l。/。胎牛血清的冰Hanks液10ml離心洗滌一次，再以含l。/。胎牛血清的冰Hanks液10ml洗滌2次。用含10%胎牛血清的1640完全培養(yǎng)液調(diào)整脾細(xì)胞濃度為1x106細(xì)胞/ml。于96孔板中每孔加入100jLi1脾細(xì)胞懸液，每只小鼠脾細(xì)胞加6孔，其中3孔加入含10jug/mlConA的完全培養(yǎng)液lOOjal作試驗孔，另3孔中加不含ConA的完全培養(yǎng)液100jul作對照孔。加好后于微量振蕩器振蕩混勻。將培養(yǎng)板置37。C,5%C02溫箱中培養(yǎng)68小時。于每孔加入10n15mg/ml的MTT溶液,繼續(xù)培養(yǎng)4小時。棄去培養(yǎng)板內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入DMSO150|li1，充分振蕩混勻，以溶解曱臜結(jié)晶。酶標(biāo)儀測定570nm光吸收，630nm作參考波長。根據(jù)各孔吸光度計算每只小鼠脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化指數(shù)靴指數(shù)湖=5==對照孔平均o/Xi:小鼠外周血DNA損傷測定參照實施例1。小鼠骨髓微核測定參照實施例l。以t檢驗進(jìn)行組間統(tǒng)計學(xué)分析。2.3實驗結(jié)果與常規(guī)低LET射線治療腫瘤相比，高LET重離子束照射治療腫瘤是提出較晚，但已應(yīng)用于臨床的治療措施。重離子與常規(guī)射線不同，它是重帶電粒子，因此具有一些獨特的物理性質(zhì)，其用于腫瘤的臨床治療較低LET射線具有明顯優(yōu)勢?？梢詺w結(jié)為①物理劑量深度分布比X射線、Y-光子、中子好，在射程末端有一個Bragg峰(能量沉積集中區(qū))，因此，可以利用重離子能量損失集中于射程末端的特性，在腫瘤治療時，可以通過調(diào)節(jié)它們的能量使離子停止在胂瘤的指定部位，達(dá)到對腫瘤的最大殺傷效應(yīng)，而在腫瘤前面離子穿過的正常組織。受到的損傷較小，至于腫瘤后面的正常組織，因為離子已經(jīng)停在肺瘤部位，所以是不受影響的；②在靶區(qū)相對生物效應(yīng)高、氧增比低，比質(zhì)子、光子好；③射程岐離與橫向散射小，比質(zhì)子好；④利用正電子發(fā)射斷層照相術(shù)(PET)技術(shù)可以實時監(jiān)測，這是高能重離子獨有的特點；由于重離子的帶電性決定了它們可以采用磁掃描技術(shù)導(dǎo)引束流對腫瘤實行精確"適形治療，，；亞致死損傷修復(fù)??；⑦輻射敏感性不依賴細(xì)胞周期時相。在生物效應(yīng)方面，重離子治療時其相對生物效應(yīng)(RBE)高，對腫瘤乏氧細(xì)胞的殺傷力比低LET射線大。對細(xì)胞生長周期依賴較小。在物理方面，重離子束在通過介質(zhì)時，速度會逐漸P條低而損失其能量并形成明顯的電離吸收峰(Bragg)，峰的深淺及寬度均可通過特殊裝置調(diào)節(jié)以適應(yīng)大小形狀不同的病灶，重離子在體內(nèi)到達(dá)的位置也便于觀察確定。這些特征，為重離子在治療腫瘤方面的應(yīng)用提供了比傳統(tǒng)射線更為優(yōu)越的條件[羅光輝，李文建，蘇興桂.重離子與其他放射治療腫瘤的比較.廣東醫(yī)學(xué).2007;28(1):159-161]。盡管重離子照射較常規(guī)低LET射線照射治療腫瘤有明顯優(yōu)勢，但當(dāng)前較難做到精確的適形照射，另外對于機體深部腫瘤組織照射時離子束穿過機體正常組織以及照射過程中形成的次級射線難免會對機體正常組織造成傷害。實驗結(jié)果表明(表3),^6+離子束照射也可致嚴(yán)重的外周血DNA損傷和骨髓微核形成，還可致脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力P條低。1-100mg/kg異甘草素可劑量依賴性地抑制》文療所致的外周血DM損傷、骨髓樣i核率的增加和脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的下降。表明異甘草素對重離子束照射所致機體正常組織損傷有明顯保護作用。腫瘤生長情況表明(表4),1-100mg/kg異甘草素本身僅對腫瘤生長有劑量依賴性抑制作用，但作用不及單純放療或環(huán)磷酰胺療效。t"單純放療對腫瘤生長抑制率可達(dá)53.8°/。，異甘草素可明顯增強;^文療的療效，1、10和100mg/kg異甘草素可分別提高放療對腫瘤的抑制率達(dá)61.8y。、74.4%和79.1%。根據(jù)金氏公式計算兩者聯(lián)用的協(xié)同情況[林溪，許建華，柯丹如.姜黃素與阿霉素聯(lián)合用藥的體外抗腫瘤作用.中國藥理學(xué)通"f艮.2000;16(5):522-525],表明1mg/kg異甘草素與重離子束放療合用具有相加作用，10-100mg/kg異甘草素與重離子束放療合用具有明顯協(xié)同作用。這一結(jié)果說明異甘草素對重離子束放療具有明顯增效作用。表3異甘草素對'2C"照射致小鼠正常組織損傷的減毒作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與荷瘤對照組比較",P復(fù)01。與單純放療組比較*,P復(fù)05;**，P復(fù)01。表4異甘草素對"C"束抑制U14宮頸癌生長的增效作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>環(huán)磷酰胺40mg/kg122.27±0.59"33.2異甘草素1mg/kg123.00±0.7211.8異甘草素10mg/kg122.71±0.88#20.3異甘草素100mg/kg122.59±0.50"23.8異甘草素1mg/kg+放療101.30±0.3961.81.04異甘草素10mg/kg+放療120.87±0.41**74.41.18異甘草素100mg/kg+放療120.71±0.27**79.11.22與荷瘤對照組比較",P<0.01。與單純放療組比較*，P<0.05;**,P<0.01。實施例3:異甘草素對Y射線放療的增效作用3.1實驗材料異甘草素，購自江西本草天工科技有限公司，純度99.8%(HPLC法測定)。H22肝癌細(xì)胞抹，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京藥物研究所，接種于昆明種小鼠腹腔傳代保存。3.2實驗方法取已接種7天的H22肝癌腹水的傳代小鼠，消毒腹部皮腹后用無菌注射器取乳白色腹水，加入5倍體積的注射用生理鹽水稀釋。小鼠120只，消毒右后支腹股溝部位皮膚后，皮下接種上述瘤細(xì)胞懸液O.2ml。接瘤后第10日，選取腫瘤包塊長徑大于1cm小鼠，隨機分為9組，每組12只，分別為荷瘤對照組、單純放療組、紫杉醇組、異甘草素lmg/kg組、異甘草素10mg/kg組、異甘草素100mg/kg組、異甘草素1mg/kg+放療組、異甘草素10+放療組、異甘草素100mg/kg+放療組。分組后放療各組小鼠每日以60Coy射線輻照小鼠右后肢腫瘤部位，每次照射劑量2Gy，每天一次連續(xù)照射6天。每次照射后異甘草素各組小鼠灌胃給予相應(yīng)劑量異甘草素，其余各組灌胃給予等體積蒸餾水。于末次照射后24小時，眼眶采血，肝素抗凝，脫頸推處死動物，剝?nèi)×鼋M織稱重，計算抑瘤率。小鼠外周血DNA損傷測定、小鼠骨髓微核測定和外周血白細(xì)胞計數(shù)方法同實施例l。以t檢驗進(jìn)行組間統(tǒng)計學(xué)分析。3.3實-驗結(jié)果Y射線照射也是腫瘤放療的常用手段之一，但已有研究表明，輻射本身也可導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[韓玲，蔡建明，李百龍，等.60CoY射線照射誘發(fā)小鼠惡性腫瘤.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報.2003;24(7):745-748]。輻射誘發(fā)腫瘤是指接受電離輻射后發(fā)生的、所受該照射具有一定程度病因?qū)W聯(lián)系的惡性腫瘤，是射線照射后重要遠(yuǎn)后效應(yīng)之一，它包括白血病、骨肉瘤和淋巴肉瘤等，屬于隨機性效應(yīng)。動物實驗和人類流行病學(xué)調(diào)查均證明電離輻射能誘發(fā)腫瘤，但目前還不能確定電離輻射是否可能引起某種特殊腫瘤。根據(jù)平均壽命研究的死亡率資料已確立，在統(tǒng)計意義上超量危險的癌癥是白血病(除慢性淋巴細(xì)胞白血病)、女性乳腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、肝癌、食管癌、卵巢癌、多發(fā)性骨髓瘤和胃癌等。電離輻射所致細(xì)胞染色體斷裂和DNA損傷是輻射致癌的直接原因之一，堿性慧星電泳實驗和骨髓微核實驗可作為電離輻射所致細(xì)胞DNA雙鏈斷裂和染色體損傷的定量指標(biāo)。實驗結(jié)果表明(表5),Y射線照射可致嚴(yán)重的外周血DNA損傷和骨髓《效核形成，同時造成骨髓造血功能障礙，外周血白細(xì)胞減少。1-100mg/kg異甘草素可劑量依賴性地抑制放療所致的外周血DNA損傷、骨髓微核率增加和外周血白細(xì)胞數(shù)目減少。表明異甘草素對Y射線照射所致機體正常組織損傷有明顯保護作用，對y射線的致癌也有一定防護作用。腫瘤生長情況表明(表6)，1-100mg/kg異甘草素本身僅對胂瘤生長有輕微抑制作用，100mg/kg異甘草素抑瘤率為23.2%(P復(fù)05),不及紫杉醇療效(抑瘤率54.7°/。)。Y射線單純放療對腫瘤生長抑制率可達(dá)38.4%,異甘草素可明顯增強放療的療效，1、10和100mg/kg異甘草素可分別提高放療對腫瘤的抑制率達(dá)55.4°/、63.0%和71.6%。根據(jù)金氏公式計算兩者聯(lián)用的協(xié)同情況，表明1-100mg/kg異甘草素與y射線放療合用均具有明顯協(xié)同作用。這一結(jié)果說明異甘草素對y射線放療具有明顯增效作用。表5異甘草素對y射線照射荷H22肝癌小鼠正常組織的減毒影響外周血白細(xì)胞組別nOTM微核率(％o)數(shù)(lx109L-1)荷瘤對照組123.18±0.875.21±0.977.59±1.87單純放療組1034.8±5.44"58.6±9.4"2.47±0.86"紫杉醇3mg/kg115,97±1.24**10.2±1.71"5.54±1.19"異甘草素1mg/kg122.97±0.774.40±1.127.62±1.74異甘草素10mg/kg122.81±0.845.12±0.867.79±1.83異甘草素100mg/kg122.82±0.784.88±1.037.52±1.61異甘草素1mg/kg+放療1127.5±3.12**43.2±7.61**3.79±0.88*異甘草素10mg/kg+放療1216.6±2.78**32.5±5.47**4.61±1.25**異甘草素100mg/kg+放療1212.8±3.57**26.9±4.32**4.97±1.62**與荷瘤對照組比4支"，P<0.01。與單純放療組比較**，P<0.01。表6異甘草素對Y射線抑制H22肝癌生長的增效作用組別n瘤重(g)抑瘤率q值(%)荷瘤對照組122.,89±0.84--單純力文療組91.78±0.52##38.4紫杉醇3mg/kg111.31±0.61#*54.7異甘草素1mg/kg122,65±0.588.3異甘草素10mg/kg122.56±0.4711.4異甘草素100mg/kg122.22±0.38#23.2異甘草素1mg/kg+放療111.29±0.41*55.41.27異甘草素10mg/kg+放療121.07±0.30**63.01.39異甘草素100mg/kg+放療120.82±0,27***71.61.36與荷瘤對照組比4交"，P復(fù)01。與單純放療組比較*,P<0.055承承，P<0.01。以上所有研究證明，異甘草素可劑量依賴性地減輕X射線、Y射線和重離子束等電離輻射所致機體正常組織和細(xì)胞的損傷，同時對上述射線的抑瘤作用有明顯增效作用。這些結(jié)果說明異甘草素可作為抗輻射藥物，用以預(yù)防或治療各種電離輻射對正常機體的損傷；另外，異甘草素還可以作為腫瘤放射治療的增效藥物，可增強各種放療措施對各種腫瘤的療效。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。權(quán)利要求1.異甘草素在制備輔助X射線照射治療惡性腫瘤減毒增效的藥物中的應(yīng)用。2.異甘草素在制備輔助y射線照射治療惡性腫瘤減毒增效的藥物中的應(yīng)用。3.異甘草素在制備輔助重離子照射治療惡性腫瘤減毒增效的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明屬醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種從甘草屬植物中提取的異黃酮類化合物——異甘草素的新用途，特別涉及其作為制備腫瘤放射治療輔助治療藥物中的應(yīng)用。異甘草素作為制備減輕惡性腫瘤放射治療不良反應(yīng)，增強惡性腫瘤放射治療效果的藥物的應(yīng)用，從而為惡性腫瘤放射治療提供了一種新的可供選擇的輔助治療藥物。文檔編號A61P35/00GK101524341SQ200910129078公開日2009年9月9日申請日期2009年3月20日優(yōu)先權(quán)日2009年3月20日發(fā)明者紅張,寧李,王振華申請人:中國科學(xué)院近代物理研究所