專利名稱：一種蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及，丁新的藥物制劑，尤其涉及一種蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微 球及其制備方法。
背景技術：
，丁(mtin)又名蕓香苷、紫槲皮苷，為一來源很廣的黃酮類化合物。蘆丁 廣泛存在于植物界，幾乎所有的蕓香科和石楠科植物中均含有之，尤以蕓香科 的蕓香草，豆科植物槐的花蕾(槐米)、果實(槐角)、蓼科植物的蕎麥、金絲桃 科植物紅單全草、鼠李科植物光枝勾兒茶、大薊科植物野梧桐葉含量較為豐富， 可以作為提取蘆丁的原料。此外，它還存在于冬青科植物毛冬青、木樨科植物 連翹、豆科植物槐角以及煙草、專、杏、橙皮和番茄等植物中。目前，我國蘆 丁生產(chǎn)主要以槐米為原料進行提取。蘆丁分子式為C27H3。016* 3H20，分子量為 610.51，其性狀為黃色結晶粉末或無晶形粉末，含有三分子的結晶水，有苦味， 熔點為174~178°C。蘆丁溶于熱水，溶解度l: 200;難溶于冷水，溶解度1: 8000;溶于熱甲醇，溶解度l: 7;冷甲醇，溶解度1: 100;熱乙醇，溶解度1: 30;冷乙醇，溶解度1: 300;難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿等非極 性溶劑。易溶于堿液中呈黃色，酸化后又析出。蘆丁具有維生素P樣作用，能 降低毛細血管通透性和脆性，促進細胞增生和防止血細胞凝聚，以及抗炎、抗 過敏、利尿、解痙、鎮(zhèn)咳、降血脂等作用。臨床上蘆丁主要用于高血壓病的輔 助治療和用于防治因蘆丁缺乏所致的其它出血癥，同時還用于預防和治療糖尿 病及合并髙血脂癥。由此可見蘆丁是一種應用非常廣泛的常用藥物。目前用于 醫(yī)學抗微生物感染輔助治療藥物的蘆丁制劑主要是片劑和注射劑，臨床使用片 劑，則由于蘆丁上述的在水中的溶解度極差的特性，生物利用度較低，因而影 響其口服吸收，并導致口服吸收不規(guī)律。為了加強藥效，只有加大劑量，大劑量片劑的應用對胃腸道及心臟具有毒副作用。蘆丁片說明書中注明蘆丁不溶 于水，吸收不規(guī)律，療效不確切，所以蘆丁片近年來在臨床上幾乎不用。
為改善蘆丁在水中的溶解性狀，增加藥理活性，提高生物利用度，已有很 多人作了大量工作，如將蘆丁與P—環(huán)糊精一起制成包合物；蘆丁與其它化合 物結合形成共沉物等。2008年1月23日中國發(fā)明專利公開號CN 101108193A公 開了一種水溶性蘆丁及其制備方法與口服制劑，是將蘆丁溶于有機溶劑中，加 入尿素或聚乙二醇加熱回流后制得。該方法確實能有效的提高蘆丁在水中的溶 解度，但遺憾的是，上述方法均因成本等問題難于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
微球是近年發(fā)展起來的新型制劑，其除了具有提高藥物的穩(wěn)定性、防止藥 物在胃內(nèi)失活和減少對胃的刺激性外，更具有緩釋作用，從而提高療效，降低 毒副作用。
發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明要解決的問題是提供一種聲丁-阿拉伯膠-明 膠緩釋微球及其制備方法。本發(fā)明使用緩釋微球作為微生物感染的輔助治療藥 物，由于其緩釋作用，能明顯改善蘆丁的生物利用度，從而可提高療效，降低 毒副作用。
本發(fā)明的蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球是以蘆丁為主要原料，加入釆用天 然高分子材料阿拉伯膠、明膠作為基質骨架制備而成，其重量配比是蘆丁阿 拉伯膠明膠=1: 3: 3。
具體制備方法步驟如下
① 分別取3份阿拉伯膠與3份明膠，各加蒸餾水97份，置水洛中，使其分 別制成質量比為3%的阿拉伯膠和3y。的明膠溶液，置50-7(TC水洛中，最佳選5(TC 的水浴，使其溫熱溶解20分鐘，保溫，備用；
② 另取已研細過200目篩的聲丁 l份，準確稱重后，加上述明膠溶液，置 50-7(TC水浴中混勾，且邊攪邊加入上述阿拉伯膠溶液，應用滴注器控制加入阿拉伯膠溶液的速度，控制囊材與囊心物的質量比為4~8: 1,最佳選6: 1,得 混合溶液；所稱的囊材為阿拉伯膠和明膠，所稱的囊心物是蘆??；
③ 維持步驟②混合溶液的成囊溫度為50°C-7(TC，優(yōu)選為6(TC;在攪拌條 件下，以40滴/min的滴加速度加入濃度10%的醋酸溶液，調(diào)節(jié)混合溶液pH值 至3.5,得凝聚囊液；繼續(xù)攪拌5分鐘后，加入溫度為30-40'C的去離子水至凝 聚囊液中，去離子水是該凝聚囊液總體積的2倍量；自水浴中取出凝聚囊液， 不斷攪拌，自然冷卻得凝聚囊后液；待溫度降至32-35'C時，將凝聚囊后液移至 冰浴中，繼續(xù)攪拌至10。C以下； -
④ 取濃度37%的甲醛溶液一次性加入冰浴中的凝聚囊后液里，控制甲醛加入 量占凝聚囊后液總體積量的0.25%;攪拌，固化，保持0.5 1.5h后從冰洛中 取出；靜置，待微囊沉降后棄上清液，過濾，用蒸餾水洗至無甲醛氣味，再過 濾，用異丙醇脫水，繼續(xù)過濾得小顆粒，再用少量無水乙醇洗滌，35-5(TC干燥，，
即得黃色蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊；
⑤ 黃色蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊經(jīng)真空干燥、或噴霧干燥、或凍干，
優(yōu)選真空干燥；釆用粉碎，或壓榨,或研磨的方法制成微粒，然后過篩得到蘆
丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球。
所述的蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球中的蘆丁成分優(yōu)選后的包封率為
41. 4%-42. 7%。
所述的包封率=(微囊中所含藥物的質量/系統(tǒng)中的總藥量)x 100%。
所述的去離子水是經(jīng)離子交換柱過濾，軟化的自來水。
本發(fā)明與傳統(tǒng)"片劑、膠囊、注射液"等藥物制劑相比，存在著本質區(qū)別。
本發(fā)明所得蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球能保持較好的穩(wěn)定性；微球狀物的總
表面積增大，表面活性好，可防止藥物在胃內(nèi)失活和減少對胃的刺激性，更具
有緩釋作用，并能使藥物有效成分與胃腸道粘膜表面充分接觸；通過粘膜上皮 細胞穩(wěn)定吸收；可使藥物運行至腸液中，使藥物易溶于堿性腸液中而易于吸收。故本法制得的蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球有效地避免了蘆丁在水中的溶解度 極差的特性。從而具有起效迅速，生物利用度高，毒副作用小，用藥方便等特 點。
圖l:蘆丁的標準曲線； 圖2:自制微球粒徑分布圖3:不同實驗條件對蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球載藥量的影響；
圖4:不同實驗條件對蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球包封率的影響；
圖5:自制蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球的粒徑分布；
圖6:蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球與普通蘆丁累積釋放度的比較；
圖7:普通聲丁與聲丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球對大腸桿菌的生長抑制作用。
具體實施例方式
實施例1
聲丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球制備方法的實施研究 1、實施方法.
(1) 儀器定時電動攪拌器，恒溫水洛鍋，干燥箱，紫外分光光度計，顯微 鏡，電子天平，電磁爐等。
(2) 試劑蘆丁，蘆丁標準品，明膠，阿拉伯膠，醋酸，甲醛，無水乙醇等。
(3) 因素與水平為了優(yōu)化制備工藝，根據(jù)預試驗結果，確定囊材與囊心物 的質量比、成囊PH值、成囊溫度和固化時間為影響微囊成囊和包封率的主要因 素，故各取3水平，按正交試驗三水平表U(34)進行實驗，以包封率作為評價指 標，來篩選制備聲丁微囊的最佳條件。
(4) ,丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球的制備方法 具體制備方法步驟如下① 分別取3份阿拉伯膠與3份明膠，各加蒸餾水97份，置水洛中，使其分 別制成質量比為3%的阿拉伯膠和3%的明膠溶液，置5(TC水浴中，使其溫熱溶解 20分鐘，保溫，備用；
② 另取已研細過200目篩的蘆丁l份，準確稱重后，加上述明膠溶液，置 50-70。C水浴中混勻，且邊攪邊加入上述阿拉伯膠溶液，應用滴注器控制加入阿 拉伯膠溶液的速度，控制囊材與囊心物的質量比，最佳選6: 1,得混合溶液； 所稱的嚢材為阿拉伯膠和明膠，所稱的囊心物是蘆??；
③ 調(diào)整水洛的溫度，使步驟②的混合溶液維持在成囊溫度為50°C-70'C,優(yōu) 選為60°C;在攪拌條件下，以40滴/min的滴加速度加入濃度10%的醋酸溶液， 調(diào)節(jié)混合溶液pH值至3.5,得凝聚囊液；繼續(xù)攪拌5分鐘后，加入此時凝聚囊 液總體積的2倍量,溫度為30-4(TC的去離子水至凝聚囊液中；自水浴中取出凝 聚囊液，不斷攪拌，自然冷卻得凝聚囊后液；待溫度降至32-35'C時，將凝聚嚢 后液移至冰洛中，繼續(xù)攪拌至10'C以下；
④ 取濃度37%的甲醛溶液一次性加入冰洛中的凝聚囊后液里，控制甲醛加入 量占凝聚囊后液總體積量的0.25%;攪拌，固化，保持0.5 1.5h后從冰浴中
取出；靜置，待微囊沉降后棄上清液，過濾，用蒸餾水洗至無甲醛氣味，再過 濾，用異丙醇脫水，'繼續(xù)過濾得小顆粒，再用少量無水乙醇洗滌，35C干燥， 即得黃色蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微嚢。
⑤ 黃色蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊經(jīng)真空干燥、或噴霧干燥、或凍干，
優(yōu)選真空干燥；采用粉碎，或壓榨，或研磨的方法制成微粒,然后過篩得到蘆
丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球。
(5) ,丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊的質量評價
① 聲丁標準曲線的制定；
② 微囊的形態(tài)；
③ 微囊的粒徑分布；
8④蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊包封率的測定
精密稱取適量載藥微囊，加入到0.1 fliol， L—1 HC1介質中攪拌3 h，再用 0.10 mg* ml—1 NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 8,繼續(xù)快速攪拌3 h后得到澄清透明
黃色溶液。'將該溶液用蒸餾水稀釋至適當濃度，濾膜濾過，可見光分光光度法 測定(在500nra處測定吸光度A) ,丁-阿拉伯膠-明膠微囊中，丁含量，計算
載藥率(載藥率Ht囊中所含藥物質量/微囊的總質量xiooy。)。
,丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊載藥量的測定
精密稱取適量載藥微囊，加入到0.1 mol* L—1 HC1介質中攪拌3 h，再用 0.10 mg* mr1 NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 8,繼續(xù)快速攪拌3 h后得到澄清透明
黃色溶液。將該溶液用蒸餾水稀釋至適當濃度，濾膜濾過，可見光分光光度法 測定(在500nra處測定吸光度A) ,丁-阿拉伯膠-明膠微囊中蘆丁含量，計算 包封率(包封率-微囊中所含藥物的質量/系統(tǒng)中的總藥量x 100% )。 2、實施分析
(1) 標準曲線的制定以蘆丁對照品的質量濃度(C)為橫坐標，吸收度(A)為 縱坐標，得吸光度-濃度回歸方程為Y=10,41667x+0. 007H(R-0. "995),表明蘆 丁在0-0.072 ing' m"范圍內(nèi)線性關系良好。(見圖l)
(2) 微囊的形態(tài)用優(yōu)化后制備工藝制備的微囊，取微囊少許，輕涂于載坡 片上，在光學顯微鏡下觀察微囊的形態(tài)。可見微囊呈黃褐色，外形完整，分散 性好，表面較光滑，不黏結，大小分布均勻。
(3) 微囊的粒徑分布最佳制備條件為囊材與囊心物的質量比為6: 1、成囊 pH值為3.5、成囊溫度為60C和固化時間為1.5 h所制備的微囊79.5%分布在 30 pm -40 pm。(見圖2)
(4) ，丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊的包封率通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，A組、B 組、C組、D組、E組、F組、G組、H組、I組的載藥量呈波動變化，其中以D 組的包封率最大，包封率為41,9%。(見圖3)(5)蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊的載藥量通過實驗研究發(fā)現(xiàn)，A組、B 組、C組、D組、E組、F組、G組、H組、I組的載藥量呈波動變化，其中以G 組,丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊的載藥量最大。(見圖4)
對正交試驗進行方差分析，可得出囊材與囊心物的質量比對包封率的影響 最大，其次是固化時間，再次是成囊溫度，最后是成囊PH值。最優(yōu)制備條件為 囊材與囊心物的質量比為6: 1、成囊pH值為3.5、成囊溫度為6(TC和固化時間 為1.5 h。
3、 蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球的制備及質量評價
a)蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊，經(jīng)干燥后，釆用粉碎、壓榨、研磨、過
篩等方法得到蘆丁-阿拉^自膠-明膠緩釋微球。
(2)自制蘆丁-阿'拉伯膠-明膠緩釋微球與普通蘆丁累積釋放度的測定按中 國藥典2005年版二部附錄XC測定溶出度，以磷酸鹽溶液為釋放介質，用轉籃 法(籃周圍包一綢布以防微球漏出)測定自制蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球和 普通蘆丁中蘆丁的累積釋放度。
4、 實施結果
(1) 自制微球的形態(tài)所制得的微球呈黃色粉末狀顆粒，在光學顯微鏡下觀 察微球呈球形，無粘連，藥粉分布均勻。微球粒徑在IOO pm-120 nm范圍內(nèi)的 占82.7%。.(見圖5)
(2) 自制蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球與普通蘆丁累積釋放度的比較 自制蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球在8 h內(nèi)釋藥速率比較平緩；而普通蘆
丁在8h內(nèi)釋放度幾乎達到100%，且釋藥速率在6 h內(nèi)特別快，與自制蘆丁-阿 拉伯膠-明膠-緩釋微球比較不具有緩釋效應。(見圖6 )
5、 細胞實驗 (1)實驗方法
10將大腸桿菌制成濃度為1. 0 x 107ml的菌液，在無菌室里向5個三角瓶中分 別加入大腸桿菌菌液0.1 ral，隨后加入自制蘆丁微球溶液使終濃度分別為0.2 mg . mr1、 0. 4 mg . m1—1、 0. 6 mg . m廠1、 0. 8 mg . m廠1、 1， 0 mg . mr1;另設無藥 培養(yǎng)組作對照。分別在0 h、 2 h、 4 h、 6 h、 8 h在600咖處測定培養(yǎng)液的OD 值，并繪制大腸桿菌的生長曲線。
(2) 細胞實驗效果
自制蘆丁微球對大腸桿菌具有一定的生長抑制作用，聲丁微球的濃度小于 0.4 mg 'mr'時對大腸桿菌的生長抑制作用不強，而濃度在0.6-1. 0 mg ml， 間有很強的抑制作用，且濃度在1. 0 mg mr時幾乎完全抑制大腸桿菌的生長。 由此可知蘆丁微球對大腸桿菌的生長抑制具有劑量-反應關系，所以本實驗所制 備的蘆丁微球具有藥理學活性。自制蘆丁微球可作為制劑中間體。(見圖7)
(3) 結論
① 蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球最優(yōu)制備條件為囊材與囊心物的質量比 為6: 1、成囊pH值為3.5、成囊溫度為6(TC和固化時間為1.5 h。
② 蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球在6 h內(nèi)釋藥速率比較平緩。
③ 蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球對大腸桿菌的生長抑制具有劑量-反應關 系，可作為制劑中間體。
實施例2
蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球的制備方法
① 分別取3g阿拉伯膠與3g明膠，各加蒸餾水97g,置水洛中，使其分別制 成質量比為3%的阿拉伯膠和3%的明膠溶液，置50'C水洛中，使其溫熱溶解20 分鐘，保溫，備用；
② 另取已研細過200目篩的蘆丁 lg，準確稱重后，加上述明膠溶液，置50。C 水洛中混句，且邊攪拌邊加入上述阿拉伯膠溶液，應用滴注器控制加入阿拉伯膠溶液的速度，控制囊材與囊心物的質量比，最佳選6: 1,得混合溶液；所稱 的囊材為阿拉伯膠和明膠，所稱的囊心物是蘆??；
③調(diào)整水洛的溫度，使步驟②的混合溶液維持在成囊溫度為60°C;在攪拌 條件下，以40滴/min的滴加速度加入濃度10%的醋酸溶液，調(diào)節(jié)混合溶液pH 值至3. 5,得凝聚囊液；繼續(xù)攪拌5分鐘后，加入此時凝聚囊液總體積的2倍量， 溫度為30-4(TC的去離子水至凝聚囊液中；自水洛中取出凝聚囊液，不斷攪拌， 自然冷卻得凝聚囊后液；待溫度降至32-35'C時，將凝聚囊后液移至冰浴中，繼 續(xù)攪拌至10'C以下；
取濃度37%的甲醛溶液一次性加入冰浴中的凝聚囊后液里，控制甲醛加入 量占凝聚囊后液總體積量的0.25%;攪拌，固化，保持1.5 h后從冰洛中取出； 靜置，待微囊沉降后棄上清液，過濾，用蒸餾水洗至無甲醛氣味，再過濾，用 異丙醇脫水，繼續(xù)過濾得小顆粒，再用少量無水乙醇洗滌，35'C干燥，即得黃 色聲丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊。
⑤黃色蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊經(jīng)真空干燥；采用粉碎，或壓榨，或 研磨的方法制成微粒，然后過篩得到蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球。
將本實施例得到的蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球分別用于累積釋放度的測 定和大腸桿菌生長抑制試驗。試驗結果表明，自制蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微 球與普通聲丁相比較在8 h內(nèi)釋藥速率比較平緩，具有緩釋效應；自制蘆丁-阿
拉伯膠-明膠緩釋微球對大腸桿菌的生長抑制具有劑量-反應關系，可作為制劑 中間體。
權利要求
1、一種蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球，其特征是以蘆丁為主要原料，加入天然高分子材料阿拉伯膠和明膠作為基質骨架制備而成；其重量配比是蘆丁∶阿拉伯膠∶明膠＝1∶3∶3。
2、 一種聲丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球的制備方法，其特征在于制備步驟 如下① 分別取3份阿拉伯膠與3份明膠，各加蒸餾水97份，置水洛中，使其分 別制成質量比為3%的阿拉伯膠和3%的明膠溶液，置50-7(TC水洛中，使其溫熱 溶解20分鐘，保溫，備用；② 另取已研細過200目篩的,丁 l份，準確稱重后，加上述明膠溶液，置 50-70'C水浴中混勾，且邊攪邊加入上述阿拉伯膠溶液，應用滴注器控制加入阿 拉伯膠溶液的速度，控制囊材與囊心物的質量比為4~8: 1，得混合溶液；所稱的囊材為阿拉伯膠和明膠，所稱的囊心物是蘆?。虎?維持步驟②混合溶液的成囊溫度為5(TC-7(TC,在攪拌條件下，以40滴/min的滴加速度加入濃度10y。的醋酸溶液，調(diào)節(jié)混合溶液pH值至3. 5，得凝聚 囊-液；繼續(xù)攪拌5分鐘后，加入溫度為30-40t:的去離子水至凝聚囊液中，去離 子水是該凝聚囊液總體積的2倍量、；自水洛中取出凝聚囊液，不斷攪拌，自然 冷卻得凝聚囊后液；待溫度降至32-35t:時，將凝聚囊后液移至冰洛中，繼續(xù)攪 拌至10'C以下；④ 取濃度37%的甲醛溶液一次性加入冰浴中的凝聚囊后液里，控制甲醛加入 量占凝聚囊后液總體積量的0.25%;攪拌，固化，保持0.5 -1.5h后從冰洛中 取出；靜置，待微囊沉降后棄上清液，過濾，用蒸餾水洗至無甲醛氣味，再過 濾，用異丙醇脫水，繼續(xù)過濾得小顆粒，再用少量無水乙醇洗滌，35-50"干燥，即得黃色蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊；(D黃色蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微囊經(jīng)真空干燥、或噴霧干燥、或凍干； 釆用粉碎，或壓榨，或研磨的方法制成微粒，然后過篩得到蘆丁-阿拉伯膠-明 膠緩釋微球。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球及其制備方法，屬于微生物感染的輔助治療藥物。是以蘆丁為主要原料，加入采用天然高分子材料阿拉伯膠、明膠作為基質骨架制備而成，其重量配比是蘆丁∶阿拉伯膠∶明膠＝1∶3∶3；本發(fā)明所制得的蘆丁-阿拉伯膠-明膠緩釋微球，有效地避免了蘆丁在水中的溶解度極差的特性。從而具有起效迅速，生物利用度高，毒副作用小，用藥方便等特點。
文檔編號A61P3/00GK101584682SQ20091004371
公開日2009年11月25日 申請日期2009年6月16日 優(yōu)先權日2009年6月16日
發(fā)明者輝 張 申請人:輝 張