專利名稱：：抗il-13抗體調(diào)配物和其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本申請案是關(guān)于抗體領(lǐng)域，且更具體地說是關(guān)于抗體的儲(chǔ)存。
背景技術(shù)：
：抗體和源自抗體的蛋白質(zhì)具有許多應(yīng)用。通過使用相對簡單的調(diào)配物將抗體儲(chǔ)存在促進(jìn)抗體在各種條件下穩(wěn)定性的調(diào)配物中會(huì)促進(jìn)抗體在所述應(yīng)用中的使用。若調(diào)配物用于治療用途，則重要的是調(diào)配物允許儲(chǔ)存而活性組份的活性沒有無法接受的損失，使不期望產(chǎn)品(例如無活性聚集物)的積聚降到最低，供給適當(dāng)濃度的活性組份，且不包含與治療應(yīng)用不相容的組份。用于儲(chǔ)存欲用于下游處理的蛋白質(zhì)(例如，欲偶聯(lián)到另一實(shí)體以制造治療劑的蛋白質(zhì))的調(diào)配物必須不含將干擾制造過程的組份。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是關(guān)于用于儲(chǔ)存抗IL-13抗體的調(diào)配物。所述調(diào)配物是用作(例如)醫(yī)藥調(diào)配物。因此，在一方面，本發(fā)明是關(guān)于抗IL-I3抗體調(diào)配物，其包括(a)抗IL-13抗體；(b)冷凍保護(hù)劑；和(c)緩沖液，以使所述調(diào)配物的pH為約5.5到6.5。在一些實(shí)施例中，所述調(diào)配物是液體調(diào)配物、凍干調(diào)配物、可重構(gòu)凍千調(diào)配物、或氣溶膠調(diào)配物。在某些實(shí)施例中，抗IL-13在調(diào)配物中的濃度為約0.5mg/ml到約250mg/ml、約0.5mg/ml到約45mg/ml、約0.5mg/ml到約100mg/ml、約100mg/ml到約200mg/ml、或約50mg/ml到約250mg/ml。在調(diào)配物的一些實(shí)施例中，抗IL-13抗體是人源化抗體(例如，部分人源化抗體或完全人源化抗體)。在一些情況下，抗體是K輕鏈構(gòu)建抗體。在一些實(shí)施例中，抗體是IgGl抗體、IgG2抗體或IgG4抗體。在某些實(shí)施例中，調(diào)配物中的抗IL-13抗體是單克隆抗體。在一些情況下，調(diào)配物的抗IL-13抗體是在美國專利申請案第11/M9，309號(美國專利公開案第20060073148號)、美國專利申請案第11/155,843號(美國專利公開案第20060063228號)或WO2006/085938中闡述的抗體。在特定實(shí)施例中，抗IL-13抗體是IMA-638(參見圖34)或IMA-026(參見圖35)。調(diào)配物的冷凍保護(hù)劑可為(例如)約2.5%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖。在一些情況下，調(diào)配物的冷凍保護(hù)劑不是組氨酸。在一些實(shí)施例中，調(diào)配物中的緩沖液為約4mM到約60mM的組氨酸緩沖液、約5mM到約25mM的琥珀酸鹽緩沖液、或約5mM到約25mM的乙酸鹽緩沖液。調(diào)配物緩沖液的pH通常在約5.0與7.0之間。在一些特定實(shí)施例中，調(diào)配物緩沖液的pH為5.0、5.5、6.0或6.5。除冷凍保護(hù)劑和緩沖液以外，本發(fā)明的調(diào)配物可含有其它賦形劑。在一些實(shí)施例中，調(diào)配物包括濃度為約0%到0.2%的表面活性劑。在一些情況下，調(diào)配物含有大于0%且至多約0.2%的聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80或聚山梨醇酯-85。在特定實(shí)施例中，調(diào)配物含有0.001%、0.002%、0.003%、0.004%、0.005%、0.006%、0.007%、0.008%、0.009%、0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.11%、0.12%、0.13%、0.14%、0.15%、0.16%、0.17%、0.18%、0.19%或0.2%的聚山梨醇酯-80。調(diào)配物還可包括約0.01%到約5%的精氨酸。在特定實(shí)施例中，調(diào)配物含有0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.11%、0.12%、0.13%、0.14%、0.15%、0.16%、0.17%、0.18%、0.19%或0.2%、0.3%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1.0%、1.1%、1.2%、1.30%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、2%、2.5%、3%、3.5%、4.0%、4.5%或5%的精氨酸。在一些實(shí)施例中，調(diào)配物還包括約0.001%到約0.05%的吐溫(Tween)20或吐溫80。在特定實(shí)施例中，調(diào)配物含有0.005%、0.008%、0.01%、0.2%、0.03%、0.04%、或0.05%的吐溫20或吐溫80。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明的調(diào)配物可含有表面活性劑和精氨酸、精氨酸和吐溫、或精氮酸、吐溫和除吐溫以外的表面活性劑。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物還可包括以下物質(zhì)中的一種或多種約1%到約10%的山梨醇、約0.1%到約2%的甘氨酸、約5mM到約150mM的甲硫氨酸、和約5mM到約100mM的氯化鈉。調(diào)配物還可包括第二抗體或其抗原結(jié)合片段。例如，第二抗體可為抗IL-13抗體或其IL-13結(jié)合片段，其中所述第二IL-13抗體的表位特異性不同于調(diào)配物的第一IL-13抗體?？膳c抗IL-13抗體共同調(diào)配的抗體的其它非限制性實(shí)例包括抗IgE抗體或其IgE結(jié)合片段、抗IL-4抗體或其IL-4結(jié)合片段、抗TNF-a抗體或其TNF-a結(jié)合片段、抗C5抗體或其補(bǔ)體結(jié)合片段、和抗IL-9抗體或其IL-9結(jié)合片段。調(diào)配物還可包括用于治療炎性病癥的第二治療或藥理活性劑。在調(diào)配物的某些實(shí)施例中，(a)抗體是人源化鼠抗IL-13抗體；(b)冷凍保護(hù)劑是約0.02%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖；且(c)緩沖液是約4mM到約60mM的組氨酸緩沖液。在一些情況下，此調(diào)配物還含有約0.01%到約5%的精氨酸。在某些情況下，此調(diào)配物還含有約0.001%到約0.05%的吐溫。在其它情況下，此調(diào)配物含有約0.01%到約5%的精氨酸和約0.001%到約0.05%的吐溫。在一些實(shí)施例中，調(diào)配物進(jìn)一步包含以下物質(zhì)中的一種或多種約1%到約10%的山梨醇、約0.1%到約2%的甘氨酸、約5mM到約150mM的甲硫氨酸、和約5mM到約100mM的氯化鈉。在一些情況下，此調(diào)配物還含有大于0%且至多約0.2%的表面活性劑(例如，聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-45、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-85)。在調(diào)配物的某些實(shí)施例中，(a)抗體是IMA-638或IMA-026;(b)冷凍保護(hù)劑是約0.02%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖；且(c)緩沖液是約10mM的琥珀酸鹽緩沖液，pH6.0。在調(diào)配物的其它實(shí)施例中，(a)抗體是IMA-638或IMA-026抗體；(b)冷凍保護(hù)劑是約0.02%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖；且(c)緩沖液是約IOmM的乙酸鹽緩沖液，pH6.0。在另一方面，提供包含以下物質(zhì)的氣溶膠調(diào)配物(a)抗IL-13抗體；(b)約5%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖；和(c)pH為約5.5到6.5的緩沖液。在一些情況下，此調(diào)配物還含有約0.01%到約5%的精氨酸。在某些情況下，此調(diào)配物還含有約0.001%到約0.05%的吐溫。在其它情況下，此調(diào)配物含有約0.01%到約5%的精氨酸和約0.001%到約0.05%的吐溫。在一些實(shí)施例中，此調(diào)配物包含以下物質(zhì)中的一種或多種約1%到約10X的山梨醇、約0.1X到約2X的甘氨酸、約5mM到約150mM的甲硫氨酸、和約5mM到約100mM的氯化鈉。在一些情況下，此調(diào)配物含有大于0%且至多約0.2%的表面活性劑(例如，聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-85)。在一些情況下，氣溶膠調(diào)配物還包括用于治療哮喘或慢性阻塞性肺病的治療劑。在另一方面，提供包含以下物質(zhì)的凍干調(diào)配物(a)抗IL-13抗體；(b)約5%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖；和(c)pH為約5.5到6.5的緩沖液。在一些情況下，此調(diào)配物還含有約0.01%到約5%的精氨酸。在某些情況下，此調(diào)配物還含有約0.001%到約0.05%的吐溫。在其它情況下，此調(diào)配物含有約0.01%到約5%的精氨酸和約0.001%到約0.05%的吐溫。在一些實(shí)施例中，調(diào)配物包含以下物質(zhì)中的一種或多種約1%到約10%的山梨醇、約0.1%到約2%的甘氨酸、約5mM到約150mM的甲硫氨酸、和約5mM到約100mM的氯化鈉。在一些情況下，此調(diào)配物含有大于0%且至多約0.2%的表面活性劑(例如，聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-85)。在一些情況下，凍干調(diào)配物還包括用于治療哮喘或慢性阻塞性肺病的治療劑。在某些實(shí)施例中，在調(diào)配物中在-8(TC下儲(chǔ)存至少18個(gè)月之后、在-8(TC下儲(chǔ)存至少24個(gè)月之后、在-2(TC下儲(chǔ)存至少18個(gè)月之后、在-2(TC下儲(chǔ)存至少24個(gè)月之后、在2。C到8。C下儲(chǔ)存至少18個(gè)月之后、在2。C到8匸下儲(chǔ)存至少24個(gè)月之后、在25。C下儲(chǔ)存至少18個(gè)月之后、或在25'C下儲(chǔ)存至少24個(gè)月之后維持抗體的完整性。在一些情況下，在-8(TC下儲(chǔ)存至少18個(gè)月之后、在-80'C下儲(chǔ)存至少24個(gè)月之后、在-20。C下儲(chǔ)存至少18個(gè)月之后、在-20'C下儲(chǔ)存至少24個(gè)月之后、在2'C到8'C下儲(chǔ)存至少18個(gè)月之后、在2'C到8'C下儲(chǔ)存至少24個(gè)月之后、在25t下儲(chǔ)存至少18個(gè)月之后、或在25'C下儲(chǔ)存至少24個(gè)月之后，調(diào)配物包括小于10X的高分子量(HMW)物質(zhì)。本發(fā)明包括其中使用尺寸排除-高效液相色譜(SEC-HPLC)分析HMW物質(zhì)的實(shí)施例。本發(fā)明還包括以下實(shí)施例其中在-8(TC下至少18個(gè)月之后、在-8(TC下至少24個(gè)月之后、在-20。C下至少18個(gè)月之后、在-20。C下至少24個(gè)月之后、在2。C到8。C下至少18個(gè)月之后、在2'C到8'C下至少24個(gè)月之后、在25'C下至少18個(gè)月之后、或在25'C下至少24個(gè)月之后，調(diào)配物包含小于10X的低分子量(LMW)物質(zhì)。在某些情況下，LMW物質(zhì)是使用SEC-HPLC進(jìn)行分析。在調(diào)配物的一些實(shí)施例中，一旦對凍干抗體調(diào)配物進(jìn)行重構(gòu)，則與凍干之前的調(diào)配物相比調(diào)配物保持至少90%的抗體結(jié)構(gòu)?？贵w結(jié)構(gòu)是通過(例如)結(jié)合分析、表面電荷分析、生物分析、或HMW物質(zhì)與LMW物質(zhì)的比例來測定。在另一方面，本發(fā)明是關(guān)于用于治療IL-13相關(guān)病癥的醫(yī)藥組合物。醫(yī)藥組合物包括本文所述的抗IL-13抗體調(diào)配物(例如，包含人源化抗體的調(diào)配物)和本文所述的其它特征。在另一方面，本發(fā)明是關(guān)于醫(yī)藥組合物的制品，所述組合物包括抗體調(diào)配物，所述調(diào)配物包括(a)抗IL-13抗體；(b)冷凍保護(hù)劑；和(c)緩沖液，以使所述調(diào)配物的pH為約5.5到6.5。在一些情況下，醫(yī)藥組合物的抗IL-13抗體是在美國專利申請案第11/149,309號(美國專利公開案第20060073148號)、美國專利申請案第11/155,843號(美國專利公開案第20060063228號)或WO2006/085938中闡述的抗體。在特定實(shí)施例中，抗IL-13抗體是IMA-638或IMA-026。在一些情況下，醫(yī)藥組合物還含有約0.01%到約5%的精氨酸。在某些情況下，醫(yī)藥組合物還含有約0.001%到約0.05%的吐溫。在其它情況下，醫(yī)藥組合物含有約0.01%到約5%的精氨酸和約0.001%到約0.05%的吐溫。在一些實(shí)施例中，醫(yī)藥組合物包含以下物質(zhì)中的一種或多種約1%到約10%的山梨醇、約0.1%到約2%的甘氨酸、約5mM到約150mM的甲硫氨酸、和約5mM到約100mM的氯化鈉。在一些情況下，此調(diào)配物含有大于0%且至多約0.2%的表面活性劑(例如，聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-85)。在另一方面，本發(fā)明是關(guān)于治療IL-13相關(guān)病癥的方法，所述方法包含投與醫(yī)藥有效量的IL-13抗體調(diào)配物。調(diào)配物包括(a)抗IL-13抗體；(b)冷凍保護(hù)劑；和(c)緩沖液，以使所述調(diào)配物的pH為約5.5到6.5。在一些情況下，調(diào)配物的抗IL-13抗體是在美國專利申請案第11/149,309號(美國專利公開案第20060073148號)、美國專利申請案第11/155,843號(美國專利公開案第20060063228號)或WO2006/085938中闡述的抗體。在特定實(shí)施例中，抗IL-13抗體是IMA-638或IMA-026。在一些情況下，調(diào)配物還含有約0.01%到約5%的精氨酸。在某些情況下，調(diào)配物還含有約0.001%到約0.05%的吐溫。在其它情況下，調(diào)配物含有約0.01%到約5%的精氨酸和約0.001%到約0.05%的吐溫。在一些實(shí)施例中，調(diào)配物包含以下物質(zhì)中的一種或多種約1%到約10%的山梨醇、約0.1%到約2%的甘氨酸、約5mM到約150mM的甲硫氨酸、和約5mM到約100mM的氯化鈉。在一些情況下，此調(diào)配物含有大于0%且至多約0.2%的表面活性劑(例如，聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-85)。在一些實(shí)施例中，本發(fā)明方法包括聯(lián)合治療。聯(lián)合治療是指兩種或兩種以上的不同治療化合物組合的任何投與形式，以使當(dāng)先前投與的治療化合物在體內(nèi)仍提供有效作用時(shí)投與第二種化合物(例如，所述兩種化合物同時(shí)在患者體內(nèi)提供有效作用，其可包括所述兩種化合物的協(xié)同效應(yīng))。聯(lián)合治療可包括抗IL-13抗體分子與一種或多種額外治療劑共同調(diào)配和/或共同投與，例如，一種或多種細(xì)胞因子和生長因子抑制劑、免疫抑制劑、抗炎劑(例如，全身性抗炎劑)、代謝抑制劑、酶抑制劑、和/或細(xì)胞毒性或細(xì)胞生長抑制劑。IL-13結(jié)合劑和其它治療劑可也分開投與。在方法的某些實(shí)施例中，IL-13相關(guān)病癥是炎性疾病。在一些實(shí)施例中，炎性疾病是選自由關(guān)節(jié)炎、哮喘、炎性腸病、炎性皮膚病、多發(fā)性硬化、骨質(zhì)疏松癥、肌腱炎、過敏性病癥、由宿主損傷導(dǎo)致的炎癥、敗血癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、易激性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、牛皮癬、全身性紅斑性狼瘡、和任何其它自身免疫疾病組成的群組。在方法的某些實(shí)施例中，IL-13相關(guān)病癥是過敏性哮喘、非過敏性哮喘、過敏性哮喘和非過敏性哮喘的組合、運(yùn)動(dòng)誘發(fā)哮喘、藥物誘發(fā)哮喘、職業(yè)性哮喘、晚期哮喘、B-細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病(B-細(xì)胞CLL)、何杰金氏病(Hodgkin，sdisease)、血吸蟲病中的組織纖維化、自身免疫風(fēng)濕性疾病、炎性腸病癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、涉及氣管發(fā)炎的病狀、嗜酸性細(xì)胞增多癥、纖維化和過度粘液產(chǎn)生(例如，囊性纖維化和肺纖維化)；特應(yīng)性病癥(例如，過敏性鼻炎)；皮膚的炎性和/或自身免疫病狀(例如，特應(yīng)性皮炎)、胃腸道器官的炎性和/或自身免疫病狀(例如，炎性腸病(IBD))、肝的炎性和/或自身免疫病狀(例如，肝硬化)；病毒感染；其它器官的硬皮病和纖維化(例如肝纖維化)、過敏性結(jié)膜炎、濕疹、蕁麻疹、食物過敏、慢性阻塞性肺病(COPD)、潰瘍性結(jié)腸炎、勞氏肉瘤病毒(RousSarcomaVirus)感染、葡萄膜炎、硬皮病、或骨質(zhì)疏松癥。在方法的一些實(shí)施例中，抗體調(diào)配物是通過吸入、噴霧或注射來投與。在一些實(shí)施例中，提供包含本文所述調(diào)配物的預(yù)裝填溶液的可注射注射器。在特定實(shí)施例中，預(yù)裝填注射器包含100mg/ml的抗IL-13抗體(例如，IMA-026、IMA-638)、10mM的組氨酸、5%的蔗糖、0.01%的吐溫-80、40mM的NaCl，pH6.0。在另一特定實(shí)施例中，預(yù)裝填注射器中的調(diào)配物進(jìn)一步包含約0.1%與約2%之間的精氨酸。在一些情況下，注射器提供有自動(dòng)注射器裝置。在其它實(shí)施例中，提供用于經(jīng)鼻投與本文所述調(diào)配物的裝置。在一些情況下，提供用于投與本文所述調(diào)配物的經(jīng)皮貼片。在另一些方面，提供用于投與本文所述調(diào)配物的靜脈輸注袋。在特定實(shí)施例中，靜脈輸注袋提供有生理鹽水或5%葡萄糖。在其它實(shí)施例中，提供包含本文所述調(diào)配物的容器的試劑盒。所述試劑盒可任選的包括使用說明書。在一些情況下，試劑盒中的容器是塑料或玻璃小瓶或可注射注射器。除非另有說明，否則本文所用所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與熟習(xí)本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
者通常所了解的含義相同的含義。盡管與本文所述方法和材料類似或等同的方法和材料皆可用于實(shí)踐或試驗(yàn)本發(fā)明，但下文描述適宜的方法和材料。本文所提及的所有出版物、專利申請案、專利、和其它參考文獻(xiàn)的全部內(nèi)容皆以引用方式并入本文中。此外，所述材料、方法和實(shí)例僅是例示性而非意欲限制本發(fā)明。依據(jù)詳細(xì)說明、圖式和權(quán)利要求書，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將顯而易見。圖1是描繪試驗(yàn)結(jié)果的圖表，其中經(jīng)凍干儲(chǔ)存的抗IL-13抗體調(diào)配物在適當(dāng)時(shí)間點(diǎn)重構(gòu)后的XHMW物質(zhì)是使用尺寸排除色譜-高效液相色譜(SEC-HPLC)測定。％HMW=HMW物質(zhì)中總蛋白質(zhì)的百分比。將試樣在4"C、25X:和4(TC下儲(chǔ)存長達(dá)24個(gè)月，然后進(jìn)行重構(gòu)。圖2是描繪試驗(yàn)結(jié)果的圖表，其中經(jīng)凍干儲(chǔ)存的抗IL-13抗體調(diào)配物在適當(dāng)時(shí)間點(diǎn)重構(gòu)后的生物活性是作為抗IL-13抗體標(biāo)準(zhǔn)物的百分比來測定。數(shù)據(jù)表示為比活性(以單位/毫克蛋白質(zhì)表示)。將試樣在4T:、25'C和4(TC下儲(chǔ)存長達(dá)24個(gè)月，然后進(jìn)行重構(gòu)。圖3是描繪試驗(yàn)結(jié)果的圖表，其中100mg/ml液體抗IL-13抗體調(diào)配物中HMW物質(zhì)的百分比是在4'C、15°C、25X:和4(TC下儲(chǔ)存長達(dá)24個(gè)月后使用SEC-HPLC測定。圖4是描繪試驗(yàn)結(jié)果的圖表，其中100mg/ml液體抗IL-13抗體調(diào)配物中LMW物質(zhì)的百分比是在4。C、15°C、25'C和40。C下儲(chǔ)存長達(dá)24個(gè)月后使用SEC-HPLC測定。圖5是描繪試驗(yàn)結(jié)果的圖表，其中液體調(diào)配物中抗IL-13抗體的％結(jié)合活性是在4°C、15°C、25。C和4(TC下儲(chǔ)存長達(dá)6個(gè)月之后進(jìn)行分析。結(jié)合活性表示為相對于標(biāo)準(zhǔn)物的百分比。圖6是描繪試驗(yàn)結(jié)果的圖表，其中100mg/ml的抗IL-13抗體調(diào)配物的生物活性是作為抗IL-13抗體標(biāo)準(zhǔn)物的百分比來測定。數(shù)據(jù)表示為比活性(以單位/毫克蛋白質(zhì)表示)。試樣已在4。C、15°C、25。C和40。C下儲(chǔ)存長達(dá)24個(gè)月。圖7是描繪分析在4。C、15°C、25。C和4(TC下儲(chǔ)存長達(dá)24個(gè)月的液體調(diào)配物中蛋白質(zhì)濃度的試驗(yàn)結(jié)果的圖表。圖8是用以測定冷凍濃縮無定形相的玻璃轉(zhuǎn)化溫度的次周圍環(huán)境調(diào)制式差示掃描量熱法(mDSC)的圖表。圖9A是抗IL-13抗體在-25'C下的冷凍干燥顯微鏡圖像的復(fù)制品。圖9B是從-25'C升高到-15T:的抗IL-13抗體的冷凍干燥顯微鏡圖像的復(fù)制品。圖9C是從-15。C降到-18。C的抗IL-13抗體的冷凍干燥顯微鏡圖像的復(fù)制品。圖9D是從-18'C升高到-8i:的抗IL-13抗體的冷凍干燥顯微鏡圖像的復(fù)制品。圖9E是從-8T:升高到-4r的抗IL-13抗體的冷凍干燥顯微鏡圖像的復(fù)制品。圖9F是從-4。C降到-16'C的抗IL-13抗體的冷凍干燥顯微鏡圖像的復(fù)制品。圖10是描繪攻擊性凍干循環(huán)的循環(huán)軌跡的圖表。展示兩種不同抗體組合物(標(biāo)記為MYO-029和IMA-638)的存架溫度(shelf)和露點(diǎn)溫度。所示壓力是使用電容式壓力計(jì)和皮拉尼真空計(jì)(Piranigauge)進(jìn)行分析。圖11是描繪對照凍干循環(huán)的循環(huán)軌跡的圖表。溫度和壓力試樣如同圖IO—樣。圖12是描繪退火凍干循環(huán)的循環(huán)軌跡的圖表。溫度和壓力試樣如同圖IO—樣。圖13是描繪在初次干燥期間分別對應(yīng)于圖10-12的攻擊性凍干循環(huán)、對照凍干和退火凍干循環(huán)的產(chǎn)品溫度的圖表。圖14是描繪對照試樣的調(diào)制式差示掃描量熱溫度記錄圖。觀察到兩個(gè)玻璃轉(zhuǎn)化溫度(對可逆熱流進(jìn)行測量)，一個(gè)在51.3'C處開始且一個(gè)在74.5"C處開始。圖15是描繪三個(gè)試樣(對照、攻擊性和退火)在酰胺I區(qū)中傅里葉(Fourier)變換紅外光譜結(jié)果的圖表。圖16是描繪試樣的重構(gòu)時(shí)間隨儲(chǔ)存時(shí)間變化的圖表。試樣是對照、攻擊性和退火試樣，且在5'C或5(TC下儲(chǔ)存。圖17是描繪蛋白質(zhì)濃度的圖表，如使用UV-可見光光譜(A，)所分析。試樣與用于圖16的一樣。圖18是描繪溶液光散射的圖表，如通過UV-可見光光譜(A42o)所分析。試樣與用于圖16的一樣。圖19是描繪使用SEC-HPL分析CHMW物質(zhì)結(jié)果的圖表。試樣與用于圖16的一樣。圖20是描繪測試抗體的結(jié)合親和力隨儲(chǔ)存時(shí)間變化的圖表。試樣與用于圖16的一樣。圖21是描繪在小瓶和注射器中所實(shí)施的IMA-638賦形劑篩選中％回收的條形圖，其中IMA-638抗體的濃度是通過UV/Vis測量。圖22是描繪在小瓶和注射器中所實(shí)施的IMA-638賦形劑篩選中在4(TC下從t=0到6周HMW物質(zhì)的％變化的條形圖。圖23是描繪在小瓶和注射器中所實(shí)施的IMA-638賦形劑篩選中在40'C下從t=0到6周LMW物質(zhì)的X變化的條形圖。圖24是描繪在室溫下在凝膠振蕩器上以約200rpm振蕩24小時(shí)之后有或沒有吐溫的調(diào)配物中IMA-638濃度的條形圖。圖25是描繪在室溫下在凝膠振蕩器上以約200rpm振蕩24小時(shí)之后有或沒有吐溫的調(diào)配物中IMA-638的XHMW物質(zhì)的條形圖。圖26是描繪在一個(gè)(FT1)、三個(gè)(FT3)和五個(gè)(FT5)冷凍-解凍循環(huán)(冷凍循環(huán)在-80。C下；解凍循環(huán)在37。C下)之后有或沒有吐溫的調(diào)配物中IMA-638濃度的條形圖。圖27是描繪在一個(gè)(FT1)、三個(gè)(FT3)和五個(gè)(FT5)冷凍-解凍循環(huán)(冷凍循環(huán)在-80'C下；解凍循環(huán)在37'C下)之后有或沒有吐溫的調(diào)配物中IMA-638的XHMW物質(zhì)的條形圖。圖28是描繪在注射器中在4'C下儲(chǔ)存長達(dá)7個(gè)月的IMA-638液體調(diào)配物中的％HMW物質(zhì)的圖表。圖29是描繪在注射器中在25t:下儲(chǔ)存長達(dá)7個(gè)月的IMA-638液體調(diào)配物中的％HMW物質(zhì)的圖表。圖30是描繪在注射器中在40'C下儲(chǔ)存長達(dá)7個(gè)月的IMA-638液體調(diào)配物中的％HMW物質(zhì)的圖表。圖31是描繪在注射器中在40'C下儲(chǔ)存長達(dá)28周的IMA-638液體調(diào)配物中的％HMW物質(zhì)的圖表，所述調(diào)配物含有0.01%的吐溫和0%與2%之間的精氨酸。圖32是描繪IL-13抗體IMA-026的XHMW物質(zhì)的圖表，所述IMA-026是在凍干并在4°C、25'C和4(TC下儲(chǔ)存長達(dá)12個(gè)月之后進(jìn)行重構(gòu)。圖33是描繪IMA-026抗體生物活性的圖表，所述IMA-026是在凍干并在4°C、25'C和4(TC下儲(chǔ)存長達(dá)12個(gè)月之后進(jìn)行重構(gòu)。圖34提供IMA-638抗體重鏈(SEQIDNO:l)和輕鏈(SEQIDN0:2)的氨基酸序列。僅在成熟分泌型IMA-638中觀察到少量由重鏈DNA序列編碼的最后一個(gè)氨基酸殘基Lys448且預(yù)期在通過中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞蛋白酶進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)處理期間去除大部分單克隆抗體。因此，IMA-638重鏈的羧基末端是Gly447。已在重組和血漿來源抗體中觀察到羧基末端賴氨酸處理且看來并不影響其功能。圖35提供IMA-026抗體重鏈(SEQIDNO:3)和輕鏈(SEQIDNO:4)的氨基酸序列。具體實(shí)施例方式己鑒別出適用于儲(chǔ)存抗IL-13抗體的包括抗IL-13抗體的調(diào)配物("調(diào)配物")。作為液體或作為凍干產(chǎn)品在各種條件下長期儲(chǔ)存之后調(diào)配物中的抗體通常維持完整性。例如，暴露于寬范圍的儲(chǔ)存溫度(例如，-S(TC到40°C)、剪切應(yīng)力(例如，振蕩)和界面應(yīng)力(冷凍-解凍循環(huán))之后充分維持抗體的完整性。此外，對于凍干物質(zhì)，在重構(gòu)過程期間充分維持抗體的完整性。另外，充分維持抗體完整性以用作藥劑，如由LMW物質(zhì)和HMW物質(zhì)相對較低的積聚、活體外生物活性、活體外結(jié)合活性和噴霧后的穩(wěn)定性所表明。調(diào)配物本文所述的抗IL-13抗體調(diào)配物包括抗IL-13抗體、可用作冷凍保護(hù)劑的化合物、和緩沖液。調(diào)配物的pH通常為pH5.5-6.5。在一些實(shí)施例中，調(diào)配物是作為液體儲(chǔ)存。在其它實(shí)施例中，將調(diào)配物制成液體且然后通過(例如)凍干或噴霧干燥來干燥，然后儲(chǔ)存。干燥調(diào)配物可作為干燥復(fù)合物(例如，氣溶膠或粉末)使用，或使用(例如)水、緩沖液或其它適當(dāng)液體重構(gòu)到其初始或另一濃度。抗體純化工藝經(jīng)設(shè)計(jì)以將15抗體轉(zhuǎn)移到適用于作為冷凍液體長期儲(chǔ)存且隨后用于冷凍干燥的調(diào)配物中(例如，使用組氨酸/蔗糖調(diào)配物)。調(diào)配物凍干后具有特定濃度的蛋白質(zhì)。然后凍干調(diào)配物可視需要利用適宜稀釋劑(例如，水)重構(gòu)以使最初調(diào)配物組份重新溶解到期望濃度，所述濃度通常與凍干前的濃度相同或比所述濃度高。凍干調(diào)配物可經(jīng)重構(gòu)以產(chǎn)生濃度不同于初始濃度(即，凍干前)的調(diào)配物，此取決于添加到凍干物中的水或稀釋劑相對于開始冷凍-干燥時(shí)液體的體積的量(例如，實(shí)例6，參見下文)。適宜抗IL-B抗體調(diào)配物可通過分析抗體完整性的一個(gè)或多個(gè)參數(shù)來鑒別。所分析的參數(shù)通常是HMW物質(zhì)的百分比或LMW物質(zhì)的百分比。HMW物質(zhì)或LMW物質(zhì)的百分比是作為調(diào)配物中總蛋白質(zhì)含量的百分比或作為百分比增加隨時(shí)間的變化(即，在儲(chǔ)存期間)來測定?？山邮苷{(diào)配物作為凍干物或液體在2x:到4(rc下(例如，在2'C到25。C下、在2。C到15'C下、在2'C到8'C下、在約2。C下或在約25"C下)儲(chǔ)存至少1年后其中HMW物質(zhì)的總百分比為不大于10X的HMW物質(zhì)或作為凍干物或液體在2'C至U4(TC下儲(chǔ)存至少1年后不大于約10%的LMW物質(zhì)。"約"是指所列舉數(shù)值±20%。因此，"約20。C"是指16。C到24。C。通常，穩(wěn)定性范圍對于冷藏產(chǎn)品是在2°C-8'C下、且對于室溫產(chǎn)品是在25T:下具有小于10X的HMW/LMW。作為凍干物儲(chǔ)存的調(diào)配物中的HMW物質(zhì)或LMW物質(zhì)是在凍干物重構(gòu)之后進(jìn)行分析。4(TC是通常用于測試穩(wěn)定性并測定短期暴露于非儲(chǔ)存條件(例如，在產(chǎn)品轉(zhuǎn)移期間或運(yùn)輸期間可能出現(xiàn)的條件)下的穩(wěn)定性的加速條件。當(dāng)所分析參數(shù)是HMW物質(zhì)或LMW物質(zhì)的百分比變化時(shí)，將儲(chǔ)存后一種或兩種物質(zhì)中的％總蛋白質(zhì)與儲(chǔ)存前(例如，調(diào)配物剛制備完時(shí))一種或兩種物質(zhì)中的％總蛋白質(zhì)相比較。測定百分比差異。通常，在2。-8'C或25'C下儲(chǔ)存約18到24個(gè)月之后液體調(diào)配物中HMW物質(zhì)或LMW物質(zhì)中蛋白質(zhì)的X變化不大于10%，例如，不大于約8%、不大于約7%、不大于約6%、不大于約5%、不大于約4%、或不大于約3%。"約"是指所列舉數(shù)值±20%。因此，約10%是指8%到12%。作為凍干產(chǎn)品儲(chǔ)存的調(diào)配物在2'C-8'C(例如，4°C)下儲(chǔ)存約18到24個(gè)月之后重構(gòu)后其通常具有小于約5%、小于約4%、小于約3%、或小于約2XHMW物質(zhì)或小于約5%、小于約4%、小于約3%、或小于約2X的LMW物質(zhì)。調(diào)配物可作為凍干物儲(chǔ)存(例如)至少2年、至少3年、至少4年、或至少5年。在一個(gè)實(shí)例中，抗IL-13抗體調(diào)配物含有100mg/ml的抗IL-13抗體、10mM的組氨酸、5%的蔗糖，且pH為6.0。在另一實(shí)例中，抗IL-13抗體調(diào)配物含有100mg/ml的抗IL-13抗體、lOmM的組氨酸、5%的蔗糖、0.01%的吐溫80、2%的精氨酸，且pH為6.0。在另一實(shí)例中，調(diào)配物含有0.5mg/ml的抗IL-13抗體、10mM的組氨酸、5%的蔗糖，且pH為6.0。在再一實(shí)例中，調(diào)配物含有0.5mg/ml的抗IL-13抗體、10mM的組氨酸、5%的蔗糖、0.01%的吐溫80、2%的精氨酸，且pH為6.0。關(guān)于調(diào)配物的組份和分析調(diào)配物中抗IL-13抗體完整性的方法的其它細(xì)節(jié)提供于下文中?？笽L-13抗體是本文所述調(diào)配物的組份。如本文所用，除非另外指明，否則術(shù)語"抗體"包括多克隆抗體、單克隆抗體、具有多表位特異性的抗體組合物、生物特異性抗體、雙特異抗體、形成抗體一部分的單鏈分子、雜交抗體(例如完全或部分人源化抗體)、抗原結(jié)合抗體片段(例如Fab片段、F(ab')2片段和Fv片段)、和上述抗體的修飾抗體(例如，聚乙二醇抗體或抗體片段)。調(diào)配物中所用的抗IL-13抗體分子可為有效地人類蛋白質(zhì)、人源化蛋白質(zhì)、CDR接枝蛋白質(zhì)、嵌合蛋白質(zhì)、成熟蛋白質(zhì)、親和力成熟蛋白質(zhì)、去免疫蛋白質(zhì)、合成蛋白質(zhì)、或者在活體外產(chǎn)生的蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施例中，抗IL-13抗體是人源化抗體。在一個(gè)實(shí)施例中，IL-13抗體在人類中不是抗原且不會(huì)造成HAMA反應(yīng)?？笽L-13抗體分子可用于在活體內(nèi)調(diào)節(jié)(例如，抑制)至少一種IL-13相關(guān)活性。IL-13抗體可用于治療或預(yù)防IL-13相關(guān)病癥，或用于改善其至少一種癥狀。實(shí)例性IL-13相關(guān)病癥包括炎性病癥(例如，肺部炎癥)、呼吸病(例如，包括過敏性和非過敏性哮喘在內(nèi)的哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD))、以及涉及氣管發(fā)炎的病狀、嗜酸性細(xì)胞增多癥、纖維化病癥(例如，囊性纖維化、肝纖維化、和肺纖維化)、硬皮病、過度粘液產(chǎn)生；特應(yīng)性病癥(例如，特應(yīng)性皮炎、蕁麻疹、濕疹、過敏性鼻炎、和過敏性腸胃炎)、IL-13相關(guān)癌癥(例如，白血病、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、或淋巴瘤，例如，何杰金氏淋巴瘤)、胃腸道病癥(例如，炎性腸病)、肝病(例如，肝硬化)、和病毒感染。抗體在調(diào)配物中的濃度通常在約0.1mg/ml與約250mg/ml之間，例如，約0.5mg/ml與約100mg/ml、約0.5mg/ml與約1.0mg/ml、約0.5mg/ml與約45mg/ml、約1mg/ml與約10mg/ml、約10mg/ml與約40mg/ml、約10mg/ml與約50mg/ml、約50mg/ml與約100mg/ml、約100mg/ml與約200mg/ml、約200mg/ml與約250mg/ml的抗IL-13。在上下文的范圍內(nèi)，"約"是指所列舉數(shù)值范圍下限-20%和所列舉數(shù)值范圍上限+20%。在上下文的范圍內(nèi)，例如，約10mg/ml到約100mg/ml此是指在8mg/ml到120mg/ml之間。在一些情況下，抗體在調(diào)配物中的濃度可為(例如)在0.1mg/ml與200mg/ml之間，例如，0.5mg/ml與100mg/ml、0.5mg/ml與1.0mg/ml、0.5mg/ml與45mg/ml、1mg/ml與10mg/ml、10mg/ml與40mg/ml、10mg/ml與50mg/ml、50mg/ml與100mg/ml、100mg/ml與200mg/ml的抗IL-13。所述抗體調(diào)配物可用作治療劑。因此，抗體在調(diào)配物中的濃度應(yīng)足以在一定體積的調(diào)配物中提供所治療的患者耐受且適于投與方法的劑量。在一個(gè)非限制實(shí)例中，為經(jīng)皮下供應(yīng)其中體積上限小(例如，每次注射約1ml到1.2ml)的高劑量，抗體的濃度通常為至少100mg/ml或更高，例如，100mg/ml到500mg/ml、100mg/ml到250mg/ml、或100mg/ml到150mg/ml。所述高濃度可通過(例如)將凍干調(diào)配物在適宜體積的稀釋劑(例如，注射用無菌水、緩沖鹽水)中重構(gòu)來獲得。在一些情況下，重構(gòu)調(diào)配物的濃度在約100mg/ml與500mg/ml之間(例如，100mg/ml、125mg/ml、150mg/ml、175mg/ml、200mg/ml、250mg/ml、275mg/ml、300mg/ml、350mg/ml、375mg/ml、400mg/ml、425mg/ml、450mg/ml、475mg/ml和500mg/ml)。為了經(jīng)由吸入遞送，調(diào)配物通常稍經(jīng)濃縮(例如，在約100mg/ml與500mg/ml之間)以便在有限的氣溶膠體積中提供充分劑量用于吸入。在一些情況下，使用低濃度(例如，在約0.05mg/ml與1mg/ml之間)。使所遞送劑量適于遞送方法的方法已為此項(xiàng)技術(shù)習(xí)知，例如，噴射式噴霧器或計(jì)量氣溶膠?？捎糜诳笽L-13抗體調(diào)配物的抗體包括(例如)鼠和人源化鼠抗IL-13抗體?？贵w可為k輕鏈抗體?？贵w可為天然的或設(shè)計(jì)成IgG、IgE、IgA、IgM抗體或IL-13-結(jié)合片段，如上文所述。在一些情況下，抗體是IgGl、IgG2、或lgG4抗體。用于本發(fā)明的抗IL-13抗體的實(shí)例闡述于美國專利申請案第11/155、843號、美國專利申請案第11/149、309號、和WO2006/085938中，其內(nèi)容以引用的方式并入本文中。用于本發(fā)明的抗IL-13抗體的非限制實(shí)例包括IMA-638(圖34)禾卩IMA-026(圖35)。在一些實(shí)施例中，抗IL-13抗體重鏈與SEQIDNO:l的序列一致性為約80%、約85%、約卯％、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、或約99%且輕鏈與SEQIDNO:2的序列一致性為約80%、約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、或約99%，且抗體結(jié)合IL-13。在一些實(shí)施例中，抗IL-13抗體重鏈與SEQIDNO:3的序列一致性為約80%、約85%、約卯％、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、或約99X且輕鏈與SEQIDNO:4的序列一致性為約80X、約85%、約卯％、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、或約99%，且抗體結(jié)合IL-13。在某些實(shí)施例中，抗IL-13抗體以一定親和力結(jié)合IL-13，所述親和力對應(yīng)于小于5xl0—7M、lxi(r7M、5xl(T8M、lxi(T8M、5xIf)-9M、1x10-9M、更通常小于5x10"°M、1x10"。M、5xM、1xl(T11M或更好的KD。在蛋白質(zhì)中引入取代的方法己為此項(xiàng)技術(shù)習(xí)知。在一個(gè)實(shí)施例中，IL-13抗體可與IL-13聯(lián)接，其中動(dòng)力學(xué)在10s到l()SM"s"的范圍內(nèi)，通常104到107]VrV1。在又一實(shí)施例中，IL-13結(jié)合劑具有在10'2到10'6s"范圍內(nèi)、通常10—2到10—5s"的解離動(dòng)力學(xué)。在一個(gè)實(shí)施例中，IL-13結(jié)合劑結(jié)合IL-13(例如人類IL-13),其親和力和/或動(dòng)力學(xué)類似于單克隆抗體MJ2-7或C65(例如，在其20、10或5倍以內(nèi))(參見，美國專利公開案第20060073148號)、或其修飾形式，例如嵌合形式或其人源化形式(例如，本文所述的人源化形式)。IL-13結(jié)合劑的親和力和結(jié)合動(dòng)力學(xué)可使用(例如)生物傳感器技術(shù)(BIACORETM)來測試。餅郝蔣疾，本文所述調(diào)配物的pH通常在約pH5.0到約7.0之間，例如約pH5.5到約6.5、約pH5.5至lj約6.0、約pH6.0到約6.5、pH5.5、pH6.0、或pH6.5。通常，使用可使溶液的pH維持在5.5到6.5的緩沖液來制備調(diào)配物，例如pKA為約6.0的緩沖液。適宜緩沖液包括(但不限于)組氨酸緩沖液、2-嗎啉乙磺酸(MES)、二甲砷酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、琥珀酸鹽、和檸檬酸鹽。緩沖液的濃度在約4mM與約60mM之間(例如約5mM到約25mM)，例如組氨酸通常以最高60mM的濃度使用。在一些情況下，組氨酸緩沖液是以約5mM或約10mM的濃度使用。在其它情況下，乙酸鹽或琥珀酸鹽緩沖液是以約5mM或約10mM的濃度使用?？笽L-13抗體調(diào)配物包括冷凍保護(hù)劑。冷凍保護(hù)劑已為此項(xiàng)技術(shù)習(xí)知且包括(例如)蔗糖、海藻糖、和甘油。通常使用在生物系統(tǒng)中展示低毒性的冷凍保護(hù)劑。冷凍保護(hù)劑是以約0.5%至(」15%、約0.5%至1」2%、約2%到5%、約5%到10%、約10%到15%、和約5%(重量/體積)的濃度包括在調(diào)配物中。在抗IL-13抗體調(diào)配物中可用作緩沖液的組氨酸緩沖液可具有冷凍保護(hù)劑性質(zhì)。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，組氨酸緩沖液與冷凍保護(hù)劑(例如糖，例如蔗糖)聯(lián)合使用。本發(fā)明的調(diào)配物可明確排除以任何實(shí)質(zhì)數(shù)量使用組氨酸，例如調(diào)配物的緩沖液或冷凍保護(hù)劑組份均不是組氨酸。調(diào)配物的粘度通常為與調(diào)配物的投與途徑相容的粘度。在一些實(shí)施例中，調(diào)配物的粘度在1cP禾B2cP之間，或類似于水(約1cP)。在其它實(shí)施例中，調(diào)配物的粘度在約5cP與約40cP之間。在特定實(shí)施例中，調(diào)配物的粘度為1cP、2cP、3cP、4cP、5cP、10cP、15cP、20cP、25cP、30cP、35cP、或40cP。表臓飾在某些實(shí)施例中，調(diào)配物中包括表面活性劑。表面活性劑的實(shí)例包括(但不限于)非離子表面活性劑，例如聚山梨醇酯(例如，聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、或聚山梨醇酯-85);泊洛沙姆(poloxamer)(例如，泊洛沙姆188);曲拉通(Triton)TM;十二垸基硫酸鈉(SDS);月桂基硫酸鈉；辛基葡糖苷鈉；月桂基-磺基甜菜堿、肉豆蔻基-磺基甜菜堿、亞油?；?磺基甜菜堿、硬脂酰基-磺基甜菜堿、月桂基-肌氨酸、肉豆蔻基-肌氨酸、亞油?；?肌氨酸、硬脂酰基-肌氨酸、亞油酰基-甜菜堿、肉豆蔻基-甜菜堿、十六垸基-甜菜堿、月桂酰胺丙基-甜菜堿、椰油酰胺丙基-甜菜堿、亞油酰胺丙基-甜菜堿、肉豆蔻酰胺丙基-甜菜堿、棕櫚酰胺丙基-甜菜堿、異硬脂酰胺丙基-甜菜堿(例如，月桂酰胺丙基)、肉豆蔻酰胺丙基-二甲胺、棕櫚酰胺丙基-二甲胺、或異硬脂酰胺丙基-二甲胺；甲基椰油?；；撬徕c、或甲基油?；；撬徕c；和MonaquatTM系列(夢娜工業(yè)公司(MonaIndustries),帕特森(Paterson),新澤西(N丄))、聚乙二醇、聚丙二醇、和乙烯與丙二醇的共聚物(例如，普朗尼克類(pluronics),PF68)。所添加表面活性劑的量應(yīng)使重構(gòu)蛋白質(zhì)的積聚降至可接受水平，如使用(例如)HMW物質(zhì)或LMW物質(zhì)的SEC-HPLC所分析，并使抗IL-13抗體調(diào)配物的凍干物重構(gòu)之后顆粒的形成減到最低限度。表面活性劑的添加還展示降低抗IL-13抗體凍干調(diào)配物的重構(gòu)時(shí)間，且?guī)椭芤好摎?。例如，表面活性劑可以約0.001%到0.5%(例如約0.005%到0.05%、約0.005%到約0.2%、和約0.01%到0.2%)的量存在于調(diào)配物中(液體或凍干之前)。貧/丄-/3鄉(xiāng)激膝雄i/19調(diào)配物是作為無菌溶液或無菌凍干物儲(chǔ)存。還可通過在調(diào)配物中包括至少一種抗細(xì)菌劑和/或抗真菌劑(例如羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、水楊乙汞(thimerosal)等)來防止調(diào)配物中微生物的作用。在一些情況下，凍干物是利用抑菌水(例如，含0.9%苯甲醇的水)重構(gòu)。對于在調(diào)配物中包括防腐劑的考慮因素己作為鑒別與特定調(diào)配物和遞送方法相容的防腐劑的方法為此項(xiàng)技術(shù)習(xí)知(例如，參見古普塔(Gupta)等人(2003)，美國藥學(xué)科學(xué)家協(xié)會(huì)醫(yī)藥科學(xué)(AAPSPharm.Sci.)5:第8章，第1-9頁)。在一些情況下，調(diào)配物等滲。通常，可向調(diào)配物中添加此項(xiàng)技術(shù)中習(xí)知有助于溶液滲透性/張力的任何組份(例如，鹽、糖、多元醇、或其組合)。通常通過以等滲濃度使用基本調(diào)配物的組份(例如蔗糖)或通過添加額外組份(例如，糖、多元醇(例如甘露醇或山梨醇)、或鹽(例如氯化鈉))來獲得等滲性。在一些情況下，抗IL-13抗體調(diào)配物中使用鹽以(例如)獲得等滲性或增加調(diào)配物抗IL-13抗體的完整性。適宜使用的鹽討論于上文中。鹽濃度可為0mM到約300m]VL在某些情況下，調(diào)配物是利用吐溫(例如，吐溫⑧20、吐溫㊣80)來制備以降低界面降解。吐溫濃度可為約0.001%到約0.05%。在一個(gè)實(shí)例中，吐溫80是以0.01%的濃度用于調(diào)配物中。在某些其它情況下，調(diào)配物是利用精氨酸制備。精氨酸在調(diào)配物中的濃度可為約0.01%到約5%。在一個(gè)實(shí)例中，精氨酸是以2%的濃度用于調(diào)配物中。在一些情況下，將吐溫和精氨酸都添加于本文所述的IL-13調(diào)配物。在其它情況中，調(diào)配物可利用一下物質(zhì)中的至少一種來制備山梨醇、甘氨酸、甲硫氨酸、或氯化鈉。若調(diào)配物中包括山梨醇，則其可以約1%與約10%之間的濃度添加。在一個(gè)實(shí)例中，發(fā)現(xiàn)山梨醇以5%的濃度存于調(diào)配物中。若調(diào)配物中包括甘氨酸，則其可以約0.1%到約2%之間的濃度添加。在一個(gè)實(shí)例中，發(fā)現(xiàn)甘氨酸以1%的濃度存于調(diào)配物中。若調(diào)配物中包括甲硫氨酸，則其可以約5mM與約150mM之間的濃度添加。在一個(gè)實(shí)例中，甲硫氨酸是以100mM的濃度添加到調(diào)配物中。在另一實(shí)例中，甲硫氨酸是以70mM的度添加到調(diào)配物中。若調(diào)配物中包括氯化鈉，則其可以約5mM與約100mM之間的濃度添加。在一個(gè)實(shí)例中，氯化鈉是以55mM的濃度添加到調(diào)配物中。錄吝方法冷凍在一些情況下，含有抗體的調(diào)配物是冷凍儲(chǔ)存。因此，希望調(diào)配物在包括冷凍-解凍循環(huán)在內(nèi)的所述條件下相對穩(wěn)定。一種測定調(diào)配物適宜性的方法是使試樣調(diào)配物經(jīng)受至少兩個(gè)(例如三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、八個(gè)、十個(gè)或更多個(gè))冷凍(在例如-2(TC或-S(TC下)與解凍(例如通過在37'C水浴中快速解凍或在2'C-8°0下緩慢解凍)循環(huán)，測定冷凍-解凍循環(huán)后積聚的LMW物質(zhì)和/或HMW物質(zhì)的量并將此量與冷凍-解凍程序之前試樣中存在的LMW物質(zhì)或HMW物質(zhì)的量相比較。LMW或HMW物質(zhì)的增加表明穩(wěn)定性降低。茶f調(diào)配物可凍干后儲(chǔ)存。因此，針對凍干后調(diào)配物蛋白質(zhì)組份的穩(wěn)定性測試調(diào)配物用于測定調(diào)配物的穩(wěn)定性。此方法類似于上文針對冷凍所闡述的方法，只是試樣調(diào)配物經(jīng)凍干而不是冷凍，經(jīng)重構(gòu)達(dá)到其初始體積，并測試是否存在LMW物質(zhì)和/或HMW物質(zhì)。將經(jīng)凍干試樣調(diào)配物與未凍干的相應(yīng)試樣調(diào)配物相比較。與相應(yīng)試樣相比經(jīng)凍干試樣中LMW或HMW物質(zhì)的增加表明凍干試樣中穩(wěn)定性降低。下文實(shí)例5中還提供了適于測試凍干方案的方法的實(shí)例。通常，凍干方案包括將試樣裝載于冷凍真空干燥箱中，預(yù)冷時(shí)期，冷凍，真空開始，斜坡變化至初次干燥溫度，初次干燥，斜坡變化至二次干燥溫度，二次干燥，及將試樣用塞子塞住。可選擇用于凍干方案的其它參數(shù)包括真空(例如，以微米汞柱為單位)和冷凝器溫度。適宜的溫度斜坡速率在約0.rC/min.到2'C/min.之間，例如0.1°C/minJIJ1.0°C/min.、0.rC/min.至U0.5°C/min.、0.2。C/min.到0.5°C/min.、0.rC/min.、0.2°C/min.、0.3°C/min.、0.4°C/min.、0.5°C/min.、0.6°C/min.、0.7°C/min.、0.8°C/min.、0.9°C/min^n1.0°C/min.。凍干循環(huán)的冷凍期間適宜地?cái)R架溫度通常為約-55。C到-5i:、-25。C到-5。C、-20。C到-5。C、陽15。C到-5。C、.10。C到-5。C、-l(TC、-ll'C、-12°C、-13°C、-14°C、-15°C、-16°C、-17°C、隱18。C、墨19。C、-20°C、陽21。C、-22°C、-23。C、-2化或-25°C。對于初次干燥和二次干燥而言擱架溫度可不同，例如初次干燥可在比二次干燥低的溫度下實(shí)施。在非限制實(shí)例中，初次干燥可在0'C下實(shí)施且二次干燥在25X:下實(shí)施，在一些情況下，冷凍期間且在真空開始之前使用退火方案。在所述情況下，退火時(shí)間必須經(jīng)選擇且溫度通常高于組合物的玻璃轉(zhuǎn)化溫度。通常，退火時(shí)間是約2到15小時(shí)、約3到12小時(shí)、約2到10小時(shí)、約3到5小時(shí)、約3到4小時(shí)、約2小時(shí)、約3小時(shí)、約5小時(shí)、約8小時(shí)、約10小時(shí)、約12小時(shí)或約15小時(shí)。退火溫度通常為約-35。C到約-5。C，例如約-25。C到約-8。C、約-20。C到約-10。C、約-25。C、約-20。C、約-15。C、約0。C或約-5。C。在一些情況下，退火溫度通常為-35'C到5'C，例如25'C到-8°C、-20。C到-10。C、-25。C、隱20。C、-15°C、0。C或5。C。在一個(gè)實(shí)例中，本文所述調(diào)配物中的抗IL-B抗體展示耐受各種凍干參數(shù)，所述參數(shù)包括有或沒有在玻璃轉(zhuǎn)化溫度(Tg')以上的預(yù)真空熱處理(退火)步驟，初次干燥擱架溫度從-25'C到30°C，且二次干燥在25°-3(TC下的持續(xù)時(shí)間為2小時(shí)到9小時(shí)。在一個(gè)非限制實(shí)例中，將10mM的組氨酸、5%的蔗糖的調(diào)配物(pH6.0)以50mg/mLIL-13的蛋白質(zhì)濃度調(diào)配在一起并凍干。凍干后，用大約一半的充滿體積重構(gòu)產(chǎn)品從而以100mg/ml遞送蛋白質(zhì)。已證實(shí)IL-13抗體在凍干之后可耐受產(chǎn)品極限溫度(參見下文實(shí)例和圖10-12)。在5(TC下儲(chǔ)存四周后的穩(wěn)定性范圍與使用各種冷凍干燥循環(huán)制得的物質(zhì)的范圍一致(例如，參見圖16-20)，其中一些在初次干燥干燥期間產(chǎn)品溫度有接近l(TC的差異(例如，圖13)。通常，凍干循環(huán)可運(yùn)行10小時(shí)到100小時(shí)，例如20小時(shí)到80小時(shí)、30小時(shí)到60小時(shí)、40小時(shí)到60小時(shí)、45小時(shí)到50小時(shí)、50小時(shí)到65小時(shí)?？贵w調(diào)配物儲(chǔ)存溫度范圍的非限制實(shí)例為約-2(rC到約5(TC(例如)約-15'C到約30°C、約-15。C到約20。C、約5。C到約25。C、約5。C到約2(TC、約5"C到約15'C、約2。C到約12。C、約2。C到約10。C、約2。C到約8。C、約2。C到約6。C、2°C、3°C、4°C、5°C、6°C、7°C、8°C、10°C、15。C或25°C。在某些情況下，盡管給出儲(chǔ)存溫度，但試樣在所述組合物可預(yù)計(jì)的儲(chǔ)存和運(yùn)送條件下可能暫時(shí)出現(xiàn)的溫度變化下穩(wěn)定。在一些情況下，調(diào)配物經(jīng)噴霧干燥且然后儲(chǔ)存。噴霧干燥是使用此項(xiàng)技術(shù)中已知的方法來實(shí)施，且可經(jīng)修改以使用液體或冷凍噴霧干燥(例如，使用那些例如來自尼洛公司(NiroInc.)(麥迪遜，威斯康星州(Madison，WI))、安珀湯粒子技術(shù)(UppertonParticleTechnologies)(諾丁漢，英國(Nottingham,England))、或布奇(Buchi)(布林曼儀器公司，西布雷，紐約(BrinkmanInstrumentsInc.,Westbury,NY))、或美國專利公開案第20030072718號和第20030082276號的方法)?？贵w完整性的測定LMW物質(zhì)和HMW物質(zhì)的積聚是抗體穩(wěn)定性的有用量度。調(diào)配物中LMW或HMW的積聚均指示作為調(diào)配物的一部分儲(chǔ)存的蛋白質(zhì)的不穩(wěn)定性。尺寸排除色譜連同HPLC可用于測定是否存在LMW和HMW物質(zhì)。用于所述測量的適當(dāng)系統(tǒng)己為此項(xiàng)技術(shù)習(xí)知，例如HPLC系統(tǒng)(沃特斯(Waters)，米爾福德，馬薩諸塞州(Milford，MA))?？墒褂么隧?xiàng)技術(shù)中習(xí)知的其它系統(tǒng)來評價(jià)調(diào)配物中抗體的完整性，例如SDS-PAGE(用于監(jiān)測HMW和LMW物質(zhì))，抗體活性的生物分析、酶聯(lián)免疫吸附分析、結(jié)合純化IL-13蛋白質(zhì)的能力、和陽離子交換-HPLC(CEX-HPLC;用以檢測變體和監(jiān)測表面電荷)。在一個(gè)實(shí)例中，生物分析是基于細(xì)胞的分析，其中在不同濃度經(jīng)調(diào)配抗體的存在下檢查IL-13依賴性細(xì)胞增殖的抑制來證實(shí)生物活性，即，結(jié)合IL-13并使其與細(xì)胞隔離的能力。制造物件本申請案還提供制造物件，其包括本文所述的調(diào)配物且提供調(diào)配物的使用說明書。制造物件可包含適用于容納調(diào)配物的容器。適宜容器可為(但不限于)瓶子、小瓶、注射器、試管、噴霧器(例如，超聲波或振動(dòng)篩噴霧器)、靜脈內(nèi)溶液袋、或吸入器(例如，定量吸入器(MDI)或干粉吸入器(DPI))。容器可由任何適宜材料形成，例如玻璃、金屬或塑料(例如聚碳酸酯、聚苯乙烯或聚丙烯)。通常，容器的材料是不會(huì)從調(diào)配物中吸收大量蛋白質(zhì)且不會(huì)與調(diào)配物的組份反應(yīng)的材料。在一些實(shí)施例中，容器是帶有維斯特(West)4432/501319硅灰色塞子或維斯特4023杜若弗酪(Durafluor)塞子的透明玻璃小瓶。在一些實(shí)施例中，容器為注射器。在特定實(shí)施例中，調(diào)配物包含100mg/ml的抗IL-13抗體(例如，IMA-026、IMA-638)、lOmM的組氨酸、5%的蔗糖、0.01%的吐溫-80、40mM的NaCl，其pH為6.0且在預(yù)裝填注射器中。在某些實(shí)施例中，注射器適于與自動(dòng)注射器裝置配合使用。在非限制實(shí)例中，噴霧器的實(shí)例包括噴射式噴霧器、超聲波噴霧器、和振動(dòng)篩噴霧器。這些類型使用不同的方法來從液體產(chǎn)生氣溶膠。通常，可維持這些調(diào)配物中蛋白質(zhì)完整性的任一氣溶膠產(chǎn)生裝置均適用于遞送本文所述的調(diào)配物。欲投與給個(gè)體的調(diào)配物(例如作為醫(yī)藥)必須無菌。此可使用此項(xiàng)技術(shù)中習(xí)知的方法來實(shí)現(xiàn)，例如通過在將液體進(jìn)行調(diào)配或凍干并重構(gòu)之前或之后通過無菌過濾膜進(jìn)行過濾?；蛘?，在不破壞結(jié)構(gòu)的情況下，調(diào)配物的組份可通過高壓殺菌來滅菌，且然后與經(jīng)過濾器或輻射滅菌的組份組合以制備調(diào)配物。治療方法抗IL-13抗體調(diào)配物用于治療與IL-13的不期望表達(dá)或活性相關(guān)的病癥。所述病癥包括炎性病癥，例如關(guān)節(jié)炎、哮喘、炎性腸病、炎性皮膚病、多發(fā)性硬化、骨質(zhì)疏松癥、肌腱炎、過敏性病癥、由宿主損傷導(dǎo)致的炎癥、敗血癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、易激性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、牛皮癬、全身性紅斑性狼瘡、和任何其它自身免疫疾病。在所述方法的某些實(shí)施例中，IL-13相關(guān)病癥是過敏性哮喘、非過敏性哮喘、B-細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病(B-細(xì)胞CLL)、何杰金氏病、血吸蟲病中的組織纖維化、自身免疫風(fēng)濕性疾病、炎性腸病癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、涉及氣管發(fā)炎的病狀、嗜酸性細(xì)胞增多癥、纖維化和過度粘液產(chǎn)生(例如，囊性纖維化和肺纖維化)；特應(yīng)性病癥(例如，過敏性鼻炎)；皮膚的炎性和/或自身免疫病狀(例如，特應(yīng)性皮炎)、胃腸道器官的炎性和/或自身免疫病狀(例如，炎性腸病(IBD))、肝的炎性和/或自身免疫病狀(例如，肝硬化)；病毒感染；其它器官的硬皮病和纖維化，例如肝纖維化；過敏性結(jié)膜炎、濕疹、蕁麻疹、食物過敏、慢性阻塞性肺病(COPD)、潰殤性結(jié)腸炎、呼吸道合胞病毒感染、葡萄膜炎、硬皮病或骨質(zhì)疏松癥。因此，抗IL-13抗體調(diào)配物可用作醫(yī)藥組合物。本發(fā)明提供預(yù)防和治療方法，其用于治療具有患與異?；虿恍枰腎L-13表達(dá)或活性相關(guān)的病癥的危險(xiǎn)(或易得所述病癥)或者患有所述病癥或所述病癥的并發(fā)癥的個(gè)體。如本文所用，術(shù)語"治療"是定義為將治療劑施加或投與給個(gè)體、或?qū)⒅委焺┦┘踊蛲杜c給個(gè)體的獨(dú)立組織或細(xì)胞，所述個(gè)體患有疾病、具有所述疾病的癥狀或易患所述疾病，其中目的是治愈、痊愈、減輕、減緩、改變、醫(yī)治、改善、改進(jìn)或影響所述疾病、所述疾病的癥狀或易患所述疾病的傾向?？墒褂么隧?xiàng)技術(shù)中習(xí)知的方法將抗IL-13抗體調(diào)配物投與給需要治療的個(gè)體，所述方法包括經(jīng)口、非經(jīng)腸、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、眼內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、病灶內(nèi)、推注、陰道、直腸、經(jīng)口腔、經(jīng)舌下、鼻內(nèi)、經(jīng)皮(局部)、或經(jīng)粘膜投與。對于通過吸入投與來說，可將化合物從含有適宜推進(jìn)劑(例如二氧化碳等氣體)的加壓容器或分配器或噴霧器以氣溶膠噴霧形式投與。在某些實(shí)施例中，調(diào)配物是作為持續(xù)釋放、延長釋放、定時(shí)釋放、控制釋放、或連續(xù)釋放調(diào)配物來投與。在一些實(shí)施例中，使用儲(chǔ)積式調(diào)配物將抗體投與給需要其的個(gè)體。經(jīng)口或非經(jīng)腸組合物可制成劑量單元形式以便于投與并保持劑量一致性。本文所用"劑量單元形式"是指適合作為單位劑量供待治療個(gè)體使用的物理分散單元；每一單元含有經(jīng)計(jì)算以產(chǎn)生期望治療效果的預(yù)定量活性化合物連同所選醫(yī)藥載劑。在吸入方法的情況下(例如定量吸入器)，裝置經(jīng)設(shè)計(jì)以遞送適當(dāng)量的調(diào)配物。調(diào)配物的毒性和治療功效可使用(例如)細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物通過此項(xiàng)技術(shù)中已知的醫(yī)藥程序來測定，例如，用于測定LDs。(導(dǎo)致群體50%死亡的劑量)禾HEDso(在50%群體中具有治療效果的劑量)的程序。毒性和治療效果之間的劑量比即為治療指數(shù)，且其可表示為比率LD5。/ED^。自細(xì)胞培養(yǎng)分析和動(dòng)物研究所獲得的數(shù)據(jù)可用于擬定適用于人類的劑量范圍。所述調(diào)配物的劑量通常在包括ED5o的循環(huán)濃度范圍內(nèi)，同時(shí)具有較低毒性或沒有毒性。劑量可視所用劑型和所用投與途徑在此范圍內(nèi)變化。對于本發(fā)明方法中所用的任一調(diào)配物來說，都可根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)分析來初步估測治療有效劑量。可在動(dòng)物模型中調(diào)配劑量以獲得循環(huán)血漿濃度范圍，其包括IQo(即可對癥狀達(dá)成半數(shù)最大抑制的測試化合物的濃度)，如在細(xì)胞培養(yǎng)物中所測定。此信息可用于更精確地確定人類中的有用劑量。血漿中的水平可通過(例如)高效液相色譜或特異性結(jié)合分析(例如，ELISA)來測量。適宜動(dòng)物模型已為此項(xiàng)技術(shù)習(xí)知且包括(但不限于)對抗原攻擊展示出功效的非人類靈長類動(dòng)物、及在抗原攻擊后對抗原敏感的綿羊、和豚鼠。調(diào)配物通常經(jīng)遞送以便劑量為至少約0.1mg抗IL-13抗體/kg體重(通常約1mg/kg到約10mg/kg)。若抗體是在大腦中起作用，則50mg/kg至l」100mg/kg的劑量可能是合適的。當(dāng)直接遞送至作用位點(diǎn)(例如當(dāng)通過吸入直接投與給肺組織)時(shí)，可減少劑量(與非經(jīng)腸投與相比)。本文所述的調(diào)配物可用于制備用于任一本文所述治療方法中的藥劑。在本發(fā)明某些方面，本文所述調(diào)配物可經(jīng)修飾以便作為聯(lián)合治療的一部分與其它試劑一起投與。聯(lián)合治療是指兩種或兩種以上的不同治療化合物組合的任何投與形式，以便當(dāng)先前投與的治療化合物在體內(nèi)仍提供有效作用時(shí)投與第二種化合物(例如，所述兩種化合物同時(shí)在患者體內(nèi)提供有效作用，其可包括所述兩種化合物的協(xié)同效應(yīng))。例如，不同治療化合物可在同一調(diào)配物投與或在單獨(dú)調(diào)配物中同時(shí)或相繼投與。因此，接受所述治療的個(gè)體可具有不同治療化合物的組合(聯(lián)合)效果?？膳cIL-13抗體共同投與和/或共同調(diào)配的優(yōu)選的額外治療劑的實(shí)例包括吸入型類固醇；p-激動(dòng)劑，例如短效或長效P-激動(dòng)劑；白細(xì)胞三烯或白細(xì)胞三烯受體的拮抗劑；組合藥物，例如ADVAIR;IgE抑制齊l」，例如抗IgE抗體(例如，XOLAIR);磷酸二酯酶抑制劑(例如，PDE4抑制劑)；黃嘌呤；抗膽堿藥；肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑，例如色甘酸鈉(cromolyn);IL-4抑制劑；IL-5抑制劑；嗜酸細(xì)胞活化趨化因子/CCR3抑制劑；和抗組胺劑。所述組合可用于治療哮喘和其它呼吸病?？膳cIL-13抗體共同投與和/或共同調(diào)配的治療劑的額外實(shí)例尤其包括以下一種或多種TNF拮抗劑(例如，TNF受體的可溶片段，例如p55或p75人類TNF受體或其衍生物，例如75kdTNFR-IgG(75kDTNF受體-IgG融合蛋白，ENBREL));TNF酶拮抗劑，例如TNFa轉(zhuǎn)化酶(TACE)抑制劑；毒蕈堿受體拮抗劑；TGF-P拮抗劑；干擾素Y;吡非尼酮(perfenidone);化學(xué)治療劑，例如甲氨蝶呤、來氟米特(leflunomide)、或西羅莫司(sirolimus)(雷帕霉素(rapamycin))或其類似物，例如CCI-779;COX2禾卩cPLA2抑制齊U;NSAID;免疫調(diào)節(jié)劑；p38抑制劑、TPL-2、Mk-2禾卩NFkB抑制劑。例如，在炎性病狀的情況下，本文所述抗IL-13抗體調(diào)配物可與一種或多種用于治療炎性疾病或病狀的其它藥劑組合投與。這些藥劑可與抗IL-13抗體一起進(jìn)行調(diào)配，或者作為單獨(dú)調(diào)配物基本同時(shí)或相繼投與。在一些情況下，藥劑可為表位不同于調(diào)配物的抗IL-13抗體的IL-13抗體。用于治療炎性疾病或病狀的其它藥劑包括(但不限于)抗炎劑或消炎劑。消炎劑包括(例如)糖皮質(zhì)激素類，例如可的松(cortisone)、氫化可的松(hydrocortisone)、、潑尼禾公(prednisone)、潑尼松、龍(prednisolone)、氟可龍(fluocortolone)、曲安西龍(triamcinolone)、甲潑尼龍(methylprednisolone)、潑尼立定(prednylidene)、巾白拉米松(paramethasone)、地塞米松(dexamethasone)、倍他米松(betamethasone)、倍氯米松(beclomethasone)、氟潑尼定(fluprednylidene)、脫氧米塞松(desoxymethasone)、膚輕松(fluocinolone)、氟米松(flumethasone)、二氟可龍(diflucortolone)、氯可托龍(clocortolone)、氯倍他索(clobetasol)和氟考丁酯(fluocortinbutylester);免疫抑制劑，例如抗TNF齊l」，例如，依那西普(etanercept)、英夫利昔單抗(infliximab)和IL-1抑制劑；青霉胺(penicillamine);非類固醇類抗炎藥(NSAID)，其涵蓋抗炎藥、鎮(zhèn)痛藥和退熱藥，例如水楊酸、青霉胺(celecoxib)、氟苯水楊酸(difunisal)和來自經(jīng)取代苯基乙酸鹽或2-苯基丙酸鹽者，例如阿氯芬酸(alclofenac)、異丁芬酸(ibufenac)、布洛芬(ibuprofen)、克林奈克(clindanac)、苯克洛酸(fenclorac)、酮洛芬(ketoprofen)、非諾洛芬(fenoprofen)、吲哚洛芬(ind叩rofen)、芬氯酸(fenclofenac)、雙氯芬酸(diclofenac)、氟比洛芬(flurbiprofen)、吡洛芬(pirprofen)、萘普生(naproxen)、苯噁洛芬(benoxaprofen)、卡洛芬(carprofen)和環(huán)洛芬(cicloprofen);昔康(oxican)衍生物，例如吡羅昔康(piroxican);鄰氨基苯甲酸衍生物，例如甲芬那酸(mefenamicacid)、氟芬那酸(flufenamicacid)、托芬那酸(tolfenamicacid)和甲氯芬那酸(meclofenamicacid)、經(jīng)苯胺基取代的煙酸衍生物，例如滅酸酯類(fenamates)尼氟滅酸(niflumicacid)、氯尼辛(clonkin)和氟尼辛(flunixin);雜芳基乙酸，其中雜芳基是2-吲哚-3-基或吡咯-2-基，例如U引哚美辛(indomethacin)、奧沙美辛(oxametacin)、吲四唑(intrazole)、阿西美辛(acemetacin)、桂美辛(cinmetacin)、佐美酸(zomepirac)、托美丁(tolmetin)、考皮若可(colpirac)和噻洛芬酸(tiaprofenicacid);舒林酸(sulindac)型茚基乙酸；具有止痛活性的雜芳基乙酸，例如本澤達(dá)可(benzadac);保泰松(phenylbutazone);依托度酸(etodolac);25萘丁美酮(nabumetone);和疾病修飾抗風(fēng)濕藥物(disease-modifyingantirheumaticdrug)(DMARD),例如甲氨蝶呤、金鹽、羥氯喹(hydroxychloroquine)、柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)、環(huán)包素(ciclosporin)、硫唑嘌呤(azathioprine)、和來氟米特。用于治療炎性疾病或病狀的其它治療劑包括抗氧化劑。抗氧化劑可為天然或合成抗氧化劑?？寡趸瘎?例如)超氧化物歧化酶(SOD)、21-氨基類固醇/氨基色滿、維生素C或E等。許多其它抗氧化劑已為所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員習(xí)知。本文所述抗IL-13抗體調(diào)配物可作為炎性病狀治療方案的一部分，其可與許多不同抗炎劑組合。例如，本文所述抗IL-13抗體調(diào)配物可與IL-4抑制劑、IL-5抑制劑、IgE抑制劑、IL-9抑制劑、TNF拮抗劑、嗜酸細(xì)胞活化趨化因子/CCR3拮抗劑、NSAID、DMARD、免疫抑制劑、磷酸二酯酶抑制劑、或抗組胺劑中的一種或多種組合投與。在應(yīng)用的一個(gè)實(shí)施例中，本文所述抗IL-13抗體調(diào)配物可與甲氨蝶呤組合投與。在另一實(shí)施例中，本文所述抗IL-13抗體調(diào)配物可與TNF-ot抑制劑組合投與。在哮喘的情況下，本文所述的抗IL-13抗體調(diào)配物可與NSAID、皮質(zhì)類固醇、白細(xì)胞三烯修飾劑、長效(3-腎上腺素能激動(dòng)藥、茶堿、抗組胺劑、和色甘酸鈉中的一種或多種組合投與。在癌癥的情況下，本文所述的抗IL-13抗體調(diào)配物可與一種或多種抗血管生成因子、化學(xué)治療劑組合投與，或作為放射線療法的輔助劑。進(jìn)一步預(yù)計(jì)，投與本文所述的抗IL-13抗體調(diào)配物將作為癌癥治療方案的一部分，所述調(diào)配物可與許多不同癌癥治療劑組合。在易激性腸病(IBD)的情況下，本文所述的抗IL-13抗體調(diào)配物可與一種或多種抗炎劑一起投與且此外可與改變飲食方案進(jìn)行組合。實(shí)通過下列若干實(shí)例進(jìn)一步闡釋本發(fā)明。這些實(shí)例僅出于例示性目的而提供。不應(yīng)將其理解為以任何方式限制本發(fā)明的范圍或內(nèi)容。實(shí)例1:經(jīng)凍干抗IL-13調(diào)配物的穩(wěn)定性一種儲(chǔ)存欲用于(例如)治療應(yīng)用的抗體的方法是作為通過凍干制得的干粉末來儲(chǔ)存。因此，研究經(jīng)凍干抗IL-13調(diào)配物的長期穩(wěn)定性。簡而言之，通過無菌過濾制得含人源化抗IL-13抗體(50mg/ml)、10mM的組氨酸、5%的蔗糖(重量/體積)的調(diào)配物(pH6.0)并將大約3.2ml分配于5ml去熱原玻璃管式小瓶中，且然后凍干。將調(diào)配物在4。C、25。C或40。C下儲(chǔ)存1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月和12個(gè)月，以及在4。C和25'C下儲(chǔ)存18個(gè)月和24個(gè)月，然后利用1.3ml無菌水(USP)進(jìn)行重構(gòu)以使經(jīng)重構(gòu)調(diào)配物達(dá)約1.6ml，以便調(diào)配物是100mg/ml的抗IL-13抗體、20mM的組氨酸、和10%的蔗糖，pH6.0。使用SEC-HPLC分析HMW物質(zhì)的百分比。凍干和重構(gòu)之前調(diào)配物中HMW物質(zhì)的百分比在調(diào)配物中總蛋白質(zhì)的1%-1.5%之間且在4°<:和25:(:下儲(chǔ)存后所有試樣還在約1%-2%之間(圖l)。于40'C下儲(chǔ)存12個(gè)月之后，調(diào)配物有約3.5XHMW物質(zhì)(圖l)。因此，于5'C和25。C下儲(chǔ)存24個(gè)月的試樣中HMW物質(zhì)的水平并無實(shí)質(zhì)增加。還使用基于細(xì)胞的分析對經(jīng)凍干抗IL-13抗體調(diào)配物的生物活性進(jìn)行分析，其中在不同濃度的經(jīng)調(diào)配抗體的存在下檢查IL-13依賴性細(xì)胞增殖的抑制來證實(shí)生物活性，即，結(jié)合IL-13并使其與細(xì)胞隔離的能力。將分析結(jié)果與使用未經(jīng)儲(chǔ)存的不同抗IL-13抗體所得結(jié)果相比較。圖2繪示來自此一組生物分析的數(shù)據(jù)。大體上，儲(chǔ)存24個(gè)月之后任何試樣中生物活性的量并無實(shí)質(zhì)變化。因此，如通過生物活性所測定，所述調(diào)配物適于將凍干調(diào)配物儲(chǔ)存至少24個(gè)月。這些數(shù)據(jù)表明本文所述的經(jīng)凍干抗IL-13調(diào)配物適于儲(chǔ)存至少24個(gè)月。實(shí)例2:高濃度液體調(diào)配物的穩(wěn)定性在一些情況下，期望以液體形式儲(chǔ)存抗IL-13抗體調(diào)配物。因此，研究含相對較高濃度抗IL-13抗體的液體抗IL-13調(diào)配物的長期穩(wěn)定性。簡而言之，通過無菌過濾含人源化抗IL-13抗體(100mg/ml)、lOmM的組氨酸、5%的蔗糖(重量/體積)的調(diào)配物(pH為6.0)制備所述調(diào)配物以儲(chǔ)存在去熱原玻璃小瓶中。將調(diào)配物于2'C-8°C、15°C、或25'C下儲(chǔ)存約6周、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月和24個(gè)月或在4CTC下儲(chǔ)存約6周、3個(gè)月和6個(gè)月，且每次分析是否存在HMW物質(zhì)、LMW物質(zhì)、生物活性、和濃度。使用SEC-HPLC分析HMW物質(zhì)的百分比。儲(chǔ)存之前調(diào)配物中高分子量物質(zhì)的百分比為調(diào)配物中總蛋白質(zhì)的2%-3%且在2°。-8°C、15。C和25。C下(圖3)儲(chǔ)存長達(dá)9個(gè)月的試樣中在約2%-4%之間，且在2°-8°。和15T:下儲(chǔ)存長達(dá)24個(gè)月后在約2%-4%之間。于40。C下儲(chǔ)存6個(gè)月后，調(diào)配物包含小于9X的HMW物質(zhì)(圖3)。因此，在低溫條件下儲(chǔ)存24個(gè)月的試樣中HMW物質(zhì)的水平并無實(shí)質(zhì)增加。還在100mg/ml的抗IL-13抗體調(diào)配物中分析抗IL-13抗體調(diào)配物中LMW物質(zhì)的百分比。儲(chǔ)存之前調(diào)配物中LMW物質(zhì)的百分比為儲(chǔ)存之前調(diào)配物中總蛋白質(zhì)的約1%-2%且在2"-8°C、15'C和25'C下(圖4)儲(chǔ)存長達(dá)9個(gè)月儲(chǔ)存時(shí)間的試樣中在約1%-3%之間，且在2。-8。C下儲(chǔ)存長達(dá)24個(gè)月后在1%-3%之間。于4(TC下儲(chǔ)存6個(gè)月后，調(diào)配物包含小于11^的LMW物質(zhì)(圖4)。因此，在低溫條件下儲(chǔ)存24個(gè)月的試樣中LMW物質(zhì)的水平并無實(shí)質(zhì)增加。使用100mg/ml的抗IL-13抗體調(diào)配物檢驗(yàn)另一穩(wěn)定性參數(shù)，即，結(jié)合活性。在這些試驗(yàn)中，在2。C-8°C、15°C、25t:和4(TC下儲(chǔ)存1個(gè)月、3個(gè)月和6個(gè)月、及僅在2。C-8。C和25。C下儲(chǔ)存9個(gè)月之后測定調(diào)配物結(jié)合活性相對于對照的百分比。分析特定監(jiān)測抗IL-13對經(jīng)標(biāo)記IL-13細(xì)胞因子試劑的結(jié)合親和力。調(diào)配物的初始結(jié)合活性為參考試樣的約120%且對于任何試樣在6個(gè)月的測試時(shí)期內(nèi)實(shí)質(zhì)上沒有變化(圖5)。經(jīng)測量，結(jié)合活性高達(dá)參考的約200%，已知此分析中通常觀察到誤差，此反映出試樣的結(jié)合活性隨時(shí)間基本上無變化，且結(jié)合結(jié)果沒有溫度相關(guān)傾向。還使用生物分析作為100mg/ml的抗IL-13抗體調(diào)配物的穩(wěn)定性參數(shù)。所述分析是如上文實(shí)例1中所闡述來實(shí)施。試樣在2°(:-8'C、15'C和25'C下儲(chǔ)存約6周、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月或24個(gè)月或在40。C下儲(chǔ)存約6周、3個(gè)月或6個(gè)月。數(shù)據(jù)表示為結(jié)合單位/毫克(圖6)。儲(chǔ)存之前試樣為約4.5x107U/mg且培養(yǎng)之后為約4.5-7.5x107U/mg。此反映了在儲(chǔ)存期間試樣的生物活性基本上無變化。數(shù)值的變化性反映了分析中固有的變化性。由于試樣中生物活性的量沒有降低，所以這些數(shù)據(jù)為所述調(diào)配物儲(chǔ)存抗IL-13的適宜性提供進(jìn)一步支持。還通過UV/Vis分析100mg/ml的抗IL-13抗體調(diào)配物在2°C-8°C、15。C和25°C下儲(chǔ)存約6周、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、18個(gè)月或24個(gè)月、或在4(TC下儲(chǔ)存約6周、3個(gè)月或6個(gè)月后的濃度。在所有所研究溫度下液體調(diào)配物的濃度實(shí)質(zhì)上相似(圖7)。實(shí)例3:低濃度液體調(diào)配物的儲(chǔ)存為進(jìn)一步檢驗(yàn)本發(fā)明調(diào)配物和其用于儲(chǔ)存抗IL-13抗體的適宜性，測試含相對低濃度抗IL-13的調(diào)配物。所述調(diào)配物是含0.5mg/ml人源化抗IL13抗體、10mM的組氨酸、5%的蔗糖的液體調(diào)配物，pH為6.0。將試樣于5'C下儲(chǔ)存6個(gè)月和12個(gè)月之后對其進(jìn)行測試，且然后測試各種穩(wěn)定性參數(shù)HMW物質(zhì)、LMW物質(zhì)、蛋白質(zhì)濃度、和結(jié)合活性。HMW物質(zhì)和LMW物質(zhì)是使用上文所闡述的方法進(jìn)行分析。蛋白質(zhì)濃度是使用UV-可見光譜通過測量試樣在280nm下的光密度并減去在320nm下的散射來分析，并使用蛋白質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)來計(jì)算。結(jié)果匯總于表l中。<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>這些數(shù)據(jù)表明，實(shí)質(zhì)上任何所分析穩(wěn)定性參數(shù)均無變化，此支持含相對較低濃度抗IL-13抗體的抗IL-13抗體調(diào)配物的適宜性。實(shí)例4:霧化抗IL-13調(diào)配物的適宜性抗IL-13抗體調(diào)配物的一個(gè)用途是(例如)通過噴霧直接投與給肺系統(tǒng)。為測試調(diào)配物噴霧的適宜性，使用市售噴霧器使0.5mg/ml人源化抗IL-13抗體、10mM的組氨酸、5%的蔗糖的調(diào)配物(pH6.0)霧化，回收氣溶膠，并通過分析降解(HMW物質(zhì)的形成)測試完整性，使用SEC-HPLC測試回收率、和結(jié)合活性。結(jié)果匯總于表2中。表2參數(shù)(方法)對照(噴霧前)噴霧后%HMW物質(zhì)0.750.80(SEC-HPLC)X回收(SEC-HPLC)100%99%濃度(uv-可見光譜)20.7mg/ml21.3mg/mlX結(jié)合活性(ELBA)189%186%這些數(shù)據(jù)表明，實(shí)質(zhì)上任何所測試穩(wěn)定性參數(shù)均無變化，此支持抗IL-13抗體調(diào)配物作為對噴霧劑型使用的適宜性。實(shí)例5:混合和過濾己證實(shí)，上述調(diào)配物中的抗IL-13抗體耐受混合和過濾，混合和過濾是兩個(gè)通用制造單元作業(yè)。簡而言之，將抗IL-13抗體以50mg/mL的蛋白質(zhì)濃度以相當(dāng)于制造期間所利用的漸增葉輪速度和時(shí)間進(jìn)行混合。所收集的每一試樣相對于開始物質(zhì)在濃度(如使用UV-可見光譜所分析)、高分子量物質(zhì)(使用SEC-HPLC進(jìn)行分析)和生物活性(使用結(jié)合分析來分析)方面均無變化?；旌涎芯恐螅玫訅菏箍笽L-13抗體通過通用0.22nm無菌過濾器。通常，氮壓力低于約30psig。過濾之后，其濃度(使用UV-可見光譜來分析)、HMW物質(zhì)(使用SEC-HPLC進(jìn)行分析)和生物活性(使用結(jié)合分析來分析)相對于開始物質(zhì)未展示變化。實(shí)例6:凍干和重構(gòu)在用于抗體的凍干和重構(gòu)條件方案的一個(gè)非限制實(shí)例中，將3.2ml以50mg/ml濃度存于調(diào)配物lOmM的組氨酸、5X(50mg/ml)蔗糖(pH6.0)中的抗體分配于透明玻璃管式小瓶(帶有維斯特(West)4432/501319硅灰色塞子)中并冷凍-干燥。冷凍干燥后，小瓶的干燥內(nèi)容物如下160mg抗體、3.2x10'5摩爾組氨酸和160mg蔗糖。冷凍干燥所得固體濾餅構(gòu)成大約0.32ml的體積，此是基于固體的密度(約320mg,密度為約lg/ml)。為使試樣重構(gòu)，將1.3ml水添加到小瓶內(nèi)容物中。將小瓶的內(nèi)容物溶于稀釋劑體積(1.3ml)中，加上固體本身的體積(0.3mL)總共約1.6ml，且調(diào)配物的濃度為約100mg/ml的抗體、約20mM的組氨酸、和約10%的蔗糖，pH6.0。實(shí)例7:試樣的制備和凍干拔/丄-"貧沐試摔激吝將以約85mg/mL的濃度存于20mM的組氨酸、10%的蔗糖(pH6.0)中的人源化抗IL-13抗體的冷凍試樣在37。C水浴中解凍。以10mM的組氨酸、5%的蔗糖(pH6.0)使用6kD-8kD分子量截留譜/Por透析管對125mL等份解凍物質(zhì)進(jìn)行透析。利29用10mM的組氨酸、5%的蔗糖(pH6.0)將所得溶液稀釋至目標(biāo)值50mg/mL(用作藥物的抗IL-13抗體調(diào)配物)。茶嫂嫂在各輪作業(yè)中，在高度為63mm的擱架和門前面使用鋁箔屏蔽以將冷凍真空干燥箱內(nèi)的輻射降至最低。在所有實(shí)驗(yàn)中，有一個(gè)盤完全充滿以維持冷凍真空干燥箱上的一致負(fù)載。所有蛋白質(zhì)小瓶的塞子均經(jīng)高壓滅菌并干燥。所有蛋白質(zhì)試樣的小瓶均用去離子水洗滌并去熱原。用于填充盤剩余部分的小瓶和塞子未經(jīng)處理。接種有抗IL-13抗體調(diào)配物的小瓶是以無菌方式在生物安全櫥中以160mg/小瓶的目標(biāo)值制得。在每次作業(yè)之前使用于穩(wěn)定性研究的小瓶充滿3.2ml實(shí)例6所述的新鮮調(diào)配物(事先未經(jīng)凍干的材料)。凍干期間，使額外的小瓶充滿與目標(biāo)凍干循環(huán)適宜的適宜緩沖液以維持冷凍真空干燥箱的一致負(fù)載。通過在蛋白質(zhì)陣列內(nèi)使用熱電偶來監(jiān)測凍干作用。謬縦差示械著雄—卿用于mDSC的所有試樣均以經(jīng)調(diào)制模式實(shí)施，其中幅值為0.5'C且時(shí)期為100秒。對于凍干后粉末來說，將試樣以2r/min，加熱到15CTC。所有粉末試樣均使用氮?dú)獯祾呤痔紫渲苽?。對于液體試樣來說，所有溫度斜坡上升均以0.5。C/min.實(shí)施且溫度與凍干循環(huán)中所用的溫度相匹配。最后加熱斜坡上升以2。C/min.實(shí)施以放大玻璃轉(zhuǎn)化作用。液體試樣是在試驗(yàn)臺上制備。冷茶f灤f微術(shù)為實(shí)施冷凍干燥顯微術(shù)，將試樣以0.5。C/min冷凍至-40。C，以模擬凍干。抽真空開始后，使溫度逐漸增加以觀察在升華期間試樣的結(jié)構(gòu)隨溫度的變化。冷凍干燥顯微鏡不允許進(jìn)行壓力對照，因此試樣是在完全真空下干燥。水分藩使用卡爾'費(fèi)歇爾滴定法(KarlFischertitration)來分析凍干試樣中的水分。用3ml甲醇對凍干試樣進(jìn)行重構(gòu)。實(shí)施兩次或三次500pL的注射。之后注射1%水標(biāo)準(zhǔn)物用作適宜性檢查。艘〃使敝//力架卿FTIR測量呈干粉狀態(tài)的抗體的二級結(jié)構(gòu)。壓制含分散于300mgKBr中的大約1mg經(jīng)調(diào)配干燥的蛋白質(zhì)小片并掃描200次。收集數(shù)據(jù)之后，分析涉及蔗糖對照劑的光譜差減、基線校正、平滑、二階導(dǎo)數(shù)和面積標(biāo)準(zhǔn)化。穩(wěn)定絲分析調(diào)配物中凍干抗體的穩(wěn)定性隨儲(chǔ)存時(shí)間和溫度的變化。凍干后于2匯-8"C下儲(chǔ)存4周和于50。C下儲(chǔ)存2周和4周后分析凍干抗IL-13抗體的試樣。冷藏試樣是儲(chǔ)存在人可進(jìn)入的冷藏冷凍室中。高溫試樣是儲(chǔ)存在設(shè)定為5(TC的雷伯拉恩英派瑞恒溫箱(LabLineImperialIncubator)中。在適當(dāng)時(shí)間點(diǎn)時(shí)不再儲(chǔ)存試樣并使其升溫或冷卻至室溫，然后分析。重雌觀貨層在用1.2ml注射用無菌水重構(gòu)之前、期間和之后目測檢査來自凍干后分析和儲(chǔ)存穩(wěn)定性分析的凍干調(diào)配物的小瓶。在重構(gòu)之前在燈箱中針對黑色和白色背景檢查小瓶的塊狀物顏色、完整性、水分、顆粒和缺陷。目測檢査凍干塊狀物之后，用啟蓋器去除小瓶的帽和巻邊密封。去除塞子并使用適當(dāng)?shù)囊埔汗軐⒆⑸溆脽o菌水緩慢分配于小瓶中。利用漩渦運(yùn)動(dòng)分配稀釋劑以確保塊狀物完全潤濕。一旦稀釋劑完全分配，利用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室計(jì)時(shí)器對重構(gòu)進(jìn)行計(jì)時(shí)并將小瓶重新蓋上。當(dāng)最后的片狀固體溶解時(shí)完成重構(gòu)。在兩手之間晃動(dòng)小瓶以促進(jìn)重構(gòu)。當(dāng)凍干塊狀物處于重構(gòu)過程時(shí)，記錄關(guān)于正溶解溶液狀態(tài)的觀察結(jié)果，例如澄清、起泡和有泡沫。一旦完成重構(gòu)，記錄重構(gòu)時(shí)間并使小瓶在試驗(yàn)臺上靜置數(shù)分鐘以使所得溶液能夠沉降并使重構(gòu)期間所形成的大部分氣泡散逸。然后在燈箱中針對黑色和白色背景檢查重構(gòu)溶液的顏色、透明度和顆粒。庸資/^#/#餘色譜f^C-7ff丄Q將2微升純凈抗IL-13抗體調(diào)配物試樣注入帶有保護(hù)柱的G3000swxl柱上(陶色哈斯(TosoHaas)部件編號為08541和08543)。流動(dòng)相是添加有250mM的氯化鈉的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。流速為0.75ml/min.且運(yùn)行時(shí)間為30分鐘。紫外吸光度是在280nm的波長下監(jiān)測。使用沃特因帕沃(WatersEmpower)TM軟件對色譜圖進(jìn)行積分以將主抗IL-13抗體峰與高分子量和低分子量物質(zhì)分開。舒濃度,定游鮮^週;^瓶W分別通過將10pi試樣添加到19卯pi和3990|il由10mM的組氨酸和5%的蔗糖形成的混合物(pH6.0)中將抗體濃度為100mg/ml的調(diào)配物試樣稀釋至大約0.5mg/ml和0.25mg/ml。將200微升的所得溶液連同緩沖液空白放置于96孔微量滴定板中的各孔中。在斯佩克特麥克斯(Spectramax)⑥Plus板讀數(shù)器中讀取板在280nm和320nm波長下的紫外吸光度。280nm下的吸光度減去320下的吸光度并除以消光系數(shù)(1.405mL/mg-cm)乘路徑長度(1cm)來測定每一孔中溶液的蛋白質(zhì)濃度。利用適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，并測定平均蛋白質(zhì)濃度。^7_^敦浙游/-^€欲^度,譜AW將200微升欲分析的每一抗IL-13抗體試樣等份添加于96孔微量滴定板的各孔中。緩沖液空白作為對照。在斯佩克特麥克斯普拉斯(SpectramaxPlus)板中讀取板在420nm波長處的可見吸光度。冶眾學(xué)^<^)潛會(huì)分折利用大腸桿菌(E.coli)Flag抗IL-13抗體結(jié)合分析格式(波沃斯(BioVeris),蓋瑟斯堡，馬里蘭(Gaithersburg,MD))對試樣進(jìn)行結(jié)合分析。分析是對等份添加于96孔板格式上的試樣實(shí)施。拔/丄-/3拔沐f激分界使用TF-1細(xì)胞增殖生物分析來測試試樣的生物活性。IL-13抗體阻斷在活體內(nèi)IL-13細(xì)胞因子至細(xì)胞表面受體的結(jié)合，此阻止與過敏性疾病和哮喘的發(fā)病機(jī)制有關(guān)的具有受體的細(xì)胞活化。此分析中所用活體外生物分析模型是由細(xì)胞系(人類TF1紅白血病細(xì)胞系；ATCCCRL-2003)構(gòu)成，所述細(xì)胞系表達(dá)IL-13受體且在IL-13細(xì)胞因子的存在下增殖。使用4-參數(shù)邏輯斯諦方程(logisticequation)來擬合IL-13抗體對TF1細(xì)胞的IL-13反應(yīng)的抑制作用。生物活性(相對功效)是通過將IL-13抗體測試試樣的抑制曲線與用作分析標(biāo)準(zhǔn)物的參考物質(zhì)的抑制曲線相比較來測定。利用一系列連續(xù)步驟(下文所述)來開發(fā)凍干循環(huán)。游,產(chǎn)/^蘊(yùn)度滯抗IL-13抗體的臨界產(chǎn)品溫度是通過兩種正交方法(即，調(diào)制式差示掃描量熱法(mDSC)和冷凍干燥顯微術(shù))來鑒別。此兩種方法用于鑒別冷凍產(chǎn)品的玻璃轉(zhuǎn)化溫度(mDSC)和所得對塌溫度(冷凍干燥顯微術(shù))。在初次干燥期間將產(chǎn)品維持在此溫度下的凍干循環(huán)將獲得完整塊狀物結(jié)構(gòu)。假設(shè)最低適宜溫度是-25'C，且因此當(dāng)開發(fā)調(diào)配物和抗體凍干的方法時(shí)此溫度通常包括在經(jīng)設(shè)計(jì)用以測試條件和調(diào)配物的程序中，如本文所述。凍f翁翠教/:f根據(jù)來自上文所述研究的結(jié)果，實(shí)施三個(gè)不同的凍干循環(huán)以檢驗(yàn)在開發(fā)適宜凍干程序中三個(gè)所關(guān)注參數(shù)，所述凍干程序用于制備適于儲(chǔ)存或其它程序的凍干調(diào)配物。所檢驗(yàn)的第一參數(shù)是對照循環(huán)，其重復(fù)先前穩(wěn)定性研究的循環(huán)。所有此前開發(fā)的穩(wěn)定性循環(huán)均利用此循環(huán)，因此其作為此分析的起點(diǎn)。第二參數(shù)是退火影響。利用以上對照循環(huán)凍干的抗IL-13抗體調(diào)配物的重構(gòu)時(shí)間相當(dāng)長，例如約100sec.到500sec(圖16)。包括高于冷凍溶液的玻璃轉(zhuǎn)化溫度以上的退火作為冷凍熱處理期間的額外步驟用以增加抽真空開始之前的冰晶尺寸。此增加的冰晶尺寸致使在凍干結(jié)束時(shí)干燥塊狀物的孔尺寸增加。較大的孔可促使水滲到凍干塊狀物中并改良重構(gòu)。第三個(gè)測試參數(shù)是攻擊性循環(huán)。使初次干燥溫度增加明顯高于對照循環(huán)設(shè)定點(diǎn)可明顯增加初次干燥期間的抗IL-13抗體調(diào)配物產(chǎn)品溫度。此凍干循環(huán)用于評價(jià)在凍干期間抗IL-13抗體調(diào)配物對產(chǎn)品溫度的敏感性，且可用于在實(shí)行正式凍干耐受性研究之前在早期臨床試驗(yàn)期間評價(jià)制造偏差。茶于脾鮮仿針對抗IL-13抗體調(diào)配物所選凍干循環(huán)的評估分為兩個(gè)方面基于凍干后所實(shí)施測試的直接比較，和在加速條件下培養(yǎng)之后所造成的潛在較長期影響。郝產(chǎn)/^溢度，抗IL-13抗體調(diào)配物產(chǎn)品含有接近50%的蛋白質(zhì)。因此，預(yù)計(jì)蛋白質(zhì)控制冷凍和凍干狀態(tài)的物理性質(zhì)。凍干之前，利用次周圍環(huán)境調(diào)制式差示掃描量熱法(mDSC)探求調(diào)配物冷凍濃縮無定形相的玻璃轉(zhuǎn)化溫度。在此試驗(yàn)中，抗IL-13抗體在5X的蔗糖、的濃度為50mg/ml。在這些條件下，經(jīng)鑒別最低轉(zhuǎn)化溫度為-ll'C(圖8)。臨界溫度是通過分析冷凍干燥顯微術(shù)溫度推移(圖9A-9F)來證實(shí)。在這些試驗(yàn)中，通過從-25。C加熱到-15'C而失去結(jié)構(gòu)并通過冷卻至-18'C再次獲得結(jié)構(gòu)。通過從-10'C加熱到-4"C的熔融起始點(diǎn)再次失去結(jié)構(gòu)。所有變化均可逆，如由當(dāng)試樣冷卻至-16'C時(shí)所觀察到的相當(dāng)結(jié)構(gòu)所指示。因此，在約-15'C下觀察到可逆轉(zhuǎn)化，且另一轉(zhuǎn)化在-l(TC與-6'C之間。使溫度降至低于-16"C獲得與初始結(jié)構(gòu)相當(dāng)?shù)母稍锝Y(jié)構(gòu)。根據(jù)此信息，選擇-15"C的產(chǎn)品溫作為臨界溫度以在凍干期間維持低于此溫度。此方法闡釋用于選擇凍干的臨界溫度的方法。連續(xù)執(zhí)行三個(gè)凍干循環(huán)。循環(huán)軌跡展示于圖10-12中。所有循環(huán)在初次和二次干燥期間均維持100mT的室壓力。對于所有斜坡上升斜坡速率均為0.5'C/min.，除了在圖11和12中初次與二次干燥之間這些循環(huán)的速率為0.2°C/min.)?？勺儏?shù)匯總于表3中。表3.凍干參數(shù)白勺比較(最后一個(gè)熱電偶達(dá)到擱架溫度的初次干燥時(shí)間).步驟攻擊性對照退火退火--8小時(shí)1°干燥12小時(shí)21小時(shí)21小時(shí)2°干燥3小時(shí)4小時(shí)4小時(shí)茶于蘇鮮汰.茶f后在初次干燥期間三個(gè)循環(huán)(對照、攻擊性和退火)中每一個(gè)的產(chǎn)品(抗IL-13抗體)溫度范圍展示于圖13中。退火產(chǎn)品與對照產(chǎn)品的熱電偶相似，而攻擊性循環(huán)的高擱架溫度導(dǎo)致在初次干燥期間增加接近io°c。凍干后，針對來自三個(gè)凍干循環(huán)中每一個(gè)的抗IL-13抗體調(diào)配物的小瓶測試固體和重構(gòu)液體二者的生物化學(xué)完整性。固態(tài)是使用以下方法測量mDSC(測量玻璃轉(zhuǎn)化溫度)、BET表面積測量、卡爾'費(fèi)歇爾水分滴定法、傅里葉變換紅外光譜(測量蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu))、和塊狀物外觀。通過以下評估重構(gòu)液體重構(gòu)時(shí)間、視覺外觀、用于測定蛋白質(zhì)濃度的280nm下的紫外吸光度、用于測定光散射的420nm下的可見光吸光度、用于高分子量定量的SEC-HPLC、用于測定表面電荷不均勻性和IGEN結(jié)合的CEX-HPLC、和用于測定生物活性的TF-1生物分析。所有三個(gè)循環(huán)均產(chǎn)生白色固體塊，其中不存在包括顆?；蛩衷趦?nèi)的明顯缺陷。對照循環(huán)的mDSC溫度記錄圖展示于圖14中。表5匯總了每一循環(huán)初次熱轉(zhuǎn)化的結(jié)果。在53'C下的轉(zhuǎn)化量值不算大，但在其它兩個(gè)凍干循環(huán)中仍可檢測到。當(dāng)在5(TC下加速儲(chǔ)存時(shí)，此轉(zhuǎn)化看起來并不影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。比較凍干后調(diào)配物的二級結(jié)構(gòu)顯示，在三個(gè)試樣之間蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)相當(dāng)(表4，圖15)。在圖15中，其展示在試樣抗體的酰胺I區(qū)中粉末傅里葉變換紅外光譜(FTIR)的二階導(dǎo)數(shù)，每次掃描的積分面積標(biāo)準(zhǔn)化成1。表4中包括的信息表示在P-折疊帶33(卩-sheetband)(1624-1657cr^)中總面積的分?jǐn)?shù)作為試樣間比較的基礎(chǔ)。當(dāng)比較呈液態(tài)的調(diào)配物與呈干燥狀態(tài)的調(diào)配物的二級結(jié)構(gòu)時(shí)，相關(guān)(3-折疊區(qū)域中的差異很明顯(液體的0.37對凍干粉末的0.25-0.27)。此不同很可能是由于不存在呈凍干狀態(tài)的水和蛋白質(zhì)構(gòu)型的相應(yīng)變化。表4.凍干后所測量的玻璃轉(zhuǎn)化溫度(Tg)、BET表面積、殘余水分和二級結(jié)構(gòu)循環(huán)Tg(。C)BET表面積(m2/g)水分卩-折疊帶的深度攻擊性860.480.45%0.255對照840.640.73%0.249退火850.590.59%0.270將來自每一循環(huán)的一個(gè)小瓶用1.2ml注射用無菌水重構(gòu)。記錄每一循環(huán)重構(gòu)期間的外觀、重構(gòu)時(shí)間、和重構(gòu)后60分鐘的外觀并匯總于表6中。所有三個(gè)循環(huán)均需要物理搖動(dòng)(在兩手之間晃動(dòng))以使塊狀物溶解。攻擊性循環(huán)(循環(huán)1)和對照循環(huán)(循環(huán)2)的塊狀物首先破碎并在適于生產(chǎn)的時(shí)間范圍內(nèi)溶解重構(gòu)時(shí)間分別為140sec.和73sec。重構(gòu)時(shí)間的大部分花費(fèi)在溶解較小較難溶的塊狀物碎塊上。退火循環(huán)試樣(循環(huán)3)重構(gòu)花費(fèi)的時(shí)間最長。此結(jié)果反駁了退火步驟可能由于形成較多孔的塊狀物而獲得較短重構(gòu)時(shí)間的理論。重構(gòu)后塊狀物保持完整并在373sec內(nèi)緩慢溶解，此類似于溶解LifesaverTM。所有三個(gè)循環(huán)均在重構(gòu)期間產(chǎn)生不同量的泡沫。對照循環(huán)產(chǎn)生的泡沫量最多，之后是退火循環(huán)，然后是攻擊性循環(huán)，如通過在420nm下的UV/Vis的溶液散射所看出(表5)。重構(gòu)后，使試樣沉降60分鐘。在此期間，大部分泡沫散逸且當(dāng)使用燈箱針對黑色和白色背景進(jìn)行檢查時(shí)所有三種溶液具有相似外觀。所有三個(gè)循環(huán)具有淺黃色且稍微發(fā)乳白色，其中退火試樣稍更多的發(fā)乳白色。所有三個(gè)試樣均使用本文所述的分析來分析生物化學(xué)完整性。這些數(shù)據(jù)表明，重構(gòu)之后抗IL-13抗體調(diào)配物的完整性隨凍干循環(huán)變化無明顯差異。如通過測量抗體在調(diào)配物中的濃度所表明，所有三個(gè)循環(huán)所回收蛋白質(zhì)的量基本上相等。調(diào)配物中高分子量化合物的量(如通過尺寸排除色譜所測量)和表面電荷不均勻性的量(如通過陽離子交換色譜所測量)對于所有三個(gè)循環(huán)來說基本上相同。沒有鑒別出分子的功能性(如通過IGEN結(jié)合分析和TF-1生物分析所測量)隨凍干循環(huán)而變化。表5.重構(gòu)后的數(shù)據(jù)1.2-mL重構(gòu)(100mg/mL目標(biāo)值，計(jì)及塊狀物)分析循環(huán)1(攻擊性)循環(huán)2(對照)循環(huán)3(對照，采取8hr退火)重構(gòu)期間的外觀相當(dāng)易起泡沫，快速散逸大片塊狀物難以重構(gòu)劇烈搖晃以進(jìn)入溶液極易起泡沫，散逸較不快.大片塊狀物難以重構(gòu)劇烈搖晃以進(jìn)入溶液極易起泡沫，較大氣泡散逸慢得多。極緩慢重構(gòu)期間塊狀物維持其形狀。劇烈搖晃以進(jìn)入溶液重構(gòu)之后的外觀(60分鐘)稍微發(fā)乳白色，帶淺黃色。仍留有氣泡。顯然更具乳白色，帶淺黃色。仍留有氣泡。稍微發(fā)乳白色，帶淺黃色。仍留有氣泡。<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>穩(wěn)定絲盡管所研究凍干循環(huán)并未顯示對本文所述調(diào)配物中抗IL-13抗體的完整性具有直接凍干后影響，但評估儲(chǔ)存穩(wěn)定性是否隨凍干循環(huán)而變化很重要。為對此進(jìn)行測試，如以上章節(jié)"穩(wěn)定性"中所概述執(zhí)行短期加速穩(wěn)定性研究。監(jiān)測試樣的重構(gòu)時(shí)間、通過UV/Vis在280nm下監(jiān)測蛋白質(zhì)濃度的改變、通過UV/Vis在420nm下監(jiān)測溶液光散射、通過SEC-HPLC監(jiān)測高分子量聚集物的變化、和通過IGEN結(jié)合分析監(jiān)測結(jié)合活性的變化。圖16經(jīng)繪制以展示重構(gòu)時(shí)間隨儲(chǔ)存時(shí)間和儲(chǔ)存溫度的變化。盡管重構(gòu)時(shí)間的絕對數(shù)存在可變性，但除了在5。C下儲(chǔ)存的攻擊性循環(huán)和退火循環(huán)以外，此趨勢類似于在凍干后分析中所觀察到的趨勢。對照循環(huán)試樣重構(gòu)最快，之后是攻擊性循環(huán)試樣。退火循環(huán)試樣重構(gòu)最慢。于5'C下儲(chǔ)存的攻擊性和退火試樣的時(shí)間點(diǎn)變化和偏離凍干后趨勢可能是由于一個(gè)或多個(gè)控制欠佳的變量所致。這些包括重構(gòu)期間塊狀物潤濕的速率、當(dāng)將注射用水分配于小瓶中時(shí)多少和哪部分塊狀物被潤濕、和在重構(gòu)期間攪動(dòng)小瓶造成的攻擊性程度。所有這些變量均是主觀的且取決于操作人員，且可能影響重構(gòu)時(shí)間和光散射。在儲(chǔ)存期間(零到4周)或隨著溫度變化(5"C和5(TC)，圖17中所展示的蛋白質(zhì)濃度在三個(gè)所測試循環(huán)之間并無明顯改變。從初始時(shí)間點(diǎn)到2周時(shí)濃度的增加可能是由于在時(shí)間點(diǎn)之間重構(gòu)體積的測量精度的不同。在儲(chǔ)存期間或隨著溫度變化，圖18中所展示的溶液散光在三個(gè)循環(huán)之間并無明顯改變。對照循環(huán)開始時(shí)間點(diǎn)處的結(jié)果升高是由于試樣處理而造成額外氣泡夾帶，而不是由于循環(huán)不同。還分析了儲(chǔ)存期間試樣中所存在HMW物質(zhì)的百分比。分析是使用SEC-HPLC來實(shí)施。圖19中展示的數(shù)據(jù)表明，儲(chǔ)存期間三個(gè)不同的凍干循環(huán)之間高分子量聚集物的百分比并無明顯改變。還使用板分析在96孔格式中分析試樣的結(jié)合(IGEN)。圖20展示，在4周的時(shí)期內(nèi)在2°C-8'C或5(TC下調(diào)配物中抗IL-13抗體的結(jié)合在凍干循環(huán)期間并無明顯變化。這些數(shù)據(jù)表明，調(diào)配物中的抗IL-13抗體在所研究的三個(gè)凍干循環(huán)期間均具有相當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性范圍。退火步驟的添加看起來使重構(gòu)變差，而非對其進(jìn)行改進(jìn)。攻擊性循環(huán)由于在初次干燥期間觀察到產(chǎn)品溫度增加接近1(TC而將起到耐受性評估的作用。潛論已證實(shí)，調(diào)配物中的抗IL-13抗體在凍干期間可耐受產(chǎn)品極限溫度。在5(TC下儲(chǔ)存4周的穩(wěn)定性范圍大約與初次干燥期間產(chǎn)品溫度相差近l(TC的物質(zhì)相同。實(shí)例8:IL-13抗體調(diào)配物為了篩選用于IL-13抗體液體調(diào)配物的可能賦形劑，使用0.5ml的100mg/mlIMA-638抗體在帶有維斯特4432/50塞子的13mm維斯特玻璃小瓶中或BDHypak預(yù)裝填注射器中在4(TC的儲(chǔ)存溫度下儲(chǔ)存6周實(shí)施短期加速穩(wěn)定性研究。然后通過使用在280nm下的吸光度和SEC-HPLC測量濃度來測試抗體的穩(wěn)定性。所測試調(diào)配物包括pH從5.0變化至5.5變化至6.0;不同緩沖液，例如組氨酸、琥珀酸鈉和乙酸鈉；不同蔗糖濃度(0%、2.5%、5.0%和10%);和其它添加劑，例如山梨醇、甘氨酸、精氨酸、和甲硫氨酸。下表6提供此篩選中所測試的調(diào)配物。表6.液體調(diào)配物編號調(diào)配物1，10mM的組氨酸、0%的蔗糖，pH6.02.lOmM的組氨酸、2.5%的蔗糖，pH6.03.lOmM的組氨酸、5%的蔗糖，pH6.04.10mM的組氨酸、10%的蔗糖，pH6.05.10mM的組氨酸、0%的蔗糖，pH5.56.10mM的組氨酸、2.5%的蔗糖，pH5.57.lOmM的組氨酸、5%的蔗糖，pH5.58.10mM的組氨酸、10%的蔗糖，pH5.59.10mM的組氨酸、5%的山梨醇，pH6.010.10mM的組氨酸、1%的甘氨酸，pH6.036<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>于4(TC下儲(chǔ)存6周后的％回收是通過UV/Vis測定抗體濃度來評估且展示于圖21中。在各調(diào)配物之間回收率實(shí)質(zhì)上相似，但調(diào)配物4和8的回收率最高。于4(TC下儲(chǔ)存6周后高分子量物質(zhì)的％增加展示于圖22中。預(yù)裝填注射器的高分子量聚集物比小瓶少(參見圖22，調(diào)配物4)。調(diào)配物6、8、14和15展示高分子量物質(zhì)的增加最少(在0.5%與1.25%之間)。于4(TC下儲(chǔ)存6周后低分子量物質(zhì)的^增加展示于圖23中。與HMW相反，預(yù)裝填注射器的LMW物質(zhì)的增加通常比玻璃小瓶少。調(diào)配物1-13的XLMW變化為約3%-4%?？傊?，大多數(shù)調(diào)配物顯示可接受的穩(wěn)定性范圍，此證明最適宜pH為5-6.5，且允許包括不同適宜賦形劑，這是因?yàn)椴粫?huì)有賦形劑對蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性有害。實(shí)例9:評估調(diào)配物中是否需要吐溫為了在界面降解情形下闡述來自實(shí)例8的首選候選調(diào)配物中是否需要吐溫，使用表7中所列出的8個(gè)首選候選物實(shí)施振蕩研究和冷凍-解凍研究。表7.首選候選物<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>振蕩研究是通過使用在玻璃小瓶中的0.25ml的100mg/mlIMA-638液體調(diào)配物并于室溫下在凝膠振蕩器上將玻璃小瓶以大約200rpm振蕩24小時(shí)來實(shí)施。將經(jīng)振蕩試樣的濃度與未經(jīng)振蕩試樣(對照)的濃度相比較。不同抗體調(diào)配物振蕩后的IMA-638濃度展示于圖24中。各調(diào)配物之間的濃度實(shí)質(zhì)上相似。圖25提供IMA-638調(diào)配物振蕩之后的^HMW物質(zhì)。各調(diào)配物之中的HMW物質(zhì)在約1.2%到約1.5%之間的范圍內(nèi)。冷凍-解凍研究是通過使用在聚丙烯試管中的0.25m的100mg/mlIMA-638液體調(diào)配物來實(shí)施，其中冷凍循環(huán)是在-80'C下實(shí)施且解凍循環(huán)是在37。C下實(shí)施。冷凍-解凍循環(huán)實(shí)施1次(FT1)、3次(FT3)或5次(FT5)。各冷凍-解凍循環(huán)之后試樣的濃度與未經(jīng)受冷凍-解凍循環(huán)的對照試樣濃度的比較展示于圖26中。也測定了冷凍-解凍循環(huán)之后的XHMW物質(zhì)并展示于圖27中。冷凍-解凍之后各調(diào)配物中的XHMW物質(zhì)在約1.2%到約1.5%之間的范圍內(nèi)。吐溫(Tween)的存在未展示對保護(hù)不受這些條件下的剪切敏感性有明確影響。實(shí)例10:預(yù)裝填注射器中的液體IL-13抗體調(diào)配物的評估下表8中所列示的100mg/mlIMA-638抗體調(diào)配物的穩(wěn)定性是通過測定在4°C、25'C和4(TC下在7個(gè)月內(nèi)XHMW物質(zhì)來評估，所述調(diào)配物包裝成在帶有維斯特4432/50塞子的BDHypakTM預(yù)裝填注射器中的1ml調(diào)配物。這些研究的結(jié)果展示于圖28、29和30中。表8.HypakTM預(yù)裝填注射器調(diào)配物<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>在4。C下從t:O個(gè)月到t=7個(gè)月有介于0.70%與0.90%之間的11^1\^物質(zhì)。在25'C下，有介于約0.75X與約2.00X之間的HMW物質(zhì)，其中聚集物隨時(shí)間流失而增加。在40。C下，對于調(diào)配物l-3和5所有調(diào)配物中的聚集物隨時(shí)間流失在7個(gè)月時(shí)增加到4.5%到6.5%之間。在調(diào)配物4中觀察到聚集物的增加最少(在7個(gè)月時(shí)約3%)。將精氨酸和吐溫添加到由10mM的組氨酸和5X的蔗糖構(gòu)成的調(diào)配物中看起來改良在所有所研究溫度下在預(yù)裝填注射器中的IL-13抗體的穩(wěn)定性。因此，這些賦形劑中的一種或兩種可為抗IL-13調(diào)配物提供額外穩(wěn)定性益處。實(shí)例11:精氨酸對預(yù)裝填注射器中的IMA-638液體調(diào)配物的影響添加低濃度精氨酸(0.1%-2%)對調(diào)配于10mM的組氨酸、5%的蔗糖和0.01%的吐溫80中的100mg/mlIMA-638抗體調(diào)配物的穩(wěn)定性的影響是通過將帶有維斯特W4023杜若弗酪(Durafluor)塞子的預(yù)裝填1mlBDHypakSCF在40。C下儲(chǔ)存4周、8周、12周和28周之后HMW物質(zhì)的X變化來研究。此研究的結(jié)果展示于圖31中。數(shù)據(jù)表明，添加精氨酸使隨時(shí)間流失所形成的HMW聚集的量降低。實(shí)例12:來自PARILCPlus噴霧器的IMA-638氣溶膠的表征本發(fā)明的IL-13抗體調(diào)配物可通過包括氣溶膠在內(nèi)的各種方式投與給個(gè)體。氣溶膠是液體或固體粒子于空氣中的懸浮液。在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，IL-13抗體調(diào)配物用于肺遞送。用于肺遞送的藥物粒子的特征通常在于空氣動(dòng)力學(xué)直徑而不是幾何直徑。空氣動(dòng)力學(xué)直徑是單位密度(lg/ml)球體的直徑，所述球體具有與所討論粒子相同的重力沉降速度?？諝鈩?dòng)力學(xué)直徑考慮了反影響粒子在空氣中性質(zhì)的物理性質(zhì)(例如密度和形狀)。粒子沉降速度與空氣動(dòng)力學(xué)直徑成比例。氣載粒子質(zhì)量的分布相對于空氣動(dòng)力學(xué)直徑的中值稱為質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑(MMAD)。幾何標(biāo)準(zhǔn)偏差(GSD)是關(guān)于MMAD散布的量度。最后，微粒分?jǐn)?shù)(FPF)是低于特定空氣動(dòng)力學(xué)直徑(小于4.7nm)的粒子的分?jǐn)?shù)。MMAD、GSD和FPF均通過安德森階式撞擊取樣器(AndersonCascadeImpactor)(ACI)來測量。ACI測量由噴霧器、定量吸入器、干粉吸入器、環(huán)境等所產(chǎn)生的液體/粒子的尺寸分布。在此試驗(yàn)中，測定從PARILCPlus噴霧器中由50mg/ml和0.5mg/mlIMA-638調(diào)配物(10mM的組氨酸、5%的蔗糖，pH6.0)所產(chǎn)生氣溶膠的MMAD、GSD和FPF。表9提供此研究的結(jié)果。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>所評價(jià)IMA-638調(diào)配物提供完全適用于通過噴霧來肺遞送抗IL-13抗體的氣溶膠特性(包括粒徑和蛋白質(zhì)完整性)。實(shí)例13:經(jīng)凍干IL-13抗體IMA-026的穩(wěn)定性研究經(jīng)凍干抗IL-13抗體調(diào)配物的長期穩(wěn)定性。簡而言之，通過無菌過濾制備含抗IL-13抗體IMA-026(50mg/ml)、10mM的組氨酸、5%的蔗糖(重量/體積)的調(diào)配物(pH6.0)并將大約3.2ml分配于帶有維斯特4432/501319硅灰色塞子的5ml去熱原玻璃管式小瓶中，且然后凍干。將調(diào)配物在4。C、25。C或40。C下儲(chǔ)存1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月和12個(gè)月，然后使用1.3ml無菌水(USP)將凍干物重構(gòu)以使重構(gòu)調(diào)配物達(dá)到約1.6ml，以便調(diào)配物有100mg/ml的抗IL-13抗體、20mM的組氨酸和10%的蔗糖，pH6.0。使用SEC-HPLC分析HMW物質(zhì)的百分比。凍干和重構(gòu)之前調(diào)配物中HMW物質(zhì)的百分比為調(diào)配物中總蛋白質(zhì)的約1%且在4'C和25'C下儲(chǔ)存的所有試樣中仍為約1%(圖32)。于40'C下儲(chǔ)存12個(gè)月之后，調(diào)配物有約3.0X的HMW物質(zhì)(圖32)。因此，在5"C和25匸下儲(chǔ)存12個(gè)月的試樣中HWM物質(zhì)的水平并無實(shí)質(zhì)增加。還使用基于細(xì)胞的分析對經(jīng)凍干抗IL-13抗體調(diào)配物的生物活性進(jìn)行分析，其中在不同濃度的經(jīng)調(diào)配抗體的存在下檢查IL-13依賴性細(xì)胞增殖的抑制來證實(shí)生物活性，即，結(jié)合IL-13并使其與細(xì)胞隔離的能力。將分析結(jié)果與使用未經(jīng)儲(chǔ)存的抗IL-13抗體所得結(jié)果相比較。圖33繪示來自此一組生物分析的數(shù)據(jù)。大體上，儲(chǔ)存12個(gè)月之后任何試樣中生物活性的量并無實(shí)質(zhì)變化。因此，如通過生物活性所測定，所述調(diào)配物適于將凍干調(diào)配物儲(chǔ)存至少12個(gè)月。這些數(shù)據(jù)表明，本文所述的經(jīng)凍干抗IL-13調(diào)配物適于儲(chǔ)存至少12個(gè)月。實(shí)例14:經(jīng)凍干IL-13抗體IMA-026的穩(wěn)定性此試驗(yàn)是如實(shí)例1中所述來試實(shí)施，只是所用抗體是IMA-026。所用IMA-026調(diào)配物是50mg/ml的IMA-026、10mM的組氨酸、5%的蔗糖、0.01%的吐溫80,pH6.0。結(jié)果實(shí)質(zhì)上類似于實(shí)例1中所獲得的結(jié)果。因此，經(jīng)凍干IMA-026與經(jīng)凍干IMA-638—樣是適宜調(diào)配物。實(shí)例15:IMA-026在有和沒有吐溫的情況下的霧化在此試驗(yàn)中，研究IMA-026的霧化對XHMW、％回收和生物活性的影響。來自此試驗(yàn)的數(shù)據(jù)展示于下表10中。表IO%HMW%回收*生物活性(U/mg)噴霧前0.13100.06.40E+07噴霧-無吐溫0.1376.07.30E+07噴霧-有吐溫0.1481.36.08E+07*=通過SEC-HP1X如從表10中可看出，噴霧前和噴霧后，在有或沒有吐溫的情況下IMA-026的性質(zhì)實(shí)質(zhì)上相似。因此，IMA-026適宜用作氣溶膠調(diào)配物。其它實(shí)施例應(yīng)了解，盡管己結(jié)合本發(fā)明的詳細(xì)說明闡述本發(fā)明，但以上說明書意欲闡釋而非限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍是由隨附權(quán)利要求書的范圍來界定。其它方面、優(yōu)點(diǎn)、和修改皆在以上權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。40權(quán)利要求1、一種抗IL-13抗體調(diào)配物，其包含(a)抗IL-13抗體；(b)冷凍保護(hù)劑；和(c)緩沖液，其中所述調(diào)配物的pH為約5.5到約6.5。2、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物是液體調(diào)配物、凍干調(diào)配物、可重構(gòu)成液體的凍干調(diào)配物、或氣溶膠調(diào)配物。3、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述抗IL-13抗體在所述調(diào)配物中的濃度為約0.5mg/ml到約250mg/ml、約0.5mg/ml到約45mg/ml、約0.5mg/ml到約100mg/ml、約100mg/ml到約200mg/ml、或約50mg/ml到約250mg/ml。4、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述抗IL-13抗體是人源化抗體。5、如權(quán)利要求4所述的調(diào)配物，其中所述抗體是K輕鏈構(gòu)建抗體。6、如權(quán)利要求4所述的調(diào)配物，其中所述抗體選自由IgGl抗體、和lgG2抗體和lgG4抗體組成的群組。7、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述抗IL-13抗體是單克隆抗體。8、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述抗IL-13抗體是IMA-638或IMA-026。9、如權(quán)利要求l所述的調(diào)配物，其中所述冷凍保護(hù)劑是約2.5%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖。10、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述緩沖液是約4mM到約60mM組氨酸緩沖液、約5mM到約25mM琥珀酸鹽緩沖液、或約5mM到25mM乙酸鹽緩沖液。11、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含濃度為約0%到約0.2%的表面活性劑。12、如權(quán)利要求4所述的調(diào)配物，其中所述表面活性劑選自由聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-40、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-65、聚山梨醇酯-80、聚山梨醇酯-85、和其組合組成的群組。13、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含約0.01%到約5%的精氨酸。14、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含約0.001%到約0.05X的吐溫(Tween)。15、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含以下物質(zhì)中的至少一種約1%到約10%的山梨醇、約0.1%到約2%的甘氨酸、約5mM到約150mM的甲硫氨酸、和約5mM到約100mM的氯化鈉。16、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述第二抗體選自由以下組成的群組具有不同于所述調(diào)配物的所述IL-13抗體的表位特異性的抗IL-13抗體、抗IgE抗體、抗C5抗體、抗IL-4抗體、抗TNF-a抗體和抗IL-9抗體。17、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含用于治療炎性病癥的第二治療或藥理活性劑，所述活性劑選自由抗組胺劑、抗炎劑、長效支氣管擴(kuò)張劑(LABA)、吸入性皮質(zhì)類固醇(ICS)和白細(xì)胞三烯抑制劑組成的群組。18、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中(a)所述抗體是人源化鼠抗IL-13抗體；(b)所述冷凍保護(hù)劑是約0.02%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖；且(c)所述緩沖液是約4mM到約60mM的組氨酸緩沖液，pH6.0。19、如權(quán)利要求18所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含約0.01%到約5%的精氨酸。20、如權(quán)利要求18所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含約0.001%到約0.05%的吐溫。21、如權(quán)利要求18所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含以下物質(zhì)中的至少一種約1%到約10%的山梨醇、約0.1%到約2%的甘氨酸、約5mM到約150mM的甲硫氨酸、和約5mM到約100mM的氯化鈉。22、如權(quán)利要求18所述的調(diào)配物，其進(jìn)一步包含大于0%且至多約0.2%的聚山梨醇酯80。23、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中(a)所述抗體是IMA-638或IMA-026;(b)所述冷凍保護(hù)劑是約0.02%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖；且(c)所述緩沖液是10mM的琥珀酸鹽緩沖液，pH6.0。24、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中(a)所述抗體是IMA-638或IMA-026;(b)所述冷凍保護(hù)劑是約0.02%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖；且(c)所述緩沖液是10mM的乙酸鹽緩沖液，pH6.0。25、一種抗IL-13抗體的氣溶膠調(diào)配物，其包含(a)抗IL-13抗體；(b)約5%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖；和(c)pH為約5.5到6.5的緩沖液。26、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含約0.01%到約5%的精氨酸。27、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含約0.001%到約0.05%的吐溫。28、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述調(diào)配物進(jìn)一步包含以下物質(zhì)中的至少一種約1%到約10%的山梨醇、約0.1%到約2%的甘氨酸、約5mM到約150mM的甲硫氨酸、和約5mM到約100mM的氯化鈉。29、如權(quán)利要求25所述的氣溶膠調(diào)配物，其進(jìn)一步包含用于治療哮喘或慢性阻塞性肺病的治療劑。30、一種抗IL-13抗體的凍干調(diào)配物，其包含(a)抗IL-13抗體；(b)約5%到約10%(重量/體積)的蔗糖或海藻糖；和(c)pH為約5.5到6.5的緩沖液。31、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中在-80。C下至少18個(gè)月后、在-80'C下至少24個(gè)月后、在-20'C下至少18個(gè)月后、在-20。C下至少24個(gè)月后、在2'C到8X:下至少18個(gè)月后、在2'C到8'C下至少24個(gè)月后、在25'C下至少18個(gè)月后、或在25'C下至少24個(gè)月后，高分子量(HMW)物質(zhì)和低分子量(LMW)物質(zhì)相比于所述初始調(diào)配物的%增加小于5%。32、如權(quán)利要求31所述的調(diào)配物，其中HMW和LMW物質(zhì)使用尺寸排除-高效液相色譜(SEC-HPLC)來分析。33、如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物，其中所述IL-13抗體在2"C到8'C下儲(chǔ)存至少18個(gè)月、或在2。C到8。C下儲(chǔ)存至少24個(gè)月之后，至少90%的所述抗體是單體抗體。34、如權(quán)利要求33所述的調(diào)配物，其中所述抗體的單體性質(zhì)通過結(jié)合分析、表面電荷分析、生物分析、或HMW物質(zhì)與LMW物質(zhì)的比例來測定。35、一種用于治療IL-13相關(guān)病癥的醫(yī)藥組合物，所述醫(yī)藥組合物包含如權(quán)利要求1所述的抗IL-13抗體調(diào)配物。36、如權(quán)利要求35所述的醫(yī)藥組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含約0.01%到約5%的精氨酸。37、如權(quán)利要求35所述的醫(yī)藥組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含約0.001%到約0.05%的吐溫。38、如權(quán)利要求35所述的醫(yī)藥組合物，其中所述組合物進(jìn)一步包含以下物質(zhì)中的至少一種約1%到約10%的山梨醇、約0.1%到約2%的甘氨酸、約5mM到約150mM的甲硫氨酸、約5mM到約100mM的氯化鈉、和大于0%且至多約0.2%的表面活性劑。39、如權(quán)利要求35所述的醫(yī)藥組合物，其中所述組合物包含人源化IL-13抗體。40、一種醫(yī)藥組合物的制品，所述組合物包含含以下物質(zhì)的抗體調(diào)配物(a)抗IL-13抗體；(b)冷凍保護(hù)劑；和(c)緩沖液，其中所述調(diào)配物的pH為約5.5到6.5。41、一種治療IL-13相關(guān)病癥的方法，所述方法包含投與醫(yī)藥有效量的抗體調(diào)配物，所述調(diào)配物包含(a)抗IL-13抗體；(b)冷凍保護(hù)劑；和(c)緩沖液，其中所述調(diào)配物的pH為約5.5到6.5。42、如權(quán)利要求41所述的方法，其中所述IL-13相關(guān)病癥選自由以下組成的群組過敏性哮喘、非過敏性哮喘、過敏性哮喘和非過敏性哮喘的組合、運(yùn)動(dòng)誘發(fā)哮喘、藥物誘發(fā)哮喘、職業(yè)性哮喘、晚期哮喘、慢性阻塞性肺病、關(guān)節(jié)炎、炎性腸病、炎性皮膚病、多發(fā)性硬化、骨質(zhì)疏松癥、肌腱炎、過敏性病癥、由宿主損傷導(dǎo)致的炎癥、敗血癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、易激性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、牛皮癬、全身性紅斑性狼瘡、自身免疫疾病、B-細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病(B-細(xì)胞CLL)、何杰金氏病(Hodgkin，sdisease)、和血吸蟲病中的組織纖維化。43、如權(quán)利要求41所述的方法，其中所述抗體調(diào)配物通過選自由以下組成的群組的方法來投與經(jīng)口、經(jīng)鼻、儲(chǔ)積式、非經(jīng)腸、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、囊內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、結(jié)腸內(nèi)、宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、眼內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、病灶內(nèi)、推注、經(jīng)陰道、經(jīng)直腸、經(jīng)口腔、經(jīng)舌下、經(jīng)皮(局部)、經(jīng)粘膜、或持續(xù)釋放投與。44、一種可注射注射器，其包含如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物的預(yù)裝填溶液。45、一種用于經(jīng)鼻投與的裝置，其包含如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物和醫(yī)藥上可接受的分散劑。46、一種經(jīng)皮貼片，其包含如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物和任選的醫(yī)藥上可接受的載劑。47、一種靜脈輸注袋，其包含如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物和任選的生理鹽水或5%葡萄糖。48、一種試劑盒，其包含至少一個(gè)包含如權(quán)利要求1所述的調(diào)配物的容器和使用說明書。49、如權(quán)利要求48所述的試劑盒，其中所述容器是玻璃小瓶或可注射注射器。50、一種預(yù)裝填可注射注射器，其包含以下物質(zhì)的調(diào)配物:(a)100mg/ml的抗IL-13抗體；(b)10mM的組氨酸；(c)5%的蔗糖；(d)0.01%的吐溫-80;(e)40mM的NaCl，其中所述調(diào)配物的pH為6.0。全文摘要本發(fā)明提供適用于治療與IL-13的不期望表達(dá)或活性有關(guān)的病癥的調(diào)配物。文檔編號A61K9/00GK101600457SQ200880001927公開日2009年12月9日申請日期2008年1月9日優(yōu)先權(quán)日2007年1月9日發(fā)明者丹尼爾·A·狄克遜,埃林·克里斯蒂娜·索利,安東尼·B·巴里,托馬斯·J·克勞利申請人:惠氏公司