專利名稱：：荔枝草總黃酮提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及物質(zhì)提取
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地，涉及荔枝草總黃酮提取
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是指荔枝草總黃酮提取物及其制備方法和用途，其具有顯著的保肝作用。
背景技術(shù)：
：我國是肝病高發(fā)區(qū)，肝炎病人占人口總數(shù)10%以上。目前臨床常用的抗肝炎藥大體可分為抗病毒藥、免疫調(diào)節(jié)藥和保肝藥三類。篇枝草(Sa/W。；7/e&/"R.Br.)系唇形科鼠尾草屬植物地上部分，又名蛤蟆草、雪見草、過冬青等。一年生或二年生直立草本植物，全國分布于除西北以外的其它地區(qū)，主產(chǎn)于江蘇，浙江，安徽等省。全草味苦，辛，性涼。有清熱，解毒，涼血，利尿的功能。用于咽喉腫痛，支氣管炎，腎炎水肝，外治乳腺炎等?，F(xiàn)代藥理表明荔枝草具有平喘、止咳、抗病毒、抗菌、抗氧化等作用。植物化學(xué)成分研究表明，荔技草的化學(xué)成分為黃酮類、碎類和咖啡酸等，黃酮類是其主要成分。黃酮類化合物廣泛存在于自然界中，屬于植物在長期自然選擇過程中產(chǎn)生的一些次級代謝產(chǎn)物。黃酮類化合物具有抗氧化、清除氧自由基；調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)；抗癌、防癌作用；抗炎免疫及抗衰老作用；對內(nèi)分泌系統(tǒng)作用；生物類黃酮還具有吸收紫外輻射、止咳、祛痰、瀉下、解痙、提高記憶力、抗過敏、活血化瘀、利膽及肝臟保護作用等。荔枝草中黃酮類成分主要為高車前苷、高車前素、假荊芥屬苷、澤蘭黃酮和木樨草香等。高車前苷和高車前素具有保肝作用；高車前素能抑制肝癌細胞和人KB細胞的生長；木樨草苷具有殺菌作用；澤蘭黃酮有顯著的抗炎效果。傳統(tǒng)黃酮類成分的純化方法有萃取法和聚酰胺柱層析法等，但操作麻煩，且溶劑有不同程度的毒性。因此，需要提供一種高效的具有保肝作用的荔枝草總黃酮的制備方法，其操作簡單、安全、易于工業(yè)化生產(chǎn)，從而荔枝草的進一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的主要目的就是針對以上存在的問題與不足，提供一種荔枝草總黃酮提取物，該荔枝草總黃酮提取物中總黃酮含量高，具有顯著的保肝作用，其制備高效、操作簡單、安全、設(shè)備投資少、生產(chǎn)周期短、易于工業(yè)化生產(chǎn)。為了實現(xiàn)上述目的，在本發(fā)明的第一方面，提供了一種荔枝草總黃酮提取物制備方法，其特點是，包括步驟1)菡枝草地上部分粉碎后，用含水的醇液加熱回流提取，濃縮獲得蕩枝草濃縮液，同時回收所述醇'液；2)將所述甚枝草濃縮液通過預(yù)處理的非極性或弱極性的大孔吸附樹脂柱；3)水洗所述大孔吸附樹脂柱，然后用洗脫液洗脫，收集部分洗脫后溶液，濃縮至干，得到所述荔枝草總黃酮提取物。其中，水洗是去除樹脂中殘留的溶液及其他雜質(zhì)。上述的荔枝草地上部分在粉碎之前可以先進行千燥，也可以不進行千燥，直接粉碎。較佳地，在步驟l)中所述提取的次數(shù)為3次，所述醇液是曱醇溶液或乙醇溶液。當(dāng)然提取的次數(shù)并不局限于3次，可以是2次，也可以4次，一般來說，次數(shù)越多，能提取出來的總黃酮越多，但是后面幾次單次提取到的總黃嗣會越來越少，而多次提取易造成提取液的體積太大，一般3次較合適。所述的荔枝草總黃酮提取物的提取采用正交試驗，最優(yōu)方法為荔枝草地上部分干燥、粉碎后，與50%乙醇溶液按重量體積比1:20(g/ml)置于提取器中，在7(TC回流提取3次，每次1小時。較佳地，在步驟l)中，在所述濃縮之前或獲得所述荔枝草濃縮液之后進行離心或過濾。其中的離心或過濾是為了去除其中的明顯雜質(zhì)。較佳地，在所述步驟2)中，所述大孔吸附樹脂柱是聚苯乙烯型或交聯(lián)丙烯腈非極性或弱極性樹脂柱。優(yōu)選HZ820和AB8，最優(yōu)選HZ820。當(dāng)然也可以是其它合適非極性或弱極性樹脂柱，比如類交聯(lián)丙烯腈非極性或弱極性樹脂柱。較佳地，在所述步驟2)中，所述荔枝草濃縮液的流速是0.55BV/h。優(yōu)選1.5~4.5BV/h,更優(yōu)選2.5BV/h。較佳地，在所述步驟3)中，所述洗脫液是醇液或酮液，所述洗脫液的濃度是10-95%。較佳地，在所述步驟3)中，所述水洗的流速是58BV/h，所述洗脫液的流速是28BV/h。所述洗脫液的流速優(yōu)選4BV/h。較佳地，在所述步驟3)中，所述部分洗脫后溶液為0.53BV/h之間的洗脫后溶液。所述洗脫液的濃度優(yōu)選50-70%。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種荔枝草總黃酮提取物，其特點是，采用上述的制備方法制成。在本發(fā)明的第三方面，提供了上述的荔枝草總黃酮提取物在用于制備治療肝臟疾病的藥物或保健品中的用途。其中肝臟疾病可以是肝損傷、肝炎、脂肪肝或肝硬化。本發(fā)明的有益效果具體如下1.本發(fā)明采用含水的醇液對粉碎的荔枝草地上部分進行多次回流提取，過濾濃縮后，樹脂柱吸附，再用洗脫液洗脫，收集洗脫后溶液，干燥得到慕枝草總黃酮提取物，經(jīng)測定，其中的總黃酮含量不低于60%,設(shè)備投資少，生產(chǎn)周期短，制備高效、操作筒單、安全、成本低、易于工業(yè)化生產(chǎn)；2.本發(fā)明得到的荔枝草總黃酮提取物，藥理學(xué)試驗證明其具有顯著的保肝、護肝、治療肝臟疾病的功效，為茶枝草的進一步開發(fā)利用提供基礎(chǔ)。圖I是本發(fā)明的荔枝草總黃酮提取物對CCU誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷病理改變的影響圖(HEx400)，(其中A:正常組；B:模型組；C:陽性對照組；D:高劑量組；E:中劑量組；F:低劑量組)。具體實施例方式本發(fā)明提到的上述特征，或?qū)嵤├岬降奶卣骺梢匀我饨M合。本案說明書所揭示的所有特征可與任何組合物形式并用，說明書中所揭示的各個特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特別說明，所揭示的特征僅為均等或相似特征的一般性例子。下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分比和份數(shù)按重量計。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明方法中。文中所迷的較佳實施方法與材料僅作示范之用。實施例1稱取250g荔枝草地上部分，干燥、粉碎后，加入5000ml的50。/。乙醇溶液，70。C下回流提取3次，每次1小時。合并提取液，靜置過夜后，4000rpm/min下離心10分鐘，減壓濃縮獲得650ml荔枝草濃縮液。5取一定量預(yù)處理好的HZ-820大孔樹脂，裝入內(nèi)徑為2.6cm的玻璃柱中，使其床體積為160ml，以2.5BV/h的流速使650ml篇枝草濃縮液緩慢通過樹脂床。然后用1000ml的水洗去柱中殘留的溶液，再用濃度為70%的乙醇溶液以4BV/h的流速流過樹脂柱，收集0.5~3BV間的洗脫后溶液，減壓濃縮至干，減壓干燥后得到7.75g的棕褐色粉末，收率為3.1%(生藥計)篇枝草總黃酮提取物，其總黃酮含量為63.5%。實施例2稱取250g蒸枝草地上部分，干燥、粉碎后，加入5000ml的50Q/。乙醇溶液，7(TC下回流提取3次，每次1小時。合并提取液，減壓濃縮至干，得篇枝草浸提物62g。稱取50g荔枝草浸提物，加入1000ml水，超聲處理20分鐘，充分溶解后，得到荔枝草濃縮液，4000rpm/min下離心10分4中。取一定量預(yù)處理好的AB-8大孔樹脂，裝入內(nèi)為3.4cm的玻璃柱中，使其床體積為350ml，以2.5BV/h的流速使1000ml篇枝草濃縮液緩慢通過樹脂床。然后用2000ml的水洗去柱中殘留的溶液，再用濃度為70%的乙醇溶液以4BV/h的流速流過樹脂柱，收集0.5-3BV間的洗脫液，減壓濃縮至干，減壓干燥后得到5.85g的棕褐色粉末，收率為2.9%(生藥計)荔枝草總黃酮提取物，其總黃酮含量為61.2%。上述實施例中所得到的荔枝草總黃酮提取物，其中含有的總黃酮的含量測定是采用NaN02-Al(N03)3-NaOH絡(luò)合比色法進行測定的，以蘆丁為外標(biāo)，發(fā)現(xiàn)其中總黃酮的含量不j氐于60%。實施例31材料與試劑實施例l獲得的荔枝草總黃酮提取物；羧曱基纖維素鈉(CMC-Na);CCU(分析純)；聯(lián)笨雙酯；ALT、AST試劑盒(南京建成生物技術(shù)公司)；昆明種小鼠60只，雌雄兼用(上海九亭實驗動物中心)。2實驗方法取60只昆明種小鼠分成6組，每組雌雄各半，同性別的小鼠隨機取。即正常對照組、模型組、陽性對照組(聯(lián)笨雙酯組)和荔枝草總黃酮提取物高、中、低三個劑量組。藥品均用0.8%的羧甲基纖維素鈉制成混懸液，每天灌胃一次，連續(xù)7天，正常組和模型組給予相應(yīng)體積的溶媒，末次給藥2小時后正常組腹腔注射花生油0.1ml/10g,其余5組注射0.1%CC140.1ml/10g。禁食16小時后，摘眼球取血，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanineamiotransferase,ALT)禾口谷草4令氨酶(Aspartateaminotransferase,AST)';舌'h生，并耳又肝臟左葉同一部位，固定，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察形態(tài)學(xué)變化。3實驗結(jié)果表l荔枝草總黃酮提取物對CCU誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的保護作用(i±s,n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與正常組比4交:"表示P0.01,"-表示PO.001;與才莫型組比較"表示PO.Ol,承"表示P0.001。表l結(jié)果表明，小鼠腹腔注射CCU后，其血清ALT和AST活性顯著升高，而小鼠預(yù)先給予蒸枝草總黃酮提取物后，血清ALT和AST值與模型組相比，不同劑量均有所降低，高劑量組降低明顯。肝臟病理組織學(xué);f全查結(jié)果見圖1:正常對照組小鼠肝細胞結(jié)構(gòu)正常，排列整齊，大小均勻，分界清楚，未見病理變化；模型組小鼠肝臟體積增大，肝細胞有灶狀壞死和較多的點狀壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，排列紊亂，肝細胞界線不清楚，胞漿透亮呈氣球樣變，間質(zhì)可見大量炎細胞浸潤；荔枝草總黃酮提取物各劑量組的肝細胞壞死程度均有不同程度的減輕。實施例4實施例2獲得的荔枝草總黃酮提取物代替實施例3中的實施例1獲得的荔枝草總黃酮提取物，其它條件同實施例3，得到了相似結(jié)果，即小鼠腹腔注射CCU后，其血清ALT和AST活性顯著升高，而小鼠預(yù)先給予荔枝草總黃酮提取物后，血清ALT和AST值與模型組相比，不同劑量均有所降低，高劑量組降低明顯；肝臟病理組織學(xué)檢查結(jié)果同樣表明蒸枝草總黃酮提取物各劑量組的肝細胞壞死程度均有不同程度的減輕。因此，本發(fā)明采用含水的醇液對粉碎的荔技草地上部分進行多次回流提取，過濾濃縮后，樹脂柱吸附，再用洗脫液洗脫，收集洗脫后溶液，干燥得到荔枝草總黃酮提取物，經(jīng)測定，其中的總黃酮含量不低于60%,同時，上述藥理學(xué)實驗證明，本發(fā)明提耳又的荔枝草總黃酮提取物對CCU誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷有明顯的保護作用。綜上所迷，本發(fā)明的荔枝草總黃酮提取物中總黃酮含量高，具有顯著的保肝作用，其制備高效、操作簡單、安全、成本低、易于工業(yè)化生產(chǎn)。需要說明的是，在本發(fā)明中提及的所有文獻在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，以上所述的是本發(fā)明的具體實施例及所運用的技術(shù)原理，在閱讀了本發(fā)明的上迷內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改而不背離本發(fā)明的精神與范圍，這些等價形式同樣落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.一種荔枝草總黃酮提取物制備方法，其特征在于，包括步驟1)荔枝草地上部分粉碎后，用含水的醇液加熱回流提取，濃縮獲得荔枝草濃縮液，同時回收所述醇液；2)將所述荔枝草濃縮液通過預(yù)處理的非極性或弱極性的大孔吸附樹脂柱；3)水洗所述大孔吸附樹脂柱，然后用洗脫液洗脫，收集部分洗脫后溶液，濃縮至干，得到所述荔枝草總黃酮提取物。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的荔枝草總黃酮提取物制備方法，其特征在于，在步驟l)中，所迷提取的次數(shù)為3次，所述醇液是甲醇溶液或乙醇溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的茶枝草總黃酮提取物制備方法，其特征在于，在步驟l)中，在所述濃縮之前或獲得所述荔枝草濃縮液之后進行離心或過濾。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的荔枝草總黃酮提取物制備方法，其特征在于，在所述步驟2)中，所迷大孔吸附樹脂柱是聚苯乙烯型或交聯(lián)丙烯腈非極性或弱極性樹脂柱。5.根據(jù)權(quán)利要求l所迷的甚枝草總黃酮提取物制備方法，其特征在于，在所述步驟2)中，所述荔枝草濃縮液的流速是0.5~5BV/h,6.根據(jù)權(quán)利要求l所述的荔枝草總黃酮提取物制備方法，其特征在于，在所述步驟3)中，所述洗脫液是醇液或酮液，所述洗脫液的濃度是IO~95%。7.根據(jù)權(quán)利要求l所述的荔枝草總黃酮提取物制備方法，其特征在于，在所迷步驟3)中，所述水洗的流速是5~8BV/h,所述洗脫液的流速是2~8BV/h。8.根據(jù)權(quán)利要求l所述的荔枝草總黃酮提取物制備方法，其特征在于，在所述步驟3)中，所述部分洗脫后溶液為0.5~3BV/h之間的洗脫后溶液。9.一種荔枝草總黃酮提取物，其特征在于，采用權(quán)利要求卜8任一所述的制備方法制成。10.權(quán)利要求9所述的荔枝草總黃酮提取物在用于制備治療肝臟疾病的藥物或保健品中的用途。全文摘要本發(fā)明提供了一種荔枝草總黃酮提取物制備方法，包括步驟荔枝草地上部分粉碎后，用含水的醇液加熱回流提取，濃縮獲得荔枝草濃縮液，同時回收所述醇液；將所述荔枝草濃縮液通過預(yù)處理的非極性或弱極性的大孔吸附樹脂柱；水洗所述大孔吸附樹脂柱，然后用洗脫液洗脫，收集部分洗脫后溶液，濃縮至干，得到所述荔枝草總黃酮提取物，本發(fā)明還提供了采用上述的制備方法制成的荔枝草總黃酮提取物及其在用于制備治療肝臟疾病的藥物或保健品中的用途，本發(fā)明的荔枝草總黃酮提取物中總黃酮含量高，具有顯著的保肝作用，其制備高效、操作簡單、安全、設(shè)備投資少、生產(chǎn)周期短、易于工業(yè)化生產(chǎn)。文檔編號A61K36/185GK101474251SQ200810207330公開日2009年7月8日申請日期2008年12月19日優(yōu)先權(quán)日2008年12月19日發(fā)明者盧艷花,晉曉峰申請人:華東理工大學(xué)