專利名稱：一種中藥組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物，特別涉及一種冠心病治療的中藥組合物。
技術(shù)背景傳統(tǒng)中藥復(fù)方制劑"冠心II號"是一種由丹參和川芎作為君藥，紅花與 赤芍作為臣藥，以及降香組成的中藥復(fù)方，丹參、川芎、紅花、赤芍和降香的比例為重量比2丄1丄1，該藥具有行氣活血化瘀的功效，是臨床上治療冠心 病的經(jīng)典名方。已有大量的文獻(xiàn)表明"冠心II號"在增加冠脈血流量，緩解 心絞痛，改善s-t段，調(diào)節(jié)血脂，降低內(nèi)皮素，降低血粘度均等方面均有良好 療效。發(fā)明內(nèi)容發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，將冠心II號整方及其各單位藥、及將有效的單位藥合用(劑量等同于母方中的劑量)，通過比較藥效學(xué)研究發(fā)現(xiàn)川芎、丹參、紅花三藥組合(以下簡稱為"丹川紅")的藥效學(xué)等同于冠心n號整方，即在增加心肌血流量、抗心肌缺血、抗心肌細(xì)胞凋亡與減少心梗面積等方面的療 效，精簡方"丹川紅"與其母方"冠心II號"其有高度的一致性。在此研究基礎(chǔ)上，發(fā)明人提出本發(fā)明的技術(shù)方案 一種治療冠心病的中 藥組合物，由丹參、川芎、紅花按2丄1的重量比組成。將本發(fā)明的中藥組合物，運(yùn)用現(xiàn)有中藥制劑領(lǐng)域中的常規(guī)方法，可以制 備各種藥學(xué)可接受形式的各種常規(guī)口服制劑。例如可以將這些原料藥研成粉末混合后制成散劑沖服。也可以先將丹參、川芎、紅花按2丄1的重量比混合， 制得其水提物或醇提物作為藥物有效成分，再加入制備不同劑型所需的各種 口服制劑的常規(guī)輔料，制得顆粒劑、膠囊劑、片劑、口服液等。如可以先將丹參、川芎、紅花按2:1:1的重量比混合，加水浸泡20 40分鐘后，水煎后取 濾液，濃縮干燥即得本發(fā)明藥物的凍干粉。也可以用醇提法，制備出本發(fā)明 藥物的醇提取物。本發(fā)明是從中藥大復(fù)方中精簡優(yōu)化單味藥較少但療效等同的中藥小復(fù) 方，通過比較藥效學(xué)研究、優(yōu)化配伍方案，將由原方的五味藥精簡為三味藥， 是一來源于母方又優(yōu)于母方的全新中藥小復(fù)方，該小復(fù)方對冠心病療效肯定，且較母方"冠心II號"有如下優(yōu)勢在療效一致的前提下，原材料浪費(fèi)小、 生產(chǎn)成本低；便于進(jìn)行復(fù)方作用原理、質(zhì)量控制、藥物動力學(xué)等研究及治療 藥物監(jiān)測；可減少中藥材的農(nóng)藥、重金屬等污染及其產(chǎn)地、氣候等對品質(zhì)的 影響。本發(fā)明通過運(yùn)用科學(xué)方法對傳統(tǒng)中藥復(fù)方進(jìn)行研究，并糾正長期以來 人們對經(jīng)驗復(fù)方運(yùn)用上的偏見，找到傳統(tǒng)復(fù)方冠心II號的有效作用部位，從 而提出療效一致的簡減方。


圖l:各實驗組心梗面積測定結(jié)果柱狀圖； 圖2: TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡各實驗組的熒光顯微圖； 圖3: TUNEL法檢測心肌細(xì)胞凋亡實驗組的凋亡指數(shù)柱狀圖； 圖4: Caspase-3活性檢測柱狀圖。
具體實施方式
實施例l:本發(fā)明中藥組合物丹川紅合煎劑的制備將丹參400g、川芎200g、紅花200g加入不銹鋼奶鍋中，加12倍水并浸 泡30分鐘；電磁爐加熱，待第一次煮沸后，煎煮30分鐘，藥液以三層紗布 和脫脂棉過濾；再加12倍量水繼續(xù)煎煮30分鐘，三層紗布和脫脂棉過濾后 將兩次藥液合并；將合并液在65° C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到濃縮液后，制備成凍干 粉，保存凍干粉于4° C冰箱備用，提取物得率約33.19%。使用前，凍干粉 用蒸餾水溶解。比較例"冠心II號"煎劑的制備冠心II號1200g，包括400g丹參；200g川芎；200g赤芍；200g紅花、 200g降香。當(dāng)五個藥材一起煎煮時，冠心II號制成凍干粉的得率(重量比， 干粉/生藥)為22.86% (w/w)。藥效學(xué)比較動物雄性SD大鼠42只，體重200 300g。試劑TUNEL試劑盒(美國ROCHE公司)；Caspase-3試劑盒(美國 CHEMICON公司)其余藥品和試劑均為市售分析純。方法大鼠隨機(jī)分為冠心II號組、丹川紅合煎劑組、模型對照組、假手 術(shù)組。所有計數(shù)資料均采用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，使用統(tǒng)計軟件SPSS10. 0進(jìn) 行統(tǒng)計分析，以one-way ANOVA方法進(jìn)行總體比較，q檢驗做組間比較，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)顯著性差異。分別灌胃給藥物20g/kg，或0.9%生理鹽水。給藥后30分鐘，建立大鼠急 性心肌梗塞模型。用3X戊巴比妥鈉(1.5ml/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉，四肢皮下連 接心電圖電極記錄整個實驗過程。常規(guī)消毒，行氣管插管，接動物人工呼吸 機(jī)，調(diào)節(jié)呼吸頻率為80 90次/分，于左側(cè)第四、五肋間打開胸腔，暴露心 臟，于肺動脈圓錐與左心耳之間、左心耳根部下方2 3mm處穿線并結(jié)扎冠 狀動脈左前降支，造成冠狀動脈阻塞。關(guān)閉胸腔，縫合皮膚，局部應(yīng)用青霉 素以預(yù)防感染。假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。術(shù)后觀察心電圖改變，心電圖ST段 明顯抬高和/或T波高聳則說明缺血模型成功。造模后的大鼠分成兩部分， —部分缺血3h后收集心臟，用于檢測心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)和Caspase-3濃度。 另一部分缺血24h收集心臟，用于測定心梗面積。 (1)心梗面積測定缺血24h， 3%伊文藍(lán)染料lml注入左心室，勾畫出危險區(qū)。剪下大鼠心 臟，生理鹽水沖洗心腔殘液，凍于-2(TC冰箱。自結(jié)扎線以下，從心尖起平行 切成等厚5片。在37。C， 1%氯化三苯基四氮唑(TTC)磷酸緩沖液(PH7.4) 中水浴15min。出現(xiàn)三個分區(qū)未梗死區(qū)(紅染)，梗死區(qū)(未紅染)，危險區(qū)(藍(lán) 染)。危險區(qū)面積大小以危險區(qū)占左室面積的百分比用表示(Ar/LV)，心梗面 積大小用梗死區(qū)占危險區(qū)的百分比表示(An/Ar)。實驗結(jié)果見表1及附圖1,各組危險區(qū)面積大小(Ar/LV)組間比較，P >0.05，無顯著差異，表明造模成功。各給藥組心肌梗死范圍(An/Ar)明顯 減小，與模型對照組比較有顯著性差異(P〈0.05，P〈0.01);而冠心II號組和 丹川紅組比較無顯著差異。表l 心梗面積(％) (jc±s，n=6)組別劑量(g/kg)Ar/LVAn/Ar模型對照組一0.516±0.2360.541±0.132冠心n號組300.511 ±0.0680.365±0細(xì)**丹川紅組200.495 ±0.0490.386±0.084*注與模型對照組比較，*尸<0. 05， **尸<0. 01。(2)細(xì)胞凋亡檢測缺血3h，取結(jié)扎部位以下左室心肌組織放入4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟 包埋、切片，用脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記法(TUNEL) 標(biāo)記凋亡細(xì)胞(測定方法遵照羅氏凋亡檢測試劑盒說明書)。每個石蠟包埋的 組織塊被切成4-5um厚度的切片，蛋白酶K孵育，修復(fù)后加上TUNEL反應(yīng) 液。切片加蓋含DAPI的封片劑來計數(shù)全部細(xì)胞。每個石蠟塊取6個切片，每 張切片任選10個視野，計數(shù)凋亡細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞總數(shù)。凋亡指數(shù)(Apoptosis Index) AI=(凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù))X100%。TENEL法檢測丹川紅合煎劑對大鼠心肌缺血心肌凋亡的影響見圖2，在 熒光倒置顯微鏡(OLYMPUS 1X71)下觀察，凋亡的細(xì)胞核顯示綠色熒光， 經(jīng)DAPI染色后的所有細(xì)胞核顯示藍(lán)色熒光。圖1中，從左至右依次為假手 術(shù)組、冠心II號組、丹川紅組、模型對照組的熒光顯微圖。圖中第一行為各 組切片經(jīng)TUNEL染色呈綠色熒光的凋亡細(xì)胞核；第二行為各組切片經(jīng)DAPI 染色呈藍(lán)色熒光的全部細(xì)胞核。模型對照組大鼠心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著高于假手術(shù)組(P < 0.01)，冠心 II號組、丹川紅合煎劑組心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)低于模型對照組，差異有顯著性 (P<0.01)，而兩藥物組比較無顯著差異。各組凋亡指數(shù)柱狀圖見圖3，從左 至右，依次為假手術(shù)組、冠心II號組、丹川紅組和模型對照組。與模型對照 組比較，** P<0.01;與假手術(shù)組比較，## P<0.01。 (3)心肌細(xì)胞Caspase-3活性測定缺血3h，取結(jié)扎部位以下左室心肌組織放-7(TC冰箱待測，測定方法遵照 CHEMICON公司Caspase-3濃度檢測試劑盒說明書。冷凍的左室心肌組織在 冰的溶解緩沖液中勻漿。BCA法測定蛋白濃度。每孔加36 ug的蛋白質(zhì)與 20 u g Caspase-3底物Ac-DEVD-pNA共同孵90min。游離的pNA在405 nm 下的酶標(biāo)儀中讀數(shù)。結(jié)果計算依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍10~640" MofpNA， 單位u mol pNA/14 g protein, x土s, n=6。Caspase-3活性檢測結(jié)果見圖4，從.左至右，依次為假手術(shù)組、冠心II號 組、丹川紅組、模型對照組。與模型對照組比較，* P<0.05， ** P<0.01; 與假手術(shù)組比較，## P<0.01。而兩藥物組比較無顯著差異。與假手術(shù)組比 較，模型對照組心肌缺血3h心肌組織的Caspase-3活性顯著增加(P<0.01)， 與模型對照組比較，冠心II號組、川丹紅組Caspase-3活性明顯降低(P < 0.05，P<0.01)，而兩藥物組比較無顯著差異。 實施例2:丹川紅膠囊劑的制備按質(zhì)量比2: 1: 1比例取丹參、川芎、紅花粉碎，加90%乙醇回流3次， 第一次2小時，第二次和第三次各為1.5小時，分別濾過，合并3次濾液，減壓濃縮成浸膏，加入等于浸膏io倍量的水，邊加邊攪拌，靜置沉淀，濾過，沉淀物于6(TC以下干燥、粉碎，過60目篩，分裝于膠囊內(nèi)，每粒含丹川紅提 取物0.4g。用量2-4粒/次，3次/日。 實施例3:丹川紅片劑的制備按質(zhì)量比2: 1: 1比例取量后，將丹參、川芎、紅花粉碎成粗顆粒，用 適量70%乙醇濕潤、攪拌，放置4-8小時后裝入滲漉缸內(nèi)，鋪勻壓緊，上面 覆蓋紗布和卵石塊防止藥渣上浮。加入70%乙醇浸過藥面30cm，浸泡48小 時后，開始滲漉，流速控制在100-150ml/min，收集滲漉液，上面不斷加入70% 乙醇溶媒，至滲漉液量達(dá)到藥材重量的6-8倍量。最后漉出液量很淡，生物堿 反應(yīng)呈陰性時停止?jié)B漉。把滲漉液放入減壓蒸發(fā)濃縮罐中，減壓回收乙醇， 至乙醇全部回收后將濃縮液轉(zhuǎn)入敞口蒸發(fā)鍋內(nèi)，加熱繼續(xù)濃縮稠膏狀，制成 軟材。過20目篩制成濕顆粒攤于干燥盤內(nèi)，8(TC溫度干燥后，取出加入0.8% 硬酯酸鎂，再過20目篩制粒，混勻、稱重供壓片。調(diào)節(jié)片重與硬度合格進(jìn)行 壓片，片重為每三片重相當(dāng)于原藥材5g。用法和劑量2-3片/次，3次/曰。
權(quán)利要求
1.一種中藥組合物，其特征在于由2∶1∶1的重量份的原料藥丹參、川芎、紅花制成。
2. 如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，包含常規(guī)藥學(xué)載體，其特征在于由 原料藥丹參、川芎、紅花按2:1:1的重量比混合，制備其水提取物或醇 提取物作為有效成分。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的藥物的制備方法，其特征在于包括下列步驟 將重量份的丹參2份、川芎1份、紅花1份，加水浸泡20~60分鐘后， 煎煮兩次，合并過濾藥液，將合并液濃縮后制得本發(fā)明的藥物活性組分。
4. 如權(quán)利要求4所述的藥物的制備方法，其特征在于合并液濃縮步驟是 指在65° C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮。
5. 如權(quán)利要求i或2所述的藥物的制備方法，其特征在于包括下列步驟-將重量份的丹參2份、川芎1份、紅花1份粉碎，加卯~95%乙醇回流 3次，分別濾過，合并3次濾液，減壓濃縮成浸膏，制得本發(fā)明的藥物 活性組分。
6. 如權(quán)利要求2所述藥物的口服制劑。
7. 如權(quán)利要求3所述藥物的膠囊劑。
8. 如權(quán)利要求3所述藥物的顆粒劑。
9. 如權(quán)利要求3所述藥物的片劑。
10. 如權(quán)利要求1、 2、 6~8所述之一的中藥組合物作為治療冠心病的藥物的 應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療冠心病的中藥組合物，由丹參、川芎、紅花按2∶1∶1的重量比組成。將本發(fā)明的中藥組合物，運(yùn)用現(xiàn)有中藥制劑領(lǐng)域中的常規(guī)方法，制備出含有本發(fā)明丹參、川芎、紅花按2∶1∶1的重量比得到的水提物或醇提物的各種藥學(xué)可接受形式的口服制劑，如片劑、顆粒劑、膠囊劑等。本發(fā)明是從中藥大復(fù)方中精簡優(yōu)化出療效等同的中藥小復(fù)方，在療效一致的前提下，原材料浪費(fèi)小、生產(chǎn)成本低；便于進(jìn)行復(fù)方作用原理、質(zhì)量控制、藥物動力學(xué)等研究及治療藥物監(jiān)測；可減少中藥材的農(nóng)藥、重金屬等污染及其產(chǎn)地、氣候等對品質(zhì)的影響。
文檔編號A61K36/537GK101401842SQ20081014358
公開日2009年4月8日 申請日期2008年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月13日
發(fā)明者平 任, 鋒 秦, 熙 黃 申請人:中南大學(xué)