專利名稱：視覺功能障礙改善劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有具有Rho激酶抑制活性化合物的視覺功能障礙改善劑。
背景技術(shù)：
視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞是視網(wǎng)膜的輸出細(xì)胞，其軸突也稱為視神經(jīng)纖維， 走向視網(wǎng)膜內(nèi)層、神經(jīng)纖維層(最靠近玻璃體側(cè))，在視神經(jīng)乳頭集合后， 離開眼球形成視神經(jīng)，發(fā)揮將視覺信息傳遞到大腦皮層的作用。另外，視 網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞分布于整個(gè)視網(wǎng)膜內(nèi)。因此，例如，由于炎癥等引起的視 網(wǎng)膜損傷，會引起視網(wǎng)膜神經(jīng)疾病、視網(wǎng)膜血管閉塞癥、視網(wǎng)膜靜脈周炎、 Eales病、缺血性眼征候群、視網(wǎng)膜小動脈瘤、高血壓以及腎臟疾病及血 液疾病引起的視網(wǎng)膜癥、糖尿病性視網(wǎng)膜癥、視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良、黃斑營養(yǎng) 不良、視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜癥、黃斑變性、黃斑水腫、視網(wǎng)膜色素上皮剝離、變 性視網(wǎng)膜分離癥、視網(wǎng)膜胚細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜色素上皮瘤等，以及尤其引起 視覺障礙。另外，由于視神經(jīng)的變性或損傷，會引起視神經(jīng)炎、視神經(jīng)乳 頭毛細(xì)血管瘤、缺血性視神經(jīng)癥、視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層缺損、視網(wǎng)膜性視神 經(jīng)萎縮、視神經(jīng)斷裂、外傷性視神經(jīng)癥、缺血乳頭、視神經(jīng)乳頭缺損、視 神經(jīng)低形成、中毒性視神經(jīng)蔞縮等，并且由此引起視覺障礙。另外，已知 眼壓亢進(jìn)(青光眼等)等引起視神經(jīng)萎縮、變性而導(dǎo)致視覺障礙。在這些 視覺障礙中，考慮到能夠恢復(fù)視網(wǎng)膜內(nèi)的視覺信息傳導(dǎo)通路的功能的藥 物、尤其是能夠促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突新生(再生)或其延伸的藥 物、能夠新生(再生)視神經(jīng)細(xì)胞的藥物有效。另外，最近也進(jìn)行了視網(wǎng) 膜移植或視網(wǎng)膜再生等的對于外科手術(shù)處理的研究，但是在這些處理中， 發(fā)現(xiàn)能夠促進(jìn)移植后的視神經(jīng)軸突的新生(再生)或其延伸的手段、藥物 是非常有用的。另一方面，近年來，作為具有Rho激酶抑制活性的的化合物，報(bào)道了 后述通式(I)所示的化合物[W098/06433號(對應(yīng)EP956865以及 US6218410]。另外，報(bào)道了某種異喹啉磺酰胺衍生物以及異喹啉衍生物也 具有Rho激酶抑制活性[W098/06433號以及Naunyn — Schmiedeberg， s Archives of Pharmacoloigy 385(1) S叩pl. R219 (1998)]。另外，也報(bào)道 了利尿酸、以及4一[2— (2,3，4，5，6 —五氟苯基)丙烯?；鵠桂皮酸等的 某種苯乙烯衍生物具有Rho激酶抑制活性[W000/57914號、特開2000 — 44513號(對應(yīng):EP1094055以及US6329547)]。另夕卜，報(bào)道以N—[1一 (3， 5 一二甲氧基苯基)四氫一1H—3 —吡咯基]一N— (1H—5 —吲唑基)胺為代 表的某種含氮化合物具有Rho激酶抑制活性(W001/56988號)。進(jìn)而，也 報(bào)道了某種硫色滿類化合物具有Rho激酶抑制活性(W001/68607號)。
眾所周知，Rho激酶是伴隨Rho的活化而被活化的絲氨酸/蘇氨酸激酶， 在Rho的下區(qū)發(fā)揮作用，通過對各種基質(zhì)進(jìn)行磷酸化，控制應(yīng)激纖維或粘 接斑的形成、平滑肌的收縮、神經(jīng)軸突的萎縮等多種生理功能。
抑制具有這樣多種生理功能的Rho激酶，被認(rèn)為與多種疾病的狀態(tài)、 疾病、障礙的預(yù)防以及治療有關(guān)。例如，作為具有Rho激酶抑制活性的化 合物的醫(yī)藥用途，在W098/06433號中廣泛公開了高血壓癥治療藥、心絞痛 治療藥、腦血管痙攣抑制藥、哮喘治療藥、末梢循環(huán)障礙治療藥、早產(chǎn)預(yù) 防藥、動脈硬化癥治療藥、抗癌藥、抗炎藥、免疫抑制藥、自體免疫疾病 治療藥、抗AIDS藥、骨質(zhì)疏松治療藥、視網(wǎng)膜癥治療藥、腦功能改善藥、 避孕藥、消化道感染預(yù)防藥。另外，在本申請的最早優(yōu)先權(quán)日后公開的 W001/56988號中中提示了關(guān)于具有Rho激酶抑制活性的化合物，作為高血
壓癥、哮喘、心絞痛、腦血管痙攣、末梢循環(huán)障礙、先兆流產(chǎn)、青光眼、 視野狹窄、尿頻、癌、癌的浸潤以及轉(zhuǎn)移、動脈硬化、視網(wǎng)膜癥、免疫應(yīng) 答、炎癥自體免疫疾病、腦功能障礙、骨質(zhì)疏松、細(xì)菌感染、慢性腎功能 不全、慢性腎炎、糖尿病性腎癥、IgA腎癥、與血栓形成有關(guān)的疾病、風(fēng) 濕、勃起障礙、纖維瘤的治療藥有效。另外，也報(bào)道了從具有基于降低眼 壓作用、視神經(jīng)乳頭的血流增加作用、睫狀肌的松弛作用的促進(jìn)房水排出 作用的情況來看，具有預(yù)防和治療青光眼的作用[W000/09162號(對應(yīng) EP1034793)]。在W000/57914號中也報(bào)道了作為眼壓降下劑有效。另外，己知通式(I)所示的化合物，作為強(qiáng)力的具有持續(xù)性的高血 壓癥治療藥、心絞痛治療藥、腎以及末梢循環(huán)障礙治療藥、腦血管痙攣抑 制藥等的冠 腦 腎以及末梢動脈等的循環(huán)系統(tǒng)疾病用的預(yù)防 治療藥，
進(jìn)而作為哮喘治療藥有效[特開昭62 —89679號、特開平3 — 218356號、特 開平4一273821號、特開平5 — 194401號(對應(yīng)EP641781以及US5478838)、 特開平6—41080號以及W095/28387號(對應(yīng)EP757038、 US5958944以及 US6156766)等]。
另外，已知上述W098/06433號記載的異喹啉磺酰胺衍生物，作為血管 擴(kuò)張劑、高血壓癥治療劑、腦功能改善劑、抗哮喘劑、心臟保護(hù)劑、血小 板凝集抑制劑、神經(jīng)征候治療劑、抗炎癥劑、過粘性征候群治療或預(yù)防劑、 青光眼治療藥、眼壓降低劑、腦血栓中的運(yùn)動麻痹的改善劑、病毒感染癥 預(yù)防治療劑以及復(fù)制調(diào)節(jié)因子抑制劑有效[特開昭57 — 200366號、特開昭 61 — 227581號、特開平2 — 256617號、特開平4一264030號、特開平6 — 56668 號(對應(yīng)EP654266以及US5747507)、特開平6 — 80569號(對應(yīng)W094/05290 號)、特開平6 —293643號、特開平7 — 41424號、特開平7 —277979號、 W097/23222號(對應(yīng):EP868186以及US6271224)、特開平9一227381號、 特開平10 —45598號以及特開平10 —87491號]。
另夕卜，已知上述文獻(xiàn) (Naunyn——Schmiedeberg,s Archives of Pharmacology 385(1) Suppl.R219(1998))記載的異喹啉衍生物，作為基于 血管痙攣的腦組織障礙的預(yù)防 治療劑有效[WO97/28130號(對應(yīng)-EP88588以及US6153608)〗。
但是，對于具有Rho激酶抑制活性的化合物，沒有公開具有視覺功能 障礙的改善作用、由視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞(the neural retina)或視神經(jīng)(the nervus opticus)的損傷和/或變性引起的視覺功能障礙改善作用、尤其是促進(jìn)視 網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突的再生以及延伸的作用。
Rho—Rho激酶通路，如上所述，已知在生物體內(nèi)發(fā)揮各種作用，近 年來，也報(bào)道與神經(jīng)軸突延伸有關(guān)(The Journal of Cell Biology ， Vol.141, 1625 — 1636 (1998) ， Neuron, 26， 431—441 (2000) ， The Journal of Neuroscience， vol.19 (17) ， 7537—7547 (1999))。但是，均沒有直接 表示涉及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中的Rho激酶作用或Rho激酶抑制劑的效果，也沒有提示涉及視覺功能恢復(fù)的Rho激酶抑制劑的有效性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供對恢復(fù)由視神經(jīng)的損傷和/或變性引起并受損 的視覺功能有效的新型視覺功能障礙改善劑。目的在于提供對視網(wǎng)膜神經(jīng) 節(jié)細(xì)胞的軸突的新生、延伸以及延伸促進(jìn)、以及視神經(jīng)細(xì)胞的再生有效的 藥物。
本發(fā)明人等為解決上述課題進(jìn)行銳意的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)具有Rho激酶 抑制活性的化合物，具有視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突的新生、延伸以及延伸 促進(jìn)作用，另外，具有視神經(jīng)細(xì)胞的再生作用，因此，發(fā)現(xiàn)對恢復(fù)由視神 經(jīng)的損傷和/或變性引起并受損的視覺功能有效，從而完成本發(fā)明。
艮口，本發(fā)明如下所示。
(1 )一種視覺功能障礙改善劑，含有具有Rho激酶抑制活性的化合物， 并改善由于視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞或視神經(jīng)的損傷或變性引起的視覺功能障礙。
(2) 根據(jù)上述(1)所述的視覺功能障礙改善劑，視覺功能的改善是 基于促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的延伸。
(3) 根據(jù)上述(1)所述的視覺功能障礙改善劑，視覺功能的改善是 基于再生視神經(jīng)細(xì)胞。
(4) 作為有效成分含有具有Rho激酶抑制活性的化合物的視網(wǎng)膜神經(jīng)
節(jié)細(xì)胞軸突的延伸促進(jìn)劑。
(5) 作為有效成分含有具有Rho激酶抑制活性的化合物的視神經(jīng)細(xì)胞
的再生促進(jìn)劑。
(6) 根據(jù)上述(1) (5)中任一項(xiàng)所述的劑，具有Rho激酶抑制活
性的化合物為通式(I)所示的酰胺化合物、其異構(gòu)體和/或其制藥上許可
的酸加成鹽、或其藥物前體，
O Rb<formula>formula see original document page 6</formula>。Rb表示氫、烷基、芳烷基、氨基垸基或單，雙烷基氨
基垸基。Rc表示可以具有取代基的含氮雜環(huán)。]。
(7)根據(jù)上述(1) (5)中任一項(xiàng)所述的劑，具有Rho激酶抑制活
性的化合物為通式(I')所示的酰胺化合物、其異構(gòu)體和/或其制藥上許
可的酸加成鹽、或其藥物前體，
<formula>formula see original document page 8</formula>。Rb表示氫、烷基、芳烷基、氨基 烷基或單 雙烷基氨基烷基。Rc表示可以具有取代基的含氮雜環(huán)。]。
(8) 根據(jù)上述(1) (5)中任一項(xiàng)所述的劑，具有Rho激酶抑制活 性的化合物，為(R) — ( + ) —N— (1H—吡咯并[2，3—b]吡啶一4一基) 一4一 (l一氨基乙基)苯酰胺或其制藥上許可的酸加成鹽、或者其藥物前 體，其一為(R) — ( + ) 一N— (1H—吡咯并[2，3 — b]吡啶一4一基)一4
(l一氨基乙基)苯酰胺 l鹽酸鹽。
(9) 根據(jù)上述(1) (5)中任一項(xiàng)所述的劑，其中，具有Rho激酶抑制活性的化合物，為選自硫色滿類化合物、異喹啉磺酰胺衍生物、乙烯 苯衍生物以及利尿酸的化合物或者其制藥上許可的鹽。
(10) —種視覺功能障礙改善用藥物組合物，其中，含有具有Rho激 酶抑制活性的化合物以及制劑上許可的載體，改善由于視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞或 者視神經(jīng)損傷或變性引起的視覺功能障礙。
(11) 根據(jù)上述(10)視覺功能障礙改善用藥物組合物，其中，視覺 功能障礙改善是基于促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的延伸。
(12) 根據(jù)上述(10)視覺功能障礙改善用藥物組合物，其中，視覺 功能障礙改善是基于再生視神經(jīng)細(xì)胞。
(13) —種視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的延伸促進(jìn)用藥物組合物，其中， 含有具有Rho激酶抑制活性的化合物以及制劑上許可的載體。
(14) 一種視神經(jīng)細(xì)胞的再生促進(jìn)用藥物組合物，其中，含有具有Rho 激酶抑制活性的化合物以及制劑上許可的載體。
(15) 根據(jù)上述(10) (14)中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中， 具有Rho激酶抑制活性的化合物，是上述通式(I)所示的酰胺化合物、其 異構(gòu)體和/或其制藥上許可的酸加成鹽、或其藥物前體。
(16) 根據(jù)上述(10) (14)中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中， 具有Rho激酶抑制活性的化合物，是由上述通式(r )所示的酰胺化合物、
其異構(gòu)體和/或其制藥上許可的酸加成鹽、或其藥物前體。
(17) 根據(jù)上述(10) (14)中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中， 具有Rho激酶抑制活性的化合物，為(R) — ( + ) —N— (1H—吡咯并[2，3 一b]吡啶一4一基)一4一 (l一氨基乙基)苯酰胺或其制藥上許可的酸加 成鹽、或者其藥物前體，其一為(R) — ( + ) —N— (1H—吡咯并[2，3 —b]吡啶—4—基)—4— (1 —氨基乙基)苯酰胺'l鹽酸鹽。
(18) 根據(jù)上述(10) (14)中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中， 具有Rho激酶抑制活性的化合物，為選自硫色滿類化合物、異喹啉磺酰胺 衍生物、乙烯苯衍生物以及利尿酸的化合物或者其制藥上許可的鹽。
(19) 一種改善視覺功能障礙的方法，其中，包括給患者服用有效量 的具有Rho激酶抑制活性的化合物，所述視覺功能障礙是由于視網(wǎng)膜神經(jīng) 細(xì)胞或視神經(jīng)的損傷或變性所引起。(20) 根據(jù)上述(19)所述的方法，其中，視覺功能障礙的改善是基 于促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的延伸。
(21) 根據(jù)上述(19)所述的方法，其中，視覺功能障礙的改善是基 于再生視神經(jīng)細(xì)胞。
(22) —種促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突延伸的方法，其中，包括給患 者服用有效量的具有Rho激酶抑制活性的化合物。
(23) —種促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞再生的方法，其中，包括給患者服用 有效量的具有Rho激酶抑制活性的化合物。
(24) 根據(jù)上述(19) (23)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，具有Rho 激酶抑制活性的化合物，是由上述通式(I)所示的酰胺化合物、其異構(gòu) 體和/或其制藥上許可的酸加成鹽、或其藥物前體。
(25) 根據(jù)上述(19) (23)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，具有Rho 激酶抑制活性的化合物，是上述通式(r )所示的酰胺化合物、其異構(gòu) 體和/或其制藥上許可的酸加成鹽、或其藥物前體。
(26) 根據(jù)上述(19) (23)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，具有Rho 激酶抑制活性的化合物，為(R) — ( + ) —N— (lH—吡咯并[2，3 — b] 吡啶一4一基)一4一 (1—氨基乙基)苯酰胺或其制藥上許可的酸加成鹽、 或者其藥物前體，其一為(R) — ( + ) —N— (1H—吡咯并[2，3—b]吡啶 一4一基)一4一 (l一氨基乙基)苯酰胺'l鹽酸鹽。
(27) 根據(jù)上述(19) (23)中任一項(xiàng)所述的方法，其中，具有Rho 激酶抑制活性的化合物，為選自硫色滿類化合物、異喹啉磺酰胺衍生物、 乙烯苯衍生物以及利尿酸的化合物或者其制藥上許可的鹽。
(28) —種具有Rho激酶抑制活性的化合物的用途，其中，用于制備
改善視覺功能障礙的視覺功能障礙改善劑，而所述視覺功能障礙是由于視 網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞或視神經(jīng)的損傷或變性所引起。
(29) 根據(jù)上述(28)所述的用途，其中，視覺功能障礙改善是基于 促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的延伸。
(30) 根據(jù)上述(28)所述的用途，其中，視覺功能障礙改善是基于 再生視神經(jīng)細(xì)胞。
(31) —種具有Rho激酶抑制活性的化合物的用途，其中，用于制備視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的延伸促進(jìn)劑。
(32) —種具有Rho激酶抑制活性的化合物的用途，其中，用于制備
視神經(jīng)細(xì)胞的再生促進(jìn)劑。
(33) 根據(jù)上述(28) (32)中任一項(xiàng)所述的用途，其中，具有Rho 激酶抑制活性的化合物，是上述通式(I)所示的酰胺化合物、其異構(gòu)體 和/或其制藥上許可的酸加成鹽、或其藥物前體。
(34) 根據(jù)上述(28) (32)中任一項(xiàng)所述的用途，其中，具有Rho
激酶抑制活性的化合物，是上述通式(r )所示的酰胺化合物、其異構(gòu)
體和/或其制藥上許可的酸加成鹽、或其藥物前體。
(35) 根據(jù)上述(28) (32)中任一項(xiàng)所述的用途，其中，具有Rho 激酶抑制活性的化合物，是(R) — ( + ) —n— (1H—吡咯并[2，3 — b] 吡啶一4 —基)一4_ (l一氨基乙基)苯酰胺或其制藥上許可的酸加成鹽、 或者其藥物前體，其一為(r) — ( + ) 一n— (1H—吡咯并[2，3—b]吡啶 —4一基)一4— (1 —氨基乙基)苯酰胺'l鹽酸鹽。
(36) 根據(jù)上述(28) (32)中任一項(xiàng)所述的用途，其中，具有Rho 激酶抑制活性的化合物，是選自硫色滿類化合物、異喹啉磺酰胺衍生物、 乙烯苯衍生物以及利尿酸的化合物或者其制藥上許可的鹽。
另外，本發(fā)明是提供關(guān)于由視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞或視神經(jīng)的損傷和/或變 性引起并受損的視覺功能的視覺功能改善方法、用于制備改善視覺功能的 藥物的具有Rho激酶抑制活性的化合物的用途、視覺功能改善用組合物以 及視覺功能改善用組合物的商業(yè)包裝(package)。


圖中化合物l表示(R) — ( + ) —n— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶 一4一基)一4一 (1 —氨基乙基)苯酰胺'2鹽酸鹽*3/2水合物，化合物2 表示(R) — ( + ) —n— (1H—吡咯并[2，3 —b]吡啶—4—基)一4— (1 一氨基乙基)苯酰胺 l鹽酸鹽，化合物3表示4一 [2— (2, 3， 4， 5， 6 —五氟 苯基)丙稀?；鵠桂皮酸，化合物4表示利尿酸，化合物5表示fasudil hydrochloride。
圖l是表示在顯微鏡下觀察存在或不存在Rho激酶抑制劑(化合物l)時(shí)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的神經(jīng)軸突延伸的程度的影像圖。A為添加牛胎兒
血清(FCS)但不添加Rho激酶抑制劑時(shí)的影像；B為既添加FCS又添加Rho 激酶抑制劑時(shí)的影像；C為不添加FSC也不添加Rho激酶抑制劑時(shí)的影像；D 不添加FSC但添加Rho激酶抑制劑時(shí)的影像。
圖2是表示對在切斷視神經(jīng)后自我移植坐骨神經(jīng)的大鼠中的視神經(jīng)細(xì) 胞的再生程度進(jìn)行測定的結(jié)果的圖表?？v軸表示每lmm2的再生視神經(jīng)細(xì)胞 數(shù)相對于對照組的比例。測定了添加與不添加Rho激酶抑制劑(化合物l) 時(shí)的兩種情況。
圖3是表示在顯微鏡下觀察存在或不存在Rho激酶抑制劑(化合物2 ) 時(shí)的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的神經(jīng)軸突延伸的程度的影像圖。A為用添加牛胎兒 血清(FCS)的培養(yǎng)液培養(yǎng)時(shí)的影像；B為用不添加FCS的培養(yǎng)液培養(yǎng)時(shí)的 影像；C為用不添加FSC的培養(yǎng)液培養(yǎng)后，再添加Rho激酶抑制劑時(shí)的影像； D為用不添加FSC的培養(yǎng)液培養(yǎng)后再添加Rho活化劑的LPA時(shí)的影像。
圖4是表示利用顯微鏡(熒光顯微鏡)通過逆行標(biāo)記再生的視神經(jīng)細(xì) 胞，對切斷視神經(jīng)后自我移植坐骨神經(jīng)的大鼠中視神經(jīng)細(xì)胞的再生程度進(jìn) 行測定的結(jié)果的影像圖。A表示沒有實(shí)施移植的大鼠(標(biāo)準(zhǔn)組)的被標(biāo)記 的視神經(jīng)細(xì)胞的狀況，B表示切斷大鼠的視神經(jīng)細(xì)胞而自我移植坐骨神經(jīng) 后的不存在Rho激酶抑制劑時(shí)(對照組)的被標(biāo)記的再生細(xì)胞的狀況，C 表示切斷大鼠的視神經(jīng)而自我移植坐骨神經(jīng)后的存在Rho激酶抑制劑時(shí) (化合物2處理組一1)的被標(biāo)記的視神經(jīng)細(xì)胞的狀況。
圖5是表示對切斷視神經(jīng)后而自我移植坐骨神經(jīng)的大鼠中的視神經(jīng)細(xì) 胞再生程度進(jìn)行測定的結(jié)果的圖表。縱軸表示每lmm2的再生視神經(jīng)細(xì)胞數(shù) 相對于標(biāo)準(zhǔn)組的比例。
圖6表示各種Rho激酶抑制劑(化合物3、化合物4以及化合物5)對視 網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突延伸影響的調(diào)查結(jié)果圖表?？v軸表示軸突伸展細(xì)胞 數(shù)相對于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)的比例。圖中標(biāo)記*的結(jié)果表示相對于對 照組有顯著差異(P〈0.05)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明中所謂視覺功能障礙，是指基于視網(wǎng)膜神經(jīng)以及視神經(jīng)的損傷、變性等的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞以及視神經(jīng)纖維的減少、視神經(jīng)萎縮、神 經(jīng)纖維的軸突消失、視神經(jīng)的神經(jīng)纖維髓鞘脫落、基于視神經(jīng)的缺損引起 的視力喪失、視力降低、視野狹窄、色覺異常以及霧視以及呈現(xiàn)視網(wǎng)膜電 圖和視覺誘發(fā)電位的異常等各癥狀的視力障礙、疾病，具體可以舉出，基 于視網(wǎng)膜的炎癥等的損傷(視網(wǎng)膜神經(jīng)疾病、視網(wǎng)膜血管閉塞癥、視網(wǎng)膜
靜脈周炎、Eales病、缺血性眼征候群、視網(wǎng)膜小動脈瘤、高血壓以及腎 臟疾病及血液疾病引起的視網(wǎng)膜癥、糖尿病性視網(wǎng)膜癥、視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良、 黃斑營養(yǎng)不良、視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜癥、黃斑變性、黃斑水腫、視網(wǎng)膜色素上皮 剝離、變性視網(wǎng)膜分離癥、視網(wǎng)膜胚細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜色素上皮瘤等)等引 起的視覺障礙；以及視神經(jīng)的變性、損傷(視神經(jīng)炎、視神經(jīng)乳頭毛細(xì)血 管瘤、缺血性視神經(jīng)癥、視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層缺損、視網(wǎng)膜性視神經(jīng)萎縮、 視神經(jīng)斷裂、外傷性視神經(jīng)癥、缺血乳頭、視神經(jīng)乳頭缺損、視神經(jīng)低形 成、中毒性視神經(jīng)萎縮等)引起的視覺障礙；以及基于眼壓亢進(jìn)(青光眼) 等的視神經(jīng)萎縮、變性等引起的視覺障礙。
在本發(fā)明中，所謂視覺功能障礙的改善，是指通過延伸視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié) 細(xì)胞軸突或者促進(jìn)延伸以及通過再生視神經(jīng)細(xì)胞等，改善由于視網(wǎng)膜神經(jīng) 的損傷、變性等引起的視覺障礙。另外，本發(fā)明的目的也在于提供具有視 網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突延伸促進(jìn)作用和/或視神經(jīng)細(xì)胞的再生作用的藥 物，這些藥物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
此處本發(fā)明所述的"軸突的延伸促進(jìn)"，是指使視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的 軸突延伸促進(jìn)，即，不僅是使該軸突的增長的作用以及突觸形成作用，也 包括在更初期階段的軸突新生(再生)或延伸等的能夠觀察軸突生長的所 有狀態(tài)。因此，本發(fā)明中僅使單稱"軸突的延伸促進(jìn)劑"或"軸突延伸的 促進(jìn)"時(shí)，該促進(jìn)劑也包括活化視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突的新生(再生)、 延伸、延伸促進(jìn)等或引起其活化的全部意思。另外，所謂視神經(jīng)細(xì)胞的再 生(新生)作用，是指基于軸突損傷、變性等的逆行性變性、減少的視神 經(jīng)細(xì)胞數(shù)增加，所謂"視神經(jīng)細(xì)胞的新生促進(jìn)劑"是指所有促進(jìn)再生視神 經(jīng)細(xì)胞數(shù)的增加的促進(jìn)劑。
在本發(fā)明中作為有效成分使用的具有Rho激酶抑制活性的化合物，只 要是具有Rho激酶抑制作用即可。[在本發(fā)明中，所謂Rho激酶，是指伴隨Rho的活化而被活化的絲氨酸/蘇氨酸激酶。例如可以舉出ROKci (R0CKII: Leung, T.等，J. Biol. Chen. ， 270， 29051 29054 (1995) ) 、 pl60R0CK (ROKe、 ROCK—I: Ishizaki， T等，The EMBO J. ， 15(8)， 1885 1893 (1996))以及其它的具有絲氨酸/蘇氨酸激酶活性的蛋白質(zhì)。]
在本發(fā)明中使用的具有Rho激酶抑制活性的化合物，具體地可以舉出 上述的W098/06433號以及W097/28130號、以及Naunyn—Schmiedeberg， s Archives of Pharmacology 385(1)—， S卿l. ， R219(1998)中記載的酰胺 化合物、異喹啉磺酰胺衍生物以及異喹啉衍生物、以及W000/57914號以及 特開2000 — 44513號中公開的乙烯苯衍生物以及利尿酸等。另外，也可以 舉出W001/56988號中公開的含氮化合物。進(jìn)而，也可以舉出W001/68607 號中公開的硫色滿類化合物。
例如，作為前述酰胺化合物，可以舉出上述通式(I)所示的化合物、
以及通式(r )所示的化合物，作為所述的異喹啉磺酰胺衍生物，可以
舉出六氫一l一 (5 —異喹啉基磺?；?一1H—1，4一二氮雜萆鹽酸鹽 (fasudil hydrochloride)等，另外，作為所述異喹啉衍生物，可以舉 出六氫一l一[ (4一甲基一5 —異喹啉基)磺酰基]一1H—1，4一二氮雜萆二 鹽酸鹽、(S) — ( + ) —六氫一2—甲基一1 —[ (4一甲基一5 —異喹啉基) 磺酰基]一1H—1，4一二氮雜萆鹽酸鹽、六氫一7—甲基一l一[(4一甲基一 5 異喹啉基)甴?；鵠一1H—1，4一二氮雜萆二鹽酸鹽、六氫一5 —甲基一 l一[ (4—甲基一5 —異喹啉基)磺?；鵠一1H—1，4一二氮雜草二鹽酸鹽、 六氫一2—甲基一1一[ (4一甲基一5 —異喹啉基)磺?；鵠一1H — 1，4一二 氮雜萆二鹽酸鹽、(R) — (一) 一六氫一2—甲基一l一[ (4一甲基一5 — 異喹啉基)磺酰基]一1H — 1，4一二氮雜萆鹽酸鹽、(R) _ ( + ) —六氫 一5 —甲基一1一[(4一甲基一5 —異喹啉基)磺?；鵠一1H—1，4一二氮雜萆 鹽酸鹽等。
進(jìn)而，作為前述乙烯苯衍生物可以舉出4一[2— (2,3，4，5，6 —五氟苯基) 丙稀酰基]桂皮酸等。另外，作為前述含氮化合物，可以舉出N—[1— (3,5 一二甲氧基芐基)四氫一1H—3 —吡咯基]一N— (1H —5 —吲唑基)胺等。
優(yōu)選通式(I)所示的酰胺化合物、異喹啉磺酰胺衍生物、乙烯苯衍 生物以及利尿酸，特別優(yōu)選通式(r)所示的酰胺化合物、fasudilhydrochloride、利尿酸以及4一[2— (2，3，4，5，6 —五氟苯基)丙稀酰基]桂 皮酸。
另外，作為所述的硫色滿類化合物，進(jìn)而可以舉出以下化合物。 (S) —4一氨基—N— (4一吡啶基)硫色滿一7 —羧酰胺、 (S) —4一氨基一N— (4一吡啶基)硫色滿一7—羧酰胺一1，1一二氧
化物、
(S) —4一氨基一N— (1H—吡唑并[3，4一b]吡啶一4一基)硫色滿一 7 —羧酰胺、
(S) —4一氨基一N— (1H—吡唑并[3，4一b]吡啶一4 —基)硫色滿一 7—羧酰胺一1，1一二氧化物、
(S) —4一氨基一N— (1H—吡咯并[2，3—b]吡啶一4一基)硫色滿一 7 —羧酰胺、
(S) —4 —氨基一N— (1H—吡咯并[2，3 —b]吡啶一4—基)硫色滿一
7—羧酰胺一1，1一二氧化物、
(S) —4一氮基一6—甲基一N_ (4 —吡啶基)硫色滿一7—羧酰胺、 (S) —4一氨基一6—甲基—N— (4一吡啶基)硫色滿一7 —羧酰胺
一l,l一二氧化物、
(S) —4一氨基一6 —氯一N— (4一吡啶基)硫色滿一7—羧酰胺、 (S) —4 —氨基一6 —氯一N— (4一吡啶基)硫色滿一7 —羧酰胺一
l,l一二氧化物、
(S) —4一氨基一8—甲基一N— (4 —吡啶基)硫色滿一7—羧酰胺、 (S) —4一氨基一8—甲基一N— (4一吡啶基)硫色滿一7 —羧酰胺
一u—二氧化物、
(S) —4—氨基一6—甲基一N— (1H—吡咯并[2,3—b]吡啶一4 —基) 硫色滿一7—羧酰胺—二氧化物、
(S) 一4 —氨基一6 —氯—N— (1H—吡咯并[2，3 —b]吡啶一4 —基) 硫色滿一7 —羧酰胺一1,1 —二氧化物。
另外，在本發(fā)明中，可以單獨(dú)含有一種具有Rho激酶抑制活性的化合 物，另外，也可以根據(jù)需要合并含有多種類。
另外，在本發(fā)明中，也可以聯(lián)合使用作為有效成分的具有Rho激酶抑制活性的化合物與其它的視覺功能障礙抑制劑。
本說明書中通式(I)以及通式(I')的各記號的定義如下所示。
R、 R' 、 R'中的垸基是指碳數(shù)l 10個(gè)的直鏈或支鏈狀的垸基，可以 舉出甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、 己基、庚基、辛基、壬基、癸基等，優(yōu)先碳數(shù)1 4個(gè)的烷基。
R、 R， 、 R'中的環(huán)垸基是表示環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán) 丁基等的碳數(shù)3 7個(gè)的環(huán)烷基。
R、 R' 、 R'中的環(huán)垸基烷基是指環(huán)烷基部分為所述碳數(shù)3 7個(gè)的環(huán)烷 基，烷基部分為碳數(shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈狀的垸基(甲基、乙基、丙基、 異丙基、丁基、戊基、己基等)的環(huán)烷基垸基，可以舉出環(huán)丙基甲基、環(huán) 丁基甲基、環(huán)戊基甲基、環(huán)己基甲基、環(huán)庚基甲基、環(huán)丙基乙基、環(huán)丁基 乙基、環(huán)戊基乙基、環(huán)己基乙基、環(huán)庚基乙基、環(huán)丙基丙基、環(huán)丁基丙基、 環(huán)戊基丙基、環(huán)己基丙基、環(huán)庚基丙基、環(huán)丙基丁基、環(huán)丁基丁基、環(huán)戊 基丁基、環(huán)己基丁基、環(huán)庚基丁基、環(huán)丙基己基、環(huán)丁基己基、環(huán)戊基己 基、環(huán)己基己基、環(huán)庚基己基等。
R、 R' 、 R'中的芳烷基是指具有垸基部分為碳數(shù)l 4個(gè)的烷基的芳烷 基，可以舉出芐基、l一苯基乙基、2 —苯基乙基、3 —苯基丙基、4一苯基 丁基等的苯基烷基。
R、 R' 、 R'中的環(huán)上可以有取代基的環(huán)烷基、環(huán)垸基烷基、苯基、芳 烷基的取代基，可以舉出鹵素(氯、溴、氟、碘)、烷基(與R、 R' 、 R1 中烷基意義相同)、垸氧基(碳數(shù)1 6個(gè)直鏈或支鏈狀的烷氧基，可以舉 出甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、 叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。)、芳烷基(與R、 R' 、 ^中芳烷基意義 相同)、鹵代烷基(在R、 R' 、 R'中表示的烷基上取代l 5個(gè)鹵原子的鹵 代烷基，可以舉出氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、2，2，2 —三氟乙基， 2，2，3，3，3 —五氟丙基等。)、硝基、氨基、疊氮基等。
r與r'或r'與r'相互結(jié)合形成可以在環(huán)中進(jìn)一步含有氧原子、硫原子 或可以具有取代基的氮原子的雜環(huán)的基團(tuán)，優(yōu)選為5 6員環(huán)、它們的稠環(huán)， 具體可以舉出l一口比咯烷基、哌啶子基、1 —哌嗪基、嗎啉代、硫代嗎啉代、 1 —咪唑基、2，3 — 二氫噻唑一3 —基等。另外，作為可以具有取代基的氮原子上的取代基，可以舉出垸基、芳
烷基、鹵代烷基等。這里，垸基、芳烷基、鹵代烷基與R、 R' 、 R'中表示 的意義相同。
R2中的烷基與R、 R' 、 R'中的烷基意義相同。
R3、 R4中鹵原子、垸基、垸氧基、芳烷基與R、 R' 、 R'中所示的意義 相同。
R3、 R4中酰基，表示碳數(shù)2 6個(gè)的垸?；?乙酰基、丙酰基、丁?；?戊?；⑷谆阴；?、苯甲?；?、或垸?；繛樘紨?shù)2 4個(gè)的苯基 垸酰基(苯基乙?；?、苯基丙?；⒈交□；?。
R3、 R4中的垸基氨基，為烷基部具有碳數(shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈狀烷基 的烷基氨基，可以舉出甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、異丙基氨基、丁 基氨基、異丁基氨基、仲丁基氨基、叔丁基氨基、戊基氨基、己基氨基等。
R3、 R4中的?；被?，為酰基部具有碳數(shù)為2 6個(gè)的烷?；?、苯甲酰 基、或烷?；刻紨?shù)為2 4個(gè)的苯基烷?；鹊孽；被梢耘e出乙酰 基氨基、丙?；被⒍□；被?、戊酰基氨基、三甲基乙酰基氨基、苯 甲酰基氨基、苯基乙?；被?、苯基丙?；被?、苯基丁?；被?。
R3、 R4中的烷基硫代，為烷基部具有碳數(shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈狀的烷 基的烷基硫代，可以舉出甲基硫代、乙基硫代、丙基硫代、異丙基硫代、 丁基硫代、異丁基硫代、仲丁基硫代、叔丁基硫代、戊基硫代、己基硫代 等。
R3、 R4中的芳烷基氧基，為具有其烷基部含有碳數(shù)1 4個(gè)的垸基的芳 烷基的芳垸基氧基，可以舉出芐氧基、l一苯基乙基氧基、2 —苯基乙基氧 基、3 —苯基丙基氧基、4一苯基丁基氧基等。
R3、 R4中的芳烷基硫代，為具有其垸基部含有碳數(shù)1 4個(gè)的烷基的芳 垸基的芳烷基硫代，可以舉出芐基硫代、l一苯基乙基硫代、2 —苯基乙基 硫代、3 —苯基丙基硫代、4一苯基丁基硫代等。
R3、 R4中的垸氧基羰基，為烷氧基部具有碳數(shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈狀 的烷氧基的垸氧基羰基，可以舉出甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、 異丙氧基羰基、丁氧基羰基、異丁氧基羰基、仲丁氧基羰基、叔丁氧基羰 基、戊氧基羰基、己氧基羰基等。R3、 R4中的單"雙垸基氨基甲?；?，為以碳數(shù)1 4個(gè)的烷基單取代或 雙取代的氨基甲?；?，可以舉出甲基氨基甲?；⒍谆被柞；⒁?基氨基甲?；?、二乙基氨基甲?；?、丙基氨基甲?；?、二丙基氨基甲?；?、 丁基氮基甲酰基、二丁基氨基甲?；?。
R5中的垸氧基與R、 R' 、 R'中表示的烷氧基意義相同。 R5中的浣氧基羰基氧基，為垸氧基部具有碳數(shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈狀 的烷氧基的垸氧基羰基氧基，可以舉出甲氧基羰基氧基、乙氧基羰基氧基、 丙氧基羰基氧基、異丙氧基羰基氧基、丁氧基羰基氧基、異丁氧基羰基氧 基、仲丁氧基羰基氧基、叔丁氧基羰基氧基、戊氧基羰基氧基、己氧基羰 基氧基等。
R5中的垸?；趸瑸橥轷；哂刑紨?shù)2 6個(gè)的垸?；耐轷；?基，可以舉出乙氧基氧基、丙?；趸?、丁?；趸?、戊酰基氧基、三甲 基乙?；趸?。
R5中的芳垸基氧基羰基氧基、為具有其烷基部含有碳數(shù)1 4個(gè)的垸基 的芳垸基的芳垸基氧基羰基氧基，可以舉出芐氧基羰基氧基、l一苯基乙 基氧基羰基氧基、2—苯基乙基氧基羰基氧基、3—苯基丙基氧基羰基氧基、 4一苯基丁基氧基羰基氧基等。
R6中的烷基與R、 R' 、 R'中的垸基意義相同。另外，R8、尺9中的烷基與 R、 R' 、 R'中的垸基意義相同。R8、 RS中的芳垸基與R、 R' 、 R'中的芳烷基 意義相同。
R7中的烷基與R、 R' 、 R'中的烷基意義相同，R7中的芳烷基與R、 R'、 R'中的芳垸基意義相同。
R6與R7相互結(jié)合形成可以在環(huán)中進(jìn)一步含有氧原子、硫原子或可以具 有取代基的氮原子的雜環(huán)的基團(tuán)，可以舉出咪唑一2 —基、噻唑一2—基、 瞎唑一2 —基、咪唑啉一2 —基、3，4，5，6 —四氫吡啶一2 —基、3， 4, 5,6 — 四氫嘧啶一2 —基、1,3—嗨唑啉—2 —基、1,3 —噻唑啉一2 —基或可以具
有鹵素、烷基、烷氧基、鹵代垸基、硝基、氨基、苯基、芳烷基等取代基 的苯并咪唑一2 —基、苯并噻唑一2 —基、苯并隨唑一2—基等。這里的鹵
原子、烷基、垸氧基、鹵代垸基、芳烷基與R、 R' 、 R'中所示的意義相同。 另外，可以具有上述取代基的氮原子中的取代基，可以舉出垸基、芳烷基、鹵代垸基等。這里的垸基、芳烷基、鹵代烷基與R、 R' 、 W中所示 的意義相同。
R1Q、 Ru中的羥基烷基，為在碳數(shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈狀的烷基中有 1 3個(gè)羥基取代的羥基烷基，例如可以舉出羥基甲基、2—羥基乙基、1 一羥基乙基、3 —羥基丙基、4一羥基丁基等。
R10、 R"中的烷基與R、 R， 、 R'中的烷基意義相同，R10、 R"中的鹵代 垸基、烷氧基羰基與R、 R' 、 R'中所示的意義相同，R1Q、 R"中的芳烷基與 R、 R' 、 R'中的芳烷基意義相同。
R1()、 R"相互結(jié)合形成的環(huán)烷基也與R、 R' 、 W中的環(huán)烷基意義相同。
L中的烷基與R、 R' 、 R'中烷基意義相同。
L中的氨基烷基，為在碳數(shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈的烷基中有氨基取代 的氨基垸基，例如可以舉出氨基甲基、2 —氨基乙基、l一氨基乙基、3 — 氨基丙基、4一氨基丁基、5 —氨基戊基、6 —氨基己基等。
L中的單 雙烷基氨基烷基，為以碳數(shù)1 4個(gè)的烷基單或雙取代的氨 基烷基，可以舉出甲基氨基甲基、二甲基氨基甲基、乙基氨基甲基、二乙 基氨基甲基、丙基氨基甲基、二丙基氨基甲基、丁基氨基甲基、二丁基氨 基甲基、2 — 二甲基氨基乙基、2 — 二乙基氨基乙基等。
L中的氨基甲?；榛?，為在碳數(shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈狀的烷基上有 氨基甲?；〈陌被柞；榛?，例如可以舉出氨基甲酰基甲基、2 — 氨基甲?；一一氨基甲?；一?、3 —氨基甲酰基丙基、4一氨基甲 酰基丁基、5 —氨基甲?；旎?、6 —氨基甲?；夯?。
L中的鄰苯二甲酰亞胺基烷基，為在碳數(shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈狀的烷 基上有鄰苯二甲酰亞胺基取代的鄰苯二甲酰亞胺基烷基，例如可以舉出鄰 苯二甲酰亞胺基甲基、2 —鄰苯二甲酰亞胺基乙基、l一鄰苯二甲酰亞胺基 乙基、3 —鄰苯二甲酰亞胺基丙基、4一鄰苯二甲酰亞胺基丁基、5 = —鄰 苯二甲酰亞胺基戊基、6 —鄰苯二甲酰亞胺基己基等。
B中的烷基與R、 R' 、 R'中的垸基意義相同。
B中的烷氧基與R、 R' 、 R'中的垸氧基意義相同。
B中的芳垸基與R、 R' 、 R'中的芳垸基意義相同。
B中的芳烷基氧基與R3、 R4中的芳烷基氧基意義相同。B中的氨基垸基與L中的氨基垸基意義相同。
B中的羥基烷基與R1。、 Ru中的羥基烷基意義相同。
B中的垸?；趸瑸樵谔紨?shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈狀的垸基上具 有碳數(shù)2 6個(gè)的烷?；康耐轷；趸〈耐轷；趸榛?，例如可以 舉出乙酰基氧基甲基、丙?；趸谆?、丁?；趸谆⑽祯；趸?基、三甲基乙?；趸谆?、乙酰基氧基乙基、丙酰基氧基乙基、丁?；?氧基乙基、戊?；趸一?、三甲基乙?；趸一取?br> B中的烷氧基羰基垸基，為在碳數(shù)1 6個(gè)的直鏈或支鏈狀的垸基上具 有碳數(shù)1 6個(gè)的垸氧基部的烷氧基羰基取代的垸氧基羰基垸基，例如可以 舉出甲氧基羰基甲基、乙氧基羰基甲基、丙氧基羰基甲基、異丙氧基羰基 甲基、丁氧基羰基甲基、異丁氧基羰基甲基、仲丁氧基羰基甲基、叔丁氧 基羰基甲基、戊氧基羰基甲基、己氧基羰基甲基、甲氧基羰基乙基、乙氧 基羰基乙基、丙氧基羰基乙基、異丙氧基羰基乙基、丁氧基羰基乙基、異 丁氧基羰基乙基、仲丁氧基羰基乙基、叔丁氧基羰基乙基、戊氧基羰基乙 基、己氧基羰基乙基等。
Q'、 Q2、 Q3中的鹵素與R、 R， 、 R'中的鹵素意義相同。Q1、 02中的芳烷 基氧基與R3、 R4中的芳垸基氧基意義相同。
Q3中的垸氧基與R、 R' 、 R'中的垸氧基意義相同。
W、 X、 Y中的亞垸基為碳數(shù)l 6個(gè)的直鏈或支鏈狀的亞垸基，可以舉 出亞甲基、亞乙基、三亞甲基、亞丙基、四亞甲基、五亞甲基、六亞甲基 等。
Y中的亞烯基為碳數(shù)2 6個(gè)的直鏈或支鏈狀的亞烯基，可以舉出亞乙 烯基、亞丙烯基、亞丁烯基、亞戊烯基等。
Rb中的烷基與R、 R' 、 R'中的垸基意義相同。
Rb中的芳烷基與R、 R' 、 R'中的芳垸基意義相同。
Rb中的氨基垸基與L中的氨基烷基意義相同。
Rb中的單 雙烷基氨基烷基與L中的單 雙烷基氨基垸基意義相同。
Rc中的含氮雜環(huán)，若為單環(huán)時(shí)表示吡啶、嘧啶、噠嗪、三嗪、吡唑、 三唑，若為稠環(huán)時(shí)表示吡咯并吡啶(1H—吡咯并[2，3 — b]吡啶、1H—吡咯 并[3， 2 — b]吡啶、1H—吡咯并[3, 4—b]吡啶等)、吡唑并吡啶(1H-吡唑并[3，4一b]吡啶、1H—卩比唑并[4，3 — b]吡啶等)、咪唑并吡啶(1H—咪 唑并[4,5 — b]吡啶等)、吡咯并嘧啶(1H—吡咯并[2，3 — d]嘧啶、1H —吡 咯[3,2 — d]嘧啶、1H—吡咯并[3，4一d]嘧啶等)、吡唑并嘧啶(1H—吡唑 并[3，4一d]嘧啶、吡唑并[l，5 — a]嘧啶、1H—吡唑并[4，3—d]嘧啶等)、 咪唑并嘧啶(咪唑并[l，2 — a]嘧啶、lH—咪唑并[4，5 — d]嘧啶等)、吡咯 并三嗪(吡咯并[l，2 — a] —1，3，5 —三嗪、吡咯并[2， l一f]一l，2，4一三 嗪等)、吡唑并三嗪(吡唑并[l， 5 — a]—l，3，5—三嗪等)、三唑并吡啶
(1H—1，2，3 —三唑[4，5—b]吡啶等)、三唑并嘧啶(1，2，4一三唑并[1，5 一a]嘧啶、1，2，4一三唑并[4，3 — a]嘧啶、1H—1， 2， 3 —三唑并[4， 5 — d] 嘧啶等)、噌啉、喹唑啉、喹啉、吡啶并噠嗪(吡啶并[2，3 — c]噠嗪等)、 吡啶并吡嗪(吡啶并[2，3 — b]吡嗪等)、吡啶并嘧啶(吡啶并[2，3 — d] 嘧啶、吡啶并[3，2 — d]嘧啶等)、嘧啶并嘧啶(吡啶并[4，5 — d]嘧啶、吡 啶并[5, 4一d]嘧啶等)、吡嗪并嘧啶(吡嗪并[2， 3 — d]嘧啶等)、萘啶(1， 8 一萘啶)、四唑并嘧啶(四唑并[l，5 — a]嘧啶等)、噻酚并吡啶(噻酚并 [2，3 — d]吡啶等)、噻酚并嘧啶(噻酚并[2,3 — d]嘧啶等)、噻唑并吡啶
(噻唑并[4，5—b]吡啶、噻唑并[5，4一b]吡啶等)、噻唑并嘧啶(噻唑并 [4，5 — d]嘧啶、噻唑并[5，4一b]嘧啶等)、隨唑并吡啶(瞎唑并[4，5 — b] 吡啶、隨唑并[5，4一b]吡啶)、隨唑并嘧啶(隨唑并[4，5 — d]嘧啶、隨唑 并[5，4一d]嘧啶等)、呋喃并吡啶(呋喃并[2，3 — b]吡啶、呋喃并[3，2 一b]吡啶等)呋喃并嘧啶(呋喃并[2， 3 — d]嘧啶、呋喃并[3， 2 — d]嘧啶等)、 2,3 — 二氫吡咯并吡啶(2，3 — 二氫一lH—吡咯并[2,3 — b]吡啶、2, 3 — 二 氫一lH—吡咯并[3，2—b]吡啶等)、2，3 — 二氫吡咯并嘧啶(2,3 —二氫一 1H —吡咯并[2，3 —d]嘧啶、2,3 —二氫一1H —吡咯并[3，2 —d]嘧啶等)、 5，6，7，8—四氫批啶并[2，3 —d]嘧啶、5，6,7，8—四氫一1，8 —萘啶、 5,6，7，8 —四氫喹啉等，若它們的環(huán)被加氫還原形成芳香族環(huán)時(shí)，環(huán)中的 碳原子可以為羰基，例如也包括2，3 — 二氫一2 —氧代吡咯并吡啶、2，3 — 二氫一2，3 — 二氧代吡咯并吡啶、7,8 — 二氫一7 —氧代一1，8 —萘啶、 5, 6， 7， 8 —四氫一7 —氧代一1， 8 —萘啶等。
另外，它們的環(huán)可以被鹵原子、烷基、烷氧基、芳烷基、鹵代烷基、 硝基、氨基、垸基氨基、氰基、甲酰基、酰基、氨基烷基、單 雙垸基氨基垸基、疊氮基、羧基、垸氧基羰基、氨基甲酰基、單'雙烷基氨基甲酰 基、烷氧基烷基(甲氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基、乙氧基甲基、 乙氧基乙基、乙氧基丙基等)、可以具有取代基的肼基等的取代基取代。 這里作為可以具有取代基的肼基的取代基，可以舉出烷基、芳烷基、
硝基、氰基等，其中烷基、芳烷基與R、 R' 、 R'中的烷基、芳烷基意義相 同，例如可以舉出甲基肼基、乙基肼基、芐基肼基等。
作為通式(I)所示的化合物，具體的可以舉出以下化合物。
(1) 4一 (2 —吡啶基氨基甲?；?哌啶
(2) l —芐氧基羰基一4— (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(3) l —苯甲?；?一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(4) l一丙基一4一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(5) l — [3— (2— (2 —噻酚基甲基)苯氧基)一2—羥基丙基]一4 —(4一吡啶基氮基甲?；?哌啶
(6) 4— (4一吡啶基氨基甲酰基)哌啶
(7) l —芐基一4— (4一吡啶基氨基甲?；?一1，2，5，6 —四氫吡啶
(8) 3— (4一吡啶基氨基甲酰基)哌啶
(9) l一節(jié)基一3— (4一吡啶基氮基甲?；?哌啶
(10) 1— (2— (4—節(jié)氧基苯氧基)乙基)一4一 (N— (2 —吡啶基) 一N—節(jié)基氨基甲酰基)哌啶
(11) l一甲?；?一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(12) 4— (3 —吡啶基氨基甲酰基)哌啶
(13) l—異丙基一4一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(14) l一甲基一4一 (4一吡啶基氨基甲酰基)哌啶
(15) l —己基一4— (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(16) l —芐基一4一 (4一吡啶基氨基甲酰基)哌啶
(17) l— (2 —噻酚基乙基)一4一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(18) l— (2— (4一甲氧基苯基)乙基)一4一 (4一吡啶基氨基甲 酰基)哌啶
(19) l一 (2— (4—甲氧基苯基)乙基)一4一 (2 —吡啶基氮基甲 ?；?哌啶(20) l— (2— (4一氯苯基)乙基)一4一 (4一吡啶基氨基甲?；?
哌啶
(21) l — 二苯基甲基一4一 (2 —吡啶基氨基甲?；?哌啶
(22) 1 — [2— (4_ (5—甲基一3 —氧代一2，3，4，5 —四氫噠嗪一6 一基)苯基)乙基]一4一 (2 —吡啶基氨基甲?；?哌啶
(23) l— (4— (4，5 — 二氫一2 —呋喃基)一4一 (4一吡啶基氨基甲 酰基)哌啶
(24) l— (2—硝基苯基)一4一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(25) 1_ (2—氨基苯基)一4— (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(26) l —煙?；?一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(27) l —異煙?；?一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(28) 1— (3，4，5 —三甲氧基苯甲酰基)一4一 (4一吡啶基氨基甲酰 基)哌啶
(29) l —乙?；?一 (4一吡啶基氨基甲酰基)哌啶
(30) l— (3— (4一氟代苯甲酰基)丙基)一4一 (4一吡啶基氨基 甲?；?哌啶
(31) l— (3— (4一氟代苯甲酰基)丙基)一4一 (2 —吡啶基氨基 甲?；?哌啶
(32) 1— (1— (4—羥基苯甲?；?乙基)—4一 (2 —吡啶基氨基 甲?；?哌啶
(33) l— (l一 (4一節(jié)氧基苯甲?；?乙基)一4一 (2 —吡啶基氨 基甲?；?哌啶
(34) l— (2— (4 —羥基苯氧基)乙基)一4一 (2 —批喊基氨基甲 ?；?哌啶
(35) l— (4一 (4一氟代苯基)一4一羥基丁基)一4一 (4一吡啶基
氨基甲?；?哌啶
(36) l— (l一甲基一2— (4—羥基苯基)一2—羥基乙基)一4— (2
一吡啶基氨基甲酰基)哌啶
(37) l —肉桂基一4一 (2 —吡啶基氨基甲?；?哌啶
(38) l— (2 —羥基一3 —苯氧基丙基)一4一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(39) l— (2 —羥基一3 —苯氧基丙基)一4— (3 —吡啶基氨基甲酰 基)哌啶
(40) 1— (2 —羥基一3 —苯氧基丙基)_4— (2 —吡啶基氨基甲酰 基)哌啶
(41) 1— (2 —苯基乙基)一4—[N— (2 —卩比啶基)一N— (2— (N，N 一二甲基氨基)乙基)氨基甲?；鵠哌啶
(42) l —芐氧基羰基一4一 (2 —吡啶基氨基甲酰基)哌啶
(43) l— (3 —氯苯基)氨基甲?；?一 (4一吡啶基氨基甲?；?
哌啶
(44) 4_[N— (2 —吡啶基)一N— (2— (N，N—二甲基氨基)乙基)
氨基甲酰基]哌啶
(45) l一甲基一4一 (4一吡啶基氨基甲?；?-1,2,5， 6—四氫吡啶。
(46) 1 —煙?；?— (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(47) 1—[2— (4 —氟代苯甲酰基)乙基]一4一 (4一吡啶基氨基甲 ?；?哌啶
(48) 1— (6 —氯一2—甲基咪唑并[1，2 —a]吡啶一3 —羰基)一4一 (4一吡啶基氨基甲酰基)哌啶
(49) l一 (4一硝基芐基)一4一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(50) l —己基一4一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(51) l —芐氧基羰基一4— (2 —氯一4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(52) 4— (2 —氯一4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(53) l— (2 —氯煙?；?_4一 (4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(54) 3— (2 —氯一4一吡啶基氨基甲?；?哌啶
(55) l— (4—鄰苯二甲酰亞胺基丁基)—4— (4一吡啶基氨基甲酰 基)哌啶
(56) l— (3,5 —二叔丁基一4一羥基肉桂酰基)一4一 (4 —吡啶基
氨基甲?；?哌啶
(57) l—氨基甲?；谆?一 (4一吡啶基氨基甲酰基)哌啶
(58) l —芐氧基羰基一4一 (5 —硝基一2 —吡啶基氨基甲?；?哌啶
25(59) 4— (5—硝基一2 —吡啶基氨基甲?；?哌啶
(60) 反式一4一芐氧基羧酰胺甲基一1一 (4一吡啶基氨基甲?；? 環(huán)己烷
(61) 反式一4一氨基甲基一1一 (4 —吡啶基氨基甲酰基)環(huán)己垸
(62) 反式一4一甲酰胺基甲基一1— (4 —吡啶基氨基甲?；?環(huán)己
烷
(63) 反式一4一二甲基氨基甲基一1一 (4一吡啶基氨基甲?；?環(huán)
己烷
(64) N—亞芐基一反式一 (4一吡啶基氨基甲酰基)環(huán)己基甲胺
(65) 反式一4一芐基氨基甲基一1一 (4一吡啶基氨基甲?；?環(huán)己
烷
(66) 反式一4一異丙基氨基甲基一1一 (4一吡啶基氨基甲?；?環(huán)
己烷
(67) 反式一4一煙酰基氨基甲基一1一 (4一吡啶基氨基甲?；?環(huán)
己烷
(68) 反式一4一環(huán)己基氨基甲基—l一 (4一吡啶基氨基甲酰基)環(huán)
己烷
(69) 反式一4一芐氧基羧酰胺一1一 (4一吡啶基氨基甲?；?環(huán)己
烷
(70) 反式一4一氨基—l一 (4一吡啶基氨基甲酰基)環(huán)己垸
(71) 反式—4一 (l一氨基甲基)—1— (4一吡啶基氨基甲?；?環(huán)
己烷
(72) 反式一4一氨基甲基一順式一2—甲基一1一 (4一吡啶基氨基甲 ?；?環(huán)己烷
(73) ( + ) —反式一4一 (l一芐氧基羧酰胺丙基)一l一環(huán)己垸羧
酸
(74) ( + ) —反式一4— (l一芐氧基羧酰胺丙基)一l一 (4一吡啶 基氨基甲酰基)環(huán)己烷
(75) (_) —反式一4一 (1 —芐氧基羧酰胺丙基)一l一 (4一吡啶 基氨基甲?；?環(huán)己垸(76) ( + ) —反式一4一 (l一氨基丙基)一l一 (4一吡啶基氨基甲 酰基)環(huán)己烷
(77) (—) —反式一4一 (l一氨基丙基)一1— (4一吡啶基氨基甲 ?；?環(huán)己垸
(78) ( — ) 一反式一4一 (l一芐氧基羧酰胺乙基)一l一 (4一吡啶 基氨基甲酰基)環(huán)己垸
(79) ( + )—反式一4一 (1—芐氧基羧酰胺乙基)一l一 (4一吡啶
基氨基甲?；?環(huán)己烷
(80) ( + ) —反式一4一 (l一氨基乙基)一l一 (4一吡啶基氨基甲
酰基)環(huán)己垸
(81) (—)—反式一4— (l一氨基乙基)一1— (4一吡啶基氨基甲 ?；?環(huán)己烷
(82) 反式一4一 (4一氯苯甲酰基)氨基甲基一l一 (4一吡啶基氨基 甲?；?環(huán)己垸
(83) 反式一4一氨基甲基一1一 (2 —吡啶基氨基甲?；?環(huán)己烷
(84) 反式一4一芐氧基羧酰胺甲基一1— (2 —吡啶基氨基甲?；? 環(huán)己垸
(85) 反式一4一氨基甲基甲基一1一 (4一吡啶基氨基甲?；?環(huán)己
烷
(86) 反式一4一 (N—節(jié)基一N—甲基氨基)甲基一1一 (4一吡徒基 氨基甲?；?環(huán)己垸
(87) 反式—4一氨基甲基一1一 (3 —吡啶基氨基甲酰基)環(huán)己垸
(88) 反式一4一氨基甲基一1一[ (3 —羥基一2 —吡啶基)氨基甲酰 基]環(huán)己烷
(89) 反式一4一芐氧基羧酰胺甲基一1一 (3 —批啶基氨基甲?；? 環(huán)己垸
(90) 反式一4一芐氧基羧酰胺甲基一1一[ (3 —芐氧基—2 —吡啶基)
氨基甲?；鵠環(huán)己烷
(91) 反式一4一鄰苯二甲酰亞胺基甲基一1一 (4一吡啶基氨基甲酰 基)環(huán)己烷(92) 反式一4一節(jié)氧基羧酰胺甲基一1一 (3—甲基一4一吡啶基氨基 甲?；?環(huán)己烷
(93) 反式一4一氨基甲基一1一 (3—甲基一4一吡啶基氨基甲?；? 環(huán)己烷
(94) 4一 (反式一4一芐氧基羧酰胺甲基環(huán)己基羰基)氨基一2，6 — 二甲基吡啶一N—氧化物
(95) 4— (反式一4一氨基甲基環(huán)己基羰基)氨基一2，6 — 二甲基吡 啶一N—氧化物
(96) 反式一4一氨基甲基一1一 (2—甲基一4一吡啶基氨基甲?；? 環(huán)己垸
(97) 反式—4一 (1 —芐氧基羧酰胺乙基)一l一 (4一吡啶基氨基甲 ?；?環(huán)己垸
(98) 反式一4一 (l一氨基一l一甲基乙基)_1一 (4一吡啶基氨基 甲酰基)環(huán)己垸
(99) 反式一4一 (2 —氨基乙基)一l一 (4一吡啶基氨基甲?；?環(huán)
己烷
(100) 反式一4一 (2 —氨基一1一甲基乙基)一l一 (4一吡啶基氨基 甲酰基)環(huán)己烷
(101) 反式—4一 (l一氨基丙基)一l一 (4一吡啶基氨基甲?；? 環(huán)己烷
(102) 反式一4一氨基甲基一反式一1一甲基一1— (4一吡啶基氨基 甲酰基)環(huán)己垸
(103) 反式一4一氨基甲基一順式一2—甲基一1— (4 —吡啶基氨基 甲?；?環(huán)己垸
(104) 反式一4一 (l一芐氧基羧酰胺一l一甲基乙基)一l一 (4一吡 啶基氨基甲酰基)環(huán)己垸
(105) 反式一4一芐氧基羧酰胺甲基一1一 (N—甲基一4一吡啶基氨 基甲?；?環(huán)己烷
(106) 反式一4一 (1 —乙酰胺一l一甲基乙基)一1_ (4一吡啶基氨 基甲酰基)環(huán)己垸(107) 反式一N— (6 —氨基一4一吡啶基)一4一氨基甲基環(huán)己垸羧
酰胺
(108) 反式一N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)一4一氨基甲 基環(huán)己垸羧酰胺
(109) ( + ) 一反式一N— (lH—吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)—4 一 (l一氨基乙基)環(huán)己烷羧酰胺
(110) 反式一N— (1H —吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)一4一 (l一氨 基一l一甲基乙基)環(huán)己烷羧酰胺
(111) 反式一N— (1H —吡咯并[3，4-b]吡啶—4_基)一4一氨基甲 基環(huán)己烷羧酰胺
(112) ( + )—反式一N— (1H —吡咯并[3，4-b]吡啶一4一基)一4
一 (l一氨基乙基)環(huán)己烷羧酰胺
(113) 反式一N— (1H—吡咯并[3，4-b]吡啶一4一基)一4— (1 —氨 基一l一甲基乙基)環(huán)己烷羧酰胺
(114) ( + ) _反式—N— (2—氨基一4 —吡啶基)一4一 (1 —氨基
乙基)環(huán)己烷羧酰胺
(115) 反式一N— (1H —吡咯并[3,4-d]吡啶一4一基)一4一氨基甲 基環(huán)己垸羧酰胺
(116) ( + ) 一反式一N— (1H —吡咯并[3，4-d]吡啶一4一基)一4
一 (l一氨基乙基)環(huán)己烷羧酰胺
(117) 反式一N— (1H—吡咯并[3，4-d]吡啶一4一基)—4— (l一氨 基一l一甲基乙基)環(huán)己烷羧酰胺
(118) 反式一N— (4—吡啶基)一4一氨基甲基環(huán)己烷羧酰胺
(119) 反式一N— (3 —氨基一4—吡啶基)—4一氨基甲基環(huán)己烷羧
酰胺
(120) 反式一N— (7H—咪唑并[4，5-d]吡啶一6 —基)一4一氨基甲 基環(huán)己垸羧酰胺
(121) 反式—N— (3H—1，2，3 —三唑并[4，5-d]吡啶一7 —基)一4
一氨基甲基環(huán)己垸羧酰胺
(122) 反式一N— (1 —芐基一1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4一基)一4一氨基甲基環(huán)己垸羧酰胺
(123) 反式一N— (1H—5 —吡唑基)—4一氨基甲基環(huán)己垸羧酰胺
(124) 反式一N— (1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4一基)一4一氨基甲 基環(huán)己烷羧酰胺
(125) 反式一N— (4 —噠嗪基)一4一氨基甲基環(huán)己烷羧酰胺
(126) 反式一N— (7H—吡咯并[2，3-d]吡啶一4一基)一4 —氨基甲 基環(huán)己烷羧酰胺
(127) 反式一N— (2 —氨基一4一吡啶基)一4一氨基甲基環(huán)己垸羧
酰胺
(128) 反式一N—(噻酚并[2，3 —d]吡啶一4 —基)_4—氨基甲基環(huán) 己烷羧酰胺
(129) 反式一N— (5—甲基一1，2,4—三唑并[1，5-a]吡啶一7 —基) 一4一氨基甲基環(huán)己垸羧酰胺
(130) 反式—N— (3 —氰基_5—甲基吡唑并[l，5-a]吡啶一7—基) 一4一氨基甲基環(huán)己垸羧酰胺
(131) 反式—N— (1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4 —基)一4— (l一氨 基一l一甲基乙基)環(huán)己垸羧酰胺
(132) 反式一N— (2— (l一吡咯烷基)一4一吡啶基)一4—氨基甲 基環(huán)己烷羧酰胺
(133) 反式一N— (2， 6 —二氨基一4一吡啶基)一4一氨基甲基環(huán)己 垸羧酰胺
(134) ( + )—反式一N— (7—甲基一1，8 —萘啶一4一基)一4— (1 一氨基乙基)環(huán)己烷羧酰胺
(135) 反式一N— (1 —芐氧基甲基吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)—4 一氨基甲基環(huán)己烷羧酰胺
(136) ( + ) 一反式一N— (1 —甲基吡咯并[2,3-b]吡啶一4—基) 一4一 (l一氨基乙基)環(huán)己垸羧酰胺
(137) 反式一N—芐基一N— (2 —芐基氨基—4 —吡啶基)—4一 (1
一氨基一l一甲基乙基)環(huán)己垸羧酰胺
(138) 反式一N— (2 —疊氮基一4一吡啶基)一4一氨基甲基環(huán)己垸羧酰胺
(139) 反式一N— (2，3 — 二氫—1H —吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基) 一4一氨基甲基環(huán)己垸羧酰胺
(140) 反式—N— (2，3 — 二氫一1H —吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基) 一4— (l一氨基一l一甲基乙基)環(huán)己烷羧酰胺
(141 — 1)反式一N— (2—羧基一4一吡啶基)一4一氨基甲基環(huán)己院
羧酰胺
(141 — 2) (R) — ( + )—反式—N— (3 —溴一1H—吡咯并[2，3-b] 吡啶一4一基)一4一 (l一氨基乙基)環(huán)己垸羧酰胺
(142) 反式一N— (lH —吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)一4一胍基甲 基環(huán)己烷羧酰胺
(143) 反式一N— (lH—吡唑并[3，4-b]吡啶一4一基)一4一胍基甲
基環(huán)己垸羧酰胺
(144) 反式一N— (4一吡啶基)一4一胍基甲基環(huán)己烷羧酰胺
(145) 反式一N— (l一甲基吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)—4—(胍 基甲基)環(huán)己烷羧酰胺
(146) 反式一N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)一4一 (2 —咪 唑啉一2 —基)氨基甲基環(huán)己烷羧酰胺
(147) 反式一N— (l一芐氧基甲基吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)一4
一胍基甲基環(huán)己烷羧酰胺
(148) 反式一N— (2 —氨基一4一吡啶基)一4一胍基甲基環(huán)己烷羧
酰胺
(149) 反式一N— (1一芐氧基甲基一1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4一 基)一4— (2 —咪唑啉一2 —基)氨基甲基環(huán)己烷羧酰胺
(150) 反式一N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4 —基)—4— (3 —芐
基胍基甲基)環(huán)己垸羧酰胺
(151) 反式一N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4 —基)—4— (3 —苯
基胍基甲基)環(huán)己垸羧酰胺
(152) 反式一N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4—基)一4_ (3 —丙
基胍基甲基)環(huán)己烷羧酰胺
31(153) 反式一N— (1H—批咯并[2，3-b]吡啶一4一基)一4— (3 —辛
基胍基甲基)環(huán)己烷羧酰胺
(154) 反式一N— (1 —芐氧基甲基一lH—吡咯并[2，3-b]吡啶一4一 基)一4一 (2 —芐基一3—乙基胍基甲基)環(huán)己垸羧酰胺
(155) 反式一N— (1H—吡咯并[2, 3-b]吡啶一4一基)一4一 (咪唑 一2 —基)氨基甲基環(huán)己垸羧酰胺
(156) 反式一N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)一4一 (噻唑 一2—基)氨基甲基環(huán)己烷羧酰胺
(157) (R) — ( + ) —N— (4一吡啶基)一4_ (1 —氨基乙基)苯
酰胺
(158) N— (4一吡啶基)一4— (1 —氨基一l一甲基乙基)苯酰胺
(159) N_ (4 —吡啶基)一4一氨基甲基一2 —芐氧基苯酰胺
(160) N— (4 —吡啶基)一4一氨基甲基一2—乙氧基苯酰胺
(161) (R) — (一) 一N— (4 —吡啶基)一4— (l一氨基乙基)一 3—硝基苯酰胺
(162) (R) — ( —) —N— (4一吡啶基)一3_氨基一4_ (l一氨 基乙基)苯酰胺
(163) (R) — ( + ) —N— (4—吡啶基)一4— (1 —氨基乙基)一 3 —氯苯酰胺
(164) N— (4一吡啶基)一3 —氨基甲基苯酰胺
(165) (R) — ( + ) 一N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)—4 一 (l一氨基乙基)苯酰胺
(166) (R) — ( + ) —N— (1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4 —基)一4 一 (l一氨基乙基)苯酰胺
(167) N— (1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4一基)一4一胍基甲基苯酰
胺
(168) N— (4—吡啶基)一4一胍基甲基苯酰胺
(169) (R) — ( + ) —N— (4 —吡啶基)一4— (1 —氨基乙基)_ 3 —氟苯酰胺
(170) N— (4一吡啶基)—4一氨基甲基苯酰胺(171) N— (4 —吡啶基)一4一氨基甲基一2—羥基苯酰胺
(172) N— (4一吡啶基)一4一 (2 —氨基乙基)苯酰胺
(173) N— (4一吡啶基)一4一氨基甲基一3 —硝基苯酰胺
(174) N— (4一吡啶基)一3 —氨基一4一氨基甲基苯酰胺
(175) (S) — (一) 一N— (4—吡啶基)一4一 (1—氨基乙基)苯
酰胺
(176) (S) — ( —) —N— (4—吡啶基)一2— (l —氨基乙基)苯
酰胺
(177) (R) — ( + ) —N— (4 —吡啶基)一4— (1 —氨基乙基)一
2 —氯苯酰胺
(178) (R) — ( + ) —N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4—基)一4 一 (l一 (3 —丙基胍基)乙基)苯酰胺
(179) (R) — ( —) —N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4 —基)一4 _ (l一氨基乙基)一3 —疊氮基苯酰胺
(180) (R) — ( + ) —N— (4 —吡啶基)_4一 (1 —氨基乙基)一
2— 硝基苯酰胺
(181) (R) — ( —) _N— (4 —吡啶基)一4— (1—氨基乙基)—
3— 乙氧基苯酰胺
(182) (R) — ( + ) —N— (3 —碘一1H —吡咯并[2，3-b]吡啶一4 一基)一4一 (l一氨基乙基)苯酰胺
(183) (R) — ( + ) —N— (3 —碘一1H —吡咯并[2，3-b]吡啶一4 一基)一4一 (1—氨基乙基)一3 —疊氮基苯酰胺
(184) (R) — ( — ) 一N— (4—批啶基)一4— (1 —氨基乙基)—
3 —羥基苯酰胺
(185) N— (lH —吡唑并[3，4-b]吡啶一4 —基)一4一胍基甲基一3 一硝基苯酰胺
(186) (R) —N— (1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4一基)—4— (l一 胍基乙基)一3 —硝基苯酰胺
(187) (R) —N— (1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4一基)一4— (1 — 氨基乙基)—2 —硝基苯酰胺(188) N— (1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4一基)一4一胍基苯酰胺
(189) (R) —N— (1H—吡唑并[3,4-b]吡啶—4—基)—4一 (1 — 氨基乙基)一3 —硝基苯酰胺
(190) (R) —N— (1H—吡唑并[3,4-b]吡啶一4 —基)—4— (l一 胍基乙基)苯酰胺
(191) N— (1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4 —基)一4一 (1 —氨基—2
一羥基乙基)苯酰胺
(192) N— (1H —吡唑并[3，4-b]吡啶一4一基)—4一氨基甲基一3
一硝基苯酰胺
(193) N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)—4一哌啶羧酰胺
(194) N— (1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4一基)—4一哌啶羧酰胺
(195) N— (1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4 —基)一1 —氨基乙?；? 一哌啶羧酰胺
(196) N— (1—甲氧基一1H—吡唑并[3，4-b]吡啶一4一基)一4 —哌 啶羧酰胺
(197) N— (2，3 — 二氫一lH—吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)一4 —哌 啶羧酰胺
(198) N— (1H—吡咯并[2， 3-b]吡啶一4一基)—1— (2 —苯基乙基) 一4一哌啶羧酰胺
(199) N— (1H—吡咯并[2，3-b]吡啶一4 —基)—1 —脒基一4—哌啶
羧酰胺
(200) N— (1H—吡咯并[2， 3-b]吡啶—4 —基)—l一 (3 —苯基丙基) 一4一哌啶羧酰胺
(201) N— (1H —吡咯并[2，3-b]吡啶一4一基)一1 —芐基一4 —哌啶
羧酰胺
(202) N— (1H—吡唑并[3， 4-b]吡啶一4 —基)—l一 (2 —苯基乙基) 一4一哌啶羧酰胺
(203) N— (1H—吡唑并[3, 4-b]卩比啶一4一基)一l一 (3 —苯基丙基) 一4一哌啶羧酰胺
(204) N— (1H —吡咯并[2, 3-b]吡啶一4一基)—4— (l一氨基一l一甲基乙基)苯酰胺
優(yōu)選的化合物可以舉出化合物(80) 、 (109) 、 (110) 、 (112)、 (115) 、 (142) 、 (143) 、 (144) 、 (145) 、 (153) 、 (157)、 (163) 、 (165) 、 (166)以及(179)。進(jìn)一步優(yōu)選化合物(165)及 其鹽酸鹽，尤其優(yōu)選化合物(165)的1鹽酸鹽。
另外，作為本發(fā)明的具有Rho激酶抑制活性的化合物而使用的化合物， 可以是制藥上許可的酸加成鹽，該酸可以舉出鹽酸、氫溴酸、硫酸等的無 機(jī)酸；甲磺酸、富馬酸、馬來酸、杏仁酸、檸檬酸、酒石酸、水楊酸等的 有機(jī)酸。另外，具有羧基的化合物，也可以與鈉、鉀、鈣、鎂、鋁等的金 屬形成鹽，也可以與賴氮酸等氨基酸形成鹽。另外，它們的l水合物、2 水合物、1/2水合物、1/3水合物、1/4水合物、2/3水合物、3/2水合物、 6/5水合物等也包括在本發(fā)明中。
作為本發(fā)明的具有Rho激酶抑制活性的化合物而使用的化合物，也可 以作為藥物前體提供。這里所述的藥物前體，是指生物體內(nèi)可以被轉(zhuǎn)化為 上述具有Rho激酶抑制活性的化合物的化合物，例如通式(I)所示的化合 物分子內(nèi)的羧基(C00H)、羥基(0H)、氨基(朋2，也包括酰胺)、巰 基(SH)等的部位被改造的化合物(醫(yī)藥品的開發(fā)第7巻(分子設(shè)計(jì))廣 川書店)。
通式(I)所示的化合物，可以通過特開昭62 — 89679號、特開平3 — 218356號、特開平5—194401號、特開平6—41080號、W095/28387號以及 W098 /06433號等中記載的方法合成。另外，硫色滿類化合物可以通過 W001/68607號中記載的方法合成，異喹啉磺酰胺衍生物可以通過 US4678783等中記載的方法合成，乙烯苯衍生物可以通過特開2000—44513 號等中記載的方法合成。
在上述具有Rho激酶抑制活性的化合物中若存在光學(xué)異構(gòu)體、其消旋 體或順反異構(gòu)體體時(shí)，在本發(fā)明中它們都可以使用，它們的異構(gòu)體或通過 常法分離或可以利用各異構(gòu)體原料制備。
對于酸加成鹽、水合物以及藥物前體可以通過常法制備。
將具有Rho激酶抑制活性的化合物作為藥物使用、尤其是作為本發(fā)明 的視覺功能障礙改善劑或視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的延伸促進(jìn)劑或視神經(jīng)細(xì)胞的再生促進(jìn)劑使用時(shí)，作為一般的藥物制劑被調(diào)制。
例如，將上述具有Rho激酶抑制活性的化合物與制劑上許可的載體(賦
形劑、結(jié)合劑、崩解劑、矯臭劑、矯味劑、乳化劑、稀釋劑、助溶劑)混 合所得的藥物組合物，作為片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑、糖錠劑、 糖漿劑、液劑、乳劑、懸濁劑、注射劑(液劑、懸濁劑等)、栓劑、吸入 劑、透皮吸收劑、滴眼劑、眼軟膏、以及眼內(nèi)植入劑等的制劑，以適合口 服或非口服的形態(tài)進(jìn)行制劑化。
在作為固體制劑時(shí)，例如可以使用蔗糖、乳糖、纖維多糖、D —甘露
醇、multitol、葡聚糖、淀粉類、瓊脂、藻酸鹽類、甲殼質(zhì)類、殼聚糖類、 粘膠質(zhì)類、二苯乙炔膠、阿拉伯膠類、明膠類、膠原類、酪蛋白、白蛋白、 磷酸鈣、山梨醇、甘氨酸、羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯垸酮、羥丙基纖維 素、羥丙基甲基纖維素、甘油、聚乙二醇、碳酸氫鈉、硬脂酸鎂、滑石粉 等。另外，根據(jù)需要，片劑可以形成為實(shí)施通常包衣的片劑，例如糖衣片、 腸溶性包衣片、膜包衣片或者兩層片、多層片。
在制作半固體制劑時(shí)，可以使用動植物油脂(橄欖油、玉米油、蓖麻 油等)、礦物性油脂(凡士林、白色凡士林、固形石蠟等)、蠟類(JOJOBA 油、巴西棕櫚蠟、蜂蠟等)、半合成或全合成甘油脂肪酸酯(月桂酸、肉 豆蔻酸、棕櫚酸等)。作為這些市售品的例子，可以舉出 UITEPUZOL(DAINAMITUDONOBEL社制)、PHAMAZ0L (日本油脂社制等。
在制作液體制劑時(shí)，作為添加劑，例如可以舉出氯化鈉、葡萄糖、山 梨醇、甘油、橄欖油、丙二醇、乙醇等。尤其在制作注射劑時(shí)，作為無菌 水溶液，例如可以使用生理鹽水、等滲液，作為油性液，例如可以使用芝 麻油、大豆油。另外，根據(jù)需要可以合并使用適當(dāng)?shù)膽覞峄瘎├玺燃谆?纖維素鈉、非離子性表面活性劑；助溶劑例如苯甲酸芐酯、卞醇等。另外， 在制作滴眼劑時(shí)，使用水性液劑或者水溶液，尤其可以舉出無菌的注射用 水溶液。在該滴眼劑中可以適當(dāng)添加緩沖劑(優(yōu)選用于減輕刺激的硼酸鹽 緩沖液、醋酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、磷酸二氫鈉、磷酸氫鈉等)、等 滲化劑(氯化鈉、濃甘油、甘露醇、葡萄糖等)、助溶劑、防腐劑(氯代 丁醇、卞醇、脫氫醋酸鈉、潔而滅、硼酸等)、增粘劑(羥乙基纖維素、 羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇、聚乙二醇等)、螯合劑(依地酸鈉、檸檬酸鈉等)、PH調(diào)節(jié)劑(優(yōu)選用鹽酸、氫氧化鈉、磷酸、醋酸 等將pH調(diào)節(jié)至6 8)、芳香劑等各種添加劑。
在制作眼內(nèi)植入用制劑時(shí)，可以使用生物體分解性聚合物，例如聚乳 酸、乙醇酸、乳酸一乙醇酸共聚物、羥丙基纖維素等的生物體分解性聚合 物。
這些制劑的有效成分的量，為制劑的O. 1 100重量％，優(yōu)選1 50重 量％。給藥量根據(jù)患者的癥狀、體重、年齡等而變化，但是通過口服給藥 時(shí)，成人每日l 500mg左右，優(yōu)選分為一次或多次服用。
在作為滴眼劑局部給藥時(shí)，優(yōu)選一日數(shù)次、其中優(yōu)選1 6次、l次數(shù) 滴、更優(yōu)選l 3滴給予含有0.0001 約10w/V/。、優(yōu)選含有約0.001 約1 w/v。/。的具有Rho激酶抑制活性化合物的滴眼劑。另外，在作為眼內(nèi)植入劑 給藥時(shí)，優(yōu)選根據(jù)例如特開平1一216917號、特開平3 — 170418號(對應(yīng) EP430539以及US5164188號)以及特開平5 —17370號(對應(yīng):EP488401以 及US5501856)等的記載的方法將含有約O. 0001 約lmg、優(yōu)選約0.01 約 0. 5mg的具有Rho激酶抑制活性化合物的眼內(nèi)植入劑調(diào)制為短棒狀、針狀、 薄膜狀、片狀、微膠囊狀或微球狀，例如優(yōu)選植入玻璃體中。
實(shí)施例
以下舉出制劑處方例以及藥理作用具體說明本發(fā)明，但是本發(fā)明不受 這些限制。
另外，在以下制劑處方例以及試驗(yàn)例中，作為具有Rho激酶抑制活性 的化合物，使用(R) — ( + ) —N— (1H —吡咯并[2，3—b]吡啶一4一基) —4_ (1 —氨基乙基)苯酰胺，2鹽酸鹽*3/2水合物(以下稱為化合物l)、 R) — ( + ) —N— (1H—吡咯并[2,3 —b]吡啶一4 —基)一4— (1 —氨基 乙基)苯酰胺'l鹽酸鹽(以下也稱為化合物2) 、 4一[2— (2， 3， 4， 5， 6 一五氟苯基)丙稀?；鵠桂皮酸(以下也稱為化合物3)、利尿酸(以下也 稱為化合物4)或fasudil hydrochloride (以下也稱為化合物5)。
制劑處方例l:片劑
本發(fā)明化合物(化合物l) 10.0mg 乳糖 50.0mg
玉米淀粉 20.0mg結(jié)晶纖維素 29.7mg
聚乙烯吡咯垸酮K30 5.0mg
滑石粉 5. Omg
硬脂酸鎂 0.3mg
120. Omg
將本發(fā)明的化合物(化合物l)、乳糖、玉米淀粉以及結(jié)晶纖維素進(jìn) 行混合，用聚乙烯吡咯垸酮K30糊液進(jìn)行揉捏，通過20目篩造粒。50'C下 干燥2小時(shí)后，通過24目篩，混合滑石粉以及硬脂酸鎂，利用直徑7mm的模
具制作每片120mg的片劑。 制劑處方例2:膠囊
本發(fā)明化合物(化合物l) 10.0mg
乳糖 70. Omg
玉米淀粉 35. Omg
聚乙烯吡咯垸酮K30 2.0mg
滑石粉 2.7mg
硬脂酸鎂 0.3mg
120. Omg
將本發(fā)明的化合物(化合物l)、乳糖、玉米淀粉進(jìn)行混合，用聚 乙烯吡咯烷酮K30糊液進(jìn)行揉捏，通過20目篩造粒。5(TC下干燥2小時(shí)后， 通過24目篩，混合滑石粉以及硬脂酸鎂，充填在硬質(zhì)膠囊(4號)中制作
120mg的膠囊。
處方例3:滴眼劑
本發(fā)明化合物(化合物2) 0.05g 磷酸二氫鈉 0. lg
氯化鈉 0.85g
潔而滅 0.005g
滅菌精制水 總量100mL pH 7.0在滅菌精制水約80mL中溶解本發(fā)明化合物(化合物2)、磷酸二氫鈉、 氯化鈉以及潔而滅。用鹽酸和氫氧化鈉將pH值調(diào)節(jié)為7.0，加入滅菌精制 水，將總量調(diào)節(jié)為100mL，制作滴眼劑。
除了利用化合物2外，再利用化合物3、化合物4或化合物5通過同樣的 方式調(diào)制滴眼劑。
制劑處方例4:眼內(nèi)植入劑
本發(fā)明化合物(化合物2) 0. lg
乳酸一乙醇酸共聚物 (乳酸乙醇酸=75: 25，分子量5000) l.Og
對本發(fā)明化合物(化合物2)和乳酸一乙醇酸共聚物進(jìn)行機(jī)械混合后， 在約8(TC下熔融得到均勻混合物。冷卻固化后，在乳缽中粉碎混合物。將 粉碎物3mg充填在0.8mm的硅膠管中。在約80。C邊加熱充填粉碎物的硅膠 管，邊在兩端加壓，制備直徑0.8mm、長3mm的短棒狀眼內(nèi)植入劑。
除了利用化合物2外，再利用化合物3、化合物4或化合物5通過同樣的
方式調(diào)制眼內(nèi)植入劑。 制劑處方例5:片劑
本發(fā)明化合物(化合物2) 10mg 乳糖 80mg 淀粉 17mg 硬脂酸鎂 3mg 結(jié)晶纖維素 10mg
將以上成分作為l片份的材料，通過常法形成片劑。該片劑根據(jù)需要 可以利用通常使用的糖衣以及膜(例如乙基纖維素等)進(jìn)行包衣。
除了利用化合物2外，再利用化合物3、化合物4或化合物5通過同樣的
方式調(diào)制片劑。
制劑處方例6:膠囊
本發(fā)明化合物(化合物2) 10mg 甘露醇 75mg 淀粉 17mg 硬脂酸鎂 3mg
39將以上成分作為l個(gè)膠囊的材料混合均勻，通過常法進(jìn)行顆?；?，充 填在硬質(zhì)膠囊中。該充填的顆粒可以根據(jù)需要利用通常使用的膜(例如乙 基纖維素等)進(jìn)行包衣。
除了利用化合物2外，再利用化合物3、化合物4或化合物5通過同樣的 方式調(diào)制膠囊。
制劑處方例7:注射劑
本發(fā)明化合物(化合物2) 150mg 氯化鈉 900mg 1N氫氧化鈉 適量 注射用蒸餾水 總量100mL
通過常法混合以上成分作為注射劑，向玻璃體內(nèi)注入O. lmL。 除了利用化合物2外，再利用化合物3、化合物4或化合物5通過同樣的 方式調(diào)制注射劑。
以下通過實(shí)施例對本發(fā)明藥物的藥理作用進(jìn)行說明 實(shí)施例l (體外試驗(yàn)) (1)方法
從Wistar大鼠眼球分離視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，利用涂敷聚賴氨酸(50 yg/mL， Sigma)和merosin (2yg/mL, GIBCO)的48孔板，在5%0)2、 95% 空氣的環(huán)境下進(jìn)行37X:培養(yǎng)。使細(xì)胞數(shù)為大致5000細(xì)胞/孔。培養(yǎng)液利用 在神經(jīng)貝色爾培養(yǎng)液(GIBCO)中添加50ng/mL、 BDNF (human brain-derived neurotrophic factor, Sigma) 、 50ng/mL、 CNTF (rat cilliary neurotrophic factor, Sigma) 、 5 y M的forskolin (Sigma) 、 lmM谷氨 酰胺(Wako)以及27 Su卯lement (GIBCO; lmL/50mL培養(yǎng)液)的培養(yǎng)液(沒 有添加牛胎兒血清的培養(yǎng)液)、以及在所述沒有添加牛胎兒血清的培養(yǎng)液 中進(jìn)一步添加10%牛胎兒血清(以下也稱為FCS)的培養(yǎng)液(添加FCS培養(yǎng) 液)。利用各培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時(shí)后，將添加FSC培養(yǎng)液培養(yǎng)的組分為2組， 一組作為添加10iiM的化合物l的化合物l添加組、另一組作為沒有添加化 合物l的無化合物l添加組。另外，對于沒有添加FSC培養(yǎng)液培養(yǎng)的組，按 照同樣的方式分為化合物1添加組與無化合物1添加組。進(jìn)而在培養(yǎng)24小時(shí) 后，在倒立光學(xué)顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的神經(jīng)軸突延伸的程度。(2)結(jié)果
結(jié)果如圖l所示。圖1中A表示利用添加FSC培養(yǎng)液培養(yǎng)48小時(shí)后的視網(wǎng) 膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，B表示利用添加FSC培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時(shí)后、添加10uM的化 合物1進(jìn)而再培養(yǎng)24小時(shí)后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，C表示利用無FCS添加培 養(yǎng)液培養(yǎng)48小時(shí)后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，D表示利用無FCS添加培養(yǎng)液培養(yǎng) 24小時(shí)后、添加10uM的化合物l進(jìn)而再培養(yǎng)24小時(shí)后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì) 胞。
對于利用添加FSC培養(yǎng)液培養(yǎng)48小時(shí)后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，幾乎沒 有發(fā)現(xiàn)神經(jīng)突起的形成(A)。若將利用添加FCS培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時(shí)后、添 加10uM的化合物l進(jìn)而再培養(yǎng)24小時(shí)，則發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞以較快的 速度形成神經(jīng)突起(神經(jīng)軸突的延伸)、與無化合物l添加組相比，具有 顯著的使視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的神經(jīng)軸突延伸的作用(B)。
對于用無FCS添加培養(yǎng)液培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，從培養(yǎng)開始就發(fā) 現(xiàn)神經(jīng)節(jié)軸突的延伸(C)。另一方面，通過在無FCS添加培養(yǎng)液中添加化 合物l，可以發(fā)現(xiàn)神經(jīng)軸突的延伸變得顯著，從而確認(rèn)化合物l的神經(jīng)軸突 延伸促進(jìn)作用(D)。
從以上可以看出，化合物l具有視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的神經(jīng)軸突延伸作 用以及軸突延伸促進(jìn)作用。
另外，在本試驗(yàn)例中僅顯示了利用Wister大鼠時(shí)的試驗(yàn)結(jié)果，但是對 于SD大鼠也進(jìn)行了同樣的試驗(yàn)，結(jié)果也同樣確認(rèn)了化合物l的視網(wǎng)膜神經(jīng) 節(jié)細(xì)胞的軸突延伸作用以及軸突延伸促進(jìn)作用。
試驗(yàn)例2 (體內(nèi)試驗(yàn))
用戊巴比妥鈉(0.4mg/kg， i.p.)麻醉體重220 280g的SD大鼠并切 斷視神經(jīng)。另一方面，取出視神經(jīng)切斷大鼠的坐骨神經(jīng)約3 4cm，在已切 斷的視神經(jīng)端進(jìn)行自我移植。在切斷視神經(jīng)之前，在玻璃體內(nèi)注入5nL 溶解后濃度為120nmol/L的化合物l，在移植片周圍植入浸漬于化合物l 的濃度為10y mol/L的溶液中的明膠片(3mmX3mm; Spongel， Yamanouchi pharm.)(化合物l處理組)。在無處理組中，向玻璃體的注入以及在調(diào) 制明膠片時(shí)均使用生理鹽水來代替化合物l。在移植中要注意避免眼動脈 損傷，在移植后，利用眼底鏡確認(rèn)視網(wǎng)膜血管走向后，在溫度23X:士2、濕度55±10%環(huán)境下進(jìn)行飼養(yǎng)。使自由攝取食物和水。在移植手術(shù)6周后， 戊巴比妥鈉(0.4mg/kg， i.p.)麻醉下將移植片橫切，將浸漬在10y。GB (p —amidinophenyl p— (6—amidino — 2—indolyl) phenyl ether， Sigma， St.Louis， MO)中的明膠片植入移植片的切斷面上，將視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 進(jìn)行逆行性標(biāo)記。48小時(shí)后，摘出大鼠的眼球，根據(jù)規(guī)定的方法制作視網(wǎng) 膜延伸標(biāo)本。由熒光顯微鏡將視網(wǎng)膜延伸標(biāo)本的在顯微鏡下的觀察影像制 作為直接計(jì)算機(jī)圖像，利用圖像解析軟件(MacSCOP， MITANI CO.)對逆 行標(biāo)記的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。將所得的逆行標(biāo)記的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié) 細(xì)胞的數(shù)目作為視神經(jīng)再生細(xì)胞的數(shù)目。另外，切斷沒有實(shí)施移植的大鼠 視神經(jīng)，通過同樣的方式植入浸漬在10XGB中的明膠片，將48小時(shí)后的視網(wǎng)膜延伸標(biāo)本的標(biāo)記視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)作為視神經(jīng)細(xì)胞數(shù)，作為對照。 由無處理組與化合物l處理組的視神經(jīng)再生細(xì)胞數(shù)計(jì)算相對于對照的 視神經(jīng)細(xì)胞數(shù)的比率(％)。 (2)結(jié)果結(jié)果如圖2所示。視神經(jīng)再生細(xì)胞數(shù)在無處理組中約為對照組的5%。 另一方面，化合物1處理組的視神經(jīng)再生細(xì)胞數(shù)約為對照組的12%，大致為 無處理組的2. 4倍。由以上可知，化合物l具有促進(jìn)視神經(jīng)細(xì)胞的再生作用。實(shí)施例3 (體外試驗(yàn)) (1)方法從Wistar大鼠眼球分離視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，利用涂敷聚賴氨酸(50 Ug/mL， Sigma)和merosin (2ug/mL， GIBCO)的48孔板，在5線、95% 空氣的環(huán)境下進(jìn)行37"C培養(yǎng)。使細(xì)胞數(shù)為大致5000細(xì)胞/孔。培養(yǎng)液利用 在神經(jīng)貝色爾培養(yǎng)液(GIBCO)中添加50ng/mL、 BDNF (human brain — derived neurotrophic factor, Sigma) 、 50ng/mL、 CNTF (rat cilliaxy neurotrophic factor, Sigma) 、 5 y M的forskolin (Sigma) 、 lmM谷氮 酰胺(Wako)以及27 Su卯lement (GIBC0; lmL/50mL培養(yǎng)液)的培養(yǎng)液(沒 有添加牛胎兒血清的培養(yǎng)液)。利用在所述沒有添加FCS的培養(yǎng)液中進(jìn)一 步添加105^FCS的培養(yǎng)液(含有Rho活化劑的添加FCS培養(yǎng)液)以及沒有添 加FCS培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時(shí)后，將沒有添加FSC培養(yǎng)液培養(yǎng)的組分為2組，一組作為添加IO u M的化合物2的化合物2添加組，另一組作為無化合物2添加 組。進(jìn)而在培養(yǎng)24小時(shí)后，在倒立光學(xué)顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的 神經(jīng)軸突延伸的程度。另外在無FCS添加組中添加1 u M的作為Rho活化劑的 lysophosphatidic acid (LPA),對基于Rho活化的軸突萎縮進(jìn)行探討。 (2)結(jié)果
結(jié)果如圖3所示。圖3中A表示利用添加FSC培養(yǎng)液培養(yǎng)48小時(shí)后的視網(wǎng) 膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，B表示利用無FSC添加培養(yǎng)液培養(yǎng)48小時(shí)后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié) 細(xì)胞，C表示利用無FCS添加培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時(shí)后添加10 ii M的化合物2進(jìn)而 再培養(yǎng)24小時(shí)后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，D表示利用無FCS添加培養(yǎng)液培養(yǎng)44 小時(shí)后、添加l P M的LPA進(jìn)而再培養(yǎng)4小時(shí)后的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。
對于在培養(yǎng)初期利用含有Rho活化劑的添加FCS培養(yǎng)液培養(yǎng)48小時(shí)后 的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，幾乎沒有發(fā)現(xiàn)神經(jīng)突起的形成(A)。在培養(yǎng)開始 時(shí)利用無FCS添加培養(yǎng)液對視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì) 胞中發(fā)現(xiàn)短的神經(jīng)軸突的延伸(B)。若利用添加FCS培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時(shí)后、 添加IO y M的化合物2進(jìn)而再培養(yǎng)24小時(shí)，則發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞以較快 的速度形成神經(jīng)突起(神經(jīng)軸突的延伸)、與無化合物2添加組相比，具 有顯著的使視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的神經(jīng)軸突延伸的作用(C)。對于用無FCS 添加培養(yǎng)液但添加l P M的LPA的組中確認(rèn)了基于Rho活化的軸突萎縮效果 (D)。
從以上可以看出，化合物2具有視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的神經(jīng)軸突延伸作 用以及軸突延伸促進(jìn)作用。這些作用由于Rho的活化而受到抑制。 實(shí)施例4 (體內(nèi)試驗(yàn)) (1)方法
用戊巴比妥鈉(0.4mg/kg， i.p.)麻醉體重220 280g的SD大鼠并切 斷視神經(jīng)。另一方面，取出視神經(jīng)切斷大鼠的坐骨神經(jīng)約3 4cm，在已切 斷的視神經(jīng)端進(jìn)行自我移植。在剛要切斷視神經(jīng)之前，在玻璃體內(nèi)注入5 uL溶解后濃度為120nM的化合物2，在移植片周圍植入浸漬于化合物2的 濃度為10uM的溶液中的明膠片(3mmX3mm; Spongel， Yamanouchi pharm.)
(化合物2處理組—1)。在化合物2處理組一2中，在玻璃體內(nèi)注入5uL 溶解后濃度為1.2yM的化合物2，在移植片的周圍也使用100uM的化合物2。在對照組中使用生理鹽水來代替化合物2。在移植中要注意避免眼動脈 損傷，在移植后，利用眼底鏡確認(rèn)視網(wǎng)膜血管走向后，在溫度23。C土2、 濕度55±10%環(huán)境下進(jìn)行伺養(yǎng)。使自由攝取食物和水。在移植手術(shù)6周后， 戊巴比妥鈉(0.4mg/kg， i.p.)麻醉下將移植片橫切，將4-Di — 10ASP[4 —(4一didecylaminostyryl) —N—methyl—propidium iodide, Sigma， St丄ouis， M0)結(jié)晶2mg植入移植片的切斷面上，將視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn) 行逆行性標(biāo)記。3日時(shí)后，摘出大鼠的眼球，根據(jù)規(guī)定的方法制作視網(wǎng)膜 延伸標(biāo)本。由熒光顯微鏡將視網(wǎng)膜延伸標(biāo)本的在顯微鏡下的觀察影像制作 為直接計(jì)算機(jī)圖像，利用圖像解析軟件(MacSC0P， MITANI CO.)對逆行 標(biāo)記的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)(圖4)。將所得的逆行標(biāo)記的視網(wǎng)膜 神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的數(shù)目作為視神經(jīng)再生細(xì)胞的數(shù)目。另外，切斷沒有實(shí)施移植 的大鼠視神經(jīng)，通過同樣的方式植入4-Di — 10ASP結(jié)晶約2mg，將制作的視 網(wǎng)膜延伸標(biāo)本的標(biāo)記視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)作為視神經(jīng)細(xì)胞數(shù)，作為標(biāo)準(zhǔn) 組。
由對照組與化合物2處理組一1以及化合物2處理組一2的視神經(jīng)再生
細(xì)胞數(shù)計(jì)算相對于對照的視神經(jīng)細(xì)胞數(shù)的比率(％)。 (2)結(jié)果
視神經(jīng)再生細(xì)胞數(shù)在無對照組中約為標(biāo)準(zhǔn)組的7%。另一方面，化合物 2處理組一1的視神經(jīng)再生細(xì)胞數(shù)約為標(biāo)準(zhǔn)組的16%，化合物2處理組一2的 視神經(jīng)再生細(xì)胞數(shù)約為標(biāo)準(zhǔn)組的28%。與對照組相比分別是2.3倍、約4倍 (圖5)。
由以上可知，化合物2具有促進(jìn)視神經(jīng)細(xì)胞的再生作用。 實(shí)施例5 (體外試驗(yàn)) (1)方法
通過與實(shí)施例1和3相同的方式，從生后6 8周齡的Wistar大鼠(雌性 混合，SLC)的眼球分離視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)(細(xì)胞數(shù)大致2000 細(xì)胞/孔)。另外，在培養(yǎng)液中添加試驗(yàn)化合物(化合物3 5)使最終濃 度為10uM，分別設(shè)為化合物3添加組、化合物4添加組、化合物5添加組。 以不添加試驗(yàn)化合物作為對照組。作為化合物3 (4—[2— (2，3,4,5,6 — 五氟苯基)丙稀?；鵠桂皮酸)使用根據(jù)特開2000—44513的實(shí)施例8記載的方法合成的物質(zhì)?；衔? (利尿酸)使用Sigma制的物質(zhì)，化合物5 (fasudil hydrochloride)使用市售的fasudil hydrochloride7jC合物注 射液"ERIL注30mg"(旭化成株式會社制造出售)。
LIVE/DEADRViability/Cytotoxicity Kit (L—3224)利用(Molecular probes)，利用基于Calcein AM的生物細(xì)胞的熒光特性將Calcein AM取入 視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中，在熒光顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的神經(jīng)軸突 延伸的程度。由熒光顯微鏡將視網(wǎng)膜延伸標(biāo)本的在顯微鏡下的觀察影像制 作為直接計(jì)算機(jī)圖像，利用圖像解析軟件(MacSC0P， MITANI CO.)進(jìn)行 測定。將具有100nm以上長度軸突的細(xì)胞作為long neurites細(xì)胞，具有 21 n m 99 u m長度軸突的細(xì)胞作為middle neurites細(xì)胞，具有20 u m以下 長度軸突的細(xì)胞作為shortneurites細(xì)胞(無軸突延伸)。分別計(jì)算相對 于整個(gè)細(xì)胞數(shù)的long neurites細(xì)胞以及middle neurites細(xì)胞的比例 (%)。
(2)結(jié)果
利用圖像解析軟件測定視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的長度的結(jié)果表示在 圖6中。對照組(N=3)的long neurites細(xì)胞以及middle neurites細(xì)胞 分別為7%和12%。與此相對，化合物3添加組(N=3)的longneurites細(xì)胞 以及middle neurites細(xì)胞分別為22^和23。/。，化合物4添加組(N=3)的long neurites細(xì)胞以及middle neurites細(xì)胞分別為ll%和45%，化合物5添加 組(N=3)的long neurites細(xì)胞以及middle neurites細(xì)胞分別為15X和 53%。與對照組相比，試驗(yàn)化合物添加組的3組中，均確認(rèn)了longneurites 細(xì)胞以及middle neurites細(xì)胞的各自增加。在化合物3添加組中的long neurites細(xì)胞、化合物4以及化合物5添加組中的middle neurites細(xì)胞， 與對照組相比均發(fā)現(xiàn)有顯著的軸突延伸促進(jìn)作用(P〈0.05)。
從以上結(jié)果可以看出，對于從視網(wǎng)膜純化分離并培養(yǎng)的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞， 具有Rho激酶抑制活性的化合物提示有利于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突的再 生。
參考例l (R) — ( + ) —N— (1H—吡咯并[2，3 —b]吡啶一4一基) 一4一 (l一氨基乙基)苯酰胺 2鹽酸鹽 3/2水合物的制備
(a)在(R) —4一 (1 —芐氧基羰基氨基乙基)苯甲酸1.2g的二氯甲
45烷15mL熔液中加入亞硫酰氯0.9mL、 二甲基甲酰胺l滴，室溫下攪拌2小時(shí)。 反應(yīng)后，減壓蒸餾除去溶劑，得到(R) —4一 (l一芐氧基羰基氨基乙基) 苯甲酰氯的結(jié)晶。然后將該結(jié)晶溶解在10mL的乙腈中，在4一氨基一1H— 吡咯并[2，3 —b]吡啶240mg與二異丙基乙胺520mg的乙腈10mL溶液中滴加 后，室溫下攪拌8小時(shí)。濾取析出的結(jié)晶，干燥后，溶解在7mL甲醇中，加 入甲醇鈉60mg，室溫下攪拌30分鐘。反應(yīng)后，在加壓濃縮的殘?jiān)屑尤胨?用乙酸乙酯萃取。將干燥減壓蒸餾除去溶劑的結(jié)晶用乙酸乙酯清洗后，得 到(R) —N— (1H —吡咯并[2，3 — b]吡啶一4一基)一4一 (l一芐氧基羰 基氨基乙基)苯酰胺330mg。
PMR (DMS0-d6/TMS) 5: 1.33-1.40 (3H， m)， 4.72-4.78 (1H, m)， 4.98—5.04 (2H， m)， 6.78—6.82 (1H， m)， 7.32—8.16 (13H， m)
(b)在(R) —N— (1H—吡咯并[2，3 —b]吡啶一4一基)一4— (1 一芐氧基羰基氨基乙基)苯酰胺200mg、 15X鹽酸一甲醇lmL以及甲醇6mL 的混合物中加入10。/。氫氧化鈀碳80mg，在氫氣流下、4(TC攪拌1小時(shí)。反應(yīng)
后，蒸餾除去溶劑，用甲醇一乙醚對減壓濃縮所得結(jié)晶進(jìn)行重結(jié)晶，得到 熔點(diǎn)286。C (分解)的(R) — ( + ) —N— (1H—吡咯并[2，3—b]吡啶一4 —基)一4一 (1—氨基乙基)苯酰胺 2鹽酸鹽 3/2水合物120mg。 [a]。二+6.1。(甲醇，c二l)
PMR (DMS0-cUTMS)S: 1.54 (3H， d， J二6.8Hz)， 4.50-4.54 (1H， m)， 7.11 (1H， br)， 7.55 (1H， br)， 7.70 (2H， d， J=8.3Hz), 8.02—8.06 (3H, m)， 8.33 (1H， br)， 8.62 (3H， br) ， 10.99 (1H, br)
參考例2 (R) — ( + ) —N— (1H —吡咯并[2,3 —b]吡啶一4一基) 一4一 (l一氨基乙基)苯酰胺 l鹽酸鹽的制備
(a)將參考例l所得的(R) — ( + ) —N— (1H —吡咯并[2,3 — b] 吡啶—4一基)一4一 (l一氨基乙基)苯酰胺 2鹽酸鹽 3/2水合物8. 5g 溶解在50mL水中，冰冷下邊攪拌邊滴加lN—Na0H水溶液。濾取析出的結(jié)晶， 干燥，得到游離的基體6.2g。 mp. 210-212。C
EA: calcd. for C16H16N40: C;68.55， H; 5.75， N; 19.99 found C;68.58， H; 5.70， N; 19.81(3H， d， J=8.0Hz)， 1.88 (2H， bs)， 4.09 (1H， m)， 6.80 (1H, s), 7.33 (1H， s)， 7.53 (2H， d， J二7.8Hz)， 7.70 (1H， d， J=7.8Hz)， 7.92 (2H， d， J=7.8Hz)， 8.14 (1H， d， J=7.8Hz)， 10.26 (IH， bs)， 11.57 (1H， bs) [a]D= + 14.7Q (甲醇，c二0.5)(b)在上述(a)所得的基體2.8g中加入5mL乙醇，邊加熱至60'C邊 加入lN鹽酸10mL。溶解后，趁熱過濾，室溫下攪拌2小時(shí)，冰一食鹽浴中 攪拌1.5小時(shí)。濾取析出的結(jié)晶，干燥(溫風(fēng)60°C， IO小時(shí))后，加入 H20—EtOH (2/1) (20mL)，回流下溶解，然后趁熱過濾，室溫下攪拌2 小時(shí)，冰—食鹽浴中攪拌1.5小時(shí)。之后濾取結(jié)晶，干燥(溫風(fēng)6(TC， IO小時(shí))后，得到(R) — ( + ) 一N— (1H—吡咯并[2,3 — b]吡啶一4一 基)一4一 (l一氨基乙基)苯酰胺* l鹽酸鹽2.4g。 mp. 298。C (分解)EA: calcd. for C16H16N40'1HC1 C;60.66， H; 5.41， N; 17.69 found C; 60.56， H; 5.32， N; 17.62'H-麗R(DMS0-de)5: 1.58 (3H， d， J=8. 0Hz), 4.51 (1H， m), 6.80 (1H， s)， 7.35 (1H， s)， 7.70 (3H， m)， 8.05 (2H， d， J=7.8Hz)， 8.15 (1H， d， J=7.8Hz), 8.68 (3H, bs)， 10,41 (1H， bs)， 11.60 (1H， bs) [a]D=+8.2° (甲醇，c二l.O)根據(jù)化合物1至化合物5具有視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突延伸作用以及視 神經(jīng)細(xì)胞再生作用，可以認(rèn)為具有Rho激酶抑制活性的化合物能夠改善由 于視網(wǎng)膜神經(jīng)以及視神經(jīng)的損傷、變性等引起的視覺功能障礙。因此，可 以認(rèn)為具有Rho激酶抑制活性的化合物，能夠有效改善伴隨基于視網(wǎng)膜的 炎癥等的損傷(視網(wǎng)膜神經(jīng)疾病、視網(wǎng)膜血管閉塞癥、視網(wǎng)膜靜脈周炎、 Eales病、缺血性眼征候群、視網(wǎng)膜小動脈瘤、高血壓以及腎臟疾病及血 液疾病引起的視網(wǎng)膜癥、糖尿病性視網(wǎng)膜癥、視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良、黃斑營養(yǎng) 不良、視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜癥、黃斑變性、黃斑水腫、視網(wǎng)膜色素上皮剝離、變 性視網(wǎng)膜分離癥、視網(wǎng)膜胚細(xì)胞瘤、視網(wǎng)膜色素上皮瘤等)等的視覺功能 障礙，進(jìn)而改善伴隨基于視神經(jīng)的變性、損傷(視神經(jīng)炎、視神經(jīng)乳頭毛 細(xì)血管瘤、缺血性視神經(jīng)癥、視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層缺損、視網(wǎng)膜性視神經(jīng)萎47縮、視神經(jīng)斷裂、外傷性視神經(jīng)癥、缺血乳頭、視神經(jīng)乳頭缺損、視神經(jīng) 低形成、中毒性視神經(jīng)萎縮等)的視覺功能障礙，以及改善基于眼壓亢進(jìn) (青光眼等)的視神經(jīng)萎縮、基于變性等的視覺功能障礙，進(jìn)而有效維持 以視網(wǎng)膜移植時(shí)的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞為代表的視神經(jīng)細(xì)胞的生長與功能、 視神經(jīng)移植時(shí)的視神經(jīng)再生。
本申請是以日本申請的特愿2001 — 113329以及特愿2001 —308010為 基礎(chǔ)，它們的內(nèi)容全部包括在本說明書中。
權(quán)利要求
1. 一種視覺功能障礙改善劑，含有具有Rho激酶抑制活性的化合物， 并改善由于視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞或視神經(jīng)的損傷或變性引起的視覺功能障礙， 所述具有Rho激酶抑制活性的化合物為選自硫色滿類化合物、異喹啉磺酰胺衍生物、乙烯苯衍生物以及利尿酸的化合物或者其制藥上許可的鹽。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的視覺功能障礙改善劑，視覺功能障礙的改善 是基于促進(jìn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的延伸。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的視覺功能障礙改善劑，視覺功能障礙的改善 是基于再生視神經(jīng)細(xì)胞。
4. 一種視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的延伸促進(jìn)劑，作為有效成分含有具有 Rho激酶抑制活性的化合物，所述具有Rho激酶抑制活性的化合物為選自硫 色滿類化合物、異喹啉磺酰胺衍生物、乙烯苯衍生物以及利尿酸的化合物 或者其制藥上許可的鹽。
5. —種視神經(jīng)細(xì)胞的再生促進(jìn)劑，作為有效成分含有具有Rho激酶抑 制活性的化合物，所述具有Rho激酶抑制活性的化合物為選自硫色滿類化 合物、異喹啉磺酰胺衍生物、乙烯苯衍生物以及利尿酸的化合物或者其制 藥上許可的鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供一種具有Rho激酶抑制活性的化合物，尤其是提供以為(R)-(+)-N-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-4-基)-4-(1-氨基乙基)苯酰胺有效成分的視覺功能改善劑，該視覺功能改善劑具有視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的軸突延伸促進(jìn)作用以及視神經(jīng)細(xì)胞的再生作用，可以有效治療伴隨基于視網(wǎng)膜或視神經(jīng)損傷或缺損、變性等的各種眼睛疾病的視覺功能障礙。
文檔編號A61P27/02GK101310771SQ20081013571
公開日2008年11月26日 申請日期2002年4月11日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月11日
發(fā)明者上畑雅義, 吉田征夫, 高山美子 申請人:千壽制藥株式會社;田邊三菱制藥株式會社