專利名稱：馬錢子生物堿囊泡及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及馬錢子生物堿囊泡及其制備方法。
背景技術：
脂質體是由磷脂雙分子層組成的單室或多室囊泡，是研究得最多靶向藥 物載體，人多用于抗腫瘤藥及抗利什曼病的銻制劑，可顯著降低藥物毒性而保 持更長時間的活性。但脂質體的性能存在缺點①由于其化學不穩(wěn)定性，制備 及貯藏困難，藥物包裹率不高且易發(fā)生滲漏而失去靶向性。②所用原料磷脂難 以純化，且易氧化變質而降低膜流動性導致被包裹藥物的滲漏。③純化的磷脂 價高。因此，人們廣泛地研究了化學組成確定、性質較穩(wěn)定、能構成脂質體樣 囊泡的載體。許多合成的表面活性劑都能形成囊泡，但其中非離子型的毒性較小， 宜用作藥物載體，非離子表面活性劑在溶液中能自組裝形成囊泡。
馬錢子為傳統(tǒng)中藥，具有通絡止痛、散結消腫功效，用于風濕頑痹，麻木 癱瘓，跌打損傷，癰疽腫痛，小兒麻痹后遺癥，類風濕性關節(jié)痛等癥，臨床療 效顯著。藥理研究證明，馬錢子中生物堿為有效成分，但治療窗極窄，治療量 和中毒量接近，臨床應用受極大限制。
已有馬錢子堿脂質體、納米馬錢子堿脂質體專利報道，但傳統(tǒng)脂質體由 于固有缺點，成本高，不穩(wěn)定。

發(fā)明內容
本發(fā)明目的在T提供馬錢子生物堿囊泡。 本發(fā)明另一目的在于提供馬錢子生物堿囊泡制備方法。 本發(fā)明通過以下技術方案予以實施。 本發(fā)明馬錢子生物堿囊泡，包括下列重量份組分馬錢子生物堿1-40 非
離子表面活性劑5-150穩(wěn)定劑0-100修飾脂質0-100。 以上非離子表面活性劑與穩(wěn)定劑重量比為1: 1-180: 1。
馬錢子生物堿可以為馬錢子總生物堿，馬錢子總生物堿中所含的任一種生物 堿，馬錢子總生物堿中任一種生物堿或一種以上的生物堿混和物。
本發(fā)明馬錢于生物堿可采取以下提取方法 馬錢子粉碎成細粉，加氨水潤濕，氯仿提取，提取液加鹽酸酸化，收集沉 淀，根據(jù)需要，沉淀可繼續(xù)純化；提取液繼續(xù)加鹽酸提取2-IO次，加氯仿及氨堿化至pH8-12，充分振搖，氯仿液蒸干，和已收集沉淀合并，也可不合并，根據(jù) 需要，可繼續(xù)進行純化，即得。
馬錢子生物堿還可采取以下提取方法
馬錢子粉碎成細粉，濃度40%以上乙醇提取l-4次，每次1-3h，乙醇中可加 入鹽酸或硫酸調節(jié)pH1-6，減壓回收乙醇，干燥，得提取物，提取物可繼續(xù)上離 子交換樹脂或大孔交換樹脂進行洗脫分離，得馬錢子生物堿一種成分或一種以 上混和物。
本發(fā)明馬錢子生物堿囊泡，其特征在于非離子表面活性劑可為聚甘油烷基 醚、葡萄糖烷基醚、冠醚、聚氧乙烯垸基醚、脂肪醇聚氧乙烯醚(AEO)、脂肪 酸聚氧乙烯酯、脂肪胺聚氧乙烯醚、烷基醇酰胺聚氧乙烷醚、嵌段聚氧乙烯-聚 氧丙烯醚、垸基聚葡萄糖苷、乙二醇單硬脂酸酯或雙硬脂酸酯、聚乙二醇雙硬 脂酸酯、丙二醇單硬脂酸酯、丙二醇藻酸酯、甘油單硬脂酸酯和雙硬脂酸酯、 山梨醇脂肪酸酯類、失水山梨醇單月桂酸酯(Span-20)、失水山梨醇單棕櫚酸酯 (Span-40)、失水山梨醇單硬脂酸酯(Span-60)、失水山梨醇單油酸酯(Span-80)、 蔗糖脂肪酸酯中一種成分或一種以上任意組合形式，穩(wěn)定劑可為膽固醇、磷酸 二鯨蠟脂、磷脂酰胺一種或-一種以上，修飾脂質可為聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二 醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚氧乙烯脂肪酸酯、N-十六酰-L-高半胱胺酸、聚 乙二醇一聚己內酯，聚乙二醇一聚乙交酯丙交酯、聚乙二醇一聚十六烷基氰基 丙烯酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪酸醚、聚氧乙烯甲基蓖麻油醚 一種或一種以上。
本發(fā)明馬錢子生物堿囊泡可采取以下制備方法
取非離子表面活性劑、穩(wěn)定劑、修飾脂質、馬錢子生物堿溶于適量有機溶劑， 加熱溶解，溶液備用；另取磷酸鹽緩沖液，在30-7(TC恒溫并攪拌下，勻速滴加 上述有機溶劑溶液，加完后繼續(xù)攪拌，至有機溶劑揮盡，加磷酸鹽緩沖液至全 量，超聲或過高壓乳勻機1-3次，微孔濾膜過濾，灌裝或冷凍干燥，即得。
本發(fā)明馬錢子生物堿囊泡制備方法也可以為取非離子表面活性劑、穩(wěn)定劑、 修飾脂質、馬錢子生物堿溶于適量有機溶劑，在旋轉蒸發(fā)儀上，30-8(TC真空蒸 發(fā)至干燥薄膜，然后加入磷酸鹽緩沖液，超聲處理，即得。
本發(fā)明中磷酸鹽緩沖液也可為硫酸銨緩沖液、三羥甲基氨基緩沖液或其它緩 沖液。
將非離子表面活性劑、穩(wěn)定劑、修飾脂質溶于適量有機溶劑中，減壓蒸發(fā)，制 備類脂膜；加入的預熱的硫酸銨緩沖液，旋轉蒸發(fā),至30-7(TC水浴中水化0. 5_2 h， 超聲5-30 min，得空白囊泡。將空白囊泡依次通過不同孔徑的微孔濾膜，進行整
5粒。整粒后空白囊泡裝入透析袋中，置于0.9懇aCl溶液中透析12-48 h，每隔一定 時間更換透析液。取此空白囊泡，加入馬錢子生物堿，30-7(TC水浴孵化5-30min， 微孔濾膜過濾，即得。
本發(fā)明馬錢子生物堿囊泡制備方法還可以為將非離子表面活性劑、穩(wěn)定劑、 修飾脂質溶于適量有機溶劑中，減壓蒸發(fā)，制備類脂膜；加入枸櫞酸緩沖液或乳 酸緩沖液，30-7(TC水浴中水化0.5-2 h，得空白囊泡；將所得空白囊泡用不同孔 徑的微孔濾膜過濾后，加入馬錢子生物堿，并加緩沖液、調外水相值至中性， 30-70。C水浴孵化5-30 min，微孔濾膜過濾，即得。
本發(fā)明有機溶劑可為乙醚、乙醇、氯仿、二氯甲垸、正戊醇、異戊醇，非離 子表面活性劑、穩(wěn)定劑、修飾脂質均可選用其它已存在的同類物代替。
本發(fā)明采用非離子表面活性劑作為囊材，成本低，易工業(yè)化生產(chǎn)，產(chǎn)品較脂 質體穩(wěn)定具有較大推廣價值。
具體實施例方式
本發(fā)明通過實施例作進一步說明，但不局限于本發(fā)明。
儀器RE-52A型旋轉蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；高壓乳勻機(美國)； 超聲波儀(上海)
實施例1
取司盤20 600mg、膽固醇100mg、馬錢子堿10mg溶于200ml乙醚，超聲溶 解，溶液備用；另取磷酸鹽緩沖液(pH7.0) 500ml，在4(TC恒溫并攪拌下，勻 速滴加上述乙醚溶液，加完后繼續(xù)攪拌，至乙醚揮盡，加磷酸鹽緩沖液至800ml， 過高壓乳勻機1-3次，0.22um微孔膜過濾，即得。
實施例2
取司盤60 1500mg、膽固醇1000mg、 士的寧400mg溶于1500ml氯仿，加熱 溶解，溶液備用；另取磷酸鹽緩沖液(pH7.0)，在60。C恒溫并攪拌下，勻速滴 加上述氯仿溶液，加完后繼續(xù)攪拌，至氯仿?lián)]盡，加磷酸鹽緩沖液至3000ml， 超聲處理，0.22um過濾，即得。
實施例3
取司盤40 50mg、膽固醇50mg、聚乙二醇-聚乳酸1000mg、馬錢子總生物堿 11mg溶于1000ml乙醇，在旋轉蒸發(fā)儀上，3(TC真空蒸發(fā)至干燥薄膜，然后加入 磷酸鹽緩沖液(pH7.0) 1200ml,超聲處理15rain， 0.22ym微孔膜過濾，即得。
實施例4
取司盤20 300mg、膽固醇150mg溶于300ml乙醚，振搖溶解，溶液備用；另 取馬錢子堿12 mg溶于磷酸鹽緩沖液(pH7.0)，在35'C恒溫并攪拌下，勻速滴加上述乙醚溶液，加完后繼續(xù)攪拌，至乙醚揮盡，加磷酸鹽緩沖液(pH7.0)至 600ml，超聲處理10min， 0.22pm微孔膜，即得。 實施例5
取司盤40 600mg、磷酸二鯨蠟脂100mg、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 200mg溶于800ml乙醚，溶解，溶液備用；另取馬錢子堿100mg溶于磷酸鹽緩沖 液(pH7.0)，在5(TC恒溫并攪拌下，勻速滴加上述乙醚溶液，加完后繼續(xù)攪拌， 至乙醚揮盡，加磷酸鹽緩沖液(pH7.CO至1500ml，超聲處理5min， 0. 22 u m微 孔膜過濾，即得。
實施例6
將脂肪醇聚氧乙烯醚900mg、磷脂酰胺900mg溶于乙醇中，減壓蒸發(fā)，制備類脂 膜，加入的預熱至50。C的硫酸銨緩沖液(200 mmol/L) 1000ml，旋轉蒸發(fā)，至6(TC 水浴中水化l h，超聲10 min，得空白囊泡；將空白囊泡依次通過O. 8 p m， 0. 45 lim和O. 22um的微孔濾膜，進行整粒。整粒后空白囊泡裝入透析袋中，置于 0. 9。/。NaCl溶液中透析24h，每隔8h更換透析液。取此空白囊泡，加入300mg馬錢子 堿，6(TC水浴孵化10 min，即得。
實施例7
將聚氧乙烯脂肪酸脂1300mg、膽固醇500mg溶于乙醇中，減壓蒸發(fā),制備類脂 膜，加入的預熱至6(TC的硫酸銨緩沖液(300咖ol/L) 1000ml，旋轉蒸發(fā)，至60。C 水浴中水化0.5h，超聲15min，得空白囊泡；將空白囊泡依次通過O. 8um， 0. 45 u ni和O. 22 p m的微孔濾膜，進行整粒。整粒后空白囊泡裝入透析袋中，置于 0. 9。/。NaCl溶液中透析24h，每隔8h更換透析液。取此空白囊泡，加入190mg馬錢子 堿，60。C水浴孵化5 min,即得。
實施例8
將垸基聚葡萄糖苷300mg、磷脂酰胺200mg溶于氯仿中，減壓蒸發(fā)，制備類脂膜， 加入的預熱至45。C的硫酸銨緩沖液(350腿ol/L) 800ml，旋轉蒸發(fā)，至45。C水浴 中水化l h，超聲8min，得空白囊泡；將空白囊泡依次通過O. 8um， 0. 45 u m和 0. 22"m的微孔濾膜，進行整粒。整粒后空白囊泡裝入透析袋中，置于0.9。/。NaCl 溶液中透析12h，每隔4h更換透析液。取此空白囊泡，加入70mg馬錢子堿，4(TC水 浴孵化20 min，即得。
實施例9
將司盤20 800mg、磷脂酰胺300mg溶于氯仿中，減壓蒸發(fā)，制備類脂膜，加入的 預熱至50。C的硫酸銨緩沖液(250 mmol/L) 1000ml，旋轉蒸發(fā)，至50。C水浴中水 化O. 5h,超聲8min，得空白囊泡；將空白囊泡依次通過O. 8 u m, 0. 45um和0. 22"m的微孔濾膜，進行整粒。整粒后空白囊泡裝入透析袋中，置于O. 9。/。NaCl溶液中 透析12h，每隔4h更換透析液。取此空白囊泡，加入100mg馬錢子堿，4(TC水浴孵化 20 min，即得。 實施例10
將司盤40 500mg、膽固醇100mg、磷脂酰胺200mg溶于氯仿中，減壓蒸發(fā)，制備 類脂膜，加入的預熱至4(TC的硫酸銨緩沖液(100 mmol/L) 600ml,旋轉蒸發(fā)，至 4(TC水浴中水化lh，超聲5min，得空白囊泡；將空白囊泡依次通過O. 8 u m， 0. 45 um和O. 22um的微孔濾膜,進行整粒。整粒后空白囊泡裝入透析袋中，置于 0. 9G/。NaCl溶液中透析24h，每隔8h更換透析液。取此空白囊泡，加入10mg士的寧生 物堿，35。C水浴孵化30 min，即得。
實施例11
將司盤20 700mg、膽固醇300mg溶于乙醇中，減壓蒸發(fā)，制備類脂膜，加入的預 熱至55。C的硫酸銨緩沖液(400 mmol/L) 500ml，旋轉蒸發(fā)，至55。C水浴中水化2 h， 超聲15min，得空白囊泡；將空白囊泡依次通過O. 8pm， 0. 45 u m和O. 22 u m的 微孔濾膜,進行整粒。整粒后空白囊泡裝入透析袋中，置于O. 9。認aCl溶液中透析 24h，每隔8h更換透析液。取此空白囊泡，加入3mg士的寧生物堿和3mg馬錢子 堿，65。C水浴孵化15 min，即得。
實施例12
將司盤20 300mg、聚乙二醇一聚乙交酯丙交酯300mg、磷脂酰胺100mg、膽固 醇100mg溶于乙醚中，減壓蒸發(fā)，制備類脂膜，加入的預熱至45。C的枸櫞酸緩沖液 (pH4. 3) 1200ml，旋轉蒸發(fā)，至45。C水浴中水化l h，超聲25min，得空白囊泡;將 空白囊泡依次通過O. 8um, 0. 45um和0. 22 y m的微孔濾膜，進行整粒。整粒 后空白囊泡裝入透析袋中，置于O. 9。/。NaCl溶液中透析24h，每隔8h更換透析液。取 此空白囊泡，加入3mg士的寧生物堿和3mg馬錢子堿，并加入磷酸氫二鈉緩沖液 (pH4. 3) 65X:水浴孵化15 min，即得。 實施例13
50g馬錢子粉碎成細粉，濃度40%乙醇4倍量提取1次，時間3h，乙醇中可加 入鹽酸調pHl，減壓回收乙醇，干燥，得提取物，提取物繼續(xù)上大孔樹脂按生物 堿常規(guī)分離方法進行洗脫分離，得以馬錢子堿和士的寧為主的生物堿混和物。
實施例14
40g馬錢子粉碎成細粉，濃度95%乙醇3倍量提取4次，每次lh，乙醇中加入 硫酸調pH6，減壓回收乙醇，干燥，得提取物，提取物繼續(xù)上離子交換樹脂按生 物堿常規(guī)分離方法進行洗脫分離，得馬錢子堿350mg， 士的寧680mg。實施例15
取司盤40 30mg、司盤20 40mg、膽固醇30mg馬錢子總生物堿8mg溶于1600ml 氯仿，在旋轉蒸發(fā)儀上，8(TC真空蒸發(fā)至干燥薄膜，然后加入磷酸鹽緩沖液 (pH7.0)畫ml，超聲處理10min， 0.22pm微孔膜過濾，即得。
權利要求
1、馬錢子生物堿囊泡，其特征在于包括下列重量份組分馬錢子生物堿1-40 非離子表面活性劑5-150 穩(wěn)定劑0-100 修飾脂質0-100。
2、 如權利要求1所述的馬錢子生物堿囊泡，其特征在于非離子表面活性劑與穩(wěn)定劑重量比為1: 1-180: 1。
3、 如權利要求1所述的馬錢子生物堿囊泡，其特征在于馬錢子生物堿可采取以下提取方法馬錢子粉碎成細粉，濃度40%以上乙醇提取1-4次，每次l-3h，乙醇中可加 入鹽酸或硫酸調節(jié)pHl-6，減壓回收乙醇，干燥，得提取物，提取物可繼續(xù)上離 子交換樹脂或大孔交換樹脂進行洗脫分離，得馬錢子生物堿一種成分或一種以 上混和物。
4、 如權利要求1所述的馬錢子生物堿囊泡，其特征在于非離子表面活性劑 可為聚甘油烷基醚、葡萄糖烷基醚、冠醚、聚氧乙烯烷基醚、脂肪醇聚氧乙烯 醚(AEO)、脂肪酸聚氧乙烯酯、脂肪胺聚氧乙烯醚、烷基醇酰胺聚氧乙垸醚、 嵌段聚氧乙烯-聚氧丙烯醚、烷基聚葡萄糖苷、乙二醇單硬脂酸酯或雙硬脂酸酯、 聚乙二醇雙硬脂酸酯、丙二醇單硬脂酸酯、丙二醇藻酸酯、甘油單硬脂酸酯和 雙硬脂酸酯、山梨醇脂肪酸酯類、失水山梨醇單月桂酸酯(Span-20)、失水山 梨醇單棕櫚酸酯(Span-40)、失水山梨醇單硬脂酸酯(Span-60)、失水山梨醇 單油酸酯(Span-80)、蔗糖脂肪酸酯中一種成分或一種以上任意組合形式，穩(wěn) 定劑可為膽固醇、磷酸二鯨蠟脂、磷脂酰胺一種或一種以上，修飾脂質可為聚 乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚氧乙烯脂肪酸酯、N-十 六酰-L-高半胱胺酸、聚乙二醇一聚己內酯，聚乙二醇一聚乙交酯丙交酯、聚乙 二醇一聚十六垸基氰基丙烯酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪酸醚、 聚氧乙烯甲基蓖麻油醚一種或一種以上。
5、 如權利要求1所述的馬錢子生物堿囊泡制備方法，其特征在于 取非離子表面活性劑、穩(wěn)定劑、修飾脂質、馬錢子生物堿溶于適量有機溶劑，加熱溶解，溶液備用；另取磷酸鹽緩沖液，在30-7(TC恒溫并攪拌下，勻速滴加 上述有機溶劑溶液，加完后繼續(xù)攪拌，至有機溶劑揮盡，加磷酸鹽緩沖液至全 量，超聲或過高壓乳勻機1-3次，微孔濾膜過濾，灌裝或冷凍干燥，即得。
6、 如權利要求1所述的馬錢子生物堿囊泡制備方法，其特征在于 取非離子表面活性劑、穩(wěn)定劑、修飾脂質、馬錢子生物堿溶于適量有機溶劑，在旋轉蒸發(fā)儀上，30-80。C真空蒸發(fā)至干燥薄膜，然后加入磷酸鹽緩沖液，超聲 處理，即得。
7、 如權利要求5、 6所述的馬錢子生物堿囊泡制備方法，其特征在于磷酸 鹽緩沖液也可為硫酸銨緩沖液、三羥甲基氨基緩沖液或其它緩沖液。
8、 如權利要求1所述的馬錢子生物堿囊泡制備方法，其特征在于 將非離子表面活性劑、穩(wěn)定劑、修飾脂質溶于適量有機溶劑中，減壓蒸發(fā),制備類脂膜；加入的預熱的硫酸銨緩沖液，旋轉蒸發(fā)，至30-7(TC水浴中水化0. 5-2 h， 超聲5-30 min，得空白囊泡。將空白囊泡依次通過不同孔徑的微孔濾膜，進行整 粒。整粒后空白囊泡裝入透析袋中，置于0.9。/。NaCl溶液中透析12-48 h，每隔一定 時間更換透析液。取此空白囊泡，加入馬錢子生物堿，30-70。C水浴孵化5-30min， 微孔濾膜過濾，即得。
9、 如權利要求1所述的馬錢子生物堿囊泡制備方法，其特征在于 將非離子表面活性劑、穩(wěn)定劑、修飾脂質溶于適量有機溶劑中，減壓蒸發(fā)，制備類脂膜;加入枸櫞酸緩沖液或乳酸緩沖液，30-7(TC水浴中水化0.5-2 h，得空 白囊泡；將所得空白囊泡用不同孔徑的微孔濾膜過濾后，加入馬錢子生物堿，并 加緩沖液、調外水相值至中性，30-7(TC水浴孵化5-30min，微孔濾膜過濾，即 得。
10、 如權利要求5、 6、 8、 9所述的馬錢子生物堿囊泡制備方法，其特征在 —有機溶劑可為乙醚、乙醇、氯仿、二氯甲烷、正戊醇、異戊醇。
全文摘要
本發(fā)明涉及馬錢子生物堿囊泡及其制備方法。本發(fā)明以非離子表面活性劑司盤、吐溫、單(雙)烷基聚丙三醇醚類、聚氧乙烯烷基醚類等為囊材，加入膽固醇、二鯨蠟磷酸酯等作為穩(wěn)定劑，制備穩(wěn)定性好，易產(chǎn)業(yè)化的新型靶向制劑。
文檔編號A61K9/50GK101574394SQ20081010618
公開日2009年11月11日 申請日期2008年5月9日 優(yōu)先權日2008年5月9日
發(fā)明者張衛(wèi)華, 張永麗 申請人:北京因科瑞斯醫(yī)藥科技有限公司