專利名稱：：陽(yáng)離子咔唑類化合物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及陽(yáng)離子咔唑類化合物的新用途。技術(shù)背景陽(yáng)離子昨唑類化合物結(jié)構(gòu)式如下有關(guān)它的化學(xué)性質(zhì)及其衍生物的制備方法等已在中國(guó)專利200710016055.1中描述。陽(yáng)離子咔唑類化合物可以作為一種雙光子核酸熒光探針被應(yīng)用在生命科學(xué)的病理學(xué)研究中。近年來(lái)，陽(yáng)離子咔唑類化合物與DNA的相互作用受到廣泛關(guān)注。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供陽(yáng)離子咔唑類化合物的一種新用途。本發(fā)明所提供的陽(yáng)離子咔唑類化合物的用途是l)和/或2)的物質(zhì)在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的應(yīng)用1)式(I)所示的陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，2)式(II)所示的陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽；所述式(I)如下CH2CH3所述式(I)或(II)的陽(yáng)離子咔唑類化合物藥學(xué)上可接受的鹽具體可為碘鹽，其結(jié)構(gòu)式為式(m)或(iv)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式(IV)式(I)、(II)的陽(yáng)離子咔唑類化合物或它們藥學(xué)上可接受的鹽，特別適合于制備預(yù)防和/或治療人肝癌和人結(jié)腸癌藥物。本發(fā)明的另一目的是提供一種預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物。本發(fā)明所提供的預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物，它的有效成分為下述l)和/或2)的物質(zhì)1)式(I)^f示的陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，2)式(II)戶萬(wàn)示的陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽；所述式(I)如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>所述式(II)如下:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>所述式(I)或(II)的陽(yáng)離子咔唑類化合物藥學(xué)上可接受的鹽具體可為碘鹽。所述預(yù)防和/或治療腫瘤藥物特別適合于制備預(yù)防和/或治療人肝癌和人結(jié)腸癌藥物。所述預(yù)防和/或治療腫瘤藥物可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學(xué)介導(dǎo)的方法導(dǎo)入機(jī)體如肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質(zhì)混合或包裹后導(dǎo)入機(jī)體。以陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽為活性成分的抗腫瘤藥物，需要的時(shí)候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤(rùn)滑劑等。用陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽制備的預(yù)防和/或治療腫瘤藥物可以制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜?jiǎng)┑榷喾N形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。陽(yáng)離子咔唑類化合物體外抗癌活性試驗(yàn)結(jié)果表明，化合物(III)、(IV)對(duì)人肝癌細(xì)胞株(Bd-7402)、人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HCT-8)均有較好的抑制作用?；衔?III)對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7402和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8的IC5。分別為0.15叱/ml(平均值)、0.12pg/ml(平均值)。化合物(IV)對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7402和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8的IC5Q分別為0.38嗎/ml(平均值)、0.39昭/ml(平均值)。實(shí)驗(yàn)中采用5-氟尿嘧啶(K-562)為陽(yáng)性對(duì)照藥物，它對(duì)人肝癌細(xì)胞Bel-7402和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8的ICso分別為0.62|ig/ml(平均值)、1.79|iig/ml(平均值)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化合物(III)、(IV)的抗癌活性比陽(yáng)性對(duì)照藥物K-562的抗癌活性好。說(shuō)明陽(yáng)離子咔唑類化合物可用于制備抗腫瘤藥物。具體實(shí)施方式實(shí)施例l、陽(yáng)離子咔唑類化合物的合成1)9-乙基咔唑的合成在250ml燒瓶中加入16.7g咔唑，6.0gNaOH，0.15g十六垸基三甲基溴化銨和100ml丙酮，攪拌回流2h，蒸出丙酮，倒入冰水中，劇烈攪拌后抽濾得到固體，干燥后得到9-乙基咔唑。2)3-甲?；?9-乙基咔唑的合成250ml干燥的燒瓶中加入3.7ml二甲基甲酰胺(DMF)，邊攪拌邊在冰水浴中慢慢滴加4.6ml三氯氧磷(POCl3)至成為一塊白色固體。將9.8g步驟l)中得到的9-乙基咔唑溶解在50ml氯仿中，倒入上述反應(yīng)體系中，油浴加熱至固體消失，攪拌，10(TC反應(yīng)30h，冷卻。將反應(yīng)物倒入冰水中，劇烈攪拌，保持0。C加入19.4gNaOH溶液，用NaHC03調(diào)節(jié)pH到8。用400ml012(:12萃取，無(wú)水MgS04干燥得到3-甲?；?9-乙基咔唑。3)3，6-二甲酰基-9-乙基咔唑的合成250ml干燥的燒瓶中加入12mlDMF，邊攪拌邊在冰水浴中慢慢滴加15mlPOCl3至成為一塊白色固體。將3,2g步驟l)中得到的9-乙基咔唑溶解在20mlDMF中，倒入上述反應(yīng)中，油浴加熱至固體消失，攪拌，10(TC反應(yīng)30h，冷卻。將反應(yīng)物倒入冰水中，劇烈攪拌，保持0"C加入19.4gNaOH溶液，用NaHC03調(diào)節(jié)pH到8。用400mlCH2Cl2萃取，無(wú)水MgS04干燥得到3，6-二甲酰基-9-乙基咔唑。4)4-甲基-N-甲基碘鹽的合成稱取9.3g4-甲基吡啶，用50ml乙醇稀釋后注入恒壓漏斗中，在200ml燒瓶中加入21.6g碘甲烷，在攪拌狀態(tài)下將4-甲基吡啶和乙醇的混合溶液緩慢滴入該燒瓶，保持回流狀態(tài)。反應(yīng)40h后，移去恒壓漏斗，45'C加熱攪拌30min。冷卻，抽濾，并用少量乙醇洗滌，得到4-甲基-N-甲基碘鹽。5)3-(l-甲基-4-乙烯基吡啶)-9-乙基咔唑碘鹽(陽(yáng)離子咔唑類化合物(IV))的合成在250ml燒瓶中加入2.0g步驟2)中得到的3-甲酰基-9-乙基咔唑，2.2g4-甲基-N-甲基碘鹽，25ml甲醇，2滴哌啶。80'C攪拌回流4h，冷卻，蒸出甲醇，產(chǎn)物用大量CH2Cl2洗滌，又用水和乙醇洗滌得黃色化合物(IV)粉末?；衔?IV)的iH-畫R(400顧z，畫SO)，S:8.8(d，J=6.77Hz,2H),8.58(s,lH),8.21(m,4H)，7.8(m,lH),7.75(d,J=8.63,1H),7.68(d,J=8.22,lH),7.52(t,J=7.94,2H),7.30(t,J=7.30,lH),4.51(m，2H)，4.24(s,3H)，1.35(t,J=7.10,3H)。6)3，6-雙(1-甲基-4-乙烯基哌啶)-9-乙基咔唑碘鹽(陽(yáng)離子咔唑類化合物(111))的合成在250ml燒瓶中加入1.5g步驟3)中得到的3，6-二甲?；?9-乙基咔唑，2.8g4-甲基-N-甲基碘鹽，25ml甲醇，2滴哌啶。80。C攪拌回流4h，冷卻，蒸出甲醇，產(chǎn)物用大量CH2Cl2洗滌，又用水和乙醇洗滌得紅色化合物(III)粉末?；衔?III)的iH-NMR(400MHz，DMSO)，S:8.83(d，J=6.54,4H)，8.64(s，lH)，8.21(t,J=7.04,4H)，7'961(d,J=5.41,2H),7.82(d,J=5.73,2H)，7.59(d,J=10.79,2H),4.54(d，J=4.76,2H),4.2(s,6H),1.37(t,J=4.78,3H)。實(shí)施例2、MTT還原法檢測(cè)化合物(III)、(IV)的體外抗癌活性試驗(yàn)MTT法的基本原理為四氮唑[MTT,3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide]是一種能接受氫原子的染料?；罴?xì)胞線粒體中與NADP相關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的MTT轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的formazon，而死細(xì)胞則無(wú)此功能。用DMSO溶解formazon后，在一定波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值，即可定量測(cè)出細(xì)胞的存活率。按照公式可計(jì)算腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率(％)=(OD艦-OD實(shí)驗(yàn))/OD對(duì)照x100%(本實(shí)驗(yàn)中給出的00順、OD實(shí)驗(yàn)值為扣除掉OD空s的值)，進(jìn)而計(jì)算得到IC"直1.材料1.1四唑鹽(MTT):用0.01M的磷酸鹽緩沖液(PBS)溶解MTT終濃度為5mg/ml，過濾除菌，分裝后4"C避光保存。1.2細(xì)胞株選用人肝癌細(xì)胞株(Bel-7402)、人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HCT-8)2.操作步驟1)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的貼壁癌細(xì)胞人肝癌細(xì)胞Bel-7402與人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8，用0.25%胰酶消化后，用含10。/。小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成5000個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，分別接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔接種IOOpl，每組3個(gè)平行樣品，37°C，5%C02培養(yǎng)24h;2)棄去上清液。按4個(gè)質(zhì)量濃度梯度設(shè)藥物組，第1-3行的第l-4列孔按濃度從低到高依次加入化合物(III)各10pl，第4-6行的第l-4列孔按濃度從低到高依次加入化合物(IV)各10pl，用RPMI1640培養(yǎng)液補(bǔ)充至每孔終體積為200pl，使每孔中藥物終濃度依次為0.005嗎/ml、0.05嗎/ml、0.5ng/ml、5嗎/ml。陽(yáng)性對(duì)照藥5—氟尿嘧啶同樣也設(shè)4個(gè)質(zhì)量濃度梯度，各濃度同上述藥物組，第l-3行第5-8列孔按濃度從低到高依次加入5—氟尿嘧啶各1(^1，用RPMI1640培養(yǎng)液補(bǔ)充至每孔終體積為200^1，使每孔中5—氟尿嘧啶終濃度依次為0.005|ig/ml、0.05pg/ml、0.5pg/ml、5|ig/ml。第1-3行第9列孔為對(duì)照組，加入200nlRPMI1640培養(yǎng)液。第l-3行第10列孔為空白組，每孔未接種細(xì)胞，只加入200nlRPMI1640培養(yǎng)液。37°C，5%(302培養(yǎng)3d。3)棄上清液，每孔加入100)Lil新鮮配制的0.5mg/mlMTT的無(wú)血清培養(yǎng)液，37"繼續(xù)培養(yǎng)4h;4)小心棄上清液，并加入200nlDMSO溶解MTTformazon沉淀，用微型超聲振蕩器混勻；5)酶標(biāo)儀檢測(cè)各孔光密度(OD)值a=544nm);6)繪制細(xì)胞活力曲線圖，求出IC5o值。試驗(yàn)結(jié)果如表l所示。試驗(yàn)結(jié)果表明化合物(III)和(IV)均具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，可用于制備抗腫瘤藥物。表1陽(yáng)離子咔唑類化合物的細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>權(quán)利要求1、下述1)和/或2)的物質(zhì)在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的應(yīng)用1)式(I)所示的陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，2)式(II)所示的陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽；所述式(I)如下所述式(II)如下2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述陽(yáng)離子咔唑類化合物藥學(xué)上可接受的鹽為碘鹽。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤為人肝癌。4、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤為人結(jié)腸癌。5、一種預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物，它的有效成分為下述l)和/或2)所示的物質(zhì)1)式(I)所示的陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，2)式(II)所示的陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽；所述式(I)如下CH2CH3;所述式(II)如下<table>tableseeoriginaldocumentpage2</column></row><table>6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于所述陽(yáng)離子咔唑類化合物藥學(xué)上可接受的鹽為碘鹽。7、根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的藥物，其特征在于所述腫瘤為人肝癌。8、根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的藥物，其特征在于所述腫瘤為人結(jié)腸癌。全文摘要本發(fā)明公開了一種陽(yáng)離子咔唑類化合物的新用途。該新用途是陽(yáng)離子咔唑類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述陽(yáng)離子咔唑類化合物為化合物(I)或(II)。體外抗癌活性試驗(yàn)表明，陽(yáng)離子咔唑類化合物對(duì)人肝癌細(xì)胞和人結(jié)腸癌細(xì)胞均有較好的抑制作用。文檔編號(hào)A61K31/4523GK101234112SQ20081010126公開日2008年8月6日申請(qǐng)日期2008年3月3日優(yōu)先權(quán)日2008年3月3日發(fā)明者向俊峰,唐亞林,張秀鳳,李滿宇申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院化學(xué)研究所