專利名稱：：治療慢性盆腔炎的中藥及其制備方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于中藥的
技術領域：
，具體是一種治療婦科疾病慢性盆腔炎的中藥及其制備方法。
背景技術：
：盆腔炎(pelvicinflammatorydisease,PID)是女性內生殖器及其周圍的結締組織、盆腔腹膜炎癥的總稱，包括子宮內膜炎、輸卵管卵巢炎、盆腔腹膜炎、盆腔結締組織炎以及盆腔膿腫等病癥。其病變可局限于一個部位，也可分布于幾個部位，甚至延及整個盆腔臟器，臨床上一般分為急性和慢性兩種。慢性盆腔炎((chronicpelvicinflammatorydisease,CPID)，一般多從急性炎癥而來，對急性炎癥未能治療或治療不徹底，或患者體質較差，病情遷延導致慢性盆腔炎，也有少數無明顯急性炎癥過程者。臨床癥狀常見下腹隱痛及腰骶部酸痛、白帶量增多等；慢性盆腔炎全身癥狀多不明顯，可有低熱、乏力等癥，疼痛常于勞累、性交后及月經前后加劇，卵巢受損時可有月經失調，輸卵管粘連阻塞可致不孕。該病發(fā)病年齡多為2540歲，發(fā)病率在30%60%。近年來，隨著我國性傳播疾病患病率的上升、各種流產、引產及其它婦科檢查、手術操作次數的增加，經期衛(wèi)生不良或性不潔、避孕措施不當等原因，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢，且性生活越早、生育越多，發(fā)病率越高。CPID發(fā)病往往是急性盆腔炎未能徹底治療，或患者體質較差，病情遷延所致。據世界衛(wèi)生組織估計，性傳播疾病泛濫導致全世界每年新增3億3千多萬性病患者，其中有10%20%將發(fā)展為CPID。一些專家和學者稱CPID是21個世紀對女性健康的新挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)的治療盆腔炎的方法主要采用抗菌消炎藥，但臨床研究表明，抗菌素雖有控制急性炎癥病情的作用但無法根治，同時抗菌藥對慢性婦科炎癥療效不明顯，且副作用很多。此外，也有不少患者采用物理療法(如激光、冷凍、電烙燒灼)和外用陰道栓、陰道泡騰片或洗液等方法治療，但這些方法易增加患者痛苦，引起局部組織疤或易復發(fā)，且療效有限。在現有的技術中有一些專門治療這類疾病的"盆炎凈顆粒"制劑和"金剛藤糖漿"制劑；它對所述疾病有一定的治療作用；但是它存在了一些問題這些制劑中添加了蔗糖，淀粉等輔料，對于一些患者服用受到了限制，特別是糖尿病患者顯然不能服用；此外，這些制劑不易保存，攜帶不便，需要解決的問題很多。
發(fā)明內容本發(fā)明目的在于提供一種治療慢性盆腔炎的中藥及其制備方法，可以有效治療慢性盆腔炎這類婦科常見疾病，且制備工藝簡單、可靠，質量穩(wěn)定，貯藏、攜帶、服用方便。本發(fā)明的技術方案如下-治療慢性盆腔炎的中藥，其特征在于其原料組分的重量比例為黃柏10002000份，當歸10002000份，川芎10002000份，白芍10002000份，生地10002000份，甘草5001000份，干姜5001000份，椿根皮10002000份，貝母10002000份。所述的治療慢性盆腔炎的中藥，其特征在于其原料組分的重量比例為黃柏210份、當歸210份、川芎210份、白芍210份、生地210份、甘草105份、干姜105份、椿根皮210份、貝母210份。所述的治療慢性盆腔炎的中藥的制備方法，其特征在于將藥材粉碎，黃柏、當歸、川芎加入濃度65%85°/。的乙醇溶液，減壓回流提取13次，每次加入812倍的量，提取12小時，濾過，將提取的乙醇液回收乙醇后濃縮至稠膏，真空干燥至恒重備用；白芍、生地、甘草、干姜、椿根皮、貝母與醇提后的藥渣合并，加水煎煮提取13次，每次加入812倍藥材的水量，每次煎煮12小時，濾過，將水煮后得到的濾液濃縮得浸膏，加入乙醇溶液至乙醇含量為50%70%,攪勻，靜置，濾取上清液，回收乙醇濃縮至稠膏，真空干燥至恒重備用；將兩次干浸膏合并粉碎成細粉，攪拌均勻即得。所述的治療慢性盆腔炎的中藥的制備方法，其特征在于所述的黃柏、當歸、川芎提取稠膏真空干燥時，真空度0.080.09Mpa，溫度40。C;含有白芍、生地、甘草、干姜、椿根皮、貝母提取成分的稠膏真空干燥條件為真空度0.080.09Mpa,溫度8(TC。所述的治療慢性盆腔炎的中藥的制備方法，其特征在于取黃柏、當歸、川芎，加10倍量75%乙醇溶液減壓回流提取3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，回收乙醇至稠膏，真空度0.080.09Mpa，溫度40。C，減壓干燥至恒重備用；白芍、生地、甘草、干姜、椿根皮、貝母以及醇提后的黃柏、當歸、川芎粗粉渣，加12倍量水煎煮3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液濃縮至相對密度1.0,加入乙醇溶液至含乙醇量為60%,攪勻，靜置24-48小時，濾取上清液，回收乙醇至稠膏，真空度0.080.09Mpa，溫度80'C減壓干燥至恒重備用；將兩次干浸膏合并，粉碎至細粉，攪拌均勻制成所需劑型。本發(fā)明浸膏可以用于制備膠囊劑，也可制成其它劑型。一、本發(fā)明藥物方解與功能主治1.本發(fā)明方解慢性盆腔炎屬于中醫(yī)的婦科帶下病。主要病機是由于濕熱流注下焦或直犯陰中，累及任帶二脈。濕熱留戀日久則阻遏氣血運行，故可見帶下量多，色黃或黃白相間，質粘稠。其氣腥臭，外陰瘙癢，小腹墜脹或下腹壓痛，腰骶疼痛，小便短少澀痛，舌紅苔黃膩等癥。本證型是由于濕熱下注，氣滯血瘀所致，故治療應以清熱利濕，活血化瘀為主，使?jié)窕鵁崆?，氣行血暢，諸癥自然消除。方中黃柏苦寒清熱燥濕、瀉火解毒，是為君藥；臣以歸、芎、芍、地滋陰清熱、涼血活血，祛邪不傷陰，活血不留瘀；椿皮清熱燥濕、收濯止帶，與黃柏同用，清濕熱之功更宏；干姜辛熱，溫中散寒，健脾益胃；川貝母清熱潤肺，化痰；生甘草清熱解毒，和中，均為佐使藥。全方合用，共奏清熱利濕、活血化瘀之功。2.本發(fā)明的功能主治本發(fā)明藥物具有清熱利濕，活血化瘀之功效，用于濕熱下注，氣滯血淤型慢性盆腔炎以及陰道炎、宮頸炎、附件炎及尿路感染等見有上述癥狀者。3、本發(fā)明組方藥物的藥性與作用(1)、黃柏味苦、性寒、歸腎、膀胱經。能清熱燥濕，瀉火解毒，消腫祛腐。臨床上用于治療濕熱瀉痢、黃疸、帶下、熱淋、痔漏、盜汗、遺精、骨蒸勞熱等癥。動物實驗表明，黃柏具有抗菌、抗病毒、抗炎、解熱、降血糖、降血壓等作用。(2)、當歸味甘辛，性溫，歸肝、心、脾經。有補血、活血、調經、潤燥、滑腸、補血活血，調經止痛，潤腸通便等作用。用于治療血虛萎黃，眩暈心悸，月經不調，經閉痛經，虛寒腹痛，跌撲損傷，癰疽瘡瘍等癥。藥理實驗證明，當歸具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗凝血、抗血栓、抗氧化、抗衰老和提高免疫力等作用。(3)、川芎味辛微苦，性溫，歸肝、膽、心包經。具有活血行氣，祛風止痛之功效。主治血瘀氣滯所致月經不調，痛經，閉經，難產，產后瘀腹痛，脅肋作痛；肝郁氣滯而致血行不暢的胸脅疼痛，頭痛，風寒濕痹，跌打腫痛等疾病。臨床主要用于治療頭痛、冠心病、缺血性腦中風、泌尿系統(tǒng)感染及婦科方面的疾病。藥理學研究證明，川芎具有抑制血小板聚集、抗血栓、降低血粘度，改善血液流變、增加冠脈流量，改善心肌缺氧等作用。(4)、白芍性微寒，味苦酸，歸肝、脾經。具有養(yǎng)血柔肝、緩中止痛、涼血消腫功能，臨床上用于治療頭暈目眩、脅腹疼痛、婦女月經不調，經期不暢、四肢攣痛等癥。動物實驗研究證實，白芍具有抗炎、抑制血小板聚集、抗血栓、抗菌、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等作用。(5)、生地黃味甘苦、性寒，歸心、肝、腎經。具有清熱涼血，養(yǎng)陰生津、止血功效，臨床上用于熱風傷陰、熱病煩渴、發(fā)斑疹、尿血、崩漏下血、陰虛內熱等癥。藥理學研究表明，地黃具有抗炎、抗衰老、降血糖、抗骨質疏松和提高免疫力等作用。(6)、貝母味甘苦，性寒，歸心、肺經。能清熱潤肺、化痰止咳，臨床上多用于外感咳嗽、肺虛久咳、痰多胸悶、瘰疬瘡癰腫毒及乳癰等癥。藥理學研究證明，貝母具有抗血小板聚集、降低血粘度、抑菌、平喘、鎮(zhèn)咳和祛痰等作用。(7)、椿皮味苦、性寒，歸大腸、胃、肝經。具有清熱燥濕、收澀止帶、止瀉、止血等功效，用于赤白帶下、濕熱瀉痢、久瀉久痢、便血和崩漏。藥理學研究證明，椿皮有抗菌、抗原蟲、抗腫瘤等作用。(8)、甘草味甘，性平，歸心、肺、脾、胃經。具有補脾益氣、清熱解毒、緩急止痛、祛痰止咳、調和諸藥功效。用于脾胃虛弱、倦怠乏力、心悸氣短、咳嗽痰多和緩解藥物毒性。藥理學研究表明，甘草具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗肝纖維化、解毒、解痙、鎮(zhèn)痛等作用。(9)、干姜味辛，性熱，歸脾、胃、腎、心、肺經，可溫中散寒、回陽通脈、燥濕消痰。主要用于脘腹冷痛，嘔吐泄瀉，肢冷脈微，痰飲喘咳的治療。藥理學研究證明，干姜具有抗血小板聚集、抗菌抗炎、擴張血管，促進血液循環(huán)、強心、抗氧化、抗衰老、解毒、抗腫瘤和增強免疫等作用。二、制備方法的研究(一)原料藥材的粉碎由于現代生產都使用多功能提取罐提取，內部壓力較大，藥材有效成分較易溶出，但易于煮爛，藥材粉末過細不易于過濾工序操作且提高生產成本，故采取適度粉碎，投料以凈藥材計算。(二)提取工藝條件的選擇依據本品中9味藥材中主要藥效成分的理化性質，將黃柏、當歸和川芎3味進行乙醇提取，考慮到有效成分阿魏酸和川芎嗪的穩(wěn)定性采取37°C,真空度0.080.09Mpa的減壓回流提?。黄渌?味及醇提后藥渣合并采用水提醇沉的工藝。1、醇提工藝條件的選擇以醇提物中有效成分小檗堿作為評價標準，采用正交試驗對醇提工藝中的乙醇濃度，提取時間和提取次數等工藝參數進行考察。分別按照配方比例稱取藥材9份，每份63.0g(黃柏21.0g、當歸21.0g、川芎21.0g)進行正交試驗，正交因素水平表及結果如下正交因素水3P表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>正交實驗表及鹽酸小檗堿提取量評價結果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注鹽酸小檗堿的測定色譜條件色譜柱Diamonsil(TM)鉆石C18(250x4.6mm,5nm);流動相乙腈一1%三乙胺磷酸溶液(Pt^3)(25:75);柱溫27°C;流速l.Oml/min;檢測波長280nm對照品溶液制備鹽酸小檗堿標準品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號110713-200208)加甲醇配制成0.068mg/ml濃度的溶液，即得。供試品溶液的制備精密稱取一定量提取并干燥好的9種醇提物，用流動相定容至10ml,搖勻，用0.45nm的濾膜過濾，保留續(xù)濾液作為供試品溶液。測定方法分別吸取對照品溶液和供試品溶液20^1，注入高效液相色譜儀(AglientllOOSeries高效液相色譜儀，美國Aglient公司)測定。鹽酸小檗堿提取量方差分析表<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>結果表明以鹽酸小檗^^為指標，各因素主次為C>A>B>D，因素C有極顯著影響，因素A有顯著影響，以A2B2C3工藝最佳。2、水提醇沉工藝條件的選擇根據水提醇沉后的固形物量，擬確定水提濾液濃縮至相對密度為1.2，加入乙醇至含醇量為60%，靜置24小時后，回收乙醇，濃縮，減壓干燥至干浸膏。以水提物中有效成分芍藥苷作為評價標準，擬采用正交試驗對水提醇沉工藝中的提取時間、提取次數和水提用量等工藝參數進行考察。分別按照配方比例稱取藥材9份，每份105.0g(白芍21g、生地21.0g、甘草10.5g、貝母21.0g、干姜10.5g、椿根皮21.0g)與醇提后的三種藥渣合并提取，進行正交試驗，正交因素水平表及結果如下正交因素水平表<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>正交實驗表及芍藥苷提取量評價結果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注芍藥苷的測定色譜條件色譜柱Diamonsil(TM)鉆石C18(250x4.6mm，5nm);流動相乙腈~0.30/0磷酸溶液(16:84);柱溫27°C;流速l.Oml/min;檢測波長230nm對照品溶液制備芍藥苷標準品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號110736-200526)加甲醇配制成0.045mg/ml濃度的溶液，即得。供試品溶液的制備精密稱取一定量提取并干燥好的9種水提醇沉后產物，用流動相定容至10ml，搖勻，用0.45pm的濾膜過濾，保留續(xù)濾液作為供試品溶液。測定方法分別吸取對照品溶液和供試品溶液20nl，注入高效液相色譜儀(AglientllOOSeries高效液相色譜儀，美國Aglient公司)測定。芍藥苷提取量方差分析表言趕—J3—繼—______——J___________屋整總(s)2926.526組間2731.9A720.72360.433.3*B1596.22798.173.8*C100.2250,14.6D314.72157.414.6誤差194.61810.8.05(2,18)=3.55;F001(2，18)=6.01結果表明以芍藥苷為指標，各因素主次為B>A>C，因素B和因素A有顯著影響，A2B3C3工藝最佳。(三)制劑成型工藝的研究1、規(guī)格的確定依據以上試驗，醇提工藝的干浸膏(固形物)得率為30%左右，水提醇沉后干浸膏得率為10%左右。藥材共計168g，提取干燥后的干浸膏應約為42.54g，可制成100粒膠囊，每粒0.4212g，考慮到藥材質量的波動性，確定本發(fā)明提供的產品規(guī)格為每粒0.4g(每粒相當于原藥材1.68g)。2、干浸膏粉的制備按上述選定的提取工藝，取5倍處方量藥材(共計840g)，其中黃柏105g、當歸105g、川芎105g進行乙醇減壓冋流提取，回收乙醇，濃縮至稠膏(溫度在4(TC以下)，減壓干燥(真空度0.080.09Mpa，3540°C)得干浸膏；白芍105g、生地105g、貝母105g、甘草52.5g、干姜52.5g、椿根皮105g,進行提取濃縮至稠膏，減壓干燥(真空度0.080.09Mpa,7580°C)得干浸膏；合并兩種干浸膏，粉碎，過100目篩，結果如下名稱重量(g)備注黃柏105黃柏、當歸、川芎，加10倍量75%乙醇減壓回流提取3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，回收乙醇至稠膏，溫度40'C，減壓干燥；白芍、生地、甘草、干姜、椿根皮、貝母以及醇提后的黃柏，當歸，川芎粗粉渣，加12倍量水煎煮3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液濃縮至相對密度l.O，加入乙醇至含醇量為60%，攪勻，靜置24小時，濾取上清，回收乙醇至稠膏，溫度80'C減壓干燥至恒重備用；將兩次干浸膏合當歸105川芎105白芍105生地105貝母105椿根皮105甘草52,5<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3、充填試驗(1)膠囊的選擇依據經驗，每粒0.4g規(guī)格一般應選擇用0號膠囊，經充填試驗，裝量穩(wěn)定符合要求，結果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>(2)分裝環(huán)境要求根據本品要求分裝環(huán)境溫度應控制在20°C以下，濕度不超過50%。本發(fā)明針對組方藥物中有效成分的理化性質，采用正交實驗進行優(yōu)化其工藝參數，極大地提高了其中的有效成分的含量，確保了治療慢性盆腔炎的有效性。提供的制備方法具有生產簡單，有效成分濃度高，產品質量穩(wěn)定的特點。由于組方中沒有使用輔料，所以在藥物有效成分中不含沒有藥效的輔料，減少服用的劑量，便于患者服用；不含糖分，便于患者方便服用不需禁忌。動物試驗證明，本發(fā)明中藥具有顯著的抗炎、抗菌、止痛、止癢、改善微循環(huán)、提高機體免疫力等多種藥理作用，且無明顯的毒副作用，可長期服用。對于濕熱蘊結、氣滯血瘀型的慢性盆腔炎以及陰道炎、宮頸炎、附件炎及尿路感染等相關婦科炎癥均有顯著的治療效果，是一種安全、有效、質量可控的治療慢性盆腔炎的中藥新藥，值得臨床推廣應用。具體實施方式一、治療慢性盆腔炎的中藥處方其原料組分的重量比例為黃柏210份、當歸210份、川芎210份、白芍210份、生地210份、甘草105份、干姜105份、椿根皮210份、貝母210份。二、制備方法取黃柏、當歸、川芎，加10倍量75%乙醇溶液減壓回流提取3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，回收乙醇至稠膏，真空度0.080.09Mpa，溫度40'C，減壓干燥至恒重備用；白芍、生地、甘草、干姜、椿根皮、貝母以及醇提后的黃柏、當歸、川芎粗粉渣，加12倍量水煎煮3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液濃縮至相對密度1.0，加入乙醇溶液至含乙醇量為60%，攪勻，靜置2448小時，濾取上清液，回收乙醇至稠膏，真空度0.080.09Mpa,溫度8(TC減壓干燥至恒重備用；將兩次干浸膏合并，粉碎至細粉，攪拌均勻制成膠囊。三、本發(fā)明藥效學研究下述為本發(fā)明膠囊劑的藥效試驗所需的條件1、受試物與試劑本發(fā)明藥物膠囊劑，規(guī)格0.4g/粒。臨用前用蒸餾水配制成所需濃度的藥液供動物給藥用。鹿角菜膠，中科院上海藥物研究所；巴豆油混合致炎劑的配制2%巴豆油、20%無水乙醇、5%蒸餾水和73%乙醚；醋酸(分析純)，成都化學試劑一廠；酵母，湖北安琦酵母股份有限公司；婦科千金片，湖南株洲千金藥業(yè)有限公司；金雞膠囊，廣西靈峰藥業(yè)有限公司；菌種大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和白色念珠菌均為安徽醫(yī)科大學附屬醫(yī)院檢驗科臨床分離菌株；鹽酸腎上腺注射液，上海禾豐制藥有限公司；鹽酸左氧氟沙星，江蘇豪森藥業(yè)有限公司。2、動物昆明種小鼠，體重1822g，由安徽醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證為皖醫(yī)動準第01號。SD大鼠，體重140170g，由安徽醫(yī)科大學實驗動物中心提供，合格證為皖醫(yī)動準第03號。3、儀器AEG-220型電子分析天平，日本島津公司；50ul微量移液器，北京青云卓立精密設備有限公司；JY601型小鼠秤，上海良平儀器儀表有限公司；椎板式R-80型全自動血液粘度儀，北京中勤世帝公司；KX-21型全自動血液分析儀，日本Sysmex公司；TXL-b型體外血栓形成血小板粘附兩用儀，無錫石塘灣興衛(wèi)醫(yī)用儀器廠4、統(tǒng)計方法采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行處理，多組間比較采用單因素方差分析(One-Way-ANOVA)。多組間兩兩比較，方差齊性采用S-N-K法(q檢驗)，方差不齊采用Dunett'sT3法。各組數據均用J&s表示。試驗例1本發(fā)明藥物膠囊劑抗炎作用1、對鹿角菜膠所致大鼠足腫脹的影響取體重140170g大鼠50只，雌雄各半，隨機分為空白對照組，陽性對照組(指婦科千金片或金雞膠囊，以下均同)，高劑量組，中劑量組，低劑量組，每組10只。各組灌胃給予相應受試物，本發(fā)明藥物膠囊劑高、中、低劑量組分別灌胃給予6.0g生藥/kg，3.0g生藥/kg，1.5g生藥/kg，陽性對照組給予婦科千金片混懸液(6.0g/kg)，空白對照組給予等體積的蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)給藥7天。第7天致炎前預先用自制軟窄尺測量正常右后爪周長(以后每次測量均固定位置)，末次給藥30min，于各鼠足跖腱膜下注射1%鹿角菜膠0.05ml/只致炎，分別于致炎后0.5、1、2、3、4、5小時測量各鼠右后足爪周長，以致炎前的周長之差為腫脹度，結果見表l。表l本發(fā)明藥物膠囊劑對大鼠鹿角菜膠性足腫脹的影響(i化)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表可見，與空白對照組比較，陽性對照組和本發(fā)明藥物高、中、低劑量組對鹿角菜膠所致大鼠足腫脹有不同程度的抑制(f<0.05或PO.Ol)。用藥后1小時即可出現明顯抗炎作用，其抑制腫脹作用持續(xù)5小時以上。2、對巴豆油所致的小鼠耳廓腫脹的影響取小鼠50只，體重1822g，隨機分為空白對照組，陽性對照組，高劑量組，低劑量組，每組10只。各組灌胃給予相應受試物，本發(fā)明藥物膠囊劑高、中、低劑量組分別灌胃給予12.0g生藥/kg，6.0g生藥/kg,3.0g生藥/kg，陽性對照組給予婦科T金片混懸液(12.0g/kg),空白對照組給予等體積的蒸餾水，每天給藥l次，連續(xù)給藥7天。末次給藥后30min，用巴豆油混合致炎劑(內含2%巴豆油、20°/。無水乙醇、5%蒸餾水和73%乙醚)涂于小鼠左耳前后兩面0.05ml/只。4h后處死小鼠，剪下兩耳，用直徑9mm打孔器分別在同一部位打下圓耳片稱重，每小鼠左右耳片重量差即為腫脹程度，取各給藥組耳腫程度的均數與對照組作比較，計算各給藥組對耳腫脹的抑制率，結果見表2。抑制率=(空白對照組耳腫程度一給藥組耳腫程度)/空白對照組耳腫程度><100°/0孝2本g明藥物膠囊齊U對巴豆油所致^、鼠^廓腫翌g^gS^丄———<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>由表可見，與空白對照組比較，陽性對照組及本發(fā)明藥物高、中劑量組對巴豆油所致小鼠耳廓腫脹有不同程度的抑制(P<0.05或P<0.01)。其中本發(fā)明藥物高劑量組效果最好，本發(fā)明藥物高、中、低劑量組呈量效關系。3、對棉球所致大鼠肉芽腫模型的影響取體重140170g大鼠50只，雌雄各半，隨機分為空白對照組，陽性對照組，高劑量組，低劑量組，每組10只。于實驗前1天，大鼠在乙醚麻醉下，將25mg消毒棉球植入大鼠腋下，兩側各1個，手術在無菌條件下進行，自手術后第一日起，各組灌胃給予相應受試物，本發(fā)明藥物膠囊劑高、中、低劑量組分別灌胃給予6.0g生藥/kg，3.0g生藥/kg，1.5g生藥/kg，陽性對照組給予婦科千金片混懸液(6.0g/kg)，空白對照組給予等體積的蒸餾水，每天給藥1次，連續(xù)給藥7天。末次給藥后24h處死動物，剝離肉芽腫稱取濕重。置80'C烤箱內烘lh后再稱其干重，結果見表3。表3本發(fā)明藥物膠囊劑對大鼠棉球肉芽腫的影響(;&5)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注與空白對照組比較，尸O.Ol由表可見，與空白對照組比較，陽性對照組及本發(fā)明藥物高、中、低劑量組棉球肉芽腫重量均有明顯的差異(尸<0.05或尸<0.01)。其中本發(fā)明藥物高劑量組效果最好，本發(fā)明藥物高、中、低劑量組呈一定量效關系，且中劑量組效果與6.0g/kg的婦科千金片作用相當。試驗例2本發(fā)明藥物膠囊劑鎮(zhèn)痛作用對醋酸所致小鼠扭體反應的影響(扭體法)取小鼠50只，體重1822g，雌雄各半，按體重分層隨機分為空白對照組，陽性對照組，本發(fā)明藥物膠囊劑高、中、低劑量組，每次分別灌胃給予生物鹽水0.2ml/10g，千金片混懸液0.2ml/10g(相當于12.0g/kg)，本發(fā)明藥物膠囊劑高、中、低劑量0.2ml/10g(分別相當于12.0g生藥/kg，6.0g生藥/kg,3.0g生藥/kg)，均每日給藥l次，連續(xù)給藥5天，末次給藥lh，分別腹腔注射0.6%醋酸(0.2ml/只)。觀察15min內出現扭體反應的動物數及扭體次數，計算鎮(zhèn)痛率，結果見表4。表4本發(fā)明藥物膠囊劑對醋酸致小鼠扭體反應的影響(i&)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>陽性對照組1023.10±4.6029.35高劑量組1014.40±4.82**55.96中劑量組1019.10±5.29**41.59低劑量組1024.50±4.54"25.08注與空白對照組比較，P<0.05由表可見，與空白對照組比較，本發(fā)明藥物膠囊劑高、中、低劑量組對醋酸所致的小鼠扭體反應次數均有不同程度的押制作用(尸<0.05或尸<0.01)，并呈一定的量效關系。試驗例3本發(fā)明藥物膠囊劑清熱作用對干酵母所致大鼠全身性發(fā)熱的影響取體重140170g大鼠70只，用體溫計測大鼠正常肛內溫度，一日2次，連續(xù)3d。實驗前，禁食14h(但可自由飲水)。實驗日再同法測定每只鼠肛溫23次。選取體溫變動不超過0.3'C的大鼠50只，隨機分為空白對照組，陽性對照組，高劑量組，低劑量組，每組10只。各組灌胃給予相應受試物，本發(fā)明藥物膠囊劑高、中、低劑量組分別灌胃給予6.0g生藥/kg，3.0g生藥/kg,1.5g生藥/kg，陽性對照組給予婦科千金片混懸液(6.0g/kg)，空白對照組給了'等體積的蒸餾水。實驗前灌胃給藥lh后，立即于大鼠背部皮下注射20%干酵母懸液]0ml/Kg，然后4、6、8、10及12h各測大鼠肛溫一次，統(tǒng)計肛溫變化，結果見表5。表5本發(fā)明藥物膠囊劑對酵母所致大鼠全身性發(fā)熱的影響(^^)動物數正常'沐入酵母懸液后不同時間內大鼠肛溫的變化情況(°C)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注與空白對照組比較，尸<0.05P<0.01由表可見，與空白對照組比較，陽性對照組及本發(fā)明藥物高、中、低劑量組對酵母所致大鼠全身性發(fā)熱有不同程度的解熱作用(尸O.05或PO.01)。本發(fā)明藥物膠囊劑在服藥6h即有顯著的解熱效果，其作用時間可維持6h以上。試驗例4本發(fā)明藥物膠囊劑對慢性盆腔炎常見治病菌體外抑菌作用1、體外最小抑菌濃度(MIC)的測定試驗采用試管連續(xù)二倍稀釋法，取滅菌小試管48支，分為4組每組12支，分別為清白膠囊藥物組(淸白膠囊大腸桿菌組、金黃色葡萄球菌組、綠膿桿菌組和白色念珠菌組)，于每管中先加入葡萄糖酚紅肉湯培養(yǎng)基5ml，然后每組第1支試管中加入5ml濃度為2g/ml(生藥含量)的本發(fā)明藥物膠囊劑肉湯培養(yǎng)基供試液，則每組第1管起始濃度為lg/ml，混勻后吸取5ml加入第2管中，同法稀釋至第10管。每組第11管不加藥物作對照，以便觀察培養(yǎng)基是否適合細菌生長，第12管中加受試液5ml，混勻后取出5ml，棄去，不加細菌，以觀察受試物是否有污染，第13管以左氧氟沙星(配制25ug/ml試液，滅菌備用)作為陽性對照組。經濕熱滅菌，最后除每組第12管外，以上每管加入備妥的對應稀釋10—s的新鮮菌液0.1ml。4組試管放于37'C搖床培養(yǎng)24h,觀察結果確定最小抑菌濃度(MIC)，結果見表6。2、體外最小殺菌濃度(MBC)的測定試驗分別將上述無肉眼可見細菌生長試管中的肉湯劃線接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿上,放于37'C生化培養(yǎng)箱內培養(yǎng)24h后取出觀察，以平皿上無菌落生長的最低藥物濃度(最高稀釋度)作為本發(fā)明藥物膠囊劑對應此菌的MBC，結果見表6。表6本發(fā)明藥物膠囊劑對四種慢性盆腔炎致病菌的抑菌作用濃度金黃色葡萄試管號稀釋度大腸桿菌綠膿桿菌白色念珠菌(g/ml)球菌<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注"+"表示有菌生長；"一"表示無菌生長；"*"表示該濃度為MIC;"A"表示該濃度為MBC;最后兩欄中的數值單位為"g生藥/ml"由上表可見，本發(fā)明藥物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌有抑菌作用，最小抑菌濃度(MIC)分別為0.0625g生藥/ml、0.0625g生藥/ml和0.0313g生藥/ml，最小殺菌濃度(MBC)分別為0.25g生藥/ml、0.125g生藥/ml和0.0313g生藥/ml，相對其他三種常見盆腔炎治病菌本發(fā)明藥物對白色念珠菌的抑菌效果不是很明顯，其MIC、MBC分別為0.25g生藥/ml和0.5g生藥/ml。試驗例5本發(fā)明藥物膠囊劑小鼠體內抗大腸桿菌和金黃色葡萄球菌感染試驗大腸桿菌和金黃色葡萄球菌以平板劃線法接種于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平皿內，37'C培養(yǎng)過夜。次日挑選典型單個菌落，于10ml肉湯培養(yǎng)基中，37'C恒溫振搖16h，以此菌液用生理鹽水作10"、10—2、l(T3、l(T4、10—5倍稀釋。用不同濃度的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌感染小鼠，每個濃度10只小鼠，測出各試驗菌株引起小鼠100%死亡的最小致死菌量(100%minimumlethaldoseofbacterial,MLD)大腸桿菌MLD為2.0x108CFU/mL，金黃色葡萄球菌的MLD為1.0xl08CFU/mL。取1822g昆明種小鼠200只，雌雄各半，隨機分為10組，每組20只，即空白對照組(大腸，金葡)共2組，陽性對照組(大腸，金葡)共2組，本發(fā)明藥物膠囊劑高、中、低劑量組，每組灌胃容量為0.2ml/10g，陽性對照組金雞膠囊混懸液劑量為6.0g藥粉/kg，高、中、低劑量分別為12.0g生藥/kg、6.0g生藥/kg和3.0g生藥/kg，均每日給藥l次，連續(xù)灌胃給藥4天，末次給藥lh后，每只小鼠分別腹腔注射上述濃度的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌懸液0.5ml/只，再連續(xù)灌胃給藥3天，觀察腹腔注射菌液后72h內各組小鼠死亡只數，結果見表6、7。表6本發(fā)明藥物膠囊劑對小鼠腹腔注射大腸桿菌死亡情況的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>由表可見，本發(fā)明藥物灌胃給藥對小鼠腹腔注射大腸桿菌感染所致的死亡情況保護作用明顯，生存率高劑量達65%、中劑量達50%、小劑量達40%，并呈一定量效關系。表7j發(fā)明藥物膠囊劑對小鼠腹腔注射金黃色葡萄球——菌死主fg^^^，<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>低劑量組20■—.5.................................5.—■2.......................40由上表可見，本發(fā)明藥物灌胃給藥對小鼠腹腔注射金黃色葡萄球菌感染所致的死亡情況保護作用明顯，生存率高劑量達60%、中劑量達45%、小劑量達40%，并呈一定量效關系。試驗例6本發(fā)明藥物膠囊劑對血瘀模型大鼠血液流變學改善的作用取SD大鼠48只，體重140170g，雌雄各半，按體重分層隨機分為6組，每組8只，分別為正常組，空白對照組，陽性對照組，本發(fā)明藥物膠囊劑高、中、低劑量組。陽性對照組金雞膠囊混懸液灌胃劑量為6.0g藥粉/kg，高、中、低劑量分別為6.0g生藥/kg、3.0g生藥/kg和1.5g生藥/kg，正常組和空白對照組灌胃同體積的生理鹽水，連續(xù)給藥14d。末次給藥后lh，除正常組外皮下注射鹽酸腎上腺素(Adr)0.8mL'kg—1,共2次，間隔4h，中間將大鼠浸入冰水內冷浴5min，以造成急性血瘀模型，如此處置后將各組大鼠禁食不禁水。次日晨給藥lh后腹腔注射2M戊巴比妥鈉2mhkg"麻醉，打開腹腔用一次性注射器自腹主動脈采血，K2EDTA、肝素鈉真空采血管抗凝。取抗凝血，用R-80全自動粘度儀測定(高、中、低切變率下)全血粘度、(高、低切變率下)全血相對粘度、血漿粘度；用STAGO-STA型全自動血凝儀測定血漿纖維蛋白原含量；用KX-21全自動血液分析儀測定血細胞比容，以上指標測定由醫(yī)院檢驗科專人操作。取1.8ml非抗凝血進行體外血栓形成試驗，即按照Chandler體外法，立即注入內徑為4mm的硅膠管內，迅速封閉，置于TXL-b型體外血栓形成血小板粘附兩用儀上，37'C下轉動15min，傾出血栓，生理鹽水洗滌，濾紙吸去表面血液測量長度并稱量濕重，將血栓條置于64'C烘箱內烘取20min后稱其干重；用旋轉玻璃球法進行血小板粘附試驗，將lml抗凝血加入玻璃球內，置于TXL-b型體外血栓形成血小板粘附兩用儀的轉動裝置上，旋轉15min，用KX-21全自動血液分析儀測定血液在玻璃球內轉動前后血小板的數量，從而計算血小板的粘附率，結果見表8、9、10。表8本發(fā)明藥物膠囊劑對急性血瘀模型大鼠血液流變學的影響(;Sts)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>注與空白對照組比較，尸<0.05PO.01表9本發(fā)明藥物膠囊劑對急性血瘀模型大鼠血液流變學的影響(;&s)<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>由表8、9可見，空白對照組全血高中低切應力粘度、血漿粘度、纖維蛋白原含量及血細胞比容均明顯升高，與正常組比較，差異十分顯著(尸<0.05或尸<0.00，提示急性血瘀大鼠血液呈"粘、濃、聚、凝"狀態(tài)。而預先給予本發(fā)明藥物膠囊劑14天的三個劑量組都能不同程度地改善上述急性血瘀大鼠血液流變學指標的變化，表明本發(fā)明藥物膠囊劑有改善急性血瘀大鼠血液流變性的作用。表IO本發(fā)明藥物膠囊劑對急性血瘀模型大鼠血小板粘附率及血栓形成的影響(i±S)組<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注與空白對照組比較，由表可見，空白對照組大鼠體外血栓長度、血栓濕重和干重與正常組相比較均明顯增加(PO.05或PO.01),血小板粘附率和粘附值與正常組相比較顯著升高(尸O.Ol)。本發(fā)明藥物膠囊劑三個劑量均能不同程度地使體外血栓長度、血栓濕重和干重及血小板粘附率和粘附值明顯降低，與模型組相比(PO.05或PO.01),表明本發(fā)明藥物膠囊劑具有降低急性血瘀大鼠血小板粘附性和體外血栓形成的作用。上述藥效學試驗說明，大鼠灌胃本發(fā)明藥物膠囊劑6.0g、3.0g、1.5g生藥/kg，小鼠灌胃本發(fā)明藥物膠囊劑12.0g、6.0g、3.0g生藥/kg，每日1次，連續(xù)7天，對鹿角菜膠所致大鼠足腫脹，對巴豆油所致的小鼠耳廓腫脹和對棉球所致大鼠肉芽腫均有不同程度的抑制作用(戶<0.05或尸<0.01)，并呈一定的量效關系，說明本發(fā)明藥物膠囊劑有明顯的抗炎作用；小鼠灌胃本發(fā)明藥物膠囊劑12.0g、6.0g、3.0g生藥/kg，每日l次，連續(xù)5天，對醋酸所致的小鼠扭體反應次數均有不同程度的抑制作用(尸<0.05或尸<0.01)，高、中、低劑量并早一定的量效關系，說明本發(fā)明藥物膠囊劑有明顯的鎮(zhèn)痛作用；大鼠灌胃本發(fā)明藥物膠囊劑6.0g、3.0g、1.5g生藥/kg，灌胃l次，lh后注射干酵母懸液，本發(fā)明藥物組對酵母所致大鼠全身性發(fā)熱有不同程度的解熱作用(P<0.05或戶<0.01)，在服藥6h即有顯著的解熱效果，其作用時間可維持6h以上，說明本發(fā)明藥物膠囊劑具有明顯的清熱作用；體外抑菌實驗結果顯示本發(fā)明藥物膠囊劑對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和綠膿桿菌有抑菌作用，最小抑菌濃度(MIC)分別為0.0625g、0.0625g、0.0313g生藥/ml，最小殺菌濃度(MBC)分別為0.25g、0.125g、0.0313g生藥/ml，對白色念珠菌抑菌效果不是很明顯，說明本發(fā)明藥物膠囊劑在體外能明顯抑制大部分盆腔炎常見致病菌的生長；體內抑菌試驗顯示小鼠灌胃本發(fā)明藥物膠囊劑12.0g、6.0g、3.0g生藥/kg,每日l次，連續(xù)7天，能明顯降低腹腔注射大腸桿菌和金黃色葡萄球菌所致小鼠死亡率，高、中、低劑量組生存率有一定量效關系，說明本發(fā)明藥物膠囊劑在體內有明顯抗大腸桿菌和金黃色葡萄感染的作用；大鼠灌胃本發(fā)明藥物膠囊劑6.0g、3.0g、1.5g生藥/kg，每日l次，連續(xù)14天，高、中、低劑量組不同程度地改善急性血瘀模型大鼠血液流變學指標的變化(F<0.05或尸<0.01)，且不同程度地使體外血栓長度、血栓濕重和干重及血小板粘附率和粘附值明顯降低(尸<0.05或尸<0.01)，說明本發(fā)明藥物膠囊劑能有效改善血液流變學異常，抗血小板粘附和抗血栓形成的作用。上述的藥效學試驗說明，本發(fā)明藥物膠囊劑服用劑量少，質量穩(wěn)定、可控，治療婦科慢性盆腔炎，具有明顯的抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、清熱及活血化瘀的作用。權利要求1、治療慢性盆腔炎的中藥，其特征在于其原料組分的重量比例為黃柏1000～2000份，當歸1000～2000份，川芎1000～2000份，白芍1000～2000份，生地1000～2000份，甘草500～1000份，干姜500～1000份，椿根皮1000～2000份，貝母1000～2000份。2、根據權利要求1所述的治療慢性盆腔炎的中藥，其特征在于其原料組分的重量比例為黃柏210份、當歸210份、川芎210份、白芍210份、生地210份、甘草105份、干姜105份、椿根皮210份、貝母210份。3、根據權利要求1或2所述的治療慢性盆腔炎的中藥的制備方法，其特征在于將藥材粉碎，黃柏、當歸、川芎加入濃度65%85%的乙醇溶液，減壓回流提取13次，每次加入812倍的量，提取12小時，濾過，將提取的乙醇液回收乙醇后濃縮至稠膏，真空干燥至恒重備用；白芍、生地、甘草、干姜、椿根皮、貝母與醇提后的藥渣合并，加水煎煮提取13次，每次加入812倍藥材的水量，每次煎煮12小時，濾過，將水煮后得到的濾液濃縮得浸膏，加入乙醇溶液至乙醇含量為50%70%，攪勻，靜置，濾取上清液，回收乙醇濃縮至稠膏，真空干燥至恒重備用；將兩次干浸膏合并粉碎成細粉，攪拌均勻即得。4、根據權利要求3所述的治療慢性盆腔炎的中藥的制備方法，其特征在于所述的黃柏、當歸、川芎提取稠膏真空干燥時，真空度0.080.09Mpa，溫度40'C;含有白芍、生地、甘草、干姜、椿根皮、貝母提取成分的稠膏真空干燥條件為真空度0.080.09Mpa，溫度80。C。5、根據權利要求3所述的治療慢性盆腔炎的中藥的制備方法，其特征在于取黃柏、當歸、川芎，加10倍量75%乙醇溶液減壓回流提取3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液，回收乙醇至稠膏，真空度0.080.09Mpa，溫度40。C，減壓干燥至恒重備用；白芍、生地、甘草、干姜、椿根皮、貝母以及醇提后的黃柏、當歸、川芎粗粉渣，加12倍量水煎煮3次，每次1.5小時，濾過，合并濾液濃縮至相對密度1.0，加入乙醇溶液至含乙醇量為60%，攪勻，靜置24-48小時，濾取上清液，回收乙醇至稠膏，真空度0.080.09Mpa,溫度80'C減壓干燥至恒重備用；將兩次干浸膏合并，粉碎至細粉，攪拌均勻制成所需劑型。全文摘要本發(fā)明是一種治療婦科慢性盆腔炎的中藥及其制備方法，原料藥包括黃柏，當歸，川芎，白芍，生地，甘草，干姜，椿根皮，貝母。本發(fā)明針對組方藥物中有效成分的理化性質，采用正交實驗進行優(yōu)化其工藝參數，極大地提高了其中的有效成分的含量，確保了治療慢性盆腔炎的有效性。提供的制備方法具有生產簡單，有效成分濃度高，產品質量穩(wěn)定的特點。由于組方中沒有使用輔料，所以在藥物有效成分中不含沒有藥效的輔料，減少服用的劑量，便于患者服用；不含糖分，便于患者方便服用不需禁忌。動物試驗證明，本發(fā)明中藥具有顯著的抗炎、抗菌、止痛、止癢、改善微循環(huán)、提高機體免疫力等多種藥理作用，且無明顯的毒副作用，可長期服用。對于濕熱蘊結、氣滯血瘀型的慢性盆腔炎以及陰道炎、宮頸炎、附件炎及尿路感染等相關婦科炎癥均有顯著的治療效果。文檔編號A61P15/00GK101279084SQ200810100550公開日2008年10月8日申請日期2008年5月6日優(yōu)先權日2008年5月6日發(fā)明者勤陳申請人:安徽大學