專利名稱：：梅花參中新的抗腫瘤化合物AnanasideB的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，是一種從海洋動物梅花參中分離到的新的抗腫瘤化合物A謹(jǐn)asideB。技術(shù)背景梅花參(7T^/e"o似朋""oyJ.)，又名"鳳梨參"，屬海洋棘皮動物門海參綱刺參科。其體形很大，長一般為700mm，寬約100mm，高約80mm，廣泛分布于我國西沙群島和臺灣南端。其體內(nèi)含有豐富的蛋白質(zhì)、多糖、維生素、皂苷類物質(zhì)，具有補(bǔ)肝腎，益精，養(yǎng)血的功效。有關(guān)其所含的皂苷類成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)及抗腫瘤活性迄今尚未見有過報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是從生長于中國福建海域的梅花參中提取分離一種新的皂苷類化合物，命名為AnanasideB，其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下AnanasideB為無色結(jié)晶性粉末，溶點(diǎn)203-205°C(MeOH-H20)，[a]D-12.3°(c=0.2，MeOH)，Liebermann-Burchard反應(yīng)和Molisch反應(yīng)均呈陽性。電噴霧質(zhì)譜信號附/z1229[M+Na]+和m/z1183[M-Na]—。紅外光譜max-3416，強(qiáng)寬峰(羥基)，1740(羰基)，1637(雙鍵)，1256，1070(us，磺酸基)。^-和13C核磁共振數(shù)據(jù)見表l。表1AnanasideB的的]H和13C核磁共振數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>Xyl:木糖，Qui:奎諾糖，MeGlc:3-氧甲基葡萄糖，J值偶合常數(shù)本發(fā)明還提供了從梅花參提取分離AnanasideB的方法，其步驟如下(1)提取將梅花參洗凈，切碎，用5倍量(重量)95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡提取2次，每次7天，合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫。收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物。(2)分離將上述總皂苷提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲烷甲醇水為8~5:1~4:1混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含AnanasideB的流份，再經(jīng)c18反相柱層析，以甲醇水為9:i~7:3梯度洗脫，薄層層析檢測，得AnanasideB純品。本發(fā)明對AnanasideB進(jìn)行了體外抗腫瘤試驗(yàn)，表明其具有明顯的抑制腫瘤的效果。試驗(yàn)所用細(xì)胞株為國際通用的腫瘤細(xì)胞株，即A-549(肺癌)MCF-7(乳腺癌)IA-9(卵巢癌)CAKI-1(腎癌)U-87-MG(神經(jīng)母細(xì)胞癌)PC-3(前列腺癌)KB(鼻咽癌)KB-VIN(鼻咽癌)SK-MEL-2(黑色素瘤)HCT-8(腸癌)試驗(yàn)方法為國際通用的SRB法根據(jù)細(xì)胞生長速率，將處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞以90pl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時再加藥l(^l/孔。每個濃度設(shè)三復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對照及無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37°C、5%(302條件下培養(yǎng)72小時，然后傾去培養(yǎng)液，用10%冷TCA固定細(xì)胞，4'C放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入150)il/孔的Tris溶液，酶標(biāo)儀520nm波長下測定OD值。試驗(yàn)結(jié)果見表2。表2AnanasideB對腫瘤細(xì)胞的抑制作用腫瘤細(xì)胞株A-549MCF-7IA-9CAKI-1U-87-MGPC-3KBKB-VINSK-MEL-2HCT-8IC50(ug/ml)2.53.80.11.73.03.53.61.10.82.1ic50:表示本發(fā)明化合物的半數(shù)有效抑制濃度上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，AnanasideB對10種不同的腫瘤細(xì)胞株均顯示明顯的抑制作用。本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，為開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要意義。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步描述AnanasideB的分離制備。將梅花參1000克洗凈，切碎，分別用5倍量(重量)的95%、85%、85%乙醇依次浸泡，每次浸泡7天，合并乙醇浸出液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于3倍量水中，過濾，濾液通過DA201-B大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至干，得總皂苷5.6克。將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以二氯甲垸甲醇水為7:3:1的溶劑洗脫，收集含AnanasideB的流份，再經(jīng)ds反相柱層析，以甲醇水為9:1~7:3溶劑進(jìn)行梯度洗脫，薄層層析檢測，得AnanasideB純品0.6克。權(quán)利要求1.一種抑制腫瘤的化合物，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下id="icf0001"file="S2008100612604C00011.gif"wi="89"he="73"top="59"left="57"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2.權(quán)利要求l所述抑制腫瘤的化合物的制備方法，其具體步驟如下(1)提取將原料梅花參洗凈，切碎，用95%乙醇浸泡7天，濾出提取液，再用85%乙醇浸泡2次，每次7天；合并3次提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏；將流浸膏溶于水中，通過大孔樹脂柱，依次用水和50%乙醇洗脫；收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得總皂苷提取物；(2)分離將上述總皂苷提取物應(yīng)用硅膠柱層析，以二氯甲垸甲醇水為8~5:14:l混合溶劑洗脫，薄層層析檢測，收集含權(quán)利要求i所述化合物的流份，再經(jīng)c18反相柱層析，以甲醇水為9:1~7:3梯度洗脫，薄層層析檢測，得權(quán)利要求i所述化合物純品。3.權(quán)利要求l所述抑制腫瘤的化合物用于制備抗腫瘤藥物的用途。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體為一種從梅花參中分離的抗癌化合物AnanasideB，分子式C₅₄H₈₇O₂₆SNa。經(jīng)多種現(xiàn)代光譜分析，特別是應(yīng)用先進(jìn)的二維核磁共振譜和高分辨質(zhì)譜的綜合解析，確定了該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及立體構(gòu)型。體外抗腫瘤試驗(yàn)表明，該化合物對A-549肺癌和IA-9卵巢癌等10種腫瘤細(xì)胞株有明顯的抑制作用。本發(fā)明可為研制新的抗腫瘤藥物提供先導(dǎo)化合物，對開發(fā)利用中國的海洋藥用生物資源具有重要價值。文檔編號A61K31/58GK101245091SQ200810061260公開日2008年8月20日申請日期2008年3月26日優(yōu)先權(quán)日2008年3月26日發(fā)明者軍巫申請人:軍巫