專(zhuān)利名稱(chēng)：：流腦多糖聯(lián)合疫苗及制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：-本發(fā)明涉及流腦多糖聯(lián)合疫苗的制備方法，尤其是提供了流腦多糖聯(lián)合疫苗制劑及制備工藝，用于腦脊髓膜炎重要疫病的免疫預(yù)防，屬于疫苗生產(chǎn)制備
技術(shù)領(lǐng)域：
。技術(shù)背景-流行性腦脊髓膜炎是由腦膜炎球菌(Meningococcus)引起的細(xì)菌性腦膜炎(簡(jiǎn)稱(chēng)流腦)，為急性呼吸道傳染病。主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、嘔吐、皮膚粘膜瘀點(diǎn)、瘀斑及腦膜刺激征。重者可有敗血癥性休克和腦膜腦炎。此病發(fā)病急，病死率高，且在各年齡組中都可發(fā)生，15歲以下兒童發(fā)病占75%以上。為有效控制流行性腦脊髓膜炎的發(fā)生，應(yīng)提前預(yù)防接種疫苗。1984年Ambrosch等制備出A、C、W135和Y群四聯(lián)流腦多糖菌苗，對(duì)成人志愿者免疫后，血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率分別達(dá)到92.5%、92.5%、97.5%和95%，免疫效果是肯定的。WHO與1976年制定了單價(jià)A群和C群流腦多糖菌苗的制檢規(guī)程，又于1980年進(jìn)行了修訂；補(bǔ)訂了W135、Y群流腦多糖菌苗及A和C，A、C、W135及Y群二聯(lián)和四聯(lián)多糖菌苗制檢規(guī)程。適合中國(guó)人群的A、C、W135和Y群四聯(lián)流腦多糖菌苗未見(jiàn)公開(kāi)文獻(xiàn)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種流腦多糖聯(lián)合疫苗，具有一針多種免疫的功能。本發(fā)明的流腦多糖(ACYWn5群)聯(lián)合疫苗，每支成品(復(fù)溶后體積0.5ml)含以下組分及含量A群腦膜炎球菌多糖疫苗50UgC群腦膜炎球菌多糖疫苗50ixgY群腦膜炎球菌多糖疫苗50"gW135群腦膜炎球菌多糖疫苗50yg乳糖2.53.0tng。本發(fā)明聯(lián)合疫苗的制備工藝，包括以下步驟.-1.菌種的的選用選用A、C、Y、W135群腦膜炎奈瑟氏球菌，用于凍干ACYW135群腦膜炎球菌多糖疫苗的制備。2.生產(chǎn)用菌種啟開(kāi)工作種子批，經(jīng)傳代，經(jīng)檢定合格后，接種于改良半綜合培養(yǎng)基或其他適宜培養(yǎng)基，制備數(shù)量適宜的生產(chǎn)用種子。3.生產(chǎn)用培養(yǎng)基采用改良半綜合培養(yǎng)基或經(jīng)批準(zhǔn)的其他適宜培養(yǎng)基。培養(yǎng)基不應(yīng)含有與十六垸基三甲基溴化銨形成沉淀的成分。4.培養(yǎng)采用培養(yǎng)罐液體培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中取樣進(jìn)行純菌檢査，涂片做革蘭氏染色鏡檢，如發(fā)現(xiàn)污染雜菌，應(yīng)廢棄。5.收獲和殺菌于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的后期或靜止期的前期終止培養(yǎng)。取樣進(jìn)行菌液濃度測(cè)定及純菌檢查，合格后在收獲的培養(yǎng)液中加入甲醛溶液殺菌，或采用加熱方法殺菌。以確保殺菌安全又不損傷其多糖抗原為宜。6.去核酸將已殺菌的培養(yǎng)液(單批或多批混合)離心后收集上清液，加入十六垸基三甲基溴化鈸，充分混勻，形成沉淀;離心后的沉淀物加入適量氯化鈣溶液，其最終濃度為lmol/L，使多糖十六垸基三甲基溴化銨解離，加入乙醇至最終濃度為25%,2—8'C靜置1一3小時(shí)或過(guò)夜，離心收集澄清的上清液。7.沉淀多糖于上述上清液中加入冷卻乙醇至最終濃度為80%，充分振搖，離心收集沉淀，用無(wú)水乙醇及丙酮各洗2次以上，將沉淀物即為多糖粗制品，應(yīng)保存在一20'C以下，待純化。8.多糖純化將粗制品溶解于1/10飽和中性醋酸鈉溶液中，使其濃度達(dá)10—20mg/ml;按l:2容量用冷酚(100g結(jié)晶酚溶于40ml的1/10飽和醋酸鈉溶液)提取數(shù)次，離心收集上清液，并用0.lmol/L氯化鈣溶液或其他適宜溶液透析，加入乙醇至終濃度為75%80%;離心收集的沉淀物用無(wú)水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后用滅菌注射用水溶解沉淀物，即為純化多糖原液。提取過(guò)程應(yīng)在15'C以下進(jìn)行。9.內(nèi)毒素去除取A、C、W135、Y群腦膜炎球菌多糖原液，經(jīng)超速離心法除去內(nèi)毒素，在用0.2um濾膜除菌后取樣檢測(cè)，以凝膠法測(cè)定內(nèi)毒素含量。10.半成品配制及分裝將檢定合格的ACYWu5群腦膜炎球菌多糖原液與乳糖按比例混合均勻后，按要求進(jìn)行分裝，分裝量0.5mL/瓶，分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空干燥，放28'C庫(kù)待檢。11.凍干將ACYW,35群腦膜炎球菌多糖疫苗半成品進(jìn)行冷凍干燥，步驟為-35匸預(yù)凍2小時(shí)，制品-40'C冷凍4~5小時(shí)，逐漸升溫真空干燥10~12小時(shí)，3(TC以下恒溫真空干燥5~6小時(shí)，全過(guò)程累計(jì)2024小時(shí)，制備出凍干ACYWw群腦膜炎球菌多糖疫苗成品，根據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國(guó)藥典》相關(guān)要求進(jìn)行全面檢定。12.成品檢定根據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國(guó)藥典》相關(guān)要求進(jìn)行全面檢定。本發(fā)明生產(chǎn)工藝的特點(diǎn)培養(yǎng)基不含有馬血清或其他致敏物質(zhì)；不含有能與cetavlon形成沉淀的成分或有害物質(zhì)；培養(yǎng)基適于腦膜炎球菌繁殖生長(zhǎng)，并適于產(chǎn)生豐厚的莢膜多糖物質(zhì)；常用酸水解酪蛋白做基礎(chǔ)液，加入酵母透析液、硫酸鎂、葡萄糖等制成半綜合培養(yǎng)基。美國(guó)則采用Frantz培養(yǎng)基，pH7.47.6。本發(fā)明與WHO規(guī)程有幾點(diǎn)不同①細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間不通，WH0規(guī)程培養(yǎng)10-12h，國(guó)內(nèi)只培養(yǎng)6-8h;②冊(cè)0規(guī)程對(duì)中間產(chǎn)品進(jìn)行凍干，國(guó)內(nèi)則放低溫(-2(TC)保存；我國(guó)ACYW135群流腦多糖疫苗質(zhì)量控制指標(biāo)與WHO規(guī)程比較見(jiàn)表1:<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>本發(fā)明的積極效果在于運(yùn)用超速離心法除去內(nèi)毒素技術(shù)制備凍干ACYW135腦膜炎球菌多糖疫苗，從而確保ACYWu5群腦膜炎球菌多糖原液的內(nèi)毒素含量較離心前大大降低。使用本發(fā)明疫苗對(duì)患者來(lái)說(shuō)一針就可以預(yù)防流腦的疾病傳染，達(dá)到并超過(guò)以前打四針才能達(dá)到的預(yù)防效果，減少了患者的痛苦，降低了預(yù)防成本。具體實(shí)施例方式下面用實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性?xún)?nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。實(shí)施例1:200502批ACYW135群腦膜炎球菌多糖疫苗的制備1、取A群腦膜炎球菌29201菌株、C群腦膜炎球菌29205菌株、Y群腦膜炎球菌29028菌株、W,35群腦膜炎球菌29037菌株，接種于含10%羊血普通瓊脂培養(yǎng)基，腦膜炎球菌在25。C不生長(zhǎng)。于35—37。C二氧化碳的環(huán)境中培養(yǎng)16—20小時(shí)，長(zhǎng)出光滑、濕潤(rùn)、灰白色的菌落，菌苔易取下，在生理氯化鈉溶液中顯現(xiàn)均勻混懸液。染色鏡檢應(yīng)為革蘭陰性雙球菌、單球菌。2、采用培養(yǎng)罐液體培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中取樣進(jìn)行純菌檢査，涂片做革蘭氏染色鏡檢，如發(fā)現(xiàn)污染雜菌，應(yīng)廢棄。于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的后期或靜止期的前期終止培養(yǎng)。取樣進(jìn)行菌液濃度測(cè)定及純菌檢查，合格后在收獲的培養(yǎng)液中加入甲醛溶液殺菌，或采用加熱方法殺菌。以確保殺菌安全又不損傷其多糖抗原為宜。3、將己殺菌的培養(yǎng)液(單批或多批混合)離心后收集上清液，加入十六烷基三甲基溴化銨，充分混勻，形成沉淀；離心后的沉淀物加入適量氯化鈣溶液，其最終濃度為lmol/L，使多糖十六烷基三甲基溴化銨解離，加入乙醇至最終濃度為25%，2—8'C靜置1—3小時(shí)或過(guò)夜，離心收集澄清的上清液。于上述上清液中加入冷卻乙醇至最終濃度為80%,充分振搖，離心收集沉淀，用無(wú)水乙醇及丙酮各洗2次以上，將沉淀物即為多糖粗制品，應(yīng)保存在一20。C以下，待純化。4、將粗制品溶解于1/10飽和中性醋酸鈉溶液中，使其濃度達(dá)10—20mg/ml;按1:2容量用冷酚(100g結(jié)晶酚溶于40ml的1/10飽和醋酸鈉溶液)提取數(shù)次，離心收集上清液，并用0.lmol/L氯化鈣溶液或其他適宜溶液透析，加入乙醇至終濃度為75%80%;離心收集的沉淀物用無(wú)水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后用滅菌注射用水溶解沉淀物，即為純化多糖原液。提取過(guò)程應(yīng)在15'C以下進(jìn)行。5、內(nèi)毒素去除取A、C、W135、Y群腦膜炎球菌多糖原液，經(jīng)超速離心法除去內(nèi)毒素，在用0.2"m濾膜除菌后取樣檢測(cè)，以凝膠法測(cè)定內(nèi)毒素含量。6、半成品配制及分裝將檢定合格的A、C、Y、Wu5群腦膜炎球菌多糖原液與乳糖按比例混合均勻后，按要求進(jìn)行分裝，分裝量0.5mL/瓶，分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空干燥，放28'C庫(kù)待檢。6、凍干將ACYW。5群腦膜炎球菌多糖疫苗半成品進(jìn)行冷凍干燥，步驟為-35°0預(yù)凍2小時(shí)，制品-4(TC冷凍4~5小時(shí)，逐漸升溫真空干燥10~12小時(shí)，3(TC以下恒溫真空干燥5~6小時(shí)，全過(guò)程累計(jì)2024小時(shí)，制備出凍干ACYW。5群腦膜炎球菌多糖疫苗成品，根據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國(guó)藥典》相關(guān)要求進(jìn)行全面檢定。實(shí)施例2:200503批ACYW135群腦膜炎球菌多糖疫苗的制備1、取A群腦膜炎球菌29201菌株、C群腦膜炎球菌29205菌株、Y群腦膜炎球菌29028菌株、Wu5群腦膜炎球菌29037菌株，接種于含10%羊血普通瓊脂培養(yǎng)基，腦膜炎球菌在25'C不生長(zhǎng)。于35—37'C二氧化碳的環(huán)境中培養(yǎng)16—20小時(shí)，長(zhǎng)出光滑、濕潤(rùn)、灰白色的菌落，菌苔易取下，在生理氯化鈉溶液中顯現(xiàn)均勻混懸液。染色鏡檢應(yīng)為革蘭陰性雙球菌、單球菌。2、采用培養(yǎng)罐液體培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中取樣進(jìn)行純菌檢查，涂片做革蘭氏染色鏡檢，如發(fā)現(xiàn)污染雜菌，應(yīng)廢棄。于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的后期或靜止期的前期終止培養(yǎng)。取樣進(jìn)行菌液濃度測(cè)定及純菌檢查，合格后在收獲的培養(yǎng)液中加入甲醛溶液殺菌，或采用加熱方法殺菌。以確保殺菌安全又不損傷其多糖抗原為宜。3、將已殺菌的培養(yǎng)液(單批或多批混合)離心后收集上清液，加入十六垸基三甲基溴化銨，充分混勻，形成沉淀；離心后的沉淀物加入適量氯化鈣溶液，其最終濃度為lraol/L，使多糖十六烷基三甲基溴化銨解離，加入乙醇至最終濃度為25%，2—8。C靜置l一3小時(shí)或過(guò)夜，離心收集澄清的上清液。于上述上清液中加入冷卻乙醇至最終濃度為80%,充分振搖，離心收集沉淀，用無(wú)水乙醇及丙酮各洗2次以上，將沉淀物即為多糖粗制品，應(yīng)保存在一2(TC以下，待純化。4、將粗制品溶解于1/10飽和中性醋酸鈉溶液中，使其濃度達(dá)10—20mg/ml;按1:2容量用冷酚(100g結(jié)晶酚溶于40ml的1/10飽和醋酸鈉溶液)提取數(shù)次，離心收集上清液，并用0.1mol/L氯化鈣溶液或其他適宜溶液透析，加入乙醇至終濃度為75%80%;離心收集的沉淀物用無(wú)水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后用滅菌注射用水溶解沉淀物，即為純化多糖原液。提取過(guò)程應(yīng)在15。C以下進(jìn)行。5、內(nèi)毒素去除取A、C、W135、Y群腦膜炎球菌多糖原液，經(jīng)超速離心法除去內(nèi)毒素，在用0.2Pm濾膜除菌后取樣檢測(cè)，以凝膠法測(cè)定內(nèi)毒素含量。6、半成品配制及分裝將檢定合格的A、C、Y、Wu5群腦膜炎球菌多糖原液與乳糖按比例混合均勻后，按要求進(jìn)行分裝，分裝量0.5mL/瓶，分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空干燥，放28'C庫(kù)待檢。6、凍千將ACYWu5群腦膜炎球菌多糖疫苗半成品進(jìn)行冷凍干燥，步驟為-35匸預(yù)凍2小時(shí)，制品-4(TC冷凍4~5小時(shí)，逐漸升溫真空干燥1012小時(shí)，30'C以下恒溫真空干燥56小時(shí)，全過(guò)程累計(jì)2024小時(shí)，制備出凍干ACYWn5群腦膜炎球菌多糖疫苗成品，根據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國(guó)藥典》相關(guān)要求進(jìn)行全面檢定。實(shí)施例3:200504批ACYW135群腦膜炎球菌多糖疫苗的制備1、取A群腦膜炎球菌29201菌株、C群腦膜炎球菌29205菌株、Y群腦膜炎球菌29028菌株、Ww群腦膜炎球菌29037菌株，接種于含10%羊血普通瓊脂培養(yǎng)基，腦膜炎球菌在25'C不生長(zhǎng)。于35—37'C二氧化碳的環(huán)境中培養(yǎng)16—20小時(shí)，長(zhǎng)出光滑、濕潤(rùn)、灰白色的菌落，菌苔易取下，在生理氯化鈉溶液中顯現(xiàn)均勻混懸液。染色鏡檢應(yīng)為革蘭陰性雙球菌、單球菌。2、采用培養(yǎng)罐液體培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中取樣進(jìn)行純菌檢査，涂片做革蘭氏染色鏡檢，如發(fā)現(xiàn)污染雜菌，應(yīng)廢棄。于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的后期或靜止期的前期終止培養(yǎng)。取樣進(jìn)行菌液濃度測(cè)定及純菌檢查，合格后在收獲的培養(yǎng)液中加入甲醛溶液殺菌，或采用加熱方法殺菌。以確保殺菌安全又不損傷其多糖抗原為宜。3、將已殺菌的培養(yǎng)液(單批或多批混合)離心后收集上清液，加入十六垸基三甲基溴化銨，充分混勻，形成沉淀；離心后的沉淀物加入適量氯化鈣溶液，其最終濃度為lmol/L，使多糖十六烷基三甲基溴化銨解離，加入乙醇至最終濃度為25%，2—8'C靜置l一3小時(shí)或過(guò)夜，離心收集澄清的上清液。于上述上清液中加入冷卻乙醇至最終濃度為80%，充分振搖，離心收集沉淀，用無(wú)水乙醇及丙酮各洗2次以上，將沉淀物即為多糖粗制品，應(yīng)保存在一2(TC以下，待純化。4、將粗制品溶解于1/10飽和中性醋酸鈉溶液中，使其濃度達(dá)10—20mg/ml;按h2容量用冷酚(100g結(jié)晶酚溶于40ml的1/10飽和醋酸鈉溶液)提取數(shù)次，離心收集上清液，并用O.lM)l/L氯化鈣溶液或其他適宜溶液透析，加入乙醇至終濃度為75%80%;離心收集的沉淀物用無(wú)水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后用滅菌注射用水溶解沉淀物，即為純化多糖原液。提取過(guò)程應(yīng)在15。C以下進(jìn)行。5、內(nèi)毒素去除取A、C、W135、Y群腦膜炎球菌多糖原液，經(jīng)超速離心法除去內(nèi)毒素，在用0.2wm濾膜除菌后取樣檢測(cè)，以凝膠法測(cè)定內(nèi)毒素含量。6、半成品配制及分裝將檢定合格的A、C、Y、Wi35群腦膜炎球菌多糖原液與乳糖按比例混合均勻后，按要求進(jìn)行分裝，分裝量0.5mL/瓶，分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空干燥，放28'C庫(kù)待檢。6、凍干將ACYWn5群腦膜炎球菌多糖疫苗半成品進(jìn)行冷凍干燥，歩驟為-35°(:預(yù)凍2小時(shí)，制品-40'C冷凍45小時(shí)，逐漸升溫真空干燥10~12小時(shí)，3(TC以下恒溫真空干燥5~6小時(shí)，全過(guò)程累計(jì)2024小時(shí)，制備出凍干ACYWns群腦膜炎球菌多糖疫苗成品，根據(jù)現(xiàn)行版《中華人民共和國(guó)藥典》相關(guān)要求進(jìn)行全面檢定。試驗(yàn)例l1、按《中華人民共和國(guó)藥典》2005版三部對(duì)A群腦膜炎球菌多糖疫苗制品的要求，我們對(duì)ACYW135群腦膜炎球菌多糖疫苗進(jìn)行熱原質(zhì)試驗(yàn)，以保證制品的安全性。試驗(yàn)方法根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2005版三部A群腦膜炎球菌多糖疫苗制造及檢定3.4.4項(xiàng)A群腦膜炎球菌多糖疫苗熱原質(zhì)試驗(yàn)方法，將三批的ACYW,35群腦膜炎球菌多糖疫苗每批取樣，注射劑量按家兔體重每1Kg注射0.1!xg多糖。<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>在初試3只家兔中,體溫升高均低0.6'C,并且3只家兔體溫升高總和低T1.4°C。2、按《中華人民共和國(guó)藥典》2005版三部對(duì)A群腦膜炎球菌多糖疫苗制品的要求，我們對(duì)ACYWn5群腦膜炎球菌多糖疫苗進(jìn)行異常毒性試驗(yàn)，以保證制品的安全性。試驗(yàn)方法根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2005版三部A群腦膜炎球菌多糖疫苗制造及檢定3.4.3項(xiàng)要求，將三批ACYWu5群腦膜炎球菌多糖疫苗每批取樣各100支，每批注射體重1822g小白鼠5只、每只腹腔注射(0.5ml/支)，250~350g豚鼠2只，每只腹腔注射(5ml/支)，于注射后第7天進(jìn)行觀察，動(dòng)物應(yīng)健康存活，到期體重比注射前增加。結(jié)果按上述方法三批制品分別注射健康豚鼠二只、小白鼠五只，觀察結(jié)果見(jiàn)表l、表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>權(quán)利要求1.一種流腦多糖聯(lián)合疫苗，每支成品(復(fù)溶后體積0.5ml)含以下組分及含量A群腦膜炎球菌多糖疫苗50μgC群腦膜炎球菌多糖疫苗50μgY群腦膜炎球菌多糖疫苗50μgW135群腦膜炎球菌多糖疫苗50μg乳糖2.5～3.0mg。2.權(quán)利要求1所述的疫苗為凍干劑型。3.權(quán)利要求1所述的疫苗制備方法，包括以下步驟(1)菌種的的選用選用A、C、Y、W135群腦膜炎奈瑟氏球菌；(2)生產(chǎn)用菌種啟開(kāi)工作種子批，經(jīng)傳代，檢定合格后，接種于改良半綜合培養(yǎng)基，制備生產(chǎn)用菌種；(3)生產(chǎn)用培養(yǎng)基采用改良半綜合培養(yǎng)基或經(jīng)批準(zhǔn)的其他適宜培養(yǎng)基；(4)培養(yǎng)采用培養(yǎng)罐液體培養(yǎng)，在培養(yǎng)過(guò)程中取樣進(jìn)行純菌檢查，涂片做革蘭氏染色鏡檢，廢棄污染雜菌；(5)收獲和殺菌于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的后期或靜止期的前期終止培養(yǎng)；取樣進(jìn)行菌液濃度測(cè)定及純菌檢査，合格后在收獲的培養(yǎng)液中加入甲醛溶液殺菌，或采用加熱方法殺菌；(6)去核酸將已殺菌的培養(yǎng)液離心后收集上清液，加入十六垸基三甲基溴化銨，充分混勻，形成沉淀；離心后的沉淀物加入適量氯化鈣溶液，其最終濃度為lmol/L，使多糖十六烷基三甲基溴化銨解離，加入乙醇至最終濃度為25%，2—8。C靜置1一3小時(shí)或過(guò)夜，離心收集澄清的上清液；(7)沉淀多糖于上述上清液中加入冷卻乙醇至最終濃度為80%,充分振搖，離心收集沉淀，用無(wú)水乙醇及丙酮各洗2次以上，將沉淀物即為多糖粗制品，應(yīng)保存在一2CTC以下，待純化；(8)多糖純化將粗制品溶解于1/10飽和中性醋酸鈉溶液中，使其濃度達(dá)io—20mg/ml;按1:2容量用冷酚(100g結(jié)晶酚溶于40ml的1/10飽和醋酸鈉溶液)提取數(shù)次，離心收集上清液，并用0.lmol/L氯化鈣溶液或其他適宜溶液透析，加入乙醇至終濃度為75%80%;離心收集的沉淀物用無(wú)水乙醇及丙酮各洗2次以上，干燥后用滅菌注射用水溶解沉淀物，即為純化多糖原液；(9)內(nèi)毒素去除取A、C、W135、Y群腦膜炎球菌多糖原液，經(jīng)超速離心法除去內(nèi)毒素，在用0.21im濾膜除菌后取樣檢測(cè)，以凝膠法測(cè)定內(nèi)毒素含量(10)半成品配制及分裝將檢定合格的A、C、Y、Wn5群腦膜炎球菌多糖原液與乳糖按比例混合均勻后，按要求進(jìn)行分裝，分裝量0.5mL/瓶，分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空千燥，放28"C庫(kù)待檢；(11)凍干將ACYWn5群腦膜炎球菌多糖疫苗半成品進(jìn)行冷凍干燥，-35"預(yù)凍2小時(shí)，制品-40。C冷凍45小時(shí)，逐漸升溫真空干燥10~12小時(shí)，3(TC以下恒溫真空干燥56小時(shí)，全過(guò)程累計(jì)2024小時(shí)，制備出凍干疫苗成品。全文摘要本發(fā)明提供一種流腦多糖聯(lián)合疫苗，運(yùn)用超速離心法除去內(nèi)毒素技術(shù)制備凍干ACYW135腦膜炎球菌多糖疫苗，從而確保ACYW₁₃₅群腦膜炎球菌多糖原液的內(nèi)毒素含量較離心前大大降低。使用本發(fā)明疫苗對(duì)患者來(lái)說(shuō)一針就可以預(yù)防流腦的疾病傳染，達(dá)到并超過(guò)以前打四針才能達(dá)到的預(yù)防效果，減少了患者的痛苦，降低了預(yù)防成本。文檔編號(hào)A61P31/00GK101428144SQ20081005162公開(kāi)日2009年5月13日申請(qǐng)日期2008年12月19日優(yōu)先權(quán)日2008年12月19日發(fā)明者孫惠軍,爽巨,沖李,楊宗輝申請(qǐng)人:長(zhǎng)春長(zhǎng)生生物科技股份有限公司