專利名稱：：用于微生物貯藏和遞送的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及細(xì)菌學(xué)和益生菌治療的領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及新的組合物(例如益生菌微生物制劑)和使用其的方法(例如用于包被表面諸如導(dǎo)尿管)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明包括冷凍干燥的組合物，其含有可被重新構(gòu)成以形成含有活的產(chǎn)菌落微生物的凝膠例如醫(yī)用潤(rùn)滑劑的微生物。
背景技術(shù)：
：菌尿和膿尿同樣出現(xiàn)在具有留置導(dǎo)尿管的患者中。抗微生物治療可暫時(shí)消除細(xì)菌，但是菌尿迅速?gòu)?fù)發(fā)并且感染的細(xì)菌逐漸變得對(duì)抗生素有抗性。已知沒有治療方法可消除慢性的、臨床癥狀不顯的感染或預(yù)防間發(fā)的，臨床上重要的感染。意圖預(yù)防或延遲導(dǎo)尿管相關(guān)的尿路感染(CAUTI)的一般指導(dǎo)方針包括下列避免不必要的導(dǎo)管插入術(shù)；由訓(xùn)練有素的專業(yè)人員插入和護(hù)理導(dǎo)尿管；當(dāng)不再需要時(shí)立即移除導(dǎo)尿管；保持無菌的封閉的排尿；保持良好的排尿；系統(tǒng)的最小操作；使用避孕套或恥骨弓上的導(dǎo)尿管代替尿路導(dǎo)尿管；以及將導(dǎo)尿的患者彼此隔離并與醫(yī)院中的其他患者隔離(NIDRR，〃SCINurs10(2):49-61Ja皿ary27-29,1992.;Maki，D.G.和P.A.Tambyah，EmerglnfectDis7(2):342-7(2001))。已經(jīng)檢測(cè)的大多數(shù)的措施并沒有在隨機(jī)的臨床試驗(yàn)中顯示出效力，而且一些不適用于患有神經(jīng)原性膀胱的患者。已經(jīng)檢測(cè)了用于預(yù)防CAUTI的技術(shù)，其包括在插入導(dǎo)尿管時(shí)使用抗感染的潤(rùn)滑劑，使用密封的導(dǎo)尿管-收集管連接或抗逆流的閥，用抗感染的溶液通過三管腔導(dǎo)尿管連續(xù)沖洗導(dǎo)尿的膀胱以及定期將抗感染溶液灌輸?shù)绞占小Ｈ欢?，這些技術(shù)尚未被證實(shí)在隨機(jī)的臨床試驗(yàn)中有效(Maki和Tambyah，如上)。使用抗感染導(dǎo)尿管材料以減少CAUTI的發(fā)生率正在研究中。盡管研究得少，但用抗微生物劑灌注導(dǎo)尿管可能有些好處(Maki和Tambyah，如上)。氧化銀包被的導(dǎo)尿管在大的隨機(jī)試驗(yàn)中沒有顯示出效用，銀合金水凝膠導(dǎo)尿管的減少感染的能力的實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生相矛盾的試驗(yàn)結(jié)果(Wong，E.和T.Hooton，〃Guidelineforpreventionofcatheter-associatedurinarytractinfections.(預(yù)防導(dǎo)尿管相關(guān)的尿路感染的指導(dǎo)方針)〃CenterforDiseaseControlandPrevention(1981);Rupp，M.E.，T.Fitzgerald,等人Am.TInfectControl32(8):445-50(2004))。由于治療和未治療的導(dǎo)尿的患者在治療結(jié)束后幾星期具有相似的感染患病率并且具有相同的發(fā)展UTI的癥狀發(fā)作的可能性，因此導(dǎo)尿的患者中無癥狀的尿路感染(UTI)的抗微生物(例如抗生素和/或殺菌)治療沒有顯示出具有好處(Nicolle，L.E.，DrugsAging22(8):627-39(2005))。此外，已經(jīng)將無癥狀的CAUTI的抗微生物治療與藥物抗性生物的出現(xiàn)相關(guān)聯(lián)，使得有癥狀的感染發(fā)生時(shí)操作復(fù)雜化。考慮到在具有長(zhǎng)期膀胱導(dǎo)管插入的患者中根除菌尿的困難，依賴導(dǎo)尿管的人中的慢性菌尿和復(fù)發(fā)的UTI的問題不可能通過使用抗微生物劑來解決。研究表明用大腸桿菌的一些非病原菌株對(duì)膀胱預(yù)建群是預(yù)防或減少經(jīng)由多種多樣的尿路病原體的尿路導(dǎo)管建群的體外發(fā)生率的安全并且有效的方法。大腸桿菌(Escherichiacoli)83972是與無癥狀的菌尿有關(guān)的臨床分離菌(Andersson等人，1991，Infect.Immun.59:2915-2921)，并且菌株已經(jīng)被用于成功地對(duì)人類志愿者的膀胱建群。已經(jīng)顯示大腸桿菌HU2117，具有缺失的p即G83972基因的83972的變體，成功地在人類受治療者的膀胱建群(Hull,等人，2002，InfectionandImmunity,70(11):6481-6481)。然而，現(xiàn)存的尿路的預(yù)接種的方法是麻煩的。在一些實(shí)例中，預(yù)建群是通過將細(xì)菌的液體制劑直接引入膀胱中來完成的。使用這一方法，首先用適當(dāng)?shù)目股刂委熁颊咭允鼓蛞簾o菌。在一個(gè)無抗生素的間隔后，將患者插入導(dǎo)尿管并且清空膀胱。將三十毫升的大腸桿菌83972(105菌落形成單位(CFU)/mL)被逐步灌輸在膀胱中并且移除導(dǎo)尿管。將所述操作每天重復(fù)一次重復(fù)3天。根據(jù)單獨(dú)的研究方案，收集隨后的尿液樣品以評(píng)價(jià)宿主響應(yīng)參數(shù)并證明建群操作的成功或失敗。通過將導(dǎo)尿管本身在含有非病原的微生物的肉湯中孵育來研究其他組的預(yù)建群。例如，在已公開的方案中，將導(dǎo)管浸入微生物懸浮液中48小時(shí)以在導(dǎo)尿管上形成生物膜。所得的生物膜通常含有每厘米導(dǎo)尿管5乂104至1乂105菌落形成單位(cfu)的大腸桿菌83972。之后在插入之前使用常規(guī)的導(dǎo)尿管潤(rùn)滑(例如SteriLub潤(rùn)滑劑、SurgiLube潤(rùn)滑劑、KYJelly)來插入導(dǎo)尿管。據(jù)信導(dǎo)管上的生物膜作為可幫助使膀胱保持建群的庫(kù)。將益生菌遞送至膀胱的這種方法需要醫(yī)生和醫(yī)院開發(fā)用于微生物的生長(zhǎng)和施用的以及用于導(dǎo)尿管的處理和使用的新的操作。保留有對(duì)用于向受治療者遞送益生菌微生物的改進(jìn)的方法和制劑的需求。還保留有對(duì)于生產(chǎn)和使用這種制劑的改進(jìn)的方法的需求。發(fā)明概述本發(fā)明涉及細(xì)菌學(xué)和益生菌治療的領(lǐng)域。特別地，本發(fā)明涉及新的化合物(例如益生菌微生物制劑)和使用其的方法(例如用于包被表面諸如導(dǎo)尿管)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供組合物，其以冷凍干燥的形式含有益生菌微生物、藥學(xué)上可接受的膠凝劑和藥學(xué)上可接受的第一保護(hù)劑。在某些實(shí)施方案中，組合物進(jìn)一步含有藥學(xué)上可接受的第二保護(hù)劑。在某些實(shí)施方案中，單一劑同時(shí)作為膠凝劑和保護(hù)劑。本發(fā)明不限于特定的益生菌微生物。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，益生菌微生物含有大腸桿菌的菌株。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，大腸桿菌的菌株是大腸桿菌83972，而在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，菌株是大腸桿菌HU2117。本發(fā)明涵蓋膠凝劑但不限于任何特定的膠凝劑。在某些實(shí)施方案中，膠凝劑是藥學(xué)上可接受的膠凝劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，膠凝劑在溶解或懸浮于含水液體中時(shí)形成凝膠。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，膠凝劑選自由羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基瓜爾膠、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、卡波姆、藻酸鹽、明膠和泊洛沙姆組成的組。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，膠凝劑是羥乙基纖維素。本發(fā)明涵蓋第一保護(hù)劑但是不限于任何特定的第一保護(hù)劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一保護(hù)劑是藥學(xué)上可接受的保護(hù)劑。在某些實(shí)施方案中，第一保護(hù)劑選自由脫脂乳固體、海藻糖、甘油、甜菜堿、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、聚乙二醇、山梨糖醇、甘露醇、聚乙烯基丙烯、谷氨酸鉀、谷氨酸單鈉、吐溫20洗滌劑、吐溫80洗滌劑和氨基酸鹽酸鹽組成的組。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一保護(hù)劑是蔗糖。本發(fā)明涵蓋含有第二保護(hù)劑的組合物但不限于任何特定的第二保護(hù)劑。在優(yōu)選的5實(shí)施方案中，第二保護(hù)劑是藥學(xué)上可接受的保護(hù)劑。在含有第二保護(hù)劑的某些實(shí)施方案中，第二保護(hù)劑與第一保護(hù)劑不同，并且選自由脫脂乳固體、海藻糖、甘油、甜菜堿、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、聚乙二醇、山梨糖醇、甘露醇、聚乙烯基丙烯、谷氨酸鉀、谷氨酸單鈉、吐溫20洗滌劑、吐溫80洗滌劑和氨基酸鹽酸鹽組成的組。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二保護(hù)劑是甘油。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過如下方法來生產(chǎn)的組合物，所述方法包括提供在含水溶液中的包括益生菌微生物、藥學(xué)上可接受的膠凝劑和藥學(xué)上可接受的第一保護(hù)劑的混合物，冷凍干燥混合物以產(chǎn)生干燥的制劑，之后將干燥的制劑暴露于液體例如含水液體以形成含有有效量的益生菌微生物的凝膠。在某些實(shí)施方案中，混合物進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受的第二保護(hù)劑。在一些實(shí)施方案中，益生菌微生物是大腸桿菌的菌株。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，大腸桿菌的菌株包括大腸桿菌83972和/或大腸桿菌HU2117。在本發(fā)明的組合物的某些實(shí)施方案中，膠凝劑選自由羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基瓜爾膠、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、卡波姆、藻酸鹽、明膠和泊洛沙姆組成的組。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，膠凝劑是羥乙基纖維素。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法形成的組合物中所使用的第一保護(hù)劑選自由脫脂乳固體、海藻糖、甘油、甜菜堿、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、聚乙二醇、山梨糖醇、甘露醇、聚乙烯基丙烯、谷氨酸鉀、谷氨酸單鈉、吐溫20洗滌劑、吐溫80洗滌劑和氨基酸鹽酸鹽組成的組。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一保護(hù)劑是蔗糖。在含有第二保護(hù)劑的某些實(shí)施方案中，第二保護(hù)劑與第一保護(hù)劑不同，并且選自由脫脂乳固體、海藻糖、甘油、甜菜堿、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、聚乙二醇、山梨糖醇、甘露醇、聚乙烯基丙烯、谷氨酸鉀、谷氨酸單鈉、吐溫20洗滌劑、和氨基酸鹽酸鹽組成的組。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二保護(hù)劑是甘油。在某些實(shí)施方案中，益生菌微生物的有效量是在每毫升凝膠約103和10"cfu之間，而在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，益生菌微生物的有效量是在每毫升凝膠約105和l(Tcfu之間。在某些尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，益生菌微生物的有效量是在每毫升凝膠約107和109cfu之間，并且在一些尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，微生物的有效量是每毫升凝膠約108Efu。在某些實(shí)施方案中，膠凝劑在凝膠中以約O.1%和10Xw/v之間的濃度存在，而在一些實(shí)施方案中，膠凝劑在凝膠中以約0.5%和5%w/v之間的濃度存在。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，膠凝劑在凝膠中以約1%和3%w/v之間的濃度存在，而在尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，膠凝劑在凝膠中以約1%和2%w/v之間的濃度存在。在某些實(shí)施方案中，在冷凍干燥之前在含有益生菌微生物、膠凝劑和第一保護(hù)劑的混合物中第一保護(hù)劑以約0.1%和40%w/v之間的濃度存在，而在一些實(shí)施方案中，第一保護(hù)劑在混合物中以約0.2%和20%w/v之間的濃度存在。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一保護(hù)劑以約O.5%和15%w/v之間的濃度存在，而在某些尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一保護(hù)劑在混合物中以約1%和10%w/v之間的濃度存在。在含有第二保護(hù)劑的某些實(shí)施方案中，在冷凍干燥之前在含有益生菌微生物、膠凝劑、第一保護(hù)劑和第二保護(hù)劑的混合物中第二保護(hù)劑以約0.1%和40%w/v之間的濃度存在，而在某些實(shí)施方案中，第二保護(hù)劑在混合物中以約0.2%和20%w/v之間的濃度存在。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二保護(hù)劑在混合物中以約0.5%和15%w/v之間的濃度存在，而在一些尤其優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二保護(hù)劑在混合物中以約1%和10%w/v之間的濃度存在。在一些實(shí)施方案中，益生菌微生物是大腸桿菌HU2117或大腸桿菌83972，膠凝劑是羥乙基纖維素，第一保護(hù)劑是蔗糖并且其中第二保護(hù)劑是甘油。在某些實(shí)施方案中，益生菌微生物以每毫升凝膠約107和109(^1!之間的濃度存在，而在某些實(shí)施方案中，羥乙基纖維素在凝膠中為約2%的濃度。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，冷凍干燥前混合物中的蔗糖為約8.3%w/v的濃度，而在某些實(shí)施方案中，冷凍干燥前混合物中的甘油為約1.3%的濃度。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了向受治療者施用益生菌微生物的方法，其包括提供含有益生菌微生物、藥學(xué)上可接受的膠凝劑和藥學(xué)上可接受的保護(hù)劑的冷凍干燥制劑，將冷凍干燥的制劑暴露于含水液體以形成含有有效量的益生菌微生物的凝膠并且使受治療者與凝膠接觸。在某些實(shí)施方案中，使受治療者與凝膠接觸包括將醫(yī)療裝置與凝膠接觸以產(chǎn)生處理的裝置并且使患者與處理的裝置接觸。本發(fā)明不限于將裝置與凝膠接觸的任何特定的方法，例如，在某些實(shí)施方案中，醫(yī)療裝置包括表面而處理的裝置至少部分地被凝膠包被。當(dāng)未將本發(fā)明限制于用任何特定的醫(yī)療裝置使用時(shí)，在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，醫(yī)療裝置包括尿路導(dǎo)尿管。在某些實(shí)施方案中，尿路導(dǎo)尿管包括抗微生物包被并且凝膠中有效量的益生菌微生物在抗微生物包被存在的條件下保持為活的。當(dāng)未將本發(fā)明限于任何特定的制劑時(shí)，在某些實(shí)施方案中，益生菌微生物包括大腸桿菌HU2117和/或大腸桿菌83972，膠凝劑包括羥乙基纖維素，第一保護(hù)劑包括蔗糖而第二保護(hù)劑包括甘油。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，凝膠中的益生菌微生物是大腸桿菌HU2117或大腸桿菌83972，凝膠中的膠凝劑是羥乙基纖維素，凝膠中的第一保護(hù)劑是蔗糖而凝膠中的第二保護(hù)劑是甘油。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，益生菌微生物在凝膠中以每毫升凝膠約107至109cuf的濃度存在，而在某些實(shí)施方案中，羥乙基纖維素在凝膠中以約2%w/v的濃度存在。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，凍干前，蔗糖在含有益生菌微生物、膠凝劑和第一保護(hù)劑的混合物中以約8.3%w/v的濃度存在，而在某些實(shí)施方案中，冷凍干燥前，甘油以約1.3%的濃度存在。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了藥盒，例如，用于治療受治療者，其包括以冷凍干燥的形式含有益生菌微生物、藥學(xué)上可接受的膠凝劑和藥學(xué)上可接受的第一保護(hù)劑的組合物。在藥盒的某些實(shí)施方案中，組合物進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受的第二保護(hù)劑。在某些實(shí)施方案中，藥盒進(jìn)一步包括無菌含水液體的容器。當(dāng)未將本發(fā)明限制于任何特定的含水液體時(shí)，在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，無菌含水液體選自由水和緩沖溶液組成的組。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥盒進(jìn)一步包括導(dǎo)尿管。當(dāng)未將本發(fā)明的藥盒限制于任何特定的微生物時(shí)，在某些實(shí)施方案中，益生菌微生物是大腸桿菌菌株。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，大腸桿菌的菌株包括大腸桿菌83972和/或大腸桿菌HU2117。在這一概述和在下文通過引用并入的本發(fā)明的詳述中描述本發(fā)明的實(shí)施方案。盡管已經(jīng)結(jié)合特定的實(shí)施方案來描述本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)理解的是如所要求保護(hù)的本發(fā)明不應(yīng)當(dāng)被過度地限制于這些特定的實(shí)施方案。圖1顯示再懸浮后時(shí)間對(duì)依照實(shí)施例3中描述的方案制備的微生物的影響的圖示。定義為了便于理解本發(fā)明，許多術(shù)語和短語定義如下如本文所使用的，術(shù)語"受治療者"是指有待通過本發(fā)明的方法或組合物治療的個(gè)體(例如人類、動(dòng)物或其他生物)。受治療者包括但不限于哺乳動(dòng)物(例如鼠科、類人猿、馬科、牛科、豬、犬科、貓科和類似動(dòng)物)以及最優(yōu)選地包括人類。在本文的上下中，術(shù)語"受治療者"通常是指將接受或已經(jīng)接受對(duì)于由病原性細(xì)菌的存在所表征的病況的治療(例如益生菌微生物和優(yōu)選一種或多種其他劑的施用)的個(gè)體或預(yù)期可能暴露于病原性細(xì)菌的個(gè)體。如本文所使用的，術(shù)語"診斷的"是指通過其體征和癥狀(例如對(duì)傳統(tǒng)治療的抗性)或遺傳分析、病理分析、組織學(xué)分析和類似分析的疾病(例如由病原性細(xì)菌的存在所導(dǎo)致的)的識(shí)別。如本文所用的，術(shù)語"體外"是指人工環(huán)境和在人工環(huán)境中發(fā)生的過程或反應(yīng)。體外環(huán)境包括但不限于試管和細(xì)胞培養(yǎng)物。術(shù)語"體內(nèi)"是指天然環(huán)境(例如動(dòng)物或細(xì)胞)和在天然環(huán)境中發(fā)生的過程或反應(yīng)。如本文所用的，術(shù)語"毒性"是指微生物的病原性的程度，例如如由所產(chǎn)生的疾病的嚴(yán)重度或其傷害受治療者的組織的能力所指示的。其通常通過半致死劑量(LD5。)或半感染劑量(LD5。)來實(shí)驗(yàn)性地測(cè)量。所述術(shù)語還被用來指任何感染劑產(chǎn)生病原作用的能力。如本文所用的，術(shù)語"有效量"是指足以產(chǎn)生有利或所期望的結(jié)果的組合物(益生菌微生物)的量。有效量可以以一次或多次施用、使用或劑量被施用，并不意圖被限制于特定的制劑或施用途經(jīng)。如本文所用的，術(shù)語"施用"是指向生理系統(tǒng)(例如受治療者或體內(nèi)、體外或離體細(xì)胞、組織和器官)給予藥物、前藥或其他劑或治療性處理(例如本發(fā)明的組合物)的行為。對(duì)人體的施用的示例性途徑可以是通過眼睛(眼的)、嘴(口服的)、皮膚(經(jīng)皮的)、鼻子(鼻的)、肺(吸入的)、口腔黏膜(經(jīng)頰的)、耳、經(jīng)由注射(例如靜脈內(nèi)地、皮下地、腫瘤內(nèi)地、腹膜內(nèi)地等)和類似途徑。如本文所用的，術(shù)語"處理表面"是指將表面暴露于本發(fā)明的一種或多種組合物的行為。處理表面的方法包括但不限于噴霧、薄霧、浸沒和涂抹。如本文所用的，術(shù)語"共施用"是指向受治療者施用至少兩種劑(例如兩種不同的供體菌，其每一種含有不同的質(zhì)粒)或治療。在某些實(shí)施方案中，兩種或多種劑或治療的共施用同時(shí)發(fā)生。在其他實(shí)施方案中，第一種劑/治療在第二種劑/治療之前被施用。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員理解所使用的不同劑或治療的施用的制劑和/或途徑可變化。用于共施用的適當(dāng)?shù)膭┝靠捎杀绢I(lǐng)域的技術(shù)人員容易地確定。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)劑或治療被共施用時(shí)，以低于適于它們的單獨(dú)施用的劑量施用各個(gè)劑或治療。因此，在劑或治療的共施用降低潛在的有害的(例如有毒的)劑的所需劑量的實(shí)施方案中，共施用是尤其期望的。如本文所用的，術(shù)語"有毒的"是指與施用有毒物之前相同的細(xì)胞或組織相比對(duì)受治療者、細(xì)胞或組織的任何不利或有害的影響。如本文所用的，術(shù)語"藥物組合物"是指活性劑(例如益生菌微生物)與惰性的或活性的載體的組合，其使得組合物特別適于體外、體內(nèi)或離體的診斷或治療使用。如本文所用的，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的"或"藥理學(xué)上可接受的"是指當(dāng)對(duì)受治療者施用時(shí)，基本沒有產(chǎn)生不利反應(yīng)例如有毒、變應(yīng)性或免疫反應(yīng)的組合物。如本文所用的，術(shù)語"局部地"是指將本發(fā)明的組合物應(yīng)用于皮膚的表面和粘膜細(xì)胞和組織(例如肺泡、頰的、舌的、咀嚼器官的或鼻粘膜和內(nèi)襯中空器官或體腔的其他組織和細(xì)胞)。如本文所用的，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"是指標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)載體中的任一個(gè)，其包括但不限于磷酸鹽緩沖的鹽溶液、水、乳液(例如諸如油/水或水/油乳液)以及不同類型的加濕劑、任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包被劑、十二烷基硫酸鈉、等滲和吸收延遲劑、崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或羥基乙酸淀粉鈉)以及類似物。組合物還可包括穩(wěn)定劑和防腐劑。載體、穩(wěn)定劑和佐劑的舉例(參見例如Martin，Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明頓藥物科學(xué))，第15版，MackPub1.Co.，Easton，Pa.(1975)，其通過引用并入本文)。而且，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可被配制用于園藝和農(nóng)業(yè)使用。這樣的制劑包括浸漬、噴霧、拌種、莖部注射、噴霧和薄霧。如本文所用的，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"是指在目標(biāo)受治療者(例如哺乳動(dòng)物受治療者和/或體內(nèi)或離體細(xì)胞、組織或器官)中被生理上耐受的本發(fā)明的化合物的任何鹽(例如通過與酸或堿反應(yīng)獲得的)。本發(fā)明的化合物的"鹽"可衍生自無機(jī)或有機(jī)的酸和堿。酸的實(shí)例包括但不限于鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富馬酸、馬來酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水楊酸、琥珀酸、對(duì)甲苯磺酸、酒石酸、醋酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、磺酸、2-萘磺酸、苯磺酸以及類似物。其他的酸，例如草酸，盡管其本身不是藥學(xué)上可接受的，但可被用于在獲得本發(fā)明的化合物和它們的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽中作為中間體的鹽的制備中。堿的實(shí)例包括但不限于堿金屬(例如鈉)氫氧化物、堿土金屬(例如鎂)氫氧化物、氨和式麗4+的化合物(其中W是(V4烷基)以及類似物。鹽的實(shí)例包括但不限于醋酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、2_羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2_萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、撲酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、苯丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽以及類似物。鹽的其他實(shí)例包括與適合的陽離子例如Na+、NH4+和NW4+(其中W是C卜4烷基基團(tuán))及類似物化合的本發(fā)明的化合物的陰離子。對(duì)于治療性使用來說，本發(fā)明的化合物的鹽涵蓋為藥學(xué)上可接受的。但是，非藥學(xué)上可接受的酸和堿的鹽也可被使用，例如在藥學(xué)上可接受的化合物的制備或純化中。對(duì)于治療性使用來說，本發(fā)明的化合物的鹽涵蓋為藥學(xué)上可接受的。但是，非藥學(xué)上可接受的酸和堿的鹽也可被使用，例如在藥學(xué)上可接受的化合物的制備或純化中。如本文所用的，術(shù)語"醫(yī)療裝置"包括在例如醫(yī)學(xué)治療(例如用于疾病或損傷)的過程中在受治療者或患者的身體上、身體中或通過受治療者或患者的身體使用的任何材料和裝置。醫(yī)療裝置包括但不限于這些產(chǎn)品，例如醫(yī)療植入物、傷口護(hù)理裝置、藥物遞送裝置9以及體腔和人身的保護(hù)裝置。醫(yī)療植入物包括但不限于尿路導(dǎo)尿管、血管內(nèi)導(dǎo)管、透析分流管、傷口引流管、皮膚縫合線、血管移植物、可植入的網(wǎng)、眼內(nèi)裝置、心臟瓣膜以及類似物。傷口護(hù)理裝置包括但不限于，一般傷口敷料、生物移植材料、封合帶和敷料以及手術(shù)開刀布。藥物遞送裝置包括但不限于針、藥物遞送皮膚貼布、藥物送遞粘膜貼布和醫(yī)療海綿。體腔和人身保護(hù)裝置包括但不限于棉塞、海綿、手術(shù)和檢查用手套和牙刷。節(jié)育裝置包括但不限于子宮內(nèi)裝置(IUD)、子宮帽和避孕套。如本文所用的，術(shù)語"治療劑"是指降低病原性微生物所接觸的受治療者中的傳染性、發(fā)病率或死亡率的發(fā)作或預(yù)防病原性微生物所接觸的宿主中的傳染性、發(fā)病率或死亡率的發(fā)作的組合物。如本文所用的，治療劑包括在例如病原體不存在的情況下，鑒于可能將來暴露于病原體所預(yù)防性使用的劑。這種劑可另外包括藥學(xué)上可接受的化合物(例如，佐劑、賦形劑、穩(wěn)定劑、稀釋劑和類似物)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的治療劑以局部組合物、可注射組合物、可吸收組合物以及類似物的形式施用。當(dāng)途徑為局部的時(shí)，形式可以是例如溶液、乳霜、油膏、軟膏或噴霧。如本文所用的，術(shù)語"病原體"是指在宿主中導(dǎo)致疾病狀態(tài)(例如感染、癌等)的生物劑。"病原體"包括但不限于病毒、細(xì)菌、古生菌、真菌、原生動(dòng)物、支原體、朊病毒和寄生生物。如本文所用的，可互換使用的術(shù)語"益生菌"和"益生菌微生物"是指被以足夠量施用的賦予宿主健康益處的活的微生物。參見例如PotentialUsesofProbioticsinClinicalPractice(益生菌在臨床實(shí)踐中可能的使用)，G.Reid等人，ClinicalMicrobiologyReviews,2003年10月，第658-672頁(yè)，其通過引用并入本文。益生菌不限于通過任何特定途徑施用的微生物。向人體施用的示例性途徑可以為通過眼睛(眼的)、嘴(口服的)、皮膚(經(jīng)皮的)、鼻子(鼻的)、肺(吸入的)、口腔黏膜(經(jīng)頰的)、陰道、直腸、尿道、耳、經(jīng)由注射(例如靜脈內(nèi)地、皮下地、腫瘤內(nèi)地、腹膜內(nèi)地等)和類似途徑。如本文所用的，術(shù)語"益生菌"包括但不限于天然存在的生物和其衍生物，例如大腸桿菌83972和大腸桿菌HU2117。益生菌生物還可例如通過選擇性培養(yǎng)或重組工程被修飾以具有改變的特性。例如，被設(shè)計(jì)為含有改變受體細(xì)胞(例如殺死或減少病原體受體細(xì)胞的病原性)的軛合地可遺傳的質(zhì)粒的益生菌微生物也可用于本發(fā)明。參見例如美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)11/137，950和11/137，948，其每一個(gè)通過引用全文并入本文。如本文所用的，術(shù)語"微生物(microbe)"是指微生物(microorganism)并且意圖包括單獨(dú)的生物或含有任何數(shù)目的生物的制劑兩者。術(shù)語"細(xì)菌(bacteria)"禾P"細(xì)菌(bacterium)"是指所有的原核生物，包括原核生物界中所有門中的那些。意圖術(shù)語包含所有被認(rèn)為是細(xì)菌的微生物，包括支原體屬(Mycoplasma)、衣原體屬(Chlamydia)、放線菌類(Actinomyces)、鏈霉菌屬(Str印tomyces)和立克次氏體(Rickettsia)。所有形式的細(xì)菌都包括在這一定義內(nèi)，包括球菌、桿菌、螺旋菌、原生質(zhì)球狀體、原生質(zhì)體等。還包括在這一術(shù)語內(nèi)的是革蘭氏陰性或革蘭氏陽性的原核生物。"革蘭氏陰性"和"革蘭氏陽性"是指使用革蘭氏染色方法的染色樣式，其是本領(lǐng)域內(nèi)熟知的(參見例如Finegold禾口Martin,DiagnosticMicrobiology(診斷微生物學(xué))，第六版，CVMosbySt丄ouis，第13-15頁(yè)(1982))。"革蘭氏陽性細(xì)菌"是在革蘭氏染色中保留所使用的初次染料導(dǎo)致所染色的細(xì)胞在顯微鏡下通常呈現(xiàn)黑藍(lán)至紫色的10細(xì)菌。"革蘭氏陰性細(xì)菌"是在革蘭氏染色中未保留所使用的初次染料但是被復(fù)染劑染色的細(xì)菌。因此，革蘭氏陰性細(xì)菌通常呈現(xiàn)紅色。如本文所用的，術(shù)語"微生物"是指微生物的任何種類或類型，包括但不限于細(xì)菌、古生菌、真菌、原生動(dòng)物、支原體和寄生生物。本發(fā)明涵蓋其中所包含的許多微生物對(duì)受治療者來說也是病原的。如本文所用的，術(shù)語"真菌"被用來指真核生物例如霉菌和酵母，包括雙態(tài)性真菌。術(shù)語"細(xì)菌(bacteria)"和"細(xì)菌(bacterium)"是指所有的原核生物，包括原核生物界中所有門中的那些。意圖屬于包含所有被認(rèn)為是細(xì)菌的微生物，包括支原體屬、衣原體屬、放線菌類、鏈霉菌屬和立克次氏體。所有形式的細(xì)菌都包括在這一定義內(nèi)，包括球菌、桿菌、螺旋菌、原生質(zhì)球狀體、原生質(zhì)體等。還包括在這一術(shù)語內(nèi)的是革蘭氏陰性或革蘭氏陽性的原核生物。"革蘭氏陰性"和"革蘭氏陽性"是指用革蘭氏染色方法的染色樣式，其是本領(lǐng)域內(nèi)熟知的(參見例如Finegold禾口Martin，DiagnosticMicrobiology(診斷微生物學(xué))，第六版，CVMosbySt丄ouis，第13-15頁(yè)(1982))。"革蘭氏陽性細(xì)菌"是在革蘭氏染色中保留所使用的初次染料導(dǎo)致所染色的細(xì)胞通常在顯微鏡下呈現(xiàn)黑藍(lán)至紫色的細(xì)菌。"革蘭氏陰性細(xì)菌"是在革蘭氏染色中未保留所使用的初次染料但是被復(fù)染劑染色的細(xì)菌。因此，革蘭氏陰性細(xì)菌通常呈現(xiàn)紅色。術(shù)語"非病原性細(xì)菌(bacteria)"或"非病原性細(xì)菌(bacterium)"包括所有已知的和未知的非病原性細(xì)菌(革蘭氏陽性的或革蘭氏陰性的)和已經(jīng)被突變或轉(zhuǎn)化為非病原性細(xì)菌的任何病原性細(xì)菌。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)可某些細(xì)菌對(duì)特定的物種是病原性的而對(duì)其他物種是非病原性的，因此這些細(xì)菌可被用在其為非病原性的物種中或被突變以致其為非病原性的物種中。如本文所用的，術(shù)語"非人類動(dòng)物"是指所有非人類的動(dòng)物包括但不限于脊椎動(dòng)物例如嚙齒目動(dòng)物、非人類靈長(zhǎng)目動(dòng)物、綿羊、牛科動(dòng)物、反芻動(dòng)物、兔形目動(dòng)物、豬、山羊、馬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物、鳥類等等。如本文所用的，術(shù)語"細(xì)胞培養(yǎng)物"是指包括例如原核細(xì)胞和真核細(xì)胞的細(xì)胞的任何體外培養(yǎng)物。這一術(shù)語中所包括的是固體或液體培養(yǎng)基中的連續(xù)的細(xì)胞系(例如具有永生顯型的)、初級(jí)細(xì)胞培養(yǎng)物、轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系、有限細(xì)胞系(例如非轉(zhuǎn)化的細(xì)胞)、細(xì)菌培養(yǎng)物以及體外維持的任何其他細(xì)胞群落。如所用的，術(shù)語"真核"是指區(qū)別于"原核"的生物。意圖所述術(shù)語包括具有表現(xiàn)真核的一般特征(例如染色體位于其中的由核膜界定的真核的存在，膜界定的細(xì)胞器的存在以及通常在真核生物中觀察到的其他特征)的細(xì)胞的所有生物。因此，術(shù)語包括但不限于這些生物例如真菌、原生動(dòng)物和動(dòng)物(例如人類)。如本文所用的，術(shù)語"藥盒"是指用于遞送材料的任何遞送系統(tǒng)。在反應(yīng)材料例如益生菌微生物的情況下，這種遞送系統(tǒng)包括但不限于從一個(gè)位置到另一個(gè)位置的系統(tǒng)，其允許貯藏、運(yùn)輸或遞送適當(dāng)?shù)脑噭?例如在適當(dāng)?shù)娜萜髦械募?xì)胞、緩沖液、培養(yǎng)基、選擇試劑等等)和/或裝置(例如導(dǎo)管、注射器、反應(yīng)管或板、培養(yǎng)管或板)和/或支持材料(例如培養(yǎng)基，用于實(shí)行使用材料的書面說明書等等)。例如藥盒包括含有相關(guān)反應(yīng)試劑和/或支持材料的一個(gè)或多個(gè)附件(例如盒子、袋子)。如本文所用的，術(shù)語"分段藥盒"是指含有兩個(gè)或多個(gè)不同容器的遞送系統(tǒng)，每個(gè)容器含有總藥盒組分的亞部分。容器可被一起或單獨(dú)遞送至所期望的受體。例如，第一個(gè)容器可含有用于特定使用的具有膠凝劑的微生物的干燥的組合物，而第二容器含有用于溶解或重懸干燥的組合物的無菌的液體例如水或緩沖液。術(shù)語"分段藥盒"意圖包括含有聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法第520(e)部分管理下的分析物特定試劑(ASR)的藥盒，但不限制于此。實(shí)際上，含有兩個(gè)或多個(gè)不同容器(每個(gè)容器含有總藥盒組分的亞部分)的任何遞送系統(tǒng)都包括在術(shù)語"分段藥盒"中。相反"組合藥盒"是指在單一的容器中(例如在包含每一種所期望的組分的單一的盒子中)含有對(duì)于特定使用來說所需的反應(yīng)材料的所有組分的遞送系統(tǒng)。術(shù)語"藥盒"包括分段和組合藥盒。就通過組合物的冷凍干燥產(chǎn)生的干燥的餅狀物來說，術(shù)語"優(yōu)美的"被用在文獻(xiàn)中以描述未開裂、未縮水、具有光滑邊緣和松軟粘稠度的"完美的"冷凍干燥產(chǎn)品。如本文所用的，術(shù)語"一種(a)"和"一種(an)"意指至少一個(gè)并且可以指多于一個(gè)。如本文所用的，術(shù)語"細(xì)菌干擾"是指細(xì)菌中使它們自身定居并占據(jù)它們的環(huán)境的拮抗性相互作用。細(xì)菌干擾通過幾種機(jī)制實(shí)行，即拮抗性物質(zhì)的產(chǎn)生、細(xì)菌微環(huán)境上的改變和所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的減少。如本文所用的，術(shù)語"包被"是指覆蓋例如醫(yī)療裝置或其一部分的一層材料。包被可被應(yīng)用于植入物的材料的表面或灌注至其中。術(shù)語"有效量"意指例如通過降低、預(yù)防或抑制細(xì)菌和/或真菌生物的生長(zhǎng)對(duì)宿主產(chǎn)生有益作用的劑例如益生菌或抗微生物劑的足夠的量。相對(duì)簡(jiǎn)單地確定益生菌微生物或其他治療性組合物的有效量在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)。如本文所用的，術(shù)語"抗微生物劑"是指降低、預(yù)防或抑制細(xì)菌和/或真菌生物的生長(zhǎng)的組合物而不是益生菌?？刮⑸飫┑膶?shí)例包括例如抗生物素和防腐劑。如本文所用的，術(shù)語"防腐劑"被定義為抗微生物物質(zhì)，其抑制微生物的作用，包括但不限于a-萜品醇、甲基異噻唑酮、氯化十六烷基嘧啶、對(duì)氯間二甲酚、六氯酚、氯己定和其他陽離子雙胍、二氯甲烷、碘和載碘化合物、三氯生、氨基乙磺酰胺、呋喃妥因、烏洛托品、醛、丙烯酸、銀、芐基過氧化物、醇和羧酸以及鹽。本領(lǐng)域的技術(shù)人員認(rèn)可這些防腐劑可以以一種或多種的組合來使用以獲得協(xié)同作用。防腐劑的組合的一些實(shí)例包括氯己定、氯己定和對(duì)氯間二甲酚、氯己定和甲基異噻唑酮、氯己定和a-萜品醇、甲基異噻唑酮和a-萜品醇、麝香草酚和對(duì)氯間二甲酚、氯己定和氯化十六烷基嘧啶或者氯己定、甲基異噻唑酮和麝香草酚的混合物。這些組合提供了抗各種生物的廣譜的活性。如本文所用的，術(shù)語"抗生素"被定義為抑制微生物生長(zhǎng)而不傷害宿主的物質(zhì)。例如，抗生素可抑制細(xì)胞壁合成、蛋白合成、核酸合成或改變細(xì)胞膜功能?？股氐姆N類包括但不限于大環(huán)內(nèi)酯類(例如紅霉素)、青霉素類(例如萘夫西林)、頭孢菌素類(例如頭孢唑啉)、碳青霉烯類(例如亞胺培南)、單酰胺菌素(例如氨曲南)、其他P-內(nèi)酰胺類抗生素、13-內(nèi)酰胺抑制劑(例如舒巴坦)、oxalines(例如利奈唑胺)、氨基糖甙類(例如慶大霉素)、氯霉素、磺環(huán)磷酰胺(例如磺胺甲噁唑)、糖肽類(例如萬古霉素)、喹諾酮類(例如環(huán)丙沙星)、四環(huán)素類(例如米諾環(huán)素)、夫西地酸、甲氧芐啶、甲硝唑、克林霉素、莫匹羅星、利福霉素類(例如利福平)、鏈霉殺陽菌素(例如奎奴普汀和達(dá)福普汀)、脂蛋白(例如達(dá)托霉素)、多烯類化合物(例如兩性霉素B)、唑類(例如氟康唑)和棘球白素(例如醋酸卡泊芬凈)。特定抗生素的實(shí)例包括但不限于紅霉素、萘夫西林、頭孢唑林、亞胺培南、氨曲南、慶大霉素、磺胺甲噁唑、萬古霉素、環(huán)丙沙星、甲氧芐啶、利福平、甲硝唑、克林霉素、替考拉寧、莫匹羅星、阿奇霉素、克拉霉素、氧氟沙星、洛美沙星、諾氟沙星、萘啶酸、司帕沙星、培氟沙星、氨氟沙星、加替沙星、莫西沙星、吉米沙星、依諾沙星、氟羅沙星、米諾環(huán)素、利奈唑胺、替馬沙星、托氟沙、克林沙星、舒巴坦、克拉維酸、兩性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑和制霉菌素。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將很容易想到抗生素的其他實(shí)例，例如在通過引用并入本文的Sakamoto等人，美國(guó)專利第4，642，104號(hào)中列出的那些。如本文所用的，術(shù)語"抗性的"當(dāng)用于提及抗微生物劑的微生物時(shí)是指在抗微生物劑存在的條件下保留足夠活力以致在抗微生物劑存在的條件下抗性的微生物可被用作益生菌的微生物。本領(lǐng)域的技術(shù)人員將理解的是微生物的活力和抗微生物劑的濃度是可變的，以致例如中度抗性的微生物可被用于其中抗微生物劑的濃度是低的(例如來自之前的處理的剩余的抗微生物劑)的應(yīng)用中，而高抗性的微生物可用于其中抗微生物劑的濃度是高的(例如益生菌和抗微生物劑的共施用)應(yīng)用中。如本文所用的，術(shù)語"干燥的"當(dāng)用于提及益生菌組合物時(shí)是指除去一種或多種溶劑組分至不再支持化學(xué)反應(yīng)的水平。提及被干燥的組合物(例如干燥的制劑或干燥的組合物)時(shí)還使用該術(shù)語。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員將理解組合物可以是"干燥的"，但冷凍干燥后仍具有殘留的溶劑和含水量，或干燥的組合物可在干燥過程結(jié)束后吸濕地從例如大氣吸收水分。術(shù)語"干燥的"包括由于吸濕性吸收而具有增加的含水量的組合物。如本文所用的，術(shù)語"保護(hù)劑"是指當(dāng)活性劑(例如酶、益生菌微生物)被暴露于一定條件(例如干燥、冷凍)時(shí)，保護(hù)活性劑的活性或完整性的組合物或化合物。在某些實(shí)施方案中，保護(hù)劑在冷凍過程中保護(hù)活的生物(例如益生菌微生物)(即，其為"低溫防護(hù)劑")。保護(hù)劑的實(shí)例包括但不限于脫脂乳固體、海藻糖、甘油、甜菜堿、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、聚乙二醇、山梨糖醇、甘露醇、聚乙烯基丙烯、谷氨酸鉀、谷氨酸單鈉、吐溫20洗滌劑、吐溫80洗滌劑和氨基酸鹽酸鹽。如本文所用的，術(shù)語"膠凝劑"是指當(dāng)在液體(例如含水液體諸如水或緩沖溶液)中溶解、懸浮或分散時(shí)形成膠狀半固體(例如潤(rùn)滑劑凝膠)的組合物。膠凝劑的實(shí)例包括但不限于羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基瓜爾膠、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、卡波姆、藻酸鹽、明膠和泊洛沙姆。如本文所用的，術(shù)語"賦形劑"是指被加至活性劑成分的制劑的非活性成分(即非藥學(xué)上活性的)。本文描述的膠凝劑和保護(hù)劑通常被認(rèn)為是"賦形劑"。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及用于向受治療者遞送有效量的活的益生菌微生物的組合物和方法。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于貯藏和/或施用有效量的益生菌微生物的組合物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及制備例如用于常規(guī)貯藏和/或施用的有效治療量的益生菌微生物的微生物組合物的方法。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包括制備和/或施用益生菌微生物的治療方法。當(dāng)未將本發(fā)明限制于任何特定的外形時(shí)，觀察到在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法和組合物提供了對(duì)例如人類來說無毒的治療性遞送系統(tǒng)或制劑。在某些特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑利用被FDA批準(zhǔn)的物質(zhì)，用于尿路和/或膀胱。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物可適于用于醫(yī)療操作例如導(dǎo)管插入中，具有對(duì)常見的導(dǎo)管插入的方法和操作的最小的變化或沒有變化。為了清楚，以下列部分提供發(fā)明詳述1.細(xì)菌干擾；11.益生菌微生物的組合物；III.施用益生菌組合物的方法；IV用于提供益生菌組合物的藥盒。I.細(xì)菌干擾已經(jīng)研究了在CAUTI的預(yù)防中細(xì)菌干擾的原理。細(xì)菌干擾是指使用益生菌預(yù)防具有其他類型的細(xì)菌例如病原體的建群的原理。盡管細(xì)菌干擾的使用不限于任何特定的機(jī)制，但所施用的益生菌細(xì)菌可通過例如細(xì)菌排泄物或者對(duì)營(yíng)養(yǎng)的競(jìng)爭(zhēng)的優(yōu)勢(shì)干擾病原性菌株的生長(zhǎng)。這一方法具有良好的理論基礎(chǔ)并且可提供用于神經(jīng)原性膀胱中有癥狀的UTI的良好的溶液(Srinivasan，A.，T.Karchmer，等人，InfectControlHospEpidemiol27(1):38-43(2006))。細(xì)菌干擾可以是被動(dòng)的或主動(dòng)的(Reid，Howard等人2001)。在UTI和神經(jīng)原性膀胱的實(shí)例中，當(dāng)無癥狀的建群被留下未處理時(shí)發(fā)生被動(dòng)的細(xì)菌干擾以便預(yù)防隨后具有致命生物的建群。主動(dòng)干擾包括向膀胱中引入具有有益特征的一種或多種特定的細(xì)菌菌株，以便預(yù)防致命菌株的感染。迄今對(duì)用于預(yù)防CAUTI的活性干擾的所有臨床研究已經(jīng)使用了直接將大腸桿菌的非病原性菌株例如(大腸桿菌83972)移植到膀胱中的方法。但是，這一方法是麻煩的并且可能需要多次嘗試以誘導(dǎo)建群。看起來有希望的可選擇的方法是將導(dǎo)尿管本身與大腸桿菌83972孵育以在導(dǎo)尿管上產(chǎn)生生物膜。體外研究顯示與載體對(duì)照處理的導(dǎo)尿管相比，將導(dǎo)尿管預(yù)暴露于大腸桿菌83972顯著降低了插入后尿路病原體在導(dǎo)尿管表面建群的數(shù)目(Roos，V.，G.C.Ulett，等人，InfectImmun74(1):615-24(2006))。來自插入12名患有神經(jīng)原性膀胱的受治療者中的預(yù)處理的導(dǎo)尿管的實(shí)驗(yàn)研究的原始數(shù)據(jù)顯示30天后建群速度為92%，表明這一建群方法是非常有效的(R.Darouiche，私人交流)。然而，在使用導(dǎo)尿管前提供生物膜的導(dǎo)尿管的孵育是麻煩的因?yàn)槠淇赡苄枰硗獾脑O(shè)備，并且需要用于尿道導(dǎo)管插入的一般操作上的顯著的改變。本發(fā)明提供了用于施用益生菌微生物的改進(jìn)的組合物和方法。當(dāng)未限制于任何特定的應(yīng)用時(shí)，方法和組合物可用于治療和預(yù)防導(dǎo)尿管相關(guān)的尿路感染。本發(fā)明提供例如與常規(guī)導(dǎo)尿管一起使用的具有對(duì)用于導(dǎo)管插入的標(biāo)準(zhǔn)方案的最小改變的益生菌的制劑。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的益生菌微生物組合物可與用抗微生物劑例如防腐劑或抗生素對(duì)裝置的處理或?qū)κ苤委熣叩闹委熉?lián)合使用或在其之后使用。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所使用的益生菌微生物對(duì)與其一起使用的抗微生物劑具有抗性。II益生菌微生物的組合物在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了為在插入前用于導(dǎo)尿管而配制的益生菌微生物的組合物。特別地，在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了含有可被設(shè)計(jì)以由例如臨床醫(yī)生使用而無需在施用前培養(yǎng)益生菌微生物的益生菌的組合物。在某些實(shí)施方案中，益生菌微生物是細(xì)菌，而在一些實(shí)施方案中，細(xì)菌選自由腸桿菌禾斗，綠膿假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)、洋蔥假單胞菌(Burkholderiac印acia)、陰道力口德菌(Gardnerellavaginalis)以及不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)組成的組。在某些特定的實(shí)施方案中，益生菌微生物是綠膿假單胞菌。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，益生菌細(xì)菌選自由埃希氏桿菌屬(Escherichia)、志賀氏菌屬(Shigella)、愛德華氏菌屬(Edwardsiella)、沙門氏菌屬(Salmonella)、擰檬酸細(xì)菌屬(Citrobacter)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、腸桿菌屬(Enterobacter)、哈夫尼亞菌屬(Hafnia)、沙雷氏菌屬(Serratia)、變形菌屬(Proteus)、摩根氏菌屬(Morganella)、普羅威登斯菌屬(Providencia)、耶爾森菌屬(Yersinia)、歐文氏菌屬(Erwinia)、Buttlauxella、西地西菌屬(Cedecea)、愛文菌屬(Ewingella)、克羅非菌屬(Kluyvera)、塔特姆菌屬(Tatumella)禾卩拉恩菌屬(Rahnella)組成的腸桿菌科(Enterobacteriacea)的組。在某些特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)菌是腸桿菌科的并選自大腸桿菌83972或其突變體的組。大腸桿菌83972是與無癥狀的菌尿有關(guān)的臨床分離菌(Andersson等人，1991，Infect.Immun.59:2915-2921)，并且菌株已經(jīng)被用于成功地對(duì)人類志愿者的膀胱建群。大腸桿菌HU2117是具有缺失的papG83972基因的83972的變體，并且其已經(jīng)被顯示成功地在人類受治療者的膀胱建群(Hull，等人，2002，Infection和Immunity,70(11):6481-6481)。在本發(fā)明的某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，益生菌細(xì)菌是粘附于導(dǎo)尿管的細(xì)菌。在某些實(shí)施方案中，具有粘附特性的細(xì)菌選自由普羅威登斯菌屬(Providencia)、變形菌屬(Proteus)、綠膿假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)和大腸桿菌組成的組。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員應(yīng)理解的是本發(fā)明的組合物不限于含有單一種或類型的微生物的那些?？稍诒疚拿枋龅姆椒ê徒M合物中使用益生菌生物的組合是所涵蓋的。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供被設(shè)計(jì)用于穩(wěn)定貯藏的益生菌微生物的制劑例如冷凍干燥制劑。盡管實(shí)行本發(fā)明不需要理解機(jī)制，并且未將本發(fā)明限制于任何特定的機(jī)制，冷凍干燥或"凍干"通常通過去除一種或多種溶劑成分至不再支持化學(xué)反應(yīng)的水平來穩(wěn)定制劑。通過首先將制劑冷凍，之后從溶劑分離溶質(zhì)來完成這一去除。之后通過干燥或升華來去除溶劑，同時(shí)樣品保持冷凍。在某些實(shí)施方案中，操作包括通過初級(jí)干燥之后次級(jí)干燥或解吸對(duì)溶劑的去除。用于冷凍干燥的制劑通常含有至少有效成分例如益生菌微生物和溶劑系統(tǒng)(例如水，在含水液體的實(shí)例中)。本發(fā)明的制劑通常進(jìn)一步含有保護(hù)劑。在冷凍含有生物學(xué)生物的制劑時(shí)，細(xì)胞中冰的形成使得細(xì)胞膜破裂，由此破環(huán)生物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，保護(hù)劑在冷凍期間保護(hù)益生菌微生物(即，其為冷凍保護(hù)劑)。本發(fā)明不限于任何特定的冷凍保護(hù)劑。在本發(fā)明的方法和組合物中使用的冷凍保護(hù)劑包括例如脫脂乳固體、海藻糖、甘油、甜菜堿、蔗糖、葡萄糖、乳糖、聚合物諸如葡聚糖和聚乙二醇、山梨糖醇、甘露醇、聚乙烯基丙烯(PVP)、谷氨酸鉀、谷氨酸單鈉、吐溫20洗滌劑、吐溫80洗滌劑、諾乃洗滌劑-P40和氨基酸諸如脯氨酸、組氨酸、精氨酸鹽酸鹽、甘氨酸、賴氨酸、谷氨酸、天冬氨酸等。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，在冷凍之前保護(hù)劑以約O.lX至20^w/v的濃度包括在制劑中。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解的是本發(fā)明的組合物不限于包括單一保護(hù)劑的那些。所涵蓋的是可在本發(fā)明的方法和組合物中使用保護(hù)劑的組合。在某些實(shí)施方案中，保護(hù)劑還作為填充劑。一些配制可產(chǎn)生具有差的結(jié)構(gòu)性質(zhì)或在干燥過程中離開容器的餅狀物。填充劑例如甘露醇和葡聚糖的加入可加固餅狀物結(jié)構(gòu)。在某些實(shí)施方案中，所涵蓋的是本發(fā)明的制劑可另外含有不是保護(hù)劑的賦形劑或填充劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物含有有助于重新構(gòu)成(例如重懸)的組合物的施用的劑。例如，在包含冷凍干燥的制劑的優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物進(jìn)一步含有膠凝劑以便干燥的制劑的重懸產(chǎn)生凝膠。凝膠具有對(duì)例如向裝置或受治療者施用組合物的許多益處，包括但不限于潤(rùn)滑特性和在使用后抗流動(dòng)和滴落的特性，本發(fā)明不限于任何特定的膠凝劑。用于本發(fā)明的方法和組合物的膠凝劑包括例如羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基瓜爾膠、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、卡波姆、藻酸鹽、明膠(例如重組和/或水解的動(dòng)物明膠)和泊洛沙姆(例如LutrolF127)。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，膠凝劑以約0.1%至20%w/v的濃度包含于凝膠組合物中。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員將理解的是本發(fā)明的組合物不限于含有單一膠凝劑的那些。所涵蓋的是膠凝劑的組合可被用于本文描述的方法和組合物中。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供以冷凍干燥形式含有益生菌微生物、藥學(xué)上可接受的膠凝劑和藥學(xué)上可接受的第一保護(hù)劑的組合物。在某些實(shí)施方案中，組合物進(jìn)一步包括藥學(xué)上可接受的第二保護(hù)劑。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，在冷凍前第二保護(hù)劑以約0.1%至20%w/v的濃度包含于制劑中。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了制備上文描述的組合物的方法。在某些實(shí)施方案中，方法包括提供含有益生菌微生物、保護(hù)劑和膠凝劑的液體混合物并且將混合物冷凍干燥以產(chǎn)生干燥的制劑。在某些實(shí)施方案中，溶劑系統(tǒng)完全是水溶液，而在其他的實(shí)施方案中，溶劑系統(tǒng)含有其他溶劑，例如醇。在某些實(shí)施方案中，溶劑系統(tǒng)含有向冷凍干燥的組合物提供干燥的緩沖組分的緩沖劑。在一些實(shí)施方案中，首先通過升華去除溶劑，同時(shí)將冷凍基質(zhì)的溫度保持在低于制劑的共晶(共晶溫度是相圖上的點(diǎn)，處于這一點(diǎn)的系統(tǒng)的溫度或溶液的濃度不能不伴隨存在的相的數(shù)目的變化而改變)或坍塌溫度。這是初級(jí)干燥過程。初級(jí)干燥期間室壓以及產(chǎn)品和架溫通常以制劑的共晶或塌陷溫度為基礎(chǔ)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，初級(jí)干燥后，所得的餅狀物表面上的剩余的水分被減少至不再支持生物生長(zhǎng)和化學(xué)反應(yīng)的水平，這一過程被稱為二級(jí)干燥。二級(jí)干燥過程中餅狀物中水分的減少通常通過增加架溫和減少容器內(nèi)水蒸氣的部分壓強(qiáng)來完成。所需的水蒸氣的部分壓強(qiáng)和架溫通常由具有不同量的剩余水分的冷凍干燥的或真空干燥的產(chǎn)品的穩(wěn)定性研究來確定。在某些實(shí)施方案中，基本上根據(jù)下文表1中描述的步驟進(jìn)行冷凍干燥。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，基本上根據(jù)下文表2中描述的步驟進(jìn)行冷凍干燥，而在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，基本上根據(jù)下文表3中描述的步驟進(jìn)行冷凍干燥。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法進(jìn)一步包括將干燥的益生菌組合物溶解或重懸于液體例如無菌水中的步驟。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，干燥的組合物包括膠凝劑，并且液體中餅狀物的重懸產(chǎn)生凝膠。III施用益生菌微生物的方法在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了向受治療者施用益生菌微生物的方法，其包括提供含有益生菌微生物、膠凝劑和保護(hù)劑的冷凍干燥制劑，將所述冷凍干燥的制劑暴露于含水液體以形成含有有效量的所述益生菌微生物的凝膠，并且使所述受治療者與所述凝膠接觸。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，使受治療者與凝膠接觸的步驟包括將裝置例如醫(yī)療裝置與凝膠接觸，并且之后使醫(yī)療裝置與受治療者接觸。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，裝置是導(dǎo)尿管。本發(fā)明的特定的實(shí)施方案是包被醫(yī)療裝置的方法，其包括向裝置的表面的至少一部分應(yīng)用含有以有效量存在的益生菌微生物的凝膠組合物的步驟，相對(duì)于未包被的醫(yī)療裝置所述有效量抑制細(xì)菌和真菌生物的生長(zhǎng)。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，在導(dǎo)尿管插入之前將含有益生菌微生物的凝膠與常規(guī)導(dǎo)尿管潤(rùn)滑劑(例如SteriLub潤(rùn)滑劑、SurgiLube潤(rùn)滑劑、KYJelly)組合使用。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，在導(dǎo)尿管插入之前含有益生菌微生物的凝膠被用來代替常規(guī)導(dǎo)尿管潤(rùn)滑劑。IV.用于提供益生菌組合物的藥盒本發(fā)明的一個(gè)方面是提供用于例如治療受治療者的含有一種或多種組分的藥盒或支架。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥盒被設(shè)計(jì)用來在例如醫(yī)院、診所或醫(yī)務(wù)室中由醫(yī)務(wù)人員簡(jiǎn)單地遞送和使用。在某些實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的藥盒被設(shè)計(jì)以與標(biāo)準(zhǔn)的導(dǎo)管插入藥盒或支架聯(lián)合使用，而在其他的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的藥盒被設(shè)計(jì)以代替標(biāo)準(zhǔn)的導(dǎo)管插入藥盒或支架。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的方法藥盒含有對(duì)于導(dǎo)管插入來說所有必須的組分。在某些實(shí)施方案中，藥盒在例如容器中提供含有益生菌微生物、藥學(xué)上可接受的膠凝劑和藥學(xué)上可接受的第一保護(hù)劑的冷凍干燥的組合物。在藥盒的某些實(shí)施方案中，組合物進(jìn)一步含有藥學(xué)上可接受的第二保護(hù)劑。在某些實(shí)施方案中，藥盒進(jìn)一步包括無菌液體例如含水液體諸如水或緩沖液的容器，以便懸浮干燥的組合物以形成在例如插入導(dǎo)尿管時(shí)使用的潤(rùn)滑劑凝膠。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥盒進(jìn)一步包括導(dǎo)尿管。當(dāng)未將本發(fā)明的藥盒限制于任何特定的微生物時(shí)，在某些實(shí)施方案中，益生菌微生物是大腸桿菌的菌株。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，大腸桿菌的菌株包括大腸桿菌83972和/或大腸桿菌HU2117。根據(jù)本發(fā)明的藥盒不限于與導(dǎo)管插入有關(guān)的組分，并且可包括另外的組分例如與患者護(hù)理有關(guān)的組分，包括但不限于支架、墊料、海綿、消毒擦、紙巾、帶子、手套、布、樣本容器、注射器等。實(shí)驗(yàn)提供下列實(shí)施例以便證明和進(jìn)一步說明本發(fā)明的一些優(yōu)選的實(shí)施方案和方面并且實(shí)施例未被解釋為限制本發(fā)明的范圍。下文的實(shí)驗(yàn)性公開內(nèi)容中，使用下列縮寫°C(攝氏度)、cm(厘米)、g(克)、1或L(升)、ml或mL(毫升)、yl或yL(微升)、yg(微克)、yl(微升)、ym(微米)、iiM(微摩爾)、iimol(微摩爾)、mg(毫克)、ml(毫升)、mm(毫米)、mM(毫摩爾)、mmo1(毫摩爾)、M(摩爾)、mo1(摩爾)、ng(納克)、nm(納米)、nmo1(納摩爾)、N(正常)、pmo1(皮摩爾)、bp(堿基對(duì))、cfu(菌落形成單位)。通過實(shí)例的方法但不通過限制性的方法，下列實(shí)驗(yàn)描述不同賦形劑和冷凍干燥方案對(duì)大腸桿菌菌株HU2117的活力的影響。選擇起始量以維持含有膠凝劑的組合物中冷凍干燥的細(xì)胞中的活力的有效水平。例如，在某些實(shí)施方案中，活的細(xì)胞的優(yōu)選濃度可以為約108cfu/ml。如果本發(fā)明的一瓶(或其他容器)的制劑將被懸浮或溶解于例如10ml的水中，小瓶中干燥的餅狀物將最好具有約109的活的細(xì)胞。一旦評(píng)估處理之后方案的仍為活的細(xì)胞的百分比，人們可以很容易的估算獲得具有任何特定期望數(shù)目的活的細(xì)胞的餅狀物的起始的細(xì)胞的大約數(shù)目。實(shí)施例1冷凍干燥的大腸桿菌HU2117的制備；方案1研究的目的是檢測(cè)不同的賦形劑和條件對(duì)HU2117的冷凍干燥的影響，以便在含有膠凝劑的組合物中維持冷凍干燥的細(xì)胞的有效細(xì)胞濃度和活力水平。麵先格培養(yǎng)兩瓶細(xì)胞(瓶A和瓶B)，來自lmL原種的每一個(gè)接種到IL改良的EZRichDefinedGlycerol培養(yǎng)基中，伴隨250RPM的恒速振蕩于37士rC孵育8小時(shí)。8小時(shí)結(jié)束時(shí)，瓶A的0D6。。為2.53而瓶B的0D6。。為1.11。通過在4°C以6000RPM離心8分鐘來收集細(xì)胞。將沉淀的細(xì)胞用0.9%的鹽水清洗兩次并用lOmM檸檬酸鹽緩沖液pH7.0清洗一次。從每升培養(yǎng)物沉淀的細(xì)胞被重懸至2-3ml的10mM檸檬酸鹽緩沖液pH7.0中至約5ml的終體積。使用平板計(jì)數(shù)測(cè)定重懸的細(xì)胞的濃度。瓶A制劑具有2.8±1.2X10"CFU/ml的活細(xì)胞濃度，而瓶B制劑具有1.8±0.2X10"CFU/ml的活細(xì)胞濃度?；旌蟻碜云緼和瓶B的細(xì)胞并將其用于冷凍干燥試驗(yàn)。冷凍干燥對(duì)于每個(gè)試驗(yàn)，將0.5ml的重懸的細(xì)胞與1.5ml的選自下文列表的賦形劑以及10ml的2%的高壓滅菌的羥乙基纖維素(HEC)混合。賦形劑(如果干燥的餅狀物被重懸至10ml的終體積，賦形劑顯示為將達(dá)到的濃度(w/v);如果使用不同體積的液體溶解餅狀物，濃度成比例變化)(a)緩沖液(無賦形劑)(b)2%HEC(c)2%HEC+1.5%甘油(d)2%HEC+5%海藻糖(e)2%HEC+5X蔗糖(f)2%HEC+10X海藻糖(g)2%HEC+10X蔗糖(h)2%HEC+5X海藻糖+1.5%甘油(i)2%HEC+5X蔗糖+1.5%甘油(j)2%HEC+10X海藻糖+1.5%甘油(k)2%HEC+10X蔗糖+1.5%甘油如表1中所述的將細(xì)胞_賦形劑混合物冷凍干燥以產(chǎn)生干燥的餅狀物。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>升華在初級(jí)干燥結(jié)束時(shí)沒有完成，并且開始新的循環(huán)，以0.5°C/min的平均控制速度于-28t:的初級(jí)干燥溫度18小時(shí)，以及于設(shè)定于2(TC的二級(jí)干燥溫度720分鐘。干燥后，每個(gè)餅狀物被重懸于12ml的H20中。遵循上文的方案得到下列觀察(a)除了在上文所列的賦形劑(f)、(g)、(j)和(k)存在的情況下，冷凍干燥餅狀物收縮并顯示相分離。(b)在上文所列的賦形劑(c)、(g)、(j)和(k)存在的情況下，餅狀物在重新構(gòu)成期間溶解度良好。(c)在賦形劑不存在(即所使用的緩沖液?jiǎn)为?dú)代替賦形劑)或使用10%海藻糖或(5%蔗糖+1.5%甘油)的情況下，用水將餅狀物重新構(gòu)成之后餅狀物具有未溶解的顆粒。檢測(cè)重懸的細(xì)胞的活力，結(jié)果示于表2表2(%活力)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>(w/v);如果使用不同體積的液體溶解餅狀物，濃度成比例變化)(a)緩沖液(b)1%HEC(c)1%HEC+1.5%甘油(d)l%HEC+5X海藻糖(e)l%HEC+5X蔗糖(f)l%HEC+10X海藻糖(g)l%HEC+10X蔗糖(h)l^HEC+5^海藻糖+1.5^甘油(i)l^HEC+5^蔗糖+1.5^甘油(力1%亞。+10%海藻糖+1.5%甘油(k)1%HEC+10X蔗糖+1.5%甘油(1)2%HEC+10X蔗糖(m)2%HEC+10X蔗糖+1.5%甘油如表3中所描述的冷凍干燥細(xì)胞混合物。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>干燥后，每個(gè)干燥的餅狀物被重懸于12ml的H20中。遵循上文的方案得到下列觀察(a)除了使用1XHEC+1.5X甘油和1%亞0+5%蔗糖+1.5%甘油的條件以夕卜，凍干餅狀物是優(yōu)美的。(b)在不存在任何賦形劑和使用1%HEC+1.5%甘油的條件下，餅狀物在重新構(gòu)成期間溶解度良好。(c)在賦形劑不存在(即所使用的緩沖液代替賦形劑)或使用1%HEC+1.5%甘油的情況下，用水將餅狀物重新構(gòu)成之后餅狀物具有未溶解的顆粒。檢測(cè)重懸的細(xì)胞的活力，結(jié)果示于表4。表4:(%活力)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>當(dāng)未將本發(fā)明限制于任何特定的最小活力時(shí)，觀察到使用這些實(shí)驗(yàn)條件，1%HEC+5X和/或10%蔗糖，1.5%甘油存在和不存在，冷凍干燥后獲得>90%的活力。相似地，使用2%亞0+10%蔗糖+1.5%甘油的條件時(shí)，留有約80%的活力。實(shí)施例3冷凍干燥的大腸桿菌HU2117的制備；方案3細(xì)胞制備從接種到1L改良的EZRichDefinedGlycerol培養(yǎng)基中的lmL的原種培養(yǎng)一個(gè)2升瓶的細(xì)胞，伴隨250RPM的恒速振蕩于37士rC孵育8小時(shí)。8小時(shí)結(jié)束時(shí)，0D6。。為2.2±0.03。通過在4°C以6000RPM離心8分鐘來收集細(xì)胞。將沉淀的細(xì)胞用0.9%的鹽水清洗兩次并用lOmM檸檬酸鹽緩沖液pH7.0清洗一次。沉淀的細(xì)胞被重懸至2-3ml的10mM檸檬酸鹽緩沖液pH7.0中至約10ml的終體積。使用平板計(jì)數(shù)測(cè)定重懸的細(xì)胞的濃度。重懸細(xì)胞具有4.9X1(TCFU/ml的活細(xì)胞濃度。冷凍干燥對(duì)于每個(gè)測(cè)試，將0.5ml的重懸的細(xì)胞與1.5ml的選自下文列表的賦形劑以及10ml的2%的高壓滅菌的羥乙基纖維素(HEC)混合。賦形劑(如果干燥的餅狀物被重懸至10ml的終體積，賦形劑顯示為將達(dá)到的濃度(w/v);如果使用不同體積的液體溶解餅狀物，濃度成比例變化)(a)緩沖液(b)2%HEC(c)2%HEC+5X蔗糖(d)2%HEC+10X蔗糖(12ml)(e)2%HEC+10X蔗糖(10ml)(f)2%HEC+5X蔗糖+1.5%甘油(g)2%HEC+10X蔗糖+1.5%甘油如表5中所描述的冷凍干燥細(xì)胞混合物。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>干燥后，除了被重懸于10ml的H20中的上文的(e)，每個(gè)干燥的餅狀物被重懸于12ml的H20中。遵循上文的方案得到下列觀察(a)根據(jù)冷凍干燥，使用2%HEC+10X蔗糖±1.5%甘油的條件時(shí)，餅狀物是優(yōu)美的。(b)除了賦形劑不存在的條件下，在所有實(shí)例中餅狀物在重新構(gòu)成期間溶解度良好。(c)在賦形劑不存在(即所使用的緩沖液代替賦形劑)或使用2%HEC+5X蔗糖的情況下所產(chǎn)生的餅狀物在用水重新構(gòu)成之后具有未溶解的顆粒。檢測(cè)重懸的細(xì)胞的活力，結(jié)果示于表6。表6:(%活力)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>當(dāng)未將本發(fā)明限制于任何特定的最小活力時(shí)，觀察到使用這些實(shí)驗(yàn)條件，2%HEC+10X蔗糖+1.5%甘油，留有約80%的活力。將餅狀物重新構(gòu)成并測(cè)定活的細(xì)胞的計(jì)數(shù)后，觀察到在12mlH20(d)或在10mlH20(e)中重懸餅狀物在對(duì)活力的影響上無差別。上文實(shí)施例1-3中報(bào)道的活力檢測(cè)在重懸后約30分鐘之內(nèi)進(jìn)行。還在重懸后以不同的時(shí)間間隔(5、20、40和60分鐘)檢測(cè)實(shí)施例3中細(xì)胞的活力。重懸后時(shí)間的影響示于圖1中。前述實(shí)施例顯示可將益生菌微生物在膠凝劑存在的條件下冷凍干燥，并在干燥后重新構(gòu)成以形成含有活的益生菌生物的凝膠。本文提供的方法和組合物提供了例如在預(yù)防CAUTI中使用的益生菌生物的簡(jiǎn)單化的遞送。上文說明書中提到的所有出版物和專利通過引用并入本文。對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說所描述的本發(fā)明的組合物和方法的各種修飾和改變是明顯的，未背離本發(fā)明的范圍和精神。盡管已經(jīng)結(jié)合特定的優(yōu)選的實(shí)施方案來說明本發(fā)明，但應(yīng)當(dāng)理解的是如權(quán)利要求所要求的本發(fā)明不應(yīng)當(dāng)被過度限制于這些特定的實(shí)施方案。事實(shí)上，對(duì)于相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員來說明顯的所描述的實(shí)行本發(fā)明的方法的不同的修飾意在本發(fā)明的范圍內(nèi)。權(quán)利要求一種組合物，其以冷凍干燥形式含有益生菌微生物、藥學(xué)上可接受的膠凝劑和藥學(xué)上可接受的第一保護(hù)劑。2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其進(jìn)一步含有藥學(xué)上可接受的第二保護(hù)劑。3.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述益生菌微生物是大腸桿菌菌株。4.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述大腸桿菌菌株是大腸桿菌83972。5.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述大腸桿菌菌株是大腸桿菌HU2117。6.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述膠凝劑選自由羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基瓜爾膠、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、卡波姆、藻酸鹽、明膠和泊洛沙姆組成的組。7.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述第一保護(hù)劑選自由脫脂乳固體、海藻糖、甘油、甜菜堿、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、聚乙二醇、山梨糖醇、甘露醇、聚乙烯基丙烯、谷氨酸鉀、谷氨酸單鈉、吐溫20洗滌劑、吐溫80洗滌劑和氨基酸鹽酸鹽組成的組。8.如權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述第二保護(hù)劑與所述第一保護(hù)劑不同，并且選自由脫脂乳固體、海藻糖、甘油、甜菜堿、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、聚乙二醇、山梨糖醇、甘露醇、聚乙烯基丙烯、谷氨酸鉀、谷氨酸單鈉、吐溫20洗滌劑、吐溫80洗滌劑和氨基酸鹽酸鹽組成的組。9.一種組合物，其通過包括如下的方法來生產(chǎn)a)在含水液體中提供混合物，所述混合物含有i)益生菌微生物；ii)藥學(xué)上可接受的膠凝劑；禾口iii)藥學(xué)上可接受的第一保護(hù)劑，b)將所述混合物冷凍干燥以產(chǎn)生干燥的制劑；以及c)將所述干燥的制劑暴露于含水液體以形成凝膠，所述凝膠含有有效量的所述益生菌微生物。10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述混合物進(jìn)一步含有藥學(xué)上可接受的第二保護(hù)劑。11.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述益生菌微生物是大腸桿菌菌株。12.如權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述大腸桿菌菌株是大腸桿菌83972。13.如權(quán)利要求11所述的組合物，其中所述大腸桿菌菌株是大腸桿菌HU2117。14.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述膠凝劑選自由羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基瓜爾膠、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、卡波姆、藻酸鹽、明膠和泊洛沙姆組成的組。15.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述第一保護(hù)劑選自由脫脂乳固體、海藻糖、甘油、甜菜堿、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、聚乙二醇、山梨糖醇、甘露醇、聚乙烯基丙烯、谷氨酸鉀、谷氨酸單鈉、吐溫20洗滌劑、吐溫80洗滌劑和氨基酸鹽酸鹽組成的組。16.如權(quán)利要求IO述的組合物，其中所述第二保護(hù)劑與所述第一保護(hù)劑不同，并且選自由脫脂乳固體、海藻糖、甘油、甜菜堿、蔗糖、葡萄糖、乳糖、葡聚糖、聚乙二醇、山梨糖醇、甘露醇、聚乙烯基丙烯、谷氨酸鉀、谷氨酸單鈉、吐溫20洗滌劑、吐溫80洗滌劑和氨基酸鹽酸鹽組成的組。17.—種向受治療者施用益生菌微生物的方法，其包括a)提供冷凍干燥的制劑，所述制劑含有益生菌微生物、藥學(xué)上可接受的膠凝劑和藥學(xué)上可接受的保護(hù)劑；b)將所述冷凍干燥的制劑暴露于含水液體以形成凝膠，所述凝膠含有有效量的所述益生菌微生物；以及c)將所述受治療者與所述凝膠接觸。18.如權(quán)利要求17所述的方法，其中將所述受治療者與所述凝膠接觸包括將醫(yī)療裝置與所述凝膠接觸以產(chǎn)生處理的裝置，并將所述受治療者與所述處理的裝置接觸。19.如權(quán)利要求18所述的方法，其中所述醫(yī)療裝置是導(dǎo)尿管。20.如權(quán)利要求17所述的方法，其中所述益生菌微生物是大腸桿菌HU2117或大腸桿菌83972。21.—種藥盒，其包含以冷凍干燥形式含有益生菌微生物、藥學(xué)上可接受的膠凝劑和藥學(xué)上可接受的第一保護(hù)劑的組合物22.如權(quán)利要求21所述的藥盒，其中所述組合物進(jìn)一步含有藥學(xué)上可接受的第二保護(hù)劑。23.如權(quán)利要求21所述的藥盒，其進(jìn)一步含有無菌含水液體的容器。24.如權(quán)利要求21所述的藥盒，其中所述益生菌微生物是大腸桿菌的菌株。25.如權(quán)利要求24所述的藥盒，其中所述大腸桿菌菌株是大腸桿菌83972。26.如權(quán)利要求24所述的藥盒，其中所述大腸桿菌菌株是大腸桿菌HU2117。全文摘要本發(fā)明涉及細(xì)菌學(xué)的領(lǐng)域。尤其地，本發(fā)明涉及益生菌微生物的組合物以及制備方法和在例如導(dǎo)尿管相關(guān)的尿路感染的治療和預(yù)防中使用這種組合物的方法。文檔編號(hào)A61K39/108GK101795707SQ200780100182公開日2010年8月4日申請(qǐng)日期2007年9月7日優(yōu)先權(quán)日2007年8月8日發(fā)明者S·布萊科,鈴木秀起申請(qǐng)人:康尤戈恩公司