專利名稱：：胸腺素α-1在制備預防和治療變態(tài)反應的藥物中的應用的制作方法胸腺素a-l在制備預防和治療變態(tài)反應的藥物中的應用本發(fā)明涉及胸腺素a-l在制備預防和治療變態(tài)反應的藥物中的應用。變態(tài)反應是一種對通常無害于人的對物質(zhì)反應過度的疾病，與正常免疫應答相比，它們構(gòu)成了突發(fā)性有害(paroxitic)免疫應答。機體免疫系統(tǒng)的功能通常是保護機體免遭病原體如細菌、病毒或毒性物質(zhì)的危害。而變態(tài)反應則是免疫系統(tǒng)對非病原生物的超敏免疫反應。個體第一次接觸引起變態(tài)反應的變應原以后，每次接觸此變應原時個體即能識別此變應原。第二次和所有以后接觸此變應原所產(chǎn)生的癥狀實際上不僅取決于所涉及的變應原，而且取決于受影響的機體和其免疫反應的強度。當變應原接觸個體的免疫系統(tǒng)時，它會剌激(機體)產(chǎn)生能結(jié)合含組胺細胞的抗體。產(chǎn)生這種物質(zhì)能引起病人典型的變應性癥狀受影響組織搔癢、腫脹，過度分泌粘液和肌肉痙攣。這些癥狀的嚴重程度和差別具有很強的個人主觀性，因為它取決于個體。最常見的變應原有食物、藥物、化妝品中含有的某些成分、珠寶首飾所用的某些金屬、昆蟲的叮咬、塵螨、花粉、霉菌和寵物。如果母親在哺乳期間不吃某些食物，例如牛奶、雞蛋和堅果，哺乳兒童發(fā)生接觸性(contracting)變態(tài)反應(包括哮喘)的可能性較低。如果發(fā)生變態(tài)反應，只有采用適當?shù)闹委熀捅M可能避免接觸有關(guān)變應原才能將未來發(fā)生變態(tài)反應危險的可能性降至最小。癥狀的嚴重程度和類型的差別取決于所述反應、受累及機體區(qū)域和病人免疫系統(tǒng)的敏感性。然而，有某些共同癥狀鼻炎、咳嗽、呼吸問題、流淚增加、接觸區(qū)(通常為眼、鼻、咽喉和皮膚)搔癢、皮疹、嘔吐、腹瀉、頭痛。變應性疾病是由易感個體對常見的環(huán)境抗原(變應原)產(chǎn)生了T輔助細胞(Th2)禾卩IgE-特異性應答所導致。研究在預防變應原引起這些潛在過敏性不良免疫反應中，對天然的或誘導的T調(diào)節(jié)(Treg)細胞群作用的興趣日益增高。近年來的證據(jù)提示，Treg細胞可主動地預防非特應性個體對變應原產(chǎn)生Th2應答，而在變態(tài)反應病人中它們的功能可能減弱。這顯示通過調(diào)節(jié)Treg細胞的功能有可能進行治療。近年來的研究目的是了解產(chǎn)生變應原特異性Treg細胞和發(fā)揮其功能所涉及的機制。主要目的是促進開發(fā)適合誘導持久的但同時局限化的非全身性變應原特異性抑制機制的治療方案。迄今，一直采用抗組胺藥物和含考的松的那些抗炎藥物或有時采用順勢(homeopathic)療法來治療變態(tài)反應。然而，用某些藥物治療可能會引起相當大的有時是嚴重的副作用，例如引起免疫抑制或各種代謝疾病。鑒于以上所述，證明需要能預防和治療變態(tài)反應但沒有已知療法缺點的新藥物。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)胸腺素a-l能有效預防和治療變態(tài)反應而對機體沒有任何毒性。胸腺素a-l(Ta-l)是一種天然胸腺肽，己熟知可單用或與IFN-a聯(lián)用來治療某些病毒感染，也可用作免疫佐劑(GoldsteinA.等，2004ExpertOpin.Biol.Ther.4:559-573)。也已知可用胸腺素a-l治療的其它適應癥，如治療免疫缺陷癥、腫瘤和AIDS。還已知胸腺素a-l可與IFN-a聯(lián)用，在治療某些病毒感染中作為生物應答的調(diào)節(jié)劑，還可用作免疫佐劑(GoldsteinA.等，2004ExpertOpin.Biol.Ther.4:559-573)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)了此分子具有新的出乎意料的作用。近年業(yè)已證明Tal能通過Toll樣受體(TLR)9調(diào)節(jié)樹突狀細胞(DC)的功能，起著先天性和適應性免疫系統(tǒng)內(nèi)源調(diào)節(jié)劑的作用(RomaniL.等,2004,Blood103:4232-4239)。由于對DC具有這種功能活性，業(yè)已發(fā)現(xiàn)Tal能在體內(nèi)外誘導功能活性Treg細胞(RomaniL,Blood2006)。這些研究為將Tal用作功能活性Treg細胞的誘導劑提供了合理的前提。面對例如目前的皮質(zhì)類固醇藥物療法的全身性不加區(qū)別的免疫抑制作用，上述方法的優(yōu)點是可調(diào)節(jié)高度選擇性的和特定的異常免疫反應。本發(fā)明的具體目的是用Tal來制備預防和治療變態(tài)反應的藥物，例如，所述變態(tài)反應是由變應原，如食物(如卵清蛋白)、藥物、化妝品中所含成分、珠寶首飾所用的某些金屬(如鎳)、昆蟲的叮咬、塵螨、花粉、霉菌、寵物和真菌如煙曲霉0^pe/^7/u5/Mw/gafus)弓I起的?，F(xiàn)在通過一些優(yōu)選實施方式，并具體參見附圖描述本發(fā)明，目的是說明而非限制本發(fā)明圖1顯示Tal在ABPA(A)和OVA引起的變態(tài)反應(B)中效果的數(shù)據(jù)。無(None)代表對照小鼠。圖2顯示Tal和CpG對ABPA的效果的比較數(shù)據(jù)。圖3顯示Tal對ABPA中肺部募集單核細胞的效果的數(shù)據(jù)。圖4顯示Tal對ABPA中局部炎癥病理變化的效果的數(shù)據(jù)。實施例1:在兩種實驗性變態(tài)反應模型中評價胸腺素a-l的效果。一種模型包括在產(chǎn)生變態(tài)反應的條件下給予雞卵清蛋白(OVA)誘導變態(tài)反應。另一種模型包括用環(huán)境變應原即煙曲霉孢子誘導變態(tài)反應。方法變態(tài)反應和治療按表1所述，用曲霉(^^"^///^)誘導病理變態(tài)反應(稱為ABPA，變應性支氣管肺曲霉菌病)，用OVA誘導病理變態(tài)反應(MontagnoliC,FallarinoF,GazianoR,BozzaS，BellocchioS,ZelanteT,KurupWP,PitzurraL，PuccettiP,RomaniL."對曲霉菌的免疫和耐受涉及到功能不同的調(diào)節(jié)性T細胞和色氨酸分角軍代謝(Immunityandtolerancetoy4s;erg〃/wsinvolvefunctionallydistinctregulatoryTcellsandtryptophancatabolism)"J.Immunol.2006，176:1712-1723)。使小鼠接受腹腔內(nèi)(i.p.)和皮下(s.c.)注射5溶于不完全弗氏佐劑(西格瑪公司(Sigma))的煙曲霉菌培養(yǎng)過濾物(CCFA)，然后連續(xù)接受兩次鼻內(nèi)注射(相隔一周)20CCFA。末次鼻內(nèi)接觸后一周，使小鼠氣管內(nèi)(i.t.)接受107個曲霉菌分生孢子04^^^7/^comW/fl)。對于OVA致敏，第0天小鼠通過i.p./s.c接受10[igOVA，然后連續(xù)接受兩次鼻內(nèi)注射(相隔一周)溶于滅菌鹽水中的10OVA(VI級雞OVA;西格瑪奧德里奇公司(Sigma-Aldrich))和1mgAl(OH)3佐齊!j(注射用鋁；伊利諾斯州羅克福德的皮爾斯公司(Pierce,Rockford,IL))。一周后分析小鼠的炎癥和變態(tài)反應參數(shù)。對于組織學分析，將浸在石蠟中的組織切片(3-4pm)用希弗氏過碘酸(PAS)染色以評價總體形態(tài)。用50、200和400倍放大觀察PAS染色的肺切片以評估變態(tài)反應的典型"杯狀(Globet)"細胞。用May-Grtowald試劑(吉姆薩(Giemsa)，西格瑪公司)對變應性小鼠的肺進行染色，以便進行肺總細胞計數(shù)和差異性計數(shù)，然后進行分析。羥脯氨酸測定按前人(MontagnoliC,FallarinoF,GazianoR，BozzaS,BellocchioS,ZelanteT，KurupWP，PitzurraL，PuccettiP,RomaniL."對曲霉菌的免疫和耐受涉及到功能不同的調(diào)節(jié)性T細胞和色氨酸分解代謝(Immunityandtoleranceto爿j^e,gz7/z^sinvolvefunctionallydistinctregulatoryTcellsandtryptophancatabolism)"J.Immunol.2006,176:1712-1723)所述測定了肺中的膠原蛋白水平。通過羥脯氨酸標準曲線(O-IOOpg/ml)計算出羥脯氨酸濃度。血清IgE測定。用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清樣品中的總IgE(MontagnoliC,FallarinoF,GazianoR,BozzaS,BellocchioS,ZelanteT，Kur叩WP,PitzurraL，PuccettiP,RomaniL."對曲霉菌的免疫和耐受涉及到功能不同的調(diào)節(jié)性T細胞和色氨酸分解代謝"J.Immunol.2006,176:1712-1723，此文中關(guān)于用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血清樣品的部分)。用胸腺素al治療。提供無菌干粉形式的Tal(購自美國密蘇里州圣路易斯的西格瑪公司(Sigma，St丄ouis，MO，USA);產(chǎn)品編號T3410;分子式C^H2i5N33055)和亂序(scambled)肽。用無菌水(用標準鱟(Limulus)裂解物試驗檢測內(nèi)毒素水平<0,03pg/ml)重建這些干粉。按照表1和2中報告的實驗設(shè)計，在ABPA模型和OVA變態(tài)反應模型中，i.p給予每公斤體重50和200微克劑量的Tal。對照小鼠接受亂序肽。在所選的實驗中，治療小鼠，與已知能改善變態(tài)反應癥狀的藥物即含非甲基化CpG序列的寡脫氧核苷酸作比較。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>a.CCFA:煙曲霉的培養(yǎng)過濾物表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>圖1顯示在ABPA(A)和OVA引起的變態(tài)反應(B)中Tal效果的數(shù)據(jù)。此結(jié)果清楚地表明Tal治療后變應性炎癥參數(shù)顯著下降，即作為變應性炎癥介質(zhì)的羥脯氨酸和IgE抗體的局部產(chǎn)生顯著減少。此效果為劑量依賴性，發(fā)現(xiàn)在200微克Tal劑量時有效，而在更低劑量時無效，預防和實際治療時情況相同。無代表對照小鼠。圖2顯示Tal和CpG對ABPA的效果的比較數(shù)據(jù)。此結(jié)果清楚地表明Tal預防和治療時降低變應性炎癥參數(shù)的效果與CpG相當。無代表對照小鼠。圖3顯示Tal對ABPA中肺部募集單核細胞的效果的數(shù)據(jù)。此數(shù)據(jù)表明預防和治療時，通過Tal的作用顯著減少了引起變態(tài)反應病理表現(xiàn)的嗜酸性粒細胞的募集。而且其效果與CpG相當。Tal對其它類型細胞如中性粒細胞和單核/巨噬細胞的募集沒有任何明顯作用。圖4顯示Tal對ABPA中局部炎癥病理變化的效果的數(shù)據(jù)。用Tal治療(+)或不用Tal治療(-)的ABPA小鼠肺切片經(jīng)不同放大倍數(shù)觀察顯示在以下項目有顯著差異i)炎癥滲出液，用Tal預防性治療后炎癥滲出液顯著減少；ii)存在粘膜下腺細胞(稱為杯狀細胞)的存在，這種細胞是產(chǎn)生粘液的主要細胞，PAS染色呈紫色。用Tal治療伴有這些細胞增生的減少?？傊?，以上數(shù)據(jù)提示Tal對預防和治療變態(tài)反應均有顯著的抗變態(tài)反應作用。權(quán)利要求1.胸腺素α-1在制備預防和治療變態(tài)反應的藥物中的應用。2.如權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，所述變態(tài)反應是由變應原，如食物、藥物或化妝品中所含物質(zhì)，珠寶首飾所含的金屬、昆蟲的叮咬、塵螨、花粉、霉菌、寵物和真菌的變應原引起的。3.如權(quán)利要求2所述的應用，其特征在于，所述食物中所含物質(zhì)是卵清蛋白。4.如權(quán)利要求2所述的應用，其特征在于，所述真菌是煙曲霉。全文摘要本發(fā)明涉及胸腺素α1在制備預防和治療變態(tài)反應的藥物中的應用。文檔編號A61K38/22GK101626778SQ200780039959公開日2010年1月13日申請日期2007年9月27日優(yōu)先權(quán)日2006年10月27日發(fā)明者E·加拉西,F·比斯托尼,G·拉斯,L·羅馬尼,P·西尼巴迪瓦萊波納申請人:適馬-道制藥業(yè)公司