專利名稱：癌癥治療的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及將奧沙利鉑包被進脂質(zhì)體的方法，所述脂質(zhì)體膜雙層的內(nèi)層和外層具有不同的脂類組成。
在第一方面中，本發(fā)明涉及形成包含奧沙利鉑的膠團的方法，所述方法包括將有效量的奧沙利鉑和帶負電荷的脂類與溶劑溶液混合。脂類被表征為含有帶負電荷(陰離子)的首基。優(yōu)選地，脂類為磷脂酰甘油脂。
優(yōu)選地，溶劑為乙醇。但是其它技術(shù)人員已知的溶劑，例如碳水化合物溶劑也可使用。甲醇可為另一種適合的溶劑。
這里用的術(shù)語奧沙利鉑是指奧沙利鉑和任何奧沙利鉑的類似物或衍生物。本發(fā)明的脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑在這里還指它的商品名
根據(jù)本發(fā)明的術(shù)語帶負電荷的磷脂酰甘油脂涉及帶負電荷的磷脂酰甘油脂或其衍生物。這些脂類被表征為含有帶負電荷(陰離子)的首基。因此，這個術(shù)語用于描述任何具有形成膠團能力和帶凈負電荷首基的脂類。根據(jù)本發(fā)明不同方面的帶負電荷的磷脂酰甘油脂可選自二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二己酰(diaproyl)磷脂酰甘油(DCPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)或二油酰磷脂酰甘油(DOPG)。在優(yōu)選的實施方案中，帶負電荷的磷脂酰甘油脂為DPPG。
根據(jù)本發(fā)明的乙醇溶液優(yōu)選為20-40％，優(yōu)選大約30％的乙醇。奧沙利鉑對帶負電荷的磷脂酰甘油脂的摩爾比是在1:1到1:2的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，比例為1:1。
因此，根據(jù)本發(fā)明第一方面的一個實施方案，奧沙利鉑與DPPG在20-40％的乙醇中以1:1到1:2的摩爾比混合，在緩沖液例如硫酸銨(10-200mM)、Tris緩沖液(10-100mM)或磷酸鈉緩沖液(10-200mM)的存在下，pH為6.5-8.0，奧沙利鉑的終濃度達到大約5mg/ml?；旌衔锛訜岬?0-60攝氏度，孵育20min到3h。在這些條件下，奧沙利鉑分子上帶正電荷的亞氨基與DPPG分子上帶負電荷的基團相互作用，在乙醇溶液中形成反膠團。
在第二方面中，本發(fā)明涉及將奧沙利鉑包被進脂質(zhì)體的方法，所述方法包括將根據(jù)本發(fā)明的奧沙利鉑膠團與預形成的脂質(zhì)體或脂類混合。
在第三方面中，本發(fā)明涉及將奧沙利鉑包被進脂質(zhì)體的方法，所述方法包括以下步驟 c)將有效量的奧沙利鉑和帶負電荷的磷脂酰甘油脂與溶劑混合，形成包含奧沙利鉑的膠團，和 d)將所述奧沙利鉑膠團與預形成的脂質(zhì)體或脂類混合。
在所述方法的一個實施方案中，膠團與預形成的脂質(zhì)體混合。
預形成的脂質(zhì)體或脂類應用于本發(fā)明的方法，因此本發(fā)明的脂質(zhì)體可包含帶負和/或正電荷的脂類，例如磷脂。很多磷脂可用于本發(fā)明。例如，磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰-乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、鞘磷脂或磷脂酸都可在本發(fā)明中使用。也可使用神經(jīng)酰胺或其它脂類衍生物。出于調(diào)節(jié)脂膜的穩(wěn)定性或通透性的目的，可加入另外的親脂組分，例如膽固醇或其它類固醇、硬脂酰胺、磷脂酸、雙十六烷基磷酸酯、維生素E或羊毛脂提取物。
脂類可選自但不限于DDAB二甲基雙十八烷基溴化銨；DMRIEN-[1-(2，3-二肉豆蔻基氧基)丙基]-N，N-二甲基-N-(2-羥乙基)溴化銨；DMTAP1，2-二肉豆蔻?；?3-三甲基銨丙烷；DOGS雙十八烷基氨基甘氨酰精胺；DOTAPN-(1-(2，3-二油酰氧基)丙基)-N，N，N-三甲基氯化銨；DOTMAN-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-n，n，n-三甲基氯化銨；DPTAP1，2-二棕櫚?；?3-三甲基銨丙烷；DSTAP1，2-二硬脂?；?disteroyl)-3-三甲基銨丙烷。
在本發(fā)明的一個實施方案中，奧沙利鉑脂質(zhì)體包含DPPG、膽固醇和HSPC(氫化大豆磷脂酰膽堿)。所述包被目的是不減少功效而減少細胞毒性藥劑的不利反應。
本發(fā)明的脂質(zhì)體制品也可包含銨鹽，例如氯化銨、硫酸銨或任何其它的銨鹽。
根據(jù)本發(fā)明的帶負電荷的磷脂酰甘油脂，其用于形成膠團和作為脂質(zhì)體膜的部分，提供了增加藥物傳送進胞質(zhì)的細胞膜通透性的優(yōu)點。脂質(zhì)體從而可與細胞膜融合，并釋放其內(nèi)容物到細胞內(nèi)部。這些特性定義為融合。因而，由于這些融合特性和吞噬機制，根據(jù)本發(fā)明的奧沙利鉑的脂質(zhì)體制劑能夠穿過腫瘤細胞的細胞膜，并因此在奧沙利鉑抗性或藥物抗性的腫瘤治療中有所應用。
根據(jù)另一個實施方案，將帶負電荷的磷脂酰甘油脂絡合進奧沙利鉑的同一脂質(zhì)體，產(chǎn)生了非常高(50-100％)的包被功效，將產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的藥物損失最小化。
根據(jù)本發(fā)明的包被方法基于這里描述的帶負電荷脂類分子與奧沙利鉑之間的反膠團形成。反膠團通過奧沙利鉑的帶正電荷氨基和磷脂酰甘油脂例如DPPG的帶負電荷硫酸基團之間的靜電相互作用保持，使磷脂酰甘油脂的疏水鏈指向乙醇溶液，從而吸入奧沙利鉑分子。奧沙利鉑-磷脂酰甘油脂反膠團通過將它們與預制的脂質(zhì)體或脂類混合，轉(zhuǎn)化成脂質(zhì)體，然后可通過透析和擠壓透膜來去除乙醇，或用水稀釋，擠壓通過濾器，進行或不進行高壓過濾濃縮。這樣導致非常高產(chǎn)率地捕獲和包被奧沙利鉑。制備方法過程中脂質(zhì)體的脂類組成，很大程度上決定了納米顆粒外表面的脂類組成。
在本發(fā)明不同方面的一個實施方案中，可添加能使本發(fā)明的脂質(zhì)體逃避免疫監(jiān)督的包衣。優(yōu)選地，這種包衣是聚合物。包衣可在脂質(zhì)體階段或者插入后形成納米載體時添加。因而，本發(fā)明的脂質(zhì)體可包含這種包衣。根據(jù)本發(fā)明可使用的聚合物包括聚乙二醇(PEG)、聚甲基乙二醇、聚羥基丙二醇、聚丙二醇、聚甲基丙二醇、聚羥基環(huán)氧丙烷、聚氧乙烯和聚醚胺。另外的聚合物包括聚乙烯吡咯酮、聚乙烯基甲基醚、聚甲基噁唑啉、聚乙基噁唑啉、聚羥丙基噁唑啉、聚羥丙基甲基丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚二甲基丙烯酰胺、聚羥基丙基甲基丙烯酸酯、聚羥基乙基丙烯酸酯、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、聚乙二醇、聚天冬酰胺(polyaspartamide)和透明質(zhì)酸。優(yōu)選的聚合物是PEG。例如，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺可用PEG衍生得到PEG衍生的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)。這些聚合物可用作均聚物或者作為嵌段或無規(guī)共聚物。
本發(fā)明公布的脂質(zhì)體奧沙利鉑納米載體能逃避免疫監(jiān)督，因為聚合物包衣，其能在體液內(nèi)延長的時期中循環(huán)，能從組織池重分配到腫瘤內(nèi)，并且能在通過外滲穿過免疫妥協(xié)的脈管系統(tǒng)而靜脈輸注進動物和人體后優(yōu)先地在實體瘤和轉(zhuǎn)移灶中聚集，在血管新生過程中所述脈管系統(tǒng)的內(nèi)皮上存在缺陷。
本發(fā)明描述的包被方法的優(yōu)點是，脂質(zhì)體納米載體中的藥物將優(yōu)先通過有漏隙的腫瘤脈管系統(tǒng)外滲到達原發(fā)腫瘤和轉(zhuǎn)移灶，從而具有增強的抗癌活性。致融脂類DPPG增強了納米顆粒與腫瘤細胞膜的融合，而也通過腫瘤細胞的吞噬親和力增強了脂質(zhì)體奧沙利鉑的更高攝取。
而且，配基可以與本發(fā)明脂質(zhì)體的聚合物包衣結(jié)合。
例如配基可為肽，例如抗體。肽可在插入后階段插入，例如像肽-PEG-DSPE軛合物。根據(jù)本發(fā)明的肽包括但不限制于那些衍生自內(nèi)皮他丁、抗凝血酶、anastellin、血管他丁、PEX、色素上皮衍生因子、血小板反應蛋白(TSP)-1和2主要結(jié)構(gòu)的肽和那些能發(fā)揮雙重抗癌活性的肽通過例如對應于內(nèi)皮他丁NH2末端結(jié)構(gòu)域的27個氨基酸肽與PEG-DSPE的連接來限制腫瘤的血管生成(圖17)，也發(fā)揮出了包被進同一脂質(zhì)體的奧沙利鉑分子的抗腫瘤活性，所述脂質(zhì)體攜帶抗血管生成肽。
優(yōu)選的肽是內(nèi)皮他丁。內(nèi)皮他丁是基底膜蛋白膠原XVIII的非膠原結(jié)構(gòu)域1(NC1)的C末端20kDa蛋白水解片段，能抑制細胞增殖和遷移，是一種內(nèi)源的腫瘤血管生成和腫瘤生長的抑制劑。調(diào)解許多報道的內(nèi)皮他丁體外效果的主要問題是缺乏高親和力的受體。對內(nèi)皮他丁的慢性暴露阻斷了內(nèi)皮細胞的增殖和遷移，而且誘導了內(nèi)皮細胞的凋亡，從而抑制血管生成；內(nèi)皮他丁激活了培養(yǎng)的牛主動脈內(nèi)皮細胞中，內(nèi)皮一氧化氮合成酶(eNOS)在Ser116、Ser617、Ser635和Ser1179的急性磷酸化及Thr497的去磷酸化，這些是與eNOS激活相關(guān)的事件。一氧化氮(NO)確實促進了血管生成。因此，內(nèi)皮細胞對內(nèi)皮他丁的短期暴露可能是促血管生成的(Li等，2005)，不像長期暴露是抗血管生成的。對應于內(nèi)皮他丁NH2末端結(jié)構(gòu)域的27個氨基酸多肽，引出它全部的抗血管生成活性，具有很強的抗癌活性；負責鋅結(jié)合的3個組氨酸對于肽的抗癌特性是必需的(Tjin Tham Sjin等，2005，Tjin Tham Sjin RM，Satchi-FainaroR，Birsner AE，Ramanujam VM，F(xiàn)olkman J，Javaherian K)。對應于內(nèi)皮他丁NH2末端鋅結(jié)合結(jié)構(gòu)域的27個氨基酸合成肽，負責其抗腫瘤活性(Cancer Res.2005年5月1日；65(9)3656-63.Li C，Harris MB，Venema VJ，Venema RC.Endostatininduces acute endothelial nitric oxide and prostacyclin release.Biochem BiophysRes Commun(內(nèi)皮他丁誘導內(nèi)皮一氧化氮和前列腺環(huán)素的急性釋放).2005年4月15日；329(3)873-8.)。
本領域技術(shù)人員可以通過配體肽文庫的選擇容易地衍生出肽配基，所述配體能特異地與肽的表位相互作用，所述肽表位衍生自在腫瘤細胞表面過表達的腫瘤特異性抗原。如圖17顯示的PEG末端這些肽的化學作用聯(lián)結(jié)，使得包被奧沙利鉑的脂質(zhì)體能指向特異的腫瘤。表1圖表描述了腫瘤抗原，暴露給細胞外表面的肽能從其衍生、合成，并用于從隨機肽文庫衍生對所述腫瘤抗原具有高親合力的肽配基。這些肽配基接著共價結(jié)合到已插入脂質(zhì)體顆粒的脂類聚合物分子，例如PEG-DSPE分子。
其它配基可選自由轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、透明質(zhì)酸、糖鏈例如半乳糖或甘露糖、單克隆抗體、磷酸吡哆醛、維生素B12、唾液酰Lewis X(Sialyl Lewis X)、表皮生長因子、堿性成纖維生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、血管細胞粘附分子(VCAM-1)、細胞間粘附分子(ICAM-1)、血小板內(nèi)皮粘附分子(PECAM-1)、Arg-Gly-Asp(RGD)肽或Asp-Gly-Arg(NGR)肽和單克隆抗體的Fab’片段構(gòu)成的組。
在一個實施方案中，在脂質(zhì)體奧沙利鉑顆粒的表面用PEG-DSPE-葉酸酯軛合物修飾，所述軛合物在脂質(zhì)體顆粒形成后插入，從而使這些顆粒指向過表達葉酸受體的腫瘤。

表1配基 指向抗腫瘤抗原的肽也可在聚合物末端添加，例如PEG聚合物，使之多功能化，從而賦予納米顆粒靶向過表達特異表面抗原的特異腫瘤的特性。
在一個實施方案中，脂質(zhì)體奧沙利鉑顆粒也可用葉酸修飾，使奧沙利鉑脂類納米顆粒指向過表達葉酸鹽受體的卵巢(和其它)惡性細胞。
在其它實施方案中，脂質(zhì)體奧沙利鉑顆粒也可用Her2/neu配基修飾，使奧沙利鉑納米顆粒指向過表達Her2/neu的乳腺癌細胞。
根據(jù)本發(fā)明的奧沙利鉑的脂質(zhì)體制劑設法避開，抗性腫瘤中藥物攝取減少導致的對游離奧沙利鉑抗性的問題。從而，制劑可在奧沙利鉑抗性腫瘤中應用。在抗擊人類多種實體惡性腫瘤臨床試驗中，根據(jù)本發(fā)明的奧沙利鉑脂質(zhì)體制劑，也表現(xiàn)出比游離奧沙利鉑藥物(游離奧沙利鉑)更低的毒性。而且，因為這些奧沙利鉑脂質(zhì)體制劑的副作用范圍與游離奧沙利鉑的副作用范圍有差異，和進入腫瘤細胞的機制也不同，所以根據(jù)本發(fā)明的奧沙利鉑脂質(zhì)體制劑在非小細胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、頭頸癌、轉(zhuǎn)移前列腺癌和多種其它實體瘤以及結(jié)腸癌和胃癌的臨床應用中有優(yōu)勢。
在一個實施方案中，本發(fā)明的脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑能降低治療患者中膽紅素(圖2)或骨轉(zhuǎn)移(圖3)的水平。
在另一個實施方案中，這里描述的脂質(zhì)體制品可在靜脈輸注后使用，從而降低奧沙利鉑和其它共包被藥物的副作用，尤其是胃腸道毒性。
根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體制品可優(yōu)先指向人類腫瘤及其轉(zhuǎn)移灶。
因此在另一方面中，本發(fā)明涉及用作藥劑的、包含如這里描述的奧沙利鉑的脂質(zhì)體。
在另一方面中，本發(fā)明涉及具包被奧沙利鉑的脂質(zhì)體在生產(chǎn)用于治療癌癥藥物中的用途。
本發(fā)明也涉及癌癥治療的方法，所述方法包括給患者施用根據(jù)本發(fā)明具有包被奧沙利鉑的脂質(zhì)體。
可以治療不同類型的癌癥，包括結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、頭頸癌、前列腺癌、睪丸癌、腸癌、食管或尿路上皮癌。優(yōu)選地，治療針對結(jié)腸癌、胃癌或胰腺癌。
脂質(zhì)體通過靜脈輸注每周以100-350mg/m2的劑量施用。優(yōu)選的施用劑量是300mg/m2，但是其它可能的劑量是100mg/m2、150mg/m2、200mg/m2或250mg/m2。在一個實施方案中，給藥是2-5周期。每周期8-12周，然后是1或2周的休息。優(yōu)選的靜脈每周輸注是3小時。
在另一個實施方案中，給藥是恰好2周。
上面描述的這些給藥方案也可在奧沙利鉑施作這里描述的聯(lián)合療法時使用。
在另一方面中，本發(fā)明涉及制備包含兩種抗癌藥物奧沙利鉑和另一種藥物的膠團和/或脂質(zhì)體的方法。該方法如這里有關(guān)制備奧沙利鉑脂質(zhì)體所描述的方法，但包括將另一種抗癌藥物包括進膠團或脂質(zhì)體的步驟。
因而，在另一方面中，本發(fā)明涉及包含包被的奧沙利鉑和另一種抗癌藥物的脂質(zhì)體。這些藥物由此被包被進同一個脂質(zhì)體。這具有它們能被一起傳送到靶上的優(yōu)勢。將多于一種其它的抗癌藥物包括進脂質(zhì)體是可能的，并且在本發(fā)明范圍內(nèi)。
在一個實施方案中，具有不同作用機制的至少兩種抗癌藥物被包括進根據(jù)本發(fā)明的同一脂質(zhì)體。因此，腫瘤細胞能用兩種獨立的機制靶向，產(chǎn)生更好的臨床成效。
其它的抗癌藥物可選自化合物例如鉑化合物(例如順鉑、碳鉑)、抗代謝藥物(例如5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他濱、噴司他丁和氨甲喋呤)、靶向DNA的蒽環(huán)類抗生素(例如多柔比星和表柔比星)、靶向DNA的藥物或靶向拓撲異構(gòu)酶的藥物以及其它化療藥物。
在優(yōu)選的實施方案中，另一藥物選自順鉑、多西他賽、紫杉醇、吉西他濱、諾維本、多柔比星、依立替康(irrinotecan)、SN-38、吉西他濱或5-氟脫氧尿苷。
通過將兩種藥物包括進同一脂質(zhì)體，可能使用比每種藥物單獨施用時更低的劑量。兩種藥物可以協(xié)同的方式作用，從而在較低的副作用下更多地破壞腫瘤細胞。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，順鉑和奧沙利鉑共包被進同一脂質(zhì)體納米載體。因而，同一腫瘤細胞可被順鉑和奧沙利鉑兩者同時貼附。順鉑的副作用(腎毒性、神經(jīng)毒性和惡心/嘔吐)不同于脂質(zhì)體順鉑的副作用(血液學毒性)。奧沙利鉑的副作用也不同于脂質(zhì)體奧沙利鉑的副作用(神經(jīng)病變)。因而，同一腫瘤細胞能通過至少兩個獨立的機制靶向，否則(如果不包被進同一脂質(zhì)體給藥)兩種藥物(順鉑和奧沙利鉑)很有可能各自靶向不同的細胞。另外，施用包被進同一脂質(zhì)體的不同藥物的并用，可能用更低的達到功效劑量從而避免或減少藥物毒性。更尤其地，發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，通過降低奧沙利鉑的劑量限制了神經(jīng)毒性的副作用，同時通過降低順鉑的劑量限制了骨髓中毒性的副作用。結(jié)果是，分別改善了施用的脂質(zhì)體奧沙利鉑和脂質(zhì)體順鉑的神經(jīng)毒性和骨髓中毒性特征，但是同時也可能在系統(tǒng)給藥后對腫瘤產(chǎn)生同樣或更大的破壞性。因而，順鉑和奧沙利鉑的混合進同一脂質(zhì)體，在脂質(zhì)體藥物的副作用更加減小的條件下，允許了每種所述藥物以更低的劑量施用。
在另一個實施方案中，本發(fā)明脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑與藥物多柔比星(DOX)并用，所述多柔比星像本發(fā)明方法中描述的奧沙利鉑一樣被包被進同一脂質(zhì)體奧沙利鉑顆粒。令人驚奇地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)這樣可以降低奧沙利鉑的劑量并因此降低施用的脂質(zhì)體奧沙利鉑的神經(jīng)毒性，同時也降低了DOX的劑量。這樣減少了DOX的心臟毒性和其它副作用，同時給予腫瘤同樣或更高的破壞。
在另一個實施方案中，脂質(zhì)體包含奧沙利鉑和5-氟尿嘧啶。奧沙利鉑與5-氟尿嘧啶的并用最近被批準用于治療轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌。但是主要因為任一藥物的重要副作用，在這些藥物給藥中存在嚴重的問題，所述副作用通過藥物在本發(fā)明描述的脂質(zhì)體包被中被減到最少。而且通過這里描述的并用藥物，增加了治療的功效。
本發(fā)明也涉及奧沙利鉑和抗癌基因在同一脂質(zhì)體內(nèi)的包被。因而，根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體可包含奧沙利鉑和抗癌基因。使用的抗癌基因包括但不限制于p53、IL-2、IL-12、血管他丁和制瘤素。
在另一方面中，本發(fā)明涉及聯(lián)合療法，其中奧沙利鉑與如這里指明的另一藥物或基因一起給藥，其中兩種藥物都包被進同一脂質(zhì)體。因而，包含奧沙利鉑和另一種抗癌藥物或基因的脂質(zhì)體，能應用于治療癌癥的藥物生產(chǎn)或治療癌癥的方法。而且，本發(fā)明涉及混合脂質(zhì)體的第一醫(yī)療用途。
本領域技術(shù)人員可理解的是，給藥方案和成分的劑量會根據(jù)存在的另一藥物而變化。對于奧沙利鉑，可以使用這里描述的劑量和劑量范圍。而且并用脂質(zhì)體的給藥方案可為這里針對奧沙利鉑描述的方案。
在一個實施方案中，本發(fā)明脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑作為單一療法每周(第1、8和15日)給癌癥患者施用150-300mg/m2共12周，或者在21天周期內(nèi)的第1、8日與1g/m2吉西他濱并用，或與多西他賽、紫杉醇、依立替康并用。
在涉及方面中，本發(fā)明指向脂質(zhì)體包被的順鉑，其中順鉑與如這里描述的另一種抗癌藥物混合包被。順鉑能因此與紫杉醇、多西他賽、依立替康、SN-38、吉西他濱和5-氟脫氧尿苷中的任一種抗癌藥物混合進同一脂質(zhì)體顆粒。優(yōu)點是，同一腫瘤細胞同時被順鉑和一種其它的藥物攻擊，由于涉及兩種獨立的分子機制，因此能達到更有效的殺傷。例如，順鉑引發(fā)線粒體和核的凋亡信號傳導以及阻止復制的DNA交聯(lián)，而多西他賽將在微管蛋白聚合時作用。
有利地，脂質(zhì)體包被的順鉑用這里描述的方法，與吉西他濱混合一起包被進同一脂質(zhì)體。
另一方面，包含本發(fā)明脂質(zhì)體的奧沙利鉑可與另一種藥物一起給藥，但另一藥物不形成同一脂質(zhì)體的部分。另一藥物是如這里描述的，并優(yōu)選自順鉑、多西他賽、紫杉醇、吉西他濱、諾維本、多柔比星、依立替康、SN-38、吉西他濱或5-氟脫氧尿苷。
而且，在獨立的方面中，本發(fā)明涉及

與吉西他濱并用給藥。因而

和吉西他濱的聯(lián)合療法是本發(fā)明的一個目的。也提供了

在制備用于治療人類癌癥患者的藥物中的用途，所述治療通過施用包括

和另一種沒包被進同一脂質(zhì)體的藥物的聯(lián)合療法。
另一藥物可與

同時或不同時給藥。
優(yōu)選地，另一藥物是吉西他濱，給藥引起臨床的改善。優(yōu)選地，治療的癌癥是胰腺癌，但是也可治療其它癌癥例如結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、頭頸癌、前列腺癌、睪丸癌、腸癌、膀胱癌、食管或尿路上皮癌。吉西他濱的使用劑量是800-1000mg/m2，優(yōu)選1000mg/m2。Lipoplatin的劑量是100-125mg/m2，優(yōu)選100mg/m2。


和吉西他濱是靜脈給藥。

優(yōu)選每兩周(第1和第15天)8小時靜脈輸注給藥。吉西他濱優(yōu)選每兩周60分鐘靜脈輸注給藥?；衔锏慕o藥是4周的周期。
參考附圖和實施例，進一步示例說明本發(fā)明。實施例顯示奧沙利鉑脂質(zhì)體給藥引起了臨床的改善，即在癌癥治療中有臨床療效。實施例II顯示，

和吉西他濱給藥提供了臨床的好處，因而引起了臨床的改善。



圖1脂質(zhì)體奧沙利鉑用黃色矩形表示。脂類分子用球形的親水頭部表示。顆粒表面上的紅色隨機鏈代表PEG分子，所述PEG分子賦予顆粒逃避在肝中巨噬細胞破壞、在血液中的調(diào)理作用(與血清蛋白和其它大分子相互作用)的能力和系統(tǒng)傳送后外滲進實體瘤和轉(zhuǎn)移灶中的能力(也包括其100nm的小尺寸)。
圖2患結(jié)腸癌和肝轉(zhuǎn)移灶的患者(TK)中膽紅素的降低。由于血液中非常高水平的膽紅素(50mg/100ml)，患者患有肝病。在第1日、8日、15日和22日以200mg/m2的劑量注射脂質(zhì)體奧沙利鉑，引起了總膽紅素從50到12mg/m2的逐步降低。這種降低最有可能緣自阻塞膽管的肝轉(zhuǎn)移灶的減少。而且第31日和37日的治療沒有如膽紅素水平推論的阻止疾病的發(fā)展。
圖3使用脂質(zhì)體奧沙利鉑的單一療法減少了骨轉(zhuǎn)移灶?；加形赴┖凸寝D(zhuǎn)移灶的患者(EK)用每7天150mg/m2的劑量治療10周。產(chǎn)生了顯著的生命質(zhì)量的改善，少得多的疼痛、更少鎮(zhèn)痛藥的使用以及患者能進行日常工作。
圖4順鉑和奧沙利鉑共包被進同一脂質(zhì)體顆粒，進一步在插入后用肽-PEG-脂類軛合物修飾顆粒，以使這些顆粒指向具有由肽或配基識別的表面受體的特異細胞類型。圖還描述了在PEG分子末端添加肽鏈(紅色)，使脂質(zhì)體顆粒多功能化和對特異腫瘤的優(yōu)先指向。在這種情況下，特異的腫瘤抗原被脂質(zhì)體表面的肽部分識別。例如，表皮生長因子肽表位能結(jié)合暴露到外表面的EGFR部分，使所述脂質(zhì)體指向過表達EGFR的腫瘤。
圖5A顯示脂質(zhì)體包被奧沙利鉑注射后最高水平約14mg總鉑/ml血漿對比奧沙利鉑注射后約8mg總鉑/ml血漿，脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑在20分鐘和奧沙利鉑在10分鐘達到這些水平。
圖5B顯示游離奧沙利鉑注射后約100小時大鼠血漿中的總鉑水平達到零。
圖6A顯示也用

治療的動物中大鼠血漿中總鉑的水平。
圖7A顯示治療5小時的動物腎臟組織中總鉑的水平和圖7B顯示治療190小時的動物腎臟組織中總鉑的水平。
圖8A顯示治療5小時的動物肝臟組織中總鉑的水平和圖8B顯示治療190小時的動物肝臟組織中總鉑的水平。
圖9A和圖9B顯示治療190小時的動物脾臟組織中總鉑的水平。
圖10A顯示用游離奧沙利鉑和脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療5小時的動物大鼠組織中總鉑的分布和圖10B 圖11A和11B是用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑重復治療(11次)的大鼠的圖表。
圖12是用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑重復治療(6次)的大鼠的圖表。
圖13Lipoxal能在以16mg/Kg的劑量4天間隔6次靜脈注射后，引發(fā)小鼠中人類乳腺癌的全部消失。奧沙利鉑在其MTD(最大耐受劑量)時只能導致小鼠中人類乳腺癌的縮小而不是消失。
圖14脂質(zhì)體奧沙利鉑(Lipoxal)16mg/Kg的劑量是根除小鼠異種移植物中乳腺癌最有效的。最大耐受劑量4mg/Kg的奧沙利鉑在小鼠模型中具有較低的抗癌功效，其次是5mg/Kg劑量的Lipoxal。
圖15和16顯示脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的臨床試驗的結(jié)果。
圖17偶聯(lián)肽到PEG-DSPE上的化學過程。
實施例 實施例I 脂質(zhì)體制備 奧沙利鉑與DPPG(二棕櫚酰磷脂酰甘油)或其它帶負電荷的脂類分子在30％乙醇和0.1M Tris HCl，pH為7.5中以1:1的比例混合，奧沙利鉑的終濃度為5mg/ml，在濃度為20-40％乙醇溶液存在下，溫度條件是30-60攝氏度，在硫酸銨(10-200mM)、Tris緩沖液(10-100mM)或磷酸鈉緩沖液(10-200mM)的存在下，pH為6.5-8.0，孵育20min到3h。在這些條件下，奧沙利鉑分子上帶正電荷的亞氨基與DPPG分子上帶負電荷的基團相互作用，在乙醇溶液中形成反膠團(也見Lipoplatin美國專利6,511,676)。得到的奧沙利鉑-DPPG反膠團通過與預制的由膽固醇、磷脂酰膽堿、mPEG-DSPE(聚乙二醇-二硬酯酰磷脂酰乙醇胺)構(gòu)成的脂質(zhì)體快速混合，而被轉(zhuǎn)化成脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑-DPPG單層，然后通過鹽水滲析和擠壓透膜來將顆粒的直徑降到80-120nm。所添加脂質(zhì)體的脂類組成決定了最終奧沙利鉑制劑的外膜組成(圖1)。
實施例II A.用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的初步臨床經(jīng)驗 I.A.動物研究 在美國、法國、瑞士和希臘(Pasteur研究所，雅典)從2003年5月到2004年12月獨立實驗室對小鼠異種移植物進行的動物研究顯示，與僅奧沙利鉑相比脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑具有更好的治療功效以及更低的毒性，而且與游離藥物奧沙利鉑比較在小鼠和大鼠中表現(xiàn)出更好的耐受。而且在6-8次靜脈輸注后的小鼠中，脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑能引起多種人類癌癥的完全消失或縮小，比奧沙利鉑的治療更有效和毒性更低。
以16mg/Kg的劑量，間隔4天6次靜脈輸注后的小鼠中，顯示脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑能引起人類乳腺癌的完全消失。另一方面，MTD(最大耐受劑量)的游離藥物奧沙利鉑只能導致腫瘤的縮小，而非消失。
5mg/Kg游離奧沙利鉑注射的小鼠死于毒性，劑量降低到4mg/Kg。脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的劑量是16mg/Kg i.v.，毒性比4mg/Kg游離奧沙利鉑更低。在攜帶人類腫瘤的動物中，4mg/Kg游離奧沙利鉑的抗癌功效比16mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑更低。
在所述研究動物中，脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的研究被報道。給大鼠腹腔(i.p.)注射脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑或作為對照的游離奧沙利鉑，用于研究注射后10分鐘到7天的組織生物擾動。注射劑量為15mg/Kg的脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑后，總鉑(Pt)在血漿中的最大水平是14.0mg/ml血漿，對比注射游離奧沙利鉑后是7.5mg/ml血漿；這些水平是在注射后10-15分鐘達到的。腎組織中也觀察到類似于血漿的藥物代謝動力學行為；在全部組織中，注射后最初20分鐘期間內(nèi)血漿和腎臟具有最高水平的奧沙利鉑。與相同劑量水平的脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑相比，游離奧沙利鉑治療后，在注射后40-190小時的延長時期內(nèi)，脾臟組織表現(xiàn)出超過2倍高水平的鉑。11次重復施用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑至大鼠后，在全部被檢查的組織中，脾臟達到異常高水平的總鉑(80mg/g組織)。肝臟表現(xiàn)出類似的鉑積累的藥物代謝動力學，作為游離奧沙利鉑對比脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療后的時間函數(shù)。與脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑比較，在大鼠腎臟中10分鐘到7天內(nèi)，

表現(xiàn)出類似的藥物代謝動力學行為，但是到4小時時兩種藥物在肝臟的藥物代謝動力學是類似的，在7天的時期內(nèi)與

比較脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑能被更高地積累。大鼠全生化和血細胞計數(shù)表明，與游離奧沙利鉑比較脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑表現(xiàn)出更低的骨髓中毒性。大鼠中SGOT轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、膽紅素、肌酐、血尿素和血尿酸水平是持續(xù)正常的，沒有來自脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的肝或腎毒性。與其脂質(zhì)體PEG化制劑一致，數(shù)據(jù)顯示出脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑在大鼠組織中更長的貯留和更低的毒性。
用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射大鼠的藥物代謝動力學研究 20只平均體重150g、2-3月齡的Wistar雌性大鼠用于藥物代謝動力學研究。用3mg/ml的脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑懸浮液腹腔注射大鼠，終劑量為15mg/Kg。每個時間點用兩只動物。大鼠在注射后7分鐘、20分鐘、1.5小時、3.75小時、24小時、40小時、90小時和170-180小時處死。血液收集到肝素化的Eppendorf管里離心。用爐原子吸收(AA700 Perkin Elmer)測定血漿中總鉑的水平。
用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑重復注射大鼠進行組織學研究。我們對于確定脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑重復注射大鼠到其最大耐受劑量后對各種組織的損傷有興趣。
關(guān)于來自脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的毒性的大鼠中生化和血液學分析 用3mg/ml的脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑懸浮液腹腔注射大鼠，終劑量為15或30mg/Kg。用于血漿藥物代謝動力學研究的大鼠血液(注射后7天)，也經(jīng)由獨立的微生物學實驗室用于分析骨髓、腎臟、肝臟和胃腸的功能。檢查的參數(shù)為血紅素、血細胞比容、白細胞、粒細胞、血小板、SGOT轉(zhuǎn)氨酶、SGPT轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、總膽紅素、尿素、尿酸和肌酐。
結(jié)果 大鼠中脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的毒理學 用游離奧沙利鉑或脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射大鼠，終劑量為15或30mg/Kg。30mg/Kg奧沙利鉑組嚴重影響食欲，表現(xiàn)出嚴重的體重減輕；30mg/Kg奧沙利鉑組治療后7天，體重減輕33％；7天后全部動物的平均體重從150g降到平均100g。作為對比，用同樣劑量30mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射的動物表現(xiàn)出只有10％體重的減少(從平均150g到7天時最終135g)。
注射后7天，從15mg/Kg治療的動物抽取血液進肝素化或非肝素化的離心管，經(jīng)由獨立的臨床實驗室進行全生化和血液學分析。每組使用兩只動物。表1顯示兩種測量的平均值。15mg/Kg奧沙利鉑組的白細胞表現(xiàn)出下降到800,000/mm3(根據(jù)WHO 4級毒性)，對比用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療的組為3,400,000/mm3(1級毒性)。因此，脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑與游離奧沙利鉑比較，沒有導致白細胞計數(shù)的大幅減少。與脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑比較，奧沙利鉑也更高程度降低了血小板的水平。兩種治療的血紅素水平都接近正常。因此，兩種藥物的骨髓中毒性表現(xiàn)出更多指向白細胞和血小板而不是紅細胞生成的過程。兩種藥物都能升高SGOT轉(zhuǎn)氨酶，具2級肝毒性；但是沒有影響SGPT轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶的水平；也沒有影響膽紅素、血尿素和肌酐的水平(盡管血尿素的水平下降了)，與大鼠腹腔施用游離奧沙利鉑或脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑沒有引起腎毒性一致。

表2大鼠腹腔注射脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑或游離奧沙利鉑后，骨髓、肝和腎功能的變化。
大鼠的藥物代謝動力學 大鼠直接腹腔注射3mg/ml脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑或3mg/ml游離奧沙利鉑5％葡萄糖的儲液，至終劑量為腹腔15mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑或奧沙利鉑。在注射后的不同時間點取血，分離血漿，測量總鉑水平用于藥物代謝動力學研究。圖5A顯示脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射后20分鐘，總鉑達到最高水平約14mg/ml血漿，對比游離奧沙利鉑注射后10分鐘，總鉑達到最高水平約8mg/ml血漿。在大約45分鐘時，兩組的總鉑表現(xiàn)出相似的水平(約5mg總鉑/ml血漿)，然而注射脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑后4-5小時獲得總鉑的水平低于1mg/ml血漿，對比注射游離奧沙利鉑后獲得的總鉑水平為約2mg/ml血漿。注射脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑40小時大鼠血漿中總鉑的水平降到零，而注射游離奧沙利鉑的是約1mg總鉑/ml血漿；注射游離奧沙利鉑后約100小時后，大鼠血漿中的總鉑水平降到零(圖5B)。


表3 根據(jù)15mg/Kg劑量的脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑

或游離奧沙利鉑，計算總鉑的平均藥物代謝動力學參數(shù)，在表2中顯示。
用線性梯形法外推到無窮確定AUC(Gibaldi等，1982 Gibaldi M，Perrier DNoncompartmental analysis based on the statistical moment theory(基于統(tǒng)計矩理論的非房室模型分析).In Pharmacokinetics，Gibaldi M，Perrier D(編)，pp409-417，第2版.Marcel DekkerNew York，1982.)，脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的AUC是53.7mg.h/ml，奧沙利鉑的是74.4mg.h/ml。
對于脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑，血漿達到的總鉑最大濃度是14.0mg/ml，游離奧沙利鉑的是7.6mg/ml。對于脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑，總身體清除率(Cl)是0.28ml/g.h，游離奧沙利鉑的是0.20ml/g.h。這是由Cl＝Di.v./AUC計算出來的，其中Di.v.是脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑或游離奧沙利鉑的腹腔注射劑量，AUC是這個特定劑量曲線下的相對面積。
脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的清除速率常數(shù)(Kel)是0.07h-1。這是用公式Kel＝[Ln(Cp1)-Ln(Cp2)]/(t2-t1)通過對數(shù)血漿濃度-時間曲線的線性回歸分析計算出來，其中t1和t2是測量開始和終止的時間點，Cp1和Cp2分別是血清總鉑在t1和t2的開始和終止?jié)舛取?br> 脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的清除半衰期(t1/2)是10.2h。這是通過公式t1/2＝0.693(1/Kel)計算出來的。1/Kel是平均滯留時間(MRT)，統(tǒng)計矩類推到半衰期t1/2(Gibaldi等，1982)。
用Lipoplatin

治療的動物中也測定了大鼠血漿的總鉑水平，Lipoplatin

是一種不同的脂質(zhì)體鉑藥物，目前處于三期評估中(Stathopoulos等，2005)。Lipoplatin

是一種脂質(zhì)體順鉑，30mg/Kg i.p.用藥。30mg/Kg Lipoplatin注射后20分鐘達到總鉑最大水平～17mg/ml，與脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑具有類似的時幀(圖6A)。也給大鼠腹腔注射最大耐受劑量5mg/Kg的順鉑作為對照；順鉑注射后10分鐘達到總鉑最大水平～7.5mg/ml，與奧沙利鉑具有類似的時幀。全部四種藥物在注射后～1.5小時，引起平行的藥物代謝動力學行為；但是，

注射5小時產(chǎn)生～2.5mg總鉑/ml血漿，隨后奧沙利鉑產(chǎn)生2.0mg總鉑/ml血漿，順鉑產(chǎn)生～1.5mg總鉑/ml血漿，和脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑產(chǎn)生～1.0mg總鉑/ml血漿。
脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑或游離奧沙利鉑腹腔注射后，大鼠組織中總鉑的生物擾動 因為用原子吸收法檢測鉑的結(jié)果精確性和相對容易，研究鉑藥物在小鼠或大鼠組織中的分布是很有用的。腎臟中的鉑水平15mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射后，腎臟中總鉑的最大量為13.7mg/g組織，對比15mg/Kg奧沙利鉑注射后為～10.5mg/g組織，在注射后7-20分鐘內(nèi)達到(圖7A)。但是大約奧沙利鉑注射后4小時后，腎臟中的鉑水平達到4.8mg/g組織的最小值，167小時輕微升高到6.9mg/g組織。腎臟中脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療后，也有～1mg/g組織總鉑的最小值，在注射后～20小時達到，188小時輕微升高到2.5mg/g組織。因而，奧沙利鉑對比同樣劑量的脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療，在注射后～7天腎臟表現(xiàn)出約3倍高水平的鉑(圖7B)。
作為比較，在腎臟中注射30mg/Kg Lipoplatin

后達到最高水平為34mg/g組織，對比注射5mg/Kg順鉑后為10mg/g組織。
Lipoplatin

和脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑在腎臟中的藥物代謝動力學表現(xiàn)出類似的行為。30mg/Kg Lipoplatin

和15mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的最大值分別為34和14mg/g組織。這點支持了兩種藥物在腎臟中的生物擾動的相似性，所述兩種藥物具有共同的外殼但藥物不同，藥物限制在其內(nèi)部和它們靶向的腫瘤內(nèi)。30mg/Kg Lipoplatin

注射后120小時腎臟中總鉑的水平是5mg/g組織，對比15mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射后是～2.5mg/g組織(圖3B)。15mg/Kg游離奧沙利鉑注射后～140小時總鉑為～7mg/g組織，對比5mg/Kg順鉑注射后為～4mg/g組織(圖3B)。
結(jié)論 在7天時全部大鼠組織中腎臟中的鉑水平是最高的，隨后是肝臟和脾臟。
肝臟中的鉑水平 15mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑腹腔注射后～7-10分鐘，肝臟中的總鉑是3.5mg/g組織，20分鐘時突然下降到2.5mg/g組織，此后這個水平維持了5小時(圖8A)。相反，用同樣劑量的游離奧沙利鉑腹腔注射大鼠在肝臟中產(chǎn)生類似的總鉑水平(3.0-3.5mg/g組織)，所述水平在注射后約30分鐘達到，維持了2小時，接著在5小時逐漸下降到1.5mg/g組織(圖4A)。脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑和游離奧沙利鉑治療后170-190小時，不像血漿中的鉑水平在約40小時后下降到零，肝聚集鉑為～2mg/g組織(圖8B)。
作為比較，

注射后肝臟中總鉑的水平是7mg/g組織，維持了～5小時(圖8A)，在～12小時降到4.5mg/g組織，在24小時升高到6.5mg/g組織，在120小時逐漸下降到3.5mg/g組織(圖4B)。順鉑也表現(xiàn)出與

類似的模式，20分鐘時達到最大水平2.5mg/g組織，維持了5小時(圖4A)，然后從24到150小時逐漸降到1(圖8B)。
脾臟中的總鉑15mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑施用后，脾臟中總鉑的最大量是3.2mg/g組織，對比15mg/Kg奧沙利鉑施用后為～5.2mg/g組織，而且在注射的15-20分鐘達到(圖9A)。脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑與奧沙利鉑施用后，到注射后～5小時分別輕微下降～2和～4mg/g組織。此后注射脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的脾臟中總鉑的水平升高，在～45小時達到～4.5mg/g組織，隨后在190小時下降到～2mg/g組織。相反，游離奧沙利鉑注射后脾臟中總鉑水平持續(xù)積累，在168小時達到18.5mg/g組織(圖9B)。這伴隨著在7天時脾臟重量的巨大減少，推測由于游離奧沙利鉑的毒性引發(fā)脾細胞的凋亡。事實上，研究前小鼠的平均體重是150g，7天時終體重是109g，脾臟的重量是0.188g。
用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療動物的脾臟中有瘀血(血液聚集)。
但是，游離奧沙利鉑治療約1小時后，腎臟中的鉑水平高于脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療；它們在12-24小時達到最小值(奧沙利鉑注射后是5mg/g組織，脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射后是1mg/g組織)，而且又開始升高；注射奧沙利鉑后170小時腎臟組織表現(xiàn)出7mg鉑/g組織，而注射脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑后是2.5mg鉑/g組織(圖5B)。
脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑或游離奧沙利鉑注射后，檢查的所有大鼠組織中總鉑的比較測量在圖10中總結(jié)。15mg/Kg奧沙利鉑注射后20分鐘，全部組織中血漿總鉑水平達到最高(14.2mg/ml)；脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑腹腔注射后～10分鐘，腎臟組織達到相對高的水平(13.8mg/ml)(圖10A)。下一個水平包括奧沙利鉑注射后腎臟中的鉑和奧沙利鉑注射后血漿中的鉑。脾臟表現(xiàn)為下一個較高的水平(15mg/Kg奧沙利鉑注射后5mg/g組織)，所述水平持續(xù)升高，24小時后變得最高，170小時甚至達到更高(18.5mg/g組織)。因此總體上，奧沙利鉑注射后脾臟最終積累了最高水平的鉑。在這個方面，游離奧沙利鉑或脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射后脾臟中鉑積累之間的差異是明顯的(圖10B)。
4種藥物腹腔注射后，大鼠組織中最大水平的鉑(以mg鉑/ml血漿或每g組織表示)(ND，未測定) 脂質(zhì)體包 奧沙利鉑

順鉑 藥物&劑量 被的奧沙 15mg/Kg 30mg/Kg 5mg/Kg 利鉑 15mg/Kg 腎臟 13.7 10.5 33.2 10.2 血漿 14.0 7.6 16.6 7.5 肝臟 3.53.1 6.9 2.7 脾臟 3.15.1 3.5 1.1 肺 3.73.2 7.5 2.0 心臟 1.81.1 4.5 0.8 腦 ND ND1.7 0.3 5小時 脂質(zhì)體包奧沙利鉑

順鉑 藥物&劑量 被的奧沙15mg/Kg 30mg/Kg 5mg/Kg 利鉑估計 15mg/Kg 估計 腎臟 2.0 5.0 4.2 6.8 血漿 0.9 1.7 2.4 1.1 肝臟 2.4 1.5 6.8 2.4 脾臟 1.8 3.8 2.7 1.2 肺 0.8 1.7 0.6 0.7 心臟 0.3 0.8 0.2 0.2 腦 ND ND 0.1 0.1 5-7天 脂質(zhì)體包奧沙利鉑

順鉑 藥物&劑量 被的奧沙15mg/Kg 30mg/Kg 5mg/Kg 利鉑 15mg/Kg 腎臟 2.5 6.9 5.2 4.1 血漿 000.1 0.1 肝臟 2.2 1.8 3.5 1.1 脾臟 2.3 18.5 4.9 1.5 肺 0.4 2.4 0.2 0.3 心臟 0.6 0.5 0.1 0.1 腦 ND ND 0.1 0 表4脂質(zhì)體奧沙利鉑、游離奧沙利鉑、脂質(zhì)體順鉑和游離順鉑注射后7-20分鐘、5小時和5-7天時，不同大鼠組織中總鉑水平的比較 脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療后5-7天腎臟、脾臟和肝臟具有顯著的鉑水平。
游離奧沙利鉑治療后5-7天脾臟、腎臟、肺和肝臟具有顯著的鉑水平。


治療后5-7天腎臟、脾臟和肝臟具有顯著的鉑水平。
順鉑治療后5-7天腎臟、脾臟和肝臟具有顯著的鉑水平。
數(shù)據(jù)顯示15mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑腹腔注射后與15mg/Kg游離奧沙利鉑比較 1.脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射后總鉑的血漿水平是14mg/ml血漿，奧沙利鉑注射后總鉑的血漿水平是7.6mg/ml血漿 腹腔注射約7-20分鐘內(nèi)達到最大值 這表示脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑與奧沙利鉑相比具有更長的循環(huán)。
2.脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑(14mg/g組織)與游離奧沙利鉑(11mg/g)相比，在注射后最初的15分鐘腎臟中的水平更高，但是在1.5小時和此后腎臟中的水平變成游離奧沙利鉑(6.7mg/g組織)比在1.5小時時脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑(2.3mg/g)的更高。
3.游離奧沙利鉑(3.8mg/g組織)與脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑(1.8mg/g)比較，注射后1.5小時脾臟中的水平更高。
4.兩種藥物心臟中的水平相當并且是低的 血漿中的鉑水平15mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑腹腔注射后，血漿中的總鉑最大值是14mg/ml，與15mg/Kg奧沙利鉑注射后是～7.5mg/ml組織比較，這些值在注射后7-20分鐘內(nèi)達到(圖10A)。但是約1小時后，來自游離奧沙利鉑比來自脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療的血漿中鉑水平變得更高，而且維持貫穿剩下的曲線直到50小時，此時脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的水平變?yōu)榱悖?00小時時游離奧沙利鉑的水平變?yōu)榱恪?br> 腎臟中的鉑水平15mg/Kg Lipoxal注射后，腎臟中的總鉑最大值是13.5mg/g組織，與15mg/Kg奧沙利鉑注射后是～10.5mg/g組織比較，這些值在注射后15-20分鐘內(nèi)達到(圖10A)。但是約4小時后，游離奧沙利鉑注射后的腎臟中的鉑水平達到最小為4.8mg/g組織，167小時輕微升高到6.9mg/g組織。脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療后，腎臟中總鉑也達到最小為～1mg/g組織，是在注射后～20小時達到，188小時輕微升高到2.5mg/g組織。因而游離奧沙利鉑治療注射后～7天，腎臟表現(xiàn)出比同樣劑量的脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療約3倍高水平的鉑。在全部大鼠組織中，腎臟中鉑的水平是最高的，然后是肝臟和脾臟。
脾臟中的鉑水平15mg/Kg脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射后，脾臟中的總鉑最大值是14mg/ml，與15mg/Kg游離奧沙利鉑注射后是～7mg/g組織比較，這些值在注射后15-20分鐘內(nèi)達到(圖10A)。但是約1小時后，來自游離奧沙利鉑比來自脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療的腎臟中鉑水平變得更高，它們在大約12-24小時顯示最小(奧沙利鉑注射后是5mg/g組織，脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑注射后是1mg/g組織)，又開始升高；游離奧沙利鉑注射后170小時，腎臟組織顯示7mg鉑/g組織，而脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑顯示2.5mg鉑/g組織(圖10A)。
藥物治療導致體重差異和組織尺寸減小 用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑(15mg/kg)和游離奧沙利鉑(15mg/kg)治療的動物，在藥物腹腔注射后7.8和7天處死，在總體重減輕和單個器官重量上表現(xiàn)出巨大的差異。

表5奧沙利鉑治療后惡病質(zhì)(cahexia)導致體重減少。用同等劑量的脂質(zhì)體奧沙利鉑治療的動物表現(xiàn)出更小的總重量或器官重量減少。脾臟顯示為被游離奧沙利鉑影響最大的組織。
用游離奧沙利鉑治療的動物在用藥后7天表現(xiàn)出巨大的重量減輕，所述減輕在治療時被估計為超過40gr總體重。而且，脾臟組織的尺寸顯著減小，是鉑濃度極其高的值(18.5mg鉑/g組織)的反映。
游離奧沙利鉑用藥后食欲的降低和藥物毒性導致重量減輕和脾臟尺寸減小；這些現(xiàn)象在用藥7天后處死動物中觀察到，因此顯示出游離奧沙利鉑腹腔注射后7天組織圖表中的高鉑濃度值。
對于其它組織也可考慮同樣的影響，只要全部游離奧沙利鉑組織圖表(肝臟、肺、心臟、脾臟和腎臟)中的鉑濃度值在時間點(7天)表現(xiàn)出升高。
用5mg/Kg奧沙利鉑注射的小鼠死于毒性，劑量降低到4mg/Kg。Lipoxal的劑量是16mg/Kg i.v.，毒性比4mg/Kg奧沙利鉑更低。對于攜帶人類腫瘤的動物，4mg/Kg奧沙利鉑的抗癌功效比16mg/Kg Lipoxal更低。
實施例2B I期臨床研究 研究的目的是a)評估脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的不利反應和檢測劑量限制性毒性(DLT)以及最大耐受劑量(MTD)?；颊吆头椒ㄑ芯靠偣舶?7名晚期疾病患者。根據(jù)既定的指導方針，用標準化療預治療全部患者。在進入目前試驗時，全部處于復發(fā)或進行性的疾病中。全部患者患有胃腸癌IV期(結(jié)腸、胃和胰腺癌)。我們設定了6個不同劑量水平的脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑，每個水平至少包括3名患者。劑量水平是1)100mg/m22)150mg/m23)200mg/m24)250mg/m25)300mg/m26)350mg/m2。8名另外的患者用300mg/m2作為MTD治療。治療每周一次，連續(xù)3周，每4周重復。結(jié)果前4個劑量水平(100-250mg/m2)沒有觀察到嚴重的副作用。水平5和6觀察到輕微的骨髓中毒性和惡心。最常見的不利反應是II級外周神經(jīng)病變，在全部4名350mg/m2治療的患者中觀察到。因此我們認為350mg/m2水平是DLT，300mg/m2水平是MTD。27名患者中，3名顯示部分反應，18名患者具有4個月的穩(wěn)定疾病，中值范圍(2-9)。結(jié)論在目前I期研究中我們發(fā)現(xiàn)，300mg/m2和350mg/m2劑量水平的最常見毒性是外周神經(jīng)病變。脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑被良好耐受，顯著減少了游離奧沙利鉑的全部其它副作用，尤其是骨髓中毒性和胃腸道毒性。這些初步的結(jié)果顯示了在預治療患者中的適當功效。
所述研究是用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑(

)進行的臨床試驗，具有以下首要目的a)確定每周Lipoxal用藥的提高劑量的劑量限制性毒性(DLT)和最大耐受劑量(MTD)，b)檢測預治療晚期胃腸癌患者中，lipoxal單一療法的毒性特征和藥物代謝動力學。第二目的是功效和存活率。
患者和方法 研究是I期群組，脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑劑量升高試驗。研究方法經(jīng)我們的機構(gòu)審查委員會審查和批準?；颊唛喿x了滿足全部機構(gòu)要求的通知同意文件，簽字作為注冊的一個條件。
合格標準 全部患者需要符合以下標準確認癌癥的組織學或細胞學診斷，至少一種二維可測或可評估的疾病，WHO體力狀態(tài)為0-2，平均壽命預期超過3個月，用標準或第一線化療預治療和進入時對任何細胞毒素治療具頑固性。如果患者具有2或3項前面的條件就是合格的，條件是他們斷開治療至少3周。
評估 合格的患者超過18歲，要求具有由下述確定的足夠的血液、腎和肝功能白細胞計數(shù)3.5 x 109/l、絕對中性粒細胞計數(shù)1.5 x 109/l，血小板計數(shù)100 x 109/l，血紅素水平9g/dl，總膽紅素水平1.5mg/dl，ALT和AST是無肝轉(zhuǎn)移灶時正常上限2倍或證明有肝轉(zhuǎn)移灶的情況下正常上限的5倍，肌酐水平1.5mg/dl。治療前完成病史、體檢、生命體征的評估、心電圖、胸和腹的計算機斷層成像(或超聲波檢查)。治療期間(每個療程前1天)完成血細胞計數(shù)、血尿素和血糖、血清肌酐和尿素測試以及ECG。至少每周8次藥物注射后或疾病發(fā)展早期進行CT掃描評估。
治療 藥物特性以3mg/ml、每玻璃管50ml、每玻璃管150mg奧沙利鉑的形式提供。脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑4攝氏度、避光儲存。脂質(zhì)體藥物的特性脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑稀釋在1升5％葡萄糖中，每周一次3小時靜脈輸注連續(xù)8周。有副作用尤其是骨髓中毒性或神經(jīng)毒性時，治療給藥將延遲1周進行。不需要提前或之后水合。沒有計劃預防性施用其他藥物例如antihemetic或抗過敏藥。有惡心或嘔吐時，給予止吐藥(昂丹司瓊(Ondasetron))或抗過敏藥(地塞米松)的支持。
前面進行的動物研究中，大約400mg/m2到600mg/m2被定義為MTD。人類中我們決定從100mg/m2劑量開始作為劑量1。劑量的提高被決定為50mg/m2每水平。表1呈現(xiàn)了每組患者脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的劑量提高。
評估治療每周期的藥物相關(guān)毒性和根據(jù)WHO標準進行評級。DLT被定義為任一3或4級毒性，50％的患者觀察到與長于72小時持續(xù)發(fā)熱相關(guān)的中性粒細胞計數(shù)<500mm2。如果在至少50％的患者中觀察到其它3級毒性尤其是神經(jīng)毒性也被認為是DLT。低于DLT的一個劑量水平被定義為MTD。每個劑量水平安排最少3名患者的群組進入。全部3名患者接受第一周期前面劑量的治療后，而且每人至少被觀察3周，沒有DLT的跡象，劑量才升高到下一個更高的水平。如果某個水平的第一個患者在3周治療的第一個時期經(jīng)歷了DLT，將另外兩個患者加入所述劑量水平。中斷DLT發(fā)生的治療，患者在更低的水平繼續(xù)治療。
藥物代謝動力學 用于藥物代謝動力學研究的患者在以下時刻取血。0(藥物注射前)和注射開始后2、4、8、24、48、72、120(5天)和168(7天)小時。3ml血液抽取進含有EDTA或肝素的管中，然后離心，2℃致冷，最后送往實驗室分析總鉑水平。使用5名患者的樣品。用原子吸收法(Perkin Elmer AA 700GraphiteFurnace Atomic Absorption Spectrometer(石墨爐原子吸收光譜儀)at RegulonA.E.)測量鉑水平(總的和血清超濾液)。在某一劑量水平(200mg和300mg/m2)血漿濃度-時間曲線(AUC)下面的面積，Cmax(血清中總鉑的最大濃度)?？偵眢w清除率(Cl)是由CL＝Div/AUC計算出來的，其中Div是Lipoplatin

的靜脈內(nèi)劑量，AUC是特定劑量曲線下的相對面積。Kel(清除速率常數(shù))是用公式Kel＝[Ln(Cp1)-Ln(Cp2)]/(t2-t1)通過對數(shù)血漿濃度-時間曲線的線性回歸分析計算出來，其中t1和t2是測量開始和終止的時間點，Cp1和Cp2分別是血清總鉑在t1和t2的開始和終止?jié)舛取?br> t1/2(清除半衰期)是通過公式t1/2＝0.693(1/Kel)計算出來的。1/Kel是MRT(平均滯留時間)，統(tǒng)計矩類推到半衰期t1/2(Gibaldi等，1982)。實際上，MRT代表清除用藥劑量63.2％的時間。
結(jié)果 患者 表5顯示患者的特征?？偣驳怯浟?7名患者。年齡32-78，中值年齡62，男性18名，女性9名，P.S.0-2。全部患者用化療預治療。預治療每腫瘤。
毒性 脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的胃腸道毒性可忽略不計。不用止吐藥(Ondosetron)會觀察到惡心或輕微嘔吐。但是用Ondosetron沒有觀察到惡心嘔吐。也沒有腹瀉。輕微或1級骨髓中毒性(中性粒細胞減少)只在最高劑量(350mg/m2)用藥的2名患者(％)中發(fā)現(xiàn)。沒有發(fā)現(xiàn)肝毒性、腎毒性、心臟毒性和脫發(fā)。3名患者出現(xiàn)了輕微衰弱。
主要副作用是神經(jīng)毒性，至少3次藥劑注射后被發(fā)現(xiàn)，第三和第四水平時是1級，第五水平時是2級，第六水平的100％患者是2級。
在這些結(jié)果的基礎上，認為3級是劑量限制性毒性，在用350mg/m2脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療的100％患者中觀察到。低于300mg/m2的一個劑量被定義為最大耐受劑量(MTD)。表5顯示的是脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑的劑量升高和用六種水平中的每個治療的患者數(shù)目。
藥物代謝動力學結(jié)果在表7、圖15和16中表示。發(fā)現(xiàn)在血漿濃度中奧沙利鉑的半衰期是24小時，7天內(nèi)整合到尿排泄。
治療的順應性 施用總數(shù)為104次注射(周期)，中值是每名患者4周期(范圍2-15)。周期間的中值間隔是7天。劑量強度是計劃的100％。因為沒有檢測到血液學3或4級的毒性，沒有患者發(fā)生治療延遲。只有用350mg/m2劑量的患者在最多4或5次注射(周期)后間隔了2周，然后分類到300mg/m2的低劑量。某些患者由于4-6周期后疾病發(fā)展停止了治療。這點應用于17名病人(62.9％)。12名病人(44.4％)仍然在研究終止時存活。死亡的原因是疾病發(fā)展。
治療反應 在意向治療的基礎上分析反應。沒有完全的反應。27名中的3名患者(11.1％)表現(xiàn)出部分反應。這些患者中2名胃癌患者，1名有胸腔積液和另一名有骨骼轉(zhuǎn)移灶；第三名患者有來自結(jié)腸癌的肝轉(zhuǎn)移灶。部分反應的檢測基于對第一名患者的CT掃描，第二名患者的骨骼掃描和第三名患者的CT掃描和膽紅素血清水平檢測。兩張圖代表圖1第二名患者治療前和治療后的骨骼掃描，以及第三名患者的膽紅素血清水平曲線。異常地，我們治療第三名患者時，其血清膽紅素水平是51mg/dl，兩個療程后其水平下降到8mg/dl，持續(xù)了5周。
對于每名患者反應的持續(xù)時間分別是4、7和2個月。18名患者(66.66％)表現(xiàn)出穩(wěn)定的疾病，中值持續(xù)時間是4個月(范圍是2-9個月)。根據(jù)不再有效的分類，5名患者可被分類為較小反應。6名患者表現(xiàn)出疾病發(fā)展。全部3名有反應者中存在50％或更多標志物CA-19-9的減少。而且全部3名有反應者的體力狀態(tài)從2提高到1。
結(jié)論 作為具胃腸系統(tǒng)晚期癌癥患者的單一療法(單個治療)，在當前試驗(實施例)中檢測了脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑。全部患者用標準治療預治療，全部包括結(jié)腸患者也用游離奧沙利鉑治療。用脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑治療只在臨床前研究中被檢測。目前沒有其它臨床試驗完成。本試驗基于臨床前研究的數(shù)據(jù)和非脂質(zhì)體(游離)奧沙利鉑的經(jīng)驗和數(shù)據(jù)。最后主要幫助我們目前的試驗集中在評估脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑與裸露的(游離)奧沙利鉑的相似性或差異。顯示大大降低了胃腸道和血液學副作用。保持無任何差異-任何減少的唯一的副作用是神經(jīng)毒性。經(jīng)?？吹缴窠?jīng)毒性類似地隨藥劑劑量的增加而或多或少地增加，作為定義劑量限制性毒性的唯一或主要標準。MTD定義的劑量是每周用藥300mg/m2。附加的神經(jīng)毒性也會出現(xiàn)，用非脂質(zhì)體奧沙利鉑時也會發(fā)生(參考)。在功效方面，在預治療難治的目前已建立腫瘤的患者中觀察到11％的反應率，對于在聯(lián)合化療模式的將來試驗有某種意義。
這種研究已確立了MTD，需要進一步考察，尤其是混用其它藥劑。
結(jié)果，這個實施例顯示脂質(zhì)體奧沙利鉑是一種耐受良好的藥劑。劑量300mg/m2被定義為MTD。與奧沙利鉑的裸露形式比較，胃腸道和骨髓毒性被大大降低。唯一保留的不利反應是神經(jīng)毒性，被定義為DLT。


表6 脂質(zhì)體包被的奧沙利鉑

劑量升高

表7 基線患者的特征 表8對于患者Lipoxal血漿藥物代謝動力學參數(shù)的評估(見參數(shù)定義的文字)

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，由Mountain View，CA的regulon Inc.生產(chǎn))。目前臨床前和臨床數(shù)據(jù)(1期藥物代謝動力學)引發(fā)對于包括

和吉西他濱的聯(lián)合治療模式的研究。
患者和方法吉西他濱的劑量保持標準在1000mg/m2，lipoplatin的劑量從25mg/m2升高到125mg/m2。對晚期預治療的胰腺癌患者施用治療，所述患者對目前包括吉西他濱的化療表現(xiàn)頑固。
結(jié)果

125mg/m2被定義為劑量限制性毒性(DLT)，100mg/m2被定義為與1000mg/m2的吉西他濱并用的最大耐受劑量(MTD)。初步目標反應率數(shù)據(jù)顯示了在2/24名患者(8.3％)有部分反應，14名患者(58.3％)的疾病穩(wěn)定，中值持續(xù)時間3個月(范圍2-7個月)，8名患者(33.3％)臨床有益。
結(jié)論脂質(zhì)體包被的順鉑是裸露的順鉑的無毒替代藥劑。與吉西他濱并用時，MTD為100mg/m2，在難治胰腺癌中表現(xiàn)出有潛力的功效。
順鉑(順式-PtCl2(NH3)2)世界范圍內(nèi)用于治療睪丸癌和卵巢癌和膀胱、頭、頸癌、肺和胃腸腫瘤癌以及很多其它的癌癥(1-7)。盡管順鉑抗擊這些腫瘤非常有效，但是與包括腎毒性(8)、耳毒性、神經(jīng)毒性、惡心和嘔吐(7-9)的嚴重副作用相關(guān)。碳鉑是一種順鉑的類似物，對腎臟和神經(jīng)系統(tǒng)的毒性比順鉑顯著降低，引發(fā)的惡心和嘔吐也減少，然而大體上(確定對卵巢癌和非小細胞肺癌)保留了等效的抗腫瘤活性。但是用碳鉑比順鉑在血液學的不利影響更經(jīng)常(10，11)。
吉西他濱(商標

，EIi Lily，Indianapolis，IN)是一種核苷酸類似物，與順鉑并用施藥作為患不能手術(shù)的、局部晚期(3A或3B期)或轉(zhuǎn)移(4期)非小細胞肺癌患者的第一線治療，而且作為局部晚期(非可切除3期)或轉(zhuǎn)移(3B、4期)胰腺癌患者的前線治療(12-14)。主要的不利反應是骨髓中毒性。使用混合的吉西他濱和鉑的優(yōu)勢歸結(jié)為鉑-DNA加合物修復涉及的DNA合成路徑的抑制。吉西他濱和順鉑協(xié)同作用，增加了鉑-DNA加合物的形成，誘導卵巢癌細胞系中核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸池的依賴于濃度和混合的變化(15)。
關(guān)于

(Regulon Inc.，Mountain View，CA)的目前研究顯示低毒性、在腫瘤中聚集和逃避免疫細胞和巨噬細胞的能力、腎臟緩慢的清除率、在體液中長期循環(huán)的特性、血液中36小時的半衰期和有潛力的治療功效(16)。在目前1-2期的研究中，我們試圖探索Lipoplatin-吉西他濱并用的治療功效和毒性，給晚期預治療的胰腺癌患者每14天用藥。我們的首要目標是決定毒性和最大耐受劑量(MTD)，我們的第二目標是決定反應率和臨床益處。
患者和方法 患者大于18歲，患組織學或細胞學確認的胰腺癌和二維可測的疾病，所述患者經(jīng)過化療預治療，患有復發(fā)的或非反應的疾病，登記加入研究。其它合格的標準包括世界衛(wèi)生組織(WHO)體力狀態(tài)(PS)為0-2，平均壽命預期至少3個月，足夠的骨髓儲備(粒細胞計數(shù)≥1,500/dl，血小板計數(shù)≥120,000/dl)、正常的腎臟(血漿肌酐濃度<1.2mg/dl)和肝功能檢測(總血清膽紅素濃度<3mg/dl，條件是血清轉(zhuǎn)氨酶和血清蛋白是正常的)、正常的心臟功能前6個月沒有臨床不穩(wěn)定性心絞痛、心肌梗塞或充血性心力衰竭的病史、無中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥。先前的手術(shù)是允許的，條件是至少發(fā)生在3周前。從研究中排除患主動侵染、營養(yǎng)不良或第二種原發(fā)腫瘤(除了非黑色素皮膚上皮癌或原位宮頸癌)的患者。全部患者交出了他們的書面通知同意書而參與研究。
治療計劃 計劃是將

與吉西他濱并用。施用由Regulon Inc.提供的

，在1和15日進行8小時靜脈輸注；選擇8小時是基于我們在1期臨床中的經(jīng)驗，為了能控制可能的不利影響。吉西他濱在500ml正常鹽水中在1和15日60分鐘靜脈輸注給藥，劑量為1000mg/m2，周期是每4周重復(28天)。在1和15日的注射被認為是1周期。條件是患者已經(jīng)從藥物相關(guān)的副作用中充分恢復，給全部患者施用標準的昂丹司瓊(ondansetron)止吐藥治療。不允許重組人粒細胞集落刺激因子(rhG-CSF)的預防性用藥。中性白細胞減少癥3級的情況下，這些患者將接受隨后的在第6或7天培非司亭6mg注射，推遲治療1周。實施治療至少3周期或直到疾病發(fā)展。研究是1/2期群組，

和吉西他濱的劑量升高試驗。目的是決定并用的劑量限制性毒性(DLT)和定義最大耐受劑量(MTD)作為2期的推薦劑量，收集對于患胰腺癌預治療患者藥物功效的初步數(shù)據(jù)。單獨藥劑

的骨髓中毒性在目前1期研究中被認為是非常輕微的(16)。我們以低劑量

開始，并用骨髓毒性藥劑吉西他濱，主要是決定骨髓不利反應的程度。

的開始劑量是25mg/m2，每個劑量水平增加25mg/m2(表1)。方法經(jīng)醫(yī)院的倫理和科學委員會批準。
劑量調(diào)整標準基于血液學參數(shù)。在3或4級發(fā)熱性中性白細胞減少癥的情況下，如上所述用培非司亭預防性用藥重復隨后的周期。在發(fā)熱性中性白細胞減少癥或3或4級中性白細胞減少癥的情況下，盡管施用rhG-CSF，在隨后的注射治療中吉西他濱和Lipoplatin的劑量減少25％。在3或4級血小板減少癥持續(xù)超過5天的情況下，兩種藥物的劑量也都減少25％。根據(jù)WHO指導方針給毒性評級。
患者評估 預治療評估包括完整的醫(yī)療史和體檢、全血細胞計數(shù)包括分化的白細胞和血小板計數(shù)、標準生化特征(和必要時的肌酐清除)、血清癌胚抗原(CEA)和CA 19-9測定、心電圖、胸透、上腹超聲波檢查和胸腔、上和下腹的計算機斷層(CT)掃描。在臨床適應癥上完成附加的成像研究。每周進行有分化的全血細胞計數(shù)；在3或4級中性白細胞減少癥或4級血小板減少癥情況下，每天評估有分化的全血細胞計數(shù)，直到絕對粒細胞計數(shù)>1,000/dl，而且血小板計數(shù)>75,000/dl。為了記錄疾病的癥狀和治療毒性，治療的每個療程前進行詳細的醫(yī)學和身體檢查。每6周進行生化檢測、ECG、血清CEA和CA19-9測定和胸透，通過臨床檢查進行神經(jīng)系統(tǒng)的評估。每個周期后測量損傷，如果損傷通過體檢或胸透可查到；3個化療周期后，可檢查的損傷通過超聲波檢查或CT掃描進行評估。
反應的定義 完全反應(CR)被定義為可測量或評估的疾病、征象和癥狀以及與腫瘤相關(guān)的生化變化至少消失4周，在所述時間內(nèi)沒有新的損傷出現(xiàn)。部分反應(PR)被定義為全部可測量損傷的垂直直徑的乘積之和比預治療的測量有>50％的減少，持續(xù)至少4周，在所述時間內(nèi)沒有新的損傷出現(xiàn)或沒有現(xiàn)存的損傷擴大。對于肝損傷，從鎖骨線肋骨邊緣和劍突到肝臟邊緣所測量的距離之和需要>30％的減少。穩(wěn)定疾病(SD)被定義為全部測量損傷的兩個垂直直徑乘積之和<50％的減少和<25％的增加，而且沒有新的損傷出現(xiàn)持續(xù)8周。發(fā)展的疾病(PD)被定義為任何可測量損傷的兩個垂直直徑乘積比進入研究時的尺寸或者對于有反應的病人，是最大退行時刻和惡性疾病新面積出現(xiàn)時的尺寸增加>25％。內(nèi)窺鏡逆行膽總管胰腺造影術(shù)(ERCP)或?qū)Ч芙M后沒有恢復而膽紅素升高，被認為是疾病發(fā)展。體力狀態(tài)的兩步惡化，預治療重量>10％的減少或癥狀增加本身不構(gòu)成疾病的發(fā)展；但是，這些癥狀的出現(xiàn)后要對疾病的程度進行新的評估。全部反應必須維持至少4周，由獨立的放射科醫(yī)師小組確認。
結(jié)果 患者人口統(tǒng)計 從2003年1月到2004年12月，24名患者(11名男性，13名女性；中值年齡66歲，范圍是47-80歲)登記進入研究?；颊叩奶卣魅绫?顯示。4.2％患者的WHO體力狀態(tài)是0，45.8％的是1，50％的是2。絕大多數(shù)患者是4期(79.2％)。全部患者經(jīng)歷了之前的化療11名患者用吉西他濱作為單一藥劑治療，13名用吉西他濱和伊立替康(irinotecan)并用治療。
劑量強度 患者共接受36個療程(每2周108次注射)治療，療程的中值數(shù)目是2(范圍1-5)。24名患者中，10名完成了3個療程。任一藥物沒有劑量減少，患者接受了每種藥物99.5％的計劃劑量強度(范圍93-100％)，直到第四個劑量水平。
毒性 沒有觀察到神經(jīng)毒性或腎毒性。在

注射開始時，10/24名患者中觀察到持續(xù)2-4分鐘的短期腹痛，可自愈。在第五個劑量水平，4名患者中2名被觀察到3級骨髓中毒性。沒有觀察到發(fā)熱性中性白細胞減少癥。毒性如表3和4顯示。第五個劑量水平(125mg/m2lipoplatin和1000mg/m2吉西他濱)被認為是DLT和劑量水平4為MTD。4名附加患者用第四劑量水平治療。
治療的反應 兩名獨立的放射學工作者和兩名有經(jīng)驗的腫瘤學專家，用計算機斷層成像完成可測量反應的決定。沒有檢測到完全反應。2名患者(8.3％)在6和5個月期間完成了PR。14名患者(58.3％)被觀察到中值持續(xù)時間3個月(范圍2-7個月)的穩(wěn)定疾病。8名患者(33.3％)被觀察到主要由于疼痛減輕的臨床有益。在研究終止時，7名患者(29.2％)仍然存活。從二線治療開始，中值存活率是4個月(范圍2-8+個月)。
結(jié)論 這種新的脂質(zhì)體包被的順鉑(

)主要目的在于避免在順鉑用藥中常見的腎毒性，并且同時產(chǎn)生類似的功效。正如在動物研究中以及患者的臨床試驗中顯示的，

的藥物代謝動力學不同于順鉑(16)。當

作為單一藥劑施用時顯示，沒有毒性是一個很大的優(yōu)勢。目前的1-2期試驗中，通過

和吉西他濱并用來研究毒性和功效，吉西他濱的毒性被很好地定義了，尤其當與其它藥劑并用時(5)。順鉑-吉西他濱并用可類似地用于非小細胞肺癌、尿路上皮癌和胰腺癌的治療(5，7，12)。看來目前試驗的數(shù)據(jù)顯示了非常低毒性的優(yōu)勢。當吉西他濱保持在標準劑量1000mg/m2時，每2周施用的并用藥物被良好耐受到劑量100mg/m2

。

在125mg/m2劑量時，骨髓中毒性達到3和4級，因此這個劑量被認為是DLT。100mg/m2

和1gr/m2吉西他濱被認為是MTD。藥物并用在8.33％患者中實現(xiàn)了目標反應，疾病穩(wěn)定的是58.3％和疼痛減輕的是33.3％?？紤]到之前包括吉西他濱的治療時，全部患者是難治的或在疾病發(fā)展中，這里得出的反應率應該歸功于

的加入。
脂質(zhì)體包被的順鉑與吉西他濱并用，在晚期預治療的胰腺癌患者中每2周施藥，MTD分別為100mg/m2和1000mg/m2。這是耐受良好的治療，而且有功效的潛力征象。
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表1

和吉西他濱劑量升高。劑量水平患者數(shù)量

吉西他濱(mg/m2/周)(mg/m2/周)第一4 25 1000，第二4 50 1000，第三4 751000，第四4+4 100 1000，第五4 125 1000。

表2患者在基線的特征。數(shù)量％登記的患者數(shù)量24100年齡(歲)中值66范圍47-80性別男性11 45.8女性13 54.2體力狀態(tài)(WHO)0 14.21 11 45.82 12 50.0疾病III期5 20.8IV 19 79.2組織學良好分化3 12.5中等分化12 50.0低分化9 37.5之前治療吉西他濱1克/m2天1、8、15/每四周11 45.8吉西他濱900mg/m2+天1、8/每三周+13 54.2依立替康300mg/m2天8/每三周
表3 血液學毒性 劑量水平患者數(shù)量

吉西他濱毒性最大毒性mg/m2mg/m2患者數(shù)量毒性(等級)類型第一25 1000，第二50 1000，第三75 1000，第四100 10002/4*2-3中性白細胞減少癥，第五125 1000 2/43-4中性白細胞減少癥*最初4例患者。

表4 非血液學毒性劑量 1級2級3級4級水平n(％)n(％)n(％)n(％)惡心5(20.8)嘔吐14(58.3)疲勞8(33.3)腹瀉2(8.3)心臟毒性神經(jīng)毒性3(12.5)腎毒性血栓發(fā)作4(16.7)
權(quán)利要求
1、一種用于形成包含奧沙利鉑的膠團的方法，所述方法包括將有效量的奧沙利鉑和帶負電荷的磷脂酰甘油脂與溶劑混合。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述溶劑是乙醇，并以20-40％存在。
3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述帶負電荷的磷脂酰甘油脂是二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)、二己酰磷脂酰甘油(DCPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)或二油酰磷脂酰甘油(DOPG)。
4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述帶負電荷的磷脂酰甘油脂是DPPG。
5、根據(jù)前述權(quán)利要求所述的方法，其中奧沙利鉑與帶負電荷的磷脂酰甘油脂的摩爾比是1:1到2:1。
6、一種將奧沙利鉑包被進脂質(zhì)體的方法，其包括將權(quán)利要求1-5任一項限定的奧沙利鉑膠團與預形成的脂質(zhì)體或脂類混合。
7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述預形成的脂質(zhì)體或脂類包括帶負和/或正電荷脂類。
8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述脂類是磷脂或其衍生物。
9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述脂類是DDAB二甲基雙十八烷基溴化銨；DMRIEN-[1-(2，3-二肉豆蔻基氧基)丙基]-N，N-二甲基-N-(2-羥乙基)溴化銨；DMTAP1，2-二肉豆蔻?；?3-三甲基銨丙烷；DOGS雙十八烷基氨基甘氨酰精胺；DOTAPN-(1-(2，3-二油酰氧基)丙基)-N，N，N-三甲基氯化銨；DOTMAN-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-n，n，n-三甲基氯化銨；DPTAP1，2-二棕櫚?；?3-三甲基銨丙烷或DSTAP1，2-二硬脂?；?3-三甲基銨丙烷。
10、根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述脂質(zhì)體包括一種或多種膽固醇、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、氫化大豆磷脂酰膽堿或神經(jīng)酰胺。
11、根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述預形成的脂質(zhì)體進一步包括銨鹽。
12、一種將奧沙利鉑包被進脂質(zhì)體的方法，其包括以下步驟
e)將有效量的奧沙利鉑和帶負電荷的磷脂酰甘油脂與溶劑混合，形成包含奧沙利鉑的膠團，和
f)將所述奧沙利鉑膠團與預形成的脂質(zhì)體或脂類混合。
13、根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述溶劑是乙醇，并以20-40％存在。
14、根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的方法，其中所述帶負電荷的磷脂酰甘油脂是DPPG、DMPG、DCPG、DSPG或DOPG。
15、根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述帶負電荷的磷脂酰甘油脂是DPPG。
16、根據(jù)權(quán)利要求12-15任一項所述的方法，其中奧沙利鉑與帶負電荷磷脂酰甘油脂的摩爾比是1:1到2:1。
17、根據(jù)權(quán)利要求6-16任一項所述的方法，其進一步包括用聚合物包衣脂質(zhì)體膜的表面。
18、根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中配基與所述聚合物軛合。
19、根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述配基能使所述脂質(zhì)體指向具有可被所述配基識別的表面受體的特定細胞類型。
20、根據(jù)權(quán)利要求18或權(quán)利要求19所述的方法，其中所述配基是肽。
21、根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述配基選自表皮生長因子或其表位、內(nèi)皮他丁、抗凝血酶、anastellin、血管他丁、PEX或色素上皮衍生因子。
22、根據(jù)前述權(quán)利要求所述的方法，其進一步包括將另一種抗腫瘤藥物包括進所述膠團或脂質(zhì)體。
23、根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述藥物選自順鉑、紫杉醇、SN-38、多西他賽、依立替康、5-氟脫氧尿苷或多柔比星。
24、一種膠團，其是通過權(quán)利要求1-5所述的方法得到的。
25、一種膠團，其包括有效量的奧沙利鉑和帶負電荷的磷脂酰甘油脂。
26、根據(jù)權(quán)利要求25所述的膠團，其中所述磷脂酰甘油脂是DPPG。
27、根據(jù)權(quán)利要求25-26任一項所述的膠團，其進一步包括另一種抗腫瘤藥物。
29、根據(jù)權(quán)利要求27所述的膠團，其中所述藥物選自順鉑、紫杉醇、SN-38、多西他賽、依立替康、5-氟脫氧尿苷或多柔比星。
29、一種脂質(zhì)體，其包括通過權(quán)利要求6-23任一項所述方法得到的奧沙利鉑。
30、一種脂質(zhì)體，其包括有效量的奧沙利鉑，其中所述脂質(zhì)體的內(nèi)層和外層包括不同的脂類。
31、根據(jù)權(quán)利要求30所述的脂質(zhì)體，其包括帶負電荷的磷脂酰甘油脂。
32、根據(jù)權(quán)利要求31所述的膠團，其中所述磷脂酰甘油脂是DPPG。
33、根據(jù)權(quán)利要求32所述的脂質(zhì)體，其進一步包括一種或多種膽固醇、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、氫化大豆磷脂酰膽堿或神經(jīng)酰胺。
34、根據(jù)權(quán)利要求30-33任一項所述的脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體的表面用容許所述脂質(zhì)體逃避免疫監(jiān)督的包衣所包被。
35、根據(jù)權(quán)利要求34所述的脂質(zhì)體，其中所述包衣是聚合物。
36、根據(jù)權(quán)利要求35所述的脂質(zhì)體，其中所述聚合物是PEG。
37、根據(jù)權(quán)利要求35或權(quán)利要求36所述的脂質(zhì)體，其中配基與所述聚合物軛合。
38、根據(jù)權(quán)利要求37所述的脂質(zhì)體，其中所述配基能使所述脂質(zhì)體指向具有可被所述配基識別的表面受體的特定細胞類型。
39、根據(jù)權(quán)利要求37或權(quán)利要求38所述的脂質(zhì)體，其中所述配基是肽。
40、根據(jù)權(quán)利要求37所述的脂質(zhì)體，其中所述配基選自表皮生長因子或其表位、內(nèi)皮他丁、抗凝血酶、anastellin、血管他丁、PEX或色素上皮衍生因子。
41、根據(jù)權(quán)利要求28-40任一項所述的脂質(zhì)體，其中所述脂質(zhì)體的粒度是80-120nm。
42、根據(jù)權(quán)利要求28-38所述的脂質(zhì)體，其進一步包括有效量的另一種抗癌藥物，其特征為奧沙利鉑和所述另一種藥物被包被進同一脂質(zhì)體。
43、根據(jù)權(quán)利要求39所述的脂質(zhì)體，其中抗癌藥物選自順鉑、多西他賽、紫杉醇、吉西他濱、諾維本、多柔比星、依立替康、SN-38、吉西他濱或5-氟脫氧尿苷。
44、根據(jù)權(quán)利要求28-38所述的脂質(zhì)體，其進一步包括有效量的抗癌基因，其特征為奧沙利鉑和另一藥物被包被進同一脂質(zhì)體。
45、根據(jù)權(quán)利要求44所述的脂質(zhì)體，其中所述抗癌基因是p53、IL-2、IL-12、血管他丁和制瘤素。
44、根據(jù)權(quán)利要求27-45任一項所述的脂質(zhì)體，其用作癌癥藥物。
46、根據(jù)權(quán)利要求27-45任一項所述的脂質(zhì)體在生產(chǎn)用于治療癌癥的藥物中的用途。
47、一種治療癌癥的方法，其包括施用權(quán)利要求27-45任一項所限定的脂質(zhì)體。
48、根據(jù)權(quán)利要求46或47所述的用途或方法，其中所述脂質(zhì)體通過靜脈輸注3小時，每周或每兩周施用，并且奧沙利鉑以100-350mg/m2的劑量存在。
49、根據(jù)權(quán)利要求48所述的用途或方法，其中所述劑量是100、150、200、250或300mg/m2。
50、根據(jù)權(quán)利要求49所述的用途或方法，其中所述劑量是300mg/m2。
51、根據(jù)權(quán)利要求48-50所述的用途或方法，其中輸注是3小時輸注，每周一次。
52、根據(jù)權(quán)利要求48-51所述的用途或方法，其中施用是2-4周期，每個周期持續(xù)大約8周，周期之間休息1周。
53、根據(jù)權(quán)利要求48-51所述的用途或方法，其中所述癌癥選自結(jié)腸癌、胃癌、胰腺癌、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、尿路上皮癌、非小細胞肺癌、乳腺癌、前列腺癌、頭頸癌、黑色素瘤、睪丸癌或卵巢癌。
54、根據(jù)權(quán)利要求53所述的用途或方法，其中所述癌癥是結(jié)腸癌、胃癌或胰腺癌。
55、一種脂質(zhì)體，其包括有效量的奧沙利鉑和另一種抗癌藥物或抗癌基因藥物以及帶負電荷的磷脂酰甘油脂。
56、一種聯(lián)合療法，其包括施用脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體包被有效量的奧沙利鉑并包被另一種抗癌藥物或抗癌基因藥物。
57、根據(jù)權(quán)利要求55或56所述的脂質(zhì)體，其中所述藥物選自順鉑、紫杉醇、SN-38、多西他賽、依立替康、5-氟脫氧尿苷或多柔比星。
58、一種聯(lián)合療法，其包括施用有效量的吉西他濱和包被有效量的順鉑的脂質(zhì)體。
60、根據(jù)權(quán)利要求58所述的聯(lián)合療法，其中吉西他濱不形成所述順鉑脂質(zhì)體的部分。
61、根據(jù)權(quán)利要求58或60所述的聯(lián)合療法，其中吉西他濱與所述順鉑脂質(zhì)體同時施用。
62、根據(jù)權(quán)利要求58或60所述的聯(lián)合療法，其中吉西他濱與順鉑脂質(zhì)體不同時施用。
63、根據(jù)權(quán)利要求58-62任一項所述的聯(lián)合療法，其中所述癌癥是胰腺癌、結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌、非小細胞肺癌、卵巢癌、頭頸癌、前列腺癌、睪丸癌、腸癌、膀胱癌、食管癌或尿路上皮癌。
64、根據(jù)權(quán)利要求58-63任一項所述的聯(lián)合療法，其中吉西他濱以800-1000mg/m2的劑量施用。
65、根據(jù)權(quán)利要求64所述的聯(lián)合療法，其中吉西他濱通過靜脈輸注以1000mg/m2的劑量施用。
66、根據(jù)權(quán)利要求64或65所述的聯(lián)合療法，其中吉西他濱每2周靜脈輸注60分鐘施用。
67、根據(jù)權(quán)利要求58-66任一項所述的聯(lián)合療法，其中所述順鉑脂質(zhì)體通過靜脈輸注以100-125mg/m2的劑量施用。
68、根據(jù)權(quán)利要求67所述的聯(lián)合療法，其中所述順鉑脂質(zhì)體每2周靜脈輸注8小時施用。
全文摘要
本發(fā)明涉及含有包被的奧沙利鉑(oxaliplatin)的脂質(zhì)體和包被的奧沙利鉑的制備方法。本發(fā)明也涉及包含奧沙利鉑和另一抗癌藥物的脂質(zhì)體。本發(fā)明的脂質(zhì)體用于癌癥治療。
文檔編號A61K9/127GK101522172SQ200780013928
公開日2009年9月2日 申請日期2007年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月3日
發(fā)明者帕斯尼奧斯·布利卡斯 申請人:帕斯尼奧斯·布利卡斯