專利名稱：：一種降低血糖產(chǎn)品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種降低血糖產(chǎn)品的制備方法。技術(shù)背景糖尿病是一種與遺傳因素和多種環(huán)境因素相關(guān)聯(lián)的以慢性高血糖為特征的代謝紊亂綜合癥，它是一種全球范圍內(nèi)的嚴(yán)重危害人類健康的常見疾病。近年來(lái)，糖尿病發(fā)病率較高，我國(guó)一般人群發(fā)病率為1一2%，40歲以上者為3—4%，老年人發(fā)病率更較高。西方工業(yè)國(guó)家的發(fā)病率為2—4%。早期糖尿病沒(méi)有明顯的臨床癥狀，不易覺(jué)察，在我國(guó)與西方工業(yè)國(guó)家都有大量的糖尿病人未能獲得及時(shí)診斷和治療，再加上糖尿病的并發(fā)癥很多，目前對(duì)糖尿病缺乏有效的預(yù)防措施，如任其發(fā)展，將成為不可逆性的改變，可導(dǎo)致患者病殘或死亡。因此，提高對(duì)糖尿病的認(rèn)識(shí)，重視早期診斷，有效預(yù)防和治療并發(fā)病，遏制全球糖尿病患病率及死亡率上升趨勢(shì)，已成為當(dāng)今世界醫(yī)學(xué)界亟待解決和攻克的重點(diǎn)課題之一。近十幾年來(lái)，經(jīng)過(guò)世人的不懈努力，研究開發(fā)了許多降低血糖的藥物，對(duì)治療糖尿病起到一定的作用。但是從目前國(guó)內(nèi)常用降糖藥來(lái)看，多是以合成藥物為主的制劑，對(duì)肝腎有一定的損傷，不易為患者接受。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)不少中草藥具有良好的降低血糖的作用，對(duì)治療糖尿病很有幫助。中國(guó)專利CN86104075公開了一種降血糖藥物--噻唑烷二酮類的制備方法，它們?cè)谥委煾哐莿?dòng)物中的應(yīng)用方法以及含有它們的藥物配方；美國(guó)專利US6855345公開了一種海巴戟天提取物治療糖尿病的方法；美國(guó)專利(申請(qǐng)?zhí)?0/316,760)公開了一種具有治療血糖病作用的龍蒿提取物成分；中國(guó)專利CN1137411(申請(qǐng)?zhí)枮?5105954.8)公開了一種由人參、蛤蚧等12種中藥組成的康復(fù)胰島降血糖的中藥"康復(fù)胰島降糖丹"及制作方法；中國(guó)專利CN1401318(申請(qǐng)?zhí)枮?2138749.4)公開了從中藥鬼箭羽中提取、分離具有降血糖作用的有效部位及有效成分，包含萜類、酚酸類等，具有降糖尿病小鼠血糖作用，同時(shí)影響丙二醛及超氧化物歧化酶，能夠減輕或抑制糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展。在上述眾多的專利文獻(xiàn)中，對(duì)產(chǎn)品降糖作用機(jī)理的研究，往往只對(duì)模型動(dòng)物的血糖水平和抗氧化系統(tǒng)進(jìn)行了研究，很少涉及到產(chǎn)品的毒副作用，缺乏對(duì)肝臟、腎臟等臟器中反應(yīng)器官受損程度的酷活性的研究。本發(fā)明首先對(duì)反映降糖作用的血糖、肝糖元和血清胰島素水平進(jìn)行了研究，還對(duì)反映肝臟和腎臟損傷的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、血清尿素氮和血清肌酐水平進(jìn)行了研究。因此，發(fā)明制備一種主要用于治療鏈脲佐菌素(STZ)造成的化學(xué)性糖尿病，并對(duì)糖尿病引起的肝臟、腎臟損傷具有明顯的修復(fù)的治療劑天然產(chǎn)品是本發(fā)明的目的所在。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種降低血糖產(chǎn)品的制備方法；該方法是以鎖陽(yáng)為原料，制備出一種主要用于治療鏈脲佐菌素(STZ)造成的化學(xué)性糖尿病，并對(duì)糖尿病引起的肝臟、腎臟損傷具有明顯修復(fù)作用的天然產(chǎn)品。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明一種降低血糖產(chǎn)品的制備方法，包括如下步驟1)稱取鎖陽(yáng)干品100g，粉碎；加入450550ml甲醇或石油醚，在7080。C的條件下回流1.52.5小時(shí)；在0.070.09MPa的條件下抽濾，以水為溶劑，抽取60120分鐘，其中鎖陽(yáng)原料與水的重量比為1:820;然后往濾液中加入乙醇，使乙醇含量占總體積的7580%，室溫下靜置2030小時(shí)，然后在35004500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心分離，收集沉淀；將沉淀物在4050°C，0.060.08MPa下的條件下干燥1113小時(shí)，得物質(zhì)A;2)稱取50g物質(zhì)A，用80100倍重量的水溶解，加熱含有物質(zhì)A的水溶液到6070。C，然后加入57u/100ml木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解1.52.5小時(shí)，再用重量比為l:24的氯仿和正丁醇混合液萃取36次，收集上層水溶液，在4550°C、0.06-0.08Mpa下減壓濃縮至原體積的1/91/11時(shí)，得物質(zhì)B;3)往物質(zhì)B中滴加濃氨水，調(diào)節(jié)ph=89之間，滴加濃度為2030%的&02水溶液，直至溶液由褐色變?yōu)榈S色；在405(TC條件下振蕩1.52.5小時(shí)，然后倒入截留分子量8000-14000Da的透析袋中透析3648小時(shí)，之后向透析袋內(nèi)液中加入乙醇，使乙醇含量占總體積的7580%，靜置1014小時(shí)；在35004500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心分離，收集沉淀；將沉淀物在4050°C，0.060.08MPa下的條件下干燥1113小時(shí)，得降低血糖產(chǎn)品。通過(guò)本發(fā)明的方法制得的降低血糖產(chǎn)品的物化特性如下顏色白色粉末狀固體粘度13.7mPas(濃度1%)PH值6.8紫外線吸收光譜，純降糖天然產(chǎn)物經(jīng)過(guò)紫外掃描，在200nm處有強(qiáng)吸收峰，在260nm、280nm均無(wú)核酸和蛋白質(zhì)的特征吸收峰，說(shuō)明不含有核酸和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)；茚三酮反應(yīng)、碘一碘化鉀反應(yīng)和雙縮脲反應(yīng)均為陰性，說(shuō)明無(wú)蛋白質(zhì)和淀粉；紅外光譜顯示在3425cm"處有一特征峰，O-H的伸縮振動(dòng)在3200-3600cm"處出現(xiàn)一寬峰；在2931cm"處有一特征峰，是分子中C-H鍵的變角振動(dòng)引起的，這些均為多糖的吸收峰；斐林試劑反應(yīng)和硫酸一苯酚反應(yīng)成陽(yáng)性，說(shuō)明降糖天然產(chǎn)物為還原性多糖。利用GC峰面積和內(nèi)標(biāo)校正因子計(jì)算單糖組成為半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖和核糖。本發(fā)明的特點(diǎn)和產(chǎn)生的有益效果是本發(fā)明以鎖陽(yáng)為原料，鎖陽(yáng)又名不老草，屬鎖陽(yáng)科鎖陽(yáng)屬多年生肉質(zhì)寄生草本植物，無(wú)葉綠素，生于干燥多沙地帶，主產(chǎn)于我國(guó)西北地區(qū)。鎖陽(yáng)的作用早在明代《本草綱目》就有記述補(bǔ)腎、益精血、潤(rùn)燥養(yǎng)筋治萎弱。臨床主治尿頻、便秘、陽(yáng)痿早泄、腰膝酸軟、失眠脫發(fā)，對(duì)于中老年尿頻和早泄有著獨(dú)特的效果，經(jīng)現(xiàn)代科學(xué)研究表明鎖陽(yáng)的化學(xué)成份主要含有多糖、鎖陽(yáng)萜、花色苷、谷甾醇熊果酸，胡蘿卜素及鋅、錳、銅等多種微量元素，能增加血清糖皮質(zhì)激素的濃度，有興奮神經(jīng)，增強(qiáng)體液免疫功能的作用。原料鎖陽(yáng)經(jīng)過(guò)提取、純化、分離、脫蛋白、脫色等步驟，制備出的天然的降低血糖制劑，能使肝糖原水平顯著升高，改善血液高凝狀態(tài)，疏通微循環(huán)、增強(qiáng)機(jī)體免疫，并能減少糖尿病造成的對(duì)肝臟、腎臟的損傷即降低血液中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮和血清肌酐的含量，以及抑制糖尿病導(dǎo)致體重減輕。本發(fā)明是以天然生物多糖制成，與其它降糖藥相比具有牛產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，使用方便，無(wú)毒副作用，降糖效果好等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病等都有較好的療效。經(jīng)對(duì)大鼠藥理實(shí)驗(yàn)表明30天服用該制劑使高血糖動(dòng)物的血糖降低26.7%，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)降低25.2%、谷草轉(zhuǎn)氨酶(G0T)降低28.1%、尿素氮含量降低54.9%。本發(fā)明充分利用甘肅、青海、內(nèi)蒙古自治區(qū)境內(nèi)遍布的寄生于蒺藜科白刺屬植物的鎖陽(yáng)，且蘊(yùn)藏量十分充足這一良好的資源優(yōu)勢(shì)，開發(fā)本產(chǎn)品，市場(chǎng)前景十分看好，經(jīng)濟(jì)效益廣闊。本發(fā)明制備的產(chǎn)品使用效果動(dòng)物試驗(yàn)如下降糖作用實(shí)驗(yàn)用昆明種小鼠56只，雌雄各半，共分7組，每組8只，分別如下正常對(duì)照組(Group1)、模型組(Group2)、多糖對(duì)照組(Group3，250mg/(kgb.w.))、多糖低劑量組(Group4，100mg/(kgb.w.))、多糖中劑量組(Group5，150mg/(kgb,w.))、多糖高劑量組(Group6，200mg/(kgb.w.))、消渴丸陽(yáng)性對(duì)照組(Group7，0.84g/(kgb.w.))，正常對(duì)照組灌胃生理鹽水。試驗(yàn)時(shí)間為3周，每天測(cè)飲水量和攝食量，2天稱一次體重，第2、4周取空腹尾靜脈血，測(cè)血糖濃度。鏈脲佐菌素(STZ)引起的化學(xué)型糖尿病大鼠服用本品后血液中血糖、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮均降低，結(jié)果如下表l:表l<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>體重變化每組體重平均值見(表2)，對(duì)照組體重增加，高血糖組體重明顯降低，降低率為8.80%，而喂純降糖天然產(chǎn)物組的糖尿病大鼠個(gè)體體重減輕，降低率為0.77%，說(shuō)明其對(duì)高血糖個(gè)體體重的減輕有抑制作用。表2實(shí)驗(yàn)各組大鼠體重(g/只)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>服用本品后使鏈脲佐菌素引起的化學(xué)型糖尿病動(dòng)物的血糖降低，胰島素水平和肝糖元升高，肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶降低，血清尿素氮和肌酐含量降低到正常水平，均表明降糖效果較好。下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明圖l為本發(fā)明的方法制備出的降血糖產(chǎn)品對(duì)糖尿病小鼠血糖的影響，圖中，△P<0.05,AAP<0.01，AAAP<0.001與模型組對(duì)比P<0.05,"P<0.01,爭(zhēng)爭(zhēng)命P〈0.001與陽(yáng)性對(duì)照組對(duì)比；圖2為本發(fā)明的方法制備出的降血糖產(chǎn)品對(duì)肝糖元的影響；圖3為本發(fā)明的方法制備出的降血糖產(chǎn)品對(duì)血清的胰島素影響；圖4為本發(fā)明的方法制備出的降血糖產(chǎn)品對(duì)肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GOT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GPT)的影響；圖5為本發(fā)明的方法制備出的降血糖產(chǎn)品對(duì)尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)的影響；圖6為本發(fā)明的方法制備出的降血糖產(chǎn)品的紫外掃描圖；圖7為本發(fā)明的方法制備出的降血糖產(chǎn)品的紅外掃描圖。具體實(shí)施方式實(shí)施例1本發(fā)明一種降低血糖產(chǎn)品的制備方法，包括如下步驟1)稱取鎖陽(yáng)干品lOOg，粉碎；加入450ml甲醇或石油醚，在70。C的條件下回流1.5小時(shí)；在0.07MPa的條件下抽濾，以水為溶劑，抽取60分鐘，其屮鎖陽(yáng)原料與水的重量比為1:8;然后往濾液中加入乙醇，使乙醇含量占總體積的75%，室溫下靜置20小時(shí)，然后在3500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心分離，收集沉淀；將沉淀物在40。C，0.06MPa下的條件下干燥11小時(shí)，得物質(zhì)A;2)稱取50g物質(zhì)A，用80倍重量的水溶解，加熱含有物質(zhì)A的水溶液到60°C，然后加入5u/100ml木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解1.5小時(shí)，再用重量比為1:2的氯仿和正丁醇混合液萃取3次，收集上層水溶液，在45'C、0.06Mpa下減壓濃縮至原體積的1/9，得物質(zhì)B;3)往物質(zhì)B中滴加濃氨水，調(diào)節(jié)ph二8，滴加濃度為20%的11202水溶液，直至溶液由褐色變?yōu)榈S色；在40。C條件下振蕩1.5小時(shí)，然后倒入截留分子量8000-14000Da的透析袋中透析36小時(shí)，之后向透析袋內(nèi)液中加入乙醇，使乙醇含量占總體積的75%，靜置10小時(shí)；在3500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心分離，收集沉淀；將沉淀物在4(TC，0.06MPa下的條件下干燥11小時(shí)，得降低血糖產(chǎn)品。本發(fā)明一種降低血糖產(chǎn)品的制備方法，包括如下步驟1)稱取鎖陽(yáng)干品100g，粉碎；加入550ml甲醇或石油醚，在8(TC的條件下回流2.5小時(shí)；在0.09MPa的條件下抽濾，以水為溶劑，抽取120分鐘，其中鎖陽(yáng)原料與水的重量比為1:20;然后往濾液中加入乙醇，使乙醇含量占總體積的80%，室溫下靜置30小時(shí)，然后在4500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心分離，收集沉淀；將沉淀物在50°C，0.08MPa下的條件下干燥13小時(shí)，得物質(zhì)A;2)稱取50g物質(zhì)A，用100倍重量的水溶解，加熱含有物質(zhì)A的水溶液到70°C，然后加入7u/100ml木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解2.5小時(shí)，再用重量比為1:4的氯仿和正丁醇混合液萃取6次，收集上層水溶液，在5(TC、0.08Mpa下減壓濃縮至原體積的1/11，得物質(zhì)B;3)往物質(zhì)B中滴加濃氨水，調(diào)節(jié)ph二9，滴加濃度為30%的11202水溶液，直至溶液由褐色變?yōu)榈S色；在5(TC條件下振蕩2.5小時(shí)，然后倒入截留分子量8000-14000Da的透析袋中透析48小時(shí)，之后向透析袋內(nèi)液中加入乙醇，使乙醇含量占總體積的7580%，靜置14小時(shí)；在4500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心分離，收集沉淀；將沉淀物在50°C，0.08MPa下的條件下干燥13小時(shí)，得降低血糖產(chǎn)口叫o實(shí)施例3本發(fā)明一種降低血糖產(chǎn)品的制備方法，包括如下步驟1)稱取鎖陽(yáng)干品100g，粉碎；加入500ml甲醇或石油醚，在75。C的條件下回流2小時(shí)；在0.08MPa的條件下抽濾，以水為溶劑，抽取90分鐘，其中鎖陽(yáng)原料與水的重量比為l:15;然后往濾液中加入乙醇，使乙醇含量占總體積的78%，室溫下靜置25小時(shí)，然后在4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心分離，收集沉淀；將沉淀物在45"C，0.07MPa下的條件下干燥12小時(shí)，得物質(zhì)A;2)稱取50g物質(zhì)A，用90倍重量的水溶解，加熱含有物質(zhì)A的水溶液到65°C，然后加入6u/100ml木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解2小時(shí)，再用重量比為1:3的氯仿和正丁醇混合液萃取4次，收集上層水溶液，在48。C、0.07Mpa下減壓濃縮至原體積的1/10時(shí)，得物質(zhì)B;3)往物質(zhì)B中滴加濃氨水，調(diào)節(jié)ph二9，滴加濃度為25。％的11202水溶液，直至溶液由褐色變?yōu)榈S色；在45。C條件下振蕩2小時(shí)，然后倒入截留分子量8000-14000Da的透析袋中透析42小時(shí)，之后向透析袋內(nèi)液中加入乙醇，使乙醇含量占總體積的78%，靜置12小時(shí)；在4000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心分離，收集沉淀；將沉淀物在45。C，0.07MPa下的條件下干燥12小時(shí)，得降低血糖產(chǎn)品。權(quán)利要求1、一種降低血糖產(chǎn)品的制備方法，其特征在于，包括如下步驟1)稱取鎖陽(yáng)干品100g，粉碎；加入450～550ml甲醇或石油醚，在70～80℃的條件下回流1.5～2.5小時(shí)；在0.07～0.09MPa的條件下抽濾，以水為溶劑，抽取60～120分鐘，其中鎖陽(yáng)原料與水的重量比為1∶8～20；然后往濾液中加入乙醇，使乙醇含量占總體積的75～80％，室溫下靜置20～30小時(shí)，然后在3500～4500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心分離，收集沉淀；將沉淀物在40～50℃，0.06～0.08MPa下的條件下干燥11～13小時(shí)，得物質(zhì)A；2)稱取50g物質(zhì)A，用80～100倍重量的水溶解，加熱含有物質(zhì)A的水溶液到60～70℃，然后加入5～7u/100ml木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解1.5～2.5小時(shí)，再用重量比為1∶2～4的氯仿和正丁醇混合液萃取3～6次，收集上層水溶液，在45～50℃、0.06-0.08Mpa下減壓濃縮至原體積的1/9～1/11時(shí)，得物質(zhì)B；3)往物質(zhì)B中滴加濃氨水，調(diào)節(jié)ph＝8～9之間，滴加濃度為20～30％的H2O2水溶液，直至溶液由褐色變?yōu)榈S色；在40～50℃條件下振蕩1.5～2.5小時(shí)，然后倒入截留分子量8000-14000Da的透析袋中透析36～48小時(shí)，之后向透析袋內(nèi)液中加入乙醇，使乙醇含量占總體積的75～80％，靜置10～14小時(shí)；在3500～4500轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下離心分離，收集沉淀；將沉淀物在40～50℃，0.06～0.08MPa下的條件下干燥11～13小時(shí)，得降低血糖產(chǎn)品。全文摘要一種降低血糖產(chǎn)品的制備方法；該方法是以鎖陽(yáng)為原料，通過(guò)粉碎、回流、抽濾、離心、酶解、萃取、減壓濃縮、調(diào)節(jié)pH值、透析袋透析和離心等步驟，制備出一種主要用于治療鏈脲佐菌素(STZ)造成的化學(xué)性糖尿病，并對(duì)糖尿病引起的肝臟、腎臟損傷具有明顯修復(fù)作用的治療藥物產(chǎn)品。本發(fā)明充分利用甘肅、青海、內(nèi)蒙古自治區(qū)境內(nèi)遍布的寄生于蒺藜科白刺屬植物的鎖陽(yáng)，且蘊(yùn)藏量十分充足這一良好的資源優(yōu)勢(shì)，開發(fā)本產(chǎn)品，市場(chǎng)前景十分看好，經(jīng)濟(jì)效益廣闊。文檔編號(hào)A61K36/185GK101219157SQ200710187929公開日2008年7月16日申請(qǐng)日期2007年11月16日優(yōu)先權(quán)日2007年11月16日發(fā)明者吳依茜,繼張,張亞楠,王云普,王俊龍,王春霞,趙保堂申請(qǐng)人:西北師范大學(xué)