專利名稱：含蒺藜果呋甾皂苷的藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種含有蒺藜總呋甾皂苷提取物的藥物組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：
本發(fā)明所涉及的蒺藜是指蒺藜科蒺藜屬植物Tribulus terrestris L.的成熟果實(shí)，為常用傳統(tǒng)中藥材，采摘季節(jié)為每年秋季，全國各地均有分布，主產(chǎn)于河南、河北、新疆、陜西、山東等地。
蒺藜果實(shí)中含有多糖、生物堿、甾醇、黃酮、甾體皂苷、脂肪酸及氨基酸等多種化學(xué)成分，甾體皂苷是蒺藜的主要活性成分，有螺甾烷(spirostane)和呋甾烷(furostane)兩種結(jié)構(gòu)大類，螺甾皂苷極性小，而呋甾皂苷水溶性較好。Y.Wang等報(bào)道從蒺藜果實(shí)中分離出terrestrosin A，B，C，D等螺甾皂苷，以及terrestrosin F，H，M等呋甾皂苷(Phytochemistry，1996，42(5)1417-1422；Phytochemistry，1997，45(4)811-816)。
蒺藜皂苷具有抗衰老、性強(qiáng)壯、調(diào)節(jié)血脂、抗菌和抑癌、利尿等多種生理活性作用(中成藥，2001，23(8)602-606)，尤其在防治心腦血管疾病等方面顯示有良好療效，可以明顯抗心臟缺血作用，減慢心率，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈和外周血管，抗動(dòng)脈硬化和抗血小板聚集作用，臨床上廣泛用于防治缺血性腦血管疾病、抗動(dòng)脈硬化癥、防治冠心病心絞痛、增強(qiáng)性功能與抗衰老等。
皂苷通常具有較強(qiáng)的溶血作用，主要由于螺甾皂苷的溶血作用較強(qiáng)，而呋甾皂苷具有溶血作用較弱和水溶性好的特點(diǎn)，因此本發(fā)明將蒺藜呋甾皂苷制成靜脈注射劑具有較好的安全性和制劑可行性，具有藥效更強(qiáng)，起效更快的特點(diǎn)，適合缺血性心腦血管急重癥的治療。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是避免蒺藜皂苷中螺甾皂苷的溶血作用較強(qiáng)的缺點(diǎn)，提供一種藥效強(qiáng)、起效快、安全性高的含蒺藜果呋甾皂苷的藥物組合物。
本發(fā)明的另一目的是提供上述藥物組合物的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的可以通過以下措施達(dá)到 一種含蒺藜果呋甾皂苷的藥物組合物，該藥物組合物為自蒺藜果中提取分離純化的蒺藜總呋甾皂苷提取物，提取物中以呋甾皂苷為主要成份，其中總呋甾皂在提取物中的質(zhì)量含量為80％以上。
蒺藜總呋甾皂苷提取物的制備方法，包括以下步驟 a、取蒺藜果粉碎成粗粉，用4-10倍(質(zhì)量比)蒺藜果粉量的30％-90％(體積含量)的乙醇(使用5-6倍量的50％-70％的乙醇回流提取條件最佳)回流提取1-3次，每次1-3小時(shí)，合并提取液后回收乙醇，在60～100℃下濃縮至相對(duì)密度為1.08-1.12(80℃)的濃縮液； b、在上述濃縮液中加5-10倍量水，靜置6-20(12小時(shí)最佳)小時(shí)，取上清液，在60～100℃下濃縮至相對(duì)密度為1.08-1.12(80℃)的濃縮水溶液； c、在上述濃縮水溶液中用95％乙醇加至含醇量達(dá)60％-80％，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至8.0-10.0，靜置6-20(12小時(shí)最佳)小時(shí)，過濾，濾液用鹽酸調(diào)溶液成中性后，回收乙醇，濃縮至無醇味的濃縮濾液； d、在上述濃縮濾液中加水稀釋至相當(dāng)于2g生藥/毫升的溶液，過濾，濾液通過大孔吸附樹脂(如NKA-9、HPD100或AB-8)，用水洗至無色，再用20-100倍柱體積的10-40％乙醇洗脫，然后用50％-90％乙醇收集，濃縮干燥，粉碎成細(xì)粉，得含量在80％以上的蒺藜總呋甾皂苷提取物。
步驟d中優(yōu)選采用70-90倍柱體積的10-20％乙醇洗脫，用50％-70％乙醇收集。
本藥物組合物可以將蒺藜總呋甾皂苷提取物與一種或多種藥用輔料按常規(guī)方法制備成注射制劑，最優(yōu)選制備成凍干制劑。
其中凍干制劑的制備方法，包括以下步驟 取蒺藜總呋甾皂苷提取物，加入凍干保護(hù)劑(如甘露醇、右旋糖苷或乳糖，用量為蒺藜總呋甾皂苷提取物質(zhì)量的0.5～4倍，1～2倍的甘露醇最佳)，加注射用水?dāng)嚢枞芙猓?％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為7.0～7.5，加入活性炭，80℃攪拌30分鐘，過濾，用除菌濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，制得凍干制劑。
具體方法為取含量80％以上蒺藜總呋甾皂苷，加0.5-4倍甘露醇或右旋糖苷或乳糖等凍干保護(hù)劑，加20倍注射用水500ml，攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為7.0～7.5，加入1％活性炭，80℃攪拌30分鐘，初濾，再加入約20倍注射用水，用除菌濾膜過濾，測定中間體含量，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制得規(guī)格為40mg的注射用蒺藜總呋甾皂苷。
本藥物組合物在制備治療或預(yù)防缺血性心腦血管疾病中的應(yīng)用，即對(duì)心、腦動(dòng)脈血管硬化或栓塞引起的心肌和腦組織缺血、缺氧及氧化脂質(zhì)升高的藥物治療方面的應(yīng)用。
蒺藜果提取物中含有螺甾皂苷和呋甾皂苷，其中螺甾皂苷極性小，水溶性差，溶血作用較強(qiáng)，而呋甾皂苷具有溶血作用較弱和水溶性好的特點(diǎn)，因此本發(fā)明將提取物制備成以呋甾皂苷為主要成份，其中總呋甾皂在提取物中的質(zhì)量含量在80％以上，因此本品具有更好的安全性，具有藥效更強(qiáng)，起效更快的特點(diǎn)，可以用于制備注射制劑，適合缺血性心腦血管急重癥的治療。
藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明 本發(fā)明的藥物組合物對(duì)于電凝中動(dòng)脈造成大鼠缺血性腦中風(fēng)模型，能明顯減少梗塞面積，降低缺血腦組織的含水量，減輕腦水腫，陽性對(duì)照藥川芎嗪注射液組顯示相同的療效；病理組織學(xué)觀察結(jié)果表明本品對(duì)腦中風(fēng)模型在不同程度上有減輕腦組織損傷作用，高劑量組(20mg/kg·d)及陽性藥鹽酸川芎嗪注射液組療效最佳(兩者療效相似)，其次為中劑量組(10mg/kg·d)。同時(shí)能降低大鼠腦組織中一氧化氮(NO)含量，升高內(nèi)皮型一氧化氮合酶(NOS)含量，降低誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS)含量，改善神經(jīng)功能，保護(hù)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞，減輕腦缺血的損害作用；電凝致缺血性腦中風(fēng)大鼠表現(xiàn)出血液粘稠度增高，血小板最大聚集率升高，而注射用蒺藜總呋甾皂苷能顯著改善全血粘度和降低血小板最大聚集率，與模型組比較有顯著差異。上述試驗(yàn)說明注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)缺血性腦中風(fēng)具有治療作用，改善血液流變學(xué)，減輕腦缺血缺氧損傷的作用。
利用先給予注射用蒺藜總呋甾皂苷高劑量組(20mg/kg·d)，中劑量組(10mg/kg·d)，低劑量組(5mg/kg·d)，然后線栓中動(dòng)脈造成大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，觀察注射用蒺藜總皂苷對(duì)缺血性腦中風(fēng)的預(yù)防作用，結(jié)果表明注射用蒺藜總呋甾皂苷可以改善模型動(dòng)物的行為學(xué)障礙，明顯縮小模型大鼠的腦梗塞面積，降低梗塞率；降低缺血腦組織的含水量，減輕腦水腫；病理組織學(xué)觀察，線栓法復(fù)制出的缺血性中風(fēng)大鼠模型，表現(xiàn)為腦組織灰質(zhì)和/或白質(zhì)不同程度水腫，神經(jīng)細(xì)胞輕度變性、壞死，注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)腦中風(fēng)模型在不同程度上有減輕腦組織損傷作用；各給藥組的大鼠血漿6-K-PGF1α含量顯著升高，其中低、高劑量組與模型組比較差異均有顯著性，TXB2、ET含量均有下降的趨勢。在上述試驗(yàn)中，注射用蒺藜總呋甾皂苷高劑量組的效果優(yōu)于或相似于陽性對(duì)照藥鹽酸川芎嗪注射液組。口服給藥組對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠未能表現(xiàn)出明顯的藥效作用。說明注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)缺血性腦中風(fēng)具有預(yù)防作用。
通過測定麻醉犬的腦血流量、血壓、心率來觀察注射用蒺藜總呋甾皂苷的作用，實(shí)驗(yàn)表明注射用蒺藜總皂苷高劑量組(6mg/kg)，中劑量組(3mg/kg)可以提高麻醉犬的腦血流量，降低其腦血管阻力，對(duì)血壓有輕微的降低作用，可以減緩心率。
采用大鼠尾靜脈注射高分子量右旋糖酐，觀察到本品對(duì)大鼠的腦部微血流較注射前明顯下降，而給予注射用蒺藜總呋甾皂苷后，中劑量組能顯著增加腦缺血部位的血流量，大、小劑量組和陽性藥鹽酸川芎嗪注射液可以減輕右旋糖酐所造成的腦血流下降趨勢，改善右旋糖酐所導(dǎo)致的大腦微循環(huán)障礙。
通過觀察結(jié)扎小鼠兩側(cè)頸動(dòng)脈后小鼠的死亡時(shí)間，發(fā)現(xiàn)給小鼠注射蒺藜總呋甾皂苷可以延長結(jié)扎小鼠兩側(cè)頸動(dòng)脈后小鼠的死亡時(shí)間及小鼠耐缺氧時(shí)間，說明注射用蒺藜總呋甾皂苷能提高小鼠腦部耐缺氧能力。
通過不同致聚劑引起血小板聚集，發(fā)現(xiàn)注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)PAF和ADP所致體外血小板聚集均有顯著的抑制效果，但弱于陽性藥鹽酸川芎嗪注射液，對(duì)膠原所致血小板聚集沒有抑制作用。說明本品是通過ADP和PAF途徑抑制血小板聚集，而不是通過促使血小板釋放內(nèi)源性物質(zhì)起作用。
通過觀測家兔血栓形成的重量和長度，實(shí)驗(yàn)顯示注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)體外血栓形成有明顯的抑制作用，且呈一定的劑量依賴關(guān)系。
通過結(jié)扎犬冠狀動(dòng)脈造成心肌的嚴(yán)重缺血，導(dǎo)致冠脈流量下降，心輸出量減少，ST上抬直至T波倒置，以及NBT染色后出現(xiàn)心肌缺血區(qū)等明顯變化，SOD活性明顯降低，LDH、AST酶活性明顯升高，CK、MDA活性雖有升高但未表現(xiàn)出明顯差異等血液生化指標(biāo)的改變。注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎型心肌缺血模型的影響，主要體現(xiàn)在增加冠狀動(dòng)脈血流量，緩解因結(jié)扎冠脈造成的心肌缺血，從而改善心電ST段，抑制上抬；增加心輸出量，降低總外周阻力，改善血流動(dòng)力學(xué)特性，增加對(duì)心肌的供養(yǎng)，改善心肌缺血；注射用蒺藜總呋甾皂苷可明顯增強(qiáng)SOD活性，LDH活性被明顯抑制；病理組織切片檢查結(jié)果顯示，模型組和試驗(yàn)用藥組犬均出現(xiàn)心肌缺血導(dǎo)致的病理改變，只是各組表現(xiàn)的病理改變程度不同，注射用蒺藜總呋甾皂苷及陽性藥組要輕于模型組。
綜上所述，注射用蒺藜總呋甾皂苷治療缺血性心腦血管疾病的藥理學(xué)基礎(chǔ)在于增加冠狀動(dòng)脈和腦部血流量，降低血管阻力，改善血流動(dòng)力學(xué)特性，改善微循環(huán)，提高心腦組織清除自由基的能力，抑制血小板聚集，改善血液流變學(xué)。
一般藥理學(xué)研究表明除對(duì)血壓和心率有一定影響外，對(duì)麻醉犬心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)無非常顯著影響，對(duì)小鼠精神神經(jīng)系統(tǒng)也無明顯興奮或抑制作用。
急性毒性研究顯示小鼠靜脈注射給藥的LD50值為830mg/kg。長期毒性研究表明大鼠連續(xù)腹腔注射給予本品13周后，其對(duì)大鼠的安全劑量為80mg/kg，約相當(dāng)于推薦臨床人用劑量(110mg/70kg/日)的50倍；Beagle犬靜脈滴注給予本品13周后，其對(duì)犬的安全劑量為27mg/kg，約相當(dāng)于推薦臨床人用劑量(110mg/70kg/日)的17倍。特殊安全性試驗(yàn)結(jié)果也表明注射用蒺藜總呋甾皂苷無過敏性、溶血性和局部刺激性。
另外，應(yīng)特別指出的是，可根據(jù)需要在本發(fā)明的藥物組合物中加入一種或多種天然或合成的其他與蒺藜總呋甾皂苷具有協(xié)同或輔助作用的活性成分，例如三七皂苷、葛根素、川芎嗪、燈盞花素、銀杏黃酮、銀杏內(nèi)酯等，這些可能被加入的天然或合成的輔助活性成分是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的和可以想到的。
可以將蒺藜總呋甾皂苷與一種或多種醫(yī)藥上可接受的載體或賦形劑按適當(dāng)比例混合，制成適于臨床上使用的不同劑型的藥物組合物，例如可將所說的組合物配制成可供靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮下、腦脊髓腔內(nèi)注射給藥的注射劑。
為了制備適于胃腸道外途徑藥的溶液劑，例如可使用注射用水、等滲氯化鈉溶液或葡萄糖溶液作為載體或賦形劑?？梢栽谶@些胃腸道外給藥的制劑中加入一種或多種其他輔助成分或添加劑，例如可使用抗壞血酸作為抗氧化劑，使用苯甲酸鈉作為防腐劑。
最好將本發(fā)明的藥物組合物制成各種適于靜脈結(jié)藥的劑型，例如凍干粉針制劑。這些制劑的單位劑量一般包含40-80mg蒺藜總呋甾皂苷。例如對(duì)于某些急性心肌梗塞或腦栓塞急性期或恢復(fù)期的病人，或心絞痛頻繁發(fā)作的病人，可將本發(fā)明藥物組合物的注射液制劑加在等滲葡萄糖溶液或等滲氯化鈉溶液中，持續(xù)地滴注給藥。靜脈內(nèi)給藥的劑量一般為每天40-80mg，通常60公斤體重成年人的用藥量為每天40-80mg。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1蒺藜果總呋甾皂苷的制備 取蒺藜果粉碎成粗粉1000克，用8倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液后回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.08-1.12(80℃)，加8倍量水，靜置12小時(shí)，取上清液，濃縮至相對(duì)密度1.08-1.12(80℃)，加95％乙醇至含醇量達(dá)70％，用1M氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至9.0，靜置12小時(shí)，過濾，濾液用1M鹽酸調(diào)溶液成中性后，回收乙醇，濃縮至無醇味，加水至500毫升，過濾，濾液通過AB-8大孔吸附樹脂，用水洗至無色，然后用32倍柱體積的10％乙醇洗脫，用80％乙醇收集，濃縮至相對(duì)密度1.20-1.25(80℃)，在80℃真空干燥12小時(shí)，粉碎成細(xì)粉，得黃色粉末狀蒺藜總呋甾皂苷2.8克(得率為2.8‰)。
參照衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十六冊“心腦舒通膠囊”修訂標(biāo)準(zhǔn)，測定了蒺藜總呋甾皂苷含量，本品按干燥品計(jì)算，蒺藜總呋甾皂苷含量為82.5％。
實(shí)施例2注射用蒺藜總呋甾皂苷組合物的制備 取25克蒺藜總呋甾皂苷，加25克乳糖，加注射用水500ml，攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為7.2，加入活性炭0.25g，80℃攪拌30分鐘，初濾，加注射用水至1000ml，用除菌濾膜過濾，測定中間體含量，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制成注射用蒺藜總呋甾皂苷。
實(shí)施例3注射用蒺藜總呋甾皂苷的制備 取25克蒺藜總呋甾皂苷，加50克甘露醇，加注射用水500ml，攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為7.3，加入活性炭0.25g，80℃攪拌30分鐘，初濾，加注射用水至1000ml，用除菌濾膜過濾，測定中間體含量，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制得含有40mg蒺藜總呋甾皂苷的凍干粉針劑。
實(shí)施例4注射用蒺藜總呋甾皂苷的制備 取25克蒺藜總呋甾皂苷，加25克甘露醇，加注射用水500ml，攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為7.3，加入活性炭0.25g，80℃攪拌30分鐘，初濾，加注射用水至1000ml，用除菌濾膜過濾，測定中間體含量，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制得含有40mg蒺藜總呋甾皂苷的凍干粉針劑。
實(shí)施例5注射用蒺藜總呋甾皂苷的制備 取25克蒺藜總呋甾皂苷，加75克右旋糖苷，加注射用水500ml，攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為7.3，加入活性炭0.25g，80℃攪拌30分鐘，初濾，加注射用水至1000ml，用除菌濾膜過濾，測定中間體含量，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制得含有40mg蒺藜總呋甾皂苷的凍干粉針劑。
藥效實(shí)驗(yàn) 以實(shí)施例3所得的注射劑進(jìn)行藥效實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)1對(duì)電凝中動(dòng)脈致大鼠缺血性腦中風(fēng)的治療作用 取體重250～350g SD雄性大鼠173只，按Tamura等的方法進(jìn)行大鼠腦中動(dòng)脈電凝術(shù)，各鼠以10％水合氯醛麻醉(4ml/kg，腹腔注射)，以側(cè)臥位沿右外耳道與右眼外眥連線的中點(diǎn)，垂直于連線切開皮膚約2cm，逐層分離肌肉，除去硬腦膜，暴露中動(dòng)脈，確認(rèn)后電凝嗅束至大腦下靜脈之間的一段大腦中動(dòng)脈，逐層縫合傷口，注射5000單位/ml青霉素鈉防止感染(3ml/kg，腹腔注射)，術(shù)后回籠飼養(yǎng)。觀察術(shù)后4h、8h、24h的大鼠行為，并對(duì)其行為進(jìn)行評(píng)分。隨機(jī)分為6組，分別為模型組、陽性藥川芎嗪注射液組、注射用蒺藜總呋甾皂苷高、中、低三個(gè)劑量組(20mg/kg·d、10mg/kg·d、5mg/kg·d)，假手術(shù)組為找到大腦中動(dòng)脈而不電凝，每天尾靜脈注射給藥一次，連續(xù)五天。第五天給藥后禁食，次晨給藥后一小時(shí)，按以上評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行再評(píng)分，發(fā)現(xiàn)各組均有所改善，頸動(dòng)脈取血后隨即將大鼠斷頭取腦，去除嗅球、小腦和低位腦干后，冷凍十分鐘，切成五片。第1刀在腦前極與視交叉連線中間；第2刀在視交叉部位；第3刀在漏斗柄部位；第4刀在漏斗柄與后葉尾極之間。然后迅速將腦片置于5ml含0.05％2，4，5-三苯基四氮唑(TTC)的PBS(10％)溶液中，37℃避光水浴溫孵10min，經(jīng)染色后，正常腦組織呈攻瑰紅色，而梗塞組織呈白色，且界限分明。梗塞指數(shù)測定取出用濾紙吸干，按順序平鋪于黑紙上，拍照，打印，按以下公式計(jì)算梗塞指數(shù)。梗塞指數(shù)＝梗塞灶紙重(g)/梗塞側(cè)腦紙重(g)。結(jié)果見表1 取用于梗塞指數(shù)測定的電凝中動(dòng)脈致缺血性腦中風(fēng)模型大鼠的頸動(dòng)脈血，置于肝素管和盛有3.8％枸櫞酸鈉的塑料試管中，進(jìn)行血流變學(xué)試驗(yàn)和血小板聚集試驗(yàn)。
用肝素管取全血，取1ml左右加入血沉管中至上部的零刻度，靜置1小時(shí)后，從上到下讀取紅細(xì)胞沉降的刻度；然后3000rpm離心30分鐘，從下往上讀取紅細(xì)胞離心后的體積。另取全血0.8mL，在血液粘度測試儀上檢測全血粘度，然后2000rpm離心10分鐘取上清所得血漿檢測血漿粘度。并用血漿在血凝測定儀上檢測凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)。
以ADP為誘導(dǎo)劑，按比濁法測定血小板聚集率。全血與抗凝劑(3.8％枸櫞酸鈉)9∶1混勻，1000rpm離心8分鐘，取得上層富血小板血漿(PRP)，余血再以3500rpm離心10分鐘，得貧血小板血漿(PPP)，取250μl PRP置于比濁管內(nèi)，37℃溫育5分鐘，隨后在PRP中加入10μl的ADP(使其終濃度為10mmol/L)，在血小板聚集儀上檢測最大聚集率。
動(dòng)物處死后，取出大腦稱濕重后將腦組織置于115℃電熱干燥箱中烘至恒重，稱干重，按下列公式計(jì)算腦含水量，結(jié)果見表2 含水量(％)＝(濕重-干重)/濕重×100％ 腦指數(shù)＝(腦濕重/體重)×100 動(dòng)物處死后，取其部分腦組織置于10％福爾馬林內(nèi)固定，常規(guī)取材、石蠟包埋，切片厚4～5μm，HE染色，病理專業(yè)人員閱片，根據(jù)病變輕重程度，依次半定量為“+”，“++”，“+++”，“++++”，無病變正常組織標(biāo)記為“-”，又分別記分為1分，2分，3分，4分，0分，累加除血管增生、巨噬細(xì)胞增生外所有分?jǐn)?shù)，得出總分。血管增生、巨噬細(xì)胞增生為損傷修復(fù)的表現(xiàn)，故從總分中減去，根據(jù)每例修正后的總分，計(jì)算出每組每只動(dòng)物的均分(

)，分值越高提示損傷越嚴(yán)重，反之則說明經(jīng)藥物處理后損傷減輕，治療有效。
結(jié)果見表3。
取用于病理組織切片檢查的電凝中動(dòng)脈致缺血性腦中風(fēng)模型大鼠，腦組織做病理切片后剩余部分稱重，以pH7.0 PBS緩沖液制成10％勻漿，4℃3000rpm離心30min，取上清液檢測NO、iNOS、eNOS、總NOS等指標(biāo)，結(jié)果見表4。
表1對(duì)電凝中動(dòng)脈致缺血性腦中風(fēng)梗塞指數(shù)的影響(

) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術(shù)組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
由表1結(jié)果顯示，電凝中動(dòng)脈后可以造成大鼠缺血性腦中風(fēng)，注射用蒺藜總呋甾皂苷高劑量、中劑量組與模型組相比，梗塞指數(shù)有顯著下降，說明注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)大鼠缺血性腦中風(fēng)有一定的治療作用。
表2.對(duì)電凝中動(dòng)脈致缺血性腦中風(fēng)大鼠腦指數(shù)及腦含水量的影響(

) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術(shù)組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
由表2結(jié)果顯示，電凝中動(dòng)脈后大鼠腦缺血，腦組織水腫，注射用蒺藜總呋甾皂苷能降低模型大鼠腦組織的含水量，減輕腦水腫。
表3對(duì)缺血性腦中風(fēng)大鼠大腦病理組織學(xué)的影響(

) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術(shù)組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
病理組織學(xué)觀察，注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)腦中風(fēng)模型在不同程度上有減輕腦組織損傷作用，其中注射用蒺藜總呋甾皂苷高劑量組及陽性藥組療效最佳(兩者療效相似)，說明注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)腦組織有保護(hù)作用。
表4對(duì)電凝中動(dòng)脈致缺血性腦中風(fēng)大鼠腦勻漿中NO和NOS的影響(

) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術(shù)組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
從表4結(jié)果可以看出，注射用蒺藜總呋甾皂苷具有降低一氧化氮(NO)含量，升高內(nèi)皮型一氧化氮合酶(NOS)含量，降低誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(NOS)含量，提示注射用蒺藜總呋甾皂苷能保護(hù)腦血管內(nèi)皮細(xì)胞，減輕腦缺血損害，對(duì)缺血性腦中風(fēng)有一定的治療作用。
表5對(duì)電凝中動(dòng)脈致缺血性腦中風(fēng)大鼠血液粘度的影響(

) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術(shù)組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
由表5結(jié)果顯示，注射用蒺藜總呋甾皂苷高中二個(gè)劑量組對(duì)電凝中動(dòng)脈致缺血性腦中風(fēng)大鼠全血粘度有顯著降低作用。
表6注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)電凝中動(dòng)脈致缺血性腦中風(fēng)大鼠血液凝血時(shí)間的影響(

) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術(shù)組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
表6結(jié)果顯示，電凝中動(dòng)脈后致缺血性腦中風(fēng)大鼠的凝血時(shí)間顯著縮短，尤其以凝血酶原時(shí)間縮短最顯著，而注射用蒺藜總呋甾皂苷能顯著延長其凝血時(shí)間。
表7對(duì)電凝中動(dòng)脈致缺血性腦中風(fēng)大鼠血小板聚集率的影響(

) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01 。與假手術(shù)組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
由表7結(jié)果顯示，電凝中動(dòng)脈后，缺血性腦中風(fēng)大鼠的血小板最大聚集率升高，注射用蒺藜總呋甾皂苷高中低三個(gè)劑量組均能顯著抑制血小板聚集率。
從以上結(jié)果表明，注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)大鼠缺血性腦中風(fēng)具有明顯的治療作用，能明顯減少梗塞面積，降低缺血腦組織的含水量，減輕腦水腫，病理組織學(xué)觀察說明注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)腦組織有保護(hù)作用，改善血液流變學(xué)，減輕腦缺血缺氧損傷的作用。
實(shí)驗(yàn)2對(duì)大腦中動(dòng)脈栓塞模型大鼠的保護(hù)作用 用頸內(nèi)動(dòng)脈線栓法制備該模型，取大鼠80只，分為7組，即假手術(shù)組，鹽酸川芎嗪注射液組(20mg/kg·d)，模型組、注射用蒺藜總呋甾皂苷高、中、低劑量(20mg/kg·d、10mg/kg·d、5mg/kg·d)和口服注射用蒺藜總呋甾皂苷組(100mg/kg·d)。每組8-10只，尾靜脈注射給藥(口服蒺藜總呋甾皂苷組為灌胃給藥)，半小時(shí)后以10％水合氯醛麻醉(350mg/kg，ip)，仰位固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部正中切口，切開皮膚后，鈍性分離，找出頸總動(dòng)脈(CCA)，繼續(xù)向下分離并結(jié)扎頸外動(dòng)脈(ECA)及頸外動(dòng)脈各分支(枕動(dòng)脈、甲狀腺上動(dòng)脈、舌動(dòng)脈和面動(dòng)脈)，輕輕剝離迷走神經(jīng)，分離出頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)和翼腭動(dòng)脈，ECA近心端備線，用動(dòng)脈夾夾閉ICA和CCA，在ECA距ICA2mm處剪一小口，將一尼龍線(直徑0.24mm)插入ECA并進(jìn)入CCA，輕扎備線，防止出血，剪斷ECA，松開ICA的動(dòng)脈夾，牽引ECA，使其和ICA約成一直線，輕輕回抽尼龍線，使其順入ICA，繼續(xù)向下推進(jìn)(尼龍線插入深度約為18mm，表明尼龍線已經(jīng)穿過大腦中動(dòng)脈(MCA)起始段，到達(dá)大腦前動(dòng)脈(ACA)近端，阻斷了MCA的所有血供來源，包括來自ICA和ACA及大腦后動(dòng)脈的血液供應(yīng)。松開CCA動(dòng)脈夾，扎緊備線，外留1cm長線頭，縫合皮膚，回籠飼養(yǎng)。
缺血3h后再灌注，輕拉尼龍線，使尼龍線拔出顱外，血流再通，修剪尼龍線，縫合皮膚，回籠自然喂養(yǎng)。以上過程均在室溫恒定(24～25℃)情況下進(jìn)行，以利于評(píng)價(jià)腦缺血情況。觀察對(duì)局灶性腦缺血大鼠腦梗塞面積的影響。
大鼠中動(dòng)脈線栓(MCAO)后24小時(shí)斷頭取腦，將腦置冰冷的生理鹽水中(2～3℃)10min，去除嗅球、小腦和低位腦干后，用生理鹽水沖洗大腦使表面不留血污，吸干周圍水分后，沿冠狀切四刀，切成五片。第一刀在腦前極與視交叉連線中間，第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。然后迅速將腦片置5ml含有1％TTC的磷酸緩沖溶液中，避光溫孵30分鐘，其中每隔7～8分鐘翻動(dòng)一次，經(jīng)染色后，正常腦組織呈玫瑰紅色，而梗塞組織呈白色，且界限分明。溫孵完畢后將腦片照相，剪下紅白顏色區(qū)稱重計(jì)算之。然后根據(jù)重量求面積法，分別計(jì)算出五個(gè)腦片共10個(gè)平面的總面積和梗塞區(qū)域的面積，求出梗塞區(qū)面積占半球總面積的百分比，即梗塞率。
腦含水量的測定動(dòng)物處死后，取出大腦稱濕重后將腦組織置于115℃電熱干燥箱中烘至恒重，稱干重，按下列公式計(jì)算腦含水量 含水量(％)＝(濕重-干重)/濕重×100％ 腦指數(shù)＝(腦濕重/體重)×100 試驗(yàn)結(jié)果顯示，各給藥組大鼠的腦梗塞面積和梗塞率均明顯低于模型組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異有顯著性，提示注射用蒺藜總呋甾皂苷可以明顯縮小模型大鼠的腦梗塞面積，降低梗塞率，數(shù)據(jù)見表8。
表8對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦梗塞面積及梗塞率的影響(

) 注與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術(shù)組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
表9結(jié)果表明，模型大鼠腦指數(shù)和含水量均明顯高于假手術(shù)組，注射用蒺藜總呋甾皂苷高劑量可降低模型大鼠的腦指數(shù)及腦含水量，與模型組比較，差異均有顯著性。提示注射用蒺藜總呋甾皂苷可以減輕腦水腫。
表9對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦指數(shù)及腦含水量的影響(

) 注各藥物組與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。模型組與假手術(shù)組比較，ΔP＜0.05， ΔΔP＜0.01。
注射用蒺藜總呋甾皂苷可以明顯縮小模型大鼠的腦梗塞面積，降低梗塞率，降低缺血腦組織的含水量，減輕腦水腫，而口服給藥組對(duì)缺血性中風(fēng)大鼠未能表現(xiàn)出明顯的治療作用。
實(shí)驗(yàn)3對(duì)麻醉犬腦血流動(dòng)力學(xué)的影響 取健康雜種犬25只，隨機(jī)分為生理鹽水組、尼莫地平組、注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量組、中劑量組及小劑量組共五組，每組5只，雌雄不拘。用戊巴比妥鈉30mg/kg靜脈麻醉，股動(dòng)脈插管，監(jiān)測血壓，股靜脈插管，供給藥及輸液(0.9％氯化鈉，15滴/min)，維持機(jī)體循環(huán)充盈和電解質(zhì)平衡。從頸部正中切開，分離一側(cè)椎動(dòng)脈和同側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈，分別置合適口徑的電磁流量計(jì)探頭，測定其血流；II導(dǎo)聯(lián)監(jiān)測心電圖。血壓、血流量、心電圖信號(hào)送入PowerLab/8s，用Chart v4.01軟件進(jìn)行采樣。血壓參數(shù)用Chart v4.01分析；腦血流量和腦血管阻力用Chart v4.01中的設(shè)置算法模塊計(jì)算；心率用SAECG v1.1.2擴(kuò)展程序計(jì)算。待各指標(biāo)穩(wěn)定后，開始記錄并靜脈給藥，分別于給藥前及給藥后1、5、10、15、30、45、60、90和120min記錄數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，開顱，枕骨大孔橫斷腦干，取出大腦稱重。將全腦濕重輸入Chart v4.01，自動(dòng)生成腦血流量和腦血管阻力圖形和數(shù)據(jù)。
監(jiān)測指標(biāo)為 收縮壓(SBP，kPa)，舒張壓(DBP，kPa)，平均動(dòng)脈壓(MBP，kpa)頸內(nèi)動(dòng)脈血流(ICAF，ml/min)，椎動(dòng)脈血流(VAF ml/min)，并通過以上參數(shù)，計(jì)算腦血流(EBFV，ml/min/100g腦組織)和腦血管阻力(EBVR，dyn×s×cm×10-5)，后兩者計(jì)算公式為 EBFV(ml/min/100g腦組織)＝[(ICAF+VAF)×2/全腦濕重(g)]×100 EBVR(dyn×s×cm×10-5)＝[MBP/(ICAF+VAF)×2]×79.9 試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析采用兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn)。結(jié)果以變化百分率＝(給藥后-給藥前)/給藥前×100％表示。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，注射用蒺藜總呋甾皂苷可以提高麻醉犬的腦血流量，降低其腦血管阻力，對(duì)血壓有輕微的降低作用，可以減緩心率；陽性對(duì)照藥物尼莫地平可以提高麻醉犬腦血流量，與臨床使用及參考文獻(xiàn)一致。注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量組在給藥1min后，腦血量有所提高，其作用可持續(xù)到15min，中劑量組在給藥后1min起作用，作用持續(xù)到120min，結(jié)果見表10。尼莫地平可降低腦血管阻力，注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量及中劑量也可降低腦血管阻力，作用持續(xù)到15min，結(jié)果見表11。注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)平均血壓、收縮壓及舒張壓有降低作用，對(duì)心率也有減緩作用，但與對(duì)照組比較無顯著性差異，對(duì)血壓和心率的影響與尼莫地平相似，結(jié)果見表12、13、14、15。
表10對(duì)麻醉犬腦血流量變化率的影響(M±SD，％) 注與對(duì)照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 表11對(duì)麻醉犬腦血管阻力變化率的影響(M±SD，％) 注與對(duì)照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 表12對(duì)麻醉犬平均動(dòng)脈血壓變化率的影響(M±SD，％) 注與對(duì)照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 表13對(duì)麻醉犬心率的影響(M±SD，BPM) 注與對(duì)照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 表14對(duì)麻醉犬收縮壓變化率的影響(M±SD，％) 注與對(duì)照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 表15對(duì)麻醉犬舒張壓變化率的影響(M±SD，％) 注與對(duì)照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 注射用蒺藜總呋甾皂苷可以提高麻醉犬的腦血流量，降低其腦血管阻力，對(duì)血壓有輕微的降低作用，可以減緩心率。尼莫地平可以提高麻醉犬腦血流量，降低腦血管阻力，與臨床及參考文獻(xiàn)一致。注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量組在給藥1min后，腦血量有所提高，其作用可持續(xù)到15min，中劑量組在給藥后1min起作用，作用持續(xù)到120min。尼莫地平降低腦血管阻力，注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量及中劑量也可降低腦血管阻力，作用持續(xù)到15min。注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)平均血壓、收縮壓及舒張壓有降低作用，對(duì)心率也有減緩作用，對(duì)血壓和心率的影響與尼莫地平相似。
實(shí)驗(yàn)4對(duì)“高粘”模型大鼠腦部微血流的影響 取健康無孕大鼠，雌雄兼用，隨機(jī)分為六組，分別為生理鹽水組，模型組，川芎嗪注射液組(20mg/kg)，注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量組(20mg/kg)，中劑量組(10mg/kg)及小劑量組(5mg/kg)。用25％烏拉坦0.5ml/100g體重進(jìn)行麻醉，背位固定，進(jìn)行氣管插管。然后腹位固定，肛溫探頭監(jiān)測體溫，用加熱板保持大鼠體溫在實(shí)驗(yàn)過程中恒定不變，每個(gè)大鼠間體溫控制在33±4℃，顱頂正中矢狀切開，在距前囟3mm，中旁線2mm，右側(cè)鉆孔，沿與顱骨平面垂直方向，將Bloodflowmeter激光多普勒血流測定儀激光探頭(使用前用校準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn))穿過硬腦膜置入皮質(zhì)下，深度達(dá)4.5mm，監(jiān)測腦微循環(huán)血流，待其穩(wěn)定后(約需20min)，各給藥組和模型組尾靜脈注射分子量為50萬的右旋糖酐(濃度為10％)0.6ml/100g體重，而生理鹽水組則注射生理鹽水0.6ml/100g體重，隨后，各給藥組尾靜脈注射各相應(yīng)藥物，給藥體積為0.1ml/100g體重，生理鹽水組和模型組注射等體積的生理鹽水，并用powerlab/8s藥理生理多導(dǎo)儀的Chart軟件系統(tǒng)描計(jì)血流圖，并實(shí)時(shí)記錄各參數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用變化率表示，計(jì)算公式為 ΔV＝(V1-V2)/V2×100％ ΔV微循環(huán)血流變化率。
V1給藥后微血流，其中生理鹽水組和模型組則表示給生理鹽水后的微血流。
V2給藥前的微血流。
表16對(duì)右旋糖酐致大鼠腦微循環(huán)障礙的影響(M±S) 與生理鹽水比較##P＜0.01 與模型組比較*P＜0.05 試驗(yàn)結(jié)果表明，大鼠尾靜脈注射高分子量右旋糖酐后，其大腦微血流較注射前下降11.18％，而給予注射用蒺藜總呋甾皂苷后，中劑量組能顯著增加腦缺血部位的血流量，大、小劑量組和陽性藥川芎嗪可以減輕右旋糖酐所造成的腦血流下降趨勢，明顯改善右旋糖酐所導(dǎo)致的大腦微循環(huán)障礙。
實(shí)驗(yàn)5對(duì)小鼠頸動(dòng)脈結(jié)扎死亡時(shí)間的影響 取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半，正常對(duì)照組，給予生理鹽水10ml/kg，陽性藥組給予鹽酸川芎嗪注射液28mg/kg，注射用蒺藜總呋甾皂苷大中小三個(gè)劑量組分別給予28.8mg/kg、14.4mg/kg、7.2mg/kg。給藥體積為10ml/kg。各組于尾靜脈注射給藥后5分鐘，同時(shí)結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈(包括頸總動(dòng)脈周圍的神經(jīng))并計(jì)時(shí)，觀察小鼠死亡時(shí)間。死亡時(shí)間超過5分鐘則淘汰。
表17對(duì)小鼠頸動(dòng)脈結(jié)扎死亡時(shí)間的影響(

) 與對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
通過觀察結(jié)扎小鼠兩側(cè)頸動(dòng)脈后小鼠的死亡時(shí)間，考察注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)小鼠腦部耐缺氧的影響。實(shí)驗(yàn)顯示注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)小鼠死亡時(shí)間有明顯延長作用，說明注射用蒺藜總呋甾皂苷能提高小鼠腦部耐缺氧能力。
實(shí)驗(yàn)6對(duì)兔體外血小板聚集的影響 正常對(duì)照組用生理鹽水；藥液以生理鹽水稀釋。
大耳白兔禁食8h后，頸動(dòng)脈取血，放入準(zhǔn)備好的塑料離心管中，管內(nèi)預(yù)加1ml的3.8％枸櫞酸鈉溶液，使全血與抗凝劑9∶1混勻。
全血以1000rpm離心10分鐘，取上清即為富血小板血漿PRP，余血以3000rpm離心10分鐘，取上清即為貧血小板血漿PPP，用PPP調(diào)節(jié)PRP至血小板數(shù)約在20～30萬/mm3，分別取350μl的PRP和PPP置于比濁管中，加入7μl藥液，輕輕搖勻，37℃溫育5分鐘，加入攪拌磁珠，在PRP中加入一定量的致聚劑，(ADP、PAF和collagen的終濃度分別為10mM、0.4μg/ml和2.86mg/ml)描計(jì)血小板聚集曲線，計(jì)算血小板聚集抑制率，T檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示1mg/ml注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)PAF和ADP所致體外血小板聚集均有顯著的抑制效果，但弱于陽性對(duì)照藥川芎嗪，對(duì)膠原所致血小板聚集沒有抑制作用，結(jié)果見表18、19、20。
表18對(duì)PAF所致體外血小板聚集的影響(

) 與對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。
表19對(duì)ADP所致體外血小板聚集的影響(

) 表20對(duì)膠原所致體外血小板聚集的影響(

) 實(shí)驗(yàn)7對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎心肌缺血模型的影響作用 犬戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉后，仰位固定于手術(shù)臺(tái)上，分別分離頸部氣管和腹股溝部位股動(dòng)脈、股靜脈。前者切開插管接人工呼吸機(jī)，輔助呼吸用。后者分別插管連接壓力傳感器供測定血壓和連接三通供輸液給藥用。
犬調(diào)整為右側(cè)臥位，第IV肋間開胸，切除第IV肋，暴露心臟，剪開心包膜做心包吊籃。分離主動(dòng)脈，掛上電磁流量探頭，探頭接電磁血流量計(jì)，測定心輸出量；分離冠狀動(dòng)脈前降枝上1/3(心耳處)，掛上電磁流量探頭測定冠狀循環(huán)血流量；millar管壓力傳感器測定左心室內(nèi)壓；在冠狀動(dòng)脈前降枝第一主分支以下或前降枝1/2處，及左旋枝第二分支下1/3處(阻斷前降枝的交通枝)用縫合針穿入絲線，各打一虛結(jié)備用，供阻斷冠脈用；所有壓力傳感器、兩電磁流量探頭及生物電放大器均聯(lián)接到powerlab主機(jī)上，通過chart軟件實(shí)時(shí)顯示各參數(shù)。
用2份生理鹽水加1份中分子右旋糖酐經(jīng)股靜脈輸液(10滴/min)，維持循環(huán)充盈和水電解質(zhì)平衡，并供靜脈給藥用。操作完成后，觀察上述指標(biāo)，分別記錄正常數(shù)據(jù)及結(jié)扎給藥后數(shù)據(jù)。
在給藥60、120min后從左心室及靜脈竇采血，測定血氧分壓。
給藥后180min記錄完畢，立即取下心臟，生理鹽水沖洗后，沿冠狀溝切除心房，留下心室，稱心室重。將心室冰凍，在心臟結(jié)扎線以下平行于冠狀溝均勻地將心室部分橫切成5片，置0.25％NBT染液中37℃恒溫振搖染色15分鐘，立即用水沖洗去多余的染料，梗塞區(qū)不著色，非梗塞區(qū)被染為藍(lán)色。剪去各心肌片被染色的梗塞區(qū)部分，把未染色的梗塞區(qū)心肌稱重，以其除心室重即分別測得梗塞區(qū)心室重量的百分比，以此判斷心肌梗塞的范圍。
實(shí)驗(yàn)分為六組，其中假手術(shù)組動(dòng)物為4只，其余各組動(dòng)物均為6只。假手術(shù)組冠脈打虛結(jié)，不結(jié)扎；模型組冠脈結(jié)扎，給予等體積生理鹽水；注射用蒺藜總呋甾皂苷小、中、大劑量組冠脈結(jié)扎，從股靜脈分別給予注射用蒺藜總呋甾皂苷藥物1.5mg/kg、3mg/kg、6mg/kg(1ml/kg)；川芎嗪注射液組冠脈結(jié)扎，從股靜脈給予注射液4mg/kg。
所有觀察指標(biāo)均輸入powerlab/8sp數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)記錄，實(shí)時(shí)顯示。確定觀察指標(biāo)為 ①心肌收縮性能指標(biāo) LVP(kPa)左心室內(nèi)壓 LVEDP(kPa)左心室舒張期末壓 dp/dtmax(kPa/s)左心室內(nèi)壓變化速率 ②心泵功能指標(biāo) CO(L/min)心輸出量 SV(ml/beat)每搏輸出量 LVSW(J/Beat)左心室每搏做功 ③外周循環(huán)指標(biāo) MBP(kPa)平均動(dòng)脈血壓 TPR(kPa·s/L)總外周阻力 ④其它指標(biāo) CF(ml/min)冠狀循環(huán)流量 HR(beat/min)心率 ECG心電圖，以s-t段偏移的絕對(duì)值反映心肌缺血的程度 MVO(mlO2/min/100g)左室心肌耗氧量 ⑤血氧分壓分析PO2/PCO2 ⑥計(jì)算指標(biāo)公式 每搏量＝心輸出量/心率，SV＝CO/HR 總外周阻力＝平均動(dòng)脈壓/心輸出量，TPR＝MBP/CO 左心室每搏做功＝(平均動(dòng)脈壓-左室舒張末壓)×心輸出量/心率，LVSW＝(MBP-LVEDP)*CO/HR 左室心肌耗氧量＝K1(收縮壓×心率)+K2*(0.8*收縮壓+0.2*舒張壓)×心率×每搏量/體重+1.43，K1＝4.08E-4，K2＝3.25E-4 數(shù)據(jù)記錄過程血壓單位為mmHg，轉(zhuǎn)換為國際單位為1mmHg＝0.133kPa powerlab八道生理記錄儀記錄數(shù)據(jù)均用chart5.0軟件進(jìn)行處理分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示，用t-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
對(duì)犬急性心肌缺血冠狀動(dòng)脈流量的影響試驗(yàn)結(jié)果(表21)顯示，注射用蒺藜總呋甾皂苷6mg/kg、3mg/kg、1.5mg/kg均可明顯抑制冠脈結(jié)扎后造成的冠脈流量下降，增加冠脈流量，6mg/kg維持的時(shí)間較長，起效時(shí)間為給藥后60min，持續(xù)120min。
表22結(jié)果顯示，冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后，模型組犬心輸出量(CO)也出現(xiàn)下降，注射用蒺藜總呋甾皂苷6mg/kg可觀察到在120min后明顯增加心輸出量。
冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后，體循環(huán)總外周阻力(TPR)增加，120min后出現(xiàn)顯著差異，注射用蒺藜總呋甾皂苷6mg/kg、3mg/kg、1.5mg/kg作用90min后可明顯降低總外周阻力，與模型組比較有顯著差異(P＜0.05)，數(shù)據(jù)見表24。
實(shí)驗(yàn)心電圖數(shù)據(jù)表明，模型組于結(jié)扎后其ST段上抬，其中多數(shù)出現(xiàn)T波倒置，說明心肌缺血嚴(yán)重，注射用蒺藜總呋甾皂苷各劑量均有一定的抑制ST上抬或T波倒置的作用，6mg/kg在作用60min后、3mg/kg在作用150min后可明顯抑制ST上抬，數(shù)據(jù)見表23。
注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎型心肌缺血的影響作用主要體現(xiàn)在增加冠狀動(dòng)脈血流量，緩解因結(jié)扎冠脈造成的心肌缺血，從而改善心電ST段，抑制上抬；增加心輸出量，降低總外周阻力，改善血流動(dòng)力學(xué)特性，增加對(duì)心肌的供養(yǎng)，改善心肌缺血。
實(shí)驗(yàn)8對(duì)大鼠急性心肌缺血模型的影響作用 取大鼠稱重，戊巴比妥鈉麻醉(30mg/kg，0.3ml/100g)，俯位固定于鼠板上，按II導(dǎo)聯(lián)方式連接心電圖模塊及PowerLab藥理生理通用軟硬件分析系統(tǒng)，實(shí)時(shí)觀測大鼠心電情況(心電記錄參數(shù)II導(dǎo)聯(lián)，400k/s采樣率)。待心電平穩(wěn)后，先尾靜脈注射(0.1ml/kg)給予生理鹽水或注射用蒺藜總呋甾皂苷，10分鐘后再尾靜脈注射給予垂體后葉素(0.6u/kg)。記錄給藥前及給予垂體后葉素后的大鼠心電圖。
分組與劑量注射用蒺藜總呋甾皂苷分組與劑量高劑量(20mg/kg)，中劑量(10mg/kg)，低劑量(5mg/kg)；陽性對(duì)照組川芎嗪(20mg/kg)；模型組給予生理鹽水(1ml/kg)。
心電圖指標(biāo)評(píng)價(jià)心肌缺血的主要指標(biāo)是ST-H，同時(shí)亦對(duì)HR、QRS、T-H等指標(biāo)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)比較。
從表26結(jié)果顯示，大鼠在注射給予注射用蒺藜總呋甾皂苷后再注射給予垂體后葉素，可發(fā)現(xiàn)ST段的升高較之模型組有所下降，其中20mg/kg與10mg/kg兩劑量下，ST段的升高值與模型組比較有明顯減小，即由垂體后葉素造成的心肌缺血的ST段升高被抑制，注射用蒺藜總呋甾皂苷可緩解此時(shí)的心肌缺血。注射用蒺藜總呋甾皂苷維持抗心肌缺血作用的時(shí)間在15分鐘左右，其后作用逐漸減弱。5mg/kg對(duì)ST段的升高亦有抑制作用，但作用較弱。
表21-1注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎型心肌缺血模型CF的影響(ml/min) 表21-2注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎型心肌缺血模型CF的影響(ml/min) 注模型組前后比較#P＜0.05，差值與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 表22-1注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎型心肌缺血模型CO的影響(L/min) 表22-2注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎型心肌缺血模型CO的影響(L/min) 注模型組前后比較#P＜0.05，##P＜0.01， 差值與模型組比較*P＜0.05 表23-1 注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎型心肌缺血模型ST的影響(mv) 表23-2注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎型心肌缺血模型ST的影響(mv) 表24-1注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎型心肌缺血模型TPR的影響(kPa.s/L) 表24-2注射用蒺藜總呋甾皂苷對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎型心肌缺血模型TPR的影響(kPa.s/L) 表25對(duì)犬冠狀動(dòng)脈結(jié)扎心肌缺血率的影響 注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 表26-1對(duì)急性心肌缺血大鼠ST-H的影響(M±SD，n＝10)單位mv 表26-1對(duì)急性心肌缺血大鼠ST-H的影響(M±SD，n＝10)單位mv 注模型組前后比較#P＜0.05；差值與模型組比較*P＜0.05。
權(quán)利要求
1、一種含蒺藜果呋甾皂苷的藥物組合物，該藥物組合物為自蒺藜果中提取分離純化的蒺藜總呋甾皂苷提取物，提取物中以呋甾皂苷為主要成份，其中總呋甾皂在提取物中的質(zhì)量含量為80％以上。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的蒺藜總呋甾皂苷提取物的制備方法，包括以下步驟
a、取蒺藜果粉碎成粗粉，用乙醇回流提取1-3次，每次1-3小時(shí)，合并提取液后回收乙醇，在60～100℃下濃縮至相對(duì)密度為1.08-1.12的濃縮液；
b、在上述濃縮液中加5-10倍量水，靜置6-20小時(shí)，取上清液，在60～100℃下濃縮至相對(duì)密度為1.08-1.12的濃縮水溶液；
c、在上述濃縮水溶液中用95％乙醇加至含醇量達(dá)60％-80％，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值至8.0-10.0，靜置6-20小時(shí)，過濾，濾液用鹽酸調(diào)溶液成中性后，回收乙醇，濃縮至無醇味的濃縮濾液；
d、在上述濃縮濾液中加水稀釋至相當(dāng)于2g生藥/毫升的溶液，過濾，濾液通過大孔吸附樹脂，用水洗至無色，再用20-100倍柱體積的10-40％乙醇洗脫，然后用50％-90％乙醇收集，濃縮干燥，粉碎成細(xì)粉，得含量在80％以上的蒺藜總呋甾皂苷提取物。
3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于步驟a中的乙醇采用4-10倍蒺藜果粉量的30％-90％的乙醇。
4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于步驟d中的大孔吸附樹脂采用NKA-9、HPD100或AB-8大孔吸附樹脂。
5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于步驟d中采用70-90倍柱體積的10-20％乙醇洗脫，用50％-70％乙醇收集。
6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于蒺藜總呋甾皂苷提取物與一種或多種藥用輔料制備成注射制劑。
7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于蒺藜總呋甾皂苷提取物與一種或多種藥用輔料制備成凍干制劑。
8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于所述的凍干制劑的制備方法，包括以下步驟
取蒺藜總呋甾皂苷提取物，加入凍干保護(hù)劑，加注射用水?dāng)嚢枞芙?，?％的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值為7.0～7.5，加入活性炭，80℃攪拌30分鐘，過濾，用除菌濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，制得凍干制劑。
9、根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于凍干保護(hù)劑采用甘露醇、右旋糖苷或乳糖，用量為蒺藜總呋甾皂苷提取物質(zhì)量的0.5～4倍。
10、根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于在制備治療或預(yù)防缺血性心腦血管疾病中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含蒺藜果呋甾皂苷的藥物組合物，該藥物組合物為自蒺藜果中提取分離純化的蒺藜總呋甾皂苷提取物，提取物中以呋甾皂苷為主要成份，其中總呋甾皂在提取物中的質(zhì)量含量為80％以上。本發(fā)明還公開了這種藥物組合物的用途。本發(fā)明藥物組合物中蒺藜總呋甾皂苷含量為80％以上，具有溶血作用較弱和水溶性好的特點(diǎn)，本發(fā)明將蒺藜呋甾皂苷制成靜脈注射劑具有較好的安全性，藥效更強(qiáng)，起效更快，適用于缺血性心腦血管急重癥的治療。
文檔編號(hào)A61K9/08GK101019905SQ20071002032
公開日2007年8月22日 申請(qǐng)日期2007年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月13日
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