專利名稱：芒柄花素－3′－磺酸鈉、櫻黃素－3′－磺酸鈉及其制備方法和藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于雜環(huán)化合物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到雜環(huán)不氫化的含六節(jié)環(huán)，有一個(gè)氧原子作為僅有環(huán)雜原子，與苯環(huán)稠合有芳環(huán)僅連在位置2的雜環(huán)化合物。
背景技術(shù)：
異黃酮類化合物是天然產(chǎn)物中活性成分之一，具有較高的藥用價(jià)值，芒柄花素和櫻黃素均屬于異黃酮類化合物。芒柄花素廣泛分布于豌豆、豇豆、大豆、刺果甘草、野葛根和紅三葉草等食用及藥用植物中，具有明顯的降血脂、抗腫瘤、抗脂質(zhì)過氧化、抗骨質(zhì)疏松、抑制螺桿菌等活性；櫻黃素主要存在于紅車軸草、雞血藤等植物中，具有抗腫瘤、降血脂、治療骨質(zhì)疏松，改善婦女更年期癥狀等用途。芒柄花素和櫻黃素異黃酮類化合物，因水溶性和脂溶性都很低，在作為藥物時(shí)生物利用度低、顯效慢，并且只能制成口服藥劑。為此，本發(fā)明將芒柄花素和櫻黃素磺化，給它們的分子結(jié)構(gòu)中引入磺酸基增加水溶性，以改善芒柄花素和櫻黃素在臨床使用時(shí)的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述芒柄花素和櫻黃素的缺點(diǎn)，提供兩種水溶性高的具有藥用價(jià)值的新化合物芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉。
本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種制備上述兩個(gè)化合物的方法。
本發(fā)明的進(jìn)一步目的在于提供一種治療高脂血癥和脂肪肝癥的藥物和組合物。
本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供一種上述化合物和組合物在制備治療高脂血癥和脂肪肝癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉的化學(xué)名稱分別為7-羥基-4′-甲氧基異黃酮-3′-磺酸鈉和4′，5-二羥基-7-甲氧基異黃酮-3′-磺酸鈉，它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)分別用下述式(1)和式(2)表示
式(1)，芒柄花素-3′-磺酸鈉R1＝R2＝H R3＝CH3式(2)，櫻黃素-3′-磺酸鈉R1＝CH3R2＝OH R3＝H采用化學(xué)反應(yīng)制備本發(fā)明的芒柄花素-3′-磺酸鈉的方法如下(1)在反應(yīng)釜中加入溶劑和下式(3)芒柄花素，攪拌下使芒柄花素完全溶解在溶劑中，再加入磺化劑，使芒柄花素與磺化劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，所用芒柄花素與磺化劑的摩爾比為1∶1～1∶10，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為20～100℃，反應(yīng)5分鐘～10小時(shí)，得芒柄花素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物。
式(3)芒柄花素(2)將(1)反應(yīng)后的混合物冷卻至室溫，加入反應(yīng)物總體積1～5倍量10～20％的氯化鈉溶液，充分?jǐn)嚢?，靜置生成沉淀，用常規(guī)分離方法，將式(1)化合物分離出來，得到粗品，再加入粗品量的1～5倍量10～20％的氯化鈉溶液使其純化，得到化合物式(1)的純品。
式(3)式(1)以櫻黃素為先導(dǎo)化合物制備本發(fā)明的櫻黃素-3′-磺酸鈉的方法如下(1)反應(yīng)釜中加入溶劑和式(4)櫻黃素，攪拌下使櫻黃素完全溶解在溶劑中，再加入磺化劑，使櫻黃素與磺化劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，所用櫻黃素與磺化劑的摩爾比為1∶1～1∶10，用 式(4)櫻黃素調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為20～100℃，反應(yīng)5分鐘～10小時(shí)，得櫻黃素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物。
(2)將(1)反應(yīng)后的混合物冷卻至室溫，加入反應(yīng)物總體積1～5倍量10～20％的氯化鈉溶液，充分?jǐn)嚢?，靜置生成沉淀，用常規(guī)分離方法，將化合物分離出來，得到粗品，再加入粗品量的1～5倍量10～20％氯化鈉溶液使其純化，得到化合物式(2)純品。
式(4)式(2)本發(fā)明芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉的制備方法中，化學(xué)反應(yīng)所用的溶劑是70～98％的濃硫酸，所用的磺化劑可以是濃硫酸或氯磺酸或發(fā)煙硫酸或三氧化硫。
本發(fā)明芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉的制備方法中，磺化反應(yīng)的優(yōu)選溫度為20～100℃，反應(yīng)的優(yōu)選時(shí)間為30分鐘～8小時(shí)。
本發(fā)明芒柄花素-3′-磺酸鈉的制備方法中，化學(xué)反應(yīng)的最佳溫度為40℃，化學(xué)反應(yīng)的最佳時(shí)間為2小時(shí)；櫻黃素-3′-磺酸鈉的制備方法中，化學(xué)反應(yīng)的最佳溫度為50℃，化學(xué)反應(yīng)的最佳時(shí)間為2.5小時(shí)。
本發(fā)明的藥物組合物含有治療有效量的上述式(1)或式(2)為活性成分，以及含有一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
本發(fā)明的化合物和藥物組合物可用于制備治療高脂血癥和脂肪肝癥的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明有效成分芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉制備治療高脂血癥和脂肪肝癥的藥物用常規(guī)藥用制劑的形式來使用；所述的常規(guī)藥用制劑含作為活性成分的芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉，該活性成分在制劑中與藥學(xué)上可接受的載體如適宜于胃腸內(nèi)和胃腸外給藥的有機(jī)或無機(jī)的固體或液體賦形劑混合。該藥用制劑可以是固體形式如片劑、顆粒集、粉劑、膠囊劑；也可以是液體形式如注射劑、懸浮劑、糖漿劑和乳劑等。
上述制劑中可含有輔助物質(zhì)、穩(wěn)定劑、潤濕劑和其它常用的添加劑，如乳糖、檸檬酸、酒石酸、硬脂酸、硬脂酸鎂、石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、花生油、橄欖油、可可脂、乙二醇、葡萄糖、鹽酸普魯卡因、鹽酸利多卡因和抗壞血酸等。
上述制劑可按照各種制劑常規(guī)的制備工藝制成。
本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.1～99.5％的活性成分，最優(yōu)選含有重量比為0.5～95％的活性成分。
本發(fā)明的活性成分芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉制成各種劑型的口服藥物，成人口服，藥物中芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉的含量應(yīng)為每天150mg，一日三次，每次藥物中芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉的含量為50mg，14天為一個(gè)療程，治療2～3個(gè)療程。成人肌肉注射，藥物中芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉含量應(yīng)為每天80mg，一日兩次，14天為一個(gè)療程，治療2個(gè)療程；靜脈點(diǎn)滴，成人用量，藥物中芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉的含量應(yīng)為每天80mg，一日一次，14天為一個(gè)療程，治療2個(gè)療程?？诜幬锘蜃⑸渌幬铮瑑和盟幾们闇p量。
發(fā)明人將本發(fā)明的活性成分芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉委托試驗(yàn)單位進(jìn)行了藥效試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明的活性成分芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉可以顯著降低高脂大鼠血清和肝臟中膽固醇含量，減輕肝細(xì)胞脂滴堆積，降低肝酶活性，保護(hù)由血管緊張素(AngII)升高引起的血管內(nèi)皮損傷和心血管疾病，具有較好的降脂護(hù)肝作用和保護(hù)血管內(nèi)皮的功能。若將芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉用于臨床試驗(yàn)，預(yù)期將會(huì)有較好的治療效果。本發(fā)明的制備方法采用親電取代反應(yīng)法，具有工藝簡便，所用的設(shè)備簡單、產(chǎn)品的收率高和生產(chǎn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。


圖1是本發(fā)明芒柄花素-3′-磺酸鈉的紅外光譜圖。
圖2是本發(fā)明芒柄花素-3′-磺酸鈉的氫核磁共振圖。
圖3是本發(fā)明芒柄花素-3′-磺酸鈉的碳核磁共振圖。
圖4是本發(fā)明櫻黃素-3′-磺酸鈉的紅外光譜圖。
圖5是本發(fā)明櫻黃素-3′-磺酸鈉的氫核磁共振圖。
在圖1和圖4中，橫坐標(biāo)為波數(shù)，縱坐標(biāo)為吸收率。在圖2、圖3和圖4中，橫坐標(biāo)為化學(xué)位移，單位為ppm，縱坐標(biāo)為峰高度。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。一、芒柄花素-3′-磺酸鈉制備實(shí)施例實(shí)施例1在本實(shí)施例中，先將芒柄花素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑80％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，芒柄花素與磺化劑摩爾比為1∶5，用攪拌機(jī)攪拌后，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為60℃，反應(yīng)6小時(shí)，得到芒柄花素-3′-磺酸和未反應(yīng)原料的混合物，冷卻至室溫，加入反應(yīng)物總體積5倍的10％的氯化鈉水溶液，充分?jǐn)嚢?，靜置析出白色沉淀，過濾，得到芒柄花素-3′-磺酸鈉粗品；用重結(jié)晶法在芒柄花素-3′-磺酸鈉粗品中加入5倍量的10％氯化鈉水溶液進(jìn)行純化，得到芒柄花素-3′-磺酸鈉精品(產(chǎn)率89％)。采用本實(shí)施例制備的芒柄花素-3′-磺酸鈉，經(jīng)測試，其理化性能如下白色針狀晶體，熔點(diǎn)為305℃(分解)；在水中的溶解度為8.6％，易溶于水。
參見圖1，本實(shí)施例的芒柄花素-3′-磺酸鈉分子結(jié)構(gòu)經(jīng)紅外光譜儀測試結(jié)果如下IR v(cm-1，KBr)3440，1635，1498，1265，1192，1095，1022，828，725，629。
參見圖2，本實(shí)施例的芒柄花素-3′-磺酸鈉的H用核磁共振儀測試結(jié)果如下1H NMR[DSMO/TMS，δ(ppm)]8.31(s，1H，H-C2)，7.98(d，1H，J＝8.7Hz，H-C5)，7.88(d，1H，J＝1.8Hz，H-C2′)，7.49(dd，1H，J＝8.6Hz，J＝1.8Hz，H-C6′)，7.04(d，1H，J＝8.6Hz，H-C5′)，6.96(d，1H，J＝8.7Hz，H-C6)，6.90(s，1H，H-C8)，3.80(s，3H，H3CO-C4′)。
參見圖3，本實(shí)施例的芒柄花素-3′-磺酸鈉的C用核磁共振儀測試結(jié)果如下13C NMR[DSMO/TMS，δ(ppm)]175.07(C-4)，163.15(C-7)，157.93(C-8a)，156.30(C-2)，153.66(C-4′)，134.88(C-3′)，131.69(C-5)，129.45(C-1′)，127.66(C-3)，123.62(C-6′)，123.48(C-4a)，116.95(C-6)，115.74(C-2′)，112.20(C-5′)，102.65(C-8)，56.31(CH3)。
實(shí)施例2在本實(shí)施例中，先將芒柄花素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑70％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，芒柄花素與磺化劑的摩爾比為1∶8，用攪拌機(jī)攪拌后，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為100℃，反應(yīng)5分鐘，得到芒柄花素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫，加5倍體積10％氯化鈉水溶液，放置，得到白色芒柄花素-3′-磺酸鈉沉淀，隨后分離芒柄花素-3′-磺酸鈉，并使其純化，分離和純化所用原料為反應(yīng)物總體積1倍的20％氯化鈉水溶液，其它工藝過程與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例3在本實(shí)施例中，先將芒柄花素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑85％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，芒柄花素與濃硫酸的摩爾比為1∶3，用攪拌機(jī)攪拌后，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為20℃，反應(yīng)10小時(shí)，得到芒柄花素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，加5倍體積10％氯化鈉水溶液，放置，得到白色芒柄花素-3′-磺酸鈉沉淀，隨后分離芒柄花素-3′-磺酸鈉，并使其純化，分離和純化所用原料及配比與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例4在本實(shí)施例中，先將芒柄花素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑98％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，芒柄花素與濃硫酸的摩爾比為1∶1，用攪拌機(jī)攪拌后，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為80℃，反應(yīng)30分鐘，得到芒柄花素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫，加5倍體積10％氯化鈉水溶液，放置，得到白色芒柄花素-3′-磺酸鈉沉淀，隨后分離芒柄花素-3′-磺酸鈉并使其純化，分離和純化所用原料及配比與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例5在本實(shí)施例中，先將芒柄花素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑75％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再通入磺化劑三氧化硫，芒柄花素與三氧化硫摩爾比為1∶3，用攪拌機(jī)攪拌后，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為20℃，反應(yīng)8小時(shí)，得到芒柄花素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫，加5倍體積10％氯化鈉水溶液，放置，得到白色芒柄花素-3′-磺酸鈉沉淀，隨后分離芒柄花素-3′-磺酸鈉并使其純化，分離和純化所用原料及配比與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例6在本實(shí)施例中，先將芒柄花素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑75％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，再加入磺化劑發(fā)煙硫酸，芒柄花素與發(fā)煙硫酸的摩爾比為1∶2，用攪拌機(jī)攪拌后，升溫至50～55℃，反應(yīng)1小時(shí)，得到芒柄花素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫，加10％氯化鈉水溶液，得到芒柄花素-3′-磺酸鈉粗品，并使其純化。分離和純化所用原料以及配比和操作與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例7在本實(shí)施例中，先將芒柄花素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑75％硫酸直到使芒柄花素充分溶解，然后滴加磺化劑氯磺酸，芒柄花素與氯磺酸的摩爾比為1∶1。滴加完后，用攪拌機(jī)攪拌后，升溫至45～50℃，反應(yīng)2小時(shí)，將反應(yīng)物的混合物冷卻至室溫，加10％氯化鈉水溶液加熱后并冷卻，得到芒柄花素-3′-磺酸鈉粗品，并使其純化。分離和純化所用原料以及配比和操作與實(shí)施例1相同。
二、櫻黃素-3′-磺酸鈉制備實(shí)施例實(shí)施例8在本實(shí)施例中，先將櫻黃素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑80％硫酸直到使櫻黃素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，櫻黃素與濃硫酸的摩爾比為1∶5，用攪拌機(jī)攪拌后，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為60℃，反應(yīng)2小時(shí)，得到櫻黃素-3′-磺酸和未反應(yīng)原料的混合物，冷卻至室溫，加入反應(yīng)物總體積5倍的10％氯化鈉水溶液，充分?jǐn)嚢?，靜置析出白色沉淀，過濾，得到櫻黃素-3′-磺酸鈉粗品；用重結(jié)晶法在櫻黃素-3′-磺酸鈉粗品中加入5倍量的10％氯化鈉水溶液進(jìn)行純化，得到櫻黃素-3′-磺酸鈉精品(產(chǎn)率79.8％)。
采用本實(shí)施例制備的櫻黃素-3′-磺酸鈉，經(jīng)測試，其理化性能如下白色針狀晶體，熔點(diǎn)為280℃(分解)；在水中的溶解度為7.5％，易溶于水。
參見圖4，本實(shí)施例的櫻黃素-3′-磺酸鈉分子結(jié)構(gòu)經(jīng)紅外光譜儀測試結(jié)果如下IR v(cm-1，KBr)3157，1661，1613，1577，1504，1440，1263，1192，1094，1036，901，827，630。
參見圖5，本實(shí)施例的櫻黃素-3′-磺酸鈉的H用核磁共振儀測試結(jié)果如下1H NMR[DSMO/TMS，δ(ppm)]12.92(s，1H，HO-C5)，10.66(s，1H，HO-C4′)，8.46(s，IH，H-C2)，7.71(s，1H，H-C2′)，7.41(d，1H，J＝6.0Hz，H-C6′)，6.85(d，1H，J＝6.0Hz，H-C5′)，6.69(s，IH，H-C8)，6.43(s，1H，H-C6)，3.87(s，3H，H3CO-C7)。
實(shí)施例9在本實(shí)施例中，先將櫻黃素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑75％硫酸直到使櫻黃素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，櫻黃素與濃硫酸的摩爾比為1∶8，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為100℃，反應(yīng)10分鐘，得到櫻黃素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫，加5倍體積10％氯化鈉水溶液，放置，得到白色櫻黃素-3′-磺酸鈉沉淀，隨后分離櫻黃素-3′-磺酸鈉，并使其純化，分離和純化所用原料為反應(yīng)物總體積1倍的20％氯化鈉水溶液，其它工藝過程與實(shí)施例8相同。
實(shí)施例10先將櫻黃素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑85％硫酸直到使櫻黃素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，櫻黃素與濃硫酸的摩爾比為1∶3，用攪拌機(jī)攪拌后，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為20℃，反應(yīng)10小時(shí)，得到櫻黃素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，加5倍體積10％氯化鈉水溶液，放置，得到白色櫻黃素-3′-磺酸鈉沉淀，隨后分離櫻黃素-3′-磺酸鈉，并使其純化，分離和純化所用原料及配比與實(shí)施例8相同。
實(shí)施例11在本實(shí)施例中，先將櫻黃素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑85％硫酸直到使櫻黃素充分溶解，再通入磺化劑三氧化硫，櫻黃素與三氧化硫的摩爾比為1∶3，用攪拌機(jī)攪拌后，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為40℃，反應(yīng)7小時(shí)，得到櫻黃素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫，加5倍體積10％氯化鈉水溶液，放置，得到白色櫻黃素-3′-磺酸鈉沉淀，隨后分離櫻黃素-3′-磺酸鈉并使其純化，分離和純化所用原料及配比與實(shí)施例8相同。
實(shí)施例12在本實(shí)施例中，先將櫻黃素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑80％硫酸直到使櫻黃素充分溶解，再通入磺化劑發(fā)煙硫酸，櫻黃素和發(fā)煙硫酸的摩爾比為1∶4。用攪拌機(jī)攪拌后，升溫至50～55℃，反應(yīng)1小時(shí)，得到櫻黃素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫，加10％氯化鈉水溶液，得到櫻黃素-3′-磺酸鈉粗品，并使其純化。分離和純化所用原料以及配比和操作與實(shí)施例8相同。
實(shí)施例13在本實(shí)施例中，先將櫻黃素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑90％硫酸直到使櫻黃素充分溶解，再加入磺化劑氯磺酸，櫻黃素與氯磺酸的摩爾比為1∶1。滴加完后，用攪拌機(jī)攪拌后，升溫至45～50℃，反應(yīng)2小時(shí)，將反應(yīng)物的混合物冷卻至室溫，加10％氯化鈉水溶液并加熱，得到櫻黃素-3′-磺酸鈉粗品。分離和純化所用原料以及配比和操作與實(shí)施例8相同。
實(shí)施例14在本實(shí)施例中，先將櫻黃素加入反應(yīng)釜中，用攪拌機(jī)攪拌并逐漸加入溶劑98％硫酸直到使櫻黃素充分溶解，再加入磺化劑濃硫酸，櫻黃素與濃硫酸的摩爾比為1∶2。滴加完后，升溫至55～60℃，反應(yīng)1小時(shí)，得到櫻黃素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物，冷卻至室溫，加10％氯化鈉水溶液并加熱，得到櫻黃素-3′-磺酸鈉粗品。分離和純化所用原料以及配比和操作與實(shí)施例8相同。
三、芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉制劑實(shí)施例實(shí)施例15以制備本發(fā)明芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉片劑1000片為例所用的原料和輔料配比如下芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉50g淀粉 250g淀粉漿(10％) 85g硬脂酸鎂 15g采用常規(guī)片劑的制備工藝制成，每片重0.4g，每片芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉的含量為50mg。用法成人一日三次，每次1片口服，兒童酌情減量。
實(shí)施例16以制備本發(fā)明芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉散劑1000袋為例所用的原料和輔料配比如下芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉 40g乳糖 2800g淀粉漿(10％) 60g采用常規(guī)散劑的制備工藝制成，每袋重3g，含芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉40mg。用法成人一日三次，每次1袋口服，兒童酌情減量。
實(shí)施例17以制備本發(fā)明芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉1000ml注射劑為例，所用的原料和輔料配比如下芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉50g注射用水 加至1000ml采用常規(guī)法注射劑的制備工藝制成，每瓶2ml，含芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉100mg。用法肌肉注射，一日兩次，每次1支，靜脈點(diǎn)滴，一日一次，每次2支。
發(fā)明人將本發(fā)明的有效成分芒柄花素-3′-磺酸鈉或櫻黃素-3′-磺酸鈉委托試驗(yàn)單位進(jìn)行了藥效試驗(yàn)，例舉下列實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及其試驗(yàn)結(jié)果，證明用本發(fā)明制備的藥物治療高脂血癥和脂肪肝癥的有效性。
1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組選用SD雄性大鼠60只，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購自陜西省中醫(yī)研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)陜醫(yī)動(dòng)證字08-004號(hào))。8周齡，體重180g～220g。動(dòng)物室內(nèi)溫度20℃～29℃，相對(duì)濕度40％～55％。大鼠自由飲水、進(jìn)食，分籠飼養(yǎng)，每籠5只。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購回正常喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為6組，即正常對(duì)照組(A)、模型組(B)、正常對(duì)照組加芒柄花素-3′-磺酸鈉(C)、模型組加芒柄花素-3′-磺酸鈉(D)、模型組加櫻黃素-3′-磺酸鈉(E)和模型組加辛伐他汀(F)，每組10只。
2模型復(fù)制及標(biāo)本制作A組和C組喂普通飼料；其余各組均喂高脂飼料。高脂飼料配方大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料中添加1.0％膽固醇，0.35％膽酸鈉，5.0％豬油，0.61％丙基硫氧嘧啶；前3天按70萬IU/kg的總劑量分3次給予維生素D灌胃。從第4周開始A、B、C三組每只每天灌服生理鹽水2ml，D、E二組每只每天灌服芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉13.5mg，用蒸餾水稀釋為2ml灌喂。F組每只每天灌服辛伐他汀1.8mg，用蒸餾水稀釋為2ml灌喂。實(shí)驗(yàn)期間大鼠自由進(jìn)水?dāng)z食，第8周末禁食12小時(shí)，次日麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，制備血清和血漿立即送檢。迅速切取肝組織用冰生理鹽水沖洗，濾紙吸干后，中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡下觀察肝組織形態(tài)學(xué)變化。
3主要儀器及檢測方法血清膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肝谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)和谷氨酰氨基轉(zhuǎn)移酶(GGT)為東芝Toshiba-TBA-120FR全自動(dòng)生化分析儀檢測，采用一步酶法、二步酶法和膽固醇酯酶氧化酶法；血管緊張素(AngII)，內(nèi)皮素(ET)，γ-放射免疫計(jì)數(shù)器測定，采用同位素沉淀法。整個(gè)檢測過程由西安市第二人民醫(yī)院專業(yè)人員完成。
4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析。T檢驗(yàn)，顯著性水平采用P＜0.05和P＜0.01水平。
5結(jié)果與分析(1)肝組織形態(tài)學(xué)變化光鏡下觀察，正常組大鼠肝細(xì)胞基本無異常變化，肝細(xì)胞內(nèi)無脂滴堆積，模型組肝組織增大，顏色發(fā)白發(fā)黃。肝細(xì)胞存在不同程度水腫和壞死，多數(shù)肝細(xì)胞內(nèi)可見大量的脂滴脂泡，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞空泡樣變性、融合。芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉組肝細(xì)胞內(nèi)脂滴和脂泡減少，和模型組比較有明顯改善，顏色也趨于正常對(duì)照組。
(2)芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉對(duì)大鼠腎臟脂肪墊、睪丸脂肪墊重、肝指數(shù)的影響表1各組大鼠腎臟脂肪墊、睪丸脂肪墊重、肝指數(shù)測定結(jié)果比較

*p＜0.01，**p＜0.05，與正常對(duì)照組(A)比較；#p＜0.05，與模型組(B組)比較從表1可知，D、E組大鼠腎臟脂肪墊和睪丸脂肪墊重顯著低于B組，D組肝指數(shù)顯著性低于B組，說明芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉有降低脂肪作用。
(3)芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉對(duì)大鼠血清和肝臟脂質(zhì)的影響表2各組大鼠血清TC、TG、HDL-c和LDL-c測定結(jié)果比較

*p＜0.01，**p＜0.05，與正常對(duì)照組(A)比較；#p＜0.05，與模型組(B組)比較表3各組大鼠肝臟勻漿液TC和TG測定結(jié)果比較

*p＜0.01，**p＜0.05，與正常對(duì)照組(A)比較；#p＜0.05，與模型組(B組)比較由表1-2可見，大鼠連續(xù)給予高脂飼料后，B組血清中TC、TG、低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)含量明顯增加，高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)明顯降低，說明高血脂模型已經(jīng)形成，給予芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉后與B組相比，D、E組TC降低(p＜0.01)，HDL-C升高(p＜0.05)，LDL-C降低(p＜0.05)。表明芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉對(duì)高脂大鼠血脂具有明顯的降脂效果。
(4)芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉對(duì)大鼠血清AngII和ET的影響表4各組大鼠血清血管緊張素(AngII)和內(nèi)皮素(ET)測定結(jié)果比較

*p＜0.01，**p＜0.05，與正常對(duì)照組(A)比較；#p＜0.05，與模型組(B組)比較ET和AngII均是機(jī)體內(nèi)強(qiáng)烈的縮血管物質(zhì)，在維持血管的正常功能和動(dòng)脈硬化過程中發(fā)揮重要作用。ET與AngII兩者之間存在相互促進(jìn)的正反饋調(diào)節(jié)機(jī)制。AngII可刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌ET進(jìn)入血液，使血液中ET含量增加。文獻(xiàn)報(bào)道，高脂膳食大鼠血漿AngII明顯升高，表4中高脂模型結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致。芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉作用后，D、E組與B組比較，血清AngII和ET都顯著降低(p＜0.05)。表明芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉可顯著降低AngII引起的ET濃度的增高，對(duì)AngII引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷有保護(hù)作用。
(5)芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉對(duì)大鼠肝酶活性的影響表5各組大鼠肝酶活性測定結(jié)果比較

*p＜0.01，**p＜0.05，與正常對(duì)照組(A)比較#p＜0.05，與模型組(B組)比較谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶的增高是肝臟功能受到損害的間接表現(xiàn)，也是傳統(tǒng)判定肝功能損害的指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)的模型組谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶明顯增高，加芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉后與模型組比較，D、E兩組ALT和AST顯著降低(p＜0.05)，趨向正常。說明芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉具有較好的護(hù)肝作用。
6結(jié)論芒柄花素和櫻黃素在化學(xué)結(jié)構(gòu)上同屬于異黃酮類化合物。黃酮類物質(zhì)廣泛存在于自然界，多具艷麗的色澤，在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，很多用于治療心臟病、腦血栓和前列腺疾病的有效藥物，活血化瘀、清熱、解毒、消炎的藥物中均含有豐富的黃酮類化合物。黃酮類化合物有多種多樣生理活性，其中包括抗氧化、清除自由基、抗癌、抗菌、抗病毒、降血脂、降血糖和免疫調(diào)節(jié)等功能。目前國內(nèi)外對(duì)黃酮類物質(zhì)的降血脂作用機(jī)理和作用效果研究較多。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜑楦吣懝檀佳Y，研究結(jié)果顯示，芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉具有如下功能(1)較好的降低高膽固醇作用，并且芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉之間降膽固醇作用無明顯差異。(2)降低肝臟勻漿脂質(zhì)(TC和TG)和肝酶(ALT和AST)活性，使其趨于正常。(3)降低血清AngII和ET水平，保護(hù)由AngII升高引起的血管內(nèi)皮損傷和心血管疾病。因此認(rèn)為，芒柄花素-3′-磺酸鈉和櫻黃素-3′-磺酸鈉具有較好的降脂護(hù)肝作用和保護(hù)血管內(nèi)皮的功能。
權(quán)利要求
1.下述式(1)或式(2)化合物。 式(1)R1＝R2＝H R3＝CH3式(2)R1＝CH3 R2＝OH R3＝H
2.一種權(quán)利要求1中式(1)或式(2)化合物的制備方法，該方法包括以下步驟(1)反應(yīng)釜中加入溶劑和下式(3)芒柄花素或式(4)櫻黃素，芒柄花素或櫻黃素溶 式(3)R1＝R2＝H R3＝CH3式(4)R1＝CH3R2＝OH R3＝H解在溶劑中，再加入磺化劑，芒柄花素或櫻黃素與磺化劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，所用芒柄花素或櫻黃素與磺化劑的摩爾比為1∶1～1∶10，用調(diào)溫裝置使反應(yīng)液的溫度為20～100℃，反應(yīng)5分鐘～10小時(shí)，得芒柄花素-3′-磺酸或櫻黃素-3′-磺酸與未反應(yīng)物的混合物；(2)將(1)反應(yīng)后的混合物冷卻至室溫，倒入總體積為反應(yīng)混合物1～5倍量10～20％的氯化鈉溶液，充分?jǐn)嚢瑁o置生成沉淀，用常規(guī)分離方法，將權(quán)利要求1中式(1)或式(2)的化合物分離出來，得到粗品，再加入粗品量的1～5倍量10～20％氯化鈉溶液使其純化，得到權(quán)利要求1中式(1)或式(2)的化合物純品。 式(3)R1＝R2＝H R3＝CH3式(1)R1＝R2＝H R3＝CH3式(4)R1＝CH3R2＝OH R3＝H式(2)R1＝CH3R2＝OH R3＝H
3.按照權(quán)利要求2所述的權(quán)利要求1中式(1)或式(2)化合物的制備方法，其中式(3)或式(4)分別與磺化劑的反應(yīng)溫度為40℃和50℃，化學(xué)反應(yīng)時(shí)間分別為2小時(shí)和2.5小時(shí)。
4.按照權(quán)利要求2所述的權(quán)利要求1中式(1)或式(2)化合物的制備方法，其特征在于所說的溶劑為70～98％硫酸；所說的磺化劑為濃硫酸或氯磺酸或發(fā)煙硫酸或三氧化硫。
5.一種治療高脂血癥和脂肪肝癥的藥物組合物，其中有治療有效量的權(quán)利要求1中式(1)或式(2)化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
6.權(quán)利要求1中式(1)或式(2)化合物在制備治療高脂血癥和脂肪肝癥的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于雜環(huán)化合物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到雜環(huán)不氫化的含六節(jié)環(huán)，有一個(gè)氧原子作為僅有環(huán)雜原子，與苯環(huán)稠合有芳環(huán)僅連在位置2的雜環(huán)化合物。本發(fā)明提供了新化合物芒柄花素－3′－磺酸鈉和櫻黃素－3′－磺酸鈉及其一種制備方法，其工藝包括在溶劑中加入反應(yīng)物芒柄花素或櫻黃素，再加入磺化劑，反應(yīng)物與磺化劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，得到本發(fā)明化合物與未反應(yīng)物的混合物，用常規(guī)分離方法并使其純化，得到本發(fā)明的化合物純品。還提供了一種治療高脂血癥和脂肪肝癥的藥物和組合物，其中有治療有效量的芒柄花素－3′－磺酸鈉或櫻黃素－3′－磺酸鈉和藥學(xué)上可接受的載體；以及芒柄花素－3′－磺酸鈉和櫻黃素－3′－磺酸鈉在制備治療高脂血癥和脂肪肝癥的藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P3/06GK101020684SQ20071001732
公開日2007年8月22日 申請(qǐng)日期2007年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月31日
發(fā)明者張尊聽, 王春燕, 田振軍, 王秋亞, 劉輝, 鄭建斌, 索志榮 申請(qǐng)人:陜西師范大學(xué)