專利名稱：銀丹組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于心腦血管疾病的銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉的藥物組合物及包含該組合物的制劑，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)心腦血管疾病如冠心病、心絞痛等是人類死亡的主要原因之一。近年來，隨著我國逐漸步入老齡化社會，人民生活水平提高，生活節(jié)奏加快，飲食習慣向高熱、高脂化發(fā)展，人群中心臟病、腦卒中等心血管系統(tǒng)疾病已成為危害人類健康及生命的嚴重疾病之一。心腦血管疾病發(fā)病率和死亡率有逐年上升的趨勢，急性發(fā)作致死率極高，存活者經(jīng)常會留下不同程度的后遺癥。心腦缺血后影響能量代謝，繼發(fā)乳酸堆積、鈣超載、自由基損傷等多種變化。多靶點逆轉(zhuǎn)或改善這些變化，提高綜合療效是藥物治療的重要目標。
銀杏葉提取物(Extract of Ginkgo bilola leaves)為銀杏葉經(jīng)加工制成的提取物，銀杏葉為銀杏科植物銀杏(Ginkgo biloba L.)的干燥葉。銀杏葉入藥始于明代，近10余年來，銀杏葉制劑的醫(yī)用價值已引起國內(nèi)外的廣泛關(guān)注，并對其活性成分及臨床應(yīng)用進行了深入研究。銀杏葉提取物是一種作用廣泛、不良反應(yīng)較少的天然藥物，其有效成分主要為黃酮類和萜類，不僅具有擴張冠脈血管和腦血管、增加血流量、改善心腦功能的作用，還有增強記憶、降低血小板的功效。大量的研究成果表明，銀杏葉提取物具有拮抗血小板活化因子、清除氧自由基、降血脂、增強中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)和激素水平、改善血液流變學狀態(tài)、抗炎、抗過敏等作用。
銀杏葉提取物已有國家標準，見中國藥典2000年版2002年增補本第6頁，或中國藥典2005年版一部第281頁。標準規(guī)定，本品按干燥品計，含總黃酮醇苷，不得少于24.0％；含萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯(C15H18O8)、銀杏內(nèi)酯A(C20H24O9)、銀杏內(nèi)酯B(C20H24O10)和銀杏內(nèi)酯C(C20H24O11)的總量計，不得少于6.0％；本品含總銀杏酸不得過百萬分之十；制劑為銀杏葉片。國內(nèi)上市的還有舒血寧注射液，可以擴張血管、改善微循環(huán)，用于缺血性心腦血管疾病，冠心病、心絞痛，腦栓塞，腦血管痙攣等。
丹參酮IIA為丹參活血化瘀的有效成分，但是胃腸道吸收差，臨床起效慢，因此將其磺化成水溶性鹽——丹參酮IIA磺酸鈉(Sulfotanshinone Sodium)。丹參酮IIA磺酸鈉能增加冠脈流量，改善缺血區(qū)心肌的側(cè)枝循環(huán)及局部供血，改善缺氧心肌的代謝紊亂，提高心肌耐缺氧能力，抑制血小板聚集及抗血栓形成，縮小實驗動物缺血心肌梗死面積，在一定劑量下亦能增強心肌收縮力。丹參酮IIA磺酸鈉的制劑有丹參酮IIA磺酸鈉注射液，主要用于各種心血管疾病。丹參酮IIA磺酸鈉結(jié)構(gòu)如下所示 國內(nèi)已有丹參酮IIA用于制備預(yù)防和治療動脈粥樣硬化的藥物的專利(CN01130086)，以及丹參與銀杏葉合用治療心腦血管疾病的專利——一種治療心腦血管疾病的中藥制劑及其制備方法(CN200410022288)。但是，利用銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉的相互作用，配伍組方制備治療心腦血管疾病的藥物，還未見報道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，更好的治療心腦血管疾病，本發(fā)明提供了一種新的藥物組合物及其制備方法和用途。
本發(fā)明藥物組合物包括銀杏葉提取物、丹參酮IIA磺酸鈉。經(jīng)過發(fā)明人大量的篩選試驗，證明銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉的優(yōu)選重量配比為1∶0.08～8，例如可以是1∶0.08、1∶0.1、1∶0.16、1∶0.2、1∶0.3、1∶0.4、1∶0.5、1∶0.6、1∶0.7、1∶0.8、1∶0.9、1∶1、1∶1.5、1∶1.6、1∶2、1∶2.4、1∶2.5、1∶3、1∶3.2、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8，進一步優(yōu)選配比為1∶0.2～4，更進一步優(yōu)選為1∶0.4～2。
上述藥物組合物中，銀杏葉提取物中總黃酮醇苷的含量不低于24.0％、萜類內(nèi)酯的含量不低于6.0％，總銀杏酸的含量不超過百萬分之十；優(yōu)選為總黃酮醇苷的含量不低于24.0％、萜類內(nèi)酯的含量不低于6.0％，總銀杏酸的含量不超過百萬分之一。
本發(fā)明藥物組合物，藥物組分的重量配比是經(jīng)過發(fā)明人進行大量摸索總結(jié)得出的，各組分在上述重量配比范圍內(nèi)都具有較好療效。上述重量配比對于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例。
本發(fā)明還提供了上述藥物組合物在制備抗心腦血管疾病的藥物中的用途。藥理實驗表明，本發(fā)明藥物組合物可顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間，對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓死亡具有顯著保護作用，可顯著改善小鼠耳廓微循環(huán)，顯著改善麻醉開胸犬血流動力學，對大鼠腦缺血再灌注損傷具有顯著保護作用，顯著降低結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血范圍和心電、生化指標的異常改變。
本發(fā)明組合物可與藥學上可接受的輔料制成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型，優(yōu)選注射劑或口服制劑；可以腸胃外或口服給藥等方式施用于需要這種治療的患者。
用于腸胃外給藥時，可制成注射劑。注射劑系指藥物制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌制劑，注射劑可分為注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內(nèi)用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，可用于肌內(nèi)注射、靜脈注射、靜脈滴注等；其規(guī)格有1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供靜脈滴注用的大體積(一般不小于100ml)注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，可用適宜的注射用溶劑配制后注射，也可用靜脈輸液配制后靜脈滴注；無菌粉末用溶媒結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。
制成注射劑時，可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，可選用水性溶劑或非水性溶劑。最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9％氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配制注射劑時，可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑，如滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、填充劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調(diào)節(jié)劑包括醋酸-醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸-枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉-碳酸鈉等；常用的增溶劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充劑包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑為苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射劑常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。
用于口服時，可制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；也可制成口服液體制劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑，以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中的固體制劑，依據(jù)其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當方法制成的球狀或類球狀固體制劑，包括滴丸、糖丸、小丸等。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑，可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等?？诜芤簞┫抵杆幬锶芙庥谶m宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑?？诜鞈覄┫抵鸽y溶性固體藥物，分散在液體介質(zhì)中，制成供口服的混懸液體制劑，也包括干混懸劑或濃混懸液。糖漿劑系指含有藥物的濃蔗糖水溶液。
制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。常用填充劑包括淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、甘露醇等；常用粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；常用崩解劑包括干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；常用潤滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。
本發(fā)明藥物組合物中，銀杏葉提取物的優(yōu)選制備工藝如下優(yōu)選工藝一取銀杏葉粉碎，加入60％的丙酮水溶液，57～59℃劇烈攪拌30min，濾過，重復上述步驟，再提取一遍，合并濾液，濾液減壓濃縮至含固體物約30％～40％(此時丙酮的含量約5％)。加水稀釋至原體積的2倍，攪拌下冷卻至約12℃，保溫1小時，離心，棄去沉淀，上清液按30％加入硫酸銨，攪勻，使全溶，用丁酮-丙酮混合溶液(6∶4)萃取2次，每次為水溶液的0.5倍量，丁酮-丙酮混合溶液減壓濃縮至含固體物50％～70％，加入水使含固體物約10％，用1/2體積的水飽和正丁醇萃取3次，正丁醇液減壓濃縮至含固體物至少50％以上，然后加入適量水再繼續(xù)濃縮，在所得濃縮液中加入水及乙醇，使固體物含量達10％，醇濃度達30％，加入正己烷萃取3次，每次1/3量的，水相濃縮，并減壓干燥(60～80℃)，即得。通過上述工藝制備的銀杏葉提取物中總黃酮醇苷的含量不低于24.0％，萜類內(nèi)酯的含量不低于6.0％。
優(yōu)選工藝二取銀杏葉，粉碎，先用12倍量60％乙醇溶液加熱回流二次，每次3小時，濾過，合并乙醇提取液，濃縮成稠膏，用熱水溶解成每1ml相當于0.5g原藥材的溶液，靜置冷卻，濾過，濾液上大孔樹脂(DA201)柱，分別用18％、30％、及50％濃度的乙醇洗脫，18％、30％乙醇脫液濃縮至無醇味，上聚酰胺柱，以95％乙醇洗脫，將大孔樹脂的50％乙醇洗脫液與聚酰胺柱的洗脫液合并，濃縮至無乙醇味，以環(huán)己烷萃取，棄去環(huán)己烷萃取液，濃縮液噴霧干燥，即得。通過上述工藝制備的銀杏葉提取物中總黃酮醇苷的含量不低于24.0％，萜類內(nèi)酯的含量不低于6.0％。
上述藥物組合物中，銀杏葉提取物還可以通過上述工藝制備，但不應(yīng)將此理解為上述藥物組合物中銀杏葉提取物僅限于上述制備工藝。
綜上所述，本發(fā)明藥物組合物具有下列優(yōu)點(1)提供了一種新的用于制備抗心腦血管疾病藥物的藥物組合物，滿足了臨床需要。
(2)對本發(fā)明藥物組合物中藥物組份的用量進行了大量摸索研究，通過銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉不同配比對大鼠實驗性頸動脈血栓形成的影響，篩選出具有顯著療效的重量配比范圍。
(3)藥理藥效研究表明，本發(fā)明藥物組合物可顯著延長大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間，對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓死亡具有顯著保護作用，可顯著改善小鼠耳廓微循環(huán)，顯著改善麻醉開胸犬血流動力學，對大鼠腦缺血再灌注損傷具有顯著保護作用，顯著降低結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血范圍和心電、生化指標的異常改變。在抗心腦血管疾病方面有顯著效果，是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所意想不到的。
(4)本發(fā)明藥物組合物中，銀杏葉提取物中有效成分含量確切，丹參酮IIA磺酸鈉結(jié)構(gòu)明確、療效確切，以銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉直接投料，制備工藝簡便，避免了由于原藥材質(zhì)量差異造成的制劑質(zhì)量差異較大的缺點，制劑質(zhì)量有很大的提高，雜質(zhì)含量大大減少，安全性更高。
(5)對本發(fā)明藥物組合物的原料或制劑，進行了鑒別、含量測定、穩(wěn)定性研究等，有效成分明確、含量高，制劑穩(wěn)定性好，便于控制產(chǎn)品質(zhì)量，可以保證臨床用藥安全。
(6)提供了優(yōu)選的銀杏葉提取物制備工藝，簡便易行，且質(zhì)量較好，適應(yīng)于工業(yè)化大生產(chǎn)。
以下通過實驗例來進一步闡述本發(fā)明的藥物組合物的有益效果，這些實驗例包括本發(fā)明的新藥物組合物的藥效學實驗、穩(wěn)定性實驗。本發(fā)明的藥物組合物具有下列有益效果，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明的藥物組合物僅具有下列有益效果。
實驗例1～4中所用銀杏葉提取物均為市購精制所得，實驗例5～7所用銀杏葉提取物均為實施例1制備所得。以下實驗例中用YD代替本發(fā)明藥物組合物。
實驗例1本發(fā)明藥物組合物對大鼠實驗性頸動脈血栓形成的影響受試動物 雄性大鼠，140只，體重240～280g，隨機分為14組，每組10只。
供試品 銀杏葉提取物含銀杏葉黃酮醇苷24.6％、萜類內(nèi)酯6.2％；丹參酮IIA磺酸鈉阿爾貝拉醫(yī)藥控股(通化)有限公司；銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉各配比注射液自制，制備方法見實施例2；注射用銀杏葉提取物50mg，含銀杏葉黃酮甙12mg、萜類3mg，德國威瑪舒培博士藥廠；
丹參酮IIA磺酸鈉注射液2ml∶10mg，上海第一生化藥業(yè)有限公司；氯化鈉注射液100ml∶0.9g，山東華信制藥有限公司。
給藥劑量 見表1。
實驗方法 大鼠用2.5％戊巴比妥鈉(25mg/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，分離右側(cè)頸總動脈，采用電流損傷頸動脈內(nèi)膜法，用BT87-3實驗性體內(nèi)血栓形成儀測定不同組別動物頸動脈血栓形成時間。將刺激電極和溫度探頭掛于頸總動脈上，按表1所示腹腔注射給藥，給藥后10min開始刺激，刺激強度為2mA，刺激5min后關(guān)閉刺激開關(guān)，取下電極，3min后調(diào)節(jié)溫控表至零位，觀察動脈溫度突降時間。記錄電刺激開始至主動脈溫度突降的時間，該時間定為頸動脈血栓形成時間(超過3000秒者以3000秒計)。
表1本發(fā)明藥物組合物對大鼠實驗性頸動脈血栓形成時間的影響(n＝10，平均值±標準偏差)
實驗結(jié)果及結(jié)論實驗結(jié)果見表1。結(jié)果表明，銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉重量配比為1∶0.08～1∶8時，均對大鼠實驗性血栓形成有顯著保護作用，且均高于注射用銀杏葉提取物或丹參酮IIA磺酸鈉注射液單獨用藥的效果，與空白對照組相比較p值均小于0.001，提示兩藥有協(xié)同增效作用。根據(jù)各組的血栓形成時間，銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉重量配比為1∶0.2～4時，效果更好；重量配比為1∶0.4～2.4時，效果最好。
實驗例2本發(fā)明藥物組合物對小鼠體內(nèi)血栓形成的影響受試動物 雄性小鼠120只，體重20～25g，隨機分為6組，每組20只。
供試品 注射用YD190mg，含銀杏葉提取物50mg、丹參酮IIA磺酸鈉40mg；注射用YD2120mg，含銀杏葉提取物100mg、丹參酮IIA磺酸鈉20mg；
注射用YD3125mg，含銀杏葉提取物25mg、丹參酮IIA磺酸鈉100mg；注射用銀杏葉提取物50mg，含銀杏葉黃酮甙12mg、萜類3mg，德國威瑪舒培博士藥廠；丹參酮IIA磺酸鈉注射液2ml∶10mg，上海第一生化藥業(yè)有限公司；氯化鈉注射液100ml∶0.9g，山東華信制藥有限公司。
給藥劑量 見表2。
實驗方法 灌胃給藥1小時后，尾靜脈注射膠原蛋白-腎上腺素混合血栓誘導劑每只0.1mg。注射后20min內(nèi)記錄小鼠偏癱恢復數(shù)，并計算各給藥組對小鼠腦血栓形成的保護率(死亡保護率＝對照組死亡數(shù)-給藥組死亡數(shù)/對照組死亡數(shù))。
表2本發(fā)明藥物組合物對小鼠體內(nèi)血栓形成的影響(n＝20)
實驗結(jié)果及結(jié)論實驗結(jié)果見表2。結(jié)果表明，注射用YD1、注射用YD2、注射用YD3、注射用銀杏葉提取物、丹參酮IIA磺酸鈉注射液均對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓死亡有保護作用。根據(jù)死亡保護率，銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉的配比為1∶0.8、1∶0.2、1∶4時，對膠原蛋白-腎上腺素誘導小鼠腦血栓死亡的保護作用，均高于注射用銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉注射液，藥效顯著，提示兩藥有協(xié)同增效作用。
實驗例3本發(fā)明藥物組合物對小鼠耳廓微循環(huán)的影響受試動物 雄性小鼠，60只，體重25～28g，隨機分為6組，每組10只。
供試品 YD注射液15ml∶90mg，含銀杏葉提取物50mg、丹參酮IIA磺酸鈉40mg；YD注射液25ml∶115mg，含銀杏葉提取物75mg、丹參酮IIA磺酸鈉40mg；YD注射液35ml∶135mg，含銀杏葉提取物75mg、丹參酮IIA磺酸鈉60mg；注射用銀杏葉提取物50mg，含銀杏葉黃酮甙12mg、萜類3mg，德國威瑪舒培博士藥廠；丹參酮IIA磺酸鈉注射液2ml∶10mg，上海第一生化藥業(yè)有限公司；氯化鈉注射液100ml∶0.9g，山東華信制藥有限公司。
給藥劑量 見表3。
實驗方法 小鼠灌胃給藥后，用烏拉坦1g/kg腹腔注射麻醉。麻醉后的小鼠置于鋪有棉花的托板上，保持室溫20±2℃。將小鼠右耳置于耳托架上，在右耳上滴少許液體石蠟，將托板置于顯微鏡載物臺上，調(diào)節(jié)冷光源，使照明光線與耳廓平面成45°～60°夾角，并與毛的生長方向相平行。先在低倍鏡下觀察耳廓全貌，選擇適當部位，換用高倍鏡進行定點連續(xù)觀察。觀察給藥后20min的微循環(huán)狀態(tài)，測量微動脈、微靜脈的直徑和血流速度。
表3銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉合并用藥對小鼠耳廓微循環(huán)的影響(平均值±標準偏差，n＝10)
*p＜0.05；**p＜0.01，與對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表3。結(jié)果表明，YD注射液、注射用銀杏葉提取物、丹參酮IIA磺酸鈉注射液均使小鼠耳微動脈、微靜脈管徑增大，血流速度加快。尤其是YD注射液給藥組，耳微動脈、微靜脈管徑明顯增大(p＜0.01)，血流速度顯著加快(p＜0.01)。并且YD注射液對小鼠耳廓微循環(huán)的作用均優(yōu)于注射用銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉注射液的作用，提示兩藥有協(xié)同增效作用。
實驗例4本發(fā)明藥物組合物對麻醉開胸犬血流動力學的影響受試動物 雜種犬，25只，體重11.0～13.0kg，隨機分為5組，每組5只。
供試品 YD注射液15ml∶90mg，含銀杏葉提取物50mg、丹參酮IIA磺酸鈉40mg；注射用YD190mg，含銀杏葉提取物50mg、丹參酮IIA磺酸鈉40mg；注射用銀杏葉提取物50mg，含銀杏葉黃酮甙12mg、萜類3mg，德國威瑪舒培博士藥廠；丹參酮IIA磺酸鈉注射液2ml∶10mg，上海第一生化藥業(yè)有限公司氯化鈉注射液100ml∶0.9g，山東華信制藥有限公司。
給藥劑量 5mg/kg實驗方法 犬用戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈注射麻醉后，采取右側(cè)臥位正壓人工呼吸下，于左4～5脅間開胸，于距迷走神經(jīng)2cm處打開心包，壁層做懸床將其縫合于胸壁，使心臟充分暴露。分離主動脈，在主動脈根部套入電磁流量計探頭(10～12mm)，測量心輸出量(CO)；在冠狀動脈左前降支根部，分離心外膜，分離出約1cm冠狀動脈，套入電磁流量計探頭(2～3mm)，測量冠脈流量(CBF)；將此二探頭連于LMTC-621型電磁流量計上，分離一側(cè)頸動脈，插管，連接壓力換能器，記錄動脈血壓(AP)及平均動脈壓(MAP)；將內(nèi)徑為1.5mm的心導管從心尖插入左心室，通過YZ-1型壓力換能器經(jīng)載波放大左室內(nèi)壓(LVP)，LVP電訊號經(jīng)直流放大器放大10倍，記錄左室舒張末期壓(LVEDP)，以LVP電訊號再經(jīng)BMI型微分器微分記錄左室內(nèi)壓變化速率(dp/dtmax)，用針型電極插入受試動物四肢皮下，記錄標II導聯(lián)心電圖(EGG-II)，以測量心率(HR)。上述指標變化均同步記錄于RM-6300生理多導儀。
分離股動脈抽動脈血，經(jīng)頸外動脈插管至冠狀靜脈竇抽取靜脈血，根據(jù)CY-2測氧儀使用說明書，用新鮮配制的無氧溶液(0.01M硼砂溶液加入無水亞硫酸鈉結(jié)晶配制成2％的亞硫酸鈉溶液)調(diào)零，用與空氣平衡溫度恒定的蒸餾水作靈敏度調(diào)節(jié)。待儀器穩(wěn)定后用測氧儀測定血氧含量。實驗結(jié)束后計算心肌耗氧量。
手術(shù)結(jié)束后，觀察上述各項指標，穩(wěn)定后將記錄值作為給藥前的指標，靜脈給藥后于1、3、5、10、20、30min，采集上述各項指標，并以給藥后各時間點的各項指標變化率(％)，與對照組各對應(yīng)時間點的各項指標變化率(％)做組間顯著性成對資料的t-test處理。
實驗結(jié)果及結(jié)論 YD注射液1、注射用YD1、注射用銀杏葉提取物、丹參酮IIA磺酸鈉注射液對受試犬心率(HR)，平均動脈壓(MBP)、左室內(nèi)壓(LVP)及心室肌收縮力(dp/dtmax)、心肌耗氧量均有降低作用。尤其是YD注射液1和注射用YD1組，降低幅度均明顯大于注射用銀杏葉提取物組和丹參酮IIA磺酸鈉注射液組，心肌耗氧量于給藥后2分鐘左右開始降低，最大值分別為25.1％和25.3％，作用時間達35分鐘以上，與對照組比較有非常顯著的療效(p＜0.01)。提示，銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉合并用藥具有協(xié)同增效作用。
實驗例5本發(fā)明藥物組合物對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用受試動物 大鼠，140只，雌雄兼用，體重200～220g，隨機分為假手術(shù)組、缺血再灌注組、YD注射液4組、YD注射液5組、YD注射液6組、銀杏葉提取物注射液、丹參酮IIA磺酸鈉注射液組，每組20只。
供試品 YD注射液45ml∶75mg，含銀杏葉提取物25mg、丹參酮IIA磺酸鈉50mg；YD注射液55ml∶70mg，含銀杏葉提取物50mg、丹參酮IIA磺酸鈉20mg；YD注射液65ml∶72mg，含銀杏葉提取物40mg、丹參酮IIA磺酸鈉32mg；銀杏葉提取物注射液自制，2ml∶50mg，制備方法參見實施例2；丹參酮IIA磺酸鈉注射液自制，2ml∶10mg，制備方法參見實施例2；
氯化鈉注射液100ml∶0.9g，山東華信制藥有限公司。
給藥劑量 見表4。
實驗方法 大鼠用10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，頸正中切口，分離、結(jié)扎右側(cè)頸總動脈近心端、頸外動脈及其分支動脈。分離右側(cè)頸內(nèi)動脈，沿頸內(nèi)動脈向下分離翼顎動脈，根部結(jié)扎該分支。在頸內(nèi)動脈近端備線、遠端放置動脈夾，頸總動脈分叉處切口，插入尼龍線(深度為17～20mm)，拴線進入頸內(nèi)動脈，入顱至大腦前動脈，阻斷大腦中動脈所有血流來源。撤掉動脈夾，扎緊備線，外留1cm長線頭，縫合皮膚。缺血1h后灌胃給藥或氯化鈉注射液，繼續(xù)缺血1h后再灌注，勿需再次麻醉和切開皮膚，輕輕提拉所留線頭至有阻力時提示尼龍線頭端已至頸總動脈切口處，血流再通。假手術(shù)組除不插線外，其余步驟同上。存活鼠再灌注24h后，觀察大鼠行為變化，進行行為評分。參考zea Longa的5分制評分標準0分，正常，無神經(jīng)損傷癥狀；1分，不能完全伸展對側(cè)前爪；2分，向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分，向?qū)?cè)傾倒；4分，不能自發(fā)行走，意識喪失。然后快速斷頭取鼠大腦。一部分(每組10只)分別稱左右腦半球濕重，置160℃烤箱內(nèi)24h后稱干重，按以下公式計算腦組織含水量腦組織含水量(％)＝(濕重-干重)/濕重×100％；一部分(每組10只)在前連合平面切下厚約2mm冠狀腦片，立刻置于2％TIE溶液中，37℃孵育30min。梗塞區(qū)呈現(xiàn)白色，非梗塞區(qū)呈現(xiàn)紅色。用求積儀(C63圖像分析系統(tǒng))測出各區(qū)面積，并計算梗塞區(qū)占全腦的百分比(％)。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表4。
(1)對行為的影響假手術(shù)組大鼠均無異常癥狀，神經(jīng)行為學評分為0。氯化鈉注射液對照組出現(xiàn)不能完全伸展對側(cè)前爪或向外側(cè)轉(zhuǎn)圈或向?qū)?cè)傾倒的神經(jīng)損傷癥狀，行為評分為1.7±0.8。與氯化鈉注射液對照組相比較，YD注射液4、YD注射液5、YD注射液6組均可極顯著降低神經(jīng)行為學評分，分別為0.7±0.5、0.6±0.4、0.5±0.4(p＜0.01)；銀杏葉提取物注射液組可顯著降低神經(jīng)行為學評分，為0.8±0.5(p＜0.05)；丹參酮IIA磺酸鈉注射液組可降低神經(jīng)行為學評分，為0.9±0.6(p＜0.05)。
(2)對腦組織含水量的影響氯化鈉注射液對照組缺血再灌注側(cè)(大腦右半球)的腦組織含水量極顯著高于假手術(shù)組(p＜0.01)，說明造模成功。與氯化鈉注射液對照組相比較，YD注射液4、YD注射液5、YD注射液6組的腦組織含水量均極顯著降低(p＜0.01)，銀杏葉提取物注射液組和丹參酮IIA磺酸鈉注射液組的腦組織含水量均顯著降低(p＜0.05)。
(3)對梗死面積的影響假手術(shù)組腦組織無梗塞。氯化鈉注射液對照組缺血側(cè)腦組織有梗塞現(xiàn)象，梗塞體積占全腦的37.33％。與氯化鈉注射液對照組相比較，YD注射液4、YD注射液5、YD注射液6均可極顯著縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積(p＜0.01)，銀杏葉提取物注射液和丹參酮IIA磺酸鈉注射液均可顯著縮小缺血側(cè)腦組織梗塞體積(p＜0.05)。
表4本發(fā)明藥物組合物對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護作用(平均值±標準偏差，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，與氯化鈉注射液對照組相比較；◆◆p＜0.01，與假手術(shù)組相比較。
上述實驗結(jié)果表明，銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉合并用藥可顯著改善局灶性腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)損傷癥狀，降低缺血再灌注損傷腦組織含水量，減輕缺血側(cè)腦半球水腫程度縮小腦梗塞體積。銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉為1∶2、1∶0.4、1∶0.8時，各治療組的效果均優(yōu)于銀杏葉提取物注射液或丹參酮IIA磺酸鈉注射液單獨用藥的效果，提示銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉合并用藥具有協(xié)同增效作用。
實驗例6本發(fā)明藥物組合物對結(jié)扎大鼠血小板凝集作用的影響受試動物 大鼠，140只，體重200～220g，雌雄兼用，隨機分為14組，每組10只。
供試品 銀杏葉提取物自制，見實施例1；丹參酮IIA磺酸鈉阿爾貝拉醫(yī)藥控股(通化)有限公司；銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉不同配比的溶液自制(配比見表5)；生理鹽水自制。
給藥劑量見表5。
實驗方法 各組動物按表5灌胃給藥，每日1次，連續(xù)給藥7天，末次給藥1小時后，以30％戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射麻醉，自腹主動脈取血，用3.28％枸櫞酸鈉抗凝(與全血以1∶9混合)。將抗凝全血在20℃條件下1500rpm離心5min獲得富血小板血漿(PPR)。留取定量PPR后，將剩余PPR再次以3000rpm離心10min，獲得自身對照貧血小板血漿(PPP)。以PPP調(diào)節(jié)PPR濃度，使各PPR濃度相同。將PPR在37℃的恒溫孔中預(yù)熱后，加入二磷酸腺苷(ADP，終濃度為3μmol·L-1)誘導血小板聚集，記錄最大聚集率，并計算血小板凝集抑制率＝(對照組凝集率-藥物組凝集率)/對照組凝集率×100％。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表5。與氯化鈉注射液對照組相比較，銀杏葉提取物、丹參酮IIA磺酸鈉均顯著抑制血小板凝集(p＜0.05)；銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉重量配比為1∶0.08、1∶0.1、1∶6、1∶8時，均顯著抑制血小板凝集(p＜0.05)；銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉重量配比為1∶0.2、1∶0.4、1∶0.6、1∶0.8、1∶1、1∶2、1∶4時，均極顯著抑制血小板凝集(p＜0.01)，尤其以1∶0.4、1∶0.6、1∶0.8、1∶1、1∶2時效果最好。銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉各配比的效果均優(yōu)于銀杏葉提取物或丹參酮IIA磺酸鈉單獨給藥的效果，提示銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉具有協(xié)同增效作用。
表5本發(fā)明藥物組合物對大鼠血小板凝集作用的影響
*p＜0.01，**p＜0.001，與氯化鈉注射液對照組相比較。
實驗例7本發(fā)明藥物組合物對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的影響受試動物 大鼠，60只，體重200～220g，雌雄兼用，隨機分為6組，每組10只。
供試品 YD顆粒80mg，含銀杏葉提取物40mg、丹參酮IIA磺酸鈉40mg(實施例11)；銀杏葉提取物自制，見實施例1；丹參酮IIA磺酸鈉阿爾貝拉醫(yī)藥控股(通化)有限公司；生理鹽水自制。
給藥劑量 見表6。
實驗方法 大鼠用烏拉坦1g/kg腹腔注射麻醉，背位固定，記錄心電，接人工呼吸機進行人工呼吸，打開胸腔，剪開心包，各組動物按表2灌胃給藥，3min后結(jié)扎左側(cè)冠狀動脈前降枝，全程記錄心電30min，結(jié)扎后1h取血，檢測磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)。取出大鼠心臟，沿結(jié)扎線將心室肌均勻橫切4片，0.5％氯化硝基四氮唑蘭染色，用求積儀測每片心肌兩面的缺血面積，計算心肌缺血面積占心室面積的百分比。
表6本發(fā)明藥物組合物對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的影響(平均值±標準偏差，n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01，與心肌缺血對照組相比較。
實驗結(jié)果及結(jié)論 實驗結(jié)果見表6。結(jié)扎后，心肌缺血對照組大鼠心電的QRS波均突然異常增高、加寬，心肌大范圍缺血，生化檢測表現(xiàn)為CK和LDH均異常增高，說明造模成功。與心肌缺血對照組相比較，各個劑量組的YD顆粒均能極顯著減小因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標的異常改變(p＜0.01)，極顯著減小心肌缺血范圍(p＜0.01)；銀杏葉提取物能極顯著減小因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標的異常改變(p＜0.01)，顯著減小心肌缺血范圍(p＜0.05)；丹參酮IIA磺酸鈉能極顯著減小因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標的異常改變(p＜0.01)，顯著減小心肌缺血范圍(p＜0.05)。各個劑量組的YD顆粒的效果均優(yōu)于銀杏葉提取物或丹參酮IIA磺酸鈉單獨給藥的效果，提示銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉具有協(xié)同增效作用。
實驗例8本發(fā)明藥物組合物穩(wěn)定性實驗供試品 YD注射液5ml∶90mg，含銀杏葉提取物50mg、丹參酮IIA磺酸鈉40mg考察項目性狀、pH值、澄明度、有關(guān)物質(zhì)、標示含量；并在加速實驗6個月和長期實驗期末增加無菌和熱原檢查。
1、影響因素實驗強光照射實驗 取供試品，置照度為4500Lx的光照箱內(nèi)放置10天。
高溫實驗 取供試品，分別置于40℃、60℃條件下放置10天。
低溫實驗 取供試品，在4℃冰箱中放置10天。
上述實驗，分別于第5、10天取樣測定。比較性狀后測試各項指標，并將結(jié)果與0天比較。
實驗結(jié)果 光照4500Lx、高溫60℃條件下放置10天，除有關(guān)物質(zhì)略有升高，標示含量略有下降外，其它各項指標均無明顯變化。高溫40℃、低溫4℃條件下放置10天，各項指標無明顯變化。
2、加速實驗實驗方法 置溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個月。在實驗期間分別于第1個月、2個月、3個月、6個月末取樣，比較外觀后，測試各項指標，將結(jié)果與0個月比較；并在6個月末增加無菌和熱原檢查。
實驗結(jié)果 溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個月，除有關(guān)物質(zhì)略有增加外，其它各項指標均無明顯變化，加速實驗6個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
3、長期實驗實驗方法 置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個月。分別于第3個月、6個月、9個月、12個月、18個月，比較外觀后，測試各項指標，將結(jié)果與0個月比較；并在18個月末增加無菌和熱原檢查。
實驗結(jié)果 溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個月，各項指標均無明顯變化，長期實驗18個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
結(jié)論 由上述考察結(jié)果得出結(jié)論，各項實驗中，YD注射液均比較穩(wěn)定。
具體實施方式
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實施例中各劑型的制備中的輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
實施例1銀杏葉提取物的制備及鑒別和含量測定銀杏葉提取物的制備取銀杏葉，粉碎，先用12倍量60％乙醇溶液加熱回流二次，每次3小時，濾過，合并乙醇提取液，濃縮成稠膏，用熱水溶解成每1ml相當于0.5g原藥材的溶液，靜置冷卻，濾過，濾液上大孔樹脂(DA201)柱，分別用18％、30％、及50％濃度的乙醇洗脫，18％、30％乙醇脫液濃縮至無醇味，上聚酰胺柱，以95％乙醇洗脫，將大孔樹脂的50％乙醇洗脫液與聚酰胺柱的洗脫液合并，濃縮至無乙醇味，以環(huán)己烷萃取，棄去環(huán)己烷萃取液，濃縮液噴霧干燥，即得。
按照上述方法分別制備三批銀杏葉提取物，得率見表7。
銀杏葉提取物的鑒別(1)取銀杏葉提取物0.2g，加正丁醇15ml，置水浴中溫浸15分鐘并時時振搖，放冷，濾過濾液蒸干，殘渣加乙醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取銀杏葉對照提取物0.2g，同法制成對照提取物溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各3μl，分別點于同一以含0.4％醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲醇-水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3％三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照提取物色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
(2)照薄層色譜法試驗，吸取萜類內(nèi)酯的含量測定項下的萜類內(nèi)酯供試品溶液和對照品溶液各15μl，分別點于同一以含0.4％醋酸鈉的羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇(10∶5∶5∶0.6)為展開劑，在15℃以下展開，取出，晾干，用醋酐蒸氣熏15分鐘，在140～160℃加熱30分鐘，放冷，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。
對上述制備的三批銀杏葉提取物進行鑒別實驗，均符合要求。
銀杏葉提取物的含量測定總黃銅醇苷的含量測定高效液相色譜法色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)為流動相；檢測波長為360nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2500。
對照品溶液的制備 分別精密稱取槲皮素對照品、山奈素對照品、異鼠李素對照品，加甲醇制成每1ml分別含30μg、30μg、20μg的混合溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 取銀杏葉提取物約35mg，精密稱定，加甲醇-25％鹽酸溶液(4∶1)的混合溶液25ml，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，分別計算槲皮素、山奈素和異鼠李素的含量，按下式換算成總黃銅醇苷的含量。
總黃銅醇苷＝(槲皮素含量+山奈素含量+異鼠李素含量)×2.51萜類內(nèi)酯的含量測定高效液相色譜法色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以正丙醇-四氫呋喃-水(1∶15∶84)為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測。理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計算應(yīng)不低于2500。
對照品溶液的制備 分別精密稱取白果內(nèi)酯對照品、銀杏內(nèi)酯A對照品、銀杏內(nèi)酯B對照品和銀杏內(nèi)酯C對照品適量，加甲醇制成每1ml各含2mg、1mg、1mg、1mg的混合溶液，作為對照品溶液。
供試品溶液的制備 取銀杏葉提取物約0.15g，精密稱定，加水10ml，置水浴中加熱使溶散，加2％鹽酸溶液2滴，用乙酸乙酯振搖提取4次(15ml，10ml，10ml，10ml)，合并提取液，用5％醋酸鈉溶液20ml洗滌。合并乙酸乙酯提取液及洗液，用水洗滌2次，每次20ml，分取水液，用乙酸乙酯10ml洗滌，合并乙酸乙酯液，回收溶劑至干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液5μl、10μl，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數(shù)方程分別計算白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的含量，即得。
對上述制備的三批銀杏葉提取物分別進行含量測定，測定結(jié)果見表7。
表7銀杏葉提取物的含量測定結(jié)果和得率
實施例2本發(fā)明藥物組合物注射液的制備1、處方處方1銀杏葉提取物 50g丹參酮IIA磺酸鈉 40g聚山梨酯80 50g注射用水 加至5000ml共制備 1000支處方2銀杏葉提取物 75g丹參酮IIA磺酸鈉 40g聚山梨酯80 75g注射用水 加至5000ml共制備 1000支處方3銀杏葉提取物 75g丹參酮IIA磺酸鈉 60g聚山梨酯80 75g注射用水 加至5000ml共制備 1000支處方4銀杏葉提取物25g丹參酮IIA磺酸鈉50g聚山梨酯80 60g注射用水加至5000ml共制備 1000支處方5銀杏葉提取物50g丹參酮IIA磺酸鈉20g聚山梨酯80 60g注射用水加至5000ml共制備 1000支處方6銀杏葉提取物40g丹參酮IIA磺酸鈉32g聚山梨酯80 60g注射用水加至5000ml共制備 1000支2、具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)將聚山梨酯80制成20％的水溶液，加入處方量的銀杏葉提取物，加熱攪拌溶解完全；丹參酮IIA磺酸鈉加入配液量40％的注射用水加熱溶解完全；補加注射用水至全量；(3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(4)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(7)將溶液熔封于玻璃安瓿中；(8)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘；(9)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍溶液中檢漏；(10)燈檢；(11)成品全檢，包裝入庫。
實施例3本發(fā)明藥物組合物粉針的制備1、處方
處方1銀杏葉提取物50g丹參酮IIA磺酸鈉40g聚山梨酯80 50g甘露醇 700g無菌注射用水加至3000ml共制備 1000支處方2銀杏葉提取物100g丹參酮IIA磺酸鈉20g聚山梨酯80 25g甘露醇 400g無菌注射用水加至4000ml共制備 1000支處方3銀杏葉提取物25g丹參酮IIA磺酸鈉100g聚山梨酯80 75g甘露醇 700g無菌注射用水加至4000ml共制備 1000支處方4銀杏葉提取物40g丹參酮IIA磺酸鈉40g聚山梨酯80 75g甘露醇 700g無菌注射用水加至4000ml共制備 1000支2、具體步驟(1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進行無菌處理；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將聚山梨酯80制成20％的水溶液，加入處方量的銀杏葉提取物，加熱攪拌溶解完全；丹參酮IIA磺酸鈉加入配液量40％的注射用水加熱溶解完全；再加入甘露醇加熱攪拌溶解完全，補加無菌注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(6)經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞；將樣品放入凍干機中冷凍干燥；-45℃預(yù)凍5小時，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時，然后升溫至25℃真空干燥3小時；(9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例4本發(fā)明藥物組合物氯化鈉注射液的制備1、處方處方1銀杏葉提取物75g丹參酮IIA磺酸鈉60g聚山梨酯80 75g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2銀杏葉提取物100g丹參酮IIA磺酸鈉60g聚山梨酯80 80g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3銀杏葉提取物125g丹參酮IIA磺酸鈉40g聚山梨酯80 125g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方4銀杏葉提取物50g丹參酮IIA磺酸鈉60g聚山梨酯80 100g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶2、具體步驟(1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)將聚山梨酯80配制成20％的水溶液，加入處方量的銀杏葉提取物，加熱攪拌溶解完全；丹參酮IIA磺酸鈉加入配液量40％的注射用水加熱溶解完全；將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全；合并各溶液，補加注射用水至全量；(3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；
(4)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(7)灌裝于100ml的輸液瓶中；(8)115℃熱壓滅菌30分鐘；(9)燈檢；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例5本發(fā)明藥物組合物葡萄糖注射液的制備1、處方處方1銀杏葉提取物100g丹參酮IIA磺酸鈉80g聚山梨酯80 100g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2銀杏葉提取物75g丹參酮IIA磺酸鈉80g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3銀杏葉提取物125g丹參酮IIA磺酸鈉60g聚山梨酯80 125g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方4銀杏葉提取物100g丹參酮IIA磺酸鈉40g聚山梨酯80 100g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶2、具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；
(2)將聚山梨酯80配制成20％的水溶液，加入處方量的銀杏葉提取物，加熱攪拌溶解完全；丹參酮IIA磺酸鈉加入配液量40％的注射用水加熱溶解完全；將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全；合并各溶液，補加注射用水至全量；(3)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(4)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；(5)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(6)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(7)灌裝于100ml的輸液瓶中；(8)115℃熱壓滅菌30分鐘；(9)燈檢；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例6本發(fā)明藥物組合物片的制備1、處方處方1銀杏葉提取物 50g丹參酮IIA磺酸鈉 40g淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片處方2銀杏葉提取物 75g丹參酮IIA磺酸鈉 40g淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片處方3銀杏葉提取物75g丹參酮IIA磺酸鈉20g淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片處方4銀杏葉提取物25g丹參酮IIA磺酸鈉50g淀粉110.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片2、具體步驟(1)將銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；(4)將銀杏葉提取物、丹參酮IIA磺酸鈉、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(5)過20目篩制顆粒；(6)顆粒在60℃的條件下烘干；(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻；(8)取樣，半成品化驗；(9)按照化驗確定的片重壓片；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例7本發(fā)明藥物組合物膠囊的制備1、處方
處方1銀杏葉提取物50g丹參酮IIA磺酸鈉40g淀粉60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂1.0g共制備 1000粒處方2銀杏葉提取物50g丹參酮IIA磺酸鈉100g淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g共制備 1000粒處方3銀杏葉提取物75g丹參酮IIA磺酸鈉40g淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g共制備 1000粒2、具體步驟(1)將銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；(4)將銀杏葉提取物、丹參酮IIA磺酸鈉、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(5)過20目篩制顆粒；(6)顆粒在60℃的條件下烘干；(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻；(8)取樣，半成品化驗；(9)按照化驗確定的裝量裝入膠囊；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例8本發(fā)明藥物組合物軟膠囊的制備
1、處方處方1銀杏葉提取物50g丹參酮IIA磺酸鈉40g大豆油 400g大豆磷脂20g蜂蠟12g共制備 1000粒處方2銀杏葉提取物25g丹參酮IIA磺酸鈉80g大豆油 400g大豆磷脂20g蜂蠟12g共制備 1000粒處方3銀杏葉提取物50g丹參酮IIA磺酸鈉20g大豆油 400g大豆磷脂20g蜂蠟12g共制備 1000粒2、具體步驟(1)處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷；(2)加入銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉，混勻，過膠體磨；(3)取樣，半成品化驗；(4)壓制成軟膠囊；(5)成品全檢，包裝入庫。
實施例9本發(fā)明藥物組合物滴丸的制備1、處方處方1銀杏葉提取物 50g丹參酮IIA磺酸鈉 40g聚乙二醇6000 600g處方2銀杏葉提取物 50g丹參酮IIA磺酸鈉 80g聚乙二醇6000 600g
處方3銀杏葉提取物25g丹參酮IIA磺酸鈉60g聚乙二醇6000600g2、具體步驟(1)聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融；(2)聚乙二醇6000全部熔融后加入銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉，攪拌溶解；(3)過60目篩過濾；(4)保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸；(5)成品全檢，包裝入庫。
實施例10本發(fā)明藥物組合物口服液的制備1、處方處方1銀杏葉提取物125g丹參酮IIA磺酸鈉100g聚山梨酯80 125g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支處方2銀杏葉提取物125g丹參酮IIA磺酸鈉80g聚山梨酯80 125g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支處方3銀杏葉提取物100g丹參酮IIA磺酸鈉100g聚山梨酯80 100g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支2、具體步驟(1)聚山梨酯80配制成20％的水溶液，將銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉加入加熱攪拌溶解完全；(2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全；(3)合并上述兩個溶液，補加水至全量；(4)過0.8μm的微孔濾膜過濾；(5)半成品化驗；(6)灌裝；成品全檢，包裝入庫。
實施例11本發(fā)明藥物組合物顆粒的制備1、處方處方1銀杏葉提取物 125g丹參酮IIA磺酸鈉 20g糖粉 1800.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方2銀杏葉提取物 75g丹參酮IIA磺酸鈉 100g糖粉 1800.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方3銀杏葉提取物 100g丹參酮IIA磺酸鈉 40g糖粉 1800.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方4銀杏葉提取物 40g丹參酮IIA磺酸鈉 40g糖粉 1900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方5銀杏葉提取物 40g丹參酮IIA磺酸鈉 80g糖粉 1900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方6銀杏葉提取物40g丹參酮IIA磺酸鈉120g糖粉1900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包2、具體步驟(1)將蔗糖粉碎過100目篩備用；將銀杏葉提取物和丹參酮IIA磺酸鈉粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將銀杏葉提取物、丹參酮IIA磺酸鈉與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(4)過20目篩制顆粒；(5)顆粒在60℃的條件下烘干；(6)干顆粒過18目篩整粒；(7)取樣，半成品化驗顆粒中主藥的含量，確定裝量；(8)包裝；成品全檢，包裝入庫。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，它包括銀杏葉提取物、丹參酮IIA磺酸鈉。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述的銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉的重量配比為1∶0.08～8。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述的銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉的重量配比為1∶0.2～4。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征在于，所述的銀杏葉提取物與丹參酮IIA磺酸鈉的重量配比為1∶0.4～2。
5.如權(quán)利要求1～4所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的銀杏葉提取物含總黃酮醇苷不低于24.0％、萜類內(nèi)酯不低于6.0％，含總銀杏酸不超過百萬分之十。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述的銀杏葉提取物含總黃酮醇苷不低于24.0％、萜類內(nèi)酯不低于6.0％，含總銀杏酸不超過百萬分之一。
7.如權(quán)利要求1～4所述的任一藥物組合物，在制備抗心腦血管疾病的藥物中的用途。
8.如權(quán)利要求1～4所述的任一藥物組合物，其特征在于，該組合物可與藥學上可接受的輔料制成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物可與藥學上可接受的輔料制成注射劑。
10.如權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物可與藥學上可接受的輔料制成口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種新的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用，包括銀杏葉提取物與丹參酮II
文檔編號A61P9/10GK1927235SQ20061012593
公開日2007年3月14日 申請日期2006年8月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月23日
發(fā)明者蔡軍 申請人:蔡軍