專利名稱：紅背葉根在制備治療慢性肝炎藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥單方紅背葉根的用途，尤其涉及紅背葉根在制藥中的用途。
背景技術(shù)：
紅背葉根為雙子葉植物藥大戟科植物紅背山麻桿Alchomea trewioides(Benth.)Muell.-Arg.的根。紅背葉別名紅背娘、紅帽頂(《廣西中草藥》)，紅羅裙(廣州空軍《常用中草藥手冊(cè)》)。紅背葉的形態(tài)特征為灌木或小喬本，嫩枝有毛。單葉互生，闊心形或卵圓形，長(zhǎng)6～15厘米，寬4～10匣米，先端長(zhǎng)漸尖。基部淺心形或近截平，基出脈3條，基部有紅色腺體和2條線狀附屬體，上面綠色，近無(wú)毛，下面淺綠而帶紅色。被柔毛，嫩葉紫紅色，邊緣有不規(guī)則的小鋸齒；葉柄長(zhǎng)達(dá)7厘米，越至上部越短，老時(shí)變?yōu)榧t紫色。雄花序腋生，總狀，長(zhǎng)7～10厘米，苞片披針形，腋內(nèi)有花4～8朵聚生，萼片2～3，雄蕊8；雌花序較短，頂生，花密集，萼片6～8，披針形，子房卵形，花柱3。蒴果球形，被灰白色毛，徑8～10毫米?；ㄆ?～6月，果期5-8月。
紅背葉生山坡、荒地的灌叢中。分布我國(guó)中部和東南、華南，通常以根、葉入藥。其味甘，性平。清熱解毒，祛風(fēng)除濕，散瘀止血，平喘，殺蟲止癢。傳統(tǒng)應(yīng)用于治腸炎腹瀉，痢疾，黃疸型肝炎，尿路感染和結(jié)石，腎炎，小便不利，血尿，血崩，白帶，濕疹，蕁麻疹，癰瘡腫毒，瘡瘍久不收口等癥。近代醫(yī)學(xué)研究表明，紅背葉根中含大量生物堿和酚性物質(zhì)，具有止咳、祛痰作用，抗乙酰膽堿作用和輕度抑制金黃色與白色葡萄球菌作用。
有報(bào)道的方例為黃疸型肝炎，該方例以紅背山麻桿鮮全株500克，水煎洗身；另用木各虎咪(一點(diǎn)紅)、山螺螄殼各15克，水煎服。但是，目前尚無(wú)用紅背葉根制備治療慢性肝炎藥物的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供紅背葉根的新用途，即在制藥中的應(yīng)用。
具體是，本發(fā)明提供紅背葉根在制備治療慢性肝炎的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述藥物是以紅背葉根為原料的水提取物與常規(guī)用量的醫(yī)學(xué)上可接受的輔料混合制成的臨床上可接受的固體口服制劑。
本發(fā)明所述的固體口服制劑具體是臨床上可接受的顆粒劑、膠囊劑或片劑，優(yōu)選顆粒劑。
本發(fā)明所述水提物可采用常規(guī)的水提方法或水提再進(jìn)一步醇沉除雜得到，其制備方法的具體步驟如下所述紅背葉根加8～12倍水，煎煮1.5～2小時(shí)，殘?jiān)偌?～8倍量水煎煮1～1.5小時(shí)，合并提取液后過(guò)濾，濃縮，濃縮液的體積與原藥材質(zhì)量比為1ml∶1g，加入乙醇至醇的體積含量為60-90％，靜置24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮，干燥至粉末狀即可，浸膏得率為6～12％。
上述方法得到的本發(fā)明紅背葉根的水提取物為棕褐色粉末。
本發(fā)明所述的固體口服制劑的制備方法即為藥典上所規(guī)定常規(guī)制備方法，即將紅背葉根的水提取物與固體口服制劑常用的輔料按臨床上可接受配比混合制得。
本發(fā)明所述的固體口服制劑具有抗肝炎病毒和阻止肝纖維化的作用，可在臨床上用以治療慢性肝炎和肝硬化，服用方法為口服，每日劑量的有效量相當(dāng)于原材料30～50克紅背葉根，每日服用2-3次。
以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的藥物作用原理和有益效果1.抗肝纖維化作用1.1動(dòng)物模型的制備、分組及藥物處理 普通級(jí)SD大鼠46只，雌雄各半，體重約230±17g，南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。從造模即日起隨機(jī)均分為5組正常對(duì)照組、CCL4模型組、本發(fā)明藥物的中劑量組(灌胃給藥，0.36g/kg)和低劑量組(灌胃給藥，0.18g/kg)、秋水仙堿組(灌胃給藥，0.9×10-5g/kg)。模型組及給藥組上午皮下注射40％四氯化碳花生油(頭次0.5ml/100g，后每隔三日皮下注射量為0.3ml/100g)，下午給藥組予相應(yīng)藥物水溶液或煎劑，模型組予生理鹽水灌胃(每日一次，每次1ml/100g)；正常組予等量的生理鹽水做對(duì)照。模型及給藥組予高脂飲食(79.5％玉米粉+20％豬油+0.5％膽固醇)，正常組予正常飲食，約六周。造模結(jié)束后處理，動(dòng)物禁食不禁水約12小時(shí)后，10％水合氯醛腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈采血，真空負(fù)壓采血管收集，取肝、脾稱重，肝左葉標(biāo)本常規(guī)固定包埋切片HE及Mallory三色染色，光鏡下觀察肝組織細(xì)胞的病理改變及肝臟纖維的增設(shè)程度。
指標(biāo)測(cè)定 (1)光鏡標(biāo)本石蠟包埋，常規(guī)切片，HE和Mallory三色染色，TGFβ1的免疫組化；(2)血清ALT、AST、ALB、GLB的檢測(cè)由南方醫(yī)科大學(xué)生化室用AU5400全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定；(3)血清HA、LN、III前膠原、IV型膠原的檢測(cè)由南方醫(yī)科大學(xué)核醫(yī)學(xué)科用放免法測(cè)定；(4)TGFβ1和TIMP-1的檢測(cè)采用ELISA法，按試劑說(shuō)明書操作測(cè)定。
統(tǒng)計(jì)方法 上述各項(xiàng)指標(biāo)均計(jì)算均數(shù)(x)與標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 11.5進(jìn)行方差分析。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.2動(dòng)物觀察 (1)脫毛現(xiàn)象約造模三周左右，模型及藥物組大鼠出現(xiàn)不同程度的脫毛現(xiàn)象(從頭頸部?jī)蓚?cè)開始，遍及全身)，程度以模型組最明顯，次之秋水仙堿組、本發(fā)明藥物組。(2)形態(tài)及皮毛狀況模型組大鼠皮毛枯槁、干澀，喜靜少動(dòng)，動(dòng)作遲緩；正常組大鼠皮毛濃密、光潔，體態(tài)自如；藥物組老鼠介于兩者之間。(3)體重及存活狀況造模結(jié)束后，模型組及藥物組大鼠體重均有不同程度的下降，以模型組最明顯，而正常組大鼠體重程增長(zhǎng)趨勢(shì)；模型組大鼠有2只死亡，余組存活情況良好。
1.2.1肝功 (血清中ALB、GLB、ALT、AST)的變化及比較 本發(fā)明藥物組可降低血清中的ALT和AST，而秋水仙堿對(duì)血清中的ALT和AST也呈一定程度的降低趨勢(shì)。各藥物組對(duì)血清中的白蛋白較模型組有增加趨勢(shì)，但對(duì)血清中球蛋白的影響不明顯(見表1)。
1.2.2肝纖維化指標(biāo)(血清中HA、LN、III前膠原、IV型膠原)的變化及比較 本發(fā)明藥物組可降低血清中的HA，而秋水仙堿對(duì)血清中的HA的降低趨勢(shì)不明顯。各藥物組對(duì)血清中III前膠原有抑制作用，但對(duì)血清中的LN、IV型膠原影響不明顯(見表1)。
1.2.3血清中TGFβ1和TIMP-1的變化及比較 本發(fā)明藥物組可明顯降低血清中的TGFβ1和TIMP-1，以中劑量組最為明顯(與正常對(duì)照組比較無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異)，秋水仙堿對(duì)血清中的TGFβ1和TIMP-1也呈一定程度的降低趨勢(shì)(見表1)。
1.2.4肝組織病理變化 光鏡下形態(tài)學(xué)變化HE染色標(biāo)本觀察，正常組沒有肝細(xì)胞變性、壞死；模型組見肝小葉內(nèi)有較廣泛的肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，伴明顯的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞再生明顯，有嚴(yán)重的脂質(zhì)空泡存在，部分肝小葉內(nèi)可見到橋接樣壞死，肝小葉破壞；藥物組肝小葉中有較少的點(diǎn)狀壞死和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。Mallory三色染色標(biāo)本觀察，正常組肝小葉間無(wú)纖維間隔；模型組肝小葉結(jié)構(gòu)被嚴(yán)重破壞，匯管區(qū)可見大量纖維組織增生，界板破壞較嚴(yán)重，分割包繞肝小葉，并伴有部分假小葉形成；藥物組內(nèi)纖維組織增生則不明顯，界板破壞少。
表1本發(fā)明藥物制劑對(duì)肝纖維化大鼠肝功、肝纖維化指標(biāo)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子及金屬蛋白酶組織抑制因子的影響(x±sd)

注*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001結(jié)果表明，對(duì)ccl4復(fù)合因素所致的肝纖維化模型中，對(duì)大鼠血清中的致肝纖維化的兩大重要因子(TGF-β1、TIMP-1)，肝纖維指標(biāo)(HA、III型前膠原)，肝功指標(biāo)(ALT、AST)都有顯著降低，有著保肝、降酶、抗肝纖維化的作用。
2.抗乙型肝炎病毒作用2.1體外試驗(yàn)將中藥紅背葉根提取物用全培液分別稀釋成1000mg/ml、500mg/ml、250mg/ml、125mg/ml、62.5mg/ml、31.25mg/ml、15.63mg/ml、7.82mg/ml、3.91mg/ml、1.96mg/ml、0.98mg/ml、0.49mg/ml)等20個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度，加于96孔細(xì)胞板，用MTT法測(cè)定細(xì)胞毒性。根據(jù)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將穩(wěn)定表達(dá)HBV-DNA及HBeAg、HBsAg的2.2.15細(xì)胞接種入24孔板，24小時(shí)細(xì)胞貼壁后，棄去上清液，分別加入含有六種不同濃度中藥紅背葉根(7.82mg/ml、3.91mg/ml、1.96mg/ml、0.98mg/ml、0.49mg/ml、0.25mg/ml)的細(xì)胞全培養(yǎng)液，陽(yáng)性對(duì)照藥物為干擾素(賽若金1001U、2001U、4001U)，于第4、8天留取培養(yǎng)液作為檢測(cè)標(biāo)本，同批次試劑同一時(shí)間定量檢測(cè)HBeAg(美國(guó)雅培試劑)、HBsAg(美國(guó)雅培試劑)。
第4天標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果表明5種不同濃度(7.82mg/ml、3.91mg/ml、1.96mg/ml、0.98mg/ml、0.49mg/ml)中藥紅背葉根與空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組相比，培養(yǎng)液中HBeAg含量有顯著性差異(P＝0.000)；第8天標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果表明6種不同濃度(7.82mg/ml、3.91mg/ml、1.96mg/ml、0.98mg/ml、0.49mg/ml、0.25mg/ml)中藥紅背葉根與空白對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組相比，培養(yǎng)液中HBeAg、HBsAg含量有顯著性差異(P＝0.000)。結(jié)果說(shuō)明中藥紅背葉根可抑制HBV蛋白中HBeAg、HBsAg的表達(dá)，有一定的抗乙肝病毒作用。
2.2體內(nèi)試驗(yàn)發(fā)明者觀察了紅背葉根抗鴨乙肝病毒的療效，采用經(jīng)PCR篩選D-HBV陽(yáng)性三日齡廣州麻鴨40只隨機(jī)分為空白對(duì)照(生理鹽水)、紅背葉根高(灌胃給藥，0.72g/kg)、中(灌胃給藥，0.36g/kg)、低劑量組(灌胃給藥，0.18g/kg)和拉米夫定組(灌胃給藥，0.3×10-5g/kg)，分別給予不同劑量紅背葉根和拉米夫定干預(yù)。在用藥前、用藥第7、14、21和停藥第7天取血實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)DHBV-DNA含量；治療前后取肝臟組織觀察病理改變情況。
結(jié)果見表2，拉米夫定組用藥后迅速降低血清病毒水平，但停藥后反跳。紅背葉根高、中劑量組血清病毒含量下降分別在第14、21天開始顯效(組內(nèi)p＜0.05，組間p＜0.01)，低劑量組治療期間未見抑制病毒的作用。停藥后紅背葉根高、中劑量組與空白對(duì)照組比較仍表現(xiàn)一定的病毒抑制作用(p＜0.05)。此外，紅背葉根高劑量組對(duì)肝臟炎癥改善較拉米夫定明顯。說(shuō)明紅背葉根有抑制體內(nèi)D-HBV復(fù)制的作用，作用與劑量和用藥時(shí)間相關(guān)。其作用較拉米夫定弱，但維持時(shí)間長(zhǎng)，服藥安全。
表2各組對(duì)DHBV-DNA的抑制作用(x±sd)

注與同組給藥前比較用配對(duì)t檢驗(yàn)，*p＜0.05，**p＜0.01；各時(shí)間段各組與空白對(duì)照組比較▲p＜0.05，▲▲p＜0.01。
3.臨床藥用效果慢性乙型肝炎病人48例，均符合2000年西安“全國(guó)傳染病寄生蟲病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的病毒性肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)”。其中男28例，女20例；年齡(43.3±19.3)歲；輕度慢性肝炎28例，中度肝炎20例?；颊呓o藥每日紅背葉根20克，水煎服。12周為1個(gè)療程，服1～2療程。
治療過(guò)程中觀察下列指標(biāo)①一般情況包括乏力、胃納、腹脹、肝脾腫大等。②治療前及后4、12、24周分別抽取靜脈血檢測(cè)生化指標(biāo)，包括谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷氨?；D(zhuǎn)肽酶(GGT)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、血清白蛋白(A)、血清球蛋白(G)、總膽紅素(TBILI)、透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、人III型前膠原(PIIIP)、IV型膠原(PIVP)、膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TRIG)。③治療前后B超。
治療4周后，所有患者癥狀均有一定的改善，乏力、納差、腹脹、肝區(qū)不適緩解率分別為84.8％(28/33)、82.4％(28/34)、88.0％(22/25)、79.7％(19/24)，尤其是緩解肝區(qū)不適較明顯，有肝、脾腫大的患者，經(jīng)治療24周后，治療組分別為25.0％(5/20)、26.3％(5/19)。
經(jīng)紅背葉根治療治療4周后，患者肝功能均有不同程度改善；治療12周后，治療組與對(duì)照組比較，AST和改善蛋白代謝方面較為明顯(P＜0.05)。48例患者經(jīng)治療24周后，肝纖維化有不同程度改善，其中LN、PIIIP下降幅度較大(P＜0.05～0.01)。
具體實(shí)施例方式
以下是本發(fā)明的一些具體實(shí)施例，用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不僅限于這些實(shí)施例。
一、水提物的制備例例1紅背葉根加8倍水提取，第1次提取2小時(shí)，第二次加8倍量水提取1.5小時(shí)，提取液合并后過(guò)濾，濃縮，干燥即得。
例2紅背葉根加10倍水提取，第1次提取1.5小時(shí)，第二次加6倍量水提取1.2小時(shí)，提取液合并后過(guò)濾，濃縮，干燥即得。
例3紅背葉根加12倍水提取，第1次提取1.5小時(shí)，第二次加5倍量水提取1小時(shí)，提取液合并后過(guò)濾，濃縮，干燥即得。
例4紅背葉根水提醇沉提取物的制備方法紅背葉根加8倍水提取，第1次提取2小時(shí)，第二次加8倍量水提取1.5小時(shí)，提取液合并后過(guò)濾，濃縮至1∶1，加入適量乙醇，使醇含量的范圍為60％，靜置24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮，干燥即得。
例5紅背葉根水提醇沉提取物的制備方法紅背葉根加10倍水提取，第1次提取1.5小時(shí)，第二次加6倍量水提取1.2小時(shí)，提取液合并后過(guò)濾，濃縮至1∶1，加入適量乙醇，使醇含量的范圍為75％，靜置24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮，干燥即得。
例6紅背葉根水提醇沉提取物的制備方法紅背葉根加12倍水提取，第1次提取1.5小時(shí)，第二次加5倍量水提取1小時(shí)，提取液合并后過(guò)濾，濃縮至1∶1，加入適量乙醇，使醇含量的范圍為90％，靜置24小時(shí)，過(guò)濾，濾液回收乙醇，濃縮，干燥即得。
二、藥物劑型制備例(所述的份均為重量份)例1(顆粒劑)顆粒劑1處方水提取物制備例2所得水提取物1份、蔗糖2.5份、糊精1.5份。
制法將提取物粉加入蔗糖與糊精，混勻，制成顆粒，干燥，分裝，即得。
性狀本品為黃褐色的顆粒；味微甜、苦。
用法與用量開水沖服，一次7.5g，一日2～3次。
顆粒劑2處方水提取物制備例5所得水提取物1份、蔗糖2.5份、糊精1.5份。
制法將提取物粉加入蔗糖與糊精，混勻，制成顆粒，干燥，分裝，即得。
性狀本品為黃褐色的顆粒；味微甜、苦。
用法與用量開水沖服，一次2.5g，一日2～3次。
例2(膠囊劑)處方水提取物制備例4所得水提取物1份、淀粉2份。
制法將提取物粉末加入淀粉，混勻，制成顆粒，干燥，裝入膠囊即得。
性狀本品為膠囊劑，內(nèi)容物為深棕色的顆?；蚍勰晃段⒖?。
用法與用量口服，一次3粒，一日2～3次。
例3(片劑)處方水提取物制備例6所得水提取物1份、淀粉2份、硬脂酸鎂適量。
制法將提取物粉末加入淀粉，混勻，制成顆粒，干燥，加入硬脂酸鎂，壓片即得。
性狀本品為深棕色片劑，味微苦。
用法與用量口服，一次3粒，一日2～3次。
權(quán)利要求
1.紅背葉根在制備治療慢性肝炎藥物中的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1所述的治療慢性肝炎的藥物，其特征是紅背葉根的水提取物與常規(guī)用量的醫(yī)學(xué)上可接受的輔料混合制成的臨床上可接受的固體口服制劑。
3.依據(jù)權(quán)利要求2所述的治療慢性肝炎的藥物，其特征是臨床上可接受的顆粒劑、膠囊劑或片劑。
4.依據(jù)權(quán)利要求2所述的治療慢性肝炎的藥物，其特征是臨床上可接受的顆粒劑。
全文摘要
本發(fā)明提供紅背葉根在制藥中的新用途，具體是提供紅背葉根在制備治療慢性肝炎的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的治療慢性肝炎的藥物，是紅背葉根的水提取物與常規(guī)用量的醫(yī)學(xué)上可接受的輔料混合制成的臨床上可接受的固體口服制劑。該固體口服制劑具有抗肝炎病毒和阻止肝纖維化的作用，可在臨床上用以治療慢性肝炎和肝硬化。
文檔編號(hào)A61K9/16GK1939383SQ20061012230
公開日2007年4月4日 申請(qǐng)日期2006年9月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月25日
發(fā)明者呂志平 申請(qǐng)人:南方醫(yī)科大學(xué)