專利名稱：一種治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的植物藥及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的植物藥，尤其涉及一種以茅莓根為藥藥材制備而成的治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的單味植物藥、其制備方法和該藥藥材和乙醇提取物的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
泌尿系統(tǒng)結(jié)石是一種危害人類健康的主要疾病之一，迄今為止，在整個非手術(shù)治療中中醫(yī)藥治療仍占主要地位。泌尿系統(tǒng)結(jié)石在國內(nèi)外的人群中，其發(fā)病率較高，一般在3-8％左右，我國南方有的地區(qū)最高達(dá)可達(dá)11-15％。目前還沒有非常理想的排石藥，許多患者應(yīng)用機(jī)器碎石后，其碎塊也不易排凈體外，碎石后仍需要服用排石藥物協(xié)助排石，現(xiàn)臨床上急需效果好、毒性低的排石藥。
目前國內(nèi)雖然有多種排石藥物，其中主要是顆粒劑，但多為大組方藥，即由多味或幾十幾味中藥組成，藥物成分復(fù)雜，這些藥物不僅存在療效不夠確切、久服有較多的毒副作用等缺陷，而且由于藥物成分比較復(fù)雜，其質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)也難以建立；而至今未見有較好的單味中藥或植物藥用于治療泌尿系結(jié)石的藥物上市的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明首先所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的療效確切的治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的單味植物藥。
本發(fā)明人經(jīng)過大量的試驗(yàn)最終發(fā)現(xiàn)，從茅莓，尤其是從茅莓根中用20-90％乙醇提取的活性成分具有利尿通石之功效，對于泌尿系統(tǒng)的結(jié)石等癥具有確切的療效。
茅莓(Rubus parvifolius L.)為薔薇科植物，別名天青地白草、三月泡。生于山坡、路旁、荒地和草叢中，全國各地都有分布。性平，味甘、酸。具有散瘀、止痛、解毒、殺蟲之功效，主要用于治療吐血、跌打損傷、產(chǎn)后腹痛、痢疾、痔瘡等癥，未有用于治療泌尿系結(jié)石的報道。動物試驗(yàn)表明，茅莓根20-90％乙醇提取物對大鼠乙二醇性腎結(jié)石有治療作用，對植入到大鼠膀胱內(nèi)的人泌尿系統(tǒng)結(jié)石具有排石和減解結(jié)石作用，還有利尿作用，并能增加兔輸尿管活動、擴(kuò)大管腔、緩解輸尿管的痙攣等作用，均利于結(jié)石的排出。
本發(fā)明所要解決的另一個技術(shù)問題是提供一種從茅莓中提取活性成分的方法。
本發(fā)明所要解決的另一個技術(shù)問題是通過以下技術(shù)途徑來實(shí)現(xiàn)的將茅莓(Rubus parvifolius L.)根用20-90％乙醇(優(yōu)選用65％乙醇提取)提取，制備成乙醇提取物浸膏或干燥粉。
優(yōu)選的，所述乙醇提取物浸膏或干燥粉的制備工藝如下(1)將茅莓根凈洗后加0.5-2倍體積20-90％酒精浸泡3-8小時；(2)加3-8倍體積20-90％酒精回餾提取3-6次，每次1-2小時；過濾，收集濾液，回收乙醇，濾液濃縮、干燥，即得浸膏粉或干燥粉；更優(yōu)選的，所述乙醇提取物浸膏或干燥粉的制備工藝如下(1)將茅莓根凈洗后加1倍體積20-90％酒精浸泡5小時；(2)加5倍體積20-90％乙醇回餾提取4次，每次1.5小時；過濾，收集濾液，回收乙醇，濾液濃縮至相對密度為1.2以上；噴霧干燥，即得浸膏或干燥粉。
最優(yōu)選的，所述乙醇提取物浸膏或干燥粉的制備工藝如下1)取茅莓根，粉碎成粗顆粒，加1倍體積20-90％酒精浸泡5小時，再加5倍量20-90％乙醇提取回餾(80℃)，每次1.5小時，第一次提取后，補(bǔ)充1.5倍20-90％乙醇再回餾，連續(xù)4次，收集所有的提取液；2)提取液粗濾后，用板框式壓濾機(jī)精濾(內(nèi)墊300目濾布)；3)精濾液濃縮至相對密度為1.2以上；噴霧干燥，即得浸膏干燥粉。
將上述方法制備得到的乙醇提取物浸膏或干燥粉加入制備不同劑型時所需的各種常規(guī)輔料或藥用載體，例如崩解劑、潤滑劑、黏合劑等，以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用的口服制劑，例如可以是顆粒劑、丸劑(含小丸劑)、片劑(含泡騰片)、膠囊劑、散劑或口服液等。
采用上述方法制備得到的20-90％乙醇提取物浸膏干燥粉為茅莓藥材重量的6.68％-13.26％；其中，采用65％乙醇提取獲得乙醇提取物浸膏干燥粉為茅莓藥材重量的10.25％％-13.26％。
本發(fā)明還進(jìn)行了茅莓根20-90％乙醇提取物和茅莓藥材質(zhì)量檢測方法和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的研究。
對茅莓根藥學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，茅莓根20-90％乙醇提取物中的總皂苷、黃酮苷、鞣質(zhì)含量較高，特別是65％左右乙醇的提取物中，上述三個部位群加在一起，達(dá)到50％以上。
本發(fā)明分別測定茅莓根藥材或20-90％乙醇提取物中的總皂苷、黃酮苷和鞣質(zhì)的總含量及其代表成分(如皂苷的代表成分為熊果酸或鉤子皂苷R1，黃酮苷的代表成分為槲皮素、鞣質(zhì)的代表成分為表兒茶素或沒食子酸)作為質(zhì)量控制指標(biāo)。
試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明20-90％乙醇提取物浸膏干燥粉中皂苷的總含量為10.15-15.50wt％，其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量為1.15-2.66wt‰或懸鉤子皂苷R1的含量為0.38-2.24wt％；所述的20-90％乙醇提取物浸膏干燥粉中黃酮苷的總含量為25.25-38.50wt％，黃酮苷的代表成分槲皮素的含量為0.25-0.55wt％；所述的20-90％乙醇提取物浸膏干燥粉中鞣質(zhì)的總含量為8.50-13.50wt％；鞣質(zhì)的代表成分表兒茶素的含量為1.60-2.95wt％或沒食子酸的含量為3.15-6.05wt％。
茅莓藥材中皂苷的總含量為0.80-1.5wt％、黃酮苷的總含量為2.35-4.50wt％、鞣質(zhì)的總含量為0.75-1.45wt％；其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量為0.10-0.25wt‰或懸鉤子皂苷R1的含量為為0.08-0.21wt％，黃酮苷的代表成分槲皮素的含量為0.025-0.042wt％，鞣質(zhì)的代表成分表兒茶素的含量為0.21-0.32wt％或沒食子酸的含量為0.26-0.55wt％。
本發(fā)明中的有關(guān)茅莓根乙醇提取物含量測定的方法及數(shù)據(jù)也可用于復(fù)方茅莓根制劑中有關(guān)茅莓根乙醇提取物部分的測定方法及質(zhì)量控制指標(biāo)。
以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅用于例證目的，絕不限制本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1本發(fā)明顆粒劑的制備取茅莓根10千克、加65％乙醇15000ml加溫回餾3-4小時，收集浸液，重復(fù)加65％乙醇回餾4次，浸液混合，回收乙醇，濃縮成浸膏，整粒，制成顆粒劑。每袋含生藥8克，病人每天服2次，每次2袋。
實(shí)施例2本發(fā)明口服液的制備取茅莓根10千克，加45％乙醇15000ml加溫回餾3-4小時，收集浸液，重復(fù)加45％乙醇浸泡4次，浸液混合，回收乙醇，浸液混合濃縮，按常規(guī)制成口服液，分瓶裝，每瓶100ml，含生藥15克，病人每天早晚各服100ml。
實(shí)施例3本發(fā)明膠囊劑的制備取茅莓根10千克，用清水沖洗2次，加70％乙醇15000ml加溫回餾3-4小時，收集浸液，重復(fù)加70％乙醇回餾3次。浸液混合，回收乙醇，濃縮成浸膏，制粒20目，裝膠囊，按常規(guī)制成膠囊劑。每粒膠囊0.4克，為生藥3克，病人每天2次，每次4-6粒。
實(shí)施例4本發(fā)明丸劑的制備取茅莓的根10千克，用清水沖洗2次，加20％乙醇15000ml，加溫回餾3小時，收集浸液，重復(fù)加20％乙醇浸泡4次。浸液混合，回收乙醇，濃縮成浸膏，20目整粒，按常規(guī)制成丸劑。每丸10克，含生藥8-10克，病人每天2次，每次2丸。小丸粒劑每丸1克，含生藥1.2克，病人每天服2次，每次10-15丸。
實(shí)施例5本發(fā)明片劑的制備取茅莓根10千克，用清水沖洗2次，加50％乙醇15000ml浸泡5小時，收集浸液，重復(fù)加50％乙醇浸泡4次。收集浸液，回收乙醇，濃縮成浸膏，整粒20目，制成片劑。每片0.4克為含生藥4克，病人每天服2次，每次4-6片。
實(shí)施例6本發(fā)明泡騰片的制備取茅莓根10千克、用清水沖洗2次，加30％乙醇15000ml浸泡5小時，收集浸液，重復(fù)加30％乙醇回餾3次。浸液混合，回收乙醇，濃縮成浸膏，加檸檬酸0.1千克，碳酸氫鈉0.1千克，混勻，整粒，制成泡騰片劑，每片0.6克為含生藥4克，病人每天服2次，每次4-6片。
試驗(yàn)例1茅莓根乙醇提取物質(zhì)量檢測方法和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的研究1、茅莓根乙醇提取物部位群的含量測定根據(jù)本發(fā)明人對茅莓根初步藥學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，茅莓根20-90％乙醇提取物中的總皂苷、黃酮苷、鞣質(zhì)含量較高，特別是65％左右乙醇的提取物中，上述三個部位群加在一起，達(dá)到50％以上。所以重點(diǎn)研究和測定提取物中皂苷、黃酮苷、鞣質(zhì)的總含量，以及三個部位群的代表物質(zhì)的含量測定。
2、茅莓根20-90％乙醇提取物總皂苷及代表物含量測定2.1總皂苷含量測定(紫外)在含量檢測中由于目前國內(nèi)尚無茅莓皂苷類成分的對照品，選用結(jié)構(gòu)與茅莓皂苷類成分相近的齊墩果酸作為對照品。黃酮、鞣質(zhì)、同樣選用經(jīng)典方法檢測含量。原理高氯酸-香草醛主要是使皂苷中羧基脫水，增加雙鍵結(jié)構(gòu)，再經(jīng)雙鍵位移，雙分子縮合等反應(yīng)生成共軛雙鍵系統(tǒng)，又在酸作用下形成陽碳離子鹽而顯色。其吸收度與含量在一定范圍內(nèi)成正比。
2.1.1對照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對照品12.0mg，用甲醇溶解，并定容于50ml量瓶中，搖勻，即得。
2.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對照品溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5ml分別置具塞試管中，揮干，加入新制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，于60℃水浴加熱15min，冰水浴冷卻2～3min，加醋酸乙酯5.0ml搖勻，隨行試劑做空白，照紫外-可見分光光度法(藥典附錄VA)，在560nm波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表1表1

2.1.3茅莓根乙醇提取物中總皂苷含量檢測精密稱取茅莓根乙醇提取物0.1g，加40ml蒸餾水，混勻，冰箱放置24h后，抽濾得，精密吸取10ml放置于分液漏斗中，用水飽和正丁醇萃取3次，每次10ml，合并萃取液，水浴揮干，甲醇定容至10ml量瓶中，備用。取供試品儲備液0.2ml置于具塞試管中，揮干，按上述方法檢測。
結(jié)果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的總皂苷含量在10.15-15.50％之間。
2.2熊果酸的含量測定2.2.1熊果酸配樣2.2.1.1對照品取熊果酸對照品10.1mg，置50ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度。濃度為0.202mg/ml。
2.2.1.2樣品取茅莓藥材10.0g，加70％乙醇溶液150ml，水浴回流3小時，放冷，過濾，轉(zhuǎn)移到250ml容量瓶中，加70％乙醇至刻度。取50ml上述溶液，加2ml濃鹽酸，加熱回流1小時，放冷，用氨水調(diào)PH＝4.0-5.0，轉(zhuǎn)移到蒸發(fā)皿中，蒸至溶液無醇味，用乙醚萃取3次，每次30ml，蒸干乙醚，用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移到10ml容量瓶中，加甲醇至刻度。即樣品的濃度為0.20g生藥/ml。
2.2.1.3色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，4.6mm×25cm，5μm；流動相甲醇∶水(85∶15)；流速1.0ml/min；檢測波長215nm；柱溫室溫；柱效理論板數(shù)按熊果酸峰計算應(yīng)不低于5000。
2.2.2熊果酸的含量測定2.2.2.1線性范圍熊果酸在0.05～0.6mg/ml范圍內(nèi)成線性。
2.2.2.2計算公式熊果酸含量(‰)＝A樣×C對(mg/ml)2.2.2.3試驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明茅莓根20-90％乙醇提取物熊果酸含量為1.15-2.66‰。
2.3懸鉤子皂苷R1的含量測定2.3.1色譜條件色譜柱Prontosil Eurobond C18(250mm4.0mm，5μm)；流動相乙腈-甲醇-0.4％醋酸銨溶液(209∶95∶96)；流速1.0ml/min；檢測波長210nm；溫柱室溫；進(jìn)樣量20μl。
2.3.2溶液的制備對照品溶液的制備 精密稱取懸鉤子皂苷R1(結(jié)構(gòu)式見下述)對照品適量，以甲醇溶解制成各對照品濃度為1.0mg/ml的混合對照溶液。
懸鉤子皂苷R1結(jié)構(gòu)式 注23為COOH；供試品溶液的制備 精密稱取茅莓總皂苷提取物適量，以甲醇溶解制成4.0mg/ml的溶液，微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。
2.3.3方法學(xué)考察2.3.4標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密吸取混合對照品溶液0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml置于2ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣20μl，按上述色譜條件，測定其峰面積值，并以進(jìn)樣量為X(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積值為Y(μV.S)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.3.5進(jìn)樣精密度試驗(yàn)精密吸取上述混合對照品溶液20μl，結(jié)果標(biāo)明茅莓根20-90％乙醇提取物懸鉤子皂苷R1為0.68-2.24％。
3、茅莓根20-90％乙醇提取物中總黃酮及代表物含量的測定3.1總黃酮含量測定原理黃酮類化合物分子結(jié)構(gòu)中凡在C3C5位有羥基或者能構(gòu)成鄰苯二羥基時，都能夠與鋁鹽形成有顏色的配位化合物，其吸收度與含量在一定范圍內(nèi)成正比。
3.1.1對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品50.0mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
3.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml分別置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1.0ml，混勻，放置6min，10％硝酸鋁溶液1.0ml，搖勻，放置6min，加氫氧化鈉試液10.0ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min，以隨行試劑做空白，照紫外-可見分光光度法(藥典附錄VA)，在500nm波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見表2表2

3.1.3樣品含量測定精密稱取茅莓根乙醇提取物1.0g，加乙醚脫脂至無色，將樣品涼干，加甲醇90ml加熱回流至提取液無色，轉(zhuǎn)移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取10ml置100ml量瓶中，加水定容至刻度，搖勻，即得。精密吸取供試品溶液3.0ml分別置25ml量瓶中，各加水3.0ml，加5％亞硝酸鈉溶液1.0ml，混勻，放置6min，按上述方法檢測總黃酮含量。
結(jié)果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的總黃酮含量在25.25-38.50％之間。
3.2槲皮素的含量測定照高效液相色譜法(藥典附錄VI D)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷機(jī)硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)為流動相；檢測波長為360nm。理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2500。
對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的槲皮素對照品適量，加甲醇制成每1ml含340μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取本品粉末約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取2小時，棄去溶劑，藥渣揮干，加甲醇提取4小時，提取液蒸干，殘加甲醇-25％鹽酸溶液(4∶1)混合液25ml，加熱回流30分鐘，放冷，轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，并加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
結(jié)果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的槲皮素含量在0.25-0.55％之間。
4、茅莓根20-90％乙醇提取物鞣質(zhì)及代表物的含量測定4.1鞣質(zhì)的含量測定原理用紫外檢測方法，利用鞣質(zhì)在堿性溶液中將磷鉬酸還原，產(chǎn)生深藍(lán)色，其吸收度與含量在一定范圍內(nèi)成正比。
4.1.1對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對照品約12mg，用水溶解，并定容于250ml棕色量瓶中，搖勻，即得。
4.1.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml分別置25ml棕色量瓶中，各加入磷鉬鎢酸試液1.0ml，再分別加水至13ml，用29％碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30min，搖勻，隨行試劑做空白，照紫外-可見分光光度法(附錄VA)，在760nm波長處測定吸收度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
結(jié)果見表3表3

4.1.3供試品溶液的制備精密稱取茅莓根乙醇提取物0.15g，置250ml棕色量瓶中，加水150ml，放置過夜，超聲處理10min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，靜置(使固型物沉淀)，濾過，棄去初濾液50ml，精密量取續(xù)濾液20ml，置100ml棕色量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。
4.1.4樣品含量測定總酚測定 精密量取供試品溶液2.0ml，置25ml棕色量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1.0ml”起，加水10ml，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量，計算，即得。
不被吸附的多酚測定 精密量取供試品溶液25ml，加入已經(jīng)盛有干酪素0.6g的100ml具塞錐型瓶中，密塞，在30℃水浴中保溫1h，時時振搖，取出，放涼，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2.0ml，置25ml棕色量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1.0ml”起，加水10ml，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量，計算，即得。
按下列式計算鞣質(zhì)的含量鞣質(zhì)含量＝總酚量-不被吸附的多酚量。
結(jié)果表明茅莓根20-90％乙醇提取物中的鞣質(zhì)含量為8.50-13.50％。
4.2表兒茶素的含量測定4.2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；體積比為110∶8∶2的0.04mol/L枸櫞酸溶液-N，N-二甲基甲酰胺-四氫呋喃為流動相；檢測波長為280nm；流速1.0ml/min；靈敏度0.02AUFS；柱溫35℃；理論板數(shù)按表兒茶素峰計算不低于4500；4.2.2對照品溶液的制備將甲醇與水按1∶1的體積比配成混合溶液，精密稱取表兒茶素對照品，以上述混合溶液為溶劑，將表兒茶素配制成1ml溶液含表兒茶素約10.5μg；4.2.3供試品溶液的制備取本品粉末約0.025g，精密稱定，置50ml量瓶中，加等體積的甲醇與水配成的混合溶液40ml，超聲處理25分鐘，并補(bǔ)加甲醇與水的混合溶液至50ml，搖勻，用0.45μm微孔濾)濾過，即得4.2.4測定結(jié)果分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀測定，測得表兒茶素的含量為1.60-2.95％。
4.3沒食子酸的含量測定4.3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷機(jī)硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-0.1％磷酸溶液(15∶85)為流動相；檢測波長為273nm。理論板數(shù)按沒食子酸峰計算應(yīng)不低于3000。
4.3.2對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對照品適量，加50％甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。
4.3.3供試品溶液的制備取本品粉末(過四號篩)約0.5g，精密稱定，精密加入4mol/l鹽酸溶液50ml，水浴中加熱水解3.5小時，放冷，濾過。精密量取續(xù)濾液1ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，搖勻，即得。
4.3.4測定結(jié)果分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定結(jié)果茅莓20-90％乙醇提取物中沒食子酸含量為3.15％-6.05％。
上面主要介紹茅莓根乙醇提取物中幾種主要部位群(總皂苷、黃酮苷、鞣質(zhì))和代表物質(zhì)的測定方法和含量，測定茅莓根藥材上述成分的測定方法與乙醇提取物的方法基本相同和相似。采用與測定茅莓根乙醇提取物幾種主要部位群(總皂苷、黃酮苷、鞣質(zhì))和代表物質(zhì)的相同的測定方法，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，茅莓根藥材皂苷的總含量為0.80-1.5％，黃酮苷的總含量為2.35-4.50％和鞣質(zhì)的總含量為0.75-1.45％；皂苷的代表成分熊果酸的含量為0.10-0.25‰，黃酮苷的代表成分槲皮素的含量為0.025-0.042％，鞣質(zhì)的代表成分表兒茶素的含量為0.21-0.32％或沒食子酸的含量為0.26％-0.55％。
說明有關(guān)茅莓根乙醇提取物含量測定的方法及數(shù)據(jù)也可用于復(fù)方茅莓根制劑中有關(guān)茅莓根乙醇提取物部分的測定方法及質(zhì)量控制指標(biāo)。
試驗(yàn)例2本發(fā)明藥物對大鼠乙二醇性腎結(jié)石的治療作用試驗(yàn)用含2％乙二醇加1％氯化銨的特殊飼料喂養(yǎng)大鼠4周，每組10只動物，然后用茅莓根乙醇提取物(本發(fā)明實(shí)施例所制備)治療，口服250mg/kg，一日一次，連續(xù)4周。結(jié)果顯示大鼠乙二醇性腎結(jié)石經(jīng)茅莓根乙醇提取物治療后，腎結(jié)石明顯降低。水煎和不同濃度乙醇的(20％，65％，90％)茅莓根提取物組對腎結(jié)石的治療，分別為40％，50％，70％和60％，比蒸餾水對照組(20％)明顯提高，表明茅莓根乙醇提取物對乙二醇性形成的腎結(jié)石有較好的效果，其中茅莓根65％乙醇提取物組治療效果最佳(70％)。陽性對照藥雙香排石顆粒尿石劑的效果為40％。
試驗(yàn)例3本發(fā)明藥物對大鼠膀胱內(nèi)植入人的尿路結(jié)石的治療作用本實(shí)驗(yàn)是將人尿路排出的草酸鈣結(jié)石植入到大鼠膀胱內(nèi)，每組10只。然后每天給茅莓根乙醇提取物治療，口服250mg/kg，一日一次，連續(xù)4周。四周后處死動物，取膀胱內(nèi)結(jié)石稱重，與植入前比較，目地是觀察藥物對結(jié)石的溶作用。結(jié)果表明蒸餾水對照組10只動物，有效率為10％，水煎和不同濃度乙醇的(20％，65％，90％)茅莓根提取物組對腎結(jié)石的治療，有效率分別為30％，50％，80％和60％，比蒸餾水對照組(10％)明顯較高。表明茅莓根乙醇提取物對大鼠膀胱內(nèi)植入人的尿路結(jié)石的治療作用有較好的效果，其中65％乙醇茅莓根提取物組治療效果最佳(80％)。陽性對照藥雙香排石顆粒尿石劑的效果為50％。
試驗(yàn)例4本發(fā)明藥物對大鼠具有明顯的利尿作用一般排石藥均具有利尿作用，便于結(jié)石排出。茅莓根在每組10只正常大鼠利尿試驗(yàn)中也可觀察到，水煎和不同濃度乙醇的(20％，65％，90％)茅莓根提取物組在給藥后(口服250mg/kg，)，8小時內(nèi)排尿量明顯高正常對熙組(比正常動物高1.3-2.5倍)，其中茅莓根65％乙醇提取物組利尿作用最為明顯。陽性對照藥雙香排石顆粒尿石劑對正常大鼠也有利尿作用(比正常動物高1.4倍)。
試驗(yàn)例5本發(fā)明藥物對麻醉家兔輸尿管電位活動及尿量的影響觀察麻醉家兔輸尿管電位活動試驗(yàn)，每組10只動物。水煎和不同濃度乙醇(20％，65％，90％)的茅莓根提取物組(250mg/kg)治療后1小時，輸尿管動作電位頻率開始增加，藥后2h達(dá)高峰，與生理鹽水對照組比較，均有一定的效果。特別是茅莓根65％乙醇的提取物組，藥前動作電位頻率為15，藥后1-2小時為20-22，差異性非常顯著(P＜0.01)，其電位幅度也較高。另外，實(shí)驗(yàn)注意到茅莓根乙醇提取物組還有擴(kuò)大管腔，緩解輸尿管的痙攣等作用。陽性藥雙香排石顆粒尿石劑，口服250mg/kg，也有明顯增加麻醉家兔輸尿管電位活動頻率的作用，但比茅莓根65％乙醇提取物組低。
試驗(yàn)例6本發(fā)明藥物治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的臨床療效觀察試驗(yàn)用茅莓根20-90％乙醇提取物制成泡顆粒劑、膠囊劑和片劑治療46例腎結(jié)石病人，其中顆粒劑16例、膠囊15例劑和片劑15例，現(xiàn)把初步結(jié)果小結(jié)如下。
1.一般資料1.1病例選擇46例中，有發(fā)作性腎絞痛史者41例，有血尿史者10例。無癥狀、體檢中發(fā)現(xiàn)腎結(jié)石者5例。46例均經(jīng)雙腎B超確診。
1.2性別及年齡男26例，女20例。20-30歲，13例，30-40歲，8例，40-50歲，7例，50-60歲，11例，60歲以上7例。
1.3腎結(jié)石情況(1)單側(cè)腎結(jié)石29例，左腎16例、右腎各13例，(2)雙側(cè)腎結(jié)石17例。(3)46例中，腎結(jié)石總數(shù)78塊，其中左腎36塊，右腎42塊。(4)結(jié)石直徑0.2-1.6cm。
2.治療方法茅莓根顆粒劑20克(含20-25克生藥)，一天2次，口服。連續(xù)2-4周為一個療程。
3.治療結(jié)果3.1療效標(biāo)準(zhǔn)按要求服藥2-4周，復(fù)查腎B超。
(1)治愈結(jié)石完全消失。(2)顯效結(jié)石縮小50％以上(含50％)。(3)有效結(jié)石有縮小30％以上。(4)無效結(jié)石大小、數(shù)量無變化。
3.2臨床結(jié)果46例臨床療效如下痊愈29例，占63.30％；顯效9例，占19.56％；有效6例，占13.04％；無效2例，占4.35％；總有效率為95.65％，治愈率為63.30％。
在服藥期間未發(fā)現(xiàn)無該藥有明顯副作用，是較為理想的治療泌尿系結(jié)石藥物，僅有少數(shù)病人在服藥時有胃腸不適感，但不影響治療。
典型病例1武XX，男性，22歲，因雙腰部疼痛而就診，經(jīng)雙腎B超確診為雙側(cè)腎結(jié)石，有0.2-0.8cm結(jié)石5塊。服用茅莓根泡顆粒劑治療一周，癥狀和體征消失，B超檢查陰性，確定為臨床痊愈。
典型病例2安XX，女，45歲，因雙腰部疼痛而就診，經(jīng)雙腎B超確診為雙側(cè)腎結(jié)石，有0.6-1.2cm結(jié)石3塊。服用茅莓根口服液，治療二周，癥狀和體征消失，B超檢查陰性，確定為臨床痊愈。
權(quán)利要求
1.茅莓(Rubus parvifolius L.)根在制備治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于將茅莓(Rubus parvifolius L.)根用20-90％乙醇提取，制備成乙醇提取物浸膏干燥粉；將提取物浸膏干燥粉用藥學(xué)常規(guī)方法制備成口服制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其特征在于將茅莓(Rubus parvifolius L.)根用65％乙醇提取，制備成提取物浸膏干燥粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其特征在于所述乙醇提取物浸膏干燥粉的制備工藝如下(1)將茅莓根凈洗后加0.5-2倍體積20-90％乙醇浸泡3-8小時；(2)加3-8倍體積20-90％酒精回餾提取3-6次，每次1-2小時；過濾，收集濾液；回收乙醇，濾液濃縮、干燥，即得浸膏或干燥粉。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于所述乙醇提取物浸膏干燥粉的制備工藝如下(1)將茅莓根凈洗后加1倍體積20-90％乙醇浸泡5小時；(2)加5倍體積20-90％酒精回餾提取4次，每次1.5小時；過濾，收集濾液；濾液濃縮至相對密度為1.2以上；噴霧干燥，即得浸膏或干燥粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其特征在于所述乙醇提取物浸膏干燥粉為茅莓藥材重量的6.68％-13.26％。
7.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其特征在于所述的口服制劑是顆粒劑、膠囊劑、片劑、丸劑或口服液；其中所述的片劑含泡騰片；所述的丸劑含小丸粒劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求2的應(yīng)用，其特征在于所述的乙醇提取物浸膏干燥粉中皂苷的總含量為10.15-15.50wt％，其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量為1.15-2.66wt‰、懸鉤子皂苷R1的含量為0.38-2.24wt％；所述的乙醇提取物浸膏干燥粉中黃酮苷的總含量為25.25-38.50wt％，黃酮苷的代表成分槲皮素的含量為0.25-0.55wt％；所述的乙醇提取物浸膏干燥粉中鞣質(zhì)的總含量為8.50-13.50wt％；鞣質(zhì)的代表成分表兒茶素的含量為1.60-2.95wt％、沒食子酸的含量為3.15-6.05wt％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的應(yīng)用，其特征在于所述的茅莓藥材中皂苷的總含量為0.80-1.5wt％、黃酮苷的總含量為2.35-4.50wt％、鞣質(zhì)的總含量為0.75-1.45wt％；其中，皂苷的代表成分熊果酸的含量為0.10-0.25wt‰、懸鉤子皂苷R1的含量為0.08-0.21wt％，黃酮苷的代表成分槲皮素的含量為0.025-0.042wt％，鞣質(zhì)的代表成分表兒茶素的含量為0.21-0.32wt％、沒食子酸的含量為0.26-0.55wt％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的單味植物藥茅莓(Rubus parvifolius L.)根，其制備方法以及20－90％乙醇提取物和茅莓根藥材的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明分別測定茅莓根藥材和20－90％乙醇提取物中的總皂苷、黃酮苷和鞣質(zhì)的總含量及其代表成分并將其作為質(zhì)量控制指標(biāo)，該指標(biāo)也可用于復(fù)方茅莓根乙醇提取物有關(guān)茅莓根部分含量的質(zhì)量控制指標(biāo)。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明藥物具有較好的排石和溶石作用。臨床療效觀察試驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明藥物對泌尿系統(tǒng)結(jié)石療效顯著，臨床應(yīng)用安全、無毒副作用。
文檔編號A61P13/00GK1895391SQ20061009864
公開日2007年1月17日 申請日期2006年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月12日
發(fā)明者黃家章, 黃萌, 趙良, 何曉娟, 黃聲德 申請人:北京亞科希藥物研究所