專利名稱：百合多糖醫(yī)藥新用途及其藥物制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種百合多糖醫(yī)藥新用途及其藥物制劑，用于免疫系統(tǒng)藥物技術領域。
背景技術：
百合自古以來即為一種療效顯著的中藥，它具有鎮(zhèn)啶、祛痰、抗病勞、耐缺氧、抗癌等多種功能；百合也為常用養(yǎng)陰潤肺中藥，亦藥亦食，是老年人適宜的滋補強壯和抗衰健身之品；值得注意的是，現代的藥理學研究提示，百合中的單一組成成分具有獨特的醫(yī)藥保健價值(黃泰康，常用中藥成分與藥理手冊，北京中國醫(yī)藥科技出版社，1994816)。
百合中富含多糖，經文獻檢索，與百合多糖生物活性與功能相關的文獻報道有苗明三，楊林莎，中藥藥理與臨床，2003，19(1)15-16；苗明三，中藥藥理與臨床，2001，17(2)21-13；劉成梅，付桂明等，食品科學，2002，23(6)，113-114；趙國華，李志孝，陳宗道，食品與生物技術，2002，21(1)62-66)。在這些文獻中，對百合多糖的生物活性進行了初步、某一動物實驗、非系統(tǒng)的研究，結果提示，百合多糖可顯著提高免疫低下小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬百分率和吞噬指數，促進溶血素及溶血空斑形成，促進淋巴細胞轉化；可明顯提高衰老小鼠血SOD、CAT及GSHP活性，降低血漿、肝勻漿及腦勻漿中LPO水平，具有滋補強壯及抗衰老作用；可通過促進小白鼠受損β-胰島細胞DNA和RNA的合成，促進胰腺中殘留的β-胰島細胞代償增生，及胰島外分泌部分的管上皮形成新的β-胰島細胞，增加血漿中的胰島素水平和降低腎上腺皮質激素分泌，以及促進肝臟中血糖轉化為糖元的聯合作用，從而使血糖降低；鼠移植性實體瘤研究表明，百合多糖對移植性黑色素B16和Lewis肺癌有較強的抑制作用。即初步提示了百合多糖具有免疫調節(jié)、抗衰老、降血糖和抗腫瘤的生物活性與功能。
但上述文獻的研究結果，由于僅是對百合多糖生物活性與功能的某一動物實驗結果和初步提示，均未有針對某一疾病的應用所開展百合多糖生物活性的系統(tǒng)研究和未形成一種醫(yī)藥產品，也沒有有關這方面的其他任何文獻包括專利文獻的報道。目前尚無提出百合多糖用于治療免疫功能低下疾病群醫(yī)藥新用途及其藥物制劑。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于針對上述現有百合多糖醫(yī)用技術的不足，明確提出百合多糖一種醫(yī)藥新用途及以百合多糖為原料的藥物制劑。
本發(fā)明的目的是通過如下方案實現的，它明確提出百合多糖一種醫(yī)藥新用途及以百合多糖為原料的藥物制劑，其特征是百合多糖在治療免疫功能低下疾病群藥物制備中的應用。
本發(fā)明提出的治療免疫功能低下疾病群藥物制劑，其特征在于含有治療有效量的百合多糖和一種或多種藥效學上允許的輔料或其它組方藥物。
所述的治療免疫功能低下疾病群藥物制劑，其特征在于百合多糖的有效量為20-60％，輔料或其它組方藥物含量為40-80％。
本發(fā)明所述治療免疫功能低下疾病群藥物制劑，其藥物形式是片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、注射劑、滴丸、氣霧劑。
本發(fā)明所述的治療免疫功能低下疾病群藥物片劑，其組成及重量百分比為6-30％的微晶纖維素、1-8％的羥甲基淀粉鈉、6-30％的乳糖、3-16％的淀粉、0.6-1.0％的硬脂酸鎂和3∶1(固體原料乙醇)的60％乙醇。
為此，本發(fā)明利用正常小鼠和荷瘤小鼠，對百合多糖的免疫增強作用進行了系統(tǒng)的試驗論證，采用的技術方案如下一.實驗方法1.小鼠脾淋巴細胞轉化實驗 昆明種小鼠24只，質量20g±，隨機平均分成4組，每組6只，雌雄各半，并進行灌胃，灌胃劑量如下第一組低濃度組，灌胃百合多糖100mg/kg/d，第二組中濃度組，灌胃200mg/kg/d，第三組高濃度組，灌胃300mg/kg/d，第四組空白對照組，灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃14天。斷頭法處死小鼠，取脾臟，通過200目鋼絲網，用Hanks液清洗后，用RPMI1640(10％胎牛血清及20μg/ml PHA)1ml制成脾淋巴細胞懸液(1×106/ml)，37℃，5％CO2培養(yǎng)48 h后，1500r/min離心5min，去上清，取細胞涂片，干燥，瑞氏染色，觀察計數200個淋巴細胞，根據轉化的形態(tài)學指標，計算出脾淋巴細胞的轉化百分率。
2.遲發(fā)型變態(tài)反應 昆明種小鼠12只，雌性，隨機平均分成2組，每組6只，于第0天每只小鼠以10％綿羊紅血球(SRBC)0.5ml腹腔注射致敏，實驗組腹腔注射百合多糖溶液0.1ml(濃度為10mg/ml)，對照組注射等量生理鹽水，連續(xù)注射6天后，在小鼠右足掌注射50μl 10％SRBC，左足掌注射等量生理鹽水，24h后測量左右足掌之體積。計算左右足掌體積差。
3.NK細胞活性測定BLAC/c小鼠24只，質量20g±，雌雄各半，隨機平均分成4組，并進行灌胃，分組和劑量同1，連續(xù)灌胃10天后，小鼠眼眶取血0.2ml，加入肝素抗凝血的PBS中，用Percoll分離其中的NK細胞，Hanks液洗滌兩次后用含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液調節(jié)細胞濃度至1×107/ml。將培養(yǎng)24 h的對數生長期的K562細胞，Hanks液洗滌后用含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液調節(jié)細胞濃度至1×105/ml。在96孔板中每孔加K562細胞100μl，再加入NK細胞100μl，自然釋放組以含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液代替NK細胞，最大釋放組為1％NP40代替NK細胞，每個標本設3個復孔，37℃，5％CO2培養(yǎng)4h后離心，取上清，用LDH試劑盒于570nm處測定LDH釋放率，按下式計算NK細胞自然殺傷率自然殺傷率(％)＝(樣品釋放平均D值-自然釋放平均D值)/(最大釋放平均D值-自然釋放平均D值)×100％4.抗體生成細胞的檢測 昆明種小鼠24只，質量20g±，分組和劑量同1，連續(xù)灌胃10天后，給小鼠腹腔注射5％SRBC 1ml免疫小鼠，將免疫4 d的小鼠斷頭法處死，取脾臟，通過200目鋼絲網，用Earles液清洗后制成細胞懸液(1×107/ml)，取懸液0.1ml加入10％SRBC0.05ml，置45℃水浴中混勻，再加RPMI 1640瓊脂糖液(1％瓊脂糖加熱熔化后，加入等量預熱的2倍RPMI1640液，搖勻)0.4ml，繼續(xù)在水浴中混勻，迅速倒于載玻片上，置于濕盒中，溫育后加入稀釋的豚鼠血清，繼續(xù)溫育2h，即可出現溶血空斑，計算每個小鼠脾臟的溶血空斑數。
5.腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗 昆明種小鼠24只，質量20g±，分組和劑量同1，連續(xù)灌胃10天后，放血處死小鼠，沿腹中線注入3ml冰中預冷的無菌10％FCS-PBS(含10U/ml肝素和10％胎牛血清的PBS)，輕輕按摩腹部5min，剪開腹壁，吸出滲出液，再用同樣容量的預冷10％FCS-PBS沖洗腹腔，合并滲出液，用預冷的RPMI1640培養(yǎng)液洗滌并懸浮細胞(106/ml)，即得巨噬細胞懸液；由雞翼下抽取靜脈血，加入5倍量的Alsever液，用PBS將紅細胞比容配成5％的濃度，制成雞紅細胞懸液，用巨噬細胞懸液1ml，加入0.04ml雞紅細胞懸液，1500r/min離心5min，棄上清。涂片，吉薩染色，計數，計算吞噬百分比。
6.碳廓清實驗 昆明種小鼠24只，質量20g±，分組和劑量同1，連續(xù)灌胃10天后，在小鼠尾靜脈注射印度墨汁0.1ml，立即計時。注入后2、10min分別從眼眶取血0.2ml，加入2ml Na2CO3，于570nm處測光密度值(D值)。以吞噬指數K為指標，按下式計算白細胞對碳粒的廓清作用K＝(logD1-logD2)/(t2-t1)；其中，D1和D2分別為2min時和10min時取血測得的D值，t1和t2分別為2min和10min。
7.百合多糖溶液對荷瘤小鼠免疫功能的影響 昆明種小鼠24只，質量30～35g，雄性，隨機平均分成4組，接種NCIH-460腫瘤細胞株24H后，分組給予不同劑量的百合多糖溶液或等體積的生理鹽水，分組和劑量同1，接種腫瘤后連續(xù)灌胃21天后，斷頭法處死小鼠，取脾臟，通過200目鋼絲網，加少量細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)2～4h后，種入96孔板，進行MTT法測脾臟淋巴細胞增殖能力，并在酶聯檢測儀上測定光密度值(D 490/D670)。
8.急性毒性試驗昆明種小鼠36只，質量20g±，隨機平均分成6組，每組6只，雌雄各半，并進行灌胃，灌胃劑量如下600、800、1000、1200、1400mg/kg/d，對照組灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃14天，比較各組動物體重變化并解剖內臟，觀察內臟有無異常。
9.統(tǒng)計學處理數據以x±s表示，組間比較采用t-test。
二.實驗結果1.百合多糖對正常小鼠免疫功能的影響①小鼠脾淋巴細胞轉化實驗結果百合多糖對正常小鼠脾淋巴細胞轉化率的影響(n＝6，x±s)

結果表明各組劑量的百合多糖能增加正常小鼠的脾淋巴細胞轉化率(P＜0.05)，且作用隨百合多糖濃度增高而增強。
②百合多糖對正常小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的影響遲發(fā)型變態(tài)反應實驗結果可見小鼠右足掌明顯比左足掌腫脹，左右足掌的體積差[(250.32±45.89)mm3]明顯比對照組的[(108.20±11.72)mm3]大，并且有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結果顯示百合多糖能顯著地增強正常小鼠的遲發(fā)型變態(tài)反應。
③NK細胞活性實驗結果百合多糖對正常小鼠NK細胞活性的影響(n＝6，x±s)

結果表明各組劑量的百合多糖能增強小鼠NK細胞活性(P＜0.05)，且隨百合多糖濃度增高而增強。
④抗體生成細胞的實驗結果
百合多糖對正常小鼠抗體形成細胞活性的影響(n＝6，x±s)

結果表明各組劑量的百合多糖能增強小鼠抗體形成細胞活性作用(P＜0.05)，且隨百合多糖濃度增高而增強。
⑤巨噬細胞吞噬實驗結果百合多糖對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬率的影響(n＝6，x±s)

結果表明各組劑量的百合多糖能增強小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞活性(P＜0.05)，且隨多糖濃度增高而增強。
⑥碳廓清實驗結果百合多糖對小鼠碳廓清率的影響(n＝6，x±s)

實驗結果顯示各組劑量的百合多糖能增強小鼠碳廓清作用(P＜0.05)，且隨百合多糖濃度增高而增強。
2.百合多糖對荷瘤小鼠免疫功能的影響
百合多糖對荷瘤小鼠脾臟細胞增殖的影響

實驗結果顯示各組劑量的百合多糖能非常顯著地增加荷瘤小鼠的脾臟細胞的活力(P＜0.05)，且隨多糖濃度增高而增強。
3.百合多糖急性毒性試驗百合多糖灌胃各組動物體重和生理鹽水對照組無差異，觀察內臟也無異常變化。
本發(fā)明應用現代生物技術從天然百合植物中提取的具有生物活性的百合多糖分子，通過上述系統(tǒng)的實驗研究，考察百合多糖對機體免疫功能的影響，結果表明該生物活性百合多糖能激發(fā)、修補、增強、調節(jié)人體的免疫功能，使人體增強對于疾病的防御能力，無毒副作用，且質量穩(wěn)定，從而達到防病、抗病的作用，可作為免疫功能低下疾病群治療藥物。
以下結合治療免疫功能低下疾病群藥物的百合多糖片劑的實施方式進一步說明本發(fā)明。
具體實施例方式
實施例一于容器中分別加入過120目篩的28.1％的微晶纖維素、6％的羥甲基淀粉鈉、26％的乳糖、15％的淀粉、0.8％的硬脂酸鎂，攪拌混均，然后加入過90目篩的22％百合多糖，攪拌混均。加入60％乙醇(固體原料∶乙醇＝3∶1，重量比)調配制粒，30目篩制軟材，40℃烘干，30目篩整粒。然后，用2％的乳糖、0.1％的硬脂酸鎂與上述顆粒充分混合均勻，按照標示量片重，異型沖壓成片。
由該處方制得的百合多糖片劑，成本較低，成人一日二次，一次2片，具有明顯的免疫增強作用，適用于免疫功能低下疾病癥狀較輕的患者長期服用或作為保健藥劑使用。
實施例二于容器中分別加入過120目篩的22.2％的微晶纖維素、5％的羥甲基淀粉鈉、16％的乳糖、8％的淀粉、0.7％的硬脂酸鎂，攪拌混均，然后加入過90目篩的46％百合多糖，攪拌混均。加入60％乙醇(固體原料∶乙醇＝3∶1，重量比)調配制粒，30目篩制軟材，40℃烘干，30目篩整粒。然后，外加2％的乳糖、0.1％的硬脂酸鎂與上述顆粒充分混合均勻，按照標示量片重， 異型沖壓成片。
由該處方制得的百合多糖片劑，成本適中，成人一日二次，一次2片，具有明顯的免疫增強作用，適用于免疫功能低下疾病癥狀較明顯的患者服用。
實施例三于容器中分別加入過120目篩的16％的微晶纖維素、3.2％的羥甲基淀粉鈉、13％的乳糖、5.2％的淀粉、0.5％的硬脂酸鎂，攪拌混均，然后加入過90目篩的60％百合多糖，攪拌混均。加入60％乙醇(固體原料∶乙醇＝3∶1，重量比)調配制粒，30目篩制軟材，40℃烘干，30目篩整粒。然后，外加2％的乳糖、0.1％的硬脂酸鎂與上述顆粒充分混合均勻，按照標示量片重，異型沖壓成片。
由該處方制得的百合多糖片劑，成本較高，成人一日二次，一次2片，免疫增強作用較明顯，適用于單次用藥量較大的免疫功能低下疾病群患者服用。
實施例四于容器中分別加入過120目篩的26％的微晶纖維素、5.2％的羥甲基淀粉鈉、20％的乳糖、10％的淀粉、0.7％的硬脂酸鎂，攪拌混均，然后加入過90目篩的36％百合多糖，攪拌混均。加入60％乙醇(固體原料∶乙醇＝3∶1，重量比)調配制粒，30目篩制軟材，40℃烘干，30目篩整粒。然后，外加2％的乳糖、0.1％的硬脂酸鎂與上述顆粒充分混合均勻，按照標示量片重，異型沖壓成片。
由該處方制得的百合多糖片劑，成本適中，免疫增強作用明顯，成人一目二次，一次2片，不同程度免疫功能低下疾病群的患者均適合服用，綜合考慮成本、藥效特性等各種因素，該處方為百合多糖片劑的最佳配比之一。
權利要求
1.百合多糖的一種醫(yī)藥新用途，其特征在于，百合多糖在治療免疫功能低下疾病群藥物制備中的應用。
2.一種治療免疫功能低下疾病群藥物制劑，其特征在于，含有治療有效量的百合多糖和藥效學上允許的輔料或其它組方藥物。
3.根據權利要求2所述百合多糖與藥物輔料或其它組方藥物，其特征在于，百合多糖的有效量為20-60％，輔料或其它組方藥物含量為40-80％。
4.根據權利要求2所述藥物制劑，其特征在于，藥物形式為片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、注射劑、滴丸和氣霧劑。
5.根據權利要求4所述的片劑，其特征在于，所包括的組成及重量百分比為20-60％百合多糖、6-30％的微晶纖維素、1-8％的羥甲基淀粉鈉、6-30％的乳糖、3-16％的淀粉、0.6-1.0％的硬脂酸鎂和3∶1(固體原料∶乙醇)的60％乙醇。
全文摘要
本發(fā)明提供了百合多糖的醫(yī)藥新用途及其藥物制劑，其特征是百合多糖在治療免疫功能低下疾病群藥物中的應用。一種治療免疫功能低下疾病群的百合多糖藥物制劑，其特征在于百合多糖的有效量為20－60％，輔料或其它組方藥物含量為40－80％；其藥物形式是片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、注射劑、滴丸、氣霧劑；其片劑組成及重量百分比為6－30％的微晶纖維素、1－8％的羥甲基淀粉鈉、6－30％的乳糖、3－16％的淀粉、0.6－1.0％的硬脂酸鎂和3∶1(固體原料乙醇)的60％乙醇。本發(fā)明提供的百合多糖片劑，具有增強機體免疫功能，主治免疫功能低下疾病具有明顯的療效，該藥物毒副作用小，質量穩(wěn)定。
文檔編號A61K9/48GK101088508SQ20061002766
公開日2007年12月19日 申請日期2006年6月13日 優(yōu)先權日2006年6月13日
發(fā)明者李慧麗, 萬錒俊 申請人:上海漢素信生化科技發(fā)展有限公司