專利名稱：一種多肽藥物的新劑型及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于材料科學(xué)與生物醫(yī)學(xué)的交叉領(lǐng)域，涉及一種多肽藥物的新劑型及其制備方法。
背景技術(shù)：
嚴(yán)重危害人類健康的艾滋病病原體HIV-1的錨定與侵入主要是膜融合的過程，是由外膜前體蛋白gp160的加工開始的，gp160經(jīng)前體加工酶(例如Furin酶)的加工后變?yōu)閮蓚€(gè)片段表面糖蛋白(surface glycoprotein，SU)gp120和跨膜蛋白(transmembrane protein，TM)gp41，其中g(shù)p120不含有穿膜區(qū)，它通過非共價(jià)鍵與gp41相結(jié)合，gp41與細(xì)胞受體結(jié)合后即導(dǎo)致HIV-1的感染，gp120主要與CD4細(xì)胞結(jié)合而造成感染，因而用多肽來抑制gp160的裂解、gp41的構(gòu)象變化和gp120與CD4蛋白結(jié)合，已成為科學(xué)家們研究的熱點(diǎn)。近年來治療艾滋病的多肽類藥物相繼問世，如T20、T1249等，由于此類藥物具有不同于其它藥物的特點(diǎn)如穩(wěn)定性差、體內(nèi)半衰期短、口服給藥易被胃腸道的蛋白水解酶降解、生物利用度低和不易通過生物膜等，其臨床應(yīng)用受到很大限制，而運(yùn)載多肽藥物的體系嚴(yán)重缺乏，迫切需要開發(fā)新的載藥體系以滿足需求。
納米載藥系統(tǒng)作為藥物、基因傳遞和控釋的載體，是一種新型的藥物輸送和控釋體系，主要包括納米粒子和納米微膠囊。其包封和釋藥的機(jī)理是通過將活性組成物(藥物、生物活性材料等)包裹作用于粒子內(nèi)部或者通過吸附作用附著于粒子表面，利用納米粒子的小尺寸特點(diǎn)，使藥物穿透組織間隙并被細(xì)胞吸收，進(jìn)而可通過人體最小的毛細(xì)血管，也可以通過生物膜屏障。同時(shí)，納米載藥系統(tǒng)具有許多獨(dú)特的優(yōu)越性能，如可緩釋藥物、實(shí)現(xiàn)靶向輸送等，并能提高藥物的穩(wěn)定性和生物利用度、減少毒副作用等。其中，具有納米尺寸層狀結(jié)構(gòu)的無機(jī)物是多肽和蛋白質(zhì)類藥物的優(yōu)良輸運(yùn)載體，有著獨(dú)特的優(yōu)勢。首先，其納米尺寸的片層間距可調(diào)，在一定的條件下，被載運(yùn)藥物分子較容易克服主體無機(jī)物各層之間弱的作用力可逆地插入層間空隙卻不破壞層狀結(jié)構(gòu)，形成插層復(fù)合物。其次，由于層狀無機(jī)物片層帶電，當(dāng)帶負(fù)電的多肽藥物分子被完整地包覆在主體片層中與帶正電的片層相鍵合時(shí)，形成的中性插層復(fù)合物使帶負(fù)電的細(xì)胞膜和帶負(fù)電的生物材料之間的靜電排斥作用最小化，加快了生物分子向細(xì)胞的傳遞。第三，層狀無機(jī)物價(jià)廉易得、表面易于修飾，可通過簡單的離子交換或共沉淀法直接把藥物分子嵌入其層間獲得結(jié)構(gòu)保持和活性保留的納米復(fù)合載藥體系，而且可以通過調(diào)節(jié)pH值來控制藥物的釋放速率，實(shí)現(xiàn)緩釋給藥。第四，可以通過控制層狀無機(jī)物的粒子尺寸來滿足不同給藥途徑的需求。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的在于將納米層狀無機(jī)物的特性用于多肽藥物，制備一種多肽藥物的新劑型，并提供這種新劑型的制備方法。
利用層狀無機(jī)物的插層化學(xué)性質(zhì)，通過插層復(fù)合方法把抗HIV-1抑制劑C22和M3類多肽藥物載入無機(jī)物層間形成納米復(fù)合體系，以改善藥物的活性、穩(wěn)定性和控釋性能，提高其生物利用度、減少毒副作用和實(shí)現(xiàn)控釋給藥，開發(fā)出穩(wěn)定性好、藥活性更高的HIV-1多肽治療藥物。
一方面，本發(fā)明提供了一種多肽藥物的新劑型，其特征是含有抗HIV-1的多肽類藥物和層狀無機(jī)物。
進(jìn)一步的，上述的多肽藥物主要包括抗HIV-1的C22和M3多肽等系列膜融合抑制劑(見中國專利200510023542.1和200510028550.5)，其特點(diǎn)是一種分子量小、活性高的抗HIV-1抑制劑，對Furin酶抑制活力的Ki值達(dá)到了10-9M，而Furin酶對HIV-1的gp160加工成gp120和gp41起到至關(guān)重要的作用。
上述的藥物組合物，還可以含有藥學(xué)上可接受的其他載體和添加劑，例如水、甘油、抗氧化劑等?？梢愿鶕?jù)需要制成各種劑型如溶液、片劑、膠囊等。藥物組合物的給藥方式可通過皮下，皮內(nèi)，靜脈注射等方式，也可以通過肌內(nèi)注射或者輸送到組織間隙來實(shí)現(xiàn)，也可以直接輸送到病灶區(qū)。
另一方面，本發(fā)明還提供了上述的多肽藥物新劑型的制備方法，其特征在于將多肽藥物和層狀無機(jī)物攪拌進(jìn)行復(fù)合，然后離心分離即可。
本發(fā)明對上述的合成產(chǎn)物進(jìn)行了如下表征X-射線粉末衍射在Rigaku D/max-rA X-射線粉末衍射儀上進(jìn)行，加速電壓和電流分別為30kv和10mA，Cu靶(λ＝0.154178nm)。TEM分析使用H-800透射電子顯微鏡，加速電壓200Kv，產(chǎn)物粉末樣品經(jīng)乙醇中超聲分散后制樣。使用JSM-6700F場發(fā)射掃描電子顯微鏡觀測粉末產(chǎn)物的SEM形貌，其樣品事先經(jīng)蒸鍍金膜5nm左右。
本發(fā)明還通過體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證多肽藥物/層狀無機(jī)物納米復(fù)合載藥體系的的藥物動(dòng)力學(xué)過程、藥物活性與穩(wěn)定性。進(jìn)一步地將C22和M3類多肽的氨基端接上具有綠色熒光標(biāo)記基團(tuán)的FITC，與層狀無機(jī)物進(jìn)行復(fù)合制成納米復(fù)合載藥體系，用流式細(xì)胞儀觀察納米復(fù)合載藥體系在細(xì)胞內(nèi)和動(dòng)物體內(nèi)的各種行為。
由上述內(nèi)容可見，本發(fā)明的有益效果在于(1)以層狀無機(jī)物為插層復(fù)合的前驅(qū)體，可以通過簡便的離子交換法制備多肽藥物/層狀無機(jī)物納米復(fù)合載藥體系，提高多肽藥物在體內(nèi)的穩(wěn)定性；(2)利用層狀無機(jī)物的納米片層結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，通過調(diào)節(jié)體系的pH值，控制多肽藥物的釋放速率，實(shí)現(xiàn)緩控釋藥物，提高藥物的生物利用度；(3)通過控制層狀無機(jī)物的粒子尺寸來滿足不同給藥途徑的需求，減少多肽藥物對胃腸粘膜的刺激。


圖1作為多肽藥物載體的層狀無機(jī)物的XRD譜2層狀無機(jī)物的TEM圖像具體實(shí)施方式
為了更詳細(xì)地說明本發(fā)明，給出了下述實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳述，以下的例子只是作為對本發(fā)明的說明，不用于限制本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1C22和M3的多肽的制備，具體制備方法參見中國專利200510023542.1和200510028550.5。首先利用多肽合成的方法，合成出所需要的Furin酶抑制劑片段，進(jìn)一步將合成粗產(chǎn)物還原，脫鹽后得到還原形態(tài)的產(chǎn)物并用HPLC進(jìn)行分離純化；之后將純化的還原形態(tài)的產(chǎn)物用2-PDS氧化3h后凍干，將氧化產(chǎn)物脫鹽后進(jìn)行HPLC純化分離，得到較純的氧化中間形態(tài)產(chǎn)物。最后將氧化中間形態(tài)的產(chǎn)物進(jìn)行碘氧化，脫去Cys的Acm保護(hù)從而使Cys正確配對，經(jīng)過脫鹽和HPLC的純化分離得到較純的抗HIV-1抑制劑。
實(shí)施例2采用離子交換法制備多肽/層狀無機(jī)物納米復(fù)合載藥體系。具體的步驟為在室溫下，取0.5mg/ml的C22或M3多肽溶液，用磷酸氫二鉀調(diào)節(jié)pH值為7.2左右，與2％的無機(jī)物的層離溶液在室溫下持續(xù)攪拌1小時(shí)，采用超速離心機(jī)進(jìn)行離心分離，制得C22或M3類多肽/層狀無機(jī)物納米復(fù)合物，并進(jìn)行冷凍干燥。
實(shí)施例3多肽藥物的體外釋放實(shí)驗(yàn)將包封有多肽藥物的多肽/層狀無機(jī)物納米粒子和空白多肽/層狀無機(jī)物納米粒子分別置于含6ml磷酸緩沖液(pH7.4PBS)試管中，置于轉(zhuǎn)速80轉(zhuǎn)/min的搖床中37℃恒溫處理。適當(dāng)間隙，4℃樣品經(jīng)20,000Xg離心30min，取出4ml上層清液，用新鮮PBS溶液補(bǔ)充，用考馬斯亮藍(lán)法計(jì)算釋放出的多肽的量，結(jié)果表明被包裹在載體中的藥物是穩(wěn)定的。
實(shí)施例4多肽藥物活性實(shí)驗(yàn)用RPMI 1640培液培養(yǎng)新鮮的外周血單核細(xì)胞(PBMC)。經(jīng)植物凝集素和IL-2活化3天后，用HIV感染PBMC1小時(shí)，PBS洗兩次除掉未感染的HIV，細(xì)胞重懸于RPMI 1640培液(含10ng/ml IL-2)中，以1×10-5個(gè)/孔加入含有不同濃度載體抑制劑的96孔板中。HIV感染5天后，用ELISA檢查HIV p24抗原的量，以空白培液組為對照。HIV的感染率為樣品孔和對照孔HIV p24抗原釋放量的比值。并與無載體時(shí)的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果表明本發(fā)明提供的藥物具備緩釋性能。
權(quán)利要求
1.一種多肽藥物的新劑型，其特征是含有抗HIV-1的多肽類藥物和層狀無機(jī)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽藥物的新劑型，其特征是所述的多肽藥物為抗HIV-1的C22和M3多肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多肽藥物的新劑型，其特征是所述的藥物組合物還可以含有藥學(xué)上可接受的其他載體和添加劑，如水、甘油、抗氧化劑。
4.權(quán)利要求1所述的多肽藥物新劑型的制備方法，其特征在于將多肽藥物和層狀無機(jī)物進(jìn)行復(fù)合，然后離心分離。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種多肽藥物的新劑型，其特征是含有抗HIV－1的多肽類藥物和層狀無機(jī)物，所述的多肽藥物主要包括抗HIV－1的C22和M3多肽等系列膜融合抑制劑。利用層狀無機(jī)物的插層化學(xué)性質(zhì)，通過插層復(fù)合方法把抗HIV－1抑制劑C22和M3類多肽藥物載入無機(jī)物層間形成納米復(fù)合體系，以改善藥物的活性、穩(wěn)定性和控釋性能，提高其生物利用度、減少毒副作用和實(shí)現(xiàn)控釋給藥，開發(fā)出穩(wěn)定性好、藥活性更高的HIV－1多肽治療藥物。
文檔編號A61P31/00GK101028508SQ200610024260
公開日2007年9月5日 申請日期2006年3月1日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月1日
發(fā)明者張蕤, 汪世龍, 孫曉宇, 王玫, 史鈞, 薛燕華, 何嬌娟 申請人:同濟(jì)大學(xué)