專利名稱：植入式膠原合成物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及適用于各種各樣的軟組織充填的膠原合成物。
背景技術(shù)：
膠原被廣泛使用于眾多醫(yī)療和化妝品應(yīng)用，包括軟組織充填。這些應(yīng)用中所使用的膠原為從自然源，如動(dòng)物，尤其是牛和豬，或人體組織中提取的內(nèi)源性膠原。牛膠原作為一種軟組織充填植入材料使用尤其廣泛。
植入和使用于各種各樣的組織充填的材料的一個(gè)關(guān)鍵特征就是持久性。膠原作為大多數(shù)組織充填產(chǎn)品的主要結(jié)構(gòu)填充材料在植入后易被宿主膠原酶降解，因此容易在相當(dāng)短的時(shí)間內(nèi)降解。由于降解或材料再吸收導(dǎo)致缺乏持久性可削弱或損害預(yù)期效果，這時(shí)可要求再處理。因此，需要或要求連續(xù)治療或長期療效的病人必須在第二或第三個(gè)月后注入時(shí)接受追加注射。(參見，例如，《皮膚美容科學(xué)原理與實(shí)踐》第155-172頁第19章“軟組織充填”(作者L.Baumann和E.Weisberg，出版商McGraw Hill，紐約2002)，該書討論了商業(yè)用皮膚充填產(chǎn)品的非永久性，列出了如ZYPLAST和ZYDERM等牛膠原皮膚充填劑(加利福尼亞州圣巴巴拉(Santa Barbara)Inamed Corp.)在2-4個(gè)月的持續(xù)時(shí)間。)如自愿整容，某過程所產(chǎn)生的不方便、費(fèi)用和不舒適可能會使準(zhǔn)病人在知道預(yù)期效果只是短期的之后喪失接受再治療的勇氣，或是選擇先前的治療方案。
為克服組織來源的膠原填充劑的持久性的缺乏/持續(xù)期短而做的各種各樣的改進(jìn)包括改變萃取的膠原的物理性能，例如膠原原料的化學(xué)交聯(lián)(使用化學(xué)藥劑增加附加交聯(lián))(參見，如，Narins et al.(2003)Dermatol.Surg.29588-595)、增大充填產(chǎn)品里膠原的濃度(參見，如，美國專利號為5,428,024)。但是，這些方案會削弱/降低膠原的可操縱性、可擠壓性和可滲透性。因此，增強(qiáng)膠原材料在各種各樣的醫(yī)療和化妝品應(yīng)用中的持久性成為了一項(xiàng)技術(shù)需要。在增強(qiáng)膠原材料的持久性的同時(shí)又不減少或削弱膠原的可操縱性、可擠壓性和可滲透性成為了另一個(gè)技術(shù)需要。
本發(fā)明通過提供改進(jìn)了持久性的植入式膠原合成物(如，比商業(yè)用膠原基組織充填產(chǎn)品的持久性強(qiáng)的膠原合成物)以滿足這些需要。同時(shí)，本發(fā)明提供有最小限度的可變性或無可變性的植入式膠原材料。此外，本發(fā)明還提供可操縱性、可擠壓性和可滲透性均有改進(jìn)的膠原合成物。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及各種各樣的包含膠原的植入式膠原合成物，該合成物在持久性、可操縱性、處理的方便性、均質(zhì)性和再現(xiàn)性上均有改進(jìn)。這些合成物適用于各種各樣的醫(yī)療和化妝品應(yīng)用，尤其適用于組織充填。本發(fā)明亦提供了生產(chǎn)和使用這些植入式合成物的方法。
在本發(fā)明中，植入式合成物是指對組織有助益，可支持、增大、增強(qiáng)組織的合成物。本發(fā)明所涵蓋之植入式合成物尤其指適合體內(nèi)注射和用作植入物或可植入設(shè)備的合成物。本發(fā)明中的植入式合成物包括可注射的合成物，如通過注射的合成物。本發(fā)明中的植入式合成物適用于表皮下、真皮下和真皮內(nèi)使用，也適用于軟組織充填和硬組織充填。
一方面，本發(fā)明提供包含膠原的植入式膠原合成物，其中膠原包括III型膠原。某方面，III型膠原指人類III型膠原。另一方面，III型膠原為合成III型膠原。另一方面，III型膠原實(shí)質(zhì)上無任何內(nèi)源性交聯(lián)。另一方面，III型膠原實(shí)質(zhì)上無任何分子內(nèi)和分子間交聯(lián)。在某些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋狀、碎片)。在其它方面，III型膠原包含SEQ DD NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋狀、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些方面方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋狀、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
在各方面，可植入式膠原合成物，其中膠原包括III型膠原，為可注射合成物，例如適合通過注射。在某些方面，這種注射是表皮下、真皮下和真皮內(nèi)使用。在某些方面，植入式合成物是從包含皮膚填充劑、骨間隙填充材料和植牙的群組中挑選而來。本發(fā)明還包含了植入式合成物適用于組織充填的方面，尤其是組織充填為軟組織充填時(shí)以及組織充填為硬組織充填時(shí)。
本發(fā)明明確提供了膠原合成物，其中膠原包含至少一定百分比的III型膠原。在一實(shí)施例中，本發(fā)明包含植入式膠原合成物，其中膠原包含至少60％的III型膠原。膠原包含至少70％的III型膠原以及膠原包含至少80％的III型膠原的特定實(shí)施例涵蓋于本發(fā)明，同樣，膠原包含至少90％、95％和98％的III型膠原的較佳實(shí)施例也涵蓋于本發(fā)明。各種各樣的實(shí)施例提供有包含一定百分比的III型膠原的植入式合成物，其III型膠原為人類III型膠原和合成III型膠原，實(shí)質(zhì)上無任何分子內(nèi)和分子間交聯(lián)，或?qū)嵸|(zhì)上無任何內(nèi)源性交聯(lián)。在某些實(shí)施例里，III型膠原包含SEQID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)。在其它實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。在各種各樣的實(shí)施例里，植入式合成物為可注射合成物，例如，可通過注射。另一方面，這種注射是表皮下、真皮下和真皮內(nèi)使用。
在某些實(shí)施例里，包含至少一定百分比的III型膠原的植入式合成物乃從包含皮膚填充劑、骨間隙填充材料和植牙的群組中挑選而來。在較佳實(shí)施例里，植入式合成物適用于組織充填。組織充填為軟組織充填和組織充填為硬組織充填的實(shí)施例明確涵蓋于本發(fā)明。
植入式膠原合成物，其中膠原實(shí)質(zhì)上無分子間和分子內(nèi)交聯(lián)，涵蓋于本發(fā)明。一方面，膠原包含III型膠原。另一方面，膠原包含至少一定百分比的III型膠原，例如，至少60％的III型膠原、至少70％的III型膠原、至少80％的III型膠原、至少90％的III型膠原、至少95％的III型膠原、至少98％的III型膠原等。一方面，膠原為纖維狀，在某些方面，膠原由包含I型膠原、II型膠原、III型膠原的群組中挑選而來。在較佳方面，膠原為人類膠原；在最佳方面，膠原為人類III型膠原。在各方面，本發(fā)明涵蓋之膠原都為合成膠原。在某方面，膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)。在其它方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另一些方面，III型膠原包含SEQID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
本發(fā)明還提供實(shí)質(zhì)上無分子間和分子內(nèi)交聯(lián)的植入式膠原合成物，其中植入式合成物由包含皮膚填充劑、骨間隙填充材料和植牙的群組中挑選而來。在特定實(shí)施例里，植入式合成物適用于組織充填。組織充填為軟組織充填和組織充填為硬組織充填的實(shí)施例明確涵蓋于本說明。
植入式膠原合成物，其中膠原實(shí)質(zhì)上無內(nèi)源性交聯(lián)，涵蓋于本發(fā)明。實(shí)質(zhì)上無內(nèi)源性交聯(lián)的膠原可包括在內(nèi)源性產(chǎn)生之后已經(jīng)暴露于交聯(lián)劑(化學(xué)交聯(lián)劑，例如，戊二醛等等)或交聯(lián)條件(例如熱、輻射等等)，不含非內(nèi)源性交聯(lián)的膠原但不限于無內(nèi)源性交聯(lián)。
在一個(gè)實(shí)施例里，實(shí)質(zhì)上無內(nèi)源性交聯(lián)的膠原為纖維狀膠原。在各種各樣的實(shí)施例里，膠原由包含I型膠原、II型膠原和III型膠原的群組中挑選而來。在其它實(shí)施例里，實(shí)質(zhì)上無內(nèi)源性交聯(lián)的膠原包含至少一定百分比的III型膠原，例如，至少60％的III型膠原、至少70％的III型膠原、至少80％的III型膠原、至少90％的III型膠原、至少95％的III型膠原、至少98％的III型膠原等。在某實(shí)施例里，膠原為合成膠原。在一實(shí)施例里，膠原為人類膠原。在另一實(shí)施例里，膠原包含SEQ DD NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)。在其它實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
本發(fā)明還提供了實(shí)質(zhì)上無分子間和分子內(nèi)交聯(lián)的植入式膠原合成物，其中植入式合成物由包含皮膚填充劑、骨間隙填充材料和植牙的群組中挑選而來。在特定實(shí)施例里，植入式合成物適用組織充填。組織充填為軟組織充填和組織充填為硬組織充填的實(shí)施例明確涵蓋于本說明。
一方面，本發(fā)明提供了充填主體內(nèi)軟組織的方法，該方法包括在充填位點(diǎn)對主體使用膠原合成物，其中膠原包含III型膠原，從而達(dá)到加強(qiáng)軟組織強(qiáng)度的目的。一方面，該主體為哺乳動(dòng)物。在較佳方面，該主體為人。另一方面，III型膠原與主體的類別相同。在某方面，III型膠原為人類III型膠原，主體為人。另一方面，III型膠原為合成III型膠原。在較佳方面，III型膠原為合成人類III型膠原。在某些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1序列或成膠氨序列(如三螺旋、碎片)。在其它方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
在各方面，在充填位點(diǎn)對主體用藥是通過植入或注射的方式進(jìn)行的，例如，使用一個(gè)注射器和針等。在某些方面，在充填位點(diǎn)對主體用藥屬于表皮下用藥、真皮下用藥或真皮內(nèi)用藥。
在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明提供了充填主體內(nèi)軟組織的方法，該方法包括在充填位點(diǎn)對主體使用膠原合成物，其中膠原包含至少60％的III型膠原，從而達(dá)到加強(qiáng)軟組織強(qiáng)度的目的。在一個(gè)實(shí)施例里，主體為哺乳動(dòng)物。在較佳實(shí)施例里，主體為人。膠原包含至少70％的III型膠原以及膠原包含至少80％的III型膠原的特定實(shí)施例涵蓋于本發(fā)明，同樣，膠原包含至少90％、95％和98％的III型膠原的較佳實(shí)施例也涵蓋于本發(fā)明。在另一個(gè)實(shí)施例里，III型膠原與主體的類別相同。在特定實(shí)施例里，III型膠原為人類III型膠原，主體為人。在另一個(gè)實(shí)施例里，III型膠原為合成III型膠原。在較佳實(shí)施例里，III型膠原為合成人類III型膠原。在某些實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1序列或成膠氨序列(如三螺旋、碎片)。在其它實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
在各實(shí)施例里，在充填位點(diǎn)對主體用藥是通過植入或注射的方式進(jìn)行的，例如，使用一個(gè)注射器和針等。在某些方面，在增大處對主體用藥屬于表皮下用藥、真皮下用藥或真皮內(nèi)用藥。
一方面，本發(fā)明提供了充填主體內(nèi)軟組織的方法，該方法包括在充填位點(diǎn)對主體使用膠原合成物，其中膠原實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)，從而達(dá)到加強(qiáng)軟組織強(qiáng)度的目的。一方面，主體為哺乳動(dòng)物。在較佳方面，主體為人。另一方面，膠原為纖維狀膠原，在特定方面，膠原由包含I型膠原、II型膠原、III型膠原的群組中挑選而來。在其它方面，膠原包含至少一定百分比的III型膠原，例如，至少60％的III型膠原、至少70％的III型膠原、至少80％的III型膠原、至少90％的III型膠原、至少95％的III型膠原、至少98％的III型膠原等。在較佳方面，膠原為人類膠原；在最佳方面，膠原為人類III型膠原。在各方面，本發(fā)明涵蓋之膠原都為合成膠原。在一特定方面，膠原包含SEQ ID NO1序列或成膠序列(如三螺旋、碎片)。在其它方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
在各方面，在充填位點(diǎn)對主體用藥是通過植入或注射的方式進(jìn)行的，例如，使用一個(gè)注射器和針等。在某些方面，在增大處對主體用藥屬于表皮下用藥、真皮下用藥或真皮內(nèi)用藥。
在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明提供了充填主體內(nèi)軟組織的方法，該方法包括在充填位點(diǎn)對主體使用膠原合成物，其中膠原實(shí)質(zhì)上無內(nèi)源性交聯(lián)，從而達(dá)到加強(qiáng)軟組織強(qiáng)度的目的。在一個(gè)實(shí)施例里，主體為哺乳動(dòng)物。在較佳實(shí)施例里，主體為人。實(shí)質(zhì)上無內(nèi)源性交聯(lián)的膠原可包括但不限于無內(nèi)源性交聯(lián)，在內(nèi)源性產(chǎn)生之后已經(jīng)暴露于交聯(lián)劑(化學(xué)交聯(lián)劑，例如，戊二醛等等)或交聯(lián)條件(例如熱、輻射等等)，不含非內(nèi)源性交聯(lián)的膠原。在一個(gè)實(shí)施例里，膠原為纖維狀膠原，在特定實(shí)施例里，膠原由包含I型膠原、II型膠原、III型膠原的群組中挑選而來。在其它實(shí)施例里，膠原包含至少一定百分比的III型膠原，例如，至少60％的III型膠原、至少70％的III型膠原、至少80％的III型膠原、至少90％的III型膠原、至少95％的III型膠原、至少98％的III型膠原等。在較佳實(shí)施例里，膠原為人類膠原；在最佳實(shí)施例里，膠原為人類III型膠原。在各方面，本發(fā)明涵蓋之膠原都為合成膠原。在一特定實(shí)施例里，膠原包含SEQ ID NO1序列或成膠序列(如三螺旋、碎片)。在其它實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
在各方面，在充填位點(diǎn)對主體用藥是通過植入或注射的方式進(jìn)行的，例如，使用一個(gè)注射器和針等。在某些方面，在充填位點(diǎn)對主體用藥屬于表皮下用藥、真皮下用藥或真皮內(nèi)用藥。
一方面，本發(fā)明提供一種植入式膠原合成物的備制方法，該方法包括一種膠原的提供，其中該膠原包含III型膠原，和III型膠原水溶液的備制，從而達(dá)到備制成一種植入式膠原合成物的目的。在一方面，III型膠原指人類III型膠原。另一方面，III型膠原為合成III型膠原。更優(yōu)選一方面，III型膠原為合成人類III型膠原。在另一方面，III型膠原實(shí)質(zhì)上無任何分子內(nèi)和分子間交聯(lián)。另一方面，膠原實(shí)質(zhì)上無任何內(nèi)源性交聯(lián)。在某些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1序列或膠原序列(如三螺旋、碎片)。在其它方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
一方面，本發(fā)明提供一種植入式膠原合成物的備制方法，該方法包括一種膠原的提供，其中該膠原包含至少60％的III型膠原，和膠原水溶液的備制，從而達(dá)到備制成一種植入式膠原合成物的目的。膠原包含至少70％的III型膠原以及膠原包含至少80％的III型膠原的特定方面涵蓋于本發(fā)明，同樣，膠原包含至少90％、95％和98％的III型膠原的較佳方面也涵蓋于本發(fā)明。在某些方面，膠原為人類III型膠原。在其它方面，膠原為合成III型膠原。在較佳方面，膠原為合成人類III型膠原。在另一方面，膠原實(shí)質(zhì)上無任何分子內(nèi)和分子間交聯(lián)。另一方面，膠原實(shí)質(zhì)上無任何內(nèi)源性交聯(lián)。在某些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1序列或膠原序列(如三螺旋、碎片)。在其它方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明提供了一種植入式膠原合成物的備制方法，該方法包括一種實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的膠原的提供，以及實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的膠原的水溶液的備制，從而達(dá)到備制成一種植入式膠原合成物的目的。在一個(gè)實(shí)施例里，膠原為纖維狀膠原，在特定實(shí)施例里，膠原由包含I型膠原、II型膠原、III型膠原的群組中挑選而來。在某些實(shí)施例里，膠原為人類膠原。在其它實(shí)施例里，膠原為合成膠原。在較佳實(shí)施例里，膠原為合成人類III型膠原。另一實(shí)施例里，膠原實(shí)質(zhì)上無任何內(nèi)源性交聯(lián)。在一特定實(shí)施例，膠原包含SEQ ID NO1序列或成膠序列(如三螺旋、碎片)。在其它實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ IDNO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
本發(fā)明也提供了一種植入式膠原合成物的備制方法，該方法包括一種實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的膠原的提供，以及進(jìn)行膠原交聯(lián)，從而達(dá)到備制成一種植入式膠原合成物的目的。一方面，膠原為纖維狀膠原，在特定方面，膠原由包含I型膠原、II型膠原、III型膠原的群組中挑選而來。另一方面，膠原為人類膠原。另一方面，膠原為合成膠原。在較佳方面，膠原為合成人類膠原。在特定方面，膠原包含SEQ ID NO1序列或成膠序列(如三螺旋、碎片)。在其它方面，III型膠原包含SEQ IDNO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。在某些方面，膠原交聯(lián)是在適合膠原交聯(lián)的條件下通過將膠原暴露于熱或輻射從而達(dá)成的。在其它方面，膠原交聯(lián)是在適合膠原交聯(lián)的條件下通過將膠原暴露于化學(xué)交聯(lián)劑從而達(dá)成的。在特定方面，化學(xué)交聯(lián)劑由包含醛、碳化二亞胺、環(huán)氧化物和咪唑的群組中挑選而來。
在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明提供了一種植入式膠原合成物的備制方法，該方法包括一種實(shí)質(zhì)上無內(nèi)源性交聯(lián)的膠原的提供、進(jìn)行膠原交聯(lián)，以及交聯(lián)膠原的水溶液的備制，從而達(dá)到備制成一種植入式膠原合成物的目的。在一個(gè)實(shí)施例里，膠原交聯(lián)是在適合膠原交聯(lián)的條件下通過將膠原暴露于熱或輻射從而達(dá)成的。在一個(gè)實(shí)施例里，膠原為纖維狀膠原，在特定實(shí)施例里，膠原由包含I型膠原、II型膠原、III型膠原的群組中挑選而來。在另一個(gè)實(shí)施例里，膠原為人類膠原。在另一個(gè)實(shí)施例里，膠原為合成膠原。在較佳實(shí)施例里，膠原為合成人類膠原。在一特定實(shí)施例里，膠原包含SEQ ID NO1序列或成膠序列(如三螺旋、碎片)。在其它實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。在另一實(shí)施例里，膠原交聯(lián)是在適合膠原交聯(lián)的條件下通過將膠原暴露于化學(xué)交聯(lián)劑從而達(dá)成的。在某些實(shí)施例里，化學(xué)交聯(lián)劑由包含醛、碳化二亞胺、環(huán)氧化和物和咪唑的群組中挑選而來。
一方面，本發(fā)明提供一個(gè)對充填包含植入式膠原合成物的軟組織有用的工具箱，該工具箱包含III型膠原、一個(gè)注射器和一針。一方面，III型膠原為人類III型膠原。另一方面，III型膠原為合成III型膠原。在較佳方面，III型膠原實(shí)質(zhì)上無任何分子間和分子內(nèi)交聯(lián)。另一方面，III型膠原實(shí)質(zhì)上無任何內(nèi)源性交聯(lián)。在某些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1序列或成膠序列(如三螺旋、碎片)。在其它方面，III型膠原包含SEQ IDNO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些方面，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
一方面，本發(fā)明提供一個(gè)對充填包含植入式膠原合成物的軟組織有用的工具箱，該工具箱包含膠原(其中膠原包含至少60％的III型膠原)、一個(gè)注射器和一針。膠原包含至少70％的III型膠原以及膠原包含至少80％的III型膠原的特定實(shí)施例涵蓋于本發(fā)明，同樣，膠原包含至少90％、95％和98％的III型膠原的較佳實(shí)施例也涵蓋于本發(fā)明。在某些實(shí)施例里，膠原為人類III型膠原。在其它實(shí)施例里，膠原為合成III型膠原。在較佳實(shí)施例里，膠原為合成人類III型膠原。在另一實(shí)施例里，膠原實(shí)質(zhì)上無任何分子內(nèi)和分子間交聯(lián)。在另一實(shí)施例里，膠原實(shí)質(zhì)上無任何內(nèi)源性交聯(lián)。在某些實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1序列或成膠序列(如三螺旋、碎片)。在其它實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
一方面，本發(fā)明提供一個(gè)對充填包含植入式膠原合成物的軟組織有用的工具箱，該工具箱包含膠原(其中膠原實(shí)質(zhì)上無分子間和分子內(nèi)交聯(lián))、一個(gè)注射器和一針。一方面，膠原為纖維狀膠原，在特定方面，膠原由包含I型膠原、II型膠原、III型膠原的群組中挑選而來。在某些方面，膠原為人類膠原。在其它方面，膠原為合成膠原。在較佳方面，膠原為合成人類膠原。在最佳方面，膠原為合成人類III型膠原。在另一方面，膠原實(shí)質(zhì)上無任何內(nèi)源性交聯(lián)。在某一特定方面，膠原包含SEQ IDNO1序列或成膠序列(如三螺旋、碎片)。在其它實(shí)施例里，III型膠原包含SEQ ID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另些實(shí)施例里，III型膠原包含SEQID NO1氨基酸序列或成膠氨基酸序列(如三螺旋、碎片)的氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。
圖式簡述

圖1A和1B顯示的是對經(jīng)基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)(圖1A)和基質(zhì)金屬蛋白酶-8(MMP-8)(圖1B)處理后的合成人類I型膠原和合成人類III型膠原的SDS-PAGE分析發(fā)明說明本發(fā)明提供對組織充填有用的植入式膠原合成物。本發(fā)明之植入式膠原合成物在持久性方面得以加強(qiáng)，適用于各種各樣的醫(yī)療和化妝品應(yīng)用。本發(fā)明提供有最小限度的可變性或無可變性的以及可操縱性、可擠壓性和可滲透性均有改進(jìn)的植入式膠原合成物。
本發(fā)明部分與III型膠原比I型膠原的持久性要強(qiáng)這一發(fā)現(xiàn)相關(guān)。尤其，本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)植入式III型膠原合成物的持久性比植入式I型膠原合成物的要強(qiáng)，例如，III型膠原比起I型膠原存留的時(shí)間要長，降解的速度要慢。因此，在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明提供一種植入式膠原合成物，其中膠原包含III型膠原。在其它實(shí)施例里，本發(fā)明提供植入式膠原合成物，其中膠原包含預(yù)先確定量的能夠增強(qiáng)成品的持久性的III型膠原。
判斷某一特定合成物里III型膠原的含量是否足夠增強(qiáng)該合成物的持久性可以通過估計(jì)包含一定百分比的III型膠原的合成物的壽命來測得，例如使用國際美容等級(GAIS)評定級別進(jìn)行視覺或觸覺評價(jià)，或通過評估金屬蛋白酶降解的體外抗藥性(例如，參見例2)等。GAIS是基于醫(yī)生對全面改進(jìn)的評估，例如，通過將接受治療的人的面容與治療之前進(jìn)行比較，對已治療處使用化妝品進(jìn)行改善，例如鼻唇溝。GAIS評定級別包括改善很大(植入最佳美容效果)；改善較大(面部較先前有明顯改善，但對該接受治療的人來說尚未完全達(dá)到其最佳美容效果)；有改善(面部較先前有明顯改善)；無變化(面部基本上與先前一樣)；更糟(面部較先前更糟)。在各實(shí)施例里，植入式膠原合成物里III型膠原的含量達(dá)總量的60％、70％甚至是80％以上。在較佳實(shí)施例里，植入式膠原合成物里III型膠原的含量超過90％；在更佳的實(shí)施例里，植入式膠原合成物里III型膠原的含量超過95％；在最佳實(shí)施例里，其含量超過98％。
目前市面上沒有一種產(chǎn)品能夠提供一種包含III型膠原的或包含預(yù)先確定量的、可再產(chǎn)的、可實(shí)現(xiàn)持久性增強(qiáng)的III型膠原的膠原成分。在許多應(yīng)用中用作組織填充材料的膠原為內(nèi)源性膠原，要么是通過分散(機(jī)械剪切組織)、分解(酸裂解)、酶消化等從動(dòng)物(尤其是牛組織)提取而來，或是內(nèi)生獲得，例如通過人工培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞。內(nèi)源性膠原是一種可變的膠原混合體，一般包含95％的I型膠原(骨和組織里主要膠原類型)，大約5％的III型膠原，及微量其它類型的膠原。
內(nèi)源性人類膠原同樣也可以從接受治療的人或死尸的皮膚上獲得。(例如參見美國專利編號為4,969,912的專利和美國專利編號為5,116,389的專利。)如從組織提取的牛膠原一樣，提取的人類膠原是多種類型的膠原的混合體；例如，人體皮膚膠原含大約95％的I型膠原、5％的III型膠原，及微量其它類型的膠原。這樣獲得的膠原的數(shù)量是有限的，價(jià)格也相當(dāng)昂貴，且容易為用戶所厭惡。人類膠原也可從生長在受控的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境里的人體成纖維細(xì)胞獲取。(例如參見加利福尼亞州圣巴巴拉(SantaBarbara)Inamed Corp.的COSMODERM和COSMOPLAST配方)。這些人工培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞看起來如在人體內(nèi)一樣，能產(chǎn)生天然膠原，例如，通常發(fā)現(xiàn)于人體的膠原含大約95％的I型膠原、5％的III型膠原和微量其它類型的膠原。這樣獲得的膠原為內(nèi)源性材料，其產(chǎn)生基于生長條件而有所不同，且數(shù)量相對有限。
本發(fā)明進(jìn)一步與如下出人意料的發(fā)現(xiàn)相關(guān)包含實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的膠原的膠原合成物可用作植入材料。
目前用于組織充填產(chǎn)品里的所有膠原都是從動(dòng)物(如?；蛉梭w)、組織提取的或內(nèi)生的(如通過人工培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞)內(nèi)源性膠原。內(nèi)源性膠原要經(jīng)歷廣泛的翻譯后修飾。(Kivirikko(1998)Matrix Biol16355-356.)尤其，膠原的組合和炮制，例如纖維狀膠原(如I型型、II型型、III型型膠原)，伴隨著分子間和分子內(nèi)共價(jià)交聯(lián)，如，單個(gè)膠原a-鏈之間形成的一個(gè)三螺旋膠原分子的分子內(nèi)交聯(lián)，或三螺旋膠原分子之間分子間交聯(lián)，增強(qiáng)纖維狀的穩(wěn)定性。天然交聯(lián)可在羥賴氨酸和賴氨酸殘基之間形成或膠原分子的羥賴氨酸、賴氨酸和組胺酸殘基之間形成。
交聯(lián)使之具有抗張強(qiáng)度和機(jī)械強(qiáng)度，有助于組織完整性，且與宿主膠原酶、蛋白酶等抵抗膠原降解有關(guān)。因此，在本項(xiàng)技術(shù)中人們相信為使膠原作為一種植入材料，具備適當(dāng)?shù)臋C(jī)械和結(jié)構(gòu)功能以及持久性以成功用于各醫(yī)療和化妝品應(yīng)用中，需要一定的天然或內(nèi)源性交聯(lián)。交聯(lián)有助于且可延長交聯(lián)的膠原的結(jié)構(gòu)完整性，但也影響了其它物理參數(shù)，包括流動(dòng)性和可溶性，限制了組織充填成品里的膠原的可使用濃度。因而，膠原操作和處理的容易度及其注射的適宜性受交聯(lián)程度和性質(zhì)的影響。
本發(fā)明意外地發(fā)現(xiàn)膠原實(shí)質(zhì)上無交聯(lián)，例如，實(shí)質(zhì)上無分子間和分子內(nèi)交聯(lián)、具備證實(shí)的持久性和降解抵抗力，因而適用于各種各樣的組織充填。(參見例2和例3。)因此，在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明提供了一種植入式膠原合成物，其中膠原實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)。這對現(xiàn)用產(chǎn)品來說是獨(dú)有的優(yōu)勢，因?yàn)閷?shí)質(zhì)上無分子間或分子內(nèi)交聯(lián)的膠原不為交聯(lián)材料的可操縱性、可擠壓性和可滲透性的削弱或降低所影響。在一個(gè)實(shí)施例里，膠原為纖維狀膠原。在另一個(gè)實(shí)施例里，膠原由包含I型膠原和III型膠原的群組中挑選而來。在較佳實(shí)施例里，膠原為III型膠原。在各種各樣的實(shí)施例里，膠原包含各種百分比的III型膠原。在特定的實(shí)施例里，植入式合成物里III型膠原的含量超過了60％、70％、甚至是80％。在較佳實(shí)施例里，植入式合成物里III型膠原的含量超過了90％；在更加實(shí)施例里，植入式合成物里III型膠原的含量超過了95％；在最佳實(shí)施例里，其含量甚至超過了98％。
本發(fā)明提供了實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的植入式膠原合成物，也涵蓋了無內(nèi)源性交聯(lián)但包含非內(nèi)源性交聯(lián)的植入式膠原合成物。
因?yàn)榻宦?lián)傳統(tǒng)上與植入的膠原材料的增強(qiáng)的穩(wěn)定性和持久性相關(guān)，目前市面上各種含膠原的產(chǎn)品都使用了化學(xué)交聯(lián)或其它外源性交聯(lián)以進(jìn)一步加強(qiáng)膠原材料的持久性。(參見McPherson et al.(1986)J BiomedMater Res 2093-107.)例如，使用市場上可買到的可注射的牛膠原(例如ZYDERM)的臨床研究證實(shí)其對矯治面部皺紋有效，但這種臨床矯治只是暫時(shí)的。(參見Burke et al.(1985)Ann Plast Surg 14515-522；Rapaportet al.(1984)J Am Acad Dermatol 11(2 Pt 1)25-252.)這促進(jìn)了更穩(wěn)定的可注射材料ZYPLAST(一種戊二醛交聯(lián)可注射牛膠原，其比ZYDERM的持久性更強(qiáng)，因此可提供更為持久的美容效果)的發(fā)展。因此，在本案中，包含外源性交聯(lián)的可植入的生物材料與更穩(wěn)定、持久的材料和材料增強(qiáng)的持久性相關(guān)。
這些附加交聯(lián)或非內(nèi)源性交聯(lián)被引入膠原材料，例如，通過將膠原暴露于化學(xué)交聯(lián)劑、輻射等。如前所述，程度增加的交聯(lián)可以增強(qiáng)持久性，但也可能影響膠原材料性能的其它方面，包括處理的容易度，以至于在一些病例里，膠原需要額外的加工和處理以適合注射。(例如，參見美國專利編號為4,582,640的專利。)本材料的一個(gè)優(yōu)勢是一方面，本發(fā)明提供一種實(shí)質(zhì)上無任何分子內(nèi)或分子間交聯(lián)的膠原原材料。該膠原可暴露于交聯(lián)劑或適合交聯(lián)發(fā)生的條件之下(例如，戊二醛、輻射等)，導(dǎo)致膠原具有一定的交聯(lián)足以增強(qiáng)持久性而又不會影響材料處理的容易度。尤其，實(shí)質(zhì)上無任何內(nèi)源性分子間或分子內(nèi)交聯(lián)的膠原以及通過使用化學(xué)劑或暴露于輻射等交聯(lián)條件下隨后交聯(lián)的膠原比在同樣條件下隨后交聯(lián)的內(nèi)源性交聯(lián)膠原交聯(lián)的程度要小。
一方面，本發(fā)明提供一種備制植入式膠原合成物的最佳原材料，其中原材料是或包含實(shí)質(zhì)上無內(nèi)源性交聯(lián)的膠原。本發(fā)明特別涵蓋在各方面，一種適用于各種各樣的化妝品和醫(yī)療應(yīng)用(包括組織充填)的植入式合成物的備制將包含膠原的交聯(lián)，本發(fā)明的特殊合成物的一個(gè)明顯的優(yōu)勢是，交聯(lián)的程度和性質(zhì)完全可在制造中進(jìn)行控制。相反，現(xiàn)用內(nèi)源性材料包含自然產(chǎn)生的內(nèi)源性交聯(lián)。在某些實(shí)施例里，本發(fā)明提供了獨(dú)特的、相容的、可再生的原材料，在今天所使用的內(nèi)源性材料的備制過程中每一步都考慮到可預(yù)知和可控性能。
因此，一方面，本發(fā)明涵蓋了一種植入式膠原合成物的備制方法，該方法包括獲得實(shí)質(zhì)上無任何分子內(nèi)或分子間交聯(lián)的膠原、進(jìn)行膠原交聯(lián)、從而進(jìn)行植入式膠原合成物的備制?？墒褂么隧?xiàng)技術(shù)中已知的方法(如通過熱、輻射或使用本技術(shù)中可獲得的化學(xué)交聯(lián)劑(如醛、碳化二亞胺、環(huán)氧化物、咪唑等)進(jìn)行膠原交聯(lián)。
這對膠原交聯(lián)的本質(zhì)和程度的控制和可預(yù)見性的加強(qiáng)是有利的。尤其，交聯(lián)的程度可以得到控制，例如，通過改變交聯(lián)劑濃度或輻射強(qiáng)度或暴露于交聯(lián)條件下的時(shí)間。交聯(lián)的性質(zhì)包括類型可以得到控制，例如，通過改變條件，促進(jìn)分子內(nèi)交聯(lián)的形成多于分子間交聯(lián)的形成，如，通過使用特殊的交聯(lián)劑、改變要交聯(lián)的溶液里膠原的濃度等等。
在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明提供無內(nèi)源性交聯(lián)的可注射膠原合成物。這包含了不含分子間和分子內(nèi)交聯(lián)的材料以及不含內(nèi)源性交聯(lián)但包含在非內(nèi)源性條件下引入的交聯(lián)的材料。
在非內(nèi)源性條件下引入的交聯(lián)包括將膠原暴露于交聯(lián)劑(如化學(xué)交聯(lián)劑)或輻射等形成的交聯(lián)等。
在較佳實(shí)施例里，使用在本合成物和方法中的膠原是通過合成手段產(chǎn)生的，最佳的通過重組手段。這對許多原因來說是有利的，如在本發(fā)明的植入式合成物里使用合成膠原產(chǎn)生特性化的、完全可再生的膠原，該種膠原有著足夠的強(qiáng)度、穩(wěn)定性和持久性，基本上無免疫反應(yīng)性、組織反應(yīng)、或植入后炎癥反應(yīng)，且無病原(如傳染性的、化學(xué)藥劑)和其它污染物質(zhì)(如源于動(dòng)物的污染物質(zhì)等)。
使用牛膠原或其它動(dòng)物膠原(豬、馬等)作為各種各樣的組織充填和植入材料的主要成分在植入/注射后可能會有不利反映。尤其，已經(jīng)觀測到非人類膠原產(chǎn)品在暴露后出現(xiàn)免疫反應(yīng)包括過敏反應(yīng)和非過敏反應(yīng)(如感染等)。(例如，參見Baumann and Weisberg，第157頁。)例如，進(jìn)行皮膚反應(yīng)測驗(yàn)的人中有3％到10％出現(xiàn)牛膠原陽性過敏反應(yīng)。(參見Barr and Stegman(1984)J Am Acad Dermatol 10652；Charrierre et al.(1989)J Am Acad Dermatol 211203.)也有部分人在一次或兩次陰性皮膚試驗(yàn)后才會有牛膠原過敏癥狀。這些反應(yīng)可能是破壞性的且難治療，但并非是不可能治療。
如果暴露于膠原源材料里過敏原免疫原甚至是有毒成分引起炎癥反應(yīng)，浸潤炎性細(xì)胞和成纖維細(xì)胞會更改天然和植入基質(zhì)成分的結(jié)構(gòu)，注射的/植入的膠原也會被降解和再吸收。因此，在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明的植入式合成物包含合成膠原。在另一個(gè)實(shí)施例里，合成膠原被重組制造，例如，按例1所描述產(chǎn)生。
除了將不利反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)降到最低外，在本發(fā)明的植入式合成物里使用合成膠原對于促進(jìn)膠原材料的均質(zhì)性和再現(xiàn)性是有利的。如上述討論的那樣，內(nèi)源性膠原，包括那些從天然源提取的內(nèi)源性膠原，含各種類型的膠原的不均勻混合物。(例如參見Byers et al.(1974)Biochemistry135243-5248；和Miller and Rhodes(1982)Methods Enzymol 82(Pt A)33-64。)相反，本發(fā)明明確地涵蓋了只包含一種類型的膠原的植入式合成物，或包含特定的、預(yù)先確定的百分比的不止一種類型的膠原的植入式合成物。在較佳實(shí)施例里，本發(fā)明提供了一種植入式膠原合成物，其中膠原包含III型膠原。在其它實(shí)施例里，本發(fā)明提供了植入式膠原合成物，其中膠原包含特定的、預(yù)先確定的百分比的III型膠原。使用合成膠原，包括重組體等，對以隔離的、預(yù)先確定的數(shù)量和以可再生的方式產(chǎn)生單個(gè)的膠原類型是有利的。
此外，使用合成技術(shù)可使膠原的產(chǎn)生最佳化，以供特殊使用。例如，適用于本發(fā)明的表達(dá)載體編碼合成膠原可包含天然人類序列，但有些特殊的改動(dòng)，這些改動(dòng)導(dǎo)致合成膠原的表達(dá)具備要求的特性，如刪除、更改、替換等，這些特性消除了誘發(fā)免疫原性反應(yīng)(如抗原反應(yīng)和致過敏反應(yīng))的各部位的膠原酶敏感部位和刪除、更改、替換等。
合成膠原的產(chǎn)生可使用本案中已知的任何一種合成技術(shù)，如重組體產(chǎn)生、肽合成等。較佳的重組體方法在Vuorela et al.(1997)EMBO J 166702-6712，Nokelainen et al.(2001)Yeast 18797-806和Myllyharju et al.(2000)Biochem Soc Trans 283532-3537(全部并入?yún)⒖?里有描述。對于重組體生產(chǎn)，宿主細(xì)胞不受限制，可以包含任何能夠進(jìn)行重組體蛋白質(zhì)表達(dá)的任何細(xì)胞。在表達(dá)后，合成膠原可以分泌進(jìn)入介質(zhì)或局部環(huán)境，和/或宿主細(xì)胞可以保留膠原。對保留的膠原可以進(jìn)行劃分，例如，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體里或相關(guān)的囊泡在動(dòng)物細(xì)胞里，空泡在植物細(xì)胞里，包含體在細(xì)菌里等。表達(dá)合成膠原的細(xì)胞可以生長在培養(yǎng)物里，或可以通過所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員獲知的技術(shù)插入轉(zhuǎn)基因植物或動(dòng)物，然后與要表達(dá)的組織隔離。
合成膠原來源于的膠原序列包括動(dòng)物膠原，在較佳實(shí)施例里是人類膠原。核酸序列編碼膠原在本技術(shù)中可獲得。(參見，F(xiàn)uller and Boedtker(1981)Biochemistry 20996-1006；Sandell et al.(1984)J Biol Chem2597826-34；Kohno et al.(1984)J Biol Chem 25913668-13673；French etal.(1985)Gene 39311-312；Metsaranta et al.(1991)J Biol Chem26616862-16869；Metsaranta et al.(1991)Biochim Biophys Acta 1089241-243；Wood et al.(1987)Gene 61225-230；Glumoff et al.(1994)Biochim Biophys Acta 121741-48；Shirai et al.(1998)Matrix Biology 1785-88；Tromp et al.(1988)Biochem J253919-912；Kuivaniemi et al.(1998)Biochem J 252633-640；Ala-Kokko et al.(1989)Biochem J 260509-516；國際出版號WO 01/34647。)此外，使用于本配方的膠原可以包含通過多核苷酸編碼膠原碎片的直接重組表達(dá)產(chǎn)生的規(guī)定長度的膠原碎片或通過處理全長膠原蛋白(如，通過酶消化、熱變性、化學(xué)降解等)獲得的膠原碎片。膠原碎片可以包括含至少一定比例的膠原或膠原狀分子三螺旋區(qū)的多肽。在一個(gè)較佳實(shí)施例里，本配方包含源于III型膠原的合成膠原或合成膠原碎片；在更佳實(shí)施例里，源于人類III型膠原。通過上述方法產(chǎn)生的每一合成膠原可作為單一類型的膠原獲得，不含任何其它類型的膠原。
在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明提供一種植入式膠原合成物，其中膠原為III型膠原。在另一實(shí)施例里，III型膠原為人類III型膠原。在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明提供一種包含SEQ ID NO1氨基酸序列的膠原或膠原碎片。在一個(gè)實(shí)施例里，膠原包含一種具有一含III型膠原的N末端肽區(qū)、a螺旋區(qū)和C末端肽區(qū)的氨基酸序列的多肽。III型膠原的N末端肽從SEQ IDNO1序列的氨基酸殘基149到氨基酸殘基167。III型膠原的a螺旋區(qū)從SEQ ID NO1序列的氨基酸殘基168到氨基酸殘基1196。III型膠原的C末端肽從SEQ ID NO1序列的氨基酸殘基1197到氨基酸殘基1221。在一個(gè)實(shí)施例里，在本發(fā)明的方法和合成物里使用的膠原包含一個(gè)多肽，該多肽具有一個(gè)SEQ ID NO1氨基酸序列從氨基酸殘基149至氨基酸殘基1221。在另一個(gè)實(shí)施例里，膠原具有一個(gè)SEQ ID NO1氨基酸序列從氨基酸殘基149到氨基酸殘基1221。此外，本發(fā)明涵蓋了一種植入式膠原合成物，其中膠原為合成人類III型膠原，該膠原包含SEQ ID NO1人類III型膠原序列氨基酸殘基1205處的一異亮氨酸到脯氨酸的替換。
在另一實(shí)施例里，膠原包含一多肽，該多肽具有一含III型膠原a螺旋區(qū)的氨基酸序列。在一實(shí)施例里，在本發(fā)明的方法和合成物里使用的膠原包含一個(gè)多肽，該多肽具有一個(gè)SEQ ID NO1氨基酸序列從氨基酸殘基168至氨基酸殘基1196。本發(fā)明的某些實(shí)施例里進(jìn)一步涵蓋在本發(fā)明的合成物和方法里使用的膠原包含一個(gè)具有SEQ ID NO1氨基酸序列從氨基酸殘基168到氨基酸殘基1196的多肽。
在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明提供一種植入式膠原合成物，其中膠原為I型膠原。在一個(gè)實(shí)施例里，I型膠原為人類I型膠原。在另一實(shí)施例里，本發(fā)明提供一種包含SEQ ID NO2氨基酸序列和或一膠原碎片的膠原。在另一實(shí)施例里，本發(fā)明提供一種包含SEQ ID NO3氨基酸序列和或一膠原碎片的膠原。在另一實(shí)施例里，膠原包含一種具有一含I型膠原的N末端肽區(qū)、a螺旋區(qū)和C末端肽區(qū)的氨基酸序列的多肽。a1(I)膠原N末端肽從SEQ ID NO2序列的氨基酸殘基162到氨基酸殘基178。a1(I)膠原a螺旋區(qū)從SEQ ID NO2序列的氨基酸殘基179到氨基酸殘基1192。a1(I)膠原C末端肽從SEQ ID NO2序列的氨基酸殘基1193到氨基酸殘基1218。在一個(gè)實(shí)施例里，在本發(fā)明的合成物和方法里使用的膠原包含一個(gè)多肽，該多肽具有一個(gè)SEQ ID NO2氨基酸序列從氨基酸殘基162至氨基酸殘基1218。a2(I)膠原N末端肽從SEQ ID NO3序列的氨基酸殘基180到氨基酸殘基190。a2(I)膠原a螺旋區(qū)從SEQ ID NO3序列的氨基酸殘基191到氨基酸殘基1102。a2(I)膠原C末端肽從SEQ IDNO3序列的氨基酸殘基1103到氨基酸殘基1119。在一個(gè)實(shí)施例里，在本發(fā)明的合成物和方法里使用的膠原包含一個(gè)多肽，該多肽具有一個(gè)SEQ ID NO3氨基酸序列從氨基酸殘基180至氨基酸殘基1119。在其它實(shí)施例里，膠原具有一個(gè)氨基酸序列，該序列由包含SEQ ID NO2序列的氨基酸殘基162到氨基酸殘基1218和SEQ ID NO3序列的氨基酸殘基180到氨基酸殘基1119的群組挑選而來。
在另一實(shí)施例里，膠原包含一個(gè)多肽，該多肽具有一個(gè)含I型膠原的a螺旋區(qū)的氨基酸序列。在一個(gè)實(shí)施例里，在本發(fā)明的方法和合成物里使用的膠原包含一個(gè)多肽，該多肽具有一個(gè)SEQ ID NO2氨基酸序列從氨基酸殘基179至氨基酸殘基1192。在一個(gè)實(shí)施例里，在本發(fā)明的方法和合成物里使用的膠原包含一個(gè)多肽，該多肽具有一個(gè)SEQ ID NO3氨基酸序列從氨基酸殘基191至氨基酸殘基1102。本發(fā)明的某些實(shí)施例里進(jìn)一步涵蓋在本發(fā)明的合成物和方法里使用的膠原包含一個(gè)具有一氨基酸序列的多肽，該序列由包含SEQ ID NO2序列的氨基酸殘基179到氨基酸殘基1192和SEQ ID NO3序列的氨基酸殘基191到氨基酸殘基1102的群組挑選而來。
此處所提供的植入式合成物可用于為所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所獲知的任何方法中。尤其，本合成物可使用于任何醫(yī)療和化妝品應(yīng)用中，包括組織充填，在組織充填里，膠原得到廣泛使用，且含膠原的合成物在持久性、處理的容易度和/或可變性降低上都有改進(jìn)。本合成物適用于組織充填。本發(fā)明明確涵蓋了在化妝品應(yīng)用和醫(yī)療應(yīng)用中使用本合成物。
一方面，本發(fā)明提供植入式膠原合成物，該合成物適用于軟組織充填。本合成物可植入或注射入皮膚或真皮的各個(gè)部位，具體取決于特殊應(yīng)用或化妝品應(yīng)用，包括真皮內(nèi)、真皮下、皮下注射或植入。本發(fā)明的材料也可以表面注射或植入，例如，在真皮乳頭層，或可以在真皮網(wǎng)狀層注射或植入。
除軟組織充填外，本發(fā)明涵蓋了在硬組織充填中使用植入式膠原合成物。本膠原合成物在各種各樣的硬組織充填中很有用，包括，骨間隙填充材料、植牙等。
本發(fā)明的合成物的化妝使用包括細(xì)紋(如面部淺表細(xì)紋、皺紋和傷疤)治療以及明顯紋、皺紋和傷疤治療。在一些方面，本發(fā)明的合成物用于其它化妝使用，包括前額橫紋、眉間紋、鼻唇溝、唇紅緣、魚尾紋、垂直唇紋等的治療和減少以及唇緣等的定義。本發(fā)明的合成物對于矯正輪廓畸形和伸展性痤瘡疤痕，或治療其它組織缺陷(如因疾病或傷損或手術(shù)誤差導(dǎo)致的萎縮癥)也有用。
在某些實(shí)施例里，本發(fā)明的可注射的合成物被用于外科手術(shù)，包括組織充填、組織修復(fù)或藥物輸送。在一些方面，本合成物可用于小便失禁、膀胱輸尿管逆流，胃食道逆流等條件下的組織充填。例如，本發(fā)明的合成物可用于給括約肌(如胃或尿道括約肌)增加組織團(tuán)塊以提供合適的閉合和控制。在小便失禁的例子里，如女性壓力性尿失禁或男性前列腺切除術(shù)后伴隨的小便失禁，本發(fā)明的合成物可進(jìn)一步壓迫尿道幫助括約肌閉合，從而避免膀胱漏尿。
類似地，胃食道逆流性疾病(GERD，又稱“消化性食管炎”和“反流性食管炎”)是影響下食管括約肌(連接食道與胃的肌肉)的一種病癥。當(dāng)下食管括約肌出現(xiàn)功能障礙、減弱或松弛時(shí)，胃含物向上流入食道(逆流)，則GERD發(fā)生。下食管括約肌機(jī)能失調(diào)(如由于肌肉張力喪失導(dǎo)致)可導(dǎo)致下食管括約肌閉合不全，引起胃酸和其它含物從胃回流入食道。對飲食調(diào)整或醫(yī)療反應(yīng)差的可要求進(jìn)行外科手術(shù)以矯正功能失調(diào)。在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明的膠原合成物被用于這些應(yīng)用中，例如，被注射入食管括約肌區(qū)域以供給團(tuán)塊給下食管括約肌機(jī)。
在一個(gè)實(shí)施例里，本發(fā)明的植入式膠原合成物被用于填充體內(nèi)空隙和腔管。這些空隙可包括但不限于各種各樣的損傷、裂縫、憩室、囊、漏管、動(dòng)脈瘤或其它可能存在于體內(nèi)的不需要的空隙；腔管可包括但不限于動(dòng)脈、靜脈、腸、輸卵管和氣管。例如，可對腔管或空隙使用適量本合成物以實(shí)現(xiàn)部分或全部閉合，或促進(jìn)受損的組織修復(fù)。
在其它方面，對有病癥的、創(chuàng)傷的或割除的組織區(qū)域使用本發(fā)明的膠原合成物可實(shí)現(xiàn)組織修復(fù)。在一些實(shí)施例里，本發(fā)明的合成物可用于充填或消除軟組織缺陷，如痘痕或疤痕。在這些病例里，本發(fā)明的配方被注入缺陷之下。本合成物增強(qiáng)的持久性將會是很有益的，例如，可以減少治療的次數(shù)和頻率而得到一個(gè)滿意的結(jié)果。在某些實(shí)施例里，膠原合成物被用于聲帶內(nèi)注射，以改變軟組織腫塊的形狀，促進(jìn)發(fā)聲機(jī)能的恢復(fù)。使用本合成物治療單側(cè)聲帶麻痹在本發(fā)明中有明確涵蓋。此外，本發(fā)明也涵蓋了在乳房植入物中使用本膠原合成物，或使用本膠原合成物矯正出生缺陷、后天不足或化妝瑕疵。
可在各種各樣的外科手術(shù)或其它應(yīng)用中使用本膠原合成物重塑或再構(gòu)造各種各樣的外觀或內(nèi)部特征，如整形外科等。
在上述任一實(shí)施例里，本合成物可用于藥物輸送，如，輸送藥物到注射處。在注射完本發(fā)明的植入式合成物后，藥物可不間斷地從膠原形成體內(nèi)庫開始輸送。藥物以此種方式輸送可以加強(qiáng)組織修復(fù)，產(chǎn)生額外的療效。
在另些實(shí)施例里，本發(fā)明進(jìn)一步涵蓋了將細(xì)胞并入植入式膠原合成物以便為細(xì)胞重新住入受損的或有病癥的組織提供一種方法或以便提供細(xì)胞合成的產(chǎn)品給注射處周圍的組織。
在上述任一實(shí)施例里，本發(fā)明的植入式合成物可以所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員獲知的任何恰當(dāng)方法進(jìn)行輸送或用藥。本發(fā)明明確涵蓋了注射給藥，如使用一個(gè)注射器。在一些實(shí)施例里，膠原合成物可另包含一種生物相容的液體，該液體對改進(jìn)該配方的注射能力起著一種相當(dāng)于潤滑劑的作用。本發(fā)明的膠原合成物可通過注射引入組織處，包括真皮內(nèi)、真皮下或皮下注射。
當(dāng)然，本發(fā)明的合成物可以包含適合特殊配方的額外成分。例如，在某些實(shí)施例里，本發(fā)明的植入式合成物被用于注射，在水溶液里按配方制造。合成物可以配制的包含藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑。這些載體和賦形劑在本技術(shù)領(lǐng)域中已明，可以包括磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)溶液、各種溶劑和鹽等。例如，包含生理鹽水緩沖劑如Hanks’溶液，林格氏溶液的生理相容緩沖劑。
特定配方里所含的膠原量應(yīng)根據(jù)本技術(shù)領(lǐng)域中確定的標(biāo)準(zhǔn)。在某些實(shí)施例里，本發(fā)明提供植入式膠原合成物，其中膠原在水溶液中的濃度在大約20到120毫克/毫升之間。在一些實(shí)施例里，膠原在水溶液中的濃度在大約30到90毫克/毫升之間；或20到65毫克/毫升之間；或25到40毫克/毫升之間。在較佳實(shí)施例里，本發(fā)明的膠原合成物中膠原的濃度有35毫克/毫升的也有65毫克/毫升的。
實(shí)施例參照下列實(shí)施例以進(jìn)一步了解本發(fā)明。這些實(shí)施例是本發(fā)明的例證，為的是對申請專利范圍所主張之本發(fā)明作出解釋。這些實(shí)施例沒有對本發(fā)明的范圍做出限制，僅是對本發(fā)明單個(gè)方面的闡釋。任何功能等效的方法都在本發(fā)明范圍之內(nèi)。除了這里所描述的那些外，本發(fā)明的各種各樣的改進(jìn)對于前述說明和附圖描述的所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將變得明顯。這些改進(jìn)屬于從屬權(quán)利要求的范圍。
實(shí)施例1.合成膠原的產(chǎn)生可以使用Vuorela et al(1997)EMBO J 166702-6712和Nokelamen etal.(2001)Yeast 18 797-806(均全部并入?yún)⒖?里所描述的已獲知的方法產(chǎn)生合成膠原，改進(jìn)描述如下。
適用于本合成物的其它膠原的產(chǎn)生可使用為所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所獲知的分子生物學(xué)技術(shù)達(dá)成。可以通過改變多肽編碼序列包括刪除、替換和插入等對這些膠原進(jìn)行改進(jìn)以增強(qiáng)降解抵抗力。例如，通過改變蛋白酶切割位點(diǎn)的氨基酸序列可以產(chǎn)生合成膠原。使用于本合成物的一種例證膠原為一種合成人類III型膠原，該膠原在SEQ ID NO1人類III型膠原序列的氨基酸殘基1205位點(diǎn)包含一個(gè)異亮氨酸到脯氨酸的替換。
合成人類III型膠原按先前描述(Vuorela et al.(1997)EMBO J 166702-6712)備制。采用了一種多核苷酸編碼人類a1(III)前膠原。將包含一種多核苷酸編碼人類a1(III)前膠原的線性質(zhì)粒重新懸浮于～1μg/mL的去離子水(deionized(di)H2O)中，電轉(zhuǎn)化表達(dá)人類脯氨酰羥化酶之a(chǎn)和β亞單位的巴斯德畢赤酵母(Pichia pastons)菌株(Vuorela et al.(1997)EMBO J 166702-6712)。精選的酵母菌株培養(yǎng)在pH值為5的含甘油的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基IOOL發(fā)酵槽中。菌株采用分批培養(yǎng)，直到細(xì)胞濕重達(dá)到215克/升(6小時(shí))。甘油進(jìn)料轉(zhuǎn)變?yōu)?10小時(shí)的甲醇進(jìn)料直到最終細(xì)胞濕重達(dá)到380克/升。細(xì)胞經(jīng)水浸濕，溶解在檸檬酸緩沖液中，培養(yǎng)48小時(shí)以將合成人類III型膠原從細(xì)胞里釋放出來。
胃蛋白酶被添加到膠原(前膠原)溶液從而將N-前肽和C-前肽部位從合成膠原除去。如本技術(shù)領(lǐng)域所獲知，胃蛋白酶非特定性質(zhì)的膠原切割，導(dǎo)致N和C端肽部位的長度那樣易變。酸性鹽沉淀之后就可發(fā)現(xiàn)合成人類III型膠原。沉淀的III型膠原被溶解在0.1M的HCl中，經(jīng)離心和過濾從而凈化。膠原溶液的PH值被調(diào)整到5.8，并有三羥甲基氨基甲烷(Tris base)，以便使更多的雜質(zhì)沉淀，然后通過一個(gè)0.2μm的薄膜進(jìn)行離心和過濾從而凈化。膠原溶液的PH值用三羥甲基氨基甲烷(Tris base)調(diào)整到9.0，，而最終濃度是1M尿素，然后過渡到DEAE-瓊脂糖凝膠FF欄(6L)。通過添加HCl和NaCl合成人類III型膠原從DEAE徑流中沉淀出來。沉淀物通過離心過濾濃縮，然后溶解在0.1M的HCl中。膠原溶液然后通過0.2μm的薄膜過濾得以凈化然后用10mm的HCl進(jìn)行稀釋。通過添加1/10容量的0.2M Na-PO4(PH值為11.2)，膠原溶液的PH值被調(diào)整到7.2，一夜之間膠原即可沉淀下來。沉淀的合成人類III型膠原通過離心過濾收集，溶解在0.1M的HCl中，然后通過0.2μm的薄膜過濾器進(jìn)行過濾。濾出液被用10mm的HCl進(jìn)行稀釋，通過0.2μm的薄膜過濾器進(jìn)行無菌過濾，然后存儲在4-8℃的環(huán)境里。
合成人類I型膠原按先前描述(Nokelainen et al.(2001)Yeast18797-806)進(jìn)行備制。采用了一種多核苷酸編碼人類a1(I)前膠原和一種多核苷酸編碼人類a2(I)前膠原。Nokelainen et al.，supra里描述的精選的酵母菌株培養(yǎng)在pH值為5的含甘油的基礎(chǔ)鹽培養(yǎng)基IOOL發(fā)酵槽中。菌株采用分批培養(yǎng)，直到細(xì)胞濕重達(dá)到170克/升(18小時(shí))。甘油進(jìn)料轉(zhuǎn)變?yōu)?00小時(shí)的甲醇進(jìn)料直到最終細(xì)胞濕重達(dá)到350克/升。細(xì)胞經(jīng)水浸濕，溶解在檸檬酸緩沖液中，培養(yǎng)48小時(shí)以將合成人類I型膠原從細(xì)胞里釋放出來。
胃蛋白酶被添加到膠原(前膠原)溶液從而將N-前肽和C-前肽部位從合成膠原除去。如本技術(shù)領(lǐng)域所獲知，胃蛋白酶非特定性質(zhì)的膠原切割，導(dǎo)致N和C端肽部位的長度那樣易變。酸性鹽沉淀之后就可發(fā)現(xiàn)合成人類I型膠原。沉淀的I型膠原被溶解在0.1M的HCl中，經(jīng)離心和過濾進(jìn)行凈化。膠原溶液的PH值用三羥甲基氨基甲烷(Tris base)調(diào)整到9.0，，而最終濃度是1M尿素，然后過渡到DEAE-瓊脂糖FF欄(6L)。通過添加HCl和NaCl合成人體I型膠原從DEAE徑流沉淀出來。沉淀物通過TFF和離心過濾濃縮，然后溶解在0.1M的HCl中。膠原溶液然后通過0.2μm的薄膜過濾得以凈化然后用10mm的HCl進(jìn)行稀釋。將合成人類I型膠原通過0.2μm的薄膜過濾器進(jìn)行無菌過濾，然后存儲在4-8℃的環(huán)境里。
膠原纖維的形成來源于合成人類III型膠原和合成人類I型膠原。原纖維生產(chǎn)緩沖劑(0.2M Na2HPO4，pH 11.2)被以1∶10(v/v)的比例添加到0.3％(3mg/ml)的合成人類III型膠原溶液和0.3％的合成人類I型膠原溶液中。將溶液在室溫下培養(yǎng)4到過夜。然后以15,000×g進(jìn)行30分鐘的離心過濾從而得到合成人類III型膠原纖維和合成人類I型膠原纖維。
重新懸浮顆粒在PBS里，同原先的量，然后按以前一樣進(jìn)行離心過濾。合成顆粒轉(zhuǎn)移到10cc的注射器里(Becton，Dickinson和Co.，F(xiàn)ranklinLakes NJ)，通過一個(gè)Luer Lok-to-Luer Lok連接體(Baxa，Englewood CO)連接到含1/5th容量0.9％NaCl(Irrigation USP；Braun-McGaw，DetroitMI)的10cc的注射器里。合成膠原通過連接體被移入第二個(gè)注射器，氣泡被從膠原懸浮液中移除，然后合成膠原被在注射器之間轉(zhuǎn)移20次。連接體被一個(gè)18G微乳化針?biāo)娲?Popper Precision Instruments，LincolnRI)，合成膠原通過針大約20次以便進(jìn)一步使材料均勻。混合物在0.9％的PBS中被調(diào)整成含35毫克/毫升膠原和3毫克/毫升利多卡因(鹽酸利多卡因，USP；Wyckoff Chemical Co，Inc.，South Haven MI)，膠原混合物按之前通過一個(gè)18G的針。最后均質(zhì)的合成膠原被存放在4℃的環(huán)境里。
實(shí)施例2合成人類膠原(體外)的持久性檢測到膠原酶對實(shí)質(zhì)上無分子間和分子內(nèi)交聯(lián)的合成人類III型膠原和合成人類I型膠原有影響?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)，又稱膠原酶，是一種能夠分解三螺旋狀膠原的酶。MMP-1(基質(zhì)金屬蛋白酶-1，成纖維細(xì)胞膠原酶)和MMP-8(膠原酶2，嗜中性膠原酶)均可分解三螺旋狀I(lǐng)型、II型和III型膠原。
合成第一型膠原質(zhì)和合成第三型膠原質(zhì)按照上述例1的描述配制。MMP-I-前酶和MMP-8可從EMB生物科學(xué)(加利福尼亞圣地亞哥)處獲得。根據(jù)由生產(chǎn)商提供的程序書，MMP-1由前酶轉(zhuǎn)換成了活性酶。每一個(gè)被使用的MMP都分別建立反應(yīng)。在37攝氏度情況下，每小時(shí)培育一毫升2mg/mL膠原質(zhì)、50mM分離膠緩沖液(PH7.0)、300mM NaCl、5mMCaCI2、0.001mM ZnCI2、0.05％Brij-35和0.05％NaN3。從每次反應(yīng)中移走200μL，然后添加0.5μg MMMP-1或MMP-8(100-500mU/mg活度)，再一次在37攝氏度的溫度下發(fā)生反應(yīng)。在發(fā)生反應(yīng)后1、2和7后，從每個(gè)里面移走200μL，每200μL冷卻20％以上的乙醇和10％以上的三氯乙酸，然后制成顆粒狀物。顆粒狀物懸浮在200μL10mMHCL中，經(jīng)過SDS-PAGE分餾以判定合成膠原質(zhì)的降解范圍。結(jié)果在IA和IB中列出。
從IA和IB的數(shù)據(jù)中可以看出，兩種合成膠原質(zhì)(第一型膠原質(zhì)和合成第三型膠原質(zhì))分為MMP-1(圖形IA)和MMP-8(圖形IB)。但是，合成第一型膠原質(zhì)的MMP分解率和范圍實(shí)質(zhì)高于合成第三型膠原質(zhì)。
就合成第三型膠原質(zhì)而言，分解率低于觀察得知合成第一型膠原質(zhì)的分解率。MMP-1對合成第三型膠原質(zhì)的降解程度高于MMP-8，這一點(diǎn)是是可以預(yù)計(jì)的，因?yàn)榈谌湍z原質(zhì)有更高專一性。本數(shù)據(jù)顯示膠原質(zhì)實(shí)體沒有分子間的和分子內(nèi)的交聯(lián)，證明了對膠原酶降解的一定的抵制作用。這些結(jié)果表明膠原質(zhì)體沒有分子間的和分子內(nèi)的交聯(lián)，可以用于各種組織加強(qiáng)程序。結(jié)果進(jìn)一步表明合成第三型膠原質(zhì)比合成第一型膠原質(zhì)更能夠有效抵制膠原酶的降解，這表明合成第三型膠原質(zhì)比合成第一型膠原質(zhì)有更強(qiáng)的持久性。
實(shí)施例3合成膠原質(zhì)體內(nèi)持久性移入的合成第一型膠原質(zhì)和合成第三型膠原質(zhì)的持久性被調(diào)查如下Wistar鼠(Charles River實(shí)驗(yàn)室國際有限公司)被剃毛，并且為了注射，在移入的前一天，標(biāo)示出了8里面×6里面的區(qū)域。純凈的膠原質(zhì)配制在10mM HCL中，其密度為3mg/mL，與1/10*0.2M NaPO4PH 11相混合。膠原質(zhì)纖維懸浮在濃度為35g/m的1PBS中15分鐘，添加利多卡因直到濃度為3mg/ml。
植入是通過在背側(cè)皮下注射0.5毫升的35毫克/毫升的合成人類I型膠原、合成人類III型膠原或I型牛膠原(VITROGEN，CohesionTechnologies)懸浮液來完成。膠原懸浮液是通過使用一個(gè)1cc注射器和一個(gè)28計(jì)針注入。每一動(dòng)物都接受3次膠原材料注射。對于試驗(yàn)的每一膠原材料，在本發(fā)明研究開始共有9個(gè)植入物(3只鼠，3個(gè)植入物/鼠)。在下列時(shí)間點(diǎn)對三個(gè)動(dòng)物每一試驗(yàn)材料都做了植入后分析植入后2天、4周、8周、13周、26周和52周。植入物被手術(shù)移除，同周圍組織切開來，并就外觀和質(zhì)地進(jìn)行宏觀檢查。在植入每種合成人類膠原后基本上無炎癥或組織反應(yīng)。
在本技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中，膠原植入物的持久性是通過確定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的注射位點(diǎn)存在的原植入物的數(shù)量來估定。數(shù)據(jù)總結(jié)在如下的表1內(nèi)，作為每個(gè)時(shí)間點(diǎn)總植入物剩余數(shù)/原植入物數(shù)量。令人意外的是，包含實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的I型膠原的所有原植入物和包含實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的III型膠原的所有原植入物均在第13周呈現(xiàn)。而且，包含III行膠原的植入物的持久性明顯比包含I型膠原的植入物的要強(qiáng)的多，這些植入物的半數(shù)以上在第52周時(shí)都存留著。
表1
這些結(jié)果顯示，首先，實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的膠原在植入后持久性大大增強(qiáng)，因此適用于各種各樣的組織充填應(yīng)用。此外，這些結(jié)果說明，III型膠原的持久性比I型膠原的要強(qiáng)，只含III型膠原的合成物，或主要為III型膠原的膠原可帶來出人意料的好處，例如，持久性增強(qiáng)。
除了這里所顯示和描述的外，各種各樣對本發(fā)明的改進(jìn)對于前述說明所描述的所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將變得明顯。這些改進(jìn)屬于從屬權(quán)利要求的范圍。
這里所引用的所有參考這里都全部并入?yún)⒖肌?br> 序 列 表<110>菲布羅根公司<120>植入式膠原合成物<130>FP0305 PCT<150>US 10/985,570<151>2004-11-10<160>3<170>PatentIn version 3.2<210>1<211>1466<212>PRT<213>Homo sapiens<400>1Met Met Ser Phe Val Gln Lys Gly Ser Trp Leu Leu Leu Ala Leu Leu1 5 10 15His Pro Thr Ile Ile Leu Ala Gln Gln Glu Ala Val Glu Gly Gly Cys20 25 30Ser His Leu Gly Gln Ser Tyr Ala Asp Arg Asp Val Trp Lys Pro Glu35 40 45Pro Cys Gln Ile Cys Val Cys Asp Ser Gly Ser Val Leu Cys Asp Asp50 55 60Ile Ile Cys Asp Asp Gln Glu Leu Asp Cys Pro Asn Pro Glu Ile Pro65 70 75 80Phe Gly Glu Cys Cys Ala Val Cys Pro Gln Pro Pro Thr Ala Pro Thr85 90 95Arg Pro Pro Asn Gly Gln Gly Pro Gln Gly Pro Lys Gly Asp Pro Gly100 105 110Pro Pro Gly Ile Pro Gly Arg Asn Gly Asp Pro Gly Ile Pro Gly Gln115 120 125Pro Gly Ser Pro Gly Ser Pro Gly Pro Pro Gly Ile Cys Glu Ser Cys130 135 140Pro Thr Gly Pro Gln Asn Tyr Ser Pro Gln Tyr Asp Ser Tyr Asp Val145 150 155 160Lys Ser Gly Val Ala Val Gly Gly Leu Ala Gly Tyr Pro Gly Pro Ala165 170 175Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Thr Ser Gly His Pro Gly180 185 190Ser Pro Gly Ser Pro Gly Tyr Gln Gly Pro Pro Gly Glu Pro Gly Gln195 200 205Ala Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Ala Ile Gly Pro Ser
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權(quán)利要求
1.一種包含膠原的植入式膠原合成物，其中膠原包含III型膠原。
2.如權(quán)利要求1所述的植入式合成物，其中III型膠原為人類III型膠原。
3.如權(quán)利要求1所述的植入式合成物，其中III型膠原為合成III型膠原。
4.如權(quán)利要求1所述的植入式合成物，其中植入式合成物選自如下群組皮膚填充劑、骨間隙填充材料和牙科植入材料。
5.如權(quán)利要求1所述的植入式合成物，其中植入式合成物適用于組織充填。
6.如權(quán)利要求5所述的植入式合成物，其中組織充填為軟組織充填。
7.如權(quán)利要求5所述的植入式合成物，其中組織充填為硬組織充填。
8.一種植入式膠原合成物，其中膠原包含至少60％的III型膠原。
9.一種植入式膠原合成物，其中膠原實(shí)質(zhì)上無分子間和分子內(nèi)交聯(lián)。
10.如權(quán)利要求9所述的植入式合成物，其中膠原為合成膠原。
11.如權(quán)利要求9所述的植入式合成物，其中膠原為纖維狀膠原。
12.如權(quán)利要求9所述的植入式合成物，其中膠原選自如下群組I型膠原、II型膠原和III型膠原。
13.一植入式膠原合成物，其中膠原實(shí)質(zhì)上無內(nèi)源性交聯(lián)。
14.在一個(gè)體里充填軟組織的一種方法，該方法包括在充填位點(diǎn)對該個(gè)體使用膠原合成物，其中膠原包含III型膠原，從而達(dá)到加強(qiáng)軟組織強(qiáng)度的目的。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中該主體為人。
16.如權(quán)利要求14所述的方法，其中通過注射用藥。
17.如權(quán)利要求14所述的方法，其中用藥方法選自如下方法表皮下用藥，真皮下用藥和真皮內(nèi)用藥。
18.在一個(gè)體里充填軟組織的一種方法，該方法包括在充填位點(diǎn)對該主體使用膠原合成物，其中膠原包含至少60％的III型膠原，從而達(dá)到加強(qiáng)軟組織強(qiáng)度的目的。
19.在一個(gè)體里充填軟組織的一種方法，該方法包括在充填位點(diǎn)對該主體使用膠原合成物，其中膠原實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)，從而達(dá)到加強(qiáng)軟組織強(qiáng)度的目的。
20.一種備制植入式膠原合成物的方法，該方法包括提供一種實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的膠原，進(jìn)行膠原交聯(lián)，從而備制成一種植入式膠原合成物。
21.一種備制植入式膠原合成物的方法，該方法包括提供一種包含III型膠原的膠原，備制所述膠原為水溶液，從而備制成一種植入式膠原合成物。
22.一種備制植入式膠原合成物的方法，該方法包括提供一種包含至少60％III型膠原的膠原，備制所述膠原為水溶液，從而備制成一種植入式膠原合成物。
23.一種備制植入式膠原合成物的方法，該方法包括提供一種實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的膠原，備制所述膠原為水溶液，從而備制成一種植入式膠原合成物。
24.一種備制植入式膠原合成物的方法，該方法包括提供一種實(shí)質(zhì)上無分子內(nèi)和分子間交聯(lián)的膠原，進(jìn)行膠原交聯(lián)，備制所述已交聯(lián)的膠原為水溶液，從而備制成一種植入式膠原合成物。
25.一個(gè)對加強(qiáng)軟組織強(qiáng)度有用的工具箱，該工具箱包含含III型膠原的膠原、一個(gè)注射器和一針。
全文摘要
本發(fā)明涉及適用于多種組織充填方法的膠原組合物。
文檔編號A61L31/04GK101084023SQ200580043634
公開日2007年12月5日 申請日期2005年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月10日
發(fā)明者D·R·奧爾森, J·W·波拉雷克, 楊春林 申請人:菲布羅根公司