專利名稱：去糖基化的和去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白ptx3的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及部分地或完全地去糖基化的長五聚環(huán)蛋白(pentraxin)PTX3。
更具體地，本發(fā)明涉及去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3和去唾液酸的(desialidated)長五聚環(huán)蛋白PTX3，它們的類似物和衍生物，它們的制備方法，含有這些物質(zhì)的藥物組合物，和它們在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于治療有使用長五聚環(huán)蛋白PTX3指征的疾病，尤其是感染性疾病，炎性疾病，包括自身免疫病和由組織梗死造成的疾病，骨和軟骨疾病，以及用于治療女性生育障礙，和用于治療腫瘤的自體疫苗。
背景技術(shù)：
通過差示篩選從由經(jīng)受IL1β處理的人內(nèi)皮細胞(HUVEC)組成的cDNA噬菌體文庫，鑒定出長五聚環(huán)蛋白PTX3(Breviario等，1992，J.Biol.Chem.，26722190-22197)。它的核苷酸序列公開在NCBI數(shù)據(jù)庫中，登錄號為X63613。PTX3的cDNA編碼381個氨基酸殘基的蛋白，其特征在于用于分泌的信號肽(殘基1-17)、N-末端結(jié)構(gòu)域(殘基18-178)和C-末端結(jié)構(gòu)域(殘基179-381)。人長五聚環(huán)蛋白PTX3的基因作圖在染色體3的q25.2區(qū)，且特征在于位于6.72kb基因組DNA上的3個外顯子。
通過還原條件下的SDS-PAGE分析，從用含有PTX3的人cDNA的質(zhì)粒載體pSG5h-PTX3穩(wěn)定感染的CHO細胞的上清液純化出的重組PTX3表現(xiàn)出45kDa的表觀分子量(Bottazzi等，J.Biol.Chem.，1997；27232817-32823)。它的氨基酸序列表現(xiàn)出在殘基220處的潛在糖基化位點。用N-糖苷酶F處理PTX3，會導(dǎo)致它的分子量降低至約42kDa(通過SDS-PAGE估計)，這與在單獨的氨基酸序列的基礎(chǔ)上計算出的值相一致。
該結(jié)果證實，PTX3被占分子量的約12％的糖供量N-糖基化。通過非還原條件下的SDS-PAGE分析蛋白，產(chǎn)生約450kDa的分子量(Bottazzi等，J.Biol.Chem.，1997；27232817-32823)。這些結(jié)果清楚地表明，PTX3通過在單個單體的半胱氨酸殘基之間形成分子間二硫橋，主要構(gòu)成十聚體結(jié)構(gòu)。
但是，在上述論文中提出的去糖基化方案不允許制備功能上有活性的PTX3，考慮到下述事實，即為此，蛋白的二硫橋的變性和還原都是必需的。
根據(jù)Bottazzi等的方法得到的蛋白不能用作藥物，其已經(jīng)喪失了它的功能特征。但是，沒有提出去糖基化的五聚環(huán)蛋白的應(yīng)用。
本發(fā)明通過提供功能上有活性的去糖基化的五聚環(huán)蛋白PTX3，解決了該問題。
關(guān)于五聚環(huán)蛋白的綜述，見H.Gewurz等，Current Opinion inImmunology，1995，754-64。
PTX3的以前的用途是眾所周知的。
以本申請人的名義提交的國際專利申請WO 99/32516公開了長五聚環(huán)蛋白PTX3和它在感染性或炎性疾病或腫瘤的治療中的應(yīng)用。
WO 02/38169公開了長五聚環(huán)蛋白PTX3在制備用于治療與生長因子FGF-2的異常激活有關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
在WO 02/36151中，公開了使用長五聚環(huán)蛋白PTX3治療自身免疫病。
WO 03/011326公開了長五聚環(huán)蛋白PTX3在治療女性不育癥中的應(yīng)用。
WO 03/084561公開了長五聚環(huán)蛋白PTX3在制備用于治療與生長因子FGF-8的異常激活有關(guān)的腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
WO 03/072603公開了長五聚環(huán)蛋白PTX3在制備用于治療腫瘤的自體疫苗中的應(yīng)用。
PTX3與短五聚環(huán)蛋白CRP和SAP都具有結(jié)合Clq的能力，所述Clq是補體系統(tǒng)的組成成分。PTX3向Clq的結(jié)合的飽和Kd為7.4×10-8M。使用BIAcore進行的PTX3和Clq之間的生物分子相互作用的動力學(xué)研究，已經(jīng)可以測量2.4×105M-1s-1的Kon和4×10-4s-1的Koff(Bottazzi等，J.Biol.Chem，，1997；27232817-32823)。
PTX3和短五聚環(huán)蛋白之間的序列同源性的對比分析，已經(jīng)揭示了PTX3的C-末端結(jié)構(gòu)域與CRP和SAP的整個序列的顯著同源性(Breviario等，1992，J.Biol.Chem.，26722190-22197)。CRP和SAP都能競爭Clq向PTX3的結(jié)合，暗示著五聚環(huán)蛋白識別Clq上的相同區(qū)域，且PTX3的C-末端結(jié)構(gòu)域是Clq的結(jié)合位點。體外研究已經(jīng)證實，PTX3可激活經(jīng)典補體途徑。
實驗和臨床證據(jù)表明，補體的功能異常伴隨著更傾向于受到病原體感染，從而證實了該先天免疫系統(tǒng)在保護免受感染中的基本功能(Roos等，2002，Immunobiol.，205595-609)。于是，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，強烈地感受到需要能加強和放大對補體-介導(dǎo)的微生物感染的免疫應(yīng)答的藥物。
另外，本領(lǐng)域的專家正在尋找具有增加活性且能與其它藥物協(xié)同作用的藥物。
發(fā)明描述現(xiàn)在已經(jīng)令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，從糖苷鏈的末端去除唾液酸，或完全去除PTX3的糖苷基，會非常顯著地提高該蛋白激活經(jīng)典補體途徑的能力。
還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，缺乏唾液酸的(去唾液酸的)PTX3和去糖基化的PTX3是有用的試劑，可以以低于未經(jīng)修飾的PTX3所用的劑量，用于預(yù)防或治療感染性疾病，尤其是真菌、細菌或病毒感染。還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，缺乏唾液酸的(去唾液酸的)PTX3和去糖基化的PTX3可以用于預(yù)防或治療已經(jīng)用天然存在的PTX3治療的疾病，尤其是炎性疾病，包括自身免疫病，腫瘤，由生長因子FGF-2的異常激活引起的疾病，女性生育障礙，骨和軟骨疾病，和用于制備治療腫瘤的自體疫苗。
還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，去糖基化和去唾液酸的PTX3可以有利地用于針對病原體的預(yù)防性疫苗接種，表現(xiàn)出有利于適應(yīng)型免疫應(yīng)答的傾向。
因此，本發(fā)明的一個目的是去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3，或它的功能上有活性的類似物或衍生物之一。
本發(fā)明的另一個目的是去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3，或它的功能上有活性的類似物或衍生物之一。本發(fā)明的另一個目的包括制備上述蛋白的方法。
本發(fā)明的另一個目的包括藥物組合物，其含有作為活性成分的去糖基化的或去唾液酸的五聚環(huán)蛋白PTX3、或它們的功能類似物或衍生物之一，和至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑和/或載體。
本發(fā)明的另一個目的是去糖基化的或去唾液酸的長PTX3、或它們的功能類似物或衍生物之一在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物能結(jié)合補體，尤其是用于治療細菌、真菌、原生動物或病毒起源的感染性疾病。
本發(fā)明的另一個目的是去糖基化的或去唾液酸的長PTX3作為針對病原體和抗原的預(yù)防性疫苗接種的佐劑的應(yīng)用。
現(xiàn)在，將詳細公開本發(fā)明，也借助于實施例和附圖，其中

圖1顯示了用內(nèi)切糖苷酶F3去糖基化的五聚環(huán)蛋白的電泳遷移率。
圖2顯示了用唾液酸酶A去唾液酸的五聚環(huán)蛋白的電泳遷移率。
圖3A和3B分別例示了去糖基化的和去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白向Clq的結(jié)合測定。
圖4例示了補體激活測定。
發(fā)明詳述″去糖基化的或去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3″指任意的PTX3，無論它的天然的(人或非人的)或重組的來源。這些五聚環(huán)蛋白PTX3記載在文獻中見，例如，本申請人的專利參考文獻和其中引用的文獻目錄。
″去糖基化的或去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3″的衍生物或類似物指所述五聚環(huán)蛋白的攜帶至少一個突變、且保留結(jié)合和激活Clq的能力的功能類似物，或能模擬PTX3的線性或構(gòu)象結(jié)構(gòu)域、且保留結(jié)合和激活Clq的功能能力的肽的或模擬肽的(peptidomimetic)衍生物。
功能上有活性的去糖基化的或去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3指保留天然存在的五聚環(huán)蛋白的生物學(xué)能力(尤其是它的補體結(jié)合能力)的那些產(chǎn)物。
關(guān)于衍生物或類似物的描述，見WO 03/38151。
優(yōu)選的去糖基化的或去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3是人的，其序列公開在WO 99/32516。
制備去糖基化的五聚環(huán)蛋白的方法包括對長五聚環(huán)蛋白PTX3的去糖基化。
起始長五聚環(huán)蛋白PTX3是一種已知的蛋白，得到它的方法也是已知的。
任意的蛋白去糖基化方法都適用于該目的，條件是，它不應(yīng)誘發(fā)五聚環(huán)蛋白活性的任何喪失或?qū)嵸|(zhì)性改變。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，該方法包括用內(nèi)切糖苷酶EndoF3處理長五聚環(huán)蛋白PTX3。
可選地，本發(fā)明也提供了制備去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3的方法，其包括，在有糖基化抑制劑存在下，培養(yǎng)表達長五聚環(huán)蛋白PTX3的細胞。一種優(yōu)選的抑制劑是衣霉素。表達五聚環(huán)蛋白的細胞是本領(lǐng)域已知的，且可以在本領(lǐng)域?qū)＜业囊话阒R的基礎(chǔ)上容易地得到。這樣的細胞的實例是用人PTX3的cDNA轉(zhuǎn)染的細胞，例如CHO(中國倉鼠卵巢)細胞。
類似地，任意的蛋白去唾液酸方法適用于該目的，條件是，該方法不應(yīng)誘發(fā)五聚環(huán)蛋白活性的任何喪失或?qū)嵸|(zhì)性改變。一種可能的實例是使用去唾液酸酶A。
類似地，可以使用適用于該目的的任意的蛋白質(zhì)工程方法，例如，生產(chǎn)通過破壞糖基化位點誘變的重組PTX3，條件是，該方法不應(yīng)誘發(fā)五聚環(huán)蛋白活性的任何喪失或?qū)嵸|(zhì)性改變。
本發(fā)明提供了去糖基化的和去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3或它們的功能類似物或衍生物作為藥物的應(yīng)用。
感染性疾病指由細菌、真菌、原生動物或病毒感染造成的疾病。
自身免疫病的實例是系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，多發(fā)性硬化(MS)，關(guān)節(jié)炎，糖尿病，甲狀腺炎，溶血性貧血，萎縮性睪丸炎，古德帕斯徹氏病，自身免疫性視網(wǎng)膜病，自身免疫性血小板減少癥，重癥肌無力，原發(fā)性膽汁性肝硬化，攻擊型慢性肝炎，潰瘍性結(jié)腸炎，皮炎，慢性腎小球腎炎，斯耶格倫氏綜合征，萊特爾氏綜合征，肌炎，全身性硬化癥和多關(guān)節(jié)炎。
組織梗死指心臟或腦梗死。
女性生育治療指去糖基化的或去唾液酸的PTX3在提高需要這樣的治療的女性的生育力中的任何應(yīng)用。
更具體地，本發(fā)明提供了去糖基化的或去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3在制備能結(jié)合補體的藥物中的應(yīng)用。
一個優(yōu)選的應(yīng)用涉及用于預(yù)防或治療感染性疾病的藥物。
更具體地，所述疾病中的感染因子是細菌、真菌、原生動物或病毒。
本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案涉及真菌曲霉，尤其是煙曲霉(Aspergillus fumigatus)。
本發(fā)明的另一個方面是用于治療真菌感染的藥物，其包含去糖基化的或去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3和抗真菌劑(優(yōu)選地，兩性霉素類，例如兩性霉素B，更具體地作為脫氧膽酸鹽或在脂質(zhì)體制劑中)的組合。該制劑是本發(fā)明的另一個目的。
還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，去糖基化的和/或去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3可以用作針對選擇的病原體或抗原的預(yù)防性疫苗接種的佐劑，這構(gòu)成本發(fā)明的另一個目的。
含有作為佐劑的所述去糖基化的和/或去唾液酸的蛋白的疫苗，可以有利地用于對抗致病因子，例如細菌、真菌、原生動物或病毒，或它們的抗原之一。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方案中，致病因子是真菌，尤其是曲霉，且更具體地是煙曲霉，以及它的抗原之一。
除了含有去糖基化的和/或去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3作為佐劑以外，根據(jù)本發(fā)明的疫苗利用具有本領(lǐng)域經(jīng)驗的技術(shù)人員已知的完全常規(guī)的方法制備，因此不需要進一步解釋。
下面給出了多個進一步解釋本發(fā)明的實施例。
實施例1制備去糖基化的PTX3用內(nèi)切糖苷酶EndoF3處理從CHO細胞的上清液純化出的PTX3(所述CHO細胞被含有PTX3的人cDNA的質(zhì)粒載體pSG5hPTX3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(如在Bottazzi等，J.BioL Chem.1997；27232817-32823中所公開的))，以去除除了結(jié)合到天冬酰胺220上的N-乙酰葡糖胺殘基以外的整個糖苷鏈。
更具體地，將PTX3與內(nèi)切糖苷酶F3一起溫育，已知所述內(nèi)切糖苷酶F3會選擇性地水解存在于N-連接的雙-和三觸角的復(fù)合物類型的寡糖核中的2個GlcNac殘基之間的糖苷β鍵(1→4)。內(nèi)切糖苷酶F3在酸性pH值發(fā)揮它的最大催化活性?；赑TX3的溶解性特征，優(yōu)化使用pH 5.5的磷酸鹽緩沖液。在實驗中使用的內(nèi)切糖苷酶F3來自在大腸桿菌中作為重組蛋白表達的腦膜膿毒性金黃桿菌(腦膜膿毒性黃桿菌)的cDNA(Sigma Aldrich代碼E2264)。通過它在SDS-PAGE中的電泳遷移率變化(見圖1)，評價純化的PTX3的糖的酶促水解。向在7μl無菌水中的約10μg PTX3加入2μl磷酸鹽緩沖液pH 5.5(5x)(NaH2PO4250mM)和從母液(Sigma Aldrich)中取出的1μl內(nèi)切糖苷酶F3。將混合物在37℃溫育12小時。該反應(yīng)可以規(guī)模放大到1mg PTX3。
通過凝膠過濾色譜(Superose 6 PHARMACIA)，純化這樣得到的去糖基化的PTX3，其目的是去除糖苷酶和糖。如Bottazzi等，J.Biol，Chem.1997；27232817-32823所公開的，完成SDS-PAGE凝膠過濾。
實施例2制備去糖基化的PTX3用蛋白的糖基化抑制劑，例如衣霉素(Sigma Aldrich)，處理在實施例1中所述的生產(chǎn)PTX3的CHO細胞。
如在Bottazzi等J.Biol Chem 1997；27232817-32823中所公開的，純化這樣得到的去糖基化的PTX3。
用于蛋白的去糖基化或去糖基化蛋白的產(chǎn)生的不會改變它們的功能能力的任何其它已知方法都適用于本發(fā)明的目的。
實施例3制備去唾液酸的PTX3使用從用含有PTX3的人cDNA的質(zhì)粒載體pSG5h-PTX3穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的CHO的上清液純化的PTX3。
用唾液酸酶A處理PTX3。使用的唾液酸酶A[α(2-＞3，6，8，9)神經(jīng)氨酸酶]來自在大腸桿菌中作為重組蛋白表達的產(chǎn)脲節(jié)桿菌的cDNA(SIGMA Aldrich代碼N8271)。也通過SDS-PAGE分析它的電泳遷移率變化(見圖2)，評價了PTX3的去唾液酸化。
通過凝膠過濾色譜(Superose 6 PHARMACIA)，純化這樣得到的去唾液酸的PTX3，其目的是去除糖苷酶和糖。
用于蛋白的去唾液酸化或去唾液酸蛋白的產(chǎn)生的不會改變它們的功能能力的任何其它已知方法都適用于本發(fā)明的目的。
實施例4去糖基化的PTX3結(jié)合Clq的測定用0.5μg/ml Clq(CALBIOCHEM)處理Maxisorp(NUNC)平板，其目的是將蛋白吸附到孔的內(nèi)表面上。隨后在磷酸鹽緩沖液(GIBCO)中洗滌后，將孔與圖3所示劑量的去糖基化的PTX3一起在磷酸鹽緩沖液中溫育1小時。
使用生物素化的抗-PTX3多克隆抗體，鏈霉抗生物素-HRP(PHARMACIA)，并用TMB染色，確定與Clq結(jié)合的PTX3的相對量。
去糖基化的PTX3表現(xiàn)出向Clq的結(jié)合，比未用糖苷酶處理的PTX3高約4倍(圖3A)。
實施例5去唾液酸的PTX3結(jié)合Clq的測定在與前面實施例所述相同的實驗條件下，以圖3B所示的劑量，進行去唾液酸的PTX3結(jié)合Clq的測定。
在該情況下，同樣地，去唾液酸的PTX3表現(xiàn)出向Clq的結(jié)合，比未用去唾液酸酶處理的PTX3高約2倍(圖3B)。
實施例6評價去唾液酸的PTX3激活經(jīng)典補體途徑的能力以5μg/ml的濃度(碳酸鹽緩沖液0.1M pH 9.6)，將去唾液酸的PTX3吸附到96-孔Maxisorp平板上。隨后，用不同稀釋百分比的作為補體來源的人血清(NHS)處理孔。如Nauta等在Eur.J.Immunology，2003，33465-473中所公開的，使用抗-C4抗體(C4-4°)，測量作為補體激活的結(jié)果而沉積在平板上的C4的量。
沉積在吸附去唾液酸的PTX3的平板上的C4的量比吸附對照PTX3的平板高約8倍(圖4)。該結(jié)果表明，去唾液酸的PTX3在補體激活能力方面比未經(jīng)修飾的PTX3更有活性。
實施例7評價去糖基化的PTX3激活經(jīng)典補體途徑的能力在與實施例6所述用于去唾液酸的PTX3的相同的實驗條件下，測試去糖基化的PTX3。
得到的結(jié)果與用去唾液酸的PTX3得到的結(jié)果相當。
關(guān)于與工業(yè)實用性有關(guān)的方面，去糖基化的或去唾液酸的PTX3，或它們的肽的或模擬肽的衍生物，將會是藥物組合物的形式，其中活性成分被藥學(xué)上可接受的賦形劑和/或載體所溶解和/或運載，所述賦形劑和/或載體例如無菌水、羧甲基纖維素或本領(lǐng)域?qū)＜乙阎钠渌x形劑。
可用于去糖基化的或去唾液酸的PTX3的藥物組合物的實例與對長五聚環(huán)蛋白PTX3公開的那些(在WO 99/32516中)相同。
藥物組合物的其它實例是那些，其允許通過靜脈內(nèi)的、肌肉內(nèi)的、皮下的、透皮的、直腸的或陰道的途徑來經(jīng)口地或腸胃外地給藥。適用于該目的的藥物組合物是片劑和硬膠囊或軟膠囊，栓劑，囊泡(ovule)，粉末，溶液，懸浮液，糖漿劑，或用于制備即時液體的固體形式。用于腸胃外給藥的組合物是，例如，所有的肌肉內(nèi)的、靜脈內(nèi)的和皮下的可注射的形式，以溶液、懸浮液或乳劑的形式。也應(yīng)提及脂質(zhì)體形式。還包括用于控制釋放活性成分的形式，作為經(jīng)口給藥形式，包有適當涂層的片劑，微囊化的粉末，環(huán)糊精復(fù)合物，長效(depot)形式，例如皮下的，或作為長效注射劑或植入物。用于氣霧劑給藥的組合物可以構(gòu)成一種優(yōu)選的給藥形式。
日劑量取決于初級護理醫(yī)師在患者的體重、年齡和一般狀況基礎(chǔ)上的判斷。
應(yīng)當指出，可以使用藥劑師和制藥技術(shù)領(lǐng)域的專家非常熟悉的普通技術(shù)和裝置，制備所述藥物組合物(包括緩釋形式)。作為參考，本領(lǐng)域的專家可以參考普通文獻，例如最新版的Remington′sPharmaceutical Sciences Handbook，Mack Pub.N.Y.。關(guān)于疫苗，讀者可以參考具體的文獻，例如國際專利申請WO 03/011903和PCT/IT03/00162。
權(quán)利要求
1.去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3或它的功能上有活性的類似物或衍生物之一。
2.去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3或它的功能上有活性的類似物或衍生物之一。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的長五聚環(huán)蛋白PTX3，它是天然的人或非人的來源或重組的來源。
4.制備根據(jù)權(quán)利要求1的去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3的方法，包括對長五聚環(huán)蛋白PTX3的去糖基化。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中用內(nèi)切糖苷酶EndoF3進行所述去糖基化。
6.制備根據(jù)權(quán)利要求1的去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3的方法，包括在有糖基化抑制劑存在下，培養(yǎng)表達長五聚環(huán)蛋白PTX3的細胞。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所述抑制劑是衣霉素。
8.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中通過誘變PTX3的糖基化位點，得到所述去糖基化。
9.制備根據(jù)權(quán)利要求2的去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3的方法，包括對長五聚環(huán)蛋白PTX3的去唾液酸化。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中用唾液酸酶A進行所述去唾液酸化。
11.根據(jù)權(quán)利要求4-8中的任一項的方法，其中純化去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3。
12.根據(jù)權(quán)利要求9-10中的任一項的方法，其中純化去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3。
13.根據(jù)權(quán)利要求11或12的方法，其中通過凝膠過濾色譜進行所述純化。
14.藥物組合物，其含有與至少一種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑相混合的根據(jù)權(quán)利要求1或3的去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3或它的功能類似物或衍生物之一。
15.藥物組合物，其含有與至少一種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑相混合的根據(jù)權(quán)利要求2或3的去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3或它的功能類似物或衍生物之一。
16.根據(jù)權(quán)利要求1或3的去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3、或根據(jù)權(quán)利要求2或3的去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白、或它們的功能類似物或衍生物之一在制備藥物中的應(yīng)用。
17.根據(jù)權(quán)利要求1或3的去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3、或根據(jù)權(quán)利要求2或3的去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白、或它們的功能類似物或衍生物之一在制備能結(jié)合補體的藥物中的應(yīng)用。
18.根據(jù)權(quán)利要求1或3的去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3、或根據(jù)權(quán)利要求2或3的去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白、或它們的功能類似物或衍生物之一在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于預(yù)防或治療有使用長五聚環(huán)蛋白PTX3指征的疾病。
19.根據(jù)權(quán)利要求1或3的去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3、或根據(jù)權(quán)利要求2或3的去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白、或它們的功能類似物或衍生物之一在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于預(yù)防或治療感染性疾病。
20.根據(jù)權(quán)利要求1或3的去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3、或根據(jù)權(quán)利要求2或3的去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白、或它們的功能類似物或衍生物之一在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于預(yù)防或治療炎性疾病，包括自身免疫病，腫瘤，由生長因子FGF-2的異常激活引起的疾病，女性生育障礙，組織梗死，和骨或軟骨疾病。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的應(yīng)用，其中所述自身免疫病選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)，多發(fā)性硬化(MS)，關(guān)節(jié)炎，糖尿病，甲狀腺炎，溶血性貧血，萎縮性睪丸炎，古德帕斯徹氏病，自身免疫性視網(wǎng)膜病，自身免疫性血小板減少癥，重癥肌無力，原發(fā)性膽汁性肝硬化，攻擊型慢性肝炎，潰瘍性結(jié)腸炎，皮炎，慢性腎小球腎炎，斯耶格倫氏綜合征，萊特爾氏綜合征，肌炎，全身性硬化癥和多關(guān)節(jié)炎。
22.根據(jù)權(quán)利要求20的應(yīng)用，其中所述組織梗死選自心臟和腦梗死。
23.根據(jù)權(quán)利要求19的應(yīng)用，其中所述疾病中的感染因子是細菌、真菌、原生動物或病毒。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的應(yīng)用，其中所述真菌是曲霉。
25.根據(jù)權(quán)利要求24的應(yīng)用，其中所述真菌是煙曲霉。
26.去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3和/或去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3或它們的功能類似物或衍生物之一與抗真菌劑的組合。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的組合，其中所述抗真菌劑屬于兩性霉素類。
28.根據(jù)權(quán)利要求27的組合，其中所述兩性霉素是兩性霉素B，特別是作為脫氧膽酸鹽或在脂質(zhì)體制劑中。
29.藥物組合物，其含有與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑相混合的根據(jù)權(quán)利要求26-28中的任一項的組合。
30.根據(jù)權(quán)利要求26-28中的任一項的組合在制備用于預(yù)防或治療真菌感染的藥物中的應(yīng)用。
31.根據(jù)權(quán)利要求30的應(yīng)用，其中所述感染中的真菌是曲霉。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的應(yīng)用，其中所述真菌是煙曲霉。
33.根據(jù)權(quán)利要求1或3的去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3、或根據(jù)權(quán)利要求2或3的去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白作為針對病原體或抗原的預(yù)防性疫苗接種的佐劑的應(yīng)用。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的應(yīng)用，其中所述病原體是細菌、真菌、原生動物或病毒，或所述抗原源自細菌、真菌、原生動物或病毒。
35.根據(jù)權(quán)利要求34的應(yīng)用，其中所述真菌是煙曲霉，或所述抗原源自煙曲霉。疫苗，其特征在于，它含有作為佐劑的去糖基化的和/或去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3。
全文摘要
本發(fā)明公開了去糖基化的長五聚環(huán)蛋白PTX3和去唾液酸的長五聚環(huán)蛋白PTX3，以及它們的制備方法，含有它們的藥物組合物，和它們在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于治療有使用長五聚環(huán)蛋白PTX指征的疾病，尤其是感染性和炎性疾病，和女性生育障礙。這些蛋白被賦予了優(yōu)于糖基化的五聚環(huán)蛋白的治療活性。
文檔編號A61K38/17GK101035805SQ200580034247
公開日2007年9月12日 申請日期2005年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月8日
發(fā)明者R·德圣蒂斯, G·薩爾瓦托里, P·卡爾米納蒂, A·因福爾扎托 申請人:希格馬托制藥工業(yè)公司