專利名稱：：藥物輸送產(chǎn)品和方法
背景技術(shù)：
：藥物輸送系統(tǒng)是設(shè)計提供活性劑的生物相容的貯庫，用于根據(jù)時間或PH等局部條件控制活性劑的釋放。在例如皮膚貼、可植入的滲透泵和可植入的皮下貯庫(例如NORPLANTTM)的宏觀藥物輸送系統(tǒng)已經(jīng)取得了一定的成功的同時，人們也一直對例如微膠囊、微粒和脂質(zhì)體的微觀藥物輸送系統(tǒng)抱有興趣。微膠囊和微球體一般是由直徑2毫米或以下，通常直徑500微米或以下的球狀顆粒組成的粉劑。如果這些顆粒小于1微米，它們常常被稱為毫微膠囊或毫微球體。制備和使用微球體和微膠囊的方法的說明書可以找到，例如美國專利No.5,407,609。通過看活性劑是否在用高分子膜等封裝結(jié)構(gòu)包圍的中心核中形成，或者在顆粒中是否擴散，將微球體和微膠囊區(qū)分開來。也就是說，內(nèi)部結(jié)構(gòu)是活性劑和賦形劑的基質(zhì)，賦形劑通常是聚合賦形劑?；钚詣奈⒛z囊的釋放通常是由基質(zhì)材料的生物降解調(diào)節(jié)的，該基質(zhì)材料通常是作為聚合賦形劑的例如聚(DL-丙交酯)(DL-PL)或聚乳酸-聚羥基乙酸共聚物(poly(DL-lactide-co-glycolide))(DL-PLG)的可生物降解的聚合材料。脂質(zhì)體可以認為是微膠囊，在其中用類脂膜代替高分子膜來包裹活性劑核。脂質(zhì)體是由脂層組成的人工脂囊泡，其中抗原可以封入脂質(zhì)體的水性隔室，或者通過表面耦合技術(shù)與位于表面的抗原相連。脂質(zhì)體可以在對截流抗原是溫和的條件下大規(guī)模、容易地和便宜地制備。它們不會引起對自身的免疫反應(yīng)，用于人類非腸胃給藥。如果說微膠囊、微球體和脂質(zhì)體的高表面積/體積之比有助于活性劑的釋放，那么制備小的個體就是一個挑戰(zhàn)。制備微膠囊和微球體的多種方法在文獻中得到了說明，例如美國專利No.5,407,609。這些方法中的幾種利用了乳劑制備微球體，特別是直徑小于2毫米的微球體。這里給出這種方法的常規(guī)例，將聚合物溶解在合適的有機溶劑(聚合物溶劑)中，并將活性劑溶解或擴散在此聚合物溶液中。將得到的聚合物/活性劑混合物分散成水相(處理介質(zhì))以得到含有擴散在處理介質(zhì)中的油微滴的水包油乳劑，后從微滴中去除溶劑以形成微球體。這些方法也可以用油包水乳劑以及雙乳劑實現(xiàn)。按照此基本方法的基于乳劑方法的使用在幾個美國專利中得到說明，例如美國專利No.3,737,337、3,891,570、4,384,975、4,389,330，和4,652,441?；蛘?，提取的酵母細胞壁顆粒是容易得到的并可生物降解，大體上球狀顆粒直徑約為2-4μm。提取的酵母細胞壁顆粒的制備在本領(lǐng)域中是公知的并且有記載，例如美國專利No.4,992,540、5,082,936、5,028,703、5,032,401、5,322,841、5,401,727、5,504,079、5,968,811、6,444,448B1、6,476,003B1，和公開的美國申請2003/0216346A1、2004/0014715A1以及PCT公開申請WO02/12348A2。提取的酵母細胞壁顆粒的一種形式，稱作“完整葡聚糖顆?！?，已經(jīng)被建議作為輸送賦形劑，但是限于通過從顆粒中而來的活性成分的簡單擴散來釋放，或者化學(xué)交聯(lián)完整葡聚糖顆粒的活性劑通過顆?；|(zhì)的生物降解來釋放。參見美國專利No.5,032,401和5,607,677。主要由于其所含有的β-葡聚糖組合物，提取的酵母細胞壁顆粒標定到吞噬細胞，例如巨噬細胞和淋巴組織細胞。與粘膜相連的淋巴組織(MALT)包括所有位于上皮和身體粘膜表面下固有層中的淋巴細胞。與粘膜相連的淋巴組織的主要部位是與腸相連的淋巴組織(GALT)和與支氣管相連的淋巴組織(BALT)。GI免疫系統(tǒng)的另一個重要組成是M或微褶細胞。M細胞是能吞噬蛋白質(zhì)和肽抗原的淋巴囊上的腸上皮中的一類特殊的細胞。M細胞不消化這些蛋白質(zhì)，而是把它們輸送到下面的組織，在這里被樹突狀細胞和巨噬細胞所吸收。M細胞通過胞吞作用或吞噬作用從腸腔吸收分子和顆粒。然后這些物質(zhì)從囊內(nèi)細胞的內(nèi)部被輸送到基底細胞膜，從這里被釋放到細胞外部。這個過程被稱為穿胞作用。在其基底表面，M細胞膜圍繞下面的淋巴細胞和抗原呈遞細胞極度折疊，其吸收從M細胞釋放的輸送物質(zhì)并為抗原呈遞進行加工。有研究已經(jīng)證實，通過Peyer淋巴結(jié)的M細胞，酵母顆粒(直徑3.4+/-0.8微米)的穿胞作用需時小于1小時(Beier，R.，&Gebert，A.，KineticsofparticleuptakeinthedomesofPeyer′spatches，AmJPhysiol.1998Jul；275(1Pt1)G130-7)。如果沒有內(nèi)上皮巨噬細胞顯著的吞噬作用，酵母顆粒需要2.5-4小時內(nèi)遷移到基膜，在此，它們很快地被吞噬并從Peyer淋巴結(jié)頂轉(zhuǎn)移。人的鼻咽淋巴組織中發(fā)現(xiàn)的M細胞(扁桃腺和腺樣增殖體)出現(xiàn)于導(dǎo)致呼吸感染的病毒樣本中。一項體外M細胞模型的研究顯示熒光標記的微球體(熒光質(zhì)點，0.2微米)和殼聚糖微粒(0.2微米)的吸收，vanderLubbenI.M.，等人，TransportofchitosanmicroparticlesformucosalvaccinedeliveryinahumanintestinalM-cellmodel，JDrugTarget，2002Sep；10(6)449-56。一種外源凝集素，荊豆凝集素1(UEA1，特別對于α-L-海藻糖殘基)已經(jīng)用于將聚苯乙烯微球體(0.5微米)或聚合物脂質(zhì)體標定到M細胞(0.2微米)。(Clark，M.A.等，TargetingpolymerisedliposomevaccinecarrierstointestinalMcells，Vaccine.2001Oct12；20(1-2)208-17)。小鼠的體內(nèi)研究已經(jīng)顯示，多聚-D，L-乳酸(PDLLA)微球體或凝膠微球體(GM)可以被巨噬細胞和M細胞有效地吸收。(Nakase，H.，等，Biodegradablemicrospherestargetingmucosalimmune-regulatingcellsnewapproachfortreatmentofinflammatoryboweldisease，JGastroenterol.2003Mar；38Suppl1559-62)。但是，據(jù)報導(dǎo)，含有聚乳酸-乙交酯微粒和脂質(zhì)體的合成微粒輸送賦形劑的攝取是高度易變的，并且由顆粒和M細胞的物理性質(zhì)所決定。Clark，M.A.，等，ExploitingMcellsfordrugandvaccinedelivery，AdvDrugDelivRev.2001Aug23；50(1-2)81-106。相同的研究報道，輸送有可能通過用包括適當?shù)耐庠茨?、微生物粘附素和有選擇性地結(jié)合到M細胞表面的免疫球蛋白的試劑涂復(fù)顆粒或脂質(zhì)體而得到提高。同時參見，F(xiàn)lorence，A.T.，Theoralabsorptionofmicro-andnanoparticulatesneitherexceptionalnorunusual，PharmRes.1997Mar；14(3)259-66。病原體模式識別受體(PRR)識別出現(xiàn)在微生物表面的普通結(jié)構(gòu)的和分子模序，并有助于誘導(dǎo)先天免疫反應(yīng)。甘露糖受體和β-葡聚糖受體部分參加霉菌病原體的識別。甘露糖受體(MR)，一種在巨噬細胞子集表達的結(jié)合碳水化合物的受體，被認為是一種這樣的PRR。巨噬細胞具有針對甘露糖和甘露糖-6-磷酸鹽的受體，其可以結(jié)合并內(nèi)在化顯示這些糖的分子。分子由于胞吞作用被內(nèi)在化成為前溶酶體內(nèi)體。這種內(nèi)在化通過使用被甘露糖-6-磷酸鹽修飾并且通過到3′端的二硫化物橋連接寡聚脫氧核苷酸的牛血清白蛋白，促進寡核苷酸進入巨噬細胞，參見Bonfils，E.，等，Nucl.AcidsRes.199220，4621-4629.參見E.Bonfils，C.Mendes，A.C.Roche，M.MonsignyandP.Midoux，Bioconj.Chem.，3，277-284(1992)。巨噬細胞也表達β-葡聚糖受體，包括CR3(Ross，G.D.，J.A.Cain，BL.Myones，S.L.Newman，andP.J.Lachmann.1987)。Specificityofmembranecomplementreceptortypethree(CR3)forβ-glucans。ComplementInflamm.461)，dectin-1.(Brown，G.D.andS.Gordon.2001.Immunerecognition.Anewreceptorfor[β]-glucans.Nature4l336)，andlactosylceramide(ZimmermanJW，LindermuthJ，F(xiàn)ishPA，PalaceGP，StevensonTT，DeMongDE。Anovelcarbohydrate-glycosphinglipidinteractionbetweenabeta-(1-3)-glucanimmunomodulator，PGG-glucan，andlactosylceramideofhumanleukocytes.JBiolChem.1998Aug21273(34)22014-20。)。β-葡聚糖受體，CR3主要在單核細胞、嗜中性和NK細胞上被表達，而dectin-1主要在巨噬細胞的細胞表面被表達。在M細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)高水平的乳糖?；窠?jīng)鞘氨醇。小神經(jīng)膠質(zhì)細胞也可以表達β-葡聚糖受體(Muller，CD.，等，F(xiàn)unctionalbeta-glucanreceptorexpressionbyamicroglialcellline，ResImmunol.1994May；145(4)267-75)。有證據(jù)表明結(jié)合到甘露糖和β-葡聚糖受體的吞噬作用的附加影響。Giaimis等的觀察報告表明，由鼠科巨噬類細胞以及鼠科腹膜常駐巨噬細胞未調(diào)理熱滅活的酵母(釀酒酵母)吞噬作用是由甘露糖和β-葡聚糖受體調(diào)節(jié)的。為了達到未調(diào)理熱滅活酵母的最大吞噬作用，甘露糖和β-葡聚糖受體的共同表達是必需的(Giaimis，J.等，.，Bothmannoseandbeta-glucanreceptorsareinvolvedinphagocytosisofunopsonized，heat-killedSaccharomycescerevisiaebymurinemacrophages，JLeukocBiol.1993Dec；54(6)564-71)。
發(fā)明內(nèi)容在一項優(yōu)選實施例中，本發(fā)明提供包括含有β-葡聚糖的提取酵母細胞壁和有效負載捕獲分子的微粒輸送系統(tǒng)。微粒輸送系統(tǒng)還可以典型地包括有效負載分子，有效負載分子和有效負載捕獲分子是可溶解在相同的溶劑系統(tǒng)中。在優(yōu)選實施例中，溶劑系統(tǒng)包括水。在其它優(yōu)選實施例中，溶劑系統(tǒng)主要由水組成。本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)對于將有效負載分子體內(nèi)或體外輸送到細胞是有效的。在特別優(yōu)選的實施例中，提取的酵母細胞壁含有少于90重量％的β-葡聚糖。在某些特定優(yōu)選實施例中，提取的酵母細胞壁含有超過50重量％的幾丁質(zhì)。在其它優(yōu)選實施例中，提取的酵母細胞壁進一步含有超過30重量％的甘露聚糖。在某些特定的優(yōu)選實施例中，提取的酵母細胞壁含有超過1重量％的蛋白質(zhì)。在優(yōu)選實施例中，有效負載分子選自多核苷酸、肽、蛋白質(zhì)、小分子有機活性劑、小分子無機活性劑及其混合物。在某些特定的優(yōu)選實施例中，有效負載分子是多核苷酸，其選自寡核苷酸、反義構(gòu)件、siRNA、酶解RNA、重組DNA構(gòu)件、表達載體及其混合物。在其它優(yōu)選實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)對于諸如氨基酸、肽和蛋白質(zhì)的有效負載分子的體內(nèi)或體外輸送是有用的。肽可以是信號分子，例如荷爾蒙、神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)質(zhì)，而且可以是更大分子的活性片段，例如受體、酶或核酸結(jié)合蛋白。蛋白質(zhì)可以是酶、結(jié)構(gòu)蛋白、信號蛋白或核酸結(jié)合蛋白，例如轉(zhuǎn)錄因子。在其它優(yōu)選實施例中，有效負載分子是小分子有機活性劑，例如治療劑或一個診斷劑。在特定的優(yōu)選實施例中，小分子有機活性劑是與DNA序列特定位點結(jié)合的低聚物，更優(yōu)選的是結(jié)合到雙鏈DNA小溝區(qū)(minorgroove)的雜環(huán)聚酰胺低聚物，如在美國專利No.6.506,906和Dervan，P.MolecularRecognitionofDNAbySmallMolecules，Bioorganic&MedicinalChemistry(2001)92215-2235中所公開，兩者在此作為參考文獻引用。在優(yōu)選實施例中，低聚物具有單體亞基N-甲基咪唑羧酰胺、N-甲基吡咯羧酰胺、β-丙氨酸和二甲基氨基丙酰胺(dimethylaminopripylamide)。在其它優(yōu)選實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)包括無機活性劑，例如氫氧化鋁、碳酸鈣、鎂碳酸鹽、碳酸鈉等胃腸治療劑。有效負載捕獲分子的選擇可以給微粒輸送系統(tǒng)帶來特殊性質(zhì)。一般說來，優(yōu)選的有效負載捕獲分子是生物相容的并且藥學(xué)上可接受的。如前所述，有效負載分子和有效負載捕獲分子可以溶解在相同劑系統(tǒng)。合適的有效負載捕獲分子包括天然的和合成的聚合物。在某些優(yōu)選實施例中，例如瓊脂糖或聚丙烯酰胺有效負載捕獲分子的物理性質(zhì)提供了有用的優(yōu)點。合適的聚合物包括多聚糖。在優(yōu)選實施例中，多聚糖選自瓊脂糖、藻酸鹽、黃原膠、葡聚糖、殼聚糖、半乳甘露聚糖膠膠及其衍生物或者混合物。在某些優(yōu)選實施例中，多聚糖被衍生以產(chǎn)生在生理pH的陽離子或陰離子特征。在其它實施例中，有效負載捕獲分子是在生理pH帶電分子，例如陽離子聚合物、陰離子聚合物、陽離子洗滌劑、陰離子洗滌劑及其混合物。優(yōu)選的陽離子聚合物包括殼聚糖、聚-L-賴氨酸和聚乙烯亞胺(PEIs)，主要為線性聚乙烯亞胺，例如JetPEI，一種商業(yè)性線性聚乙烯亞胺陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑(Qbiogene，Lie，CA)。其它陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑也適合，優(yōu)選CytoPureTM，一種專有的、商業(yè)性、可溶于水的陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑(Qbiogene，Lie，CA)。在其它優(yōu)選的實施例中，合適的陰離子聚合物包括藻酸鹽、葡聚糖和黃原膠，及衍生的藻酸鹽、葡聚糖和黃原膠。在更優(yōu)選的實施例中，有效負載捕獲分子是陽離子洗滌劑，例如溴化十六烷基三甲基銨。在一項優(yōu)選的實施例中，使用了例如溴化十六烷基三甲基銨陽離子洗滌劑和例如聚乙烯亞胺陽離子聚合物的混合物。在另一項優(yōu)選的實施例中，可以使用例如溴化十六烷基三甲基銨陽離子洗滌劑和例如殼聚糖或PEI的陽離子聚合物的混合物。盡管不是限于單個假設(shè)，人們相信，除了用酵母細胞壁顆粒促進保留負荷量，優(yōu)選的有效負載捕獲分子通過作為洗滌劑、幫助滲透膨脹內(nèi)體或其它作用來作用于支持有效負載分子從吞噬細胞內(nèi)體的釋放。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供使用微粒輸送系統(tǒng)的方法。在某些優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供輸送有效負載分子到細胞的方法，包括以下步驟，提供包含β-葡聚糖的提取的酵母細胞壁，酵母細胞壁包圍住內(nèi)部空間；用有效負載分子接觸提取的酵母細胞壁，在此，有效負載分子至少部分地被包裹在內(nèi)部空間中；用有效負載捕獲分子接觸提取的酵母細胞壁，在此，有效負載捕獲分子至少部分地將有效負載分子包圍在提取的酵母細胞壁中以形成微粒輸送系統(tǒng)；以及用微粒輸送系統(tǒng)接觸細胞。優(yōu)選地，此方法進一步包括細胞內(nèi)在化微粒輸送系統(tǒng)的步驟。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供制備微粒輸送系統(tǒng)的方法，包括以下步驟，提供包含β-葡聚糖的提取的酵母細胞壁，酵母細胞壁包圍住內(nèi)部空間；用有效負載分子接觸提取的酵母細胞壁，在此，有效負載分子變?yōu)榕c提取的酵母細胞壁結(jié)合；用有效負載捕獲分子接觸提取的酵母細胞壁，在此，有效負載捕獲分子穩(wěn)定有效負載分子與提取的酵母細胞壁的結(jié)合以形成微粒輸送系統(tǒng)。在優(yōu)選的實施例中，此方法還包括洗滌和干燥微粒輸送系統(tǒng)的步驟。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供將個體暴露于抗原的方法，包括以下步驟，用包括含有β-葡聚糖、有效負載捕獲分子和有效負載分子的提取酵母細胞壁的微粒輸送系統(tǒng)接觸個體的吞噬細胞，在此，有效負載分子為多核苷酸，含有可連接到閱讀框編碼在個體細胞中可操控表達的一種肽的控制元素。優(yōu)選是，被編碼的肽是有效負載分子，是一種抗原肽。在更優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供將一個體暴露于抗原的方法，包括以下步驟，用包括含有β-葡聚糖、有效負載捕獲分子和有效負載分子的提取酵母細胞壁的微粒輸送系統(tǒng)接觸個體的吞噬細胞，其中有效負載分子是抗原分子。優(yōu)選的抗原分子是類毒素。在優(yōu)選的實施例中，被接觸的細胞是巨噬細胞，但也可以包括任何有酵母顆粒吞噬作用能力的細胞，包括Peyer淋巴結(jié)的M細胞、單核細胞、嗜中性白細胞、樹突狀細胞、Langerhans細胞、Kupffer細胞、肺泡噬細胞、腹膜巨噬細胞、乳巨噬細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞、嗜曙紅細胞、粒性白細胞、系膜吞噬細胞、滑膜A細胞和其它吞噬細胞。在優(yōu)選的實施例中，微粒輸送系統(tǒng)是口服給藥，通過腸中Peyer淋巴結(jié)的M細胞吸收。在優(yōu)選的實施例中，多核苷酸是重組DNA構(gòu)件，包括可以連接到編碼蛋白質(zhì)如表達載體閱讀框的控制單元。蛋白質(zhì)可以是結(jié)構(gòu)蛋白、具有酶活性的蛋白質(zhì)、膜蛋白、DNA結(jié)合蛋白或信號蛋白。在某些優(yōu)選的實施例中，蛋白質(zhì)是抗原蛋白。在某些優(yōu)選的實施例中，此方法進一步包括細胞表達蛋白質(zhì)的步驟。被表達的蛋白質(zhì)可以被細胞保留在胞內(nèi)，與膜性結(jié)構(gòu)如質(zhì)膜結(jié)合，或者由細胞分泌出來。在其它實施例中，超過一種的多核苷酸封閉在微粒輸送系統(tǒng)中。在優(yōu)選的實施例中，多核苷酸具有表達受控的多個基因產(chǎn)物的能力。在某些實施例中，至少一種可表達的基因產(chǎn)物是膜蛋白，優(yōu)選是膜受體，最優(yōu)選的是信號分子的膜結(jié)合受體。在一些實施例中，至少一種可表達的基因產(chǎn)物是可溶性蛋白質(zhì)，優(yōu)選是分泌的蛋白質(zhì)，最優(yōu)選的是信號蛋白或肽。在其它實施例中，本發(fā)明提供輸送藥物到巨噬細胞的方法，包括如下步驟，提供包含β-葡聚糖的大體球狀的提取的酵母細胞壁，酵母細胞壁包圍內(nèi)部空間；用藥物接觸提取的酵母細胞壁，其中藥物是至少部分地封閉在內(nèi)部空間中；用捕獲分子接觸提取的酵母細胞壁，其中捕獲分子至少部分地封閉在內(nèi)部空間中以形成微粒藥物輸送系統(tǒng)；并且用微粒藥物輸送系統(tǒng)接觸巨噬細胞。優(yōu)選地，此方法也包括通過巨噬細胞內(nèi)在化微粒藥物輸送系統(tǒng)的步驟。在優(yōu)選的實施例中，此方法也包括由巨噬細胞傳送微粒藥物輸送系統(tǒng)。在特定優(yōu)選的實施例中，巨噬細胞傳送微粒藥物輸送系統(tǒng)到巨噬細胞吸引位點，例如感染、炎癥反應(yīng)、組織缺氧或增生的位點。在某些優(yōu)選的實施例中，巨噬細胞傳送微粒藥物輸送系統(tǒng)到腫瘤。在特別優(yōu)選的實施例中，該方法包括從微粒藥物輸送系統(tǒng)釋放藥物的方法，更優(yōu)選地進一步包括釋放藥物到胞外空間的步驟。在某些實施例中，釋放藥物的步驟包括表達重組蛋白質(zhì)和分泌蛋白質(zhì)到胞外空間的步驟。本發(fā)明提供使個體對病原體免疫的方法。該方法包括以下步驟，用包含具有β-葡聚糖、有效負載捕獲分子和核酸組合物的提取酵母細胞壁的微粒輸送系統(tǒng)接觸所述個體細胞，因此將包含編碼肽的核苷酸序列的核酸分子送給細胞，該肽包含至少一種等同于或基本相似于在所述病原體顯示為抗原的抗原決定基的抗原決定基，并且所述核苷酸序列有效地接合到調(diào)控序列，其中核酸分子可以在個體細胞中表達。在另一優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供產(chǎn)生對于類毒素免疫性的方法，包括以下步驟，提供包含具有β-葡聚糖、有效負載捕獲分子和類毒素的提取酵母細胞壁的微粒輸送系統(tǒng)，用微粒輸送系統(tǒng)接觸吞噬細胞并且誘導(dǎo)微粒輸送系統(tǒng)的吞噬作用。吞噬細胞可以是一個或多個巨噬細胞、Peyer淋巴結(jié)的M細胞、單核細胞、嗜中性白細胞、樹突狀細胞、Langerhans細胞、Kupffer細胞、肺泡噬細胞、腹膜巨噬細胞、乳巨噬細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞、嗜曙紅細胞、粒性白細胞、系膜吞噬細胞和滑膜A細胞。本發(fā)明提供使個體對過度增生疾病或自體免疫疾病免疫的方法。該方法包括以下步驟，用包含具有β-葡聚糖、含有核酸組合物的有效負載捕獲分子的提取酵母細胞壁的微粒輸送系統(tǒng)接觸所述個體細胞，從而將包含編碼肽的核苷酸序列的核酸分子送給細胞，該肽包括至少一種等同于或基本相似于在過度增生疾病相關(guān)蛋白質(zhì)或與自體免疫疾病相關(guān)蛋白質(zhì)上分別顯示的抗原決定基的抗原決定基，并且可結(jié)合到調(diào)控序列，其核酸分子可以在個體細胞中表達。本發(fā)明也提供治療患自體免疫疾病的個體的方法，包括以下步驟，用包含具有β-葡聚糖、含有核酸組合物的有效負載捕獲分子的提取酵母細胞壁的微粒輸送系統(tǒng)接觸所述個體細胞，從而將包含核苷酸序列的核酸分子送給細胞，該序列恢復(fù)缺失的、有缺陷的或者抑制的基因的活性或者編碼在個體中產(chǎn)生治療效果的蛋白質(zhì)，并且可以接合到調(diào)控序列，其中核酸分子可以在所述個體細胞中表達。在進一步的實施例中，本發(fā)明提供使個體對過度增生疾病免疫的方法，包括以下步驟，用包含具有β-葡聚糖、有效負載捕獲分子和有效負載分子的提取酵母細胞壁的微粒輸送系統(tǒng)接觸所述個體細胞，該有效負載分子是包含可以結(jié)合到編碼肽的閱讀框的調(diào)控序列的多核苷酸，該肽包括等同于或基本相似于在過度增生疾病相關(guān)蛋白質(zhì)或與自體免疫疾病相關(guān)蛋白質(zhì)上分別顯示的抗原決定基的抗原決定基，其中編碼的肽可以在個體細胞中表達。在其它實施例中，本發(fā)明也提供治療患遺傳病的個體的方法，包括以下步驟，用包含具有β-葡聚糖、有效負載捕獲分子和是多核苷酸的有效負載分子的提取酵母細胞壁的微粒輸送系統(tǒng)接觸所述個體細胞，因此將包括核苷酸序列的多核苷酸送給細胞，該序列恢復(fù)缺失的、有缺陷的或抑制的基因的活性。優(yōu)選地，多核苷酸包含可以結(jié)合到編碼在個體中產(chǎn)生治療效果的蛋白質(zhì)的閱讀框的調(diào)控序列，該蛋白質(zhì)可以在所述細胞中表達。本發(fā)明也涉及治療患自體免疫疾病的個體的方法，包括以下步驟，用包含具有β-葡聚糖、含有核酸組合物的有效負載捕獲分子的提取酵母細胞壁的微粒輸送系統(tǒng)接觸所述個體細胞，從而將包括核苷酸序列的核酸分子送給細胞，該序列恢復(fù)缺失的、有缺陷的或抑制的基因的功能或者編碼在個體中產(chǎn)生治療效果的蛋白質(zhì)，并且可以結(jié)合到調(diào)控序列；該核酸分子可以在個體細胞中表達。相應(yīng)地，本發(fā)明為個體提供針對病原體或異常的、與疾病相關(guān)的細胞進行預(yù)防性和/或者治療性免疫的組分和方法。遺傳物質(zhì)對與在病原體或標定細胞上發(fā)現(xiàn)的免疫蛋白分享至少一種抗原決定基的肽或蛋白質(zhì)進行編碼。遺傳物質(zhì)由個體細胞表達，并且作為誘導(dǎo)免疫反應(yīng)產(chǎn)生的免疫靶。產(chǎn)生的免疫反應(yīng)是廣泛的除一個體液免疫反應(yīng)之外，細胞的免疫反應(yīng)的兩個途徑都被誘導(dǎo)出來。本發(fā)明的方法對于產(chǎn)生預(yù)防性和治療性免疫作用是有用的。因而，免疫方法包括保護個體免受病原體的侵襲，或某些細胞的發(fā)生或增生以及治療病原體傳染、過度增生疾病或自體免疫疾病的兩個方法。因而，本發(fā)明對于誘導(dǎo)針對靶蛋白的廣泛免疫反應(yīng)是有效的，該蛋白質(zhì)即與病原體或個體自身“異?！奔毎禺惤Y(jié)合的蛋白質(zhì)。本發(fā)明通過誘導(dǎo)針對特異結(jié)合到過度增生細胞靶蛋白的免疫反應(yīng)，對抗過度增生疾病和例如癌癥的紊亂是有效的。本發(fā)明通過誘導(dǎo)與參與自體免疫疾病的細胞特異性結(jié)合靶蛋白的免疫反應(yīng)，對抗自體免疫疾病和紊亂更有效。本發(fā)明也提供藥物試劑盒，包括一種含有有效負載分子的容器，該有效負載分子選自核酸組合物、蛋白質(zhì)組合物、小分子有機分子及其混合物，以及一種含有酵母細胞壁顆粒和捕獲分子的容器?；蛘?，，這種試劑盒還包括針對藥物組合物的上述類型的賦形劑、載體、防腐劑和賦形藥。術(shù)語藥物試劑盒也指包括在本發(fā)明方法中使用的多個接種體。這種試劑盒包括分裝不同接種體和傳遞組合物的獨立容器。本發(fā)明的藥物試劑盒也計劃包括用于如上所述的處理和免疫方法和/或治療方法中的一整套接種體。本發(fā)明的組合物和方法在人用藥和獸藥的領(lǐng)域中都是有用的。因此，本發(fā)明涉及哺乳動物、鳥和魚類的基因免疫和治療處理。本發(fā)明的方法對包括人、牛、羊、豬、馬、犬和貓在內(nèi)的哺乳類的基因免疫和治療處理尤其有用。微粒藥物輸送系統(tǒng)和方法的前述的和其它的特征及優(yōu)點可以從下面描述該系統(tǒng)和方法的優(yōu)選實施例的附圖中明顯看出，在附圖中相同的附圖標記代表不同附圖中的相同的部分。圖1是酵母細胞壁橫截面的示意圖100，從外到內(nèi)表示外部絲狀層110、外甘露聚糖蛋白層120、β葡聚糖層130、β葡聚糖-幾丁質(zhì)層140、內(nèi)甘露聚糖蛋白層150、質(zhì)膜160和細胞質(zhì)170。圖2A是酵母細胞壁顆粒的結(jié)構(gòu)圖；圖2B是彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負負片)灰度級圖象，表示通過伴刀豆球蛋白-A-FITC(con-A-fluoresceinisothiocyanate，SigmaChemical，St.Louis，MO)對酵母細胞壁顆粒的甘露聚糖組分的著色，來顯示充分著色的酵母細胞壁顆粒210；圖2C是YGMPβ葡聚糖-甘露聚糖顆粒的結(jié)構(gòu)圖，圖2D是彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，表示con-A-FITC對YGMPβ葡聚糖-甘露聚糖顆粒220的部分的著色；圖2E是YGPβ葡聚糖顆粒的結(jié)構(gòu)圖，以及圖2F是表示缺少con-A-FITC著色的彩色熒光顯微圖的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象。圖3A是細胞的彩色光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，顯示細胞310，該細胞暴露于裝載熒光標記pIRES質(zhì)粒的YGP顆粒，該質(zhì)粒具有作為陽離子捕獲聚合物的PEI和作為陽離子洗滌劑的CTAB；圖3B是細胞群相同區(qū)域的彩色光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，顯示代表被圖3B所示的相同細胞310內(nèi)在化的熒光YGP顆粒的明亮著色。圖4A是細胞的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如所示的暴露于熒光標記的YGP顆粒的細胞410；圖4B是細胞的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如所示的暴露于YGP顆粒的細胞420，該顆粒包含pIRESDNA、陽離子捕獲聚合物聚乙烯亞胺(PEI)和表達GFP的陽離子洗滌劑溴化十六烷基三甲基銨(也稱為溴化十六烷基三甲銨或CTAB)，；圖4C是細胞的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如所示的暴露于YGP顆粒的細胞430，該顆粒包含pIRESDNA、陽離子捕獲聚合物殼聚糖和表達GFP的陽離子洗滌劑CTAB。圖5A是細胞的彩色組合光和熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如所示的暴露于熒光標記的YGP顆粒的細胞510；圖5B是熒光活化細胞分類(FACS)研究結(jié)果的圖示，顯示了表示來自具有內(nèi)在化熒光標記YGP顆粒的細胞的信號分布的主峰值520，以及表示來自無熒光標記YGP顆粒的細胞的信號分布的次峰值530；圖5C是細胞的彩色光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如所示的暴露于含有熒光標記DNA、陽離子捕獲聚合物PEI和陽離子洗滌劑CTAB的YGP顆粒的細胞540；圖5D是細胞群相同區(qū)域的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，表示相同的細胞540；圖5E是FACS研究結(jié)果的圖示，顯示了表示來自具有帶熒光DNA負荷量的內(nèi)在化YGP顆粒的細胞的信號分布的主峰值610，以及表示來自無YGP顆粒的細胞的信號分布的肩部620；圖5F是細胞的彩色光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如用含有熒光反義RNA負荷量的YGP顆粒培養(yǎng)的所示細胞710；圖5G是細胞群相同區(qū)域的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，表示所示的相同的細胞710；圖5H是細胞群相同區(qū)域的彩色光顯微圖的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如用含有熒光標記的siRNA、PEI和CTAB的YGP顆粒培養(yǎng)的所示細胞810；圖5I是細胞群相同區(qū)域的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，表示含有帶熒光RNAi負荷量的內(nèi)在化YGP顆粒的所示的相同細胞810。本發(fā)明前述的和其它的主題、特征和優(yōu)點可以從以下本發(fā)明的優(yōu)選實施例得到更詳細的描述，如附圖所顯示的那樣，在附圖中相同的附圖標記代表不同附圖中相同的部分。附圖不一定是按比例的，重點是解釋本發(fā)明的原理。具體實施例在優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供包含提取的酵母細胞壁顆粒和至少一種有效負載捕獲分子的微粒輸送系統(tǒng)。優(yōu)選地，酵母細胞壁顆粒是2-4微米的酵母細胞壁殼。有效負載捕獲分子有效負載捕獲分子優(yōu)選藥學(xué)上可接受的賦形劑。負荷量和捕獲分子都可以溶于溶劑系統(tǒng)中；溶劑系統(tǒng)必須通過允許負荷量和捕獲聚合物吸收的酵母細胞顆粒碳水化合物基質(zhì)吸收。負荷量和捕獲分子優(yōu)選水溶性的。在優(yōu)選的實施例中，捕獲分子可生物降解。具有給定負荷量的捕獲反應(yīng)的作用機理決定有效負載捕獲分子的選擇。對于靜電相互作用，需要一個與負荷量相反電荷的帶電有效負載捕獲分子。對于物理捕獲，有效負載捕獲分子適當?shù)貐⑴c誘導(dǎo)負荷量分散的基質(zhì)形成。在其它實施例中，有效負載捕獲分子具有利于保留負荷量的疏水結(jié)合性質(zhì)。在進一步的實施例中，有效負載捕獲分子選擇性地結(jié)合負荷量，提供有助于保留負荷量的親和作用。一般來說，聚合電解質(zhì)可以作為合適的有效負載捕獲分子。美國專利No.6,133,229公開了一些合適的聚合電解質(zhì)。聚合電解質(zhì)可以是陽離子或陰離子聚合電解質(zhì)。也可以使用兩性聚合電解質(zhì)。陽離子聚合電解質(zhì)優(yōu)選是具有沿分子鏈分布的陽離子基團的聚合物。在某些實施例中，包含季銨衍生物的陽離子基團可以排列在從鏈垂下的側(cè)基上，或者與其結(jié)合。陽離子聚合電解質(zhì)的實施例包括乙烯基吡咯烷酮和四個甲基丙烯酸甲酯(quaternarymethylmethacrylate)的共聚物，例如由ISP得到的GAFQUAT系列(755N，734，HS-100)；取代的聚丙烯酰胺；聚乙烯亞胺，聚丙烯亞胺及取代的衍生物；多胺均聚物(GOLCHEMCL118)；多胺共聚物(例如表氯醇和單或二甲胺的縮合物)；聚二甲基二烯丙基氯化銨(polyDADMAC)；取代的葡聚糖；修飾瓜爾膠(用羥丙基三甲基氯化銨(hydroxypropytrimonium)取代)；取代的蛋白質(zhì)(例如在大豆蛋白和水解膠原質(zhì)上取代的四價基團)；聚氨基酸(例如聚賴氨酸)；低分子量聚氨基化合物(例如精胺和亞精胺)?？梢岳锰烊换蛉斯ぞ酆衔铩？梢岳肕W150到5,000,000，優(yōu)選5000到500,000，更優(yōu)選5000到100,000的陽離子聚合電解質(zhì)。優(yōu)選0.01to10％的量，更優(yōu)選0.1to2％w/v，特別是0.05to5％。陰離子聚合電解質(zhì)優(yōu)選為具有沿分子鏈分布的陰離子基團的聚合物。包含羧酸鹽、磺酸鹽、硫酸鹽或其它帶負電荷的可電離類陰離子基團，可以排列在從鏈垂下的基團上，或者直接結(jié)合在聚合物主鏈上。可以利用天然或人工聚合物。陰離子聚合電解質(zhì)的實施例包括甲基乙烯基醚和馬來酸酐的共聚物，甲基乙烯基醚和馬來酸的共聚物，(GantrezAN-seriesandS-series，respectively，InternationalSpecialtyProducts，Wayne，NJ)；褐藻酸及鹽；羧甲基纖維素及鹽；取代的聚丙烯酰胺(例如用羧酸基取代的)；聚丙烯酸及鹽；聚苯乙烯磺酸及鹽；葡聚糖硫酸鹽；取代的糖類，例如蔗糖辛硫酸鹽；肝磷脂。可以利用MW150到5,000,000，優(yōu)選5000到500,000，更優(yōu)選5000到100,000的陰離子聚合電解質(zhì)。優(yōu)選0.01％to10％的量，特別是0.05to5％，更特別是0.1to2％w/v。例如多聚糖的生物聚合物是優(yōu)選的捕獲聚合物。優(yōu)選地，將聚合物加工到平均分子量小于100,000道爾頓。聚合物優(yōu)選地衍生具有陽離子或陰離子特性。合適的多聚糖包括殼聚糖(去乙?；鶐锥≠|(zhì))、藻酸鹽、葡聚糖，例如2-(二乙基氨基)乙醚葡聚糖(DEAE-葡聚糖)和葡聚糖硫酸鹽、黃原、刺槐豆膠和瓜爾膠。兩個普通類別的陽離子分子適于用作帶負電荷的負荷量的捕獲分子，例如多核苷酸陽離子聚合物和陽離子脂類。多種陽離子聚合物已經(jīng)證實介導(dǎo)體外細胞轉(zhuǎn)染，范圍包括從蛋白質(zhì)[例如組蛋白(Fritz，J.D.等，，(1996)Hum.GeneTher.7，1395-1404)和高遷移率族(HMG)蛋白(Mistry，A.R..等，(1997)BioTechniques22.718-729)]和多肽[例如聚賴氨酸(Wu，G.Y.&Wu，C.H.(1987)J.Biol.Chem.262，4429-4432，Wagner，E.等，(1991)BioconjugateChem.2，226-231，短合成肽(Gottschalk，S.等，(1996)GeneTher.3，448-457；Wadhwa，M.S.等，(1997)BioconjugateChem.8，81-88)，和螺旋兩親性肽(Legendre，J.Y.等，(1997)BioconjugateChem.8，57-63；Wyman，T.B.等，(1997)Biochemistry36，3008-3017))到合成聚合物[例如聚乙烯亞胺(Boussif，O.等，(1996)GeneTher.3，1074-1080)，陽離子樹枝狀高分子(Tang，M.X.等，(1996)BioconjugateChem.7，703-714；Haensler，J.等，(1993)BioconjugateChem.4，372-379)，和戊二酰胺(glucaramide)聚合物(Goldman，C.K.等，(1997)Nat.Biotech.15，462-466)]。其它合適的陽離子聚合物包括N-取代的甘氨酸低聚物(類胨)(Murphy，J.E.等，Acombinatorialapproachtothediscoveryofefficientcationicpeptoidreagentsforgenedelivery，ProcNatlAcadSci.USA，199895(4)1517-1522)，聚(2-甲基-丙烯酸2-[(2-二甲基氨基)-乙基)-甲基-氨基]-乙酯)，縮寫為pDAMA，和聚(2-二甲基氨基乙基)-異丁烯酸鹽(pDMAEMA)(Funhoff，A.M.等，2004Biomacromolecules，5，32-39)。陽離子脂類在本領(lǐng)域中公知對于轉(zhuǎn)染是合適的。Feigner，P.L1等，Lipofectionahighlyefficient.lipid-mediatedDNA-transfectionprocedure.ProcNatlAcadSciUSA.198784(21)7413-7。合適的陽離子脂類包括N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基氯酸銨(DOTMA)，[N，N，N′，N′-四甲基-N，N′-雙(2-羥乙基)-2，3-二(氧油?；?-1，4-丁二銨碘化物](PromegaMadison，WI，USA)，雙十八烷基氨基甘氨酰(dioctadecylamidoglycyl)精胺(PromegaMadison，WI5USA)，N-[1-(2，3-二氧油酰基)]-N5N，N-三甲基銨丙烷甲基硫酸鹽(DOTAP)，N-[1-(2，3-雙油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基氯酸銨，1，2-雙十四烷氧基丙基-3-二甲基-羥乙基溴化銨(DMRIE)，雙十四烷基油?；Ⅴ；谆谆@(DMPTA)(參見Floch等.1997.Cationicphosphonolipidsasnon-viralvectorsforDNAtransfectioninhematopoieticcelllinesandCD34+cells.BloodCells，Molec.&Diseases2369-87)，1，2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-(7-硝基-2-1，3-苯并噁二唑-4-基)，銨鹽(AvantiPolarLipids，Inc.Alabaster，AL，US)，1，2-二油酰-3-三甲基銨-丙烷氯化物(AvantiPolarLipids，Inc.Alabaster，AL，US)，1，2-二油?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(AvantiPolarLipids，Inc.Alabaster，AL，US)和1，3-二氧油酰基-2-(6-carboxyspermyl)丙基酰胺(DOSPER)。美國專利No.6,379,965和6,372,499描述了適于用作陽離子捕獲分子的多胺。有效負載分子本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)對于有效負載分子的體內(nèi)或體外輸送是有用的，該有效負載分子包括但不限于多核苷酸，例如寡核苷酸、反義構(gòu)件、siRNA、酶促RNA以及重組DNA構(gòu)件，包括表達載體。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)對于有效負載分子的體內(nèi)或體外輸送是有用的，例如氨基酸、肽和蛋白質(zhì)。在此，″蛋白質(zhì)″意味著氨基酸序列，其鏈長度足以產(chǎn)生較高水平的三級和/或四級結(jié)構(gòu)。這可以將″肽″或沒有這種結(jié)構(gòu)的其它小分子量藥物區(qū)分開來。典型地，在此所指的蛋白質(zhì)將具有至少大約15-20kD分子量，優(yōu)選地至少約20kD。包括在此定義中的蛋白質(zhì)的實施例包括哺乳動物蛋白質(zhì)，例如生長激素(GH)，包括人生長激素、牛生長激素和其它GH超基因族成員；生長激素釋放因子；甲狀旁腺激素；甲狀腺激素；脂蛋白；α-1-抗胰蛋白酶；胰島素A-鏈；胰島素B-鏈；胰島素原；促濾泡素；降血鈣素；黃體化激素；胰高血糖素；凝固因子，例如因子VIIIC、因子IX組織因子和vonWillebrands因子；抗凝固因子，例如蛋白質(zhì)C；心鈉素；肺表面活性劑；纖溶酶原激活素，例如尿激酶或組織型纖溶酶原激活素(t-PA)；bombazine；凝血酶；α腫瘤壞死因子，β腫瘤壞死因子；腦啡肽酶；RANTES(對于正常表達和分泌的T-細胞的活化調(diào)節(jié))；人類巨噬細胞炎性蛋白質(zhì)(MIP-I-α)；血清白蛋白，例如人血清白蛋白；mullerian抑制物質(zhì)；松弛肽A-鏈；松弛肽B-鏈；原松弛肽；鼠促性腺激素相關(guān)肽；DNA酶DNA酶；抑制素；激活素；脈管內(nèi)皮生長激素(VEGF)；荷爾蒙或生長激素受體；整聯(lián)蛋白；蛋白質(zhì)A或D；類風濕因子；神經(jīng)營養(yǎng)因子，例如骨源神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)，神經(jīng)調(diào)理素-3，-4，-5，或-6(NT-3，NT-4，NT-5，或NT-6)，或神經(jīng)生長激素，例如NGF-β；來自血小板的生長因子(PDGF)；成纖維細胞生長因子，例如aFGF和bFGF；表皮生長因子(EGF)；轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)，例如TGF-α和TGF-β，包括TGF-β1，TGF-β2，TGF-β3，TGF-β4，或TGF-β5；胰島素類生長因子-I和-II(IGF-I和IGF-II)；脫(1-3)-IGF-I(腦IGF-D)；胰島素類生長激素結(jié)合蛋白質(zhì)；CD蛋白質(zhì)例如CD3，CD4，CD8，CD19和CD20；骨誘導(dǎo)因子；抗毒素；骨形態(tài)形成蛋白質(zhì)(BMP)；T-細胞受體；表面膜蛋白；衰減加速因子(DAF)；病毒抗原，例如AIDS囊膜的一部分；傳輸?shù)鞍踪|(zhì)；復(fù)位受體；地址素；調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)；免疫粘附素；抗體；和上面列出的任何多肽中的生物活性片段或變體。GH超基因族成員包括生長激素、催乳激素、胎盤泌乳素、紅細胞生成素、血小板生成素、白介素-2、白介素-3、白介素-4、白介素-5、白介素-6、白介素-7、白介素-9、白介素-10、白介素-11、白介素-12(p35亞基)、白介素-13、白介素-15、制瘤素M、毛狀神經(jīng)營養(yǎng)因子、白血病抑制因子、α干擾素、β干擾素、γ干擾素、ω干擾素、τ干擾素、粒性白細胞集落刺激因子、粒性白細胞-巨噬細胞集落刺激因子、巨噬細胞集落刺激因子、心臟營養(yǎng)素-1和其它被認定和分類的該族成員的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)有效負載分子優(yōu)選地是基本純化的和基本均質(zhì)的(即沒有污染蛋白質(zhì)等)?！寤炯儍簟宓牡鞍踪|(zhì)意味著組合物包括基于組合物總重的至少約90重量％的蛋白質(zhì)，優(yōu)選至少約95重量％?！寤揪|(zhì)″的蛋白質(zhì)指組合物包括基于組合物總重的至少約99重量％的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)可以天然的或由重組技術(shù)產(chǎn)生。蛋白質(zhì)包括由氨基酸替代物或由直接蛋白質(zhì)進化產(chǎn)生的蛋白質(zhì)變體(Kurtzman，A.L.等.，Advancesindirectedproteinevolutionbyrecursivegeneticrecombinationapplicationstotherapeuticproteins，CurrOpinBiotechnol.200112(4)361-70)以及例如聚乙二醇化蛋白質(zhì)的衍生物。在某些實施例中，蛋白質(zhì)是抗體。例如，抗體可以與上述任何分子結(jié)合。本發(fā)明典型的針對抗體的分子靶包括CD蛋白質(zhì)，例如CD3，CD4，CD8，CD19，CD20和CD34；HER受體族成員，例如EGF受體，HER2，HER3或HER4受體；細胞附著分子，例如LFA-I，MoI，p150，95，VLA-4，ICAM-I，VCAM和αV/β3整聯(lián)蛋白包括其α或β亞基(例如抗-CD11a，抗-CD18或抗-CD11b抗體)；生長激素，例如VEGF；IgE；血型抗原；flk2/flt3受體；多脂(OB)受體；蛋白質(zhì)C等。除了肽、多肽和多核苷酸，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)也適于比較小的分子的輸送，優(yōu)選藥物活性劑的輸送，更優(yōu)選的是治療小分子。對于本發(fā)明輸送系統(tǒng)合適的小分子負荷量包括避孕劑，例如二乙基己烯雌酚、17-β-雌二醇、雌激素酮、乙炔基雌二醇、炔雌醇甲醚等；黃體酮，例如復(fù)方炔諾酮、藻蛋白酸、炔諾醇雙乙酸鹽、炔雌烯醇、甲孕酮醋酸鹽、地美炔酮、甲地孕酮醋酸鹽、氯化孕酮醋酸鹽、炔雌二醇、炔諾酮、孕烯炔醇酮、櫟皮酮、異炔諾酮等；和殺精子化合物，例如壬基苯氧基.聚氧化亞乙基二醇、芐索氯銨、氯茚酚等。優(yōu)選地，對于甾族負荷量，使用捕獲分子混合物，包括足夠量的洗滌劑以增溶負荷量及聚合物，使將負荷量保留在酵母細胞壁顆粒中?？梢耘c本發(fā)明輸送系統(tǒng)結(jié)合的其它活性劑包括胃腸治療劑，例如氫氧化鋁、碳酸鈣、碳酸鎂、碳酸鈉等；非甾族避孕劑；擬副交感神經(jīng)藥；心理治療劑；強力鎮(zhèn)定劑，例如氯丙嗪HCl、氯氮平、美索噠嗪、甲哌硫氮卓、利舍匹林、甲硫達嗪等；弱效鎮(zhèn)定劑，例如甲氨二氮卓、安定、甲丙氨酯、羥基安定等；鼻科解充血藥；鎮(zhèn)靜催眠藥，例如可待因、苯巴比妥、戊巴比妥鈉、司可巴比妥鈉等；其它類固醇，例如睪酮和睪酮丙酸鹽；索佛拿酰胺；擬交感神經(jīng)藥劑；疫苗；維生素和營養(yǎng)素，例如必需氨基酸、必需脂肪等；抗瘧藥，例如4-氨基喹啉、8-氨基喹啉、乙胺嘧啶等；抗偏頭痛劑，例如氯苯咪吲哚、苯(叔)丁胺等；抗帕金森劑，例如左旋多巴；抗痙攣，例如阿托品、甲基溴化東莨菪堿等；抗痙攣和抗膽堿能藥劑，例如膽汁治療、助消化劑、酶等；止咳劑，例如右美沙芬、那可丁等；支氣管擴張劑；心血管類藥，例如抗高血壓化合物、蘿芙木生物堿、冠脈擴張藥、硝基丙三醇、有機硝酸鹽、戊四硝脂等；電解質(zhì)替代物，例如氯化鉀；麥角生物堿，例如有或無咖啡因的麥角胺、氫化麥角生物堿類、雙氫麥角汀甲烷硫酸鹽、二氫麥角柯寧堿甲烷磺酸鹽、雙氫麥角隱亭甲烷硫酸鹽及其結(jié)合物；生物堿，例如硫酸阿托品、顛茄、東莨菪堿等；鎮(zhèn)痛藥；麻醉藥，例如可待因、二氫可待因酮，哌替啶、嗎啡等；非麻醉藥，例如水楊酸鹽、阿斯匹林、對乙酰氨基酚、d-丙氧酚等。在優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的系統(tǒng)用于輸送抗生素，例如頭孢菌素、氯霉素、慶大霉素、卡那霉素A、卡那霉素B、青霉素、氨芐西林、鏈霉素A、抗霉菌素A、chloropamtheniol、甲硝唑、地霉素、青霉素G，四環(huán)素類等。在優(yōu)選的實施例中，通過輸送抗生素，加強了體內(nèi)巨噬細胞滅活病原體的能力，例如將四環(huán)素輸送到巨噬細胞。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供一種系統(tǒng)，輸送抗癌劑；抗驚厥劑，例如美芬妥因、苯巴比妥、三甲雙酮；抗催吐劑，例如硫乙拉嗪；抗組織胺，例如氯代吩嗪(chlorophinazine)、茶苯海明、苯海拉明、奮乃靜、曲吡那敏等；抗炎劑，例如荷爾蒙劑、皮質(zhì)醇、強的松、潑尼松、非荷爾蒙劑、別嘌呤醇、阿斯匹林、吲哚美辛、保泰松等；前列腺素；細胞毒素藥物，例如塞替派、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、氮芥、甲氨喋呤等。疫苗在優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)對于提供疫苗的口服輸送是有效的。在優(yōu)選的實施例中，系統(tǒng)用于輸送抗原，例如微生物抗原，如淋病奈瑟氏球菌(Neisseriagonorrhea)，結(jié)核分枝桿菌(Myeobacteriumtuberculosis)，皰疹病毒(humonis，1型和2型)，白色念珠菌(Candidaalbicans)，熱帶念珠菌(Candidatropicalis)，陰道毛滴蟲(Triehomonasvaginalis)，陰道嗜血桿菌(Haemophilusvaginalis)，B族鏈球菌(GroupBStreptococcussp.)，人形支原體(Microplasmahominis)，杜克雷嗜血桿菌(Hemophilusducreyi)，肉芽腫莢膜桿菌(Granulomainguinale)，Lymphopathiavenereum，梅毒螺旋體(Treponemapallidum)，流產(chǎn)布魯氏桿菌(Brucellaabortus.)羊種布魯氏菌(Brucellamelitensis)，豬種布魯氏菌(Brucellasuis)，犬種布魯氏菌(Brucellacanis)，胚胎彎曲桿菌(Campylobacterfetus)，胚胎腸彎曲桿菌(Campylobacterfetusintestinalis)，波莫那鉤端螺旋體(Leptospirapomona)，單核球增多性李斯特菌，羊布氏桿菌(Brucellaovis)，馬皰疹病毒1，馬動脈炎病毒，IBR-IBP病毒，BVD-MB病毒，鸚鵡披衣菌(Chlamydiapsittaci)，滴蟲(Trichomonasfoetus)，弓形蟲(Toxoplasmagondii)，大腸桿菌，水腫芽孢梭菌(Actinobacillusequuli)，羊流產(chǎn)沙門菌(Salmonellaabortusovis)，馬流產(chǎn)沙門菌(Salmonellaabortusequi)，綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)，馬棒狀桿菌(Corynebacteriumequi)，化膿棒桿菌(Corynebacteriumpyogenes)，Actinobaccilusseminis，牛生殖道支原體(Mycoplasmabovigenitalium)，煙曲霉(Aspergillusfumigatus)，分枝犁頭霉(Absidiaramosa)，馬疫錐蟲(Trypanosomaequiperdum)，駑巴貝斯蟲(Babesiacaballi)，破傷風梭菌(Clostridiumtetani)，肉毒桿菌(Clostridiumbotulinum)等。在其它實施例中，該系統(tǒng)可以用于輸送抵抗上述微生物的中和抗體。在其它實施例中，該系統(tǒng)可以用于輸送酶，例如核糖核酸酶、神經(jīng)氨酸酶、胰島素、糖原磷酸化酶、精子乳汁脫氫酶、精子透明質(zhì)酸酶、adenossinetriphosphatase、堿磷酸酶、堿磷酸酶、氨基肽酶、胰島素木瓜胰島素、淀粉酶、溶菌酶、精子蛋白酶、二酯酶、谷氨酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶、β-甘磷酸酶，脂肪酶、ATP-酶α-peptateγ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、甾酮-3-β-ol-脫氫酶、DPN-di-aprorase。在優(yōu)選的實施例中，該系統(tǒng)可以輸送生物恐怖主義的危險生物制劑的抗原，包括A級制劑，例如嚴重痘癥(天花)，炭疽熱細菌(Bacillusanthracis，炭疽)，鼠疫桿菌(Yersiniapestis，瘟疫)，肉毒桿菌毒素(波特淋菌中毒)，土拉弗朗西斯菌(兔熱病)，絲狀病毒(伊波拉病毒出血熱及馬堡病毒出血熱)，沙粒病毒(拉薩病毒(拉薩熱)，胡寧病毒(阿根廷出血熱)及相關(guān)病毒)；CategoryB制劑，例如立克次體(Q熱)，布氏桿菌屬(布魯氏菌病)，鼻疽伯克霍爾德氏菌(鼻疽病)，α病毒(委內(nèi)瑞拉腦脊髓炎，東部及西部馬腦脊髓炎)，從蓖麻(篦麻子)得到的篦麻毒素，產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌的ε-毒素；金黃色葡萄球菌腸毒素B，沙門氏菌，志賀氏痢疾桿菌，大腸桿菌0157H7，霍亂弧菌，微小隱孢子蟲；andC級制劑，例如尼派病毒，漢他病毒，蜱媒出血熱病毒，蜱媒腦炎病毒，黃熱病及耐多藥物肺結(jié)核。在優(yōu)選的實施例中，該系統(tǒng)可以用于輸送滅活抗原毒素，例如去毒毒素抗原，包括類毒素(滅活的但為抗原毒素)和類毒素軛合物。在優(yōu)選的實施例中，類毒素是一種滅活微生物毒素。在其它實施例中，類毒素是滅活植物毒素。在進一步的實施例中，類毒素是一種滅活動物毒素。在某些實施例中，該系統(tǒng)可以用于輸送類毒素，例如百日咳類毒素，白喉桿菌類毒素，破傷風類毒素，流感嗜血桿菌b型-破傷風類毒素軛合物，肉毒梭狀芽孢桿菌D類毒素，肉毒梭狀芽孢桿菌E類毒素，由困難腸梭菌毒素A產(chǎn)生的類毒素，霍亂弧菌類毒素，產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌C型和D型類毒素，氣腫疽梭菌類毒素，諾維氏梭菌(B型)類毒素，腐敗梭菌類毒素，重組HIVtatIHB類毒素，金黃色葡萄球菌類毒素，胸膜肺炎放線桿菌(ApxI類毒素，胸膜肺炎放線桿菌ApxII類毒素，胸膜肺炎放線桿菌ApxIII類毒素，胸膜肺炎放線桿菌外膜蛋白(OMP)類毒素，綠膿桿菌彈性蛋白酶類毒素，蛇毒類毒素，篦麻毒素類毒素，曼氏溶血桿菌類毒素，巴斯德桿菌類毒素，鼠傷寒沙門氏菌類毒素，巴斯德桿菌類毒素，和支氣管敗血波氏桿菌類毒素。從相應(yīng)的毒素制備類毒素的技術(shù)，例如用甲醛或鋁鹽或γ輻射的化學(xué)處理，在本領(lǐng)域中是公知的。將毒素轉(zhuǎn)換為類毒素的重組方法也是眾所周知的(Fromen-Romano，C等，Transformationofanon-enzymatictoxinintoatoxoidbygeneticengineering，ProteinEngineeringvol.10no.10pp.1213-1220，1997)。在優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的系統(tǒng)可以用于輸送重組類毒素。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的系統(tǒng)可以用于輸送編碼重組類毒素的表達載體。為產(chǎn)生抗病原體感染的基因疫苗，編碼產(chǎn)生保護免疫反應(yīng)的免疫蛋白的遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)必須包含在核酸組合物中。無論是針對病原體本發(fā)明特別有效的細胞內(nèi)感染，還是細胞外感染，所有病原體抗原都誘導(dǎo)保護反應(yīng)是不太可能的。由于DNA和RNA相對小并且可以相對容易地生產(chǎn)，本發(fā)明還具有另一個優(yōu)點，涉及多病原體抗原的接種疫苗。用于基因疫苗的核酸組合物可以包括編碼許多病原體抗原的遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)。舉例來說，一些病毒基因可包括在單個結(jié)構(gòu)中，從而提供多靶。另外，可輸送到個體中不同細胞的多個接種體，在某些情況下可以制備為在疫苗中都包括完整的或更優(yōu)選地不完整的，例如接近完整的一組基因。舉例來說，一套完整的病毒基因可以用兩個結(jié)構(gòu)給藥，每個結(jié)構(gòu)包括在不同位點給藥的一半不同的基因組。因此，針對每一個抗原可以產(chǎn)生免疫應(yīng)答，而不必冒傳染性病毒被裝配的風險。這個特點考慮到了多于一個抗原靶的介入，并且可以消除識別保護抗原的要求。本發(fā)明還提供了一種針對具有過度增生疾病特性的過度增生細胞的廣泛免疫保護機制的方法，以及治療患過度增生疾病的個體的方法。在此，″過度增生疾病″是指那些以細胞過度增生為特征的疾病和紊亂。過度增生疾病實例包括所有形式的癌癥和牛皮癬。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，包含編碼免疫原的″過度增生細胞″相關(guān)的蛋白質(zhì)到個體細胞中的核苷酸序列的核酸組合物的引入，導(dǎo)致這些蛋白質(zhì)在個體接種細胞中的產(chǎn)生。如同在此所用的，術(shù)語″過度增生相關(guān)的蛋白質(zhì)″是指與過度增生疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)。為了對過度增生疾病產(chǎn)生免疫，將包含核苷酸序列的核酸組合物輸送給個體，其中核苷酸序列編碼與過度增生疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)。為使過度增生相關(guān)的蛋白質(zhì)成為有效的免疫原靶，與正常細胞相比，該蛋白質(zhì)在過度增生細胞中必須是排它地或以更高的水平產(chǎn)生。靶抗原包括這種蛋白質(zhì)、其片段，以及包含在此蛋白質(zhì)上發(fā)現(xiàn)的至少一種抗原決定基的肽。在某些情況下，過度增生相關(guān)的蛋白質(zhì)是編碼蛋白質(zhì)的基因突變的產(chǎn)物。突變基因編碼一種與正常蛋白質(zhì)幾乎一樣的蛋白質(zhì)，但其具有導(dǎo)致與正常蛋白質(zhì)上不一樣的抗原決定基的略微不同的氨基酸序列。這種靶蛋白包括那些由致癌基因編碼的蛋白質(zhì)，例如myb，myc，fyn以及易位基因bcr/abl，ras，src，P53，neu，trk和EGRF。除了作為靶向抗原的致癌基因產(chǎn)物，用于抗癌治療和保護療法的靶蛋白包含由B細胞淋巴瘤產(chǎn)生的抗體易變區(qū)域和T細胞淋巴瘤的T細胞受體的易變區(qū)域，其在一些實施例中也用作自體免疫疾病的靶抗原。其它腫瘤相關(guān)的蛋白質(zhì)可用作靶蛋白，例如在腫瘤細胞中發(fā)現(xiàn)的較高水平的蛋白質(zhì)，包括由單克隆抗體17-1A和葉酸鹽結(jié)合蛋白質(zhì)識別的蛋白質(zhì)。盡管本發(fā)明可以用于使個體針對一或多個形式的癌癥進行免疫，本發(fā)明對有癌變或已得癌癥并因此易于復(fù)發(fā)的個體的預(yù)防免疫尤其有效?；蚝蜕锛夹g(shù)以及流行病學(xué)的發(fā)展，可以確定個體患癌的可能性和風險評估。使用基因篩選和/或家族健康史，有可能預(yù)知特定個體患上任何一種癌癥的可能性。相似地，那些已經(jīng)患上癌癥和已經(jīng)接受治療或在康復(fù)中的個體尤其易于復(fù)發(fā)和再得癌癥。作為治療方法的一部分，，可對這些個體被診斷出的癌癥進行免疫以防止復(fù)發(fā)。因此，一旦知道哪些個體患有某種癌癥并且有復(fù)發(fā)危險，可對他們進行免疫，使其免疫系統(tǒng)能夠?qū)刮磥沓霈F(xiàn)的癌癥。本發(fā)明也提供對于患過度增生疾病的個體治療的方法。在此方法中，肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物或核酸組合物及其組合物的引入是用作免疫治療的，引導(dǎo)以及促進個體免疫系統(tǒng)與產(chǎn)生靶蛋白的過度增生細胞進行對抗。本發(fā)明提供對患自體免疫疾病和紊亂的個體進行治療的方法，其是通過向與自體免疫相關(guān)的靶提供廣泛的免疫保護性免疫反應(yīng)機制，包括細胞受體和產(chǎn)生“自”定向抗體的細胞。T細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病包括風濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、多個硬化癥(MS)，Sjogren綜合癥、肉狀瘤病、胰島素依賴糖尿病(IDDM)、自體免疫甲狀腺炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、膠著脊椎炎、硬皮病、多肌炎、皮膚肌炎、牛皮癬、結(jié)節(jié)性脈管炎、Wegener肉芽腫病、Crohn疾病和潰瘍性大腸炎。每種這些疾病是以與內(nèi)生抗原結(jié)合并引發(fā)與自體免疫疾病有關(guān)的炎性級聯(lián)的T細胞受體為特征的。抗T細胞可變區(qū)域的接種疫苗會誘導(dǎo)包括CTLs的免疫應(yīng)答以除去那些T細胞。在RA中，參與疾病的T細胞受體(TCRs)的一些特殊易變區(qū)域已經(jīng)被表示出來。這些TCRs包括V[β]-3、V[β]-14、V[β]-17和V[α]-17。因此，用肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物或核酸組合物和輸送或編碼至少一種這些蛋白質(zhì)的組合物組成的組合物進行接種，會誘導(dǎo)靶向參與RA的T細胞的免疫反應(yīng)。參見Howell，M.D.等，1991Proc.Natl.Acad.Sci.USA8810921-10925；Paliard，X.等，1991Science253325-329；Williams，W.V.等.，1992J.Clin.Invest.90326-333；每一篇在此可作為參考文獻引用。對于MS病，參與該病的TCRs的一些特定易變區(qū)域已經(jīng)被表示出來。這些TCRs包括V[β]-7和V[α]-10。因此，用肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物或核酸組合物和輸送或編碼至少一種這些蛋白質(zhì)的組合物組成的組合物進行接種，會誘導(dǎo)靶向參與MS的T細胞的免疫反應(yīng)。參見Wucherpfennig，K.W.等，1990Science2481016-1019；Oksenberg，J.R.等，1990Nature345344-346；每一篇在此可作為參考文獻引用。對于硬皮病，參與該病的TCRs的一些特定易變區(qū)域已經(jīng)被表示出來。這些TCRs包括V[β]-6，V[β]-8，V[β]-14和V[α]-16，V[α]-3C，V[α]-7，V[α]-14，V[α]-15，V[α]-16，V[α]-28和V[α]-12。因此，用具有肽、蛋白質(zhì)、碳水化合物或核酸組合物和輸送或編碼至少一種這些蛋白質(zhì)的組合物組成的組合物進行接種，會誘導(dǎo)靶向參與硬皮病的T細胞的免疫反應(yīng)。為了治療患T細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病的病人，特別是那些TCR的可變區(qū)域還沒有被表示出來的病人，可以進行活組織切片檢查。取含T細胞的樣品并使用標準技術(shù)識別那些TCRs的可變區(qū)域?？梢岳眠@些信息來制備疫苗。B細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病包括狼瘡(SLE)、Grave疾病、重癥肌無力、自體免疫溶血貧血、自體免疫血小板減少癥、哮喘、冷球蛋白血癥、原發(fā)性膽汁性硬化癥和惡性貧血。這些疾病的每一種是以與內(nèi)生抗原結(jié)合并引發(fā)與自體免疫疾病有關(guān)的炎性級聯(lián)的抗體為特征的。對這些抗體可變區(qū)域的免疫，會誘導(dǎo)包括CTLs在內(nèi)的免疫反應(yīng)以除去那些產(chǎn)生抗體的B細胞。為了治療患B細胞介導(dǎo)的自體免疫疾病的病人，必須識別參與自體免疫活性的那些TCRs的可變區(qū)域?？梢赃M行活組織切片檢查，并且可以取炎癥部位抗體的樣品?？梢允褂脴藴始夹g(shù)識別那些抗體的可變區(qū)域。利用這些信息來制備疫苗。對于SLE，一種抗原相信是DNA。因此，對用免疫來抗SLE的病人，可以用他們的血清來篩選抗-DNA的抗體，而且可以制備疫苗，該疫苗包含編碼在血清中發(fā)現(xiàn)的此抗-DNA抗體的可變區(qū)域的核酸組合物。有關(guān)TCRs和抗體的易變區(qū)域中的普通結(jié)構(gòu)特征是廣為人知的。編碼特定TCR或抗體的DNA序列通常能在下列的廣為人知的方法中發(fā)現(xiàn)，Kabat等，1987SequenceofProteinsofImmunologicalInterestU.S.DepartmentotHealthandHumanServices，BethesdaMd.，其在此可作為參考文獻引用。另外，對于從抗體克隆功能易變區(qū)域的常規(guī)方法可以參見Chaudhary，V.K.等，1990Proc.Natl.Acad.Sci.USA871066，其在此可作為參考文獻引用。基因療法在優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供治療遺傳病或有基因成分疾病的組合物和方法。在更優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明提供用于制造藥品的含有基因組分的組合物，來治療遺傳病或病癥。人類基因組項目增加了我們關(guān)于遺傳病的知識。通常可參見http://www.ornl.gov/sci/techresources/Huma_Genome/medicine/assist.shtml。環(huán)境和遺傳因素二者對任何疾病的發(fā)展都有作用。遺傳病是由于個體的遺傳物質(zhì)(基因組)異常所引起的疾病。有四種遺傳病的類型(1)單一基因型，(2)多因子型，(3)染色體型，和(4)線粒體型。(1)單一基因型(也稱Mendelian或單基因型)——這一類型是由于在DNA序列中一個基因的變化或突變所引起?；蛴脕砭幋a蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)是用來完成大部分的工作、實施生命的功能、建立細胞主要結(jié)構(gòu)的分子。當一個基因發(fā)生突變時，其蛋白質(zhì)產(chǎn)物將不再執(zhí)行其正常的功能，失調(diào)就發(fā)生了。有超過6,000種已知的單一遺傳病，每200個新生命誕生約有1個發(fā)生。有的是胞囊纖維癥、鐮狀細胞貧血、Marfan綜合癥，Huntington疾病和遺傳血色沉著病。(2)多因子型(也稱復(fù)癥或多基因型)——這一類型是由環(huán)境因素和多個基因突變共同引起的。舉例來說，影響乳腺癌易感性的不同的基因已經(jīng)在第6，11，13，14，15，17和22號染色體上被發(fā)現(xiàn)。它的比較復(fù)雜的特性使它比單一基因或染色體病更難以分析。一些最普通的慢性病是多因子病。實例包括心臟病、高血壓、老年性癡呆、關(guān)節(jié)炎、糖尿病、癌癥和肥胖癥。多因子遺傳也與遺傳性狀相關(guān)，例如指紋、身高、眼睛顏色和皮膚顏色。(3)染色體型——染色體，由DNA和蛋白質(zhì)組成的獨特結(jié)構(gòu)，位于每個細胞的細胞核。由于染色體是遺傳物質(zhì)的載體，染色體結(jié)構(gòu)異常，例如丟失或重復(fù)或折斷和再結(jié)合(異位)，可導(dǎo)致疾病。一些主要染色體異常的類型可以由顯微檢查發(fā)現(xiàn)。唐氏綜合癥或21號三染色體是一種常見的染色體病，是指人有三條21號染色體。(4)線粒體型——這種相對稀有類型的遺傳病，由線粒體的非染色體DNA中突變所引起。線粒體是小的圓形或桿狀細胞器，參與細胞呼吸，存在于植物和動物細胞的細胞質(zhì)中。每個線粒體可能包含5-10個環(huán)形DNA。在優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)用于至少一種包含補償基因的多核苷酸的給藥。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)用于至少一種編碼缺失基因基因產(chǎn)物的多核苷酸的給藥，其中基因產(chǎn)物的表達對治療遺傳病或疾病的遺傳成分是有用的。在優(yōu)選的實施例中，包括所需有效負載分子的本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)對于制備治療遺傳病或疾病的遺傳成分的藥品是有用的。這種藥品適于口服、直腸、腸胃外的(如靜脈注射、肌內(nèi)或皮下)、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、膀胱內(nèi)、局部給藥(如粉劑、膏劑或滴劑)或口腔或鼻腔噴霧。藥品優(yōu)選口服、口腔和腸胃外地給藥，更優(yōu)選口服給藥。負載不同負荷量的顆粒，例如多核苷酸、多核苷酸表達載體或小分子治療劑，可以適當比例混合在一起一并給藥，例如膠囊劑，用于組合療法。本發(fā)明在涉及基因療法這一方面，核酸組合物既包含補償基因也包含編碼治療用蛋白質(zhì)的基因。補償基因的實施例包括編碼抗肌萎縮蛋白或功能性片段的基因，補償患胞囊纖維癥病人缺陷基因的基因，補償患受ADA病人缺陷基因的基因，以及編碼因子VIII的基因。編碼治療用蛋白質(zhì)的基因的實施例包括編碼紅細胞生成素、干擾素、LDL受體、GM-CSF、IL-2、IL-4和TNF的基因。另外，編碼特異結(jié)合到有毒物質(zhì)的單鏈抗體組分的核酸組合物可以進行給藥。在一些優(yōu)選的實施例中，抗肌萎縮基因是作為小基因的一部分來提供的，并且用于治療患肌肉萎縮癥的個體。在一些優(yōu)選的實施例中，提供了包含部分抗肌萎縮蛋白編碼序列的小基因?？辜∥s基因異常是形成輕度貝克型肌肉萎縮癥(BMD)和重度裘馨氏肌肉萎縮癥(DMD)的原因。在BMD中，有抗肌萎縮蛋白生成，但其大小和/或數(shù)量是異常的。病人逐漸變得虛弱。在DMD中，沒有蛋白質(zhì)產(chǎn)生，病人在13歲以前靠輪椅過活并且通常到20歲就死亡。有些病人，特別是患BMD的病人，由依照本發(fā)明輸送的小基因表達產(chǎn)生的部分抗肌萎縮蛋白可以增強肌肉功能。在優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療遺傳病和相信有基因成分存在的疾病的組合物和方法，例如Aarskog-Scott綜合癥、Aase綜合癥、軟骨發(fā)育不全、肢端發(fā)育不全、成癮性、腎上腺-腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、白化病、無瞼-巨口綜合癥、Alagille綜合癥、黑尿癥、α-1抗胰蛋白酶缺乏、Alport綜合癥、Alzheimer′s疾病、哮喘、自體免疫多腺綜合癥、雄激素不敏感癥綜合癥、Angelman綜合癥、共濟失調(diào)、共濟失調(diào)毛細管擴張、動脈粥樣硬化、注意力缺陷高活性紊亂(ADHD)、孤獨癥、禿發(fā)癥、Batten病、Beckwith-Wiedemann綜合癥、Best病、躁郁癥短指、乳腺癌、Burkitt淋巴瘤、慢性骨髓白血病、進行性神經(jīng)性肌萎縮疾病、Crohn病、兔唇、Cockayne綜合癥、CoffinLowry綜合癥、結(jié)腸癌、先天性腎上腺增生(CAH)、CorneliadeLange綜合癥、Costello綜合癥、Cowden綜合癥、鼻腔發(fā)育異常、Crigler-Najjar綜合癥、Creutzfeldt-Jakob病(CJD)、胞囊纖維癥、耳聾、抑郁癥、糖尿病、軟骨畸形、DiGeorge綜合癥、’唐氏綜合癥、誦讀困難、裘馨氏肌肉萎縮癥、Dubowitz綜合癥、外胚層發(fā)育異常、Ellis-vanCreveld綜合癥、Ehlers-Danlos綜合癥、大皰性表皮松解癥(EB)、癲癇、特發(fā)性震顫、家族高膽固醇血癥、家族性地中海熱、脆性X綜合癥、Friedreich共濟失調(diào)、Gaucher病、青光眼、葡萄糖半乳糖吸收不良、戊二酸尿癥、(脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜)回旋形萎縮、GoldbergShprintzen綜合癥(先天性腭咽閉合功能不全)、Gorlin綜合癥、Hailey-Hailey病、偏身肥大、血色沉著病、血友病、遺傳性運動神經(jīng)和感覺神經(jīng)病(HMSN)、遺傳非息肉病結(jié)腸直腸癌癥(HNPCC)、Huntington病、具有高IgM的免疫缺乏、幼年發(fā)作型糖尿病、Klinefelters綜合癥、Kabuki綜合癥、Leigh病(或綜合癥)、LongQT綜合癥、肺癌、惡性黑素瘤、躁狂抑郁癥、Marfan綜合癥、Menkes綜合癥、流產(chǎn)、粘多聚糖疾病、多內(nèi)分泌腺腫瘤形成、多硬化癥、肌肉萎縮癥、肌增重側(cè)部硬化癥、肌強直性營養(yǎng)不良、多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤、Niemann-Pick病、Noonan綜合癥、肥胖癥、卵巢癌、p53基因腫瘤、胰臟癌、帕金森氏病、陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿、Pendred綜合癥、腓側(cè)肌萎縮、苯丙酮尿癥(PKU)、多囊腎疾病、Prader-Willi綜合癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、前列腺癌、REAR綜合癥、Refsum病、色素性視網(wǎng)膜炎、視網(wǎng)膜成神經(jīng)細胞瘤、Rett綜合癥、Sanfilippo綜合癥、精神分裂癥、重度聯(lián)合免疫缺乏、鐮狀細胞貧血、脊柱裂、脊髓性肌萎縮、脊髓小腦萎縮癥、SRY性別決定、猝死、Tangier疾病、Tay-Sachs疾病、皮下TAR、Townes-Brocks綜合癥、結(jié)節(jié)硬化癥、Turner綜合癥、Usher綜合癥、vonHippel-Lindau綜合癥、Waardenburg綜合癥、Weaver綜合癥、Werner綜合癥、Williams綜合癥、Wilson病、著色性皮膚干燥癥和Zellweger綜合癥。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療遺傳病和相信有基因成分存在的疾病的組合物和方法，這些病癥表現(xiàn)為代謝紊亂，例如與蛋白質(zhì)相關(guān)的紊亂，包括鐮刀狀貧血和β型海洋性貧血、α型海洋性貧血、Marfan′s綜合癥、I型Ehlers-Danlos綜合癥、II型Ehlers-Danlos綜合癥、III型Ehlers-Danlos綜合癥、IV型Ehlers-Danlos綜合癥自體顯性、IV型Ehlers-Danlos綜合癥自體隱性、IV-D型Ehlers-Danlos綜合癥、V型Ehlers-Danlos綜合癥、VI型Ehlers-Danlos綜合癥、VII型Ehlers-Danlos綜合癥自體顯性、VII型Ehlers-Danlos綜合癥自體隱性、VIII型Ehlers-Danlos綜合癥、具有血小板機能障礙的Ehlers-Danlos綜合癥、皮膚松弛征、I型皮膚松弛征隱性遺傳、枕骨角綜合癥CutisLaxa、X伴性遺傳病、I型成骨不全癥、I-C型成骨不全癥、II/III型OsteogenesisImperfectaSilent、IV型成骨不全癥、OsteogenesisImperfectaNeonatalLethalform和成骨不全癥進行性致畸。在更優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療凝血系統(tǒng)遺傳病的組合物和方法，例如纖維蛋白原缺乏血癥，血纖蛋白原完全喪失、因子I；血纖蛋白原血癥機能障礙血纖蛋白原、因子I；因子II紊亂；組織因子缺乏；因子V缺乏，膽汁因子缺乏、因子VII缺乏、因子VIII缺乏(血友病A)、因子IX缺乏(血友病B)、因子X缺乏、因子XI缺乏、Rosenthal綜合癥、血漿促凝血酶原激酶前體(PTA)缺乏、因子XII缺乏、Hageman因子缺乏、因子XIII缺乏、因子V&VIII共同缺乏、因子VIII&IX共同缺乏、因子IX&XI共同缺乏，蛋白質(zhì)C缺乏，蛋白質(zhì)S缺乏、血栓形成傾向、抗凝血酶III缺乏、巨血小板綜合癥、血小板糖蛋白Ib缺乏、vonWillebrand病、Fletcher因子缺乏和前激肽釋放酶缺乏。在更優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療糖原貯存紊亂的組合物和方法，例如O型，I型(vonGierke病)，Ib型，Ic型，II型(Pompe病)，IIb型(Danon病)，III型(Cori病或Forbes病)，IV型(Andersen病)，V型(McArdle病)，VI型(Hers病)，VII型(Tarui病)，VIII型，IX型和XI型(Fanconi-Bickel綜合癥)。在更優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療果糖、半乳糖和甘油代謝缺陷的組合物和方法，例如遺傳果糖不耐性，醛縮酶B缺乏；果糖尿癥，肝聚果糖激酶缺乏；典型半乳糖血癥，半乳糖表異構(gòu)酶缺乏；半乳糖激酶缺乏；高甘油癥和甘油激酶缺乏。在另外優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療膽固醇和脂蛋白代謝缺陷的組合物和方法，例如載脂蛋白(a)-Lp(a)，I型高脂蛋白癥；Ib型高脂蛋白癥；載脂蛋白C-II缺乏；Ic型高脂蛋白癥，乳糜微粒血癥；家族性高膽固醇癥，II型高脂蛋白癥；II型高脂蛋白癥，家族性高β脂蛋白癥；III型高脂蛋白癥，載脂蛋白E缺乏；IV型高脂蛋白癥；V型高脂蛋白癥；家族性LCAT缺乏；Wolman?。恢鞍字久溉狈?；家族性高甘油三酸酯癥；V型高類脂癥；VI型高類脂癥；家族性配基缺陷apo-B；家族性高α脂蛋白癥；低β脂蛋白癥，載脂蛋白B-100缺乏；aβ脂蛋白癥，Kornzweig綜合癥；Tangier病，家族性高密度脂蛋白缺乏。在另外優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療粘多糖和糖脂紊亂的組合物和方法，例如IH型粘多糖癥(Hurler綜合癥)、IS型粘多糖癥(Scheie綜合癥)、IH/S型粘多糖癥(Hurler/Scheie綜合癥)、II型粘多糖癥(Hunter′s綜合癥)、III型粘多糖癥(A型Sanfilippo、B型Sanfilippo、C型Sanfiotalippo、D型Sanfilippo)、IV型粘多糖癥(A型Morquio、B型Morquio)、VI型粘多糖癥(Maroteaux-Lamy綜合癥)和VII型粘多糖癥(Sly綜合癥)。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療鞘糖脂代謝紊亂的組合物和方法，例如GM1神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥，包括彌撒性II型GM1，幼型；彌撒性III型GM1，成人型；GM2神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥，Sandhoff-Jatzkewitz?。籊M3神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥，Tay-Sachs病，Tay-SachsAB變體，Gaucher病，Niemann-Pick病，A，B，C1，C2和D型，Schindler病，F(xiàn)abry病，乳糖基?；拾贝歼^多癥，F(xiàn)arber病，Krabbe病，多硫酸酯酶缺乏，Austin病，異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良和硫脂沉積癥。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療低聚糖癥的組合物和方法，例如巖藻糖苷貯積癥、VI型粘液脂肪代謝障礙、涎脂病、α-甘露糖苷過多癥、β-甘露糖苷過多癥、I和II型唾液酸沉積癥、半乳糖唾液酸沉積癥、Goldberg綜合癥和天冬氨?；咸烟前纺颉Ｔ谄渌鼉?yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療溶酶體酶輸送紊亂的組合物和方法，例如粘脂癥I、唾液酸沉積癥；II型粘液脂肪代謝障礙、I-細胞?。缓虸II型粘液脂肪代謝障礙、粘脂質(zhì)累積病。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療氨基酸和有機酸代謝缺陷的組合物和方法，例如苯丙酮酸尿癥；I型酪氨酸血癥，酪氨酸代謝癥；II型酪氨酸血癥，Richner-Hanhart綜合癥；III型酪氨酸血癥；尿黑酸癥；高胱氨酸尿癥；組氨酸血癥；槭糖尿病(MSUD)；Ib型MSUD，II型MSUD；甲基丙二酸尿癥；I型非酮性高甘氨酸血癥(NKHI)和高賴氨酸血癥。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療尿素循環(huán)缺陷的組合物和方法，例如血氨過多；氨基甲酰磷酸鹽合成酶I(CPS-I)缺乏；鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶(OTC)缺乏；N-乙酰谷氨酸合成酶缺乏；精氨琥珀酸尿癥，精氨琥珀酸裂解酶缺乏；高精氨酸癥，精氨酸酶缺乏；瓜氨酸血癥，精氨琥珀酸合成酶缺乏和鳥氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶缺乏。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療氨基酸轉(zhuǎn)移缺陷的組合物和方法，例如I型胱氨酸尿癥；III型胱氨酸尿癥；Hartnup病和血氨過多-高鳥氨酸癥-高瓜氨酸癥(HHH)綜合癥。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療卟啉癥and膽紅素血癥的組合物和方法，，例如先天紅血球生成卟啉癥(CEP)；紅血球生成原卟啉癥(EPP)；ALA脫水酶缺乏卟啉癥(ADP)；急性間歇卟啉癥(AJP)；遺傳糞卟啉癥(HCP)；花斑型卟啉癥(VP)；遲發(fā)性皮膚卟啉癥(PCT)；肝紅血球生成卟啉癥(HEP)；Gilbert綜合癥；Crigler-Najjar綜合癥，類型I和I；Dubin-Johnson綜合癥和Rotor綜合癥。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療脂肪酸代謝錯誤的組合物和方法，例如極長鏈?；?CoA脫氫酶缺乏(VLCAD)；長鏈?；?CoA脫氫酶缺乏(LCAD)；中鏈?；?CoA脫氫酶缺乏(MCAD)；短鏈酰基-CoA脫氫酶缺乏(SCAD；肉毒堿轉(zhuǎn)移酶缺乏；肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I(CPTI)缺乏和肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶II(CPTII)缺乏。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療核苷酸代謝缺陷的組合物和方法，例如Lesch-Nyhan綜合癥；重度聯(lián)合免疫缺乏病(SCID)，由于腺苷脫氨酶(ADA)缺乏；痛風；腎結(jié)石病，由于腺嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(APRT)缺乏；黃嘌呤尿癥，由于黃嘌呤氧化酶缺乏；乳清酸尿癥，類型I&I和鳥氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶缺乏。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療金屬代謝和轉(zhuǎn)移紊亂的組合物和方法，例如Wilson病，Menkes病，枕骨角綜合癥和血色沉著病。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療過氧化物酶體紊亂的組合物和方法，例如Zellweger綜合癥，X連鎖腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良，新生兒腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良(NALD)，肢根軟骨發(fā)育異常斑點(RCDP)和嬰兒Refsum病(IRD)。在其它優(yōu)選的實施例中，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)提供治療與DNA缺陷修復(fù)有關(guān)的紊亂的組合物和方法，例如共濟失調(diào)毛細管擴張(AT)，著色性皮膚干燥癥(XP)，Cockayne綜合癥，Bloom綜合癥和范科尼貧血。給藥途徑給藥途徑包括但不限于口服；及經(jīng)口腔、舌下、肺部、透皮、粘膜、以及皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)和肌內(nèi)注射給藥。優(yōu)選的給藥途徑是口服；口腔、舌下、肺部和經(jīng)粘膜給藥。本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)以治療有效量對病人給藥。該微粒輸送系統(tǒng)可以單獨或作為藥學(xué)上可接受的組合物的一部分給藥。另外，化合物或組合物可以一次全部給藥，舉例來說，通過大丸藥注射，多次，例如通過一系列片劑，或在一段時間內(nèi)基本均勻輸送，舉例來說，利用控制釋放方法。也要注意，化合物的劑量可以隨時間變化。微粒輸送系統(tǒng)可以是速釋制劑、控釋制劑或其組合制劑給藥。術(shù)語″控制釋放″包括持續(xù)釋放、延遲釋放及其組合。本發(fā)明的藥物組合物可以以單個單位劑量或多個單位劑量特制、包裝或散裝銷售。此外所用的″單位劑量″是含有預(yù)定量活性成分的藥物組合物的分散量?；钚猿煞值牧客ǔ５扔趯Σ∪私o藥的活性成分劑量或這種劑量的一部分，舉例來說，這種劑量的一半或三分之一。在本發(fā)明藥物組合物中的活性成分、藥學(xué)上可接受的載體和任何添加成分的相對量將隨著受治療人身份、大小和病癥并進一步隨著該組合物給藥途徑而變化。組合物可以包含在0.1％和100％(w/w)之間的活性成分。本發(fā)明藥物組合物的單位劑量通常包括從約100毫克到約2克的活性成分，優(yōu)選包括從約200毫克到約1.0克的活性成分。另外，本發(fā)明的微粒輸送系統(tǒng)可以單獨、與具有不同負荷量的微粒輸送系統(tǒng)或與其它藥物活性化合物組合給藥?？梢赃x擇其它藥物活性化合物作為微粒輸送系統(tǒng)治療相同病癥或不同病癥。如果病人接受或正在接受多個藥物活性化合物，該化合物可以同時或按任何次序給藥。舉例來說，對于片劑，活性化合物可以在同時或按任何次序給藥的一個片劑或在獨立片劑中發(fā)現(xiàn)。另外，應(yīng)該認識到，組合物可以具有不同形式。舉例來說，一個或多個化合物可以通過片劑輸送，而另一個通過注射或作為糖漿劑口服給藥。本發(fā)明的另一個方面涉及包括本發(fā)明的藥物組合物和教學(xué)材料的試劑盒。教學(xué)材料包括出版物、錄音帶、圖表或任何一種說明本發(fā)明為人創(chuàng)造的藥物組合物的有用性的媒介。舉例來說，教學(xué)材料也可以描述本發(fā)明藥物組合物的適當劑量。舉例來說，本發(fā)明試劑盒的教學(xué)材料可以附于包含本發(fā)明的藥物組合物的容器或與包括本發(fā)明的藥物組合物的容器一起裝運?；蛘?，教學(xué)材料可以與包含本發(fā)明的藥物組合物的容器分別裝運，接受者可將教學(xué)材料和藥物組合物配合使用。本發(fā)明也包括包含本發(fā)明藥物組合物和將組合物送到人體的輸送裝置的試劑盒。舉例來說，輸送裝置可以是可壓擠噴霧劑瓶、配量噴霧劑瓶、氣霧劑裝置、噴霧器、干粉劑輸送裝置、自推溶劑/粉劑-配藥裝置、注射器、針、棉球或劑量測量容器。該試劑盒也可以包括在此所述的教學(xué)材料。舉例來說，試劑盒可以包括兩種獨立藥物組合物，其分別包括包含微粒輸送系統(tǒng)和藥學(xué)上可接受載體的第一組合物和包含第二藥物活性化合物和藥學(xué)上可接受的載體的組合物。試劑盒也包括獨立組合物的容器，例如分開的瓶或分開的箔包。容器的其它實施例包括注射器、箱、包等。通常，試劑盒包括對獨立組分給藥的指示說明。當獨立組分優(yōu)選以不同劑型給藥(例如口服和經(jīng)非腸胃)，以不同劑量間隔給藥，或當處方醫(yī)生需要對組合物的個別組分滴定時，試劑盒形式是特別有優(yōu)勢的。試劑盒的一個實例是硬泡沫塑料墊包裝。硬泡沫塑料墊包裝在包裝工業(yè)是眾所周知的，廣泛用于包裝藥劑單元劑型(片劑，膠囊劑等)。硬泡沫塑料墊包裝通常是由用優(yōu)選為透明塑料墊覆蓋的相對較硬的材料組成。在包裝過程中，在塑料墊上形成凹進窩。凹進窩為要包裝的片劑或膠囊劑的形狀和大小。接著，片劑或膠囊劑放入凹進窩，用較硬材料片與形成凹進窩反方向的塑料墊表面上密封。因此，片劑或膠囊劑密封在塑料墊與材料片之間的凹進窩中。優(yōu)選地，材料片的強度為能用手工在凹進窩處施加壓力而在凹進處形成開口，可將片劑或膠囊劑從包裝中取出為宜。片劑或膠囊劑然后可以通過所述開口取走?？梢栽谠噭┖猩咸峁┯洃涊o助物，例如靠近片劑或膠囊劑以數(shù)字的形式對應(yīng)應(yīng)服下指定的片劑或膠囊劑的用法天數(shù)，。另一種記憶輔助物實施例在卡片上印日歷，例如，″第一周，星期一，星期二、星期三，......等......第二周，星期一，星期二、星期三......”，等。其它的記憶輔助物也是容易得到的?！迕咳談┝俊蹇梢允窃诮o定日服用的單片劑或膠囊劑或一些丸劑或膠囊劑。同時，微粒輸送系統(tǒng)組合物的每日劑量可以由片劑或膠囊劑組成，而第二化合物的每日劑量可以由幾個片劑或膠囊劑組成，反之亦然。記憶輔助物應(yīng)當反映這一點并幫助正確給藥。在本發(fā)明的另一個實施例中，設(shè)計一個按計劃每次分配一個每日劑量的分配器。優(yōu)選地，分配器裝有記憶輔助物，從而更有助于依從劑量用法。這種記憶輔助物的一個實施例是機械計數(shù)器，指示已經(jīng)分配的每日劑量的數(shù)字。這種記憶輔助物的另一個實施例是具有液晶可讀器或可聽提示器信號的電池驅(qū)動的微芯存儲器，舉例來說，其可以讀取最后服用每日劑量的日期，并且/或者提示下次服用的時間。選擇性地含有其它藥物活性化合物的微粒輸送系統(tǒng)組合物，既可以通過口服、直腸、腸胃外(舉例來說，靜脈注射、肌內(nèi)、或皮下)腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹膜內(nèi)、膀胱內(nèi)、局部(舉例來說，粉劑，膏劑或滴劑)，也可以作為口腔或鼻腔噴霧劑，來對病人用藥。藥物組合物的腸胃外給藥包括任何一個以人組織物理性開口為特征，從而將藥物組合物通過該組織開口用藥的途徑。因此，腸胃外給藥包括注射組合物、外科切口應(yīng)用組合物、組織滲透非外科傷口應(yīng)用組合物，等。特別地，腸胃外給藥包括皮下、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、肌內(nèi)或胸骨內(nèi)注射以及靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)或腎透析技術(shù)。適于腸胃外注射的組合物包括與藥學(xué)上可接受的載體結(jié)合的活性成分，該載體是生理學(xué)上可接受的無菌水性或非水性溶液、分散劑、懸浮液或乳劑，或可還原成無菌可注射溶液或分散劑的無菌粉劑。合適的水性和非水性載體、稀釋劑、溶劑或賦形劑的實施例包括水、等壓鹽水、乙醇、多羥基化合物(丙二醇、聚乙二醇、甘油等)，及其合適的混合物，甘油三酸酯，包括例如橄欖油的植物油或例如乙基油酸鹽的可注射的有機酯。舉例來說，通過時用卵磷脂等的糖衣，在分散劑情況下保持需要的顆粒大小，和/或使用表面活性劑，可以保持適當?shù)牧鲃有?。這種配方可以以適于大丸藥給藥或持續(xù)給藥的形式制備、包裝或出售。可注射配方可以以單位劑量的形式制備、包裝或出售，例如安瓿、包含防腐劑的多劑量容器，或者自我注射或由開業(yè)醫(yī)生注射的單次使用裝置。腸胃外給藥的配方包括懸浮液、溶液、在油性或水性賦形劑中的乳劑、糊劑和可植入的持續(xù)釋放或可生物降解配方。這種配方可以進一步包括一個或多個添加成分，包括懸浮、穩(wěn)定或分散劑。在腸胃外給藥配方的一項實施例中，活性成分以干的形式(即粉劑或顆粒)提供，用合適的賦形劑(例如無菌無熱原水)還原，然后將重組組合物進行腸胃外給藥。藥物組合物可以以無菌可注射水性或油性懸浮液或溶液的形式制備、包裝或出售。此懸浮液或溶液可以依照現(xiàn)有技術(shù)配制，并可以包括除活性成分之外的添加劑，例如在此所述的分散劑、濕潤劑或懸浮劑。舉例來說，這種無菌可注射配方可以用無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑制備，例如水或1，3-丁二醇。其它可接受的稀釋劑和溶劑包括Ringer溶液，等壓氯化鈉溶液和不揮發(fā)性油，例如合成甘油一酸酯或甘油二酯。其它有效的腸胃外給藥的配方包括那些包括微晶形式、在脂質(zhì)體制劑中或作為生物降解聚合物系統(tǒng)的組分的活性成分。持續(xù)釋放的或輸入的組合物包括藥學(xué)上可接受的聚合物或疏水的物質(zhì)，例如乳劑、離子交換樹脂、少量可溶聚合物或少量可溶鹽。這些組合物也可以包含助劑，例如防腐劑、保濕劑、乳化劑和/或分散劑。組合物的微生物污染的防止可以通過添加不同抗菌和抗霉菌制劑來完成，例如苯甲酸酯類、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。也可以包括等壓制劑，例如糖、氯化鈉等?？勺⑸渌幬锝M合物的延續(xù)吸收可以通過使用能夠延遲吸收的制劑實現(xiàn)，例如，一硬脂酸鋁和/或凝膠。劑型可以包括固體或可注射的輸入劑或貯存劑。在優(yōu)選的實施例中，輸入劑包括微粒輸送系統(tǒng)和可生物降解聚合物的等分部分。在優(yōu)選的實施例中，合適的可生物降解聚合物可以選自聚門冬氨酸酯、聚谷氨酸酯、聚(L-丙交酯)、聚(D，L-丙交酯)、聚丙交酯-乙交酯共聚物、聚己內(nèi)酯、聚酐、聚(β-氫氧基丁酸酯)、聚(原酸酯)及含磷氡鏈聚合物?？诜o藥的固體劑型包括膠囊劑、片劑、粉劑以及顆粒。在這種固體劑型中，微粒輸送系統(tǒng)非必要地與至少一種惰性常規(guī)賦形劑(或載體)混合，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣或(a)填充劑或補充劑，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇或硅酸；(b)粘合劑，例如，羧甲基纖維、藻酸鹽、凝膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖或阿拉伯樹膠；(c)保濕劑劑，例如甘油；(d)崩解劑，例如，瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些復(fù)合硅酸鹽或碳酸鈉；(e)溶液阻滯劑，例如，石蠟；(f)吸收促進劑，例如，季銨化合物；(g)保濕劑，例如，鯨蠟醇或甘油一硬脂酸鹽；(h)吸附劑，例如，高嶺土或斑脫土；和/或(i)潤滑劑，例如，滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂硫酸鈉或其混合物。對于膠囊劑和片劑，劑型也可以包括緩沖劑。包含微粒輸送系統(tǒng)的片劑可以通過例如壓縮或模壓活性成分來制備，或者包括一個或多個添加成分。壓縮片劑可以在合適的裝置中通過壓縮活性成分為粉劑或顆粒等自由流動形式來制備，或者是與一個或多個粘合劑、潤滑劑、賦形劑、表面活性劑和分散劑混合來制備。模壓片劑可以在合適的裝置中通過模壓活性成分、藥學(xué)上可接受的載體以及至少足以濕潤混合物的液體的混合物來制備。用于片劑制造藥學(xué)上可接受的賦形劑包括隋性稀釋劑、?；捅澜鈩⒄澈蟿┖蜐櫥瑒?。已知的分散劑包括馬鈴薯淀粉和淀粉乙醇酸鈉。已知的表面活性劑包括月桂硫酸鈉。已知的稀釋劑包括碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、微晶纖維素、磷酸鈣、磷酸氫鈣和磷酸鈉。已知的粒化和崩解劑包括玉米淀粉和褐藻酸。已知的粘合劑包括凝膠、阿拉伯樹膠、預(yù)凝膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和羥基丙甲基纖維素。已知的潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸、硅石和滑石。片劑可以是非覆膜的，或其可以用已知方法覆膜以實現(xiàn)在人胃腸道中延遲崩解，從而提供持續(xù)的釋放以及微粒輸送系統(tǒng)的吸收，例如在小腸的Peyer淋巴結(jié)區(qū)域中。舉例來說，甘油基一硬脂酸鹽或甘油基二硬脂酸鹽等物質(zhì)可以用于覆膜片劑。再舉例來說，片劑可以用在美國專利No.4,256,108；4,160,452；和4,265,874中的方法覆膜以形成向滲性控制釋放的片劑。為提供藥學(xué)上良好和適口的制劑，片劑可以進一步包括甜味劑、調(diào)味劑、著色劑、防腐劑或其組合。固體劑型如片劑、糖衣丸、膠囊劑和粒劑，可以用糖衣或殼體制備，例如腸衣及其它本領(lǐng)域周知的材料。其也可以包含不透明劑，并且也可以是能以延遲的方式釋放微粒輸送系統(tǒng)的組合物。放入的組合物的實施例是聚合物和蠟狀物?；钚曰衔镆部梢允俏⒛z囊形式，如適合，可用一個或多個上述賦形劑。相似類型的固體組合物可以用作在軟或硬填充凝膠的膠囊劑中的填充劑，該膠囊劑使用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的賦形劑。包括微粒輸送系統(tǒng)的硬膠囊劑可以利用凝膠等可生理可降解的組合物來制備。這種硬膠囊劑包含微粒輸送系統(tǒng)，并進一步包含添加成分，例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土的惰性固體稀釋劑。含有微粒輸送系統(tǒng)的軟凝膠膠囊劑可以利用凝膠等可生理降解的組合物來制備。這種軟膠囊劑包括微粒輸送系統(tǒng)，其可以與水或花生油、液態(tài)石蠟或橄欖油等油介質(zhì)混合?？诜M合物特別是在病人的小腸或大腸中釋放口服給藥的制劑，可以利用已知的技術(shù)制備。舉例來說，輸送到包括結(jié)腸在內(nèi)的胃腸系統(tǒng)的配方包括腸覆膜系統(tǒng)，基于例如聚(甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯)等異丁烯酸鹽共聚物，其只能在pH值為6和以上條件下可溶，因此聚合物在進入小腸時即開始溶解。此聚合物配方崩解的部位依賴于腸內(nèi)運輸?shù)乃俾屎捅揪酆衔锏臄?shù)量。例如，相對厚的聚合物糖衣用來輸送到近端的結(jié)腸(Hardy等，1987Aliment.Pharmacol.Therap.1273-280)。也可以使用能提供結(jié)腸特定部位輸送的聚合物，在此，聚合物依賴大腸細菌菌群對聚合物膜進行酶促降解并因此釋放藥物。舉例來說，偶氮聚合物(美國專利No.4,663,308)，苷類(Friend等，1984，J.Med.Chem.27261-268)和多種天然得到和修飾的多聚糖(參見PCT申請PCT/GB89/00581)可以用于這種配方。如美國專利No.4,777,049所描述的脈沖釋放技術(shù)，其可以將微粒輸送系統(tǒng)給藥到胃腸道內(nèi)特定部位。這種系統(tǒng)允許在預(yù)定的時間進行輸送并且可以用于輸送微粒輸送系統(tǒng)，或者與其它可改變局部微環(huán)境以促進穩(wěn)定和攝取的添加劑一同輸送，除了水，可以不直接依賴外部條件而進行體內(nèi)釋放。口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳劑、溶液、懸浮液、糖漿劑和酏劑。除活性化合物之外，液體劑型可以包含在本領(lǐng)域中常見的隋性稀釋劑，例如水或其它溶劑、等壓鹽水、增溶劑和乳化劑，如，乙醇，異辛烷丙醇，乙基碳酸鹽，乙基醋酸鹽，苯甲醇，苯甲酸芐酯，丙二醇，1，3-丁烯乙二醇，二甲基形式酰胺，油脂，特別是杏仁油，花生油(arachisoil)，椰子油，棉籽油，花生油(groundnutoil)，玉米胚油，橄欖油，蓖麻油，芝麻油，MIGLYOLTM，甘油，分餾的植物油，例如液態(tài)石蠟的礦物油，四氫糠醇，聚乙二醇，山梨聚糖的脂肪酸酯類或這些物質(zhì)的混合物等。除了這些隋性稀釋劑，該組合物還可以包括助劑，例如保濕劑、乳化和懸浮劑、鎮(zhèn)痛劑、防腐劑、緩沖劑、鹽、甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和芳香劑。除了這些活性化合物以外，懸浮液還可以包括懸浮劑，例如乙氧基異辛烷硬脂醇、聚氧乙烯烷基山梨糖醇或山梨聚糖酯類、微晶纖維素、氫化可食用脂肪、普羅比妥鈉藻酸鹽、聚乙烯吡咯烷酮、西黃蓍膠樹脂、阿拉伯樹膠樹脂、瓊脂，和纖維素衍生物，例如普羅比妥鈉羧甲基纖維、甲基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、AlO(OH)(aluminummetahydroxide)、斑脫土或這些物質(zhì)的混合物等。適于口服給藥的本發(fā)明的藥物組合物的液體配方可以液體形式或者以可在使用前用水或另一合適賦形劑還原的固體形式制備、包裝和出售。已知的分散劑或保濕劑包括天然存在的磷脂，例如卵磷脂，烯烴氧化物縮合物，其具有脂肪酸、長鏈脂肪醇、由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯，或具有由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯(例如聚氧乙烯烷基硬脂酸鹽，十七乙烯氧基十六烷醇(heptadecaethyleneoxycetanol)，聚氧乙烯烷基山梨糖醇單油酸鹽，和聚氧乙烯烷基山梨聚糖單油酸鹽)。已知的乳化劑包括卵磷脂和阿拉伯樹膠。已知的防腐劑包括甲基、乙基或n-對丙基羥基苯甲酸脂、抗壞血酸和山梨酸。已知的甜味劑包括如甘油、丙二醇、山梨糖醇、蔗糖和糖精。已知的油性懸浮液的增稠劑包括如蜂蠟、硬石蠟、和鯨蠟醇。在其它實施例中，藥物組合物可配制成營養(yǎng)制品，即作為食品或添加到食品(例如用于直接消費的加工品)或食品材料的形式(例如用于在食用前加到食品中的可食用成分)。合適食品的實施例包括棒棒糖等糖果，餅干、面包、甜品和點心蛋糕等焙烤食品，完整的、提純的或搗碎的水果和蔬菜，飲料和處理過的肉制品。合適食品材料的實施例包括碾磨的谷物和糖，香料和其它調(diào)味品和糖漿劑。優(yōu)選地，此處所述的微粒輸送系統(tǒng)不要延長高溫烹調(diào)時間，以減少化合物的降解。直腸或陰道給藥的組合物可以通過與微粒輸送系統(tǒng)混合來制備，該系統(tǒng)含可可脂、聚乙二醇或栓劑蜂蠟等非刺激性合適的賦形劑或載體，可可脂、聚乙二醇或栓劑蜂蠟在常溫下呈固體而在體溫下為液體，因此能在直腸或陰道腔內(nèi)溶解和釋放微粒輸送系統(tǒng)。這樣的組合物可以為例如栓劑、保留灌腸制劑和直腸或結(jié)腸灌洗溶液劑的形式。此外，栓劑配方可以進一步包括各種添加成分，如抗氧化劑和防腐劑的。保留灌腸制劑或直腸或結(jié)腸灌洗溶液劑可以由活性成分與藥學(xué)上可接受的液態(tài)載體進行組合而制備。如本領(lǐng)域所公知的，灌腸制劑可以利用并可以包裝在其中的適合于人直腸結(jié)構(gòu)的輸送裝置給藥，。此外灌腸制劑可以包括各種添加成分，如抗氧化劑和防腐劑。本發(fā)明的藥物組合物可用適于經(jīng)由口腔對肺部給藥的配方進行制備、包裝和出售。這種組合物可以是方便給藥的干粉劑形式，利用包括干粉劑貯存庫的裝置，其可以引導(dǎo)噴射劑流分散粉劑，或利用自推溶劑/粉劑配藥容器，例如包括在密封容器中懸浮在低沸點噴射劑中的微粒輸送系統(tǒng)的裝置。干粉劑組合物可以包括例如糖的固體細小粉劑稀釋劑，并以方便的單位劑量形式提供。低沸點噴射劑通常包括在大氣壓下沸點低于65的液體噴射劑。通常噴射劑可以構(gòu)成組合物的50到99.9％(w/w)，活性成分可以構(gòu)成組合物的0.1to20％(w/w)。此外噴射劑可以包括下列添加成分，例如液體非離子或固體陰離子表面活性劑或固體稀釋劑(優(yōu)選具有與組成微粒輸送系統(tǒng)的顆粒大小相同的顆粒)。為肺部輸送的本發(fā)明的藥物組合物也可以提供懸浮液滴形式的活性成分。此配方可以作為水性或稀醇懸浮液制備、包裝和出售，選擇性地利用無菌形式，且包括微粒輸送系統(tǒng)，并且可以利用任何噴霧法或霧化裝置方便地給藥。此外該配方可以包括一個或多個包括調(diào)味劑的添加成分，例如糖精鈉、揮發(fā)油、緩沖溶液、表面活性劑或例如甲基羥基苯甲酸脂的防腐劑。此處描述的用于肺部輸送的配方也適用于本發(fā)明的藥物組合物的鼻腔內(nèi)輸送。另一個鼻腔內(nèi)給藥的合適配方是包括微粒輸送系統(tǒng)的粗粉劑。此配方是用鼻吸藥的方法給藥，即從靠近鼻孔裝有粉劑的容器內(nèi)通過鼻腔通道快速吸入。本發(fā)明的藥物組合物可用適于口腔給藥的配方制備、包裝和出售。舉例來說，此配方可以是以常規(guī)方法制成的片劑或錠劑形式，可以包含0.1to20％(w/w)微粒輸送系統(tǒng)、含有口服溶解或降解組合物或者上述一個或多個添加成分的平衡?？蛇x擇地，適合口腔給藥的配方包括含有微粒輸送系統(tǒng)的粉劑或氣溶化或霧化的溶液或懸浮液?？贵w如同在此所用的，術(shù)語″抗體″(Ab)或″單克隆抗體″(Mab)包括完整的分子以及抗體片段(例如，F(xiàn)ab和F(ab′)2片段)，其與蛋白質(zhì)特異性地結(jié)合。Fab和F(ab′)2片段缺乏完整抗體的Fc片段，可以更快地從循環(huán)中去除，與完整抗體相比具有比較少的非特異性組織結(jié)合。因此，優(yōu)選這些片段以及Fab產(chǎn)物或其它免疫球蛋白表達文庫。此外，本發(fā)明的抗體包括嵌合的、單鏈的和人源化抗體?？贵w可以用本領(lǐng)域任何已知的技術(shù)來制備。下面簡要討論合適的技術(shù)?？贵w可以被多克隆或單克隆。多克隆抗體對于最初的發(fā)展可以有顯著優(yōu)點，包括生產(chǎn)的快速性和多個抗原決定基的特異性，確保強免疫熒光著色和抗原捕獲。單克隆抗體適應(yīng)于大規(guī)模生產(chǎn)；優(yōu)選的實施例包括至少一種單克隆抗體特異于靶抗原的抗原決定基。由于多克隆制劑不能輕易大規(guī)模生產(chǎn)復(fù)制，另一個實施例使用了至少四個單克隆抗體的合劑。單鏈Fv(″scFv″或″sFv″)多肽是共價鍵合的VHVL異源二聚體，其可以由核酸表達，該核酸包含或是直接連接或是通過肽編碼接頭連接的VH-和VL-編碼序列。Huston，等Proc.Nat.Acad.Sci.USA，855879-5883(1988)。有很多將來自抗體V區(qū)域的自然聚集但化學(xué)獨立的多肽輕鏈和重鏈轉(zhuǎn)換為scFv分子的結(jié)構(gòu)，scFv分子折疊成大體與抗原結(jié)合位點結(jié)構(gòu)類似的三維結(jié)構(gòu)。參見，例如美國專利No.6,512,097，5,091,513和5,132,405和4,956,778。在一類實施例中，重組設(shè)計方法可以用于發(fā)展合適的化學(xué)結(jié)構(gòu)(接頭)，將來自抗體可變區(qū)的兩種天然關(guān)聯(lián)的但是化學(xué)獨立的多肽輕鏈和重鏈轉(zhuǎn)換為sFv分子，其折疊成大體與天然抗體結(jié)構(gòu)類似的三維結(jié)構(gòu)。設(shè)計標準包括確定跨越一條鏈的C-端和另一條鏈的N-端之間距離的適當長度，其中，接頭通常由不易卷曲或形成二級結(jié)構(gòu)的小的親水氨基酸殘基形成。此方法在本領(lǐng)域中已經(jīng)說明。參見，例如Huston等人的美國專利No.5,091,513和5,132,405；和Ladner等人的美國專利No.4,946,778。在此方面，設(shè)計接頭的常規(guī)第一步是確認要連接的似是而非的位點。在VH和VL每個多肽域上的適當連接位點包括導(dǎo)致多肽域的殘基最小損失的那些位點，和需要包括符合分子穩(wěn)定性要求最少數(shù)目的殘基的接頭的那些位點。一對位點確定要連接的″溝″。將一個域C端連接到下一格域N端的接頭通常包含親水氨基酸，其在生理溶液中呈現(xiàn)無特定結(jié)構(gòu)的構(gòu)型，并且優(yōu)選不含具有可能影響VH和VL鏈正確折疊的大的側(cè)基團。因此，本發(fā)明的合適的接頭通常為多套甘氨酸和絲氨酸殘基交互組成的多肽鏈，并且可以包含用來增強溶解度的插入的谷氨酸和賴氨酸殘基。利用本領(lǐng)域已知的各種寡核苷酸合成技術(shù)，可以容易地提供編碼接頭部分的核苷酸序列。或者，人源化抗體片段可以包含鼠科單克隆抗體的抗原結(jié)合位點和來自人抗體的可變區(qū)域片段(缺乏抗原結(jié)合位點)。嵌合抗體和進一步設(shè)計的單克隆抗體的制造方法包括那些在Riechmann等(Nature332323，1988)，Liu等(PNAS843439，1987)，Larrick等(BioTechnology7934，1989)，以及Winter和Harris(TIPS14139，May，1993)文章中所述。產(chǎn)生人抗體的一個方法包括將非人類動物轉(zhuǎn)基因鼠用一個靶抗原進行免疫，賦予例如具有的的免疫性，從而在所述動物中產(chǎn)生抗靶抗原的抗體。在非人類動物中產(chǎn)生人抗體的方法已經(jīng)得到發(fā)展?？贵w可以部分是人的，或優(yōu)選為全部是人的?？梢允褂帽灰刖幋a一個或多個人類免疫球蛋白鏈的遺傳物質(zhì)的非人類動物(例如轉(zhuǎn)基因鼠)。可以不同的方式改變這種轉(zhuǎn)基因鼠的基因?；虿僮骺梢詫?dǎo)致在至少一些(實際上優(yōu)選全部)由動物免疫產(chǎn)生的抗體中，人免疫球蛋白多肽鏈取代內(nèi)生免疫球蛋白鏈。在此可以提供用靶抗原對轉(zhuǎn)基因動物進行免疫而產(chǎn)生的抗體。一個或多個內(nèi)生免疫球蛋白基因被一各種方式滅活的鼠已經(jīng)得到。人類免疫球蛋白基因已經(jīng)引入鼠中取代滅活的鼠基因。在動物中產(chǎn)生的抗體與引入到動物的人遺傳物質(zhì)編碼的人免疫球蛋白多肽鏈相結(jié)合。這種轉(zhuǎn)基因動物的生產(chǎn)和使用技術(shù)在美國專利5,814,318，5,569,825，和5,545,806中得到說明，在此作為參考文獻引用。單克隆抗體可以由傳統(tǒng)方法產(chǎn)生，例如通過永生化從完成免疫程序的轉(zhuǎn)基因動物獲得的脾細胞的來產(chǎn)生。脾細胞通過傳統(tǒng)方法與骨髓瘤細胞融合來產(chǎn)生雜交瘤細胞。產(chǎn)生雜交瘤細胞系的方法包括用免疫原對轉(zhuǎn)基因動物進行免疫，該免疫原具有靶抗原的至少七個相鄰氨基酸殘基；從免疫動物獲得脾細胞；將獲得的脾細胞與骨髓瘤細胞系融合，從而產(chǎn)生雜交瘤細胞；并識別產(chǎn)生與靶抗原結(jié)合的單克隆抗體的雜交瘤細胞。這種雜交瘤細胞和從其產(chǎn)生的單克隆抗體是包含在本發(fā)明范圍內(nèi)的。用傳統(tǒng)技術(shù)來提純由雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體。在另一個實施例中，抗體片段是通過在競爭組(competingset)抗原參與下的對抗一組抗原的非免疫噬菌體展示抗體譜上選擇產(chǎn)生的(Stausbol-Grn，B.等，Denovoidentificationofcell-typespecificantibody-antigenpairsbyphagedisplaysubtraction.Isolationofahumansinglechainantibodyfragmentagainsthumankeratin14.EurJBiochem2001May；268(10)3099-107)。此方法可以用于產(chǎn)生對抗靶抗原的噬菌體抗體。此方案通常是基于Stausbol-Grn，B.，等2001年所述的。簡要地說，使用非免疫半合成噬菌體展示抗體譜。該譜是一個通過從lox文庫多代克隆重鏈和輕鏈區(qū)域而構(gòu)成的單鏈Fv(scFv)噬菌粒譜(Griffiths，A.D.，等(1994)Isolationofhighaffinityhumanantibodiesdirectlyfromlargesyntheticrepertoires.EMBOJ.13，3245-3260.)。大腸桿菌TG1(supEhsdD5Δ(lac-proAB)thiF’{traD36proAB+laclqlacZΔM15})是琥珀抑制株(supE)并用于繁殖噬菌體顆粒。大腸桿菌HB2151(ara[Δ(lac-proAB)thiF′{proAB+laclqlacZΔM15})是非抑制株并用于可溶scFv的表達。在另一個實施例中，人單鏈Fv(scFv)文庫可以放大和救護(rescued)，如下述文獻所述(Gao等，Makingchemistryselectablebylinkingittoinfectivity，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，Vol.94，pp.11777-11782，October1997)。將該文庫針對懸浮在PBS中的靶抗原進行淘選(10mM磷酸鹽，150mMNaCl，pH7.4)，并且通過酶連接的免疫吸附試驗(ELISA)選擇陽性scFv-噬菌體。在其它優(yōu)選的實施例中，通過提供編碼重組抗體的表達載體來提供抗體，該重組抗體優(yōu)選為單鏈Fv抗體。實施例1圖1是酵母細胞壁橫截面的示意圖100，從外到內(nèi)表示外部絲狀層110、外部甘露糖蛋白層120、β葡聚糖層130、β葡聚糖-幾丁質(zhì)層140、內(nèi)部甘露糖蛋白層150、質(zhì)膜160和細胞質(zhì)170。完整葡聚糖顆粒(WGP，LotW0282)是通過前述α-β技術(shù)得到的。一般來說，完整葡聚糖顆粒是由酵母細胞制備的，從酵母細胞壁提取和提純可溶于堿的葡聚糖片段。用水性氫氧化物溶液處理酵母細胞而不破壞酵母細胞壁，其可消化蛋白質(zhì)和細胞的胞內(nèi)部分，使葡聚糖壁組分無明顯蛋白質(zhì)污染，并且細胞壁的β(1-6)和β(1-3)連接葡聚糖的結(jié)構(gòu)大體不變。將酵母細胞(S.cerevisae株R4)在最小培養(yǎng)基中在補料分批發(fā)酵條件下培養(yǎng)到對數(shù)中期。以2000rpm分批離心10分鐘獲得細胞(～90g干細胞重量/L)。然后將細胞在蒸餾水中洗一次，隨后在1升1MNaOH中重新懸浮并加熱到90攝氏度。將細胞懸浮液在此溫度下劇烈地攪拌1小時。含細胞壁的不可溶物質(zhì)通過2000rpm離心10分鐘來回收。然后將此物質(zhì)在1升1MNaOH中懸浮并再次加熱到90攝氏度。將此懸浮液在此溫度下劇烈攪拌1小時。然后將懸浮液冷卻到室溫并持續(xù)提取16小時。以2000rpm離心10分鐘回收含細胞壁的不可溶殘渣。該物質(zhì)最終用HCl得到pH4.5的1升水，在75攝氏度下1小時提取出來。不可溶殘渣通過離心回收，用200毫升水洗三次，200毫升異丙醇洗四次，用200毫升丙酮洗兩次。將得到的漿料放入玻璃盤中，在55攝氏度下減壓干燥生成7.7g的白色細小粉劑。有關(guān)完整葡聚糖顆粒及其制備方法的更詳細的說明可以參見美國專利No.4,810,646；4,992,540；5,028,703；5,607,677和5,741,495，其技術(shù)在此可作參考。舉例來說，美國專利No.5,028,703公開酵母WGP顆?？梢杂媒湍讣毎?jīng)過發(fā)酵培養(yǎng)產(chǎn)生。通過在SorvalRC2-B離心機中以8000rpm分批離心20分鐘獲得細胞。然后將細胞在蒸餾水中洗兩次，準備提取完整葡聚糖。第一步包括在1升4％w/vNaOH中重新懸浮細胞團并加熱到100攝氏度。將細胞懸浮液在此溫度下有力地攪拌1小時。以2000rpm離心15分鐘來回收含細胞壁的不可溶物質(zhì)。然后將此物質(zhì)在2升3％w/vNaOH中懸浮并加熱到75攝氏度。將此懸浮液在該溫度下劇烈攪拌3小時。然后將懸浮液冷卻到室溫并持續(xù)提取16小時。以2000rpm離心15分鐘來回收不可溶殘渣。該物質(zhì)最終在用HCl得到pH4.5的2升3％w/vNaOH，75攝氏度下1小時提取出來。不可溶殘渣通過離心而回收，用200毫升水洗三次，用200毫升脫水乙醇洗一次，并用200毫升脫水乙醚洗兩次。將得到的漿料放入培養(yǎng)皿中并干燥。YGMP顆粒的制備將釀酒酵母(100gFleishmansBakers酵母)懸浮在1升1MNaOH中并加熱到55攝氏度。將細胞懸浮液在此溫度下混合1小時。以2000rpm離心10分鐘來回收含細胞壁的不可溶物質(zhì)。然后將該物質(zhì)在1升水中懸浮，并用HCl調(diào)到pH4.5，在55攝氏度下培養(yǎng)1小時。通過離心回收不可溶殘渣，并用1000毫升水洗一次，用200毫升脫水異丙醇洗四次，并用200毫升丙酮洗兩次。將得到的漿料放入玻璃盤中，并在室溫下干燥得到12.4g的微白色細小粉劑。YGMP顆粒的制備將釀酒酵母(75gSAF-甘露聚糖)懸浮在1升水中，用1MNaOH調(diào)到pH12-12.5，并加熱到55攝氏度。將細胞懸浮液在此溫度下混合1小時。以2000rpm離心10分鐘來回收含細胞壁的不可溶物質(zhì)。然后此物質(zhì)在1升水中懸浮并用HCl調(diào)到pH4.5，并且在55攝氏度下培養(yǎng)1小時。通過離心回收不可溶殘渣并用1000毫升水洗一次，用200毫升脫水異丙醇洗四次，并用200毫升丙酮洗兩次。將得到的漿料放入玻璃盤中，并在室溫下干燥并產(chǎn)生15.6g的微白色細小粉劑。YCP顆粒的制備將從美國模式菌種收集中心(AmericanTypeCultureCollection)(ATCC，Manassas，VA)得到的酵母細胞(紅酵母)在YPD中30攝氏度下有氧培養(yǎng)到停滯期。從ATCC得到的紅酵母培養(yǎng)物包括No.886，917，9336，18101，20254，20837和28983。以2000rpm分批離心10分鐘獲得細胞(1L)。然后將細胞在蒸餾水中洗一次，然后在用HCl調(diào)到pH4.5的水中，75攝氏度下重新懸浮1小時。通過2000rpm離心10分鐘來回收含細胞壁的不可溶物質(zhì)。然后將此物質(zhì)在1升1MNaOH中，并且加熱到90攝氏度懸浮1小時。然后將懸浮液冷卻到室溫并持續(xù)提取16小時。通過2000rpm離心15分鐘來回收不可溶殘渣，并用1000毫升水洗兩次，用200毫升異丙醇洗四次，并用200毫升丙酮洗兩次。將得到的漿料放入放入玻璃盤中，并在室溫下干燥得到2.7g的淺褐色細小粉劑。圖2A是酵母細胞壁顆粒的結(jié)構(gòu)圖；圖2B是熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，表示酵母細胞壁顆粒的甘露聚糖組分的伴刀豆球蛋白-A-FITC(con-A-fluoresceinisothiocyanate，SigmaChemical，St.Louis，MO)著色；圖2C是YGMPβ葡聚糖-甘露聚糖顆粒的結(jié)構(gòu)圖，圖2D是表示YGMPβ葡聚糖-甘露聚糖顆粒的部分的con-A-FITC著色的熒光顯微照片；圖2E是YGPβ葡聚糖顆粒的結(jié)構(gòu)圖，以及圖2F是表示缺少YGPβ葡聚糖顆粒的con-A-FITC著色的熒光顯微圖。伴刀豆球蛋白-A是與甘露糖選擇性結(jié)合的外源凝集素。為觀察在不同酵母細胞壁制劑表面甘露聚糖的量和分布模式，用熒光顯微鏡檢查評估伴刀豆球蛋白-A-FITC結(jié)合。以1×108顆粒/ml的密度制備PBS+1mMMgCl2+1mMCaCl2中的Baker′s酵母(FleishmansBakers酵母)、YGMP和YGP的懸浮液。Con-A-FITC原液是在PBS+1mMMgCl2+1mMCaCl2中的1mg/ml的伴刀豆球蛋白-A-FITC。標記混合物在微量離心管中制備，由以下成分組成100μlPBS+1mMMgCl2+1mMCaCl22.5μl酵母細胞壁顆粒懸浮液2.5μlcon-A-FITC原液。含有標記混合物的微量離心管在黑暗中室溫下培養(yǎng)1小時。通過離心(10,000rpm，10分鐘)回收酵母細胞壁顆粒，然后用100μlPBS洗滌三次此顆粒狀物。將洗滌后的酵母細胞壁顆粒重新懸浮在100μlPBS中，并轉(zhuǎn)移到96孔板作熒光顯微鏡檢查。圖2B、2D和2F為示范區(qū)域照片。表1總結(jié)了制備上述WGP顆粒、YGP顆粒、YGMP顆粒和YCP顆粒的化學(xué)成分的分析結(jié)果。注意，與現(xiàn)有技術(shù)的WGP顆粒相比，YGP顆粒和YGMP顆粒具有較低β-葡聚糖和較高蛋白質(zhì)含量。YGMP顆粒與其它顆粒類型相比具有明顯較高的甘露聚糖含量。YCP顆粒與其它顆粒類型相比具有明顯較高的幾丁質(zhì)+殼聚糖含量。實施例2酵母細胞壁顆粒的流體力學(xué)體積酵母細胞壁顆粒的流體力學(xué)體積用來測量顆粒的負荷容量。將1g測定量的酵母細胞壁顆粒在15ml配衡離心管中稱重，以確定干顆粒的重量。將水(12.5ml)加到管中，并將管震蕩以混合酵母細胞壁顆粒的懸浮液。使顆粒變得膨脹并吸收水分30分鐘。將顆粒懸浮液以2000rpm離心10分鐘。除去水并稱管的重量，并且計算所吸收的水分的重量。將流體力學(xué)體積計算為吸收的水的重量與干顆粒重量的比率。表2給出了現(xiàn)有技術(shù)WGP與本發(fā)明的YGP和YGMP兩種制備方法的結(jié)果。WGPPrep2的低流體力學(xué)體積可能是由于在此制劑中破碎顆粒的數(shù)量增加。對于其它顆粒，“較純的”YGP具有比YGMP更高的流體力學(xué)體積。通常地，將負荷體積限制于＜66％流體力學(xué)體積，以保證酵母細胞壁顆粒對負荷的定量吸收。按此要求，每1mgYGP顆粒將加載≤5.5μl負荷量，每1mgYGMP顆粒將加載≤4.4μl負荷量。實施例3YGP和YGMP的口服生物利用率為研究攝取而制備熒光標記的酵母葡聚糖顆粒(YGP-F)和熒光標記的酵母葡聚糖-甘露聚糖顆粒(YGMP-F)。起始物質(zhì)是新制備的5mlYGP(5mg/ml于0.1M硼酸鹽緩沖溶液中，pH8)，5mlYGMP(5mg/ml于0.1M硼酸鹽緩沖溶液中，pH8)，二氯三嗪基氨基熒光素(DTAF)，20mg/ml于DMSO中，和0.1M硼酸鹽緩沖溶液，pH8。標記反應(yīng)以25mg的規(guī)模進行。將25mg測定顆粒懸浮于pH8的5ml0.1M硼酸鹽緩沖溶液中，并經(jīng)超聲波處理將顆粒凝塊降解成單個顆粒。將顆粒在pH8的5ml0.1M硼酸鹽緩沖溶液中離心和重新懸浮。將DTAF(0.5ml20mg/ml)加到重新懸浮的顆粒，并在37攝氏度培養(yǎng)2天。在培養(yǎng)的末期，加入pH8.3的5ml1MTris緩沖液，將混合物培養(yǎng)30分鐘，焠滅DTAF。將培養(yǎng)顆粒離心，并在PBS中洗滌直到上清夜不再發(fā)熒光。將洗過的顆粒以5mg/ml的濃度重新懸浮在PBS中。計算在以1∶100稀釋的測定樣中顆粒的數(shù)量。結(jié)果如下產(chǎn)生了強熒光酵母細胞壁顆粒，濃度為1.8×109顆粒每mlYGP-F和2.1×109顆粒每mlYGMP-F。研究表面碳水化合物成分對于酵母葡聚糖顆粒的口服生物利用率的影響，以確定有效負載的吞噬顆粒的攝取能否通過甘露糖受體以及通過CR3/dectin-1β葡聚糖受體來定向。標定一個或兩個受體的能力可以擴展到標定超過巨噬細胞和樹突狀細胞之外的細胞群落。在下面表3中總結(jié)了處理組。起始物包括FITC-標記的酵母葡聚糖顆粒(YGP-F)，F(xiàn)ITC-標記的酵母葡聚糖-甘露聚糖顆粒(YGMP-F)，一組七個C57Black鼠和一組七個C57/B16鼠。在0.1mlPBS中制備的YGP-F(1mg/ml)和YGMP-F(3.7mg/ml)的制劑來輸送相等數(shù)量的顆粒，并通過口服強飼法對每組中的一只鼠連續(xù)五天每日給藥。用每日相同劑量對每組中的一只鼠皮下注射0.1ml，連續(xù)給藥五天。在第四天換籠并提供新襯墊。在第5天將糞便顆粒收集到15ml圓錐管中，并冷凍以用于后續(xù)處理。加5ml水以及保持在4攝氏度2小時，來處理糞便顆粒。使用Polytron均化器均化水合的糞便顆粒。將均化的糞便稀釋物置放在96孔微量滴定板，并通過顯微鏡在熒光下檢查，透射出白光的情形即表明是熒光顆粒。進一步稀釋含有熒光顆粒的測定樣，并用血細胞計數(shù)器計數(shù)熒光顆粒/ml。在第7天殺死鼠，從每個動物中取出脾，并放入置于冰上含PBS的單個管中。將脾浸軟并壓過70微米篩網(wǎng)，來產(chǎn)生單細胞懸浮液。將PBS的單細胞懸浮液保存和固定在1％福爾馬林中，用FACS量化含有熒光標記顆粒的細胞塊。用抗巨噬細胞標記的抗體來標記的藻紅蛋白(PE)對細胞懸浮液染色，優(yōu)選鼠科Emr-1(F4/80)，其可對脾紅髓巨噬細胞、Kupffer細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞和Langerhans細胞染色。將細胞懸浮液以107細胞每60mm的密度置于培養(yǎng)皿中，并置于含10％胎牛血清(JRHScientific)、青霉素-鏈霉素和谷氨酸鹽(Gibco)的DMEM中，在37攝氏度和5％CO2條件下培養(yǎng)24小時，以使其附著。在培養(yǎng)后，洗掉任何未附著的淋巴細胞。，用熒光顯微鏡對附著的脾巨噬細胞typsinized、固定和刻痕于，對含有熒光顆粒的附著的細胞塊進行分析。熒光顆粒的給藥有很好的耐受性。附著脾巨噬細胞的分析證實了在所有熒光顆粒處理的動物中熒光酵母細胞壁顆粒的存在。這些結(jié)果證明，YGP-F和YGMP-F均是口服生物可利用的，并且可以由巨噬細胞系統(tǒng)地分布。對糞便的的分析證明了熒光顆粒的存在，說明在所用劑量水平下的口服吸收是不完全的。C57/B16鼠可以吸收口服給藥的YGP-F和YGMP-F。定量分析糞便中的熒光顆粒數(shù)目可估計攝取效率。實施例4負載殼聚糖的YGP顆粒的制備YGP顆粒是由陽離子捕獲聚合物殼聚糖制備的。1％w/v殼聚糖溶液是在0.1M乙酸中用高分子量(HMW)殼聚糖(～70,000Mw，SigmaChemicalSt.Louis，Mo)或低分子量(HMW)殼聚糖(～10,000Mw，SigmaChemicalSt.Louis，Mo)來制備。1％w/vHMW和LMW殼聚糖溶液都是在0.1M乙酸中制備的。在50ml圓錐離心管中將4mlHMW或LMW殼聚糖溶液加到2gYGP中，混合至形成均勻糊劑。將此混合物在室溫下培養(yǎng)1小時，使液體被吸收。將NaOH(40ml，0.1M)加到每個管中，并立即震蕩使殼聚糖沉淀在YGP中。將YGP殼聚糖懸浮液流過18號針頭以產(chǎn)生成YGP殼聚糖顆粒的優(yōu)良懸浮液。通過離心(2,000rpm，10分鐘)收集YGP殼聚糖顆粒，然后用去離子水洗滌顆粒物直到上清夜的pH為7-8。其后將YGP殼聚糖顆粒用兩個顆粒體積(pelletvolume)的異丙醇洗4次，接著用兩個顆粒體積(pelletvolume)的丙酮洗2次。然后將YGP殼聚糖顆粒在通風櫥中室溫下干燥。此方法得到了1.2gYGPLMW殼聚糖顆粒和1.4gYGPHMW殼聚糖顆粒。實施例5負載CytoPure(TM)的YGP顆粒的制備YGP顆粒是用聚乙烯亞胺(PEI)生物可降解的陽離子捕獲聚合物，一種CytoPureTM，專有的商業(yè)上可得到的且可溶于水的陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑(Qbiogene，Inc.，CA)來制備的。將20μlCytoPureTM在0.5ml去離子水中稀釋并在50ml圓錐離心管中加到0.5gYGP中，混合至形成均勻糊劑。將該混合物在4攝氏度培養(yǎng)15分鐘，使液體被吸收。將25ml乙醇加到每個管中，并立即震蕩使CytoPureTM沉淀在YGP中。將YGPCytoPureTM懸浮液經(jīng)超聲波處理以產(chǎn)生成YGPCytoPureTM顆粒的優(yōu)良懸浮液。通過離心(2,000rpm，10分鐘)收集YGPCytoPureTM顆粒，然后用兩個顆粒體積(pelletvolume)的異丙醇洗4次，接著用兩個顆粒體積(pelletvolume)的丙酮洗2次。然后將YGPCytoPureTM顆粒在通風櫥中室溫下干燥。此方法得到0.45gYGPCytoPureTM顆粒。實施例6負載聚乙烯亞胺的YGP顆粒的制備YGP顆粒是用聚乙烯亞胺(PEI)作為陽離子捕獲聚合物來制備的。將0.5ml在水中2％w/v的PEI(～50,000Mw，SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)溶液加到在50ml圓錐離心管中的0.5gYGP中，混合直形成均勻糊劑。將此混合物在室溫下培養(yǎng)1小時，使液體被吸收。將25ml乙醇加到每個管中，并立即震蕩使PEI沉淀在YGP中。將YGPPEI懸浮液流過18號針頭以產(chǎn)生成YGPPEI顆粒的優(yōu)良懸浮液。通過離心(2,000rpm，10分鐘)收集YGPPEI顆粒，上清夜用兩個顆粒體積的異丙醇洗4次，接著用兩個顆粒體積的丙酮洗2次。然后將YGPPEI顆粒在通風櫥中室溫下干燥。此方法得到了0.48gYGPPEI顆粒。實施例7負載藻酸鹽的YGP顆粒的制備用藻酸鹽(F200或F200L，Multi-KemCorp.，Ridgefield，NJ)作為陰離子捕獲聚合物來制備YGP顆粒。將2ml在水中1％w/v藻酸鹽溶液加到在50ml圓錐離心管中的1gYGP中，混合至形成均勻糊劑。將此混合物在室溫下培養(yǎng)1小時，使液體被吸收。用40ml的1％w/v氯化鈣水性溶液稀釋混合物。將YGP藻酸鹽懸浮液流過18號針頭以生成YGP藻酸鹽顆粒的優(yōu)良懸浮液。通過離心(2,000rpm，10分鐘)收集YGP藻酸鹽顆粒，然后上清夜用兩個顆粒體積的異丙醇洗4次，接著用兩個顆粒體積的丙酮洗2次。然后將YGP藻酸鹽顆粒在通風櫥中室溫下干燥。此方法得到了0.95gYGPF200藻酸鹽顆粒和0.86gYGPF200L藻酸鹽顆粒。實施例8負載聚-L-賴氨酸的YGP和YGMP顆粒的制備用聚-L-賴氨酸(PLL)作為捕獲聚合物來制備YGP和YGMP顆粒。將4ml在水中1％w/vPLL(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)溶液加到在50ml圓錐離心管中的1gYGP或YGMP中。將此混合物在55攝氏度下培養(yǎng)30分鐘，使液體被吸收。將10ml乙醇加到每個管中，其被均化(Polytron均化器)產(chǎn)生YGPPLL或YGMPPLL顆粒的優(yōu)良懸浮液。通過離心(2,000rpm，10分鐘)收集YGPPLL或YGMPPLL顆粒。其后將YGPPLL或YGMPPLL用兩個顆粒體積的異丙醇洗4次，接著用兩個顆粒體積的丙酮洗2次。然后將YGPPLL或YGMPPLL顆粒在通風櫥中室溫下干燥。此方法得到了1.3gYGPPLL顆粒和1.1gYGMPPLL顆粒。顯微鏡觀察沒有發(fā)現(xiàn)PLL聚集體，只有YGPPLL或YGMPPLL顆粒。實施例9負載黃原膠的YGP和YGMP顆粒的制備用黃原膠作為陰離子捕獲聚合物來制備YGP和YGMP顆粒。將4ml1％w/v黃原膠溶液的在水中加熱到55攝氏度以減小粘度，并加到在50ml圓錐離心管中的1gYGP或YGMP中。將此混合物在55攝氏度下培養(yǎng)30分鐘。將10ml乙醇加到每個管中，其被均化(Polytron均化器)以產(chǎn)生YGP黃原膠或YGMP黃原膠顆粒的優(yōu)良懸浮液。通過離心(2,000rpm，10分鐘)收集YGPPLL或YGMPPLL顆粒。將YGP黃原膠或YGMP黃原膠顆粒用兩個顆粒體積的異丙醇洗4次，接著用兩個顆粒狀積的丙酮洗2次。然后將YGP黃原膠或YGMP黃原膠顆粒在通風櫥中室溫下干燥。此方法得到了1.2gYGP黃原膠顆粒和1.1gYGMP黃原膠顆粒。顯微鏡觀察沒有發(fā)現(xiàn)黃原膠聚集體，只有YGP黃原膠或YGMP黃原膠顆粒。實施例10YGP殼聚糖和YGP藻酸鹽與帶電染劑結(jié)合能力的評估依照上述實施例7和9制備YGP殼聚糖和YGP藻酸鹽顆粒。并制備了0.1％w/v臺盼藍(Benzamineblue；CI23850)、陰離子染劑和二甲苯藍(酸性藍，陽離子染劑)的水性溶液。將50μl在水中0.1％w/v水性染劑溶液加到在微量離心管中的10mgYGP、YGP殼聚糖或YGP藻酸鹽中，并將此混合物在室溫下培養(yǎng)1小時。用去離子水洗顆粒物直到上清夜不再有顏色。評估顆粒狀物的顏色并將結(jié)果列于下面的表4。在YGP內(nèi)的不可溶捕獲聚合物之間的靜電相互作用能夠結(jié)合帶相反電荷的低分子量模式染劑有效負載。實施例11應(yīng)用YGP瓊脂糖通過物理捕獲來捕獲分子制備YGP瓊脂糖來評估物理捕獲作為在YGP中捕獲有效負載的方法。在TE中制備2％w/v瓊脂糖(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)溶液，并冷卻到50攝氏度。將在TE中的鮭魚精子DNA的1mg/ml原液在TE中或在1％瓊脂糖中50攝氏度下稀釋到0.5mg/mlDNA。將500mgYGP與500μl在TE中的DNA或500μl在瓊脂糖中的DNA在50攝氏度下混合，并將混合物在50攝氏度下培養(yǎng)1小時。然后將混合物在冰箱中冷卻1小時固化瓊脂糖。1小時后，加入10ml的TE，在冰箱中過夜培養(yǎng)混合物。然后離心過濾混合物，用260nm波長的吸收來測量在上清夜中的DNA。約＞80％的應(yīng)用的DNA被YGP瓊脂糖保留，與此對照的是，＜1％的應(yīng)用DNA被YGPTE對照物保留。這些結(jié)果表明，瓊脂糖通過物理捕獲可以有效地捕獲在YGP中的DNA。實施例12應(yīng)用YGP聚丙烯酰胺通過物理捕獲來捕獲分子制備YGP聚丙烯酰胺來評估物理捕獲作為在YGP中捕獲有效負荷的方法。將lmg/ml在TE中的鮭魚精子DNA原液在TE中或在30％聚丙烯酰胺/bis(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)中稀釋到0.5mg/mlDNA。將TEMED(N，N，N′，N′-四甲基乙二胺)加到每種DNA混合物中(1μlTEMED加到5ml的DNA溶液)，將每種溶液的2ml加到1gYGP。將產(chǎn)物混合形成均勻懸浮液，并在室溫下培養(yǎng)3小時。經(jīng)過3小時的培養(yǎng)后，加入10ml的TE，在冰箱中過夜培養(yǎng)混合物。然后離心混合物，并用260nm波長的吸收來測量上清夜中的DNA。約＞95％的應(yīng)用的DNA被YGP聚丙烯酰胺保留，與此對照的是，＜1％的應(yīng)用的DNA被YGPTE對照物保留。這些結(jié)果表明，聚丙烯酰胺是有效的通過物理捕獲來捕獲在YGP中的DNA的捕獲聚合物。實施例13用小分子四環(huán)素負載YGP利用四環(huán)素鈣鹽的相對不溶性將抗生素四環(huán)素(tet)負載載到Y(jié)GP中。使用的酵母細胞壁顆粒是如上述制備的YGP、YGPF200藻酸鹽和YGPF200L藻酸鹽。原液是1MCaCl2和100mg/ml鹽酸四環(huán)素(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)。建立的負載混合物如下面表5所示。將混合物在室溫下培養(yǎng)30分鐘，然后如所述加入去離子水或1MCaCl2。在室溫下60分鐘后，將混合物經(jīng)超聲波處理并在室溫下再培養(yǎng)至少30分鐘。然后將混合物離心(2,000rpm，10分鐘)，顆粒狀物和初始上清夜的黃色說明了四環(huán)素的存在。根據(jù)在355nm處四環(huán)素吸收光譜峰值的吸收損失來計算四環(huán)素負載到酵母細胞壁顆粒中的數(shù)量。4μl的100mg/ml鹽酸四環(huán)素原液在200μl去離子水中的稀釋物與空白去離子水相比在355nm具有0.538的吸收度。用分光光度滴定法測定四環(huán)素從被負載的酵母細胞壁顆粒到PBS或0.1MHCl中釋放。以上的表5顯示了結(jié)果。一般來說，YGPF200藻酸鹽和YGPF200L藻酸鹽顆粒狀物在洗滌后是黃色，而YGP顆粒狀物不是黃色，如果有極少黃顏色，表明在無捕獲聚合物情況下，四環(huán)素作為鹽酸鹽或鈣鹽負載。相反地，在YGPF200藻酸鹽和YGPF200L藻酸鹽配方中四環(huán)素被有效地負載和捕獲，約25-30％的應(yīng)用的四環(huán)素負載被作為藻酸鈣鹽吸收。捕獲的四環(huán)素從YGPF200藻酸鹽和YGPF200L藻酸鹽中釋放到0.1MHCl中。將捕獲的四環(huán)素在37攝氏度下部分地保留在PBS中的YGPF200藻酸鹽和YGPF200L藻酸鹽中1小時，約有26.5-51.6％可提取的0.1MHCl。綜上所述，在YGP-藻酸鹽-鈣組合物中四環(huán)素作為藻酸鈣鹽絡(luò)合物容易被捕獲，但在單獨的YGP中不能有效地負載和保留。在YGPF200藻酸鹽和YGPF200L藻酸鹽中作為藻酸鈣鹽絡(luò)合物被捕獲的四環(huán)素，在PBS中37攝氏度下緩慢地釋放，在酸性條件下大量釋放。實施例14Tet和YGPTet增強J774巨噬細胞的體外殺菌能力的功效按照上面實施例13所述來制備YGP藻酸鹽-tet。在原液中YGP和YGP藻酸鹽-tet顆粒的數(shù)分別是9×107/ml和6×108/ml。如表6所總結(jié)，1ml的鼠科巨噬細胞J774(5×105/ml)與YGP、YGP藻酸鹽-tet或不同濃度的四環(huán)素進行組合。將J774細胞在培養(yǎng)基(含10％不含抗生素或谷氨酸鹽的胎牛血清的DMEM)中過夜培養(yǎng)。將培養(yǎng)物單獨用培養(yǎng)基來培養(yǎng)，四環(huán)素或顆粒在培養(yǎng)基中稀釋1小時，并在37攝氏度下旋轉(zhuǎn)以使顆粒的吞噬作用發(fā)生。在96孔板上進行微生物滅殺試驗。培養(yǎng)物在培養(yǎng)基中稀釋并過夜培養(yǎng)使tet從被吞噬的YGP藻酸鹽-tet顆粒中代謝和釋放出來。如表6所述，加入細菌試驗，并將培養(yǎng)物在CO2培養(yǎng)器中在37攝氏度下培養(yǎng)2小時，使J774鼠科巨噬細胞對金黃色葡萄球菌進行吞噬和殺滅。在此培養(yǎng)后，將200μlLBBroth(Luria-BertaniBroth1.0％胰酶解胨，0.5％酵母提取物，1.0％NaCl)添加到每一個培養(yǎng)物以溶解巨噬細胞。將培養(yǎng)物在37攝氏度下在培養(yǎng)器中培養(yǎng)以允許存活的金黃色葡萄球菌長出。通過用苯酚紅指示的pH的變化來觀察生長。將YGP，YGP藻酸鹽-tet或四環(huán)素的結(jié)果作對比。表6的最右側(cè)兩列中提供了這些結(jié)果。約7.5×106YGP藻酸鹽-tet顆粒對巨噬細胞產(chǎn)生的效果大致相當于約2.5μg/ml鹽酸四環(huán)素對其產(chǎn)生的效果。巨噬細胞單獨所起的作用比與二種模式結(jié)合時所起的作用相對都要小，大約與用空的YGP單獨處理所起的作用相當。巨噬細胞與溶液中的自由四環(huán)素組合所起的作用不比單獨的四環(huán)素更有效。而用YGP藻酸鹽-tet顆粒處理則顯示明顯的協(xié)同優(yōu)勢?？傮w來說，該結(jié)果證明了吞噬體將四環(huán)素輸送到J774巨噬細胞增強了J774巨噬細胞對于金黃色葡萄球菌的殺菌能力。實施例15蛋白質(zhì)到Y(jié)GP的負載利用胎牛血清的混合蛋白評估本發(fā)明的輸送系統(tǒng)對于治療性肽或蛋白質(zhì)、疫苗抗原或者其它肽或蛋白質(zhì)的保留、轉(zhuǎn)移和輸送的效用。所使用的酵母細胞壁顆粒是按前述制備的YGP、YGP-PEI和YGP-殼聚糖。原液是45ng/μl胎牛血清(FCS)(胎牛血清，JRHBiosciences，Lenexa，KS)，0.2％TE中的PEI(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)，0.05M磷酸鹽緩沖溶液，pH7.2(P緩沖溶液)和0.05M磷酸鹽緩沖溶液，pH7.2，1MNaCl(P+鹽緩沖溶液)。如表7所示，將4μl的FCS添加到在微量離心管中的1mg的YGP、YGP-P或YGP-CN，所得到的混合物在室溫下培養(yǎng)60分鐘使液體被顆粒吸收。在培養(yǎng)后，200μl磷酸鹽緩沖溶液或200μlPEI如表7所示，將得到的混合物在室溫下培養(yǎng)60分鐘。在培養(yǎng)后，添加0.5ml磷酸鹽緩沖溶液，再經(jīng)過5分鐘的培養(yǎng)，將管經(jīng)超聲波處理以產(chǎn)生單個顆粒。此顆粒是通過10,000rpm、10分鐘的離心來顆粒狀化，并將上清夜移至新管。將0.5ml0.05M磷酸鈉緩沖溶液、pH7.2+1MNaCl添加到顆粒狀物，再經(jīng)過5分鐘的培養(yǎng)，將管以10,000rpm離心10分鐘，將高鹽洗脫上清夜移至新管。通過在280nm處的吸收度來測量上清夜中蛋白質(zhì)的含量。表8表示蛋白質(zhì)負載結(jié)果。無捕獲分子的YGP顆粒僅捕獲5％的蛋白質(zhì)。首先用FCS蛋白質(zhì)負載然后暴露于PEI的YGP顆粒保留了47％蛋白質(zhì)負載。在暴露于蛋白質(zhì)負載之前先用例如PEI或殼聚糖的捕獲聚合物負載的YGP顆粒分別保留了68％和60％蛋白質(zhì)負載。結(jié)果證明，血清蛋白質(zhì)在無捕獲聚合物的條件下不能有效地負載和捕獲到Y(jié)GP中。使用在暴露于蛋白質(zhì)負荷之前事先用捕獲聚合物負載的YGP增加蛋白質(zhì)捕獲?；蛘哒f，可以通過先負載蛋白質(zhì)來將蛋白質(zhì)捕獲在YGP內(nèi)，然后添加可溶性捕獲聚合物以將蛋白質(zhì)保留在顆粒中。實施例16將DNA負載到Y(jié)GP中的不同方法的比較評估了將鮭魚精子DNA負載到Y(jié)GP、含YGP的低分子量(LMW)或高分子量(HMW)殼聚糖的幾種方法。a.毛細負載而后乙醇沉淀將鮭魚精子DNA(Sigma，St.Louis，MO)通過18號針頭扯切40遍，并在50mMTE(Tris-HCl，pH8，2mMEDTA)中稀釋到0.1mg/ml的濃度。如同實施例2來確定DNA溶液的裝載量和在離心管中將其雙份與100mg的YGP、YGPLMW殼聚糖或YGPHMW殼聚糖混合并培養(yǎng)1小時。將1.5ml乙醇添加到每個管中使培養(yǎng)混合物乙醇沉淀。通過2,000rpm10分鐘的離心收集不可溶產(chǎn)物。將10mlTE添加到每個管中，在37攝氏度培養(yǎng)1小時，以2,000rpm離心10分鐘以沉淀不可溶YGP，通過260nm處的吸收度確定上清夜的DNA含量。計算留在YGP中的DNA量。b.通過吸收負載DNA如同實施例4a，在離心管中將負載DNA溶液的雙份與100mg的YGP、YGPLMW殼聚糖或YGPHMW殼聚糖混合，并培養(yǎng)1小時。將10mlTE添加到每個管中，在37攝氏度培養(yǎng)1小時，以2,000rpm離心10分鐘以沉淀不可溶YGP。通過在260nm處的吸收度確定上清夜的DNA含量。計算留在YGP中的DNA量。c.通過CTAB捕獲負載DNA如同實施例4，在離心管中將負載DNA溶液雙份與100mg的YGP、YGPLMW殼聚糖或YGPHMW殼聚糖混合，并培養(yǎng)1小時。通過將1.5ml的2％溴化十六烷基三甲基銨(也就是已知的溴化十六烷基三甲銨或CTAB)溶液添加到每個管中沉淀培養(yǎng)混合物。將10mlTE添加到每個管中，在37攝氏度培養(yǎng)1小時，以2,000rpm離心10分鐘以沉淀不可溶YGP。通過在260nm處的吸收度確定上清夜的DNA含量。計算留在YGP中的DNA量。計算留在YGP中的DNA量。結(jié)果如下面的表9所示。簡單的DNA負載或沉淀不能有效地將DNA負載和捕獲到Y(jié)GP中。相反，作為陽離子捕獲聚合物的殼聚糖導(dǎo)致形成可以將DNA捕獲到Y(jié)GP中的殼聚糖-DNA絡(luò)合物。另外，陽離子制劑CTAB可以有效地用于將負載的DNA捕獲到Y(jié)GP中。實施例17DNA負載和捕獲通過將在pH9.2的0.1M碳酸鹽緩沖溶液中1ml的1mg/ml鮭魚精子DNA溶液與在pH9.2的10mM碳酸鹽緩沖溶液中100μl的1mg/mlDTAF懸浮液混合，制備出熒光鮭魚精子DNA。經(jīng)過在37攝氏度過夜培養(yǎng)，添加200μlpH8.3的1MTris-HCl，在室溫下培養(yǎng)15分鐘。然后，添加100μl1MNaCl和3m1乙醇，以乙醇沉淀DNA。在-20C過夜儲存后，以10,000rpm離心15分鐘收集乙醇沉淀物。用70％乙醇洗滌乙醇沉淀物直到上清夜澄清，并在1mlTE中重新懸浮。在室溫下培養(yǎng)YGP懸浮液30分鐘。在培養(yǎng)后，將0.45ml95％乙醇添加到一組(YGP，YGP-P，YGP-殼聚糖)三個管中，將0.2ml2％PEI添加到兩個組的管中，并將0.2ml2％CTAB添加到另一組管中。在室溫下培養(yǎng)30分鐘之后，將0.2ml2％CTAB添加到一組PEI管并再培養(yǎng)30分鐘。添加乙醇(1ml，95％)，并將YGP在-20攝氏度儲存過夜。用70％乙醇洗滌YGP懸浮液，并在0.5mlPBS中重新懸浮。用熒光顯微鏡檢查評估結(jié)果，并在表10中說明。如果使用無捕獲聚合物的單純乙醇沉淀，沒有明顯的熒光標記DNA的捕獲發(fā)生，證明現(xiàn)有技術(shù)作為DNA輸送系統(tǒng)不是有效的。熒光標記DNA清楚地由陽離子捕獲聚合物PEI或殼聚糖或用YGP顆粒內(nèi)的陽離子洗滌劑CTAP來捕獲。當使用捕獲聚合物和CTAB的組合物時，例如YGPPEIDNACTAB，YGP殼聚糖DNACTAB或YGPDNAPEICTAB，得到最好的DNA捕獲。實施例18熒光標記質(zhì)粒DNA負載和捕獲為在J774細胞即鼠科巨噬細胞衍生的細胞株中的編碼的EGFP的轉(zhuǎn)染和表達，制備含pIRES質(zhì)粒的YGP。所用的陽離子捕獲制劑包括陽離子聚合物，例如聚乙烯亞胺(PEI)，CytoPureTM，一種專有的商業(yè)上可得到的且可溶于水的陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑(Qbiogene，Inc.，CA)，殼聚糖和陽離子洗滌劑溴化十六烷基三甲銨(CTAB)。優(yōu)選的PEI是JetPEI，即商業(yè)上可得到的線性聚乙烯亞胺陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑(Qbiogene，Inc.，CA)。pIRES-EGFP(Clonetech，CA)包括在MCS和EGFP(增強的綠色熒光蛋白)編碼區(qū)之間的腦心肌炎病毒(ECMV)的內(nèi)部核糖體進入位點(IRES)。該特征允許目標基因(克隆到MCS中)和EGFP基因二者由單一雙順反子mRNA翻譯。pIRES-EGFP是用于表達EGFP和另一個目標蛋白質(zhì)的短暫轉(zhuǎn)染的哺乳動物細胞的有效選擇(通過流式細胞術(shù)或其它方法)。為優(yōu)化表達高水平目標蛋白質(zhì)的細胞選擇，pIRES-EGFP利用部分失效的IRES序列(1)。該減弱的IRES導(dǎo)致在EGFP起始密碼子翻譯起始速率相對于克隆基因降低，對那些細胞進行選擇，在那些細胞中mRNA以及靶蛋白在高水平上產(chǎn)生，以補償翻譯EGFP的次優(yōu)速率。該載體也可以用于單獨表達EGFP或獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系而無耗時藥物和克隆選擇。EGFP是野生型GFP的紅移變體，其已經(jīng)優(yōu)化在哺乳動物細胞中得到更亮的熒光和更高的表達。(最大激發(fā)效果＝488nm；最大強度波長＝509nm。)EGFP編碼含64位Phe到Leu和65位Ser到Thr氨基酸取代的GFPmutl變體。這些突變主要是由于提高了蛋白質(zhì)折疊性和發(fā)色團形成的效率，增加了GFP的亮度和溶解度。。EGFP也包括幾乎全部由優(yōu)選的人類密碼子組成的閱讀框。相對于野生型GFP，這導(dǎo)致了在真核細胞中更有效的翻譯以及因而更高的表達水平。制備的溶液是pIRESEGFP質(zhì)粒DNA，在水中0.72μg/μl，在TE中0.2％w/vPEI(Sigma)，2μlCytoPure(Qbiogene)+48μl0.15MNaCl，2μlJetPEI(Qbiogene)+48μlTE，在TE中0.2％亞精胺，2％(aq)CTAB和磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。通過將1ml的在pH9.2的0.1M碳酸鹽緩沖溶液中的1mg/mlpIRESDNA溶液與100μl的在pH9.2的10mM碳酸鹽緩沖溶液中的1mg/mlDTAF懸浮液混合，來制備熒光pIRES質(zhì)粒DNA。在37攝氏度過夜培養(yǎng)，添加200μlIMTris-HClpH8.3并在室溫下培養(yǎng)15分鐘。然后，添加100μl1MNaCl和3ml乙醇，以乙醇沉淀DNA。在-20℃過夜培養(yǎng)后，以10,000rpm離心15分鐘收集乙醇沉淀物。用70％乙醇洗滌乙醇沉淀物直到上清夜澄清，并在1mlTE中重新懸浮。在室溫下培養(yǎng)YGP懸浮液30分鐘。在培養(yǎng)后，將0.45ml95％乙醇添加到一組(YGP，YGP-P，YGP-殼聚糖)三個管，將0.2ml2％PEI添加到兩組的管中，并將0.2ml2％CTAB添加到另一組管中。在室溫下培養(yǎng)30分鐘之后，將0.2ml2％CTAB添加到一組PEI管并再培養(yǎng)30分鐘。添加乙醇(1ml，95％)，并將YGP在-20攝氏度儲存過夜。用70％乙醇洗滌YGP懸浮液，并在0.5mlPBS中重新懸浮。如實施例14所述，將J774鼠科巨噬細胞以每孔2.5×105細胞的密度放入六孔板，過夜培養(yǎng)。如表11中所概述，進行轉(zhuǎn)染。將顆粒以每細胞10顆粒的比例添加到培養(yǎng)基中，并旋轉(zhuǎn)板以分散顆粒。將細胞培養(yǎng)4小時。在培養(yǎng)未期，除去培養(yǎng)基，用PBS洗滌細胞并在PBS中用0.4％福爾馬林固定。用熒光顯微鏡檢查評估含熒光DNA的顆粒和用含熒光DNA的顆粒培養(yǎng)的J774細胞，在表12中概述結(jié)果，并在圖3A和3B中說明。圖3A是細胞的彩色光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，該細胞暴露于負載熒光標記pIRES質(zhì)粒的YGP顆粒，并具有作為陽離子捕獲聚合物的PEI和作為陽離子洗滌劑的CTAB，表示細胞310；圖3B是細胞群相同區(qū)域的彩色光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，顯示代表被圖3B所示的相同細胞310內(nèi)在化的含熒光質(zhì)粒DNA的熒光YGP顆粒的明亮著色。實施例19用YGPpIRES培養(yǎng)的J774鼠科巨噬細胞的EGFP表達在此實施例中pIRES質(zhì)粒DNA不是熒光標記的，而pIRES編碼的綠色熒光蛋白(GFP)的功能表達被用于表示負載的酵母細胞壁顆粒的攝取、pIRESDNA細胞內(nèi)釋放和作為熒光產(chǎn)生證據(jù)的GFP的表達。如下表12所述來制備YGPpIRES劑型。DNA是1mg/ml的原液由去離子水中稀釋來制備的。將所示量的DNA溶液添加到Y(jié)GP并培養(yǎng)至少30分鐘以允許液體吸收。添加在TE中所示量的0.2％PEI或0.2％在醋酸鹽緩沖溶液中的殼聚糖，在超聲波處理產(chǎn)生單個顆粒以前，將混合物培養(yǎng)5分鐘。再培養(yǎng)至少30分鐘，添加所示量的2％CTAB。在經(jīng)過另外5分鐘培養(yǎng)之后，將管旋轉(zhuǎn)混合，并再培養(yǎng)至少30分鐘。添加所示量的95％乙醇。然后將每個管混合并在-20攝氏度過夜培養(yǎng)。然后將YGPpIRES形成的顆粒離心，在70％乙醇中洗兩次，通過10,000rpm和5分鐘的離心來收集，在0.5ml無菌PBS中重新懸浮并經(jīng)超聲波處理以產(chǎn)生單個顆粒。計數(shù)每毫升的顆粒并在-20攝氏度貯藏每個劑型。如實施例14所述，將J774鼠科巨噬細胞以每孔2.5×105細胞的密度放入六孔板，并過夜培養(yǎng)。如在上面表11中所概述的，進行轉(zhuǎn)染。將顆粒以每細胞10顆粒的比例添加到培養(yǎng)基中，并旋轉(zhuǎn)板以分散顆粒。每天飼喂細胞并培養(yǎng)2天。在培養(yǎng)未期，除去培養(yǎng)基，用PBS洗滌細胞并在PBS中用0.4％福爾馬林固定。在表13中概述結(jié)果，并在圖4A-C中說明。通過熒光顯微鏡檢查評估細胞。89％的J774細胞吞噬了YGP-F顆粒(表13，孔1B，圖4A).在＞80％的J774細胞中EGFP表達是明顯的，表現(xiàn)為在孔1E(圖4B)和1F(圖4C)中液泡中的點狀熒光。圖4A是細胞的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如所示的暴露于熒光標記的YGP顆粒的細胞410，圖4B是細胞的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如所示的細胞420，其由YGP輸送的pERESDNA表達GFP，該YGP具有陽離子捕獲聚合物聚乙烯亞胺(PEI)和陽離子洗滌劑溴化十六烷基三甲基銨(也稱為溴化十六烷基三甲銨或CTAB)；圖4C是細胞的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如所示的細胞430，其由YGP輸送的pERESDNA表達GFP，該YGP具有陽離子捕獲聚合物殼聚糖和陽離子洗滌劑CTAB。實施例20使用YGP-陽離子捕獲聚合物技術(shù)將熒光DNA，寡核苷酸和siRNA寡核苷酸輸送到J774細胞中使用下列物質(zhì)YGP熒光鮭魚精子DNAPEICTAB顆粒，YGP熒光寡核苷酸PEICTAB顆粒，和YGP熒光siRNAPEICTAB。熒光寡核苷酸由SigmaGenosys合成，具有連接在5’端的熒光素殘基的的18堿基節(jié)其5’熒光素-TTGGTCATCCATGGCTCT3’SEQIDNO1。熒光siRNA是由SigmaGenosys合成的21堿基節(jié)非沉默調(diào)控siRNA，其具有連接在5’端的熒光素殘基(0iagen，Valencia，CA，CatalogNo.1022079)5’熒光素-UUCUCCGAACGUGUCACGUdTdT3’SEQIDNO2。如實施例14所述，將J774鼠科巨噬細胞以每孔2.5×105細胞的密度放入六孔板并過夜培養(yǎng)。如表14所述進行轉(zhuǎn)染。將對照物和負載多核苷酸的顆粒添加到培養(yǎng)基中，并旋轉(zhuǎn)板以分散顆粒。每天飼喂細胞并培養(yǎng)24小時。在培養(yǎng)未期，除去培養(yǎng)基，用PBS洗滌細胞并在PBS中用0.4％福爾馬林固定。結(jié)果在圖5A-I中說明。用熒光顯微鏡和FACS來檢測細胞，92％的J774細胞吞噬了YGP-F顆粒(表14，孔1B，圖5A).在＞80％的J774細胞中，熒光寡核苷酸(SEQIDNO1)輸送是明顯的，表現(xiàn)為點狀內(nèi)體熒光和分散細胞質(zhì)熒光。在＞80％的J774細胞中，熒光非沉默siRNA(SEQIDNO1)輸送是明顯的，表現(xiàn)為點狀內(nèi)體熒光和分散細胞質(zhì)熒光。圖5A是細胞的彩色組合光和熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如所示的暴露于熒光標記的YGP顆粒的細胞510；圖5B是熒光活化細胞分類(FACS)研究結(jié)果的圖示，顯示了表示來自包含內(nèi)在化熒光標記YGP顆粒的細胞的信號分布的主峰值520，以及表示來自不含熒光標記YGP顆粒的細胞的信號分布的次峰值530；圖5C所示為暴露于含有熒光標記DNA、陽離子捕獲聚合物PEI和陽離子洗滌劑CTAB的YGP顆粒的細胞540；圖5D是細胞群相同區(qū)域的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，表示相同的細胞540；圖5E是FACS研究結(jié)果的圖示，顯示了表示來自具有帶熒光DNA負荷量的內(nèi)在化YGP顆粒的細胞的信號分布的主峰值610，以及表示來自無YGP顆粒的細胞的信號分布的肩部620；圖5F是細胞的彩色光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如用含有熒光反義RNA負荷量的YGP顆粒培養(yǎng)的所示細胞710；圖5G是細胞群相同區(qū)域的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，表示所示的相同的細胞710；圖5H是細胞群相同區(qū)域的彩色光顯微圖的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，例如用含有熒光標記的siRNA、PEI和CTAB的YGP顆粒培養(yǎng)的所示細胞810；圖5I是細胞群相同區(qū)域的彩色熒光顯微照片的反向?qū)Ρ?負片)灰度級圖象，表示含有帶熒光RNAi負荷量的內(nèi)在化YGP顆粒的所示的相同細胞810。總之，使用陽離子捕獲聚合物可以有效地將負載在YGP中的熒光DNA、寡核苷酸或siRNA有效負荷輸送到J774細胞中。有效負荷在24小時內(nèi)從內(nèi)涵體腔釋放到細胞質(zhì)和細胞核中。除非指明，權(quán)利要求不應(yīng)該理解為受限于所述的順序或要素。因此，在權(quán)利要求及其等同的范圍和主旨中的所有實施例都是本發(fā)明所要求的。序列表<110>奧斯特羅夫(Ostroff&Associates)加里·R·奧斯特羅夫(Ostroff，Gary，R.)<120>藥物輸送產(chǎn)品和方法<130>080033-0003<150>美國10/869,693<151>2004-06-15<150>美國10/869,693<151>2004-06-16<160>2<170>PatentInversion3.2<210>1<211>18<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成探針<220><221>misc_feature<222>(1)..(1)<223>熒光素<400>1ttggtcatccatggctct18<210>2<211>21<212>DNA<213>人工序列<220><223>合成RNAi控制寡核苷酸<220><221>misc_feature<222>(1)..(1)<223>熒光素<220><221>misc_feature<222>(20)..(21)<223>脫氧胸苷<400>2uucuccgaacgugucacgutt2權(quán)利要求1.一種包括含有β-葡聚糖的提取的酵母細胞壁和有效負載捕獲分子的微粒輸送系統(tǒng)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒輸送系統(tǒng)，其進一步包括有效負載分子，其中所述有效負載分子和有效負載捕獲分子可溶于相同的溶劑系統(tǒng)中。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述溶劑系統(tǒng)包括水。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的提取的酵母細胞壁進一步包括少于90重量％的β-葡聚糖。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的提取的酵母細胞壁進一步包括超過50重量％的幾丁質(zhì)。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的提取的酵母細胞壁進一步包括超過30重量％的甘露聚糖。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的提取的酵母細胞壁進一步包括超過1重量％的蛋白質(zhì)。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的有效負載捕獲分子是多聚糖，其選自瓊脂糖、藻酸鹽、黃原膠、葡聚糖、殼聚糖、半乳甘露聚糖膠、其衍生物及其混合物組成的組。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的有效負載捕獲分子聚丙烯酰胺。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的有效負載捕獲分子是聚酰胺。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的有效負載捕獲分子選自陽離子聚合物、陰離子聚合物、陽離子洗滌劑、陰離子洗滌劑及其混合物組成的組。12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的有效負載捕獲分子，其中所述的陽離子聚合物選自殼聚糖、聚乙烯亞胺和聚-L-賴氨酸。13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的有效負載捕獲分子，其中所述的有效負載捕獲分子是陽離子聚合物和陽離子洗滌劑的混合物。14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的有效負載捕獲分子，其中所述的陽離子聚合物選自蛋白質(zhì)、多肽、短合成肽、螺旋兩性肽，陽離子樹枝狀高分子、glucaramide聚合物、N-取代的甘氨酸低聚物、聚(2-甲基-丙烯酸2-[(2-二甲基氨基)-乙基]-甲基-氨基)-乙酯)、聚(2-二甲基氨基乙基)-甲基丙烯酸酯及其混合物組成的組。15.根據(jù)權(quán)利要求11所述的有效負載捕獲分子，其中所述的陰離子聚合物選自藻酸鹽和黃原膠組成的組。16.根據(jù)權(quán)利要求11所述的有效負載捕獲分子，其中所述的陽離子洗滌劑是溴化十六烷基三甲基銨。17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的有效負載捕獲分子選自陽離子聚合電解質(zhì)、陰離子聚合電解質(zhì)和兩性聚合電解質(zhì)組成的組。18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的陽離子聚合電解質(zhì)選自乙烯基吡咯烷酮和四個甲基丙烯酸甲酯的共聚物、取代的聚丙烯酰胺、聚乙烯亞胺、聚丙烯亞胺、多胺均聚物、多胺共聚物、聚二甲基二烯丙基氯化銨、取代的葡聚糖；修飾的瓜爾膠、取代的蛋白質(zhì)、聚氨基酸、精胺和亞精胺組成的組。19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的陰離子聚合電解質(zhì)選自甲基乙烯基醚和馬來酸酐的共聚物、甲基乙烯基醚和馬來酸的共聚物、褐藻酸、羧甲基纖維素、取代的聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚苯乙烯磺酸、葡聚糖硫酸鹽、取代的糖類、肝磷脂和其藥學(xué)上可接受的鹽組成的組。20.根據(jù)權(quán)利要求2所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的有效負載分子選自多核苷酸、肽、蛋白質(zhì)、小分子有機活性劑、小分子無機活性劑及其混合物組成的組。21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中多核苷酸選自寡核苷酸、反義構(gòu)件、siRNA、酶解RNA、重組DNA構(gòu)件及其混合物組成的組。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的重組DNA構(gòu)件是包括可與編碼蛋白質(zhì)的閱讀框連接的控制單元的表達載體。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中由閱讀框編碼的蛋白質(zhì)是結(jié)構(gòu)蛋白、具有酶活性的蛋白質(zhì)、膜蛋白、DNA結(jié)合蛋白或信號蛋白。24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中由閱讀框編碼的蛋白質(zhì)是抗原蛋白。25.根據(jù)權(quán)利要求19所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的多核苷酸包括能恢復(fù)缺失的、有缺陷的或被抑制的基因的功能的核苷酸序列。26.根據(jù)權(quán)利要求22所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中由閱讀框編碼的蛋白質(zhì)是在患有遺傳病的個體中產(chǎn)生治療效果的蛋白質(zhì)。27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的遺傳病是Aarskog-Scott綜合癥、Aase綜合癥、軟骨發(fā)育不全、肢端發(fā)育不全、成癮性、腎上腺-腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、白化病、無瞼-巨口綜合癥、alagille綜合癥、黑尿癥、α-1抗胰蛋白酶缺乏、Alport綜合癥、Alzheimer′s疾病、哮喘、自體免疫多腺綜合癥、雄激素不敏感癥綜合癥、Angelman綜合癥、共濟失調(diào)、共濟失調(diào)毛細管擴張、動脈粥樣硬化、注意力缺陷高活性紊亂(ADHD)、孤獨癥、禿發(fā)癥、Batten病、Beckwith-Wiedemann綜合癥、Best病、躁郁癥短指、乳腺癌、Burkitt淋巴瘤、慢性骨髓白血病、進行性神經(jīng)性肌萎縮疾病、Crohn病、兔唇、Cockayne綜合癥、CoffinLowry綜合癥、結(jié)腸癌、先天性腎上腺增生(CAH)、CorneliadeLange綜合癥、Costello綜合癥、Cowden綜合癥、鼻腔發(fā)育異常、Crigler-Najjar綜合癥、Creutzfeldt-Jakob病(CJD)、胞囊纖維癥、耳聾、抑郁癥、糖尿病、軟骨畸形、DiGeorge綜合癥、唐氏綜合癥、誦讀困難、裘馨氏肌肉萎縮癥、Dubowitz綜合癥、外胚層發(fā)育異常、Ellis-vanCreveld綜合癥、Ehlers-Danlos綜合癥、大皰性表皮松解癥(EB)、癲癇、特發(fā)性震顫、家族高膽固醇血癥、家族性地中海熱、脆性X綜合癥、Friedreich共濟失調(diào)、Gaucher病、青光眼、葡萄糖半乳糖吸收不良、戊二酸尿癥、(脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜)回旋形萎縮、GoldbergShprintzen綜合癥(先天性腭咽閉合功能不全)、Gorlin綜合癥、Hailey-Hailey病、偏身肥大、血色沉著病、血友病、遺傳性運動神經(jīng)和感覺神經(jīng)病(HMSN)、遺傳非息肉病結(jié)腸直腸癌癥(HNPCC)、Huntington病、具有高IgM的免疫缺乏、幼年發(fā)作型糖尿病、Klinefelters綜合癥、Kabuki綜合癥、Leigh病(或綜合癥)、LongQT綜合癥、肺癌、惡性黑素瘤、躁狂抑郁癥、Marfan綜合癥、Menkes綜合癥、流產(chǎn)、粘多聚糖疾病、多內(nèi)分泌腺腫瘤形成、多硬化癥、肌肉萎縮癥、肌增重側(cè)部硬化癥、肌強直性營養(yǎng)不良、多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤、Niemann-Pick病、Noonan綜合癥、肥胖癥、卵巢癌、p53基因腫瘤、胰臟癌、帕金森氏病、陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿、Pendred綜合癥、腓側(cè)肌萎縮、苯丙酮尿癥(PKU)、多囊腎疾病、Prader-Willi綜合癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、前列腺癌、REAR綜合癥、Refsum病、色素性視網(wǎng)膜炎、視網(wǎng)膜成神經(jīng)細胞瘤、Rett綜合癥、Sanfilippo綜合癥、精神分裂癥、重度聯(lián)合免疫缺乏、鐮狀細胞貧血、脊柱裂、脊髓性肌萎縮、脊髓小腦萎縮癥、SRY性別決定、猝死、Tangier疾病、Tay-Sachs疾病、皮下TAR、Townes-Brocks綜合癥、結(jié)節(jié)硬化癥、Turner綜合癥、Usher綜合癥、vonHippel-Lindau綜合癥、Waardenburg綜合癥、Weaver綜合癥、Werner綜合癥、Williams綜合癥、Wilson病、著色性皮膚干燥癥或Zellweger綜合癥。28.根據(jù)權(quán)利要求20所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的蛋白質(zhì)選自生長激素，催乳激素，胎盤泌乳素，紅細胞生成素，血小板生成素，白介素-2，白介素-3，白介素-4，白介素-5，白介素-6，白介素-7，白介素-9，白介素-10，白介素-11，白介素-12(p35亞基)，白介素-13，白介素-15，制瘤素M，毛狀神經(jīng)營養(yǎng)因子，白血病抑制因子，α干擾素，β干擾素，γ干擾素，ω干擾素，τ干擾素，粒性白細胞集落刺激因子，粒性白細胞-巨噬細胞集落刺激因子，巨噬細胞集落刺激因子，心臟營養(yǎng)素-1，生長激素釋放因子；甲狀旁腺激素，甲狀腺激素，脂蛋白，α-1-抗胰蛋白酶，胰島素A-鏈，胰島素B-鏈，胰島素原，促濾泡素，降血鈣素，黃體化激素，胰高血糖素，因子VIIIC、因子XI組織因子和vonWillebrands因子，蛋白質(zhì)C，心鈉素，肺表面活性劑，尿激酶，組織型纖溶酶原激活素，bombazine，凝血酶，α腫瘤壞死因子，β腫瘤壞死因子，腦啡肽酶，RANTES，人類巨噬細胞炎性蛋白質(zhì)，血清白蛋白，mullerian抑制物質(zhì)，松弛肽A-鏈，松弛肽B-鏈，原松弛肽，鼠促性腺激素相關(guān)肽，DNA酶，抑制素，激活素，脈管內(nèi)皮生長激素，荷爾蒙受體，生長激素受體，整聯(lián)蛋白，蛋白質(zhì)A，蛋白質(zhì)D，類風濕因子，神經(jīng)營養(yǎng)因子，骨源神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)，神經(jīng)調(diào)理素-3，神經(jīng)調(diào)理素-4，神經(jīng)調(diào)理素-5，神經(jīng)調(diào)理素-6，NGF-B，來自血小板的生長因子(PDGF)，α成纖維細胞生長因子，βα成纖維細胞生長因子，表皮生長因子，轉(zhuǎn)化生長因子-α，轉(zhuǎn)化生長因子-β1，轉(zhuǎn)化生長因子-β2，轉(zhuǎn)化生長因子-β3，轉(zhuǎn)化生長因子-β4，轉(zhuǎn)化生長因子-β5，胰島素類生長因子-I，胰島素類生長因子-II，脫(1-3)-胰島素類生長因子-I，脫(1-3)-IGF-I，胰島素類生長激素結(jié)合蛋白質(zhì)，CD3，CD4，CD8，CD19和CD20，骨誘導(dǎo)因子，抗毒素，骨形態(tài)形成蛋白質(zhì)，T-細胞受體，表面膜蛋白，衰減加速因子，病毒抗原，傳輸?shù)鞍踪|(zhì)，復(fù)位受體，地址素，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，免疫粘附素，抗體，和其生物活性片段或變體。29.根據(jù)權(quán)利要求22所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中由閱讀框編碼的蛋白質(zhì)選自生長激素，催乳激素，胎盤泌乳素，紅細胞生成素，血小板生成素，白介素-2，白介素-3，白介素-4，白介素-5，白介素-6，白介素-7，白介素-9，白介素-10，白介素-11，白介素-12(p35亞基)，白介素-13，白介素-15，制瘤素M，毛狀神經(jīng)營養(yǎng)因子，白血病抑制因子，α干擾素，β干擾素，γ干擾素，ω干擾素，τ干擾素，粒性白細胞集落刺激因子，粒性白細胞-巨噬細胞集落刺激因子，巨噬細胞集落刺激因子，心臟營養(yǎng)素-1，生長激素釋放因子；甲狀旁腺激素，甲狀腺激素，脂蛋白，α-1-抗胰蛋白酶，胰島素A-鏈，胰島素B-鏈，胰島素原，促濾泡素，降血鈣素，黃體化激素，胰高血糖素，因子VIIIC、因子XI組織因子和vonWillebrands因子，蛋白質(zhì)C，心鈉素，肺表面活性劑，尿激酶，組織型纖溶酶原激活素，bombazine，凝血酶，α腫瘤壞死因子，β腫瘤壞死因子，腦啡肽酶，RANTES，人類巨噬細胞炎性蛋白質(zhì)，血清白蛋白，mullerian抑制物質(zhì)，松弛肽A-鏈，松弛肽B-鏈，原松弛肽，鼠促性腺激素相關(guān)肽，DNA酶，抑制素，激活素，脈管內(nèi)皮生長激素，荷爾蒙受體，生長激素受體，整聯(lián)蛋白，蛋白質(zhì)A，蛋白質(zhì)D，類風濕因子，神經(jīng)營養(yǎng)因子，骨源神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)，神經(jīng)調(diào)理素-3，神經(jīng)調(diào)理素-4，神經(jīng)調(diào)理素-5，神經(jīng)調(diào)理素-6，NGF-β，來自血小板的生長因子(PDGF)，α成纖維細胞生長因子，βα成纖維細胞生長因子，表皮生長因子，轉(zhuǎn)化生長因子-α，轉(zhuǎn)化生長因子-β1，轉(zhuǎn)化生長因子-β2，轉(zhuǎn)化生長因子-β3，轉(zhuǎn)化生長因子-β4，轉(zhuǎn)化生長因子-β5，胰島素類生長因子-I，胰島素類生長因子-II，脫(1-3)-胰島素類生長因子-I，脫(1-3)-IGF-I，胰島素類生長激素結(jié)合蛋白質(zhì)，CD3，CD4，CD8，CD19和CD20，骨誘導(dǎo)因子，抗毒素，骨形態(tài)形成蛋白質(zhì)，T-細胞受體，表面膜蛋白，衰減加速因子，病毒抗原，傳輸?shù)鞍踪|(zhì)，復(fù)位受體，地址素，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，免疫粘附素，抗體，和其生物活性片段或變體組成的組。30.根據(jù)權(quán)利要求20所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的小分子有機活性劑是以與序列特定位點結(jié)合的方式結(jié)合到雙鏈DNA的小溝區(qū)的雜環(huán)聚酰胺低聚物。31.根據(jù)權(quán)利要求20所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中所述的小分子有機活性劑是具有選自下列的單體亞基組成的低聚物N-甲基咪唑羧酰胺、N-甲基吡咯羧酰胺、β-丙氨酸和二甲基氨基丙酰胺。32.根據(jù)權(quán)利要求19所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中小分子有機活性劑是避孕劑，胃腸治療劑，非甾族避孕劑，擬副交感神經(jīng)藥，心理治療劑，強力鎮(zhèn)定劑，弱效鎮(zhèn)定劑，鼻科解充血藥，鎮(zhèn)靜催眠藥，類固醇，索佛拿酰胺，疫苗；維生素，營養(yǎng)素，抗瘧藥，抗-偏頭痛制劑，抗帕金森劑，抗-痙攣藥劑，抗膽堿能藥劑，抗咳嗽劑，支氣管擴張劑，心血管類藥；抗高血壓化合物，冠脈擴張藥，有機硝酸鹽，生物堿，鎮(zhèn)痛藥，麻醉藥，抗癌劑，抗驚厥劑，抗催吐劑，抗炎劑，細胞毒素藥物或抗生素。33.根據(jù)權(quán)利要求20所述的微粒輸送系統(tǒng)，其中小分子有機活性劑是抗生素，其選自頭孢菌素，氯霉素，慶大霉素，卡那霉素A，卡那霉素B，青霉素，氨芐西林，鏈霉素A，抗霉菌素A，chloropamtheniol，甲硝唑，地霉素，青霉素G，四環(huán)素類及其混合物組成的組。34.一種制造品，其包括第一容器、第二容器和有效負載捕獲分子及使用說明，所述第一容器含有有效負載分子，該有效負載分子選自核酸組合物、蛋白質(zhì)組合物、有機小分子及其混合物組成的組，所述第二容器含有微粒輸送系統(tǒng)，該微粒輸送系統(tǒng)包括酵母細胞壁顆粒。35.一種藥物組合物，其包括含有微粒輸送系統(tǒng)的制造品，該微粒輸送系統(tǒng)包括酵母細胞壁顆粒、有效負載捕獲分子和有效負載分子，該有效負載分子選自多核苷酸、蛋白質(zhì)、有機小分子及其混合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑。36.一種輸送有效負載分子到細胞的方法，包括以下步驟提供包含β-葡聚糖的提取的酵母細胞壁，酵母細胞壁圍成內(nèi)部空間；用有效負載分子接觸提取的酵母細胞壁，其中有效負載分子變?yōu)橹辽俨糠值胤忾]在內(nèi)部空間中；用有效負載捕獲分子接觸提取的酵母細胞壁，其中有效負載捕獲分子至少部分地將有效負載分子包圍在提取的酵母細胞壁中以形成微粒輸送系統(tǒng)，其中有效負載分子和有效負載捕獲分子可溶于相同的溶劑系統(tǒng)中；以及用微粒輸送系統(tǒng)接觸細胞。37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，進一步包括細胞內(nèi)在化微粒輸送系統(tǒng)的步驟。38.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述提取的酵母細胞壁進一步包括少于90重量％的β-葡聚糖。39.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述提取的酵母細胞壁進一步包括超過50重量％的幾丁質(zhì)。40.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述提取的酵母細胞壁進一步包括超過30重量％的甘露聚糖。41.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述提取的酵母細胞壁進一步包括超過1重量％的蛋白質(zhì)。42.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述有效負載捕獲分子是多聚糖，其選自瓊脂糖、藻酸鹽、黃原膠、葡聚糖、殼聚糖、半乳甘露聚糖膠、其衍生物及其混合物組成的組。43.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述有效負載捕獲分子是聚丙烯酰胺。44.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述有效負載捕獲分子是聚酰胺。45.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述有效負載捕獲分子選自陽離子聚合物、陰離子聚合物、陽離子洗滌劑、陰離子洗滌劑及其混合物組成的組。46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述陽離子聚合物選自殼聚糖、聚乙烯亞胺和聚-L-賴氨酸組成的組。47.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述有效負載捕獲分子是陽離子聚合物和陽離子洗滌劑的混合物。48.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述陽離子聚合物選自蛋白質(zhì)、多肽、短合成肽、螺旋兩親性肽，陽離子樹枝狀高分子、glucaramide聚合物、N-取代的甘氨酸低聚物、聚(2-甲基-丙烯酸2-[(2-二甲基氨基)-乙基]-甲基-氨基)-乙酯)、聚(2-二甲基氨基乙基)-異丁烯酸鹽及其混合物組成的組。49.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述陰離子聚合物選自藻酸鹽和黃原膠組成的組。50.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中陽離子洗滌劑是十六烷基三甲基溴化銨。51.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述有效負載捕獲分子選自陽離子聚合電解質(zhì)、陰離子聚合電解質(zhì)和兩性聚合電解質(zhì)組成的組。52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述陽離子聚合電解質(zhì)選自乙烯基吡咯烷酮和四個甲基丙烯酸甲酯的共聚物、取代的聚丙烯酰胺、聚乙烯亞胺、聚丙烯亞胺、多胺均聚物、多胺共聚物、聚二甲基二烯丙基氯化銨、取代的葡聚糖；修飾的瓜爾膠、取代的蛋白質(zhì)、聚氨基酸、精胺和亞精胺組成的組。53.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述陰離子聚合電解質(zhì)選自甲基乙烯基醚和馬來酸酐的共聚物、甲基乙烯基醚和馬來酸的共聚物、褐藻酸、羧甲基纖維素、取代的聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚苯乙烯磺酸、葡聚糖硫酸鹽、取代的糖類、肝磷脂和藥學(xué)上可接受的鹽組成的組。54.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述有效負載分子選自多核苷酸、肽、蛋白質(zhì)、小分子有機活性劑、小分子無機活性劑及其混合物組成的組。55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述多核苷酸選自寡核苷酸、反義構(gòu)件、siRNA、酶解RNA、重組DNA構(gòu)件及其混合物組成的組。56.根據(jù)權(quán)利要求55所述的方法，其中所述重組DNA構(gòu)件是包括可與編碼蛋白質(zhì)的閱讀框連接的控制單元的表達載體。57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的方法，其進一步包括表達蛋白質(zhì)的步驟。58.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中由閱讀框編碼的蛋白質(zhì)是結(jié)構(gòu)蛋白、具有酶活性的蛋白質(zhì)、膜蛋白、DNA結(jié)合蛋白或信號蛋白。59.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中由閱讀框編碼的蛋白質(zhì)是抗原蛋白。60.根據(jù)權(quán)利要求55所述的方法，其中所述多核苷酸包括能恢復(fù)缺失的、有缺陷的或被抑制的基因的功能的核苷酸序列。61.根據(jù)權(quán)利要求57所述的方法，其中由閱讀框編碼的蛋白質(zhì)是在患遺傳病的個體中產(chǎn)生治療效果的蛋白質(zhì)。62.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中所述遺傳病是Aarskog-Scott綜合癥、Aase綜合癥、軟骨發(fā)育不全、肢端發(fā)育不全、成癮性、腎上腺-腦白質(zhì)營養(yǎng)不良、白化病、無瞼-巨口綜合癥、Alagille綜合癥、黑尿癥、α-1抗胰蛋白酶缺乏、Alport綜合癥、Alzheimer′s疾病、哮喘、自體免疫多腺綜合癥、雄激素不敏感癥綜合癥、Angelman綜合癥、共濟失調(diào)、共濟失調(diào)毛細管擴張、動脈粥樣硬化、注意力缺陷高活性紊亂(ADHD)、孤獨癥、禿發(fā)癥、Batten病、Beckwith-Wiedemann綜合癥、Best病、躁郁癥短指、乳腺癌、Burkitt淋巴瘤、慢性骨髓白血病、進行性神經(jīng)性肌萎縮疾病、Crohn病、兔唇、Cockayne綜合癥、CoffinLowry綜合癥、結(jié)腸癌、先天性腎上腺增生(CAH)、CorneliadeLange綜合癥、Costello綜合癥、Cowden綜合癥、鼻腔發(fā)育異常、Crigler-Najjar綜癥、Creutzfeldt-Jakob病(CJD)、胞囊纖維癥、耳聾、抑郁癥、糖尿病、軟骨畸形、DiGeorge綜合癥、’唐氏綜合癥、誦讀困難、裘馨氏肌肉萎縮癥、Dubowitz綜合癥、外胚層發(fā)育異常、Ellis-vanCreveld綜合癥、Ehlers-Danlos綜合癥、大皰性表皮松解癥(EB)、癲癇、特發(fā)性震顫、家族高膽固醇血癥、家族性地中海熱、脆性X綜合癥、Friedreich共濟失調(diào)、Gaucher病、青光眼、葡萄糖半乳糖吸收不良、戊二酸尿癥、(脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜)回旋形萎縮、GoldbergShprintzen綜合癥(先天性腭咽閉合功能不全)、Gorlin綜合癥、Hailey-Hailey病、偏身肥大、血色沉著病、血友病、遺傳性運動神經(jīng)和感覺神經(jīng)病(HMSN)、遺傳非息肉病結(jié)腸直腸癌癥(HNPCC)、Huntington病、具有高IgM的免疫缺乏、幼年發(fā)作型糖尿病、Klinefelters綜合癥、Kabuki綜合癥、Leigh病(或綜合癥)、LongQT綜合癥、肺癌、惡性黑素瘤、躁狂抑郁癥、Marfan綜合癥、Menkes綜合癥、流產(chǎn)、粘多聚糖疾病、多內(nèi)分泌腺腫瘤形成、多硬化癥、肌肉萎縮癥、肌增重側(cè)部硬化癥、肌強直性營養(yǎng)不良、多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤、Niemann-Pick病、Noonan綜合癥、肥胖癥、卵巢癌、p53基因腫瘤、胰臟癌、帕金森氏病、陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿、Pendred綜合癥、腓側(cè)肌萎縮、苯丙酮尿癥(PKU)、多囊腎疾病、Prader-Willi綜合癥、原發(fā)性膽汁性肝硬變、前列腺癌、REAR綜合癥、Refsum病、色素性視網(wǎng)膜炎、視網(wǎng)膜成神經(jīng)細胞瘤、Rett綜合癥、Sanfilippo綜合癥、精神分裂癥、重度聯(lián)合免疫缺乏、鐮狀細胞貧血、脊柱裂、脊髓性肌萎縮、脊髓小腦萎縮癥、SRY性別決定、猝死、Tangier疾病、Tay-Sachs疾病、皮下TAR、Townes-Brocks綜合癥、結(jié)節(jié)硬化癥、Turner綜合癥、Usher綜合癥、vonHippel-Lindau綜合癥、Waardenburg綜合癥、Weaver綜合癥、Wemer綜合癥、Williams綜合癥、Wilson病、著色性皮膚干燥癥或Zellweger綜合癥。63.根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)選自生長激素，催乳激素，胎盤泌乳素，紅細胞生成素，血小板生成素，白介素-2，白介素-3，白介素-4，白介素-5，白介素-6，白介素-7，白介素-9，白介素-10，白介素-11，白介素-12(p35亞基)，白介素-13，白介素-15，制瘤素M，毛狀神經(jīng)營養(yǎng)因子，白血病抑制因子，α干擾素，β干擾素，γ干擾素，ω干擾素，τ干擾素，粒性白細胞集落刺激因子，粒性白細胞-巨噬細胞集落刺激因子，巨噬細胞集落刺激因子，心臟營養(yǎng)素-1，生長激素釋放因子；甲狀旁腺激素，甲狀腺激素，脂蛋白，α-1-抗胰蛋白酶，胰島素A-鏈，胰島素B-鏈，胰島素原，促濾泡素，降血鈣素，黃體化激素，胰高血糖素，因子VIIIC、因子XI組織因子和vonWillebrands因子，蛋白質(zhì)C，心鈉素，肺表面活性劑，尿激酶，組織型纖溶酶原激活素，bombazine，凝血酶，α腫瘤壞死因子，β腫瘤壞死因子，腦啡肽酶，RANTES，人類巨噬細胞炎性蛋白質(zhì)，血清白蛋白，mullerian抑制物質(zhì)，松弛肽A-鏈，松弛肽B-鏈，原松弛肽，鼠促性腺激素相關(guān)肽，DNA酶，抑制素，激活素，脈管內(nèi)皮生長激素，荷爾蒙受體，生長激素受體，整聯(lián)蛋白，蛋白質(zhì)A，蛋白質(zhì)D，類風濕因子，神經(jīng)營養(yǎng)因子，骨源神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)，神經(jīng)調(diào)理素-3，神經(jīng)調(diào)理素-4，神經(jīng)調(diào)理素-5，神經(jīng)調(diào)理素-6，NGF-β，來自血小板的生長因子(PDGF)，α成纖維細胞生長因子，βα成纖維細胞生長因子，表皮生長因子，轉(zhuǎn)化生長因子-α，轉(zhuǎn)化生長因子-β1，轉(zhuǎn)化生長因子-β2，轉(zhuǎn)化生長因子-β3，轉(zhuǎn)化生長因子-β4，轉(zhuǎn)化生長因子-β5，胰島素類生長因子-I，胰島素類生長因子-II，脫(1-3)-胰島素類生長因子-I，脫(1-3)-IGF-I，胰島素類生長激素結(jié)合蛋白質(zhì)，CD3，CD4，CD8，CD19和CD20，骨誘導(dǎo)因子，抗毒素，骨形態(tài)形成蛋白質(zhì)，T-細胞受體，表面膜蛋白，衰減加速因子，病毒抗原，傳輸?shù)鞍踪|(zhì)，復(fù)位受體，地址素，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，免疫粘附素，抗體，及其生物活性片段或變體組成的組。64.根據(jù)權(quán)利要求56所述的方法，其中由閱讀框編碼的蛋白質(zhì)選自生長激素，催乳激素，胎盤泌乳素，紅細胞生成素，血小板生成素，白介素-2，白介素-3，白介素-4，白介素-5，白介素-6，白介素-7，白介素-9，白介素-10，白介素-11，白介素-12(p35亞基)，白介素-13，白介素-15，制瘤素M，毛狀神經(jīng)營養(yǎng)因子，白血病抑制因子，α干擾素，β干擾素，γ干擾素，ω干擾素，τ干擾素，粒性白細胞集落刺激因子，粒性白細胞-巨噬細胞集落刺激因子，巨噬細胞集落刺激因子，心臟營養(yǎng)素-1，生長激素釋放因子；甲狀旁腺激素，甲狀腺激素，脂蛋白，α-1-抗胰蛋白酶，胰島素A-鏈，胰島素B-鏈，胰島素原，促濾泡素，降血鈣素，黃體化激素，胰高血糖素，因子VIIIC、因子XI組織因子和vonWillebrands因子，蛋白質(zhì)C，心鈉素，肺表面活性劑，尿激酶，組織型纖溶酶原激活素，bombazine，凝血酶，α腫瘤壞死因子，β腫瘤壞死因子，腦啡肽酶，RANTES，人類巨噬細胞炎性蛋白質(zhì)，血清白蛋白，mullerian抑制物質(zhì)，松弛肽A-鏈，松弛肽B-鏈，原松弛肽，鼠促性腺激素相關(guān)肽，DNA酶，抑制素，激活素，脈管內(nèi)皮生長激素，荷爾蒙受體，生長激素受體，整聯(lián)蛋白，蛋白質(zhì)A，蛋白質(zhì)D，類風濕因子，神經(jīng)營養(yǎng)因子，骨源神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)，神經(jīng)調(diào)理素-3，神經(jīng)調(diào)理素-4，神經(jīng)調(diào)理素-5，神經(jīng)調(diào)理素-6，NGF-β，來自血小板的生長因子(PDGF)，α成纖維細胞生長因子，βα成纖維細胞生長因子，表皮生長因子，轉(zhuǎn)化生長因子-α，轉(zhuǎn)化生長因子-β1，轉(zhuǎn)化生長因子-β2，轉(zhuǎn)化生長因子-β3，轉(zhuǎn)化生長因子-β4，轉(zhuǎn)化生長因子-β5，胰島素類生長因子-I，胰島素類生長因子-II，脫(1-3)-胰島素類生長因子-I，脫(1-3)-IGF-I，胰島素類生長激素結(jié)合蛋白質(zhì)，CD3，CD4，CD8，CD19和CD20，骨誘導(dǎo)因子，抗毒素，骨形態(tài)形成蛋白質(zhì)，T-細胞受體，表面膜蛋白，衰減加速因子，病毒抗原，傳輸?shù)鞍踪|(zhì)，復(fù)位受體，地址素，調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，免疫粘附素，抗體，及其生物活性片段或變體組成的組。65.根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述小分子有機活性劑是以與序列特定位點結(jié)合的方式結(jié)合到雙鏈DNA的小溝區(qū)的雜環(huán)聚酰胺低聚物。66.根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述小分子有機活性劑是具有選自下列的單體亞基的低聚物N-甲基咪唑羧酰胺、N-甲基吡咯羧酰胺、β-丙氨酸和二甲基氨基丙酰胺組成的組。67.根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述小分子有機活性劑是避孕劑，胃腸治療劑，非甾族避孕劑，擬副交感神經(jīng)藥，心理治療劑，強力鎮(zhèn)定劑，弱效鎮(zhèn)定劑，鼻科解充血藥，鎮(zhèn)靜催眠藥，類固醇，索佛拿酰胺，疫苗；維生素，營養(yǎng)素，抗瘧藥，抗-偏頭痛制劑，抗帕金森劑，抗-痙攣藥劑，抗膽堿能藥劑，抗咳嗽劑，支氣管擴張劑，心血管類藥；抗高血壓化合物，冠脈擴張藥，有機硝酸鹽，生物堿，鎮(zhèn)痛藥，麻醉藥，抗癌劑，抗驚厥劑，抗催吐劑，抗炎劑，細胞毒素藥物或抗生素。68.根據(jù)權(quán)利要求54所述的方法，其中所述小分子有機活性劑是抗生素，其選自頭孢菌素，氯霉素，慶大霉素，卡那霉素A，卡那霉素B，青霉素，氨芐西林，鏈霉素A，抗霉菌素A，chloropamtheniol，甲硝唑，地霉素，青霉素G，四環(huán)素類及其混合物組成的組。69.一種輸送藥物到吞噬細胞的方法，包括以下步驟提供包含β-葡聚糖的提取酵母細胞壁，酵母細胞壁圍成內(nèi)部空間；用有效負載分子接觸提取的酵母細胞壁，其中有效負載分子變?yōu)榕c提取的酵母細胞壁締合；用有效負載捕獲分子接觸提取的酵母細胞壁，其中有效負載捕獲分子穩(wěn)定有效負載分子與提取的酵母細胞壁的結(jié)合以形成微粒輸送系統(tǒng)；以及其中有效負載分子和有效負載捕獲分子可溶于相同的溶劑系統(tǒng)中；以及用微粒輸送系統(tǒng)接觸吞噬細胞。70.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其進一步包括吞噬細胞內(nèi)在化微粒輸送系統(tǒng)的步驟。71.根據(jù)權(quán)利要求70所述的方法，其進一步包括吞噬細胞運送微粒輸送系統(tǒng)的步驟。72.根據(jù)權(quán)利要求71所述的方法，其進一步包括從微粒藥物輸送系統(tǒng)釋放藥物的步驟。73.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中所述吞噬細胞是巨噬細胞、Peyer淋巴結(jié)的M細胞、單核細胞、嗜中性白細胞、樹突狀細胞、Langerhans細胞、Kupffer細胞、肺泡噬細胞、腹膜巨噬細胞、乳巨噬細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞、嗜曙紅細胞、粒性白細胞、系膜吞噬細胞或滑膜A細胞。74.根據(jù)權(quán)利要求69所述的方法，其中所述有效負載分子選自多核苷酸、肽、蛋白質(zhì)、小分子有機活性劑、小分子無機活性劑及其混合物組成的組。75.一種制備微粒輸送系統(tǒng)的方法，包括以下步驟提供包含β-葡聚糖的提取酵母細胞壁，酵母細胞壁圍成內(nèi)部空間；用有效負載分子接觸提取的酵母細胞壁，其中有效負載分子與提取的酵母細胞壁結(jié)合；以及用有效負載捕獲分子接觸提取的酵母細胞壁，其中有效負載捕獲分子穩(wěn)定有效負載分子與提取的酵母細胞壁的結(jié)合以形成微粒輸送系統(tǒng)。76.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，進一步包括洗滌和干燥微粒輸送系統(tǒng)的步驟。77.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中所述有效負載分子至少部分地處于酵母細胞壁包圍的內(nèi)部空間中。78.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中所述有效負載分子結(jié)合的穩(wěn)定至少部分地發(fā)生在由酵母細胞壁包圍的內(nèi)部空間中。79.根據(jù)權(quán)利要求75所述的方法，其中所述有效負載分子選自多核苷酸、肽、蛋白質(zhì)、小分子有機活性劑、小分子無機活性劑及其混合物組成的組。80.根據(jù)權(quán)利要求79所述的方法，其中所述多核苷酸選自寡核苷酸、反義構(gòu)件、siRNA、酶解RNA、重組DNA構(gòu)件及其混合物組成的組。81.根據(jù)權(quán)利要求80所述的方法，其中所述重組DNA構(gòu)件是包括可以與編碼蛋白質(zhì)的閱讀框連接的控制單元的表達載體。82.根據(jù)權(quán)利要求79所述的方法，其中所述肽選自荷爾蒙、神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)調(diào)質(zhì)、信號蛋白的活性片段、受體的活性片段、酶的活性片段和核酸結(jié)合蛋白的活性片段組成的組。83.根據(jù)權(quán)利要求79所述的方法，其中所述蛋白質(zhì)選自酶、結(jié)構(gòu)蛋白、信號蛋白、核酸結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)錄因子組成的組。84.一種將個體暴露于抗原的方法，包括以下步驟用包括含有β-葡聚糖的提取酵母細胞壁、有效負載捕獲分子和有效負載分子的微粒輸送系統(tǒng)接觸個體的吞噬細胞，其中所述有效負載分子是多核苷酸，其包含可以結(jié)合到編碼肽的閱讀框的控制單元，該肽可以在個體細胞中可控地表達。85.根據(jù)權(quán)利要求84所述的方法，其中所述肽包括至少一種與在病原體上顯示的抗原決定基等同或基本相似的抗原決定基。86.根據(jù)權(quán)利要求84所述的方法，其中所述肽包括至少一種與過度增生疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的抗原決定基等同或基本相似的抗原決定基。87.根據(jù)權(quán)利要求84所述的方法，其中所述肽包括至少一種與自體免疫疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的抗原決定基等同的或基本相似的抗原決定基。88.根據(jù)權(quán)利要求84所述的方法，其中所述肽是類毒素。89.根據(jù)權(quán)利要求84所述的方法，其中吞噬細胞是巨噬細胞、Peyer淋巴結(jié)的M細胞、單核細胞、嗜中性白細胞、樹突狀細胞、Langerhans細胞、Kupffer細胞、肺泡噬細胞、腹膜巨噬細胞、乳巨噬細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞、嗜曙紅細胞、粒性白細胞、系膜吞噬細胞或滑膜A細胞。90.一種將個體暴露于抗原的方法，包括以下步驟用包括含有β-葡聚糖的提取酵母細胞壁、有效負載捕獲分子和有效負載分子的微粒輸送系統(tǒng)接觸個體的吞噬細胞，其中所述有效負載分子是抗原分子。91.根據(jù)權(quán)利要求90所述的方法，其中所述有效負載分子選自多核苷酸、肽、蛋白質(zhì)、小分子有機活性劑、小分子無機活性劑及其混合物組成的組。92.根據(jù)權(quán)利要求90所述的方法，其中所述有效負載分子是類毒素。93.根據(jù)權(quán)利要求90所述的方法，其中所述抗原分子包括至少一種與過度增生疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的抗原決定基等同的或基本相似的抗原決定基。94.根據(jù)權(quán)利要求90所述的方法，其中所述抗原分子包括至少一種與自體免疫疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的抗原決定基等同的或基本相似的抗原決定基。95.根據(jù)權(quán)利要求90所述的方法，其中所述吞噬細胞是巨噬細胞、Peyer淋巴結(jié)的M細胞、單核細胞、嗜中性白細胞、樹突狀細胞、Langerhans細胞、Kupffer細胞、肺泡噬細胞、腹膜巨噬細胞、乳巨噬細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞、嗜曙紅細胞、粒性白細胞、系膜吞噬細胞或滑膜A細胞。96.一種將藥物輸送到巨噬細胞的方法，包括如下步驟提供含有β-葡聚糖的提取酵母細胞壁、藥物和有效負載捕獲分子的微粒輸送系統(tǒng)；以及用微粒藥物輸送系統(tǒng)接觸巨噬細胞。97.根據(jù)權(quán)利要求96所述的方法，其進一步包括巨噬細胞內(nèi)在化微粒藥物輸送系統(tǒng)的步驟。98.根據(jù)權(quán)利要求97所述的方法，其進一步包括巨噬細胞運送微粒藥物輸送系統(tǒng)的步驟。99.根據(jù)權(quán)利要求98所述的方法，其進一步包括輸送微粒藥物輸送系統(tǒng)到巨噬細胞吸引位點的步驟。100.根據(jù)權(quán)利要求99所述的方法，其中所述巨噬細胞吸引位點是感染、炎癥反應(yīng)、組織缺氧或增生的部位。101.根據(jù)權(quán)利要求99所述的方法，其中所述巨噬細胞吸引位點是腫瘤。102.根據(jù)權(quán)利要求99所述的方法，其進一步包括從微粒藥物輸送系統(tǒng)釋放藥物的步驟。103.根據(jù)權(quán)利要求102所述的方法，其進一步包括釋放藥物到細胞外空間的步驟。104.根據(jù)權(quán)利要求102所述的方法，其中釋放藥物的步驟包括表達重組蛋白質(zhì)和分泌蛋白質(zhì)到細胞外的空間的步驟。105.一種使個體針對過度增生疾病進行免疫的方法，其包括以下步驟用包含具有β-葡聚糖的提取酵母細胞壁、有效負載捕獲分子和有效負載分子的微粒輸送系統(tǒng)接觸所述個體細胞，該有效負載分子是包含可以結(jié)合到編碼肽的閱讀框的控制單元的多核苷酸，該肽包括與在過度增生疾病相關(guān)蛋白質(zhì)上顯示的抗原決定基等同的或基本相似的抗原決定基，其中所編碼的肽可以在個體細胞中表達。106.一種治療患遺傳病個體的方法，包括以下步驟用包含具有β-葡聚糖的提取酵母細胞壁、有效負載捕獲分子和有效負載分子的微粒輸送系統(tǒng)接觸所述個體細胞，該有效負載分子是多核苷酸，從而將包括核苷酸序列的多核苷酸給予細胞，該序列能恢復(fù)缺失的、有缺陷的或被抑制的基因的活性。107.根據(jù)權(quán)利要求106所述的方法，其中所述多核苷酸包括可以結(jié)合到編碼在個體中產(chǎn)生治療效果的蛋白質(zhì)的閱讀框的調(diào)節(jié)元件，該蛋白質(zhì)可以在所述細胞中表達。全文摘要本發(fā)明提供包含具有β－葡聚糖的提取酵母細胞壁、有效負載捕獲分子和有效負載分子的微粒輸送系統(tǒng)。本發(fā)明進一步提供制備和使用微粒輸送系統(tǒng)的方法。文檔編號A61K9/50GK101001615SQ200580019946公開日2007年7月18日申請日期2005年6月15日優(yōu)先權(quán)日2004年6月16日發(fā)明者加里·R·奧斯特羅夫申請人:加里·R·奧斯特羅夫