專利名稱：5－氨基乙酰丙酸或其衍生物的酸加成鹽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid，5-ALA)和其衍生物的某些鹽、它們的制備和它們的用途，尤其是作為光化學療法或診斷中的光敏劑(photosensitizing agent)的用途。本發(fā)明特別涉及新5-ALA的鹽和新5-ALA酯的鹽。
光化學療法，或其實也是已知的光動力學療法(photodynamic therapy，PDT)，是用于治療皮膚或其它上皮器官或粘膜的各種異?；虿“Y的技術(shù)，特別是癌癥或初步癌性病變，以及某些非惡性病變，例如皮膚疾病如牛皮癬。
光化學療法包括在身體的感染區(qū)上施用光敏(光化學治療)劑，而后暴露于光敏燈，以便激活光敏劑并將它們轉(zhuǎn)變?yōu)榧毎舅匦问?，由此殺死感染細胞或削弱它們的增殖潛力?br>
大量的光敏劑是已知的，包括著名的補骨脂素、卟啉(例如Photofrin)、克洛林和酞花青。當暴露于光時，這種藥物變得具有毒性。
本領(lǐng)域已知的臨床上最有效的光敏劑是5-氨基乙酰丙酸和其衍生物，例如酯例如5-ALA酯。例如，這些描述在WO91/01727、WO96/28412和WO02/10120中。迄今為止，只是建議這種化合物以它們的鹽酸鹽的形式用于臨床的用途，例如，ALA-HCl形式，商品名Levulan(得自于DusaPharmaceuticals Inc.，Wilmington，US)，ALA甲酯HCl形式，商品名Metvix(PhotoCure ASA，Oslo，Norway)和ALA己基酯HCl形式，商品名Hexvix(同樣得自于PhotoCure ASA)。
盡管在許多初期癌性疾病和癌性疾病及其它病癥中，使用ALA和ALA衍生物的光化學療法是臨床上有效的，然而當配制用作藥物，例如在PDT中時，這種化合物顯示出一些局限性。例如，這些化合物(尤其是ALA和其鹽酸鹽)在藥學制劑中具有不穩(wěn)定的傾向。在某些情況下，這種化合物也可以與它們的物理化學性能有關(guān)的問題相關(guān)聯(lián)，例如它們的結(jié)晶性能、溶解性或吸濕性能。
由此，存在可供選擇的光化學治療劑的需要。尤其是，對作為更好藥物的中試劑存在需要，例如與那些本領(lǐng)域已知的藥劑相比具有改進的物理化學性能(例如更穩(wěn)定的物理化學性能、吸濕性更小等等)的光化學治療劑。當用于PDT中時，與已知的光敏劑相比，這種藥劑應(yīng)該顯示出同等的、或優(yōu)選改進的效果(即，同等或增強的光化學治療效果)，這也是合乎需要的。
意外地，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)某些5-氨基乙酰丙酸和其衍生物的鹽，尤其是ALA酯的鹽，具有用于藥學制劑的所需性能(例如用于光化學療法的制劑)，而且相對于已知的和本領(lǐng)域中使用的ALA化合物，許多這種鹽具有提高的性能。特別地，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，ALA和其衍生物與非HCl的酸的酸加成鹽特別適合用于藥學制劑，例如用于光化學療法的制劑，這種酸具有大約5或更小的pKa，特別是磺酸。例如，現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，與已知的ALA化合物相比，這種化合物具有提高的物理化學性能，例如增加的穩(wěn)定性(例如更低的吸濕性)。同樣已經(jīng)發(fā)現(xiàn)某些這種化合物比目前臨床使用的ALA化合物顯示出提高的效果(即增加的光化學治療效果)，例如相對于ALA和ALA酯的相應(yīng)鹽酸鹽。
由此，從一個方面考慮，本發(fā)明提供了5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)或5-ALA衍生物(例如5-ALA酯)與酸的酸加成鹽，這種酸具有大約5或更小的pKa，條件是該酸不是鹽酸。
在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供了5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)或其衍生物(例如5-ALA酯的鹽)與pKa小于大約3的酸的酸加成鹽。這種酸的特別優(yōu)選例子包括磺酸和磺酸衍生物。
優(yōu)選，本發(fā)明的酸加成鹽是藥學可接受的。因此，優(yōu)選的是，得到本發(fā)明鹽的酸本身應(yīng)該是藥學可接受的。
在進一步方面中，本發(fā)明還提供了用作藥物，例如用于光化學療法或診斷的藥物的這種化合物(即酸加成鹽)。
本文中使用的術(shù)語“5-氨基乙酰丙酸”、“ALA”和“5-ALA”可互換使用，并且包括5-氨基-4-氧代戊酸。當相對于ALA而使用時，術(shù)語“衍生物”包括化學修飾的化合物，例如酯例如ALA酯。這種化合物典型地由修飾5-ALA羧基而形成。術(shù)語“衍生物”還包括其中5-氨基可以是取代或未取代的任何5-氨基乙酰丙酸化合物。換句話說，相對于5-ALA使用的術(shù)語“衍生物”包括這樣的化合物，其中化學修飾可以出現(xiàn)在ALA的羧酸或5-氨基中的一處或兩處。5-ALA的衍生物通常是已知的，并且描述在現(xiàn)有技術(shù)中，例如在WO96/28412和WO02/10120中，其全部內(nèi)容引入本文中作為參考。用于本發(fā)明的5-ALA的優(yōu)選衍生物是ALA酯，特別是其中5-氨基是未取代的5-ALA化合物的那些酯。
本文中使用的術(shù)語“磺酸”包括任何含有至少一個-SO3H基團的有機化合物。優(yōu)選，其可以包括1、2或3個-SO3H基團，最優(yōu)選1或2個，例如1個。當相對于磺酸使用時，術(shù)語“衍生物”包括任何含有至少一個(優(yōu)選1、2或3個，最優(yōu)選1或2個，例如1個)-SO3X基團(其中X是生理學可允許的陽離子，例如鈉、鈣、鉀、鎂或葡甲胺陽離子(meglumine cation))的這種化合物。
根據(jù)本發(fā)明的鹽典型地衍生自ALA或ALA衍生物和單質(zhì)子酸(mono-protic acid)，例如磺酸如甲磺酸，從而形式1∶1的鹽?；蛘?，可以在ALA或ALA衍生物與二-或三質(zhì)子酸之間形成鹽，例如磺酸例如乙烷-1，2-二磺酸、硫酸或磷酸。在使用具有一個酸性質(zhì)子以上的酸的情況下，得到的化合物的化學計量比可以不是1∶1，例如2∶1(ALA∶酸)或3∶1(ALA∶酸)，或可以包括化學計量變化水平的鹽的混合物。例如在硫酸的情況下，可以形成2∶1(ALA∶酸)的鹽，而在磷酸的情況下，可以形成3∶1(ALA∶酸)的鹽。多質(zhì)子酸也能夠與ALA或ALA衍生物形成其它鹽。例如硫酸可以基于HSO4-陰離子提供1∶1(ALA∶酸)的鹽，磷酸可以基于HPO42-和H2PO4-陰離子分別提供2∶1(ALA∶酸)和1∶1(ALA∶酸)的鹽(或其組合)。而且，多質(zhì)子酸還可以以與其它生理學可接受的堿(例如氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鉀和葡甲胺)的鹽的形式，與ALA或其衍生物(例如與ALA酯)形成其它鹽，例如1∶1的鹽。
本發(fā)明的鹽優(yōu)選衍生自具有大約4或更小的pKa、更優(yōu)選大約3或更小的pKa的酸。該酸可以是無機或有機酸。優(yōu)選的無機酸包括氫溴酸，硫酸，磷酸，尤其是硝酸。優(yōu)選的有機酸包括磺酸和磺酸衍生物。衍生自硝酸、磺酸和磺酸衍生物的那些鹽是特別優(yōu)選的。
更優(yōu)選，本發(fā)明提供了式I的化合物
(其中R是氫原子或任選取代的烴基(例如C1-20烴基)或芳基(例如至多20個碳原子的芳基)，優(yōu)選任選取代的烴基或芳基；R1和R2每個獨立地表示氫原子或任選取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀烴基，其可以任選被一個或多個-O-、-NR3-、-S-或-PR3-基團間隔；和R3是氫原子或C1-6烴基)。
除非另外具體陳述，本文中使用的術(shù)語“烴基(alkyl)”包括任何長或短鏈、直鏈、支鏈或環(huán)狀脂肪族的飽和或不飽和烴基團。任選地，這種基團可以被取代(例如單或多取代)，例如被下列取代羥基，烴氧基，酰氧基，硝基，烴氧羰基氧基，氨基，芳基，氧基，鹵素(例如氟或氯)，-SR3，-NR32或-PR32基團(其中R3如上文所定義)。不飽和的烴基可以是單或多不飽和的，并且包括烯基和炔基兩者。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物是那些式I的化合物，其中R是任選取代的(即單或多取代)、直鏈的、支鏈的或環(huán)狀的(例如單或雙環(huán)，橋接或非橋接)烴基，該烴基可以含有至多20個碳原子，或任選取代的(即單或多取代)芳基，該芳基優(yōu)選含有至多20個碳原子?？梢源嬖谟诨鶊FR中的優(yōu)選取代基包括C1-6烴基(例如甲基)，羥基，烴氧基，酰氧基，硝基，烴氧羰基氧基，氨基，芳基，氧基和鹵素(例如氟或氯)。
通常，本發(fā)明的在ALA或ALA衍生物與磺酸化合物之間形成的鹽，包括單一磺酸部分，即單質(zhì)子酸。然而，如上所述，具有一個以上磺酸部分(例如2或3個這種基團)的化合物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。因此，可以存在于基團R中的其它取代基包括一個或多個、優(yōu)選一個-SO2OH、-SO2OX(其中X如上文定義)或-SO2Oθ基團?？梢杂糜谥苽浔景l(fā)明鹽的二磺酸的代表性例子包括乙烷-1，2-二磺酸和萘-1，5-二磺酸。
就基團R而論，優(yōu)選的烴基可以含有至多20個、但優(yōu)選至多15個例如至多12個碳原子。然而，優(yōu)選含有至多10個，例如至多5個、更優(yōu)選1、2或3個碳原子的烴基。尤其是，優(yōu)選具有至多10個碳原子的直鏈烴基，例如甲基、乙基或丙基。盡管這些基團可以是取代或未取代的，優(yōu)選這些基團是未取代的。
就基團R而論，優(yōu)選的芳基包括任選取代的苯基或萘基。優(yōu)選，芳基是取代的，例如被一個或多個(例如一個、兩個或三個)取代基取代，取代基可以包括C1-6烴基(優(yōu)選C1-4烴基，例如甲基)，烴氧基(例如甲氧基)，硝基，鹵素(例如氟或氯)，-SO3H，-SO3X(其中X如上文定義)，-SO2O-或三氟甲基。芳基的代表性例子包括甲苯(例如對甲苯)，苯，萘和萘磺酸酯(例如2-萘磺酸酯)。
就R1和R2而論，優(yōu)選的烴基是那些含有至多20個、例如至多10個碳原子的烴基。尤其是，優(yōu)選具有至多10個碳原子的飽和烴類，例如己基，庚基或辛基。然而也可以使用低級烴基，例如甲基、乙基和丙基。合適的烴基可以是直鏈或支鏈的。合適的支烴烷基的代表性例子包括2-甲基戊基和4-甲基戊基。通常直鏈的非支鏈烴基是優(yōu)選的。
取代的烴基可以是單或多取代的。由此合適的基團R1和R2包括，例如，未取代的烴基，烴氧基烴基，羥基烴氧基烴基，多羥基烴基，羥基多亞烴基氧基烴基，氧雜烴基(oxaalkyl)，多氧雜烴基(polyoxaalkyl)等等。
優(yōu)選的取代烴基R1基團包括那些帶有一個或多個氧代的基團，優(yōu)選被一個、兩個或三個(優(yōu)選兩個或三個)氧代取代的直鏈C4-12烴基(例如C8-10烴基)。這種基團的例子包括3，6-二氧雜-1-辛基和3，6，9-三氧雜-1-癸基。
可以存在于式I化合物中的特別優(yōu)選的取代的烴基R1基團包括被芳基取代(優(yōu)選末端取代)的下述基團C1-6烴基，優(yōu)選C1-4烴基，特別優(yōu)選C1或C4烴基(例如甲基)。優(yōu)選的芳基包括苯基、二苯基和單環(huán)的5-7元例如5或6-元雜芳環(huán)，特別是苯基，并且這種基團本身可以任選被取代，例如被一個或多個(例如一或兩個)C1-6烴基(優(yōu)選C1-4烴基，例如甲基)、烴氧基(例如甲氧基)、硝基、氟、氯或三氟甲基取代。合適的雜芳族基團包括那些含有至少一個選自氧、硫和氮雜原子的基團。優(yōu)選的雜芳族基團是吡啶。
代表性的取代的烴基R1和R2包括烴氧基甲基，烴氧基乙基和烴氧基丙基或酰氧甲基，酰氧乙基和酰氧基丙基，例如新戊酰氧基甲基。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括那些式I的化合物，其中R1和/或R2，優(yōu)選R1表示未取代的烴基或芳基取代的烴基(例如芐基)，其中芳基本身也可以被取代，如本文所描述。特別是，R1是C1-6烴基，例如C1或C6烴基或芐基，每個可以任選被取代。優(yōu)選，C1或C6烴基和芐基是未取代的。特別優(yōu)選這種化合物是ALA酯的鹽，即R1如上所述，并且在N-末端兩個R2基團是氫原子。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物是那些式I的化合物，其中R1表示未取代的烴基(例如C1-6烴基)或表示被芳基(例如苯基)取代的烴基(例如C1-2烴基)，和/或每個R2表示氫原子。
本發(fā)明最優(yōu)選的化合物是下列物質(zhì)的磺酸鹽或磺酸衍生物鹽ALA，甲基ALA酯，1-甲基戊基ALA酯，對-異丙基芐基ALA酯，對-甲基芐基ALA酯，芐基ALA酯，2-苯乙基ALA酯，己基ALA酯，環(huán)己基ALA酯，4-甲基戊基ALA酯，2-(2-乙氧基乙氧基)乙基ALA酯，對-[三氟甲基]芐基ALA酯，對-[叔丁基]芐基ALA酯，對-硝基芐基ALA酯，1-乙基丁基ALA酯，2-甲基戊基ALA酯，4-苯基丁基ALA酯，對-氟芐基ALA酯，3，3-二甲基-1-丁基ALA酯，2-氟芐基ALA酯，2，3，4，5，6-五氟芐基ALA酯，4-氯芐基ALA酯，2-甲氧基乙基ALA酯，3-硝基芐基ALA酯，3，4-[二-氯]芐基ALA酯，3，6-二氧雜-1-辛基ALA酯，3-氟芐基ALA酯，3，6，9-三氧雜-1-癸基ALA酯，3-吡啶基-甲基ALA酯，4-聯(lián)苯-甲基ALA酯，4-甲氧基-芐基ALA酯，2-甲基芐基ALA酯，芐基-5-[(1-乙酰基氧基乙氧基)-羰基]氨基乙酰丙酸酯，和3-甲基芐基ALA酯。
本發(fā)明其它優(yōu)選的化合物包括以上所述ALA化合物的硝酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、和硫酸鹽。最優(yōu)選的是，這種ALA化合物的磺酸鹽、磺酸衍生物鹽和硝酸鹽，特別是磺酸鹽和磺酸衍生物鹽。
本發(fā)明更加優(yōu)選的化合物是下列物質(zhì)的磺酸鹽或磺酸衍生物鹽ALA，甲基ALA酯，1-甲基戊基ALA酯，對-異丙基芐基ALA酯，對-甲基芐基ALA酯，芐基ALA酯，己基ALA酯，4-甲基戊基ALA酯和2-(2-乙氧基乙氧基)乙基ALA酯。
ALA、甲基ALA酯、1-甲基戊基ALA酯、對-異丙基芐基ALA酯、對-甲基芐基ALA酯、芐基ALA酯、己基ALA酯、4-甲基戊基ALA酯和2-(2-乙氧基乙氧基)乙基ALA酯的硝酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽和硫酸鹽也是本發(fā)明優(yōu)選的化合物。
本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物包括ALA或ALA衍生物(例如ALA酯)與硝酸、硫酸、磷酸、氫溴酸的酸加成鹽，或更尤其的是，與選自下述磺酸的酸加成鹽萘-1，5-二磺酸，乙烷-1，2-二磺酸，對甲苯磺酸，甲磺酸，十二烷基磺酸，萘-2-磺酸，苯磺酸，2-羥基-乙磺酸，乙磺酸，和(+)-樟腦-10-磺酸。
尤其優(yōu)選的鹽是以上列出的那些衍生自硝酸或磺酸的鹽。衍生自以上列出的磺酸的鹽(例如衍生自甲磺酸、苯磺酸和對甲苯磺酸的鹽)是特別優(yōu)選的。
尤其優(yōu)選的化合物的例子包括5-氨基-4-氧代戊酸甲苯磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸己基酯甲苯磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯甲苯磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸甲酯甲苯磺酸鹽；2-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲苯磺酸鹽；4-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲苯磺酸鹽；4-甲基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲苯磺酸鹽；4-異丙基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲苯磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸甲磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸己基酯甲磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯甲磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸甲酯甲磺酸鹽；2-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲磺酸鹽；
4-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲磺酸鹽；4-甲基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲磺酸鹽；4-異丙基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲磺酸鹽；2-(2-乙氧基乙氧基)乙基5-氨基-4-氧代戊酸酯苯磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯苯磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯2-羥基乙磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯(1S)-10-樟腦磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯2-萘磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯硝酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯硫酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯磷酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸氫溴酸鹽；和芐基5-氨基-4-氧代戊酸氫溴酸鹽。
本發(fā)明化合物特別優(yōu)選的包括下列物質(zhì)的磺酸鹽5-ALA，5-ALA甲酯，5-ALA己基酯和5-ALA芐基酯(例如5-氨基-4-氧代戊酸甲苯磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸己基酯甲苯磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯甲苯磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸甲酯甲苯磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸甲磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸己基酯甲磺酸鹽；5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯甲磺酸鹽；和5-氨基-4-氧代戊酸甲基酯甲磺酸鹽)。5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯硝酸鹽也是特別優(yōu)選的化合物。
具有大約5或更小pKa的酸并且適合用于形成根據(jù)本發(fā)明的酸加成鹽的酸，可以是非HCl的無機酸或有機酸。無機酸的代表性例子包括氫溴酸，硫酸，硝酸和磷酸。尤其優(yōu)選硝酸。有機酸的代表性例子包括萘-1，5-二磺酸，乙烷-1，2-二磺酸，對甲苯磺酸，甲磺酸，十二烷基磺酸，萘-2-磺酸，苯磺酸，2-羥基-乙磺酸，乙磺酸，和(+)-樟腦-10-磺酸。
優(yōu)選地，具有大約5或更小pKa的酸是有機酸。例如，該酸可以是具有大約3至大約5的pKa的有機酸，或可以是具有大約4或更小的pKa(例如大約3至大約4的pKa)的有機酸。優(yōu)選的有機酸可以具有大約3或更小的pKa。
具有大約3或更小的pKa的有機酸的代表性例子包括萘-1，5-二磺酸，乙烷-1，2-二磺酸，環(huán)拉酸(cyclamic acid)，對甲苯磺酸，硫氰酸(thiocyanicacid)，甲磺酸，十二烷基磺酸，萘-2-磺酸，苯磺酸，草酸，2，2-二氯乙酸，乙二醇磷酸(glycophosphoric acid)，2-羥基-乙磺酸，L-天冬氨酸，馬來酸，乙磺酸，(+)-樟腦-10-磺酸，谷氨酸，海藻酸，雙羥萘酸酸(pamoic acid)，2-氧代-戊二酸，1-羥基-2-萘酸，丙二酸，龍膽酸(gentisic acid)，水楊酸和酒石酸。
pKa為大約3至大約4的有機酸的代表性例子包括半乳糖酸，檸檬酸，D-葡糖醛酸，乳糖酸，4-氨基水楊酸，羥基乙酸，D-葡庚糖酸，(-)-L-焦谷氨酸，DL-扁桃酸，(-)-L-蘋果酸，馬尿酸，D-葡糖酸，DL-乳酸和油酸。
具有pKa大約3至大約5的有機酸的代表性例子包括 苯甲酸，琥珀酸，4-乙酰胺基苯甲酸，戊二酸，肉桂酸，己二酸，癸二酸，(+)-樟腦酸(camphoric acid)，乙酸，樟腦酸(camporic acid)，煙酸(nicotinic acid)，異丁酸，丙酸，癸酸，月桂酸，棕櫚酸，硬脂酸，十一碳烯酸和辛酸。上述披露的pKa為大約3至大約4的那些酸也可以包括在這組內(nèi)。
本發(fā)明或用于本發(fā)明的化合物可以使用本領(lǐng)域所熟知的形成鹽的標準工藝和方法來制備。
用于制備根據(jù)本發(fā)明的鹽的起始原料包括ALA和其衍生物，例如ALA酯，可以使其與酸例如磺酸(例如對甲苯磺酸、甲磺酸)等等反應(yīng)。
由此可以了解，本發(fā)明提供了用于制備本發(fā)明化合物的方法，所述方法包括5-氨基乙酰丙酸或其衍生物(例如ALA酯)與酸(例如磺酸或磺酸衍生物)反應(yīng)。
或者，為了制備本發(fā)明的ALA酯的鹽，可以使用一鍋反應(yīng)(one-potreaction)，其包括在酸(例如磺酸或磺酸衍生物)的存在下使5-氨基乙酰丙酸或其酯化衍生物與烷醇或其酯形成衍生物(ester-forming derivative)(例如與烷醇)反應(yīng)。這種方法構(gòu)成了本發(fā)明的另一方面。
更尤其是，本發(fā)明的這個方面提供了用于制備上文描述的酸加成鹽(例如式I的化合物)的方法，所述方法包括使式II的化合物與式(III)的化合物在上文定義的酸例如式IV的磺酸的存在下進行反應(yīng)的步驟式II的化合物R22N-CH2COCH2-CH2COY(II)(其中Y表示離去基團，例如羥基，鹵素原子或烷氧基，或COY表示酸酐基團，R2如上文定義)
式III的化合物R1-OH (III)(其中R1是任選取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀烷基，其可以任選被一個或多個-O-、-NR3-、-S-或-PR3-基團間隔；R3是氫原子或C1-6烴基)；式IV的化合物R-SO2OH (IV)(其中R如上文所定義)。
這種反應(yīng)可以方便地在溶劑或溶劑的混合物中、在至多100℃的溫度(優(yōu)選在室溫)下進行，所述溶劑例如水、丙酮、甲醇、乙醇或四氫呋喃等等，優(yōu)選為水。反應(yīng)條件將取決于所使用的試劑，并且可以選擇條件，由此獲得該鹽的最高產(chǎn)率。
本發(fā)明的化合物也可以由相應(yīng)的鹽酸鹽制備，例如使用下面列出的離子交換法或通過“銀-鹽”方法。這些方法形成本發(fā)明的進一步方面。
離子交換法典型地包括將含有ALA或ALA衍生物的鹽酸鹽的溶液通過離子交換柱的第一步，和將洗脫液由柱加入到酸溶液(例如磺酸)中的第二步?？梢允褂媚軌?qū)l-交換為堿性陰離子(例如氫氧離子)的任何離子交換樹脂。合適的離子交換劑包括強堿性的陰離子交換樹脂(例如Dowex11，AmberlystA26(OH)等等)。在該方法中，ALA或ALA衍生物的鹽酸鹽的氯離子在通過柱期間被交換為堿性(例如氫氧化物)離子。這樣就提供了游離堿，然后其與酸(例如磺酸或磺酸衍生物)中和，由此同時形成ALA或ALA衍生物的相應(yīng)酸(例如磺酸)加成鹽。
由此，從進一步方面來看，本發(fā)明提供了用于制備根據(jù)本發(fā)明的酸加成鹽(例如式I的化合物)的方法，所述方法包括(i)將包含ALA或ALA衍生物的鹽酸鹽(例如式Cl-R22N+H-CH2COCH2CH2CO2R1的化合物，其中R1和R2如上文定義)溶液與堿性陰離子交換樹脂接觸；(ii)任選地除去所述樹脂；和(iii)將得到的溶液與包含上文定義的酸優(yōu)選磺酸或磺酸衍生物(例如式RSO3H或RSO3X的化合物，其中R和X如上文定義)的溶液混合。
在銀鹽方法中，使ALA或ALA衍生物的鹽酸鹽與酸的銀鹽在AgCl不能溶解的溶劑(例如水)中反應(yīng)。合適的銀鹽的例子包括甲磺酸銀，對-甲苯磺酸銀，苯磺酸銀，硫酸銀，磷酸銀，硝酸銀，等等。在這種方法中，銀可以被任何其它陽離子替代，這種陽離子與氯離子在下述溶劑中形成不溶解化合物，在所述溶劑中ALA或ALA衍生物的鹽酸鹽與合適的酸加成鹽(例如磺酸鹽)至少部分地(例如基本上))。例如，可以使ALA或ALA衍生物的鹽酸鹽與磺酸的鈉、鉀、鈣或鎂鹽在溶劑中反應(yīng)，在這種溶劑中，NaCl/KCl/CaCl2/MgCl2是不能溶解的(例如非水的有機溶劑)。
由此，從進一步方面來看，本發(fā)明提供了用于制備本發(fā)明化合物(例如式I的化合物)的方法，所述方法包括(i)使ALA或ALA衍生物的鹽酸鹽(例如式Cl-R22N+H-CH2COCH2CH2CO2R1的化合物，其中R1和R2如上文定義)與上文定義的酸優(yōu)選磺酸的銀鹽(例如式RSO3Ag，其中R如上文定義)在AgCl基本上不能溶解的溶劑中反應(yīng)；和(ii)任選從得到的鹽(例如磺酸鹽)中分離AgCl。
上面描述的方法主要參考5-ALA和5-ALA衍生物與磺酸和磺酸衍生物的酸加成鹽的制備來加以說明。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員很清楚，可以通過類似的方法制備根據(jù)本發(fā)明的其它酸加成鹽，只不過其中磺酸或其衍生物被所需要的酸替代。
用作起始原料的化合物可以從文獻中得知，并且在很多情況下是可商業(yè)購買的，或可以使用已知的方法獲得。例如ALA得自于Sigma。用于制備ALA衍生物例如ALA酯的方法，例如描述在WO96/28412和WO02/10120中，其內(nèi)容引入本文中作為參考。
在現(xiàn)有技術(shù)中是眾所周知的、并且適合用作合成本發(fā)明酸加成鹽(例如磺酸鹽)的起始原料的一些鹽酸鹽例子包括ALA HCl，ALA甲基酯HCl，ALA己基酯HCl等等。
如上所述，本發(fā)明的化合物和根據(jù)本發(fā)使用的化合物具有有價值的藥理學性質(zhì)，即具有光敏性能的胞內(nèi)卟啉的誘導(dǎo)物的用途，這種性能使它們可以用作光化學治療藥劑。然而，本發(fā)明的化合物與已知的ALA和ALA酯的鹽例如鹽酸鹽，相比具有許多的優(yōu)點。首先，本發(fā)明的化合物通常更穩(wěn)定并且吸濕性更??；這種性能具有可以長期保存藥物制劑的優(yōu)點，而沒有能夠?qū)е鹿πp失的活性物質(zhì)的顯著降解。其次，本發(fā)明的某些酸加成鹽，尤其是硝酸加成鹽和磺酸加成鹽，令人吃驚地發(fā)現(xiàn)其具有提高的光敏性能；在施用硝酸或磺酸鹽之后的熒光水平，比相應(yīng)的鹽酸鹽的熒光水平高。
本發(fā)明的進一步方面相應(yīng)地提供了一種藥物組合物，其包含本發(fā)明的酸加成鹽以及至少一種藥學載體或賦形劑。
在進一步方面，提供了一種藥物組合物，如上文描述，其用作例如光化學療法或診斷的藥物。
在更進一步方面，提供了本發(fā)明的酸加成鹽在制備用于光化學療法的治療劑中的用途，特別是在制備用于治療對光化學療法敏感的身體外或內(nèi)表面的病癥或異常的治療劑中的用途。
可以根據(jù)本發(fā)明治療的異常和病癥包括對光化學療法敏感的任何惡性的、初期惡性的和非惡性的異?；虿“Y，例如皮膚基底細胞癌(bcc)，腫瘤或其它增殖，皮膚病例如牛皮癬或光化性角化病和痤瘡，皮膚擦傷，和其它疾病或感染例如細菌、病毒或真菌感染，例如皰疹病毒感染。本發(fā)明尤其適于治療這樣的疾病、病癥或異常，其中組合物可以直接施加到所形成的分散病變(discrete lension)(這里使用的病變在廣義上包括腫瘤等等)。
可以根據(jù)本發(fā)明治療的內(nèi)表面和外身體表面包括皮膚和所有其它的上皮和絨膜表面，包括例如粘膜，器官例如呼吸、胃-腸和生殖尿路的內(nèi)層，和具有通往這種表面的中空管道的腺體(例如肝臟，具有皮脂腺的毛囊，乳腺，唾液腺和精囊腺)。除了皮膚之外，這種表面包括例如陰道的內(nèi)層(lining)，子宮內(nèi)膜和尿路上皮。這種表面也可以包括患病或癌性的組織切除之后在身體內(nèi)形成的空隙，例如腫瘤(例如神經(jīng)膠質(zhì)瘤)切除之后的腦空隙。
由此，典型的表面包括(i)皮膚和結(jié)膜；(ii)口腔、咽、食道、胃、腸和腸的附屬體、直腸和肛管的內(nèi)層；(iii)鼻部通道、鼻竇、鼻咽、氣管、支氣管和細支氣管的內(nèi)層；(iv)輸尿管、膀胱和尿道的內(nèi)層；(v)陰道、子宮頸和子宮的內(nèi)層；(vi)側(cè)膜和臟層胸膜；(vii)腹膜和骨盆空隙的內(nèi)層，和包含在那些空隙之內(nèi)的器官的表面；(viii)硬腦膜和腦膜；(ix)實質(zhì)組織中的任何腫瘤，該實質(zhì)組織可以受光敏化燈的影響，例如直接、手術(shù)時、或通過插入針頭的光纖的影響。
本發(fā)明的組合物可以用任何常規(guī)的方式、與一或多種生理學可接受的載體或賦形劑根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)進行配制。如果合適的話，可以將根據(jù)本發(fā)明的化合物或組合物消毒，例如通過γ照射、高壓消毒或加熱消毒，在加入化合物或組合物存在于其中的載體或賦形劑前或后進行消毒，以提供無菌制劑。
組合物可以局部、口服或系統(tǒng)給藥。優(yōu)選為局部組合物，包括凝膠劑，乳膏劑，油膏，噴涂劑，洗劑，油膏劑(salves)，粘貼劑(sticks)，皂，粉末，子宮托(pressaries)，氣霧劑，滴劑，溶液劑和本領(lǐng)域任何其它常規(guī)的藥學形式。
油膏、凝膠劑和乳膏劑可以用含水或油性堿外加合適的稠化和/或膠凝劑進行配制。洗劑可以用含水或油性堿進行配制，并且通常也包含一或多種乳化、分散、懸浮、稠化或著色劑。粉末可以借助于任何合適的粉末堿形成。滴劑和溶液可以用含水或非水堿進行配制，也包含一或多種分散、增溶或懸浮劑。氣溶膠噴霧劑可以借助于合適的推進劑而方便地從加壓包裝中釋放。
或者，組合物可以以適合于口服或腸胃外給藥的形式提供，例如通過皮內(nèi)、皮下注射、腹膜內(nèi)或靜脈注射的形式。由此，可替代的藥學形式包括普通的或糖衣片劑、膠囊、懸浮液和溶液劑，其中包含活性組分以及任選的一或多種惰性的常規(guī)載體和/或稀釋劑，例如玉米淀粉，乳糖，蔗糖，微晶纖維素，硬脂酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，檸檬酸，酒石酸，水，水/乙醇，水/丙三醇，水/山梨糖醇，水/聚乙二醇，丙二醇，十八醇，羧甲基纖維素或脂肪物質(zhì)例如硬脂(hard fat)或其合適的混合物。
組合物可以另外包括潤滑劑，潤濕劑，乳化劑，懸浮劑，防腐劑，甜味劑，調(diào)味劑，吸附增強劑，例如下列的表面滲透劑，等等。可以配制本發(fā)明的組合物，以便在使用本領(lǐng)域眾所周知方法對患者給藥后，提供活性組分的迅速、持續(xù)或延遲釋放。還可以使用增溶和/或穩(wěn)定劑，例如環(huán)糊精(CD)α、β、γ和HP-β環(huán)糊精。組合物可以是任何合適的劑型，例如乳狀液或微脂粒、niosomes、微球體、納米顆粒等等形式。然后可以將本發(fā)明的化合物吸收、并入或結(jié)合到這些形式中。
組合物中的本發(fā)明化合物的濃度，取決于化合物、組合物的性質(zhì)，給藥方式，待治療的病情和患者，并且可以根據(jù)選擇進行改變或調(diào)節(jié)。然而，通常合適的濃度范圍是0.01到50％，例如0.05到20％，例如1-10％(w/w)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)0.1到50％的治療施用濃度范圍是合適的，例如0.2到30％(w/w)。當化合物是高度親脂性的時，可以使用更低的劑量，例如0.01到10％的濃度范圍，例如0.02到1％(w/w)。
可以通過本領(lǐng)域已知的技術(shù)，實現(xiàn)局部給藥至難達到的位點，例如通過利用導(dǎo)管或其它合適的給藥系統(tǒng)。
給藥至表面之后，將所治療部位暴露于光線中，以實現(xiàn)光化學治療的效果。在給藥之后的期間(在此期間進行曝光)，取決于組合物的性質(zhì)、待治療的病情和給藥的形式。通常可以約為0.5至48小時，例如1至10小時。
通常以40至200焦耳/cm2的劑量水平施加照射，例如100焦耳/cm2。
可以選擇用于照射的光波長，以實現(xiàn)有效的光化學治療效果。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)用白光照射是有效的，尤其是具有300-800nm波長范圍的光線，例如500-700nm的范圍。尤其重要的是包括波長630和690nm。
由此本發(fā)明的進一步方面提供了光化學治療身體外或內(nèi)表面的病癥或異常的方法，包括對感染表面給藥上文所定義的酸加成鹽或組合物，并且將所述表面暴露于光線(例如白光)中，優(yōu)選波長范圍300-800nm的光線(例如波長范圍380-440nm的藍光)?；蛘?，可以使用波長范圍500-700nm的光線。
用于照射身體不同領(lǐng)域的方法，例如利用燈或激光，在本領(lǐng)域為大家所熟知(見例如Van den Bergh，Chemistry in Britain，May 1986p.430-439)。對于難達到的區(qū)域，可以使用光纖方便地實現(xiàn)。
可以將本發(fā)明的化合物用與其它光敏劑例如Photofrin、或與其它可以增加光化學治療效果的活性組分一起進行配制和/或給藥。例如，為了增加有效光敏劑原卟啉IX(Pp)的積聚，可以有利地包括螯合劑；利用螯合劑而產(chǎn)生的鐵的螯合作用，可以防止其結(jié)合到Pp中，在亞鐵螯合成酶的作用下形成血紅素，由此引起Pp的累積作用。用這種方法，增加了光敏效果。
氨基多羧酸螯合劑尤其適合用于這方面，包括文獻中描述的用于金屬解毒或在核磁共振機造影劑中用于順磁性金屬離子螯合作用的任何螯合劑。具體提及的可以由EDTA、CDTA(環(huán)己烷二胺四乙酸)、DTPA和DOTA和其眾所周知的衍生物/類似物組成。EDTA是優(yōu)選的。為了實現(xiàn)鐵-螯合效應(yīng)，還可以使用去鐵敏(desferrioxamine)及其它鐵載體(siderophore)，例如與氨基多羧酸螯合劑例如EDTA同時使用?？梢砸?.05至20％，例如0.1至10％(w/w)的濃度方便地使用螯合劑。
如WO95/07077所述，還發(fā)現(xiàn)表面滲透助劑且特別是二烷基亞砜例如二甲基亞砜(DMSO)，可以在增加光化學治療效果方面具有有益的效果。用于本發(fā)明的表面滲透助劑可以是描述在藥學文獻中的任何皮膚-滲入幫助藥劑，例如螯合劑(例如EDTA)，表面活性劑(例如十二烷基硫酸鈉)，非表面活性劑，膽鹽(例如脫氧膽酸鈉)和脂肪酸(例如油酸)。合適的表面滲入幫助藥劑的例子包括HPE-101(得自于Hisamitsu)，DMSO及其它二烷基亞砜，尤其是正癸基甲基-亞砜(NDMS)，二甲基磺胺醋酰，二甲基甲酰胺(DMFA)，二甲基乙酰胺，乙二醇，各種的吡咯烷酮衍生物(Woodford等人J.Toxicol.Cut.& Ocular Toxicology，1986，5167-177)，和Azone(Stoughton等人Drug Dpv.Ind.Pharm.1983，9725-744)，或其混合物。
然而DMSO是優(yōu)選的，這是由于其抗組胺和抗炎藥活性和其對于酶ALA-合成酶和ALA-脫氫酶(分別形成并將ALA縮合為膽色素原的酶)的刺激效應(yīng)，由此增加了活性形式的形成，Pp。
可以以0.2至50％(w/w)例如大約10％(w/w)的濃度范圍方便地提供表面滲透劑。
可以另外配制本發(fā)明的組合物，和/或與其它藥劑一起給藥，以提高PDT的功效。此外，當治療腫瘤時，可以將已經(jīng)發(fā)現(xiàn)對用于治療腫瘤(O’Reilly等人，Nature Medicine，2，p689-692，1996；Yamamoto等人，AnticancerResearch，14，p1-4，1994；和Brooks等人，J.Clin.Invest.，96，p1815-1822，1995)的血管生成抑制劑(抗生成血管藥物)與本發(fā)明的組合物在PDT中一起使用，以進一步破壞腫瘤的血管系統(tǒng)?？梢允褂玫难苌梢种苿┌═NP-470(AGM-1470，一種稱為煙曲霉素的真菌分泌物的合成類似物；Takeda Chemical Industries Ltd.，Osaka，Japan)，血管抑素(Surgical ResearchLab.at Children′s Hospital Medical Center of Harvard Medical School)和整聯(lián)蛋白αvβ3拮抗劑(例如單克隆抗體至整聯(lián)蛋白αvβ3，The Scripps ResearchInstitute，LaJolla，CA)。
或者，或另外，可以使用免疫療法藥劑(例如抗體或效應(yīng)子例如巨噬細胞活化因子)或化療藥劑，以提高根據(jù)本發(fā)明的PDT。給藥這些輔助藥劑，應(yīng)該根據(jù)使用這些藥劑的已知方法、依據(jù)途徑、濃度和制劑來進行。根據(jù)它們的功能，可以在PDT以前、之后或期間給藥這些輔助藥劑。例如，血管生成抑制劑可以在PDT之后5至10天加入，以防止腫瘤再生。
其它抗癌癥藥劑可以類似地用于與本發(fā)明組合物的組合中，既可以作為制劑的一部分，也可以作為同時、單獨或順序給藥的獨立治療。
當局部或系統(tǒng)地施加時，還發(fā)現(xiàn)葡萄糖可以促進PDT。當打算局部給藥時，制劑例如乳膏劑可以方便地包含0.01％至10％葡萄糖(w/w)。
根據(jù)所治療的病情和組合物的性質(zhì)，用于本發(fā)明的化合物可以與這種其它任選的藥劑共同給藥，例如在單一組合物中，或它們可以順序或單獨給藥。實際上，在很多情況下，特別有益的光化學治療效果可以在單獨的步驟中、在給藥本發(fā)明化合物之前，通過用表面滲透輔助劑(surface-penetrating assisting agent)進行預(yù)處理來獲得。此外，在一些情況下，用表面滲透輔助劑預(yù)處理、而后與表面滲透輔助劑同時給藥光化學治療藥劑可以是有益的。當表面滲透輔助劑用于預(yù)處理時，其可以以高濃度例如至多100％(w/w)使用。如果使用這種預(yù)處理步驟，在預(yù)處理之后至多幾個小時，例如在預(yù)處理之后5-60分鐘，可以隨后給藥光化學治療藥劑。
從進一步方面考慮，本發(fā)明由此提供了一種產(chǎn)品，其包括本發(fā)明的酸加成鹽、以及至少一種表面滲透輔助劑和任選一或多種螯合劑，在治療對光化學療法敏感的身體外或內(nèi)表面的病癥或異常中，作為同時、單獨或連續(xù)使用的組合制劑。
換個角度看，本發(fā)明的這方面還提供了一種試劑盒，該試劑盒用于光化學治療身體的外或內(nèi)表面的病癥或異常，包括a)包含本發(fā)明酸加成鹽的第一容器，b)包含至少一種表面滲透輔助劑的第二容器；和任選地c)包含在所述第一容器之內(nèi)或在第三容器之內(nèi)的一或多種螯合劑。
應(yīng)理解，使用上文描述化合物的治療方法，不可避免地包括胞內(nèi)卟啉的供應(yīng)，胞內(nèi)卟啉在所治療的病癥或異常的位點發(fā)熒光。雖然可以使用這種熒光的強度來排除異常的細胞，可以使用局部化熒光來顯現(xiàn)異常或病癥的規(guī)模、程度和狀況?？梢杂盟{光(例如波長范圍350-440nm的光線)激發(fā)來產(chǎn)生熒光，并且在波長范圍550-750nm處測量。
然后可以將由此在所探查位點確定或確認的異?；虿“Y，通過可供選擇的治療技術(shù)例如外科或化學處理來治療，或利用本發(fā)明的治療方法、通過熒光的繼續(xù)形成來治療，或通過在合適的位點進一步應(yīng)用本發(fā)明的化合物來治療。應(yīng)理解，診斷技術(shù)可以比治療用途需要更低水平的顯色熒光。然而，通常0.2至30％例如1-5％(w/w)的濃度范圍是合適的。在關(guān)于治療用途以前，已經(jīng)考慮了給藥的位點、方法和方式，并且還適用于這里描述的診斷用途。
本發(fā)明的化合物還可以用于體外診斷技術(shù)，例如用于包含在體液中的細胞的檢查。與異常組織相關(guān)的較高水平熒光可以方便地指示異?；虿“Y。這種方法具有高靈敏度，并且可以用于異常或病癥的早期檢測，通過尿或唾液樣品中的上皮細胞的檢查來分別檢查膀胱或肺惡性腫瘤。除了尿和唾液之外，可以用于診斷的其它有效的體液包括血液、精液、淚、脊髓液等等。還可以評價組織樣品或制品，例如活檢組織或骨髓樣品。由此本發(fā)明提供了本發(fā)明化合物用于根據(jù)上述光化學療法的診斷的用途、和進行所述診斷的產(chǎn)品和試劑盒。
本發(fā)明的進一步方面涉及通過化驗患者的體液或組織樣品來體外診斷異?；虿“Y的方法，所述方法至少包括下面的步驟i)將所述體液或組織與根據(jù)本發(fā)明的酸加成鹽混合，ii)將所述混合物暴露于光線中，iii)確定熒光水平，和iv)將熒光水平與對照水平進行比較。
在下面非限制性的實施例中參考附圖更詳細地描述本發(fā)明，其中圖1顯示局部施用乳膏劑之后的皮膚熒光(skin fluorescene)，乳膏劑包含5-氨基-4-氧代戊酸的不同鹽，狹條表示標準偏差；圖2顯示局部施用乳膏劑之后的皮膚熒光，乳膏劑含有5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯的鹽酸鹽、甲苯磺酸鹽和甲磺酸鹽，狹條表示標準偏差；圖3顯示局部施用乳膏劑之后的皮膚熒光，乳膏劑含有5-氨基-4-氧代戊酸甲基酯的鹽酸鹽和甲磺酸鹽，狹條表示標準偏差；圖4顯示局部施用乳膏劑之后的皮膚熒光，乳膏劑含有5-氨基-4-氧代戊酸甲基酯的鹽酸鹽、甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽，狹條表示標準偏差；圖5顯示局部施用乳膏劑之后的皮膚熒光，乳膏劑含有5-氨基-4-氧代戊酸的鹽酸鹽和氫溴酸鹽，狹條表示標準偏差；圖6顯示局部施用乳膏劑之后的皮膚熒光，乳膏劑含有芐基5-氨基-4-氧代戊酸的鹽酸鹽、氫溴酸鹽和硝酸鹽，狹條表示標準偏差；
圖7顯示局部施用乳膏劑之后的皮膚熒光，乳膏劑含有芐基5-氨基-4-氧代戊酸的鹽酸鹽、硫酸鹽和磷酸鹽，狹條表示標準偏差；圖8顯示甲基5-氨基-4-氧代戊酸的鹽酸鹽、甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽的吸濕性；圖9顯示5-氨基-4-氧代戊酸的鹽酸鹽和甲苯磺酸鹽的吸濕性；和圖10顯示己基5-氨基-4-氧代戊酸的鹽酸鹽、甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽的吸濕性。
實施例15-氨基-4-氧代戊酸己基酯甲苯磺酸鹽的制備將碳酸氫鈉(0.42克；5.0mmol)加入到5-氨基-4-氧代戊酸己基酯鹽酸鹽(0.5克；2.0mmol)的水(10毫升)和二氯甲烷(5毫升)的溶液中。將混合物徹底搖動并分離。將有機層吸出并加至對甲苯磺酸(0.38克；2.0mmol)中。用二氯甲烷(1×1毫升)提取含水部分。將合并的有機溶液蒸發(fā)，剩下黃色油，其在冷藏箱中過夜貯存可以固化。將殘余物在170×25mm硅膠60柱上通過快速色譜法純化，用乙腈(150ml)、5％甲醇/乙腈(methanol in acetonitrile)(500ml)和10％甲醇/乙腈(250ml)洗脫，收集15×50毫升餾份。將含有產(chǎn)品的餾份蒸發(fā)，剩下0.31克(40％)殘余物。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ0.87(3H，t，J＝7Hz)，1.26(6H，br s)，1.56(2H，m)，2.29(3H，s)，2.54(2H，t，J＝7Hz)，2.79(2H，t，J＝6Hz)，4.0(4H，m)，7.12(2H，d，J＝8Hz)，7.48(2H，d，J＝8Hz)，8.04(3H，br s).
實施例25-氨基-4-氧代戊酸己基酯甲磺酸鹽的制備(離子交換法)使5-氨基-4-氧代戊酸己基酯鹽酸鹽(1.0克；4.0mmol)的水(5毫升)和96％乙醇(5毫升)溶液通過AmberlystA-26(OH)(2.1克；8.8meq)柱到甲磺酸(0.38克；4.0mmol)的水溶液(3毫升)中。用50％乙醇水溶液(10ml)洗滌樹脂柱，并將合并的洗脫液蒸干。干燥過夜之后，將殘余物在170×25mm硅膠60柱上通過快速色譜法純化，用乙腈(200ml)、5％甲醇/乙腈(500ml)、7.5％甲醇/乙腈(500ml)和10％甲醇/乙腈(750ml)洗脫，收集27×50毫升餾份。將含有產(chǎn)物的餾份蒸發(fā)，得到0.77克(62％)殘余物，熔點132-134℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ0.87(3H，t，J＝6Hz)，1.27(6H，br s)，1.56(2H，m，J＝6Hz)，2.35(3H，s)，2.55(2H，t，J＝6Hz)，2.80(2H，t，J＝6Hz)，4.00(4H，m)，8.08(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ13.8，21.8，24.9，27.0，30.8，34.1，39.5，46.6，64.0，171.8，202.4.
實施例35-氨基-4-氧代戊酸芐基酯甲磺酸鹽使用離子交換法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽和甲磺酸制備，熔點110-115℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.36(3H，s)，2.63(2H，t，J＝6Hz)，2.84(2H，t，J＝6Hz)，3.99(2H，s)，5.10(2H，s)，7.37(5H，m)，8.10(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ27.0，34.1，39.5，46.6，65.5，127.6，127.8，128.2，135.9，171.7，202.4.
實施例45-氨基-4-氧代戊酸芐基酯甲苯磺酸鹽使用離子交換法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽和對甲苯磺酸制備，熔點120-125℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.29(3H，s)，2.62(2H，t，J＝6Hz)，2.83(2H，t，J＝6Hz)，3.99(2H，s)，5.10(2H，s)，7.12(2H，d，J＝8Hz)，7.37(5H，s)，7.50(2H，d，J＝8Hz)，8.08(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ20.7，27.0，34.1，46.6，65.5，127.6，127.8，127.9，128.2，135.9，137.6，145.2，171.7，202.4.
實施例55-氨基-4-氧代戊酸甲磺酸鹽的制備(銀鹽法)在用鋁箔纏繞的塞好的錐形依氏燒瓶中，將5-氨基-4-氧代戊酸鹽酸鹽(1.0克；6.0mmol)的水(5毫升)的溶液加入到甲磺酸銀(1.22克；6.0mmol)的攪拌水溶液(10毫升)中。將混合物攪拌過夜并轉(zhuǎn)入離心管中。將混合物離心并傾析。將殘余物用水(2×1毫升)洗滌。離心之后，將合并的水溶液冷凍干燥過夜，得到5-氨基-4-氧代戊酸甲磺酸鹽(1.3克；96％產(chǎn)率)，熔點153.5-154.5℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.39(3H，s)，2.50(2H，t，J＝6Hz)，2.72(2H，t，J＝4Hz)，3.97(2H，s)，8.08(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ27.2，34.2，39.5，46.6，173.2，202.6.
實施例6-5-氨基-4-氧代戊酸甲苯磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸鹽酸鹽和對甲苯磺酸銀制備，熔點185-186℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.29(3H，s)，2.49(2H，t，J＝6Hz)，2.74(2H，t，J＝6Hz)，3.97(2H，s)，7.12(2H，d，J＝7Hz)，7.48(2H，d，J＝8Hz)，8.03(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ20.7，27.1，34.2，46.6，125.2，127.8，138，145，173.1，202.6.
實施例75-氨基-4-氧代戊酸甲酯甲磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸甲酯鹽酸鹽和甲磺酸銀制備，熔點135-137℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.29(3H，s)，2.54(2H，t，J＝8Hz)，2.79(2H，t，J＝6Hz)，3.59 3H，s)，3.98(2H，s)，7.13(2H，d，J＝8Hz)，7.50(2H，d，J＝8Hz)，8.07(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ20.7，26.8，34.1，46.6，51.4，125.3，127.9，137.7，145.1，172.2，202.4.
實施例85-氨基-4-氧代戊酸甲酯甲苯磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸甲酯鹽酸鹽和對甲苯磺酸銀制備，熔點138-140℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.29(3H，s)，2.54(2H，t，J＝8Hz)，2.79(2H，t，J＝6Hz)，3.59 3H，s)，3.98(2H，s)，7.13(2H，d，J＝8Hz)，7.50(2H，d，J＝8Hz)，8.07(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ20.7，26.8，34.1，46.6，51.4，125.3，127.9，137.7，145.1，172.2，202.4.
實施例95-氨基-4-氧代戊酸己基酯甲磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸己基酯鹽酸鹽和甲磺酸銀制備，熔點125℃和134-136℃(不同的晶形)。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ0.87(3H，t，J＝6Hz)，1.27(6H，br s)，1.56(2H，m，J＝6Hz)，2.35(3H，s)，2.55(2H，t，J＝6Hz)，2.80(2H，t，J＝6Hz)，4.00(4H，m)，8.08(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ13.8，21.8，24.9，27.0，30.8，34.1，39.5，46.6，64.0，171.8，202.4.
實施例105-氨基-4-氧代戊酸己基酯甲苯磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸己基酯鹽酸鹽和對甲苯磺酸銀制備，熔點116-118℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ0.86(3H，t，J＝6Hz)，1.26(6H，br s)，1.53(2H，m)，2.29(3H，s)，2.53(2H，t，J＝6Hz)，2.78(2H，t，J＝6Hz)，4.0(4H，m)，7.12(2H，d，J＝8Hz)，7.50(2H，d，J＝8Hz)，8.06(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ13.8，20.7，21.9，24.9，27.0，28.0，30.8，34.1，46.6，64.0，125.3，127.9，137.6，145.2，171.8，202.4.
實施例112-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲磺酸鹽使用銀鹽法，由2-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯鹽酸鹽和甲磺酸銀制備，熔點128-133℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ0.88(6H，m)，1.0-1.4(4H，m)，1.74(1H，m，J＝6Hz)，2.35(3H，s)，2.56(2H，t，J＝6Hz)，2.81(2H，t，J＝8Hz)，3.75-3.96(2H，m)，3.97(2H，s)，8.12(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ14.0，16.5，19.3，23.6，27.0，31.6，34.1，34.9，39.5，46.6，68.6，171.8，202.4.
實施例122-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲苯磺酸鹽使用銀鹽法，由2-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯鹽酸鹽和對甲苯磺酸銀制備，熔點125-127℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ0.88(6H，t，J＝6Hz)，1.0-1.4(4H，m)，1.73(1H，m)，2.29(3H，s)，2.56(2H，t，J＝6Hz)，2.80(2H，t，J＝6Hz)，3.75-4.0(2H，m)，3.98(2H，s)，7.12(2H，d，J＝8Hz)，7.49(2H，d，J＝8Hz)，8.03(3H，brs).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ14.0，16.5，19.3，20.7，23.6，26.9，31.6，34.1，34.8，46.6，68.6，125.3，127.8，137.4，145.2，171.8，202.4.
實施例134-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲磺酸鹽使用銀鹽法，由4-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯鹽酸鹽和甲磺酸銀制備，熔點75-85℃和110-115℃(不同的晶形)。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ0.86(6H，d，J＝6Hz)，1.20(2H，m)，1.53(2H，m，2.39(3H，s)，2.55(2H，t，J＝6Hz)，2.80(2H，t，J＝8Hz)，3.90-4.04(4H，m)，8.18(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ22.3，25.9，27.0，27.0，34.1，34.3，39.5，46.6，64.2，171.8，202.4.
實施例144-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲苯磺酸鹽使用銀鹽法，由4-甲基-1-戊基5-氨基-4-氧代戊酸酯鹽酸鹽和對-甲苯磺酸銀制備，熔點96-100℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ0.86(6H，t，J＝6Hz)，1.16(2H，m)，1.53(1H，m)，2.29(3H，s)，2.57(2H，t，J＝6Hz)，2.78(2H，t，J＝6Hz)，3.95-4.05(4H，m)，7.13(2H，d，J＝8Hz)，7.51(2H，d，J＝8Hz)，8.06(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ20.7，22.3，25.9，27.0，27.0，34.1，34.3，46.6，64.2，125.3，127.9，137.6，145.1，171.8，202.4.
實施例152-(2-乙氧基乙氧基)乙基5-氨基-4-氧代戊酸酯苯磺酸鹽使用銀鹽法，由2-(2-乙氧基乙氧基)乙基5-氨基-4-氧代戊酸酯鹽酸鹽和苯磺酸銀制備，熔點52-56℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ1.10(3H，t，J＝7Hz)，2.57(2H，t，J＝6Hz)，2.79(2H，t，J＝6Hz)，3.35-3.65(8H，m)，3.98(2H，s)，4.12(2H，t，J＝5Hz)，7.25-7.36(3H，m)，7.55-7.65(2H，m)，8.04(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ15.0，27.0，34.1，46.6，63.4，65.5，68.0，69.0，69.7，125.3，127.4，128.3，147.8，171.8，202.4.
實施例165-氨基-4-氧代戊酸芐基酯甲磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽和甲磺酸銀制備，熔點132-135℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.36(3H，s)，2.63(2H，t，J＝6Hz)，2.84(2H，t，J＝6Hz)，3.99(2H，s)，5.10(2H，s)，7.37(5H，m)，8.10(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ27.0，34.1，39.5，46.6，65.5，127.6，127.8，128.2，135.9，171.7，202.4.
實施例175-氨基-4-氧代戊酸芐基酯2-羥基乙磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽和2-羥基乙磺酸銀制備，熔點76-82℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.63(2H，t，J＝6Hz)，2.67(2H，t，J＝6Hz)，2.84(2H，t，J＝6Hz)，3.65(2H，t，J＝7Hz)，3.98(2H，s)，5.10(2H，s)，7.37(5H，m)，8.13(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ27.0，34.1，46.6，53.5，57.5，65.5，127.6，127.8，128.2，135.9，171.7，202.4.
實施例185-氨基-4-氧代戊酸芐基酯(1S)-10-樟腦磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽和(1S)-10-樟腦磺酸銀制備，粘性油狀物。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ0.75(3H，s)，1.04(3H，s)，1.31(2H，m)，1.75-1.97(3H，m)，2.24(1H，dt，J＝4and18Hz)，2.40(1H，d，J＝16Hz)，2.63(2H，t，J＝6Hz)，2.84(2H，t，J＝6Hz)，2.90(1H，d，J＝16Hz)，3.99(2H，s)，5.10(2H，s)，7.36(5H，s)，8.08(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ19.4，20.0，24.0，26.3，27.0，42.0，42.1，42.1，46.5，46.6，46.9，58.1，65.5，127.6，127.8，128.2，135.9，171.7，202.4，216.0.
實施例195-氨基-4-氧代戊酸芐基酯苯磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽和苯磺酸銀制備，熔點100-103℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.62(2H，t，J＝6Hz)，2.83(2H，t，J＝6Hz)，3.99(2H，s)，5.10(2H，s)，7.30-7.40，7.60-7.70(10H，m)，8.08(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ27.0，34.1，46.6，65.5，122.9，125.3，127.5，127.6，127.8，128.2，128.2，135.9，147.8，171.7，202.4.
實施例205-氨基-4-氧代戊酸芐基酯甲苯磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽和對-甲苯磺酸銀制備，熔點146-148℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.29(3H，s)，2.62(2H，t，J＝6Hz)，2.83(2H，t，J＝6Hz)，3.99(2H，s)，5.10(2H，s)，7.12(2H，d，J＝8Hz)，7.37(5H，s)，7.50(2H，d，J＝8Hz)，8.08(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ20.7，27.0，34.1，46.6，65.5，127.6，127.8，127.9，128.2，135.9，137.6，145.2，171.7，202.4.
實施例215-氨基-4-氧代戊酸芐基酯2-萘磺酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽和2-萘磺酸銀制備，熔點137-141℃(dec)。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.62(2H，t，J＝6Hz)，2.84(2H，t，J＝6Hz)，4.00(2H，s)，5.10(2H，s)，7.12(2H，d，J＝8Hz)，7.36(5H，s)，7.49(2H，m)，7.74(1H，dd，J＝2 and 8Hz)，7.86-8.00(4H，m)，8.18(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ27.0，34.1，46.6，65.5，123.7，123.9，126.1，126.3，127.2，127.6，127.8，128.2，131.9，132.6，134.7，135.9，137.6，145.1，171.7，202.4.
實施例224-甲基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲磺酸鹽使用銀鹽法，由4-甲基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯鹽酸鹽和甲磺酸銀制備，熔點120-124℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.30(3H，s)，2.36(3H，s)，2.61(2H，t，J＝6Hz)，2.83(3H，m)，3.98(2H，s)，5.05(2H，s)，7.22(4H，m)，8.14(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ20.6，23.6，27.0，34.1，39.5，46.6，65.4，127.8，128.8，132.8，137.1，171.7，202.4.
實施例234-甲基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲苯磺酸鹽使用銀鹽法，由4-甲基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯鹽酸鹽和對-甲苯磺酸銀制備，熔點115-119℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.29(3H，s)，2.30(3H，s)，2.59(2H，t，J＝6Hz)，2.82(3H，m)，3.97(2H，s)，5.04(2H，s)，7.19(6H，m，J＝8Hz)，7.50(2H，d，J＝8Hz)，8.18(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ20.7，27.0，34.1，46.5，65.4，125.3，127.8，127.9，128.8，132.8，137.1，137.6，145.2，171.7，202.4.
實施例244-異丙基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲磺酸鹽使用銀鹽法，由4-異丙基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯鹽酸鹽和甲磺酸銀制備，熔點113-115℃和125-127℃(不同的晶形)。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ1.20(6H，d，J＝6Hz)，2.36(3H，s)，2.62(2H，t，J＝6Hz)，2.85(3H，m)，3.99(2H，s)，5.06(2H，s)，7.27(4H，m)，8.15(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ23.7，27.0，33.1，34.1，39.5，46.6，65.4，126.1，127.9，133.2，148.1，171.7，202.4.
實施例254-異丙基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯甲苯磺酸鹽使用銀鹽法，由4-異丙基芐基5-氨基-4-氧代戊酸酯鹽酸鹽和對-甲苯磺酸銀制備，熔點121-123℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ1.20(6H，d，J＝6Hz)，2.29(3H，s)，2.60(2H，t，J＝6Hz)，2.82(2H，t，J＝6Hz)，2.88(1H，m)，3.98(2H，s)，5.05(2H，s)，7.12(2H，d，J＝8Hz)，7.26(4H，d，J＝2Hz)，7.50(2H，d，J＝8Hz)，8.10(3H，brs).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ20.7，2.7，27.0，33.1，34.1，46.6，65.4，125.3，126.1，127.8，133.2，137.5，145.5，148.1，171.7，202.4.
實施例265-氨基-4-氧代戊酸氫溴酸鹽將5-苯二甲酰亞氨基-4-氧代戊酸甲酯(4.0克，14.5mmol)[Z.Naturforsch.41B，1593-94(1986)]和48％氫溴酸(40毫升)的攪拌混合物回流7小時，然后冷卻至室溫，并在冰箱中存儲過夜。過濾之后，用水洗滌殘余物，并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上蒸干合并的濾液，用乙醚(2×25ml)滴定。將殘余物過濾，并在干燥槍(drying pistol)中、在30℃和15毫米汞柱下用硅膠干燥。將粗產(chǎn)品溶于甲醇(10毫升)和異丙醇(30毫升)中。加入乙醚(150毫升)，并使混合物靜置2小時。濾出沉淀并如前所述進行干燥，得到2.5克(81％)，熔點137-140℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.49(2H，t，J＝6Hz)，2.76(2H，t，J＝6Hz)，3.99(2H，s)，8.13(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d，)δ27.1，34.3，46.6，173.1，202.5.
實施例275-氨基-4-氧代戊酸芐基酯氫溴酸鹽將5-氨基-4-氧代戊酸氫溴酸鹽(1.60克，7.5mmol)、苯甲醇(15毫升)和48％氫溴酸(8滴)的攪拌混合物加熱至80℃(浴溫)，保持2天。將混合物冷卻至室溫，并在0.12毫米汞柱下使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去過量苯甲醇。用乙醚(2×50ml)滴定殘余物，在160×55mm硅膠60柱上通過快速色譜法純化殘余物，用乙腈、5％甲醇/乙腈和10％甲醇/乙腈順序洗脫。將含有產(chǎn)物的餾份合并，蒸發(fā)。用乙醚(5×15ml)滴定殘余物，過濾，在30℃和15毫米汞柱下干燥，得到0.97克(43％)褐色粉末，熔點62-67℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.63(2H，t，J＝6Hz)，2.86(2H，t，J＝6Hz)，4.02(2H，s)，5.10(2H，s)，7.37(5H，s)，8.16(3H，br s).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ27.0，34.2，39.5，46.5，65.5，127.6，127.8，128.2，135.9，171.7，202.3.
實施例285-氨基-4-氧代戊酸芐基酯硝酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽和硝酸銀制備，熔點82-86℃。
1H NMR(200MHz；DMSO-d6)δ2.63(2H，t，J＝6Hz)，2.84(2H，t，J＝6Hz)，4.00(2H，s)，5.10(2H，s)，7.37(5H，s)，8.10(3H，brs).
13C NMR(50MHz；DMSO-d6)δ27.0，34.1，39.5，46.6，65.5，127.6，127.8，128.2，135.9，171.7，202.4.
實施例295-氨基-4-氧代戊酸芐基酯硫酸鹽(2∶1)
使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽(0.52克；2.0mmol)和Ag2SO4(0.31克；1.0mmol)水溶液(10毫升)制備。
用硅膠干燥之后的產(chǎn)率是0.51克(94％)。熔點106-109℃。
元素分析(通過Ilse Beetz Mikroanalytisches Laboratorium，96301Kronach，Germany進行)％C計算值53.32％測定值53.37％％H計算值5.97％測定值5.97％％S計算值5.93％測定值5.78％元素分析表明產(chǎn)物以硫酸鹽(2∶1)形態(tài)存在，即(5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯)2SO4。
實施例305-氨基-4-氧代戊酸芐基酯磷酸鹽使用銀鹽法，由5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯鹽酸鹽(0.52克；2.0mmol)和Ag3PO4(0.28克；0.67mmol)水溶液(10毫升)制備。
用硅膠干燥之后產(chǎn)率是0.36克。熔點93-95℃。
元素分析(通過Ilse Beetz Mikroanalytisches Laboratorium，96301Kronach，Germany進行)PO43-HPO42-％C計算值56.76％計算值53.33％ 測定值53.62％％H計算值6.35％ 計算值6.15％測定值6.08％％P計算值4.07％ 計算值5.73％測定值3.90％元素分析表示，產(chǎn)物不是所希望的磷酸鹽(3∶1)；與C和H最接近相符的是單磷酸氫鹽(5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯)2HPO4。相對低的P值可能由不完全反應(yīng)所引起，例如可能還存在一些氯。
實施例31制劑5-氨基-4-氧代戊酸或其酯的不同鹽是在研究皮膚的Unguentum Merck中配制的。所有的乳膏劑，每10克乳膏劑含有0.5mmol的物質(zhì)，以保證相同摩爾濃度(假定10克乳膏劑等于10毫升，近似摩爾濃度是0.5mmol/10ml或50mM)。在下面表1中列出了所制備的制劑。
表1-皮膚制劑
*除用(a)標明的物質(zhì)是通過離子交換法制備的以外，所有的鹽是通過銀鹽方法制備的。
**對于所有的制劑，每10克乳膏劑中含有0.5mmol鹽。
實施例32生物活性-5-氨基-4-氧代戊酸的鹽方法雌性Balb/c無胸腺裸鼠，重量大約22克，從the Department ofLaboratory Animals，The Norwegian Radium Hospital，Oslo，Norway處獲得，用于研究。每個組由三個小鼠組成。
每個小鼠接受0.05-0.1克的制劑(見實施例31)，局部施加在身體肋部的右邊，均勻分布并用繃帶覆蓋(Opsite Flexigrid；Smith and Nephew MedicalLtd.，Hull，England)。
所使用的纖維點測量裝置由一束光學纖維組成，該光學纖維連接到可以產(chǎn)生407nm激發(fā)光線的分光熒光計上。將能夠滲入組織中0.1-0.5mm的激發(fā)光線通過一半纖維導(dǎo)引至小鼠皮膚。收集所得到的輻射熒光光譜(550-750)nm，并通過剩余的纖維導(dǎo)引到用于定量分析的光電倍增器中。在給藥之后的0、2、4、6、8、10、12和24小時測定源于皮膚的熒光光譜，并隨時間繪圖。
結(jié)果從圖1可以看到，甲磺酸鹽比HCl鹽產(chǎn)生稍微高的最大皮膚熒光。
實施例33生物活性-5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯的鹽制劑的制備描述于實施例31中。使用與實施例32相同的實驗系統(tǒng)，結(jié)果示于圖2中。
從圖2可以看到，甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽比鹽酸鹽產(chǎn)生高25-30％的最大皮膚熒光。甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽的初始熒光累積作用和最大熒光都比鹽酸鹽的出現(xiàn)更快。
實施例34生物活性-5-氨基-4-氧代戊酸甲酯的鹽制劑的制備描述于實施例31中。使用與實施例32相同的實驗系統(tǒng)，結(jié)果示于圖3中。
從圖3可以看到，與鹽酸鹽相比較，5-氨基乙酰丙酸甲基酯的甲磺酸鹽在皮膚熒光方面產(chǎn)生大量的增加。
實施例35生物活性-5-氨基-4-氧代戊酸己基酯的鹽制劑的制備描述于實施例31中。使用與實施例32相同的實驗系統(tǒng)，結(jié)果示于圖4中。
從圖4可以看到，與鹽酸鹽相比較，5-氨基乙酰丙酸己基酯的甲苯磺酸鹽產(chǎn)生與鹽酸鹽相同的皮膚熒光。
實施例36制劑5-氨基-4-氧代戊酸或其芐基酯的不同鹽是在研究皮膚的UnguentumMerck中配制的。所有的乳膏制劑，每10克乳膏劑中含有0.5mmol物質(zhì)，以確保相同的摩爾濃度。在2∶1鹽的情況下進行校正，以使5-氨基-4-氧代戊酸或相應(yīng)酯的摩爾濃度相當于0.5mmol/10g乳膏劑。假定10克乳膏劑等于10毫升，近似摩爾濃度是0.5mmol/10ml＝50mM。在下面表2中列出了所制備的制劑。
表2-皮膚制劑
*假定1/2摩爾硫酸鹽或磷酸氫鹽/摩爾5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯。
實施例37生物活性-5-氨基-4-氧代戊酸的鹽制劑的制備描述于實施例36中。使用與實施例32相同的實驗系統(tǒng)，除了在636nm而非550-750nm處測量皮膚熒光之外。結(jié)果見圖5。
實施例38生物活性-5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯的鹽制劑的制備描述于實施例36中。使用與實施例37相同的實驗系統(tǒng)。結(jié)果見圖6和7。
從圖6可以看到，與鹽酸鹽相比較，5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯的硝酸鹽在引起皮膚熒光方面更有效。
從圖7可以看到，與相應(yīng)的鹽酸鹽相比較，5-氨基-4-氧代戊酸芐基酯的硫酸鹽和磷酸鹽使較差的皮膚熒光誘發(fā)劑。然而，與鹽酸鹽相比，硫酸鹽和磷酸鹽的最大熒光出現(xiàn)較早。
實施例395-氨基-4-氧代戊酸己基酯鹽酸鹽、甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽的吸濕性將5-氨基-4-氧代戊酸己基酯的鹽酸鹽、甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽的樣品(2毫克)在室溫和環(huán)境濕度下保持4天。沒有顯著的變化。
將5-氨基-4-氧代戊酸己基酯的鹽酸鹽、甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽的樣品(2毫克)保持在室溫和100％濕度下。放置過夜之后，鹽酸鹽潮解。兩天之后，甲磺酸鹽潮解，而甲苯磺酸鹽四天之后潮解。
實施例405-氨基-4-氧代戊酸甲酯鹽酸鹽、甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽的吸濕性將5-氨基-4-氧代戊酸甲酯鹽酸鹽、甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽的樣品稱重，并在密室中、在利用飽和硫酸銨溶液形成的75-84％相對濕度下、在室溫(大約25℃)下保存在30ml塑料杯中。然后在不同的時間間隔之后，稱重樣品，以監(jiān)測水的吸收。同時還可以檢測樣品的外觀，以確定潮解的起始。結(jié)果見圖8。
從圖8可以看到，根據(jù)所監(jiān)測的重量，鹽酸鹽和甲磺酸鹽都大量程度的吸水，而且22小時之后出現(xiàn)潮解(通過圖中的星號表示)。相反，在試驗階段，5-氨基-4-氧代戊酸甲酯的甲苯磺酸鹽沒有吸水，并且外觀沒有變化。
實施例415-氨基-4-氧代戊酸鹽酸鹽、甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽的吸濕性將5-氨基-4-氧代戊酸鹽酸鹽和甲苯磺酸鹽的樣品稱重，并在密室中、在利用飽和硫酸銨溶液形成的75-84％相對濕度下、在室溫(大約25℃)下保存在30ml塑料杯中。然后在不同的時間間隔之后，稱重樣品，以監(jiān)測水的吸收。同時還可以檢測樣品的外觀，以確定潮解的起始。結(jié)果見圖9。
從圖9可以看到，根據(jù)所監(jiān)測的重量，5-氨基-4-氧代戊酸的鹽酸鹽大量程度的吸水。22.5小時之后，鹽酸鹽出現(xiàn)起始潮解(通過圖中的星號表示)。相反，在試驗階段，甲苯磺酸鹽沒有吸水，并且外觀沒有變化。
實施例425-氨基-4-氧代戊酸己基酯鹽酸鹽、甲磺酸鹽和甲苯磺酸鹽的吸濕性將5-氨基-4-氧代戊酸己基酯鹽酸鹽和甲苯磺酸鹽的樣品稱重，并在密室中、在利用飽和硫酸銨溶液形成的75-84％相對濕度下、在室溫(大約25℃)下保存在30ml塑料杯中。然后在不同的時間間隔之后，稱重樣品，以監(jiān)測水的吸收。同時還可以檢測樣品的外觀，以確定潮解的起始。結(jié)果示于圖10。
在圖10中可以看到，根據(jù)所監(jiān)測的重量，5-氨基-4-氧代戊酸己基酯鹽酸鹽沒有大量程度的吸水，但僅僅5.0小時之后出現(xiàn)起始潮解(由圖中的星號表示)。甲磺酸鹽吸水至某種程度，但沒有出現(xiàn)潮解。在試驗階段期間，己基5-氨基-4-氧代乙酰丙酸的甲苯磺酸鹽沒有吸水并且外觀沒有變化。
權(quán)利要求
1.5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)或5-ALA衍生物(例如5-ALA酯)與酸的酸加成鹽，所述酸具有大約5或更小的pKa，優(yōu)選大約3或更小，條件是該酸不是鹽酸。
2.權(quán)利要求1中所要求的酸加成鹽，其衍生自式X的化合物R22N-CH2COCH2-CH2CO-OR1(X)其中R1和R2每個獨立地表示氫原子或任選取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀烴基，其可以任選被一個或多個-O-、-NR3-、-S-或-PR3-基團間隔；以及R3是氫原子或C1-6烴基。
3.權(quán)利要求2所要求的酸加成鹽，其中在式X中，R1表示未取代的烴基(例如C1-6烴基)或表示被芳基(例如苯基)取代的烴基(例如C1-2烴基)，和/或每個R2表示氫原子。
4.權(quán)利要求2或權(quán)利要求3所要求的酸加成鹽，其中R1是芐基或取代的芐基。
5.權(quán)利要求2所要求的酸加成鹽，其中所述的式X化合物是5-ALA，5-ALA甲酯，5-ALA己基酯，5-ALA芐基酯，5-ALA2-甲基戊基酯，5-ALA4-甲基戊基酯，5-ALA2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯，5-ALA4-甲基芐基酯或5-ALA4-異丙基芐基酯。
6.權(quán)利要求2所要求的酸加成鹽，其中所述的式X化合物是5-ALA，5-ALA甲酯，5-ALA己基酯或5-ALA芐基酯。
7.權(quán)利要求1至6中任一項所要求的酸加成鹽，其中所述酸是有機酸。
8.權(quán)利要求7的酸加成鹽，其中所述酸是磺酸或磺酸衍生物。
9.權(quán)利要求1自的式I的酸加成鹽 其中R是氫原子或任選取代的烴基(例如C1-20烴基)或芳基(例如至多20個碳原子的芳基，優(yōu)選為任選取代的烴基或芳基；R1和R2每個獨立地表示氫原子或任選取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀烴基，其可以任選被一個或多個-O-、-NR3-、-S-或-PR3-基團間隔；以及R3是氫原子或C1-6烴基。
10.權(quán)利要求9的酸加成鹽，其中R是任選取代的苯基或甲基。
11.權(quán)利要求9或權(quán)利要求10的酸加成鹽，其中在式I中，R1表示未取代的烴基(例如C1-6烴基)或表示被芳基(例如苯基)取代的烴基(例如C1-2烴基)，和/或每個R2表示氫原子。
12.權(quán)利要求9至11中任一項的酸加成鹽，其中R1是芐基或取代的芐基。
13.權(quán)利要求9中的酸加成鹽，其是下列物質(zhì)的磺酸加成鹽5-ALA，5-ALA甲酯，5-ALA己基酯，5-ALA芐基酯，5-ALA2-甲基戊基酯，5-ALA4-甲基戊基酯，5-ALA2-(2-乙氧基乙氧基)乙酯，5-ALA4-甲基芐基酯或5-ALA4-異丙基芐基酯。
14.權(quán)利要求9中的酸加成鹽，其是下列物質(zhì)的磺酸加成鹽5-ALA，5-ALA甲酯，5-ALA己基酯或5-ALA芐基酯。
15.權(quán)利要求13或權(quán)利要求14的酸加成鹽，其中所述酸是萘-1，5-二磺酸，乙烷-1，2-二磺酸，對甲苯磺酸，甲磺酸，十二烷基磺酸，萘-2-磺酸，苯磺酸，2-羥基-乙磺酸，乙磺酸，或(+)-樟腦-10-磺酸。
16.權(quán)利要求1至7中任一項的酸加成鹽，其中所述酸是環(huán)拉酸，硫氰酸，草酸，2，2-二氯乙酸，乙二醇磷酸，L-天冬氨酸，馬來酸，谷氨酸，海藻酸，雙羥萘酸酸，2-氧代-戊二酸，1-羥基-2-萘酸，丙二酸，龍膽酸，水楊酸或酒石酸。
17.權(quán)利要求1至6中任一項的酸加成鹽，其中所述酸是無機酸。
18.權(quán)利要求17的酸加成鹽，其中所述酸是氫溴酸，硫酸，硝酸或磷酸，優(yōu)選硝酸。
19.權(quán)利要求1至6中任一項的酸加成鹽，其中所述酸是磺酸、磺酸衍生物或硝酸。
20.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項的酸加成鹽，其中所述酸是藥學可接受的。
21.用于制備權(quán)利要求1至20中任一項的酸加成鹽的方法，所述方法包括使5-氨基乙酰丙酸或其衍生物(例如ALA酯)與酸反應(yīng)。
22.用于制備權(quán)利要求1至20中任一項的酸加成鹽的方法，所述方法包括使5-氨基乙酰丙酸或其酯化衍生物與烷醇或其酯形成衍生物(例如與烷醇)在酸的存在下反應(yīng)。
23.用于制備權(quán)利要求1至20中任一項的酸加成鹽(例如式I的化合物)的方法，所述方法包括(i)將包含ALA或ALA衍生物的鹽酸鹽(例如式Cl-R22N+H-CH2COCH2CH2CO2R1的化合物，其中R1和R2如權(quán)利要求2所定義)的溶液與堿性陰離子交換樹脂接觸；(ii)任選地除去所述樹脂；和(iii)將得到的溶液與包含酸的溶液混合，所述酸優(yōu)選為磺酸或磺酸衍生物。
24.用于制備權(quán)利要求1至20中任一項的酸加成鹽(例如式I的化合物)的方法，所述方法包括(i)使ALA或ALA衍生物的鹽酸鹽(例如式Cl-R22N+H-CH2COCH2CH2CO2R1的化合物，其中R1和R2如權(quán)利要求2所定義)在AgCl基本上不能溶解的溶劑中與酸的銀鹽反應(yīng)，所述酸優(yōu)選為磺酸或磺酸衍生物；和(ii)任選從得到的鹽中分離AgCl。
25.一種酸加成鹽，其是通過將5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)或5-ALA衍生物(例如5-ALA酯)與pKa為大約5或更小，優(yōu)選大約3或更小的酸接觸(例如反應(yīng))得到的，條件是該酸不是鹽酸。
26.一種酸加成鹽，其是通過權(quán)利要求21至24中任一項的方法得到的。
27.一種藥物組合物，包括權(quán)利要求1至20、25或26中任一項的酸加成鹽，以及至少一種藥學載體或賦形劑。
28.權(quán)利要求1至20、25或26中任一項的酸加成鹽或組合物，作為藥物的用途，例如用于光動力學治療的用途。
29.權(quán)利要求1至20、25或26中任一項的酸加成鹽在制備用于光化學療法的治療劑的用途，優(yōu)選為在制備用于治療對光化學療法敏感的身體外或內(nèi)表面的病癥或異常的治療劑的用途。
30.光化學治療身體外或內(nèi)表面的病癥或異常的方法，所述方法包括對感染表面給藥權(quán)利要求1至20、25或26中任一項的酸加成鹽或組合物，并且將所述表面暴露于光線(例如白光)中，優(yōu)選波長范圍300-800nm的光線(例如波長范圍380-440nm的藍光)。
31.一種產(chǎn)品，包括權(quán)利要求1至20、25或26中任一項的酸加成鹽、以及至少一種表面滲透輔助劑和任選的一或多種螯合劑作為組合制劑，所述組合制劑在治療對光化學療法敏感的身體外或內(nèi)表面的病癥或異常中用于同時、獨立或順序使用。
32.用于光化學治療身體的外或內(nèi)表面的病癥或異常的試劑盒，包括a)第一容器，含有權(quán)利要求1至20、25或26中任一項的酸加成鹽，b)第二容器，包含至少一種表面滲透輔助劑；和任選地c)一或多種螯合劑，其包含在所述第一容器之內(nèi)或在第三容器之內(nèi)。
33.通過化驗患者的體液或組織樣品來體外診斷異?；虿“Y的方法，所述方法至少包括下面的步驟i)將所述體液或組織與權(quán)利要求1至20、25或26中任一項的酸加成鹽混合，ii)將所述混合物暴露于光線中，iii)確定熒光水平，和iv)將熒光水平與對照水平進行比較。
全文摘要
本發(fā)明提供了5－氨基乙酰丙酸(5－ALA)或5－ALA衍生物(例如5－ALA酯)與pKa為約5或更小的，優(yōu)選為約3或更小的酸的酸加成鹽，條件是該酸不是鹽酸。特別優(yōu)選的鹽是那些源于選自下列物質(zhì)的鹽包括磺酸和其衍生物，氫溴酸，硫酸，硝酸和磷酸。本發(fā)明的鹽特別適合用于身體外表面或內(nèi)表面的病癥或異常的診斷和光化學療法中的光敏劑。
文檔編號A61K31/195GK1938264SQ200580009845
公開日2007年3月28日 申請日期2005年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月26日
發(fā)明者喬恩·E·布雷恩登, 阿斯拉克·戈達爾, 尼爾斯·O·尼爾森, 喬·克拉維尼斯 申請人:弗托庫爾公司