專(zhuān)利名稱(chēng)：抗狂犬病免疫血漿及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制品原料及其制備方法。具體涉及一種用于生產(chǎn)注射用人狂犬病免疫球蛋白的特異性免疫血漿及其制備方法。
背景技術(shù)：
狂犬病毒為一類(lèi)核糖核酸型彈性病毒?？袢∈怯煽袢《疽鸬囊环N人畜共患傳染病，主要通過(guò)患狂犬病動(dòng)物咬傷、抓傷或粘膜感染引起，在特定條件下也可通過(guò)呼吸道氣溶膠傳染。病毒主要侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，其典型癥狀為恐水癥，又稱(chēng)“恐水病”。人狂犬病直接傳染源主要是犬(超過(guò)90％)，其次為貓。該病的潛伏期為10到12個(gè)月，一般為20到90天，有的潛伏期長(zhǎng)達(dá)幾年甚至一、二十年，其發(fā)病死亡率接近100％。國(guó)內(nèi)狂犬病發(fā)病人數(shù)連續(xù)7年呈增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)。近3年來(lái)，包括發(fā)生“非典”疫情的2003年，狂犬病死亡人數(shù)在我國(guó)法定報(bào)告?zhèn)魅静≈惺冀K占據(jù)首位，表明這一古老的病毒性疾病重新成為不容忽視的公共衛(wèi)生問(wèn)題。目前對(duì)此病尚無(wú)特殊有效的治療方法，接種疫苗和使用抗狂犬病血清至今仍是預(yù)防感染狂犬病的主要方法。
臨床上以注射抗狂犬病疫苗使受傷者產(chǎn)生相應(yīng)抗體而預(yù)防發(fā)病，目前國(guó)內(nèi)用于主動(dòng)免疫的人用抗狂犬病疫苗有兩類(lèi)一類(lèi)為原代地鼠腎組織培養(yǎng)疫苗(PHKCV)，其方法是北京株固定毒組織培養(yǎng)適應(yīng)株，接種原代鼠腎組織培養(yǎng)的病毒液，經(jīng)滅活后加氫氧化鋁而成。另一類(lèi)為Vero細(xì)胞培養(yǎng)疫苗，其方法是狂犬病病毒固定株CTN-1V、aGV等培養(yǎng)適應(yīng)株接種Vero細(xì)胞的病毒液，經(jīng)滅活后加人血白蛋白作為穩(wěn)定劑凍干制成。使用方法為一個(gè)防疫療程中共注射5針，經(jīng)10到14天后抗狂犬病抗體開(kāi)始上升，待28至40天抗體水平達(dá)到高峰，能有效中和侵入傷者體內(nèi)的病毒。
盡管抗狂犬病疫苗早已得到推廣應(yīng)用，仍有20％左右傷者使用抗狂犬病疫苗后未能避免死亡，究其原因，除了傷者體內(nèi)需28至40天才能產(chǎn)生足夠抗體而預(yù)防發(fā)病(該時(shí)期稱(chēng)為免疫“窗口期”)外，還因?yàn)椴糠只颊叽嬖谥鲃?dòng)免疫缺陷，特別是對(duì)于距中樞神經(jīng)較近的嚴(yán)重多處咬傷病人，如先天性免疫缺陷綜合癥和后天免疫缺陷病(如艾滋病)、免疫機(jī)能低下的腫瘤病人、結(jié)核病人、年老體弱、兒童及由于治療其他疾病使用免疫抑制劑的病人。該類(lèi)傷者在注射抗狂犬病疫苗后體內(nèi)產(chǎn)生的抗體總量達(dá)不到世界衛(wèi)生組織規(guī)定的0.5國(guó)際單位/毫升，由此造成免疫失敗。對(duì)于上述特殊病人如能及時(shí)提供足量的抗狂犬病血清，將能使患者得到及時(shí)有效的保護(hù)。
用于被動(dòng)免疫的馬抗狂犬病血清可以使傷者在“窗口期”期得到有效保護(hù)，傷者在注射了抗狂犬病血清后立即獲得了抗狂犬病的抗體，該抗體可中和進(jìn)入體內(nèi)的狂犬病毒，使其失去致病作用。但馬抗狂犬病血清屬異種血清，其在人體內(nèi)僅能存留7到14天，且很容易引起血清病，據(jù)統(tǒng)計(jì)注射馬血清后血清病的發(fā)病率高達(dá)25％，此外馬抗狂犬病血清易引起副反應(yīng)，一般反應(yīng)率為12.3-46.2％，有時(shí)出現(xiàn)過(guò)敏性休克，重者即刻死亡。由于副反應(yīng)大，病人不易接受，臨床使用風(fēng)險(xiǎn)高，該方法已逐漸淘汰。
迄今為止，人抗狂犬病免疫球蛋白已取代馬血清，人抗狂犬病免疫球蛋白具有在人體內(nèi)半衰期長(zhǎng)(為21天)、注射前無(wú)需做皮試及不會(huì)引起血清病等諸多優(yōu)勢(shì)而得到推廣。
作為人狂犬病免疫球蛋白生產(chǎn)原料的狂犬病免疫血漿，尤其是高效價(jià)的免疫血漿無(wú)疑處于舉足輕重的地位。由于免疫程序不盡合理、病毒滅活工藝落后加上血源安全性得不到保障等原因，導(dǎo)致國(guó)內(nèi)狂犬病免疫血漿大多存在效價(jià)低、安全性難以保證等諸多不足，優(yōu)質(zhì)狂犬病免疫血漿的生產(chǎn)能力十分有限，已成為了制約人狂犬病免疫球蛋白產(chǎn)量的主要瓶頸。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)國(guó)內(nèi)現(xiàn)有抗破傷風(fēng)免疫血漿效價(jià)低、生產(chǎn)工藝復(fù)雜、成本較高及安全性得不到保障等問(wèn)題提供一種效價(jià)高、安全性好、工藝簡(jiǎn)單而成本低廉的抗破傷風(fēng)免疫血漿，及該血漿的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是一種用于生產(chǎn)人狂犬病免疫球蛋白的免疫血漿抗狂犬病抗體效價(jià)≥12國(guó)際單位/毫升(IU/ml)；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT賴(lài)氏法)≤25單位；狂犬病表面抗原(使用敏感度為1ng/ml以下的試劑盒檢測(cè))陰性；梅毒檢查陰性；HIV-1、HIV-2抗體測(cè)定陰性；HCV抗體測(cè)定陰性；血漿蛋白含量≥6％(g/ml)。
一種抗狂犬病免疫血漿的制備方法，按單采血漿技術(shù)規(guī)程進(jìn)行，選擇身體健康、符合國(guó)家單采血漿獻(xiàn)漿標(biāo)準(zhǔn)的獻(xiàn)漿員，經(jīng)乙型肝炎疫苗免疫后，再以狂犬病疫苗進(jìn)行免疫，其免疫程序?yàn)槭状巫⑸淇袢∫呙?支，隔2周后再注射2支，再隔2周后進(jìn)行第三次免疫，注射1支，待被免疫獻(xiàn)漿員體內(nèi)抗狂犬病抗體達(dá)12IU/ml以上時(shí)，按照衛(wèi)生部頒發(fā)的“單采血漿術(shù)規(guī)程”對(duì)獻(xiàn)血員實(shí)行血漿單采術(shù)。在無(wú)菌凈化室內(nèi)采用改良S/D病毒滅活法對(duì)血漿進(jìn)行滅菌，無(wú)菌塑料血袋分裝，采集6小時(shí)內(nèi)-20℃以下速凍，并在-10℃下儲(chǔ)存。按照《2005版藥典三部》中血液制品原料血漿規(guī)程對(duì)上述產(chǎn)品進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)。所有指標(biāo)全部合格后才在規(guī)定溫度下運(yùn)往生產(chǎn)廠家。
所使用的狂犬病疫苗的效價(jià)≥2.5IU/支。
采用本發(fā)明的抗狂犬病免疫血漿具有如下優(yōu)點(diǎn)1、發(fā)明的免疫血漿的抗體效價(jià)高，在人體內(nèi)存留時(shí)間長(zhǎng)達(dá)21天，因而有效地增強(qiáng)了預(yù)防和治療效果。
2、傷者在注射了狂犬病免疫球蛋白后立即獲得了抗狂犬病的抗體，該抗體可中和進(jìn)入體內(nèi)的狂犬病毒，使其失去致病作用。對(duì)于無(wú)免疫應(yīng)答或免疫應(yīng)答低下者，使用本制品后傷者可以即刻得到有效保護(hù)，阻斷病毒從局部傷口擴(kuò)散至臨近細(xì)胞，并抑制體內(nèi)病毒的繁殖速度，因此可以使傷者在“窗口期”期得到有效保護(hù)。
3、由于是人源性血制品，可以避免血清病發(fā)生的危險(xiǎn)，并可免除皮膚試驗(yàn)，節(jié)約了醫(yī)治時(shí)間并減輕了傷者痛苦。
采用本發(fā)明的方法制備抗狂犬病免疫血漿具有如下優(yōu)點(diǎn)1、該發(fā)明生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，便于推廣應(yīng)用。
2、與生產(chǎn)馬抗狂犬病免疫血清相比較，由于獻(xiàn)血員分散，可以節(jié)約大筆用于動(dòng)物飼養(yǎng)的資金。
具體實(shí)施例方式
1、按單采血漿技術(shù)規(guī)程進(jìn)行，選擇身體健康、符合國(guó)家單采血漿獻(xiàn)漿標(biāo)準(zhǔn)的獻(xiàn)漿員，經(jīng)乙型肝炎疫苗免疫后再以狂犬病疫苗進(jìn)行免疫，其免疫程序?yàn)槭状巫⑸淇袢∫呙?支，隔2周后再注射2支，再隔2周后進(jìn)行第三次免疫，注射1支，此時(shí)90％獻(xiàn)漿員體內(nèi)抗體效價(jià)達(dá)12IU/ml以上，甚至高達(dá)20IU/ml，且持續(xù)時(shí)間超過(guò)18個(gè)月，當(dāng)血漿抗體滴度不合格時(shí)，隔2周后再注射狂犬病疫苗一支。
2、待被免疫獻(xiàn)血員體內(nèi)抗狂犬病抗體達(dá)12IU/ml以上時(shí)，采用美國(guó)HAEMONETICS公司的PCS全自動(dòng)單采血漿機(jī)完成采漿，每次每人份采漿500-600ml，在此過(guò)程中加入4％注射用枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H2O)作抗凝劑，所用抗凝劑無(wú)菌無(wú)熱源且不含防腐劑的，pH7.2-7.6。在10～20℃進(jìn)行離心分出血漿，將紅細(xì)胞還輸給獻(xiàn)漿員。由此得到抗狂犬病免疫血漿，獻(xiàn)漿員體內(nèi)狂犬病抗體的含量越高，所采集的免疫血漿質(zhì)量越好。
3、在無(wú)菌凈化室內(nèi)采用改良S/D病毒滅活法對(duì)血漿進(jìn)行滅菌采用有機(jī)溶劑和表面活性劑進(jìn)行協(xié)同處理，用于滅活血漿制品中的脂包膜病毒(HIV，HBV和HCV等)，結(jié)合紫外照射法以滅活血漿制品中的非脂包膜病毒(HAV，B19等)。
4、采用無(wú)菌、無(wú)熱原塑料血袋分裝，采集6小時(shí)內(nèi)-20℃以下速凍，并在-10℃下儲(chǔ)存。按照《2005版藥典三部》對(duì)血液制品原料血漿規(guī)程對(duì)上述產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，本發(fā)明的原料血漿能達(dá)到以下指標(biāo)外觀淡黃色或黃色，無(wú)纖維蛋白析出，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT賴(lài)氏法)≤25單位；狂犬病表面抗原(使用敏感度為1ng/ml以下的試劑盒檢測(cè))陰性；梅毒檢查陰性；HIV-1、HIV-2抗體測(cè)定陰性；HCV抗體測(cè)定陰性。血漿蛋白含量≥6％(g/ml)；抗狂犬病抗體效價(jià)≥12IU/ml，液體血漿在2-8℃運(yùn)輸，冰凍血漿于-15℃下運(yùn)輸。
權(quán)利要求
1.一種從健康獻(xiàn)血員體內(nèi)采得的抗狂犬病免疫血漿，其特征在于所述血漿內(nèi)含有12國(guó)際單位/毫升(IU/ml)以上抗狂犬病抗體。
2.一種抗狂犬病免疫血漿的制備方法，其特征在于用人抗狂犬病疫苗免疫健康獻(xiàn)血員，待被免疫獻(xiàn)血員體內(nèi)抗狂犬病抗體達(dá)到12IU/ml以上時(shí)對(duì)對(duì)獻(xiàn)血員實(shí)行血漿單采術(shù)，血漿滅菌后進(jìn)行嚴(yán)格檢測(cè)，在無(wú)菌凈化室內(nèi)包裝，冷凍保存待用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗狂犬病免疫血漿的制備方法，其特征在于抗狂犬病疫苗的免疫程序?yàn)槭状巫⑸淇袢∫呙?支，隔2周后再注射2支，再隔2周后進(jìn)行第三次免疫，注射1支，當(dāng)血漿抗體滴度不合格時(shí)，隔2周后再注射狂犬病類(lèi)毒素一支。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗狂犬病免疫血漿及該免疫血漿的制備方法。通過(guò)對(duì)健康獻(xiàn)漿員進(jìn)行抗狂犬病疫苗免疫，待獻(xiàn)漿員體內(nèi)抗體達(dá)12國(guó)際單位/毫升以上時(shí)，對(duì)獻(xiàn)漿員施行血漿單采術(shù)，采得的免疫血漿經(jīng)嚴(yán)格檢測(cè)后凍存。用本發(fā)明方法制得的免疫血漿具有高效價(jià)、高特異性、高度安全以及在人體內(nèi)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)勢(shì)，延長(zhǎng)了傷者的被保護(hù)期，增加了預(yù)防和治療效果。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1748711SQ20051003206
公開(kāi)日2006年3月22日 申請(qǐng)日期2005年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月29日
發(fā)明者鄭程遠(yuǎn), 周祖岳, 李少波, 周松華 申請(qǐng)人:湖南綠十字景達(dá)生物原料有限公司