專(zhuān)利名稱(chēng)：一種含有六環(huán)水的獸用恩諾沙星溶液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于獸藥的技術(shù)領(lǐng)域，涉及以恩諾沙星為原料制備一種廣譜抗菌藥，用于畜禽細(xì)菌和支原體感染的獸用藥劑及其制法。
背景技術(shù)：
水是所有生物中最重要的成分，生物體一般含水量都在60％以上；食品中除干制品之外，含水量都在65％-90％之間；可以說(shuō)水在我們的生活中起著非常重要的作用。水有許多特殊的性質(zhì)，近年來(lái)引起人們的關(guān)注。例如雜志《江西化工》1997年第四期第34頁(yè)《生命的水神奇的水》中介紹了具有六個(gè)水分子團(tuán)結(jié)構(gòu)的水，即所謂“六環(huán)水”，具有促進(jìn)健康的功能。
天津大學(xué)學(xué)報(bào)2000年1月第33卷第1期收載的《水的六環(huán)結(jié)構(gòu)及其對(duì)溶菌酶熱變性的影響》通過(guò)理論分析和實(shí)驗(yàn)證明了水的六環(huán)結(jié)構(gòu)及其生物功能。研究表明，水經(jīng)過(guò)低溫超聲定頻譜振后，大多數(shù)呈六環(huán)和六籠形水分子簇存在，這種水在生物蛋白、核酸、細(xì)胞及組織活動(dòng)中起到重要作用；經(jīng)DSC法實(shí)驗(yàn)證明，用六環(huán)水水合溶菌酶時(shí)，提高了其熱抗變性能力。
化學(xué)通報(bào)2004年第四期收載的《水分子團(tuán)簇結(jié)構(gòu)的改變及其生物效應(yīng)》概述了近30年來(lái)從水分子團(tuán)簇結(jié)構(gòu)的發(fā)現(xiàn)到水分子簇的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)及相關(guān)理論計(jì)算的研究進(jìn)展；總結(jié)了改變水分子團(tuán)簇結(jié)構(gòu)的四種方法，包括外加磁場(chǎng)、外加電場(chǎng)、激光輻射以及直接加熱法，分別討論了這四種方法的作用機(jī)理，介紹了水分子團(tuán)簇結(jié)構(gòu)變小后，作用于生物體，能產(chǎn)生多種生物效應(yīng)，在很多方面能夠改善生物體的生理機(jī)能。
科學(xué)研究表明，水分子團(tuán)越小，活性越大，這種水喝起來(lái)越好喝，反之亦然。許多實(shí)驗(yàn)證明，改變水的結(jié)構(gòu)時(shí)對(duì)生物的生理反應(yīng)有很大的影響；具有五個(gè)水分子或六個(gè)水分子的小分子團(tuán)結(jié)構(gòu)的水，即五環(huán)水和六環(huán)水，對(duì)健康有很好的促進(jìn)作用。目前在獸用口服液的制備工藝中，純凈水是最常用的溶媒，即將自來(lái)水進(jìn)行一定的水處理后，用做藥物的溶媒。然而科學(xué)研究表明，在藥物制作的過(guò)程中使用普通水，由于水分子的結(jié)構(gòu)，使藥物的生物利用度不能得到最大限度的發(fā)揮。然而六環(huán)水能夠保持較長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定性，對(duì)于細(xì)胞有很強(qiáng)的親和力，能夠顯著提高藥物的療效，對(duì)于疾病的恢復(fù)有較快的促進(jìn)作用。
水是一種特殊的物質(zhì)，它具有很多功能。首先它是一種良好的溶劑，它含有O2、CO2等物質(zhì)，具有不同的PH值。因此，可以溶解很多礦物質(zhì)，為人體輸送營(yíng)養(yǎng)；水體又是一個(gè)“化學(xué)場(chǎng)”，其中可以進(jìn)行各種復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)如酸堿反應(yīng)、氧化還原反應(yīng)等，同時(shí)，還可以發(fā)生溶解、沉淀、分解、化合、膠溶等化學(xué)作用，在獸用口服液的制備工藝中，純凈水是最常用的溶媒。即將自來(lái)水進(jìn)行一定的水處理后，用作藥物的溶媒。在藥物制作的過(guò)程中使用普通水，由于水分子的結(jié)構(gòu)及其排列等原因，使藥物的生物利用度不能得到最大限度的發(fā)揮。
已知恩諾沙星化學(xué)名稱(chēng)為1-環(huán)丙基-6-氟-4-氧代-1，4-二氫-7-(4-乙基-1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸，分子式為C19H22FN3O3，分子量為359.4，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖。該藥物為微黃色或類(lèi)白色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭，味微苦，易溶于堿性溶液中，在水、甲醇中微溶，在乙醇中不溶；遇光漸變?yōu)槌燃t色。結(jié)構(gòu)式為 恩諾沙星的作用機(jī)理為在喹諾酮結(jié)構(gòu)的6位上引入了氟原子，從而增強(qiáng)了藥物與細(xì)菌靶位的親和力，且擴(kuò)大了抗菌譜，1位上的環(huán)丙基能促進(jìn)藥物的組織滲透性。恩諾沙星在動(dòng)物體內(nèi)代謝為環(huán)丙沙星來(lái)發(fā)揮抗菌活性，與其他喹諾酮類(lèi)藥的抗菌機(jī)理相同，恩諾沙星以細(xì)菌的脫氧核糖核酸(DNA)酶為靶細(xì)菌的雙股DNA扭曲成為袢狀或螺旋狀(稱(chēng)為超螺旋)，使DNA形成超螺旋的酶稱(chēng)為DNA回旋酶。藥物通過(guò)與細(xì)菌DNA回旋酶亞基A結(jié)合，抑制該酶的切割與連接功能，對(duì)染色體造成不可逆損害，阻止細(xì)菌細(xì)胞分裂而發(fā)揮抗菌作用。同時(shí)，它對(duì)細(xì)菌細(xì)胞壁有高度的滲透力并破壞細(xì)菌的胞膜。因此，恩諾沙星是通過(guò)雙重抗菌作用來(lái)達(dá)到溶菌、殺菌的目的。大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)恩諾沙星對(duì)細(xì)菌、支原體等引起的疾病療效一般要優(yōu)于環(huán)丙沙星、諾氟沙星及其他同類(lèi)抗生素類(lèi)藥物。恩諾沙星在水中具有良好的溶解性，其為廣譜抗菌藥，抗支原體效力比泰樂(lè)菌素、硫酸粘菌素強(qiáng)。主要用于犢牛大腸桿菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染、豬白痢、仔豬黃痢、豬水腫病及家禽各種支原體感染。用法用量?jī)?nèi)服，一次量，每1kg體重，犬、貓2.5-5mg，禽5-7.5mg，一日2次，連用3-5天。
目前有關(guān)恩諾沙星的產(chǎn)品主要有恩諾沙星溶液，是將恩諾沙星與適宜溶媒配制而成的溶液，含恩諾沙星(C19H22FN3O3)為標(biāo)示量的90.0％～110.0％，性狀為無(wú)臭、微黃色澄明液體。
該藥物的鑒別方法為(1)取本品適量，加稀硝酸酸化，調(diào)整溶液pH值到6.5～9.0，即有白色沉淀析出。
(2)取本品適量，加碘化鉍鉀試液數(shù)滴，即生成桔紅色沉淀。
(3)取含量測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液，照分光光度法(《中華人民共和國(guó)獸藥典》2000年版一部附錄17頁(yè))，在271±2、322±2、334±2nm處有最大吸收。
pH值應(yīng)為10.5～12.0(《中華人民共和國(guó)獸藥典》2000年版一部附錄40頁(yè))含量測(cè)定方法如下取在105℃干燥至恒重的恩諾沙星對(duì)照品25mg，精密稱(chēng)定，置500ml量瓶中，加氫氧化鈉溶液(0.1mol/l)10ml，振搖使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取10ml，置100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備精密量取本品適量(約相當(dāng)于恩諾沙星25mg)，加水制成每1ml中約含恩諾沙星5ug的溶液，搖勻，即得。
測(cè)定法吸取上述兩種溶液，照分光光度法(《中華人民共和國(guó)獸藥典》2000年版一部附錄17頁(yè))，在271nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，根據(jù)二者吸收度比值，計(jì)算，即得。
恩諾沙星溶液制備方法洗瓶首先將12-15ml西林瓶粗洗、精洗，100℃烘干30分鐘，冷卻待用。
1、將恩諾沙星25g加入適量純化水使之充分稀釋、攪拌均勻。
2、加入40％氫氧化鈉溶液10-40ml，使之溶解。
3、加注純化水至全量1000ml，調(diào)解PH至9.5-10.5。
4、再加入EDTA-2Na 0.5-1.5g，充分?jǐn)嚢杈鶆颉?br> 5、用高壓滅菌柜滅菌120℃，30分鐘，中間體檢驗(yàn)合格后灌裝壓蓋。
以上所述的即為恩諾沙星溶液現(xiàn)有的制備工藝及檢測(cè)方法，但是現(xiàn)有恩諾沙星溶液存在著釋放速度慢、血藥高峰濃度存在時(shí)間短、生物利用度差等問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用六環(huán)水制備的具有釋放速度快、血藥高峰濃度時(shí)間長(zhǎng)、生物利用度高的恩諾沙星溶液獸用制劑。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種畜禽抗菌藥物，包含六環(huán)水，其特征在于以六環(huán)水為載體以微溶或溶于六環(huán)水的抗菌藥物為活性成分，制備畜禽抗菌藥物。
所述的畜禽抗菌藥物，包含六環(huán)水，恩諾沙星(化學(xué)名稱(chēng)為1-環(huán)丙基-6-氟-4-氧代-1，4-二氫-7-(4-乙基-1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸，分子式為C19H22FN3O3，分子量為359.4。)化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 其特征在于以六環(huán)水為載體制備恩諾沙星溶液。
所述的恩諾沙星溶液，其特征在于a、選用凈化的水(即純凈水)作為原水，一般市售合格純凈水，電導(dǎo)率小于20μs/cm即可，靜置數(shù)小時(shí)后緩慢冷凍，降溫速率為2-5℃/h，冷凍最低溫度達(dá)-30～-50℃，使水充分結(jié)晶，而后再解凍，其解凍過(guò)程在低于10℃下進(jìn)行，溶化的水及時(shí)收集儲(chǔ)存在4-10℃的溫度環(huán)境中，即得到六環(huán)水；b、將恩諾沙星25g加入適量六環(huán)水使之充分稀釋、攪拌均勻；c、加入40％氫氧化鈉溶液10-40ml，使之溶解。
d、加注六環(huán)水至全量1000ml，調(diào)解PH至9.5-10.5；e、再加人EDTA-2Na 0.5-1.5g，充分?jǐn)嚢杈鶆颍籪、用高壓滅菌柜滅菌120℃，30分鐘，中間體檢驗(yàn)合格后灌裝壓蓋，即得到含六環(huán)水的恩諾沙星溶液。
g、燈檢、化驗(yàn)、貼簽，包裝入庫(kù)。經(jīng)過(guò)一個(gè)月時(shí)間低溫(4℃)存儲(chǔ)后，分析測(cè)試結(jié)果表明溶液的結(jié)構(gòu)無(wú)明顯變化。
下面以實(shí)驗(yàn)說(shuō)明本發(fā)明的治療效果1材料與方法試驗(yàn)藥品實(shí)驗(yàn)藥物為用六環(huán)水制備的恩諾沙星溶液，對(duì)照藥物為普通水制備的恩諾沙星溶液試驗(yàn)動(dòng)物京白雛雞140只(抗雞敗血霉形體抗體陰性)，購(gòu)自天津方大禽業(yè)發(fā)展有限公司。將試驗(yàn)雞隨機(jī)平均分為4組，試驗(yàn)前按常規(guī)飼養(yǎng)，喂全價(jià)飼料，不含任何抗菌藥物，自由采食及飲水，并進(jìn)行臨床觀察，在35日齡時(shí)用于試驗(yàn)。
人工誘發(fā)雞慢性呼吸道病霉形體菌種雞敗血霉形體強(qiáng)毒菌種PG31，由中國(guó)獸藥監(jiān)察所提供。使用時(shí)將菌種接種于牛心消化湯中，于50mL/L CO2條件下37℃培養(yǎng)7d，用普通細(xì)菌計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)菌數(shù)，稀釋成每1mL含活菌2.0億的懸液。接種量和接種途徑經(jīng)毒力測(cè)定，確定對(duì)雞接種量為0.5mL/只，含活菌1.0億個(gè)，接種途徑為滴鼻、口服。
接種前后雞的臨床癥狀觀察主要觀察試驗(yàn)雞的精神狀態(tài)、食飲欲、糞便性狀、呼吸表現(xiàn)等。對(duì)死亡雞進(jìn)行尸體剖檢，取鼻、氣管分泌物和肺、氣囊等組織進(jìn)行雞敗血霉形體分離培養(yǎng)。采未死亡雞血分離血清，用平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)抗雞敗血霉形體抗體。
試驗(yàn)性治療接種雞出現(xiàn)臨床癥狀后，對(duì)第1～4組雞飲水給藥，連續(xù)5d，觀察30d，記錄各組雞的臨床表現(xiàn)與發(fā)病、死亡情況，對(duì)死亡雞做雞敗血霉形體分離培養(yǎng)以確定死亡原因。
藥物療效評(píng)價(jià)指標(biāo)檢查中，以未死亡雞血清抗雞敗血霉形體抗體轉(zhuǎn)為陽(yáng)性者說(shuō)明人工感染成功。藥物療效用保護(hù)率表示，凡在試驗(yàn)期間出現(xiàn)慢性呼吸道病的臨床癥狀并有部分雞死亡，尸體剖檢有比較特征的病變，并從鼻、氣管分泌物及肺與氣囊等組織中分離到雞敗血霉形體PG31的判為霉形體感染死亡。
2結(jié)果試驗(yàn)雞的臨床癥狀與病變?cè)囼?yàn)雞接種雞敗血霉形體后第4d開(kāi)始表現(xiàn)精神沉郁，食欲不振，第5d出現(xiàn)明顯的呼吸道癥狀，如咳嗽、噴嚏、流鼻液等，嚴(yán)重者呼吸困難，病雞張口呼吸、甩頭、呼吸羅音加重。有的病雞眼濕潤(rùn)、流淚，后期個(gè)別雞眼瞼腫脹，有粘液或膿性分泌物。死亡雞鼻竇粘膜水腫、充血、肥厚。竇腔內(nèi)充有粘液或干酪樣滲出物，氣管和喉頭內(nèi)有粘液狀物質(zhì)，氣管粘膜增厚。肺和氣囊、支氣管內(nèi)有明顯的卡他性炎癥，胸氣囊灰色混濁、肥厚，氣囊內(nèi)含有稍混濁的粘稠滲出物或干酪樣物質(zhì)，有的雞腹氣囊也有同樣的病變。
死亡雞病料中霉形體分離培養(yǎng)結(jié)果從各組死亡雞的鼻分泌物、氣囊等材料中均分離到雞敗血霉形體。
未死亡雞血清中抗雞敗血霉形體抗體檢測(cè)結(jié)果從各組未死亡雞的血清中均檢測(cè)到抗雞敗血霉形體抗體。
各組雞的保護(hù)率 見(jiàn)表1
六環(huán)水恩諾沙星溶液對(duì)雞慢性呼吸道病的治療效果

從上表可以看出，在藥物濃度相同的情況下，用六環(huán)水制成的恩諾沙星溶液的保護(hù)率明顯高于普通水制成的恩諾沙星溶液，對(duì)雞慢性呼吸道病有較好的療效。
發(fā)明效果在其它條件相同情況下，與現(xiàn)有含純化水恩諾沙星溶液相比，將冷凍制備的六環(huán)水加注恩諾沙星溶液中，水分子簇的體積變小，相應(yīng)的水的粘度、表面張力等有所下降，使恩諾沙星擴(kuò)散阻力降低，促進(jìn)藥物釋放，恩諾沙星溶液藥物釋放速率和釋放量都有所提高。六環(huán)水對(duì)于細(xì)胞有很強(qiáng)的親和力，生物利用度好，用于畜禽細(xì)菌和支原體感染，能夠顯著提高藥物的療效，對(duì)于疾病的恢復(fù)有較快的促進(jìn)作用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例11、洗瓶首先將12-15ml西林瓶粗洗、精洗，100℃烘干30分鐘，冷卻待用。
2、選用凈化的水(即純凈水)做為原水，一般市售合格純凈水(電導(dǎo)率小于20μs/cm)即可，靜置數(shù)小時(shí)后緩慢冷凍，降溫速率為2-5℃/h，冷凍最低溫度達(dá)-30～-50℃，使水充分結(jié)晶，而后再解凍，其解凍過(guò)程在低于10℃的條件下進(jìn)行，溶化的水及時(shí)收集儲(chǔ)存在4-10℃的溫度環(huán)境中，即得到六環(huán)水。
3、將恩諾沙星25g加人適量六環(huán)水使之充分稀釋、攪拌均勻。
4、加入40％氫氧化鈉溶液10-40ml，使之溶解。
5、加注六環(huán)水至全量1000ml，調(diào)解PH至9.5-10.5。
6、再加人EDTA-2Na0.5-1.5g，充分?jǐn)嚢杈鶆颉?br> 7、用高壓滅菌柜滅菌120℃，30分鐘，中間體檢驗(yàn)合格后灌裝壓蓋，即得到含六環(huán)水的恩諾沙星溶液。
8、燈檢、化驗(yàn)、貼簽，包裝入庫(kù)。經(jīng)過(guò)一個(gè)月時(shí)間低溫(4℃)存儲(chǔ)后，分析測(cè)試結(jié)果表明溶液的結(jié)構(gòu)無(wú)明顯變化。
該方法工藝簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)。
實(shí)施例2本發(fā)明藥物，可用于治療犢牛大腸桿菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌感染、豬白痢、仔豬黃痢、豬水腫病及家禽各種支原體感染。使用方法為混飲，每升水中加本發(fā)明藥物1毫升，連用3-5天為一個(gè)療程。
權(quán)利要求
1.一種畜禽抗菌藥物，包含六環(huán)水，其特征在于以六環(huán)水為載體以微溶或溶于六環(huán)水的抗菌藥物為活性成分制備畜禽抗菌藥物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的畜禽抗菌藥物，包含六環(huán)水，恩諾沙星(化學(xué)名稱(chēng)為1-環(huán)丙基-6-氟-4-氧代-1，4-二氫-7-(4-乙基-1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸，分子式為C19H22FN3O3，分子量為359.4)，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為 其特征在于以六環(huán)水為載體制備恩諾沙星溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的恩諾沙星溶液，其特征在于a、選用凈化的水，即純凈水做為原水，一般市售合格純凈水，電導(dǎo)率小于20μs/cm即可，靜置數(shù)小時(shí)后緩慢冷凍，降溫速率為2-5℃/h，冷凍最低溫度達(dá)-30～-50℃，使水充分結(jié)晶，而后再解凍，其解凍過(guò)程在低于10℃的條件下進(jìn)行，溶化的水及時(shí)收集儲(chǔ)存在4-10℃的溫度環(huán)境中，即得到六環(huán)水；b、將恩諾沙星25g加人適量六環(huán)水使之充分稀釋、攪拌均勻；c、加入40％氫氧化鈉溶液10-40ml，使之溶解；d、加注六環(huán)水至全量1000ml，調(diào)解PH至9.5-10.5；e、再加人EDTA-2Na0.5-1.5g，充分?jǐn)嚢杈鶆?；f、用高壓滅菌柜滅菌120℃、30分鐘，中間體檢驗(yàn)合格后灌裝壓蓋，即得到含六環(huán)水的恩諾沙星溶液。
全文摘要
本發(fā)明屬于獸藥的技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種畜禽抗菌藥物以恩諾沙星為原料制備一種廣譜抗菌溶液，恩諾沙星溶液以六環(huán)水為載體，經(jīng)冷凍制備的六環(huán)水加注恩諾沙星溶液中，水分子簇的體積變小，相應(yīng)的水的粘度、表面張力等有所下降，使恩諾沙星擴(kuò)散阻力降低，促進(jìn)藥物釋放，發(fā)明恩諾沙星溶液藥物釋放速率和釋放量都有所提高，六環(huán)水對(duì)于細(xì)胞有很強(qiáng)的親和力，用于畜禽細(xì)菌和支原體感染，能夠顯著提高藥物的療效，對(duì)于疾病的恢復(fù)有較快的促進(jìn)作用。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1965834SQ20051001614
公開(kāi)日2007年5月23日 申請(qǐng)日期2005年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月18日
發(fā)明者李旭東, 鮑恩東, 蘇建東 申請(qǐng)人:天津市潤(rùn)拓生物技術(shù)有限公司