專利名稱：皮膚增白組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于皮膚增白的試劑，這些試劑用于抑制哺乳動(dòng)物皮膚中黑色素產(chǎn)生的用途和適于這種用途的組合物。
背景技術(shù)：
一些具有天然較黑皮膚類型的人希望促使他們的全部膚色能增白一定的程度。膚色主要由黑色素的數(shù)量和類型來決定，黑色素是通過存在于表皮的黑素細(xì)胞在皮膚內(nèi)產(chǎn)生的物質(zhì)。黑色素存在兩種形式，即深黑色素(dark melanin)和淺黑色素(light melanin)。如果深黑色素的產(chǎn)生減少和/或淺黑色素對(duì)深黑色素產(chǎn)生的比例提高，將使得皮膚增白。
發(fā)明概述我們現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)類黃酮(flavanoid)，維生素C和維生素E的組合物對(duì)抑制深黑色素產(chǎn)生同時(shí)實(shí)際提高淺黑色素的產(chǎn)生具有顯著的效果。通常將皮膚增白劑配制成局部使用。然而，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)如果將三種組分局部給予，其組合是細(xì)胞毒性的。因此我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)至少一些組分應(yīng)當(dāng)全身給予。用分開的給予例如將類黃酮和維生素C全身給予而將維生素E局部給予獲得了特別好的效果。
因此，本發(fā)明提供了皮膚增白產(chǎn)品，包括組分(a)類黃酮、(b)維生素C和(c)維生素E，其中至少組分(b)以適于全身給予的形式來提供，其他組分以適于局部給予的形式來提供。
一優(yōu)選實(shí)施方案中，(a)和(b)以適于全身給予的形式來提供，而(c)以適于局部給予的形式來提供。
另一優(yōu)選實(shí)施方案中，其中組分(a)、(b)和(c)以適于全身給予的形式來提供。
優(yōu)選適于全身給予的形式是口服劑型。
相關(guān)方面中，本發(fā)明提供了皮膚增白產(chǎn)品，包括用于口服給予的第一組合物，其包括類黃酮和維生素C，和用于局部給予的第二組合物，其包括維生素E，即第一組合物是口服劑型而第二組合物是局部組合物。
進(jìn)一步相關(guān)的方面中，本發(fā)明提供了用于增白皮膚的產(chǎn)品，該產(chǎn)品包括組分(a)類黃酮、(b)維生素C和(c)維生素E，其中至少組分(b)以適于全身給予的形式來提供，而其他組分以適于局部給予的形式來提供。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了調(diào)控哺乳動(dòng)物皮膚中黑色素產(chǎn)生的方法，該方法包括將(a)類黃酮、(b)維生素C和(c)維生素E給予所述的哺乳動(dòng)物，其中將至少組分(b)全身給予，而將其他組分局部給予。
還提供了本發(fā)明的用于調(diào)控哺乳動(dòng)物皮膚中黑色素產(chǎn)生的組合物或產(chǎn)品以及本發(fā)明的組合物或產(chǎn)品在制造用于抑制哺乳動(dòng)物皮膚中黑色素產(chǎn)生的組合物或產(chǎn)品中的用途。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了提高哺乳動(dòng)物皮膚中淺黑色素對(duì)深黑色素比例的方法，該方法包括將有效量的(a)類黃酮、(b)維生素C和(c)維生素E給予所述哺乳動(dòng)物，其中將至少組分(b)全身給予，而將其他組分局部給予。
一實(shí)施方案中，將組分(a)和(b)全身給予而將組分(c)局部給予。
另一實(shí)施方案中，將組分(a)，(b)和(c)全身給予。
本發(fā)明還提供了本發(fā)明的用于提高哺乳動(dòng)物皮膚中淺黑色素對(duì)深黑色素比例的組合物或產(chǎn)品以及本發(fā)明的組合物或產(chǎn)品用于提高哺乳動(dòng)物皮膚中淺黑色素對(duì)深黑色素比例的用途。通常，這樣的用途是用于美容目的。
發(fā)明詳述除非另外限定，在此所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常所理解的相同意思。
類黃酮類黃酮是多酚化合物并在自然界中能廣泛找到。存在幾類類黃酮黃烷醇，黃酮醇，黃酮，異黃酮，黃烷酮，原花色素，花色素和羥基均二苯代乙烯。這些化合物中的許多以糖基化的形式存在，尤其是作為O-糖苷。通常，糖基化的形式優(yōu)于配基(aglycone)。優(yōu)選，類黃酮不是黃烷醇。
黃酮醇包括櫟精，莰非醇和楊梅黃酮。黃烷醇包括兒茶素，表兒茶素，棓兒茶素，表?xiàng)攦翰杷?，及其與棓酸的酯，即兒茶素棓酸酯，表兒茶素棓酸酯，棓兒茶素棓酸酯和表?xiàng)攦翰杷貤斔狨?EGCg)。黃烷酮包括柚苷配基，橙皮素和櫻花亭。黃酮包括藤黃菌素和芹菜配基。異黃酮包括黃豆苷原和染料木黃酮。羥基均二苯代乙烯包括白藜蘆醇和氧白藜蘆醇(oxyresveratrol)。
所述化合物可以化學(xué)合成或從植物原料獲得。
植物提取物不同于完整的植物原料，因?yàn)橥暾参镌现写嬖诘母鞣N組分將以不同的含量存在于提取物中，或基本上不存在。在提取之前，可以將植物原料干燥和或機(jī)械加工，例如，碾碎。
通常通過溶劑提取來制得植物原料的提取物。溶劑包括包含極性和非極性有機(jī)溶劑，水及其混合物的“溶劑”。優(yōu)選的溶劑為水、乙醇及其混合物。提取方法可以包括加熱步驟。溶劑提取的組分可進(jìn)行進(jìn)一步的純化/分離步驟，如色譜或分餾。如在此所用的，“級(jí)分”意思是含有上述一種或多種活性成分的溶劑的任何分級(jí)部分，例如，通過色譜或通過分餾獲得的。
上述各種多酚化合物的合適植物來源包括新鮮水果如葡萄(尤其是皮和籽)，酸果蔓(cranberry)，黑醋栗，黑莓和柑桔類水果，以及蔬菜如洋蔥，羽衣甘藍(lán)，花椰菜(broccoli)和菜豆(French bean)。
通過共同溶解一種或多種花色素可以提高黃酮醇在水溶劑中的溶解度(參見，US專利No.6,569,446)。
優(yōu)選的實(shí)施方案中，組合物包括原花色素和花色素的混合物。優(yōu)選以樹皮提取物來提供原花色素和花色素的混合物，更優(yōu)選是法國(guó)海岸松(Pinus pinatus)的樹皮提取物。一種這樣的提取物以PycnogenolTM是可購(gòu)得的。
另一優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物包括一種或多種黃酮醇。優(yōu)選，組合物包括楊梅黃酮和/或櫟精，更優(yōu)選櫟精。
另一優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物包括一種或多種黃烷酮。優(yōu)選，組合物包括柚苷配基，橙皮素和/或櫻花亭，更優(yōu)選橙皮素。
可以使用例如實(shí)施例中所述的測(cè)試方法來測(cè)試含有相同物質(zhì)的其他化合物和/或植物提取物來證實(shí)它們具有合適的活性。
本發(fā)明的化合物和產(chǎn)品可以包括兩種或多種類黃酮的混合物。一實(shí)施方案中，以不同的植物提取物來提供不同的類黃酮。
維生素C如在此所用的，“維生素C”意思是抗壞血酸或其有機(jī)或無機(jī)(例如，鈉)鹽。還包括一種或多種該酸及其鹽的混合物。
維生素E及其衍生物如在此所用的，“維生素E”包括其任何異構(gòu)形式的α-、β-、γ-和δ-生育酚或其混合物(包括這些異構(gòu)形式任意的混合物)。維生素E的衍生物可以是油溶性的或水溶性的。油溶性維生素E衍生物的實(shí)例，包括酯衍生的維生素E，生育酚醋酸酯，生育酚亞油酸酯，生育酚亞油酸酯/油酸酯，生育酚煙酸酯和生育酚(維生素E醇)。水溶性維生素E衍生物包括維生素E磷酸鈉(VEP)，月桂基亞氨基二丙酸生育酚磷酸鹽，生育酚葡糖苷，生育酚琥珀酸鹽，托可索侖(tocophersolan)(生育酚聚乙二醇1000琥珀酸鹽)，tocophereth-5，10，12，18和50(聚乙二醇(PEG)生育酚醚)。對(duì)于PEG維生素E衍生物，提高數(shù)目表示提高連接到維生素E的PEG分子的數(shù)目。因此，隨著數(shù)目的提高，水溶性也提高，tocophereth-5具有最低的水溶性，而tocophereth-50具有最高的水溶性。在此涉及的維生素E衍生物具有至少50％的α-生育酚生物活性，例如，至少50％的α-生育酚的抗氧化活性。
組合物和產(chǎn)品形式可以以用于局部和/或全身給予的形式來提供本發(fā)明的皮膚增白產(chǎn)品。其中三種組分作為分開的系統(tǒng)來提供，即全身和局部劑型，至少維生素C以全身劑型來提供局部劑型優(yōu)選不包括任何維生素C。優(yōu)選，分開的系統(tǒng)中，維生素E以局部形式來提供，類黃酮/維生素C以全身劑型來提供?；蛘?，所有三種組分都以全身劑型來提供。
因此，根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)品范圍中的如在此所用的術(shù)語“產(chǎn)品”指的是含有所有必要成分的單一組合物的情況和其中整個(gè)產(chǎn)品的單個(gè)成分在一起提供作為產(chǎn)品的兩個(gè)不同組合物形式之間分開的情況。例如，產(chǎn)品可包括一個(gè)用于全身傳送其組分的組成形式和一個(gè)用于局部傳送其組分的組成形式。含有這樣組成形式的組合的產(chǎn)品實(shí)例是護(hù)膚霜和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充片劑。
局部組合物一實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物包括配制成局部給予的劑型，即，組合物/產(chǎn)品包括局部組合物。因此，可以將本發(fā)明的局部組合物局部給予患者，即，通過將組合物直接放置或涂抹于皮膚上。可以通過將安全而有效量的活性物質(zhì)或上述物質(zhì)與藥物學(xué)上可接受的局部載體或稀釋劑即皮膚學(xué)上可接受的載體或稀釋劑混合來制得這樣的組合物。
組合物通常含有全部約0.1％至約50％重量的活性物質(zhì)，優(yōu)選約1wt％至約50wt％，如5或10wt％至約50wt％。
可以將本發(fā)明中有用的局部組合物制成多種產(chǎn)品類型。這些包括，但不限于，洗劑，霜?jiǎng)z，棒劑，噴霧劑，膏劑和糊劑。這些產(chǎn)品類型可以包括幾種類型的載體系統(tǒng)，包括，但不限于，溶液，乳濁液，凝膠和固體。
可以將本發(fā)明中有用的局部組合物配制成通常包括藥物學(xué)上可接受的水溶劑或有機(jī)溶劑的溶液。術(shù)語“藥物學(xué)上可接受的水溶劑”和“藥物學(xué)上可接受的有機(jī)溶劑”指的是在其中能夠分散或溶解活性物質(zhì)的溶劑，并具有可接受的安全特性(例如，刺激和敏感特征)。合適有機(jī)溶劑的實(shí)例包括丙二醇，聚乙二醇(200-600)，聚丙二醇(425-2025)，聚乙烯吡咯烷酮，丙二醇-14丁基醚，甘油，1，2，4-丁三醇，山梨糖醇酯，1，2，6-己三醇，乙醇，異丙醇，丁二醇及其混合物。這些溶液優(yōu)選含有約0.1％至約20％，更優(yōu)選約1％至約20％，更優(yōu)選至約1％至約10％的每種活性物質(zhì)。
如果將本發(fā)明中有用的局部組合物配制成氣溶膠并以噴射應(yīng)用至皮膚上，將推進(jìn)劑加入溶液組合物中。
可以將局部組合物配制成包括潤(rùn)膚劑的溶液，潤(rùn)膚劑即用于防止或緩解干燥以及用于保護(hù)皮膚的物質(zhì)。多種合適的潤(rùn)膚劑是已知的并可以在此使用(參見，Sagarin，Cosmetics，Science and Technology，第2版，Vol.1，pp.32-43(1972))。這樣的組合物優(yōu)選含有約2％至約50％的局部藥物學(xué)上可接受的潤(rùn)膚劑。
如果將載體配制成乳濁液，優(yōu)選約1％至約10％，更優(yōu)選約2％至約5％的載體系統(tǒng)由乳化劑組成。乳化劑可以是非離子的，陰離子的或陽離子的。合適的乳化劑公開于，例如，McCutcheon’s Detergents andEmulsifiers，North American Edition，第317-324頁(yè)(1986)。
水包油型和油包水型的單相乳濁液護(hù)膚制劑，如洗液和霜?jiǎng)?，是化妝品領(lǐng)域公知的。這樣的乳濁液可以穩(wěn)定和提高活性物質(zhì)的滲透。也可以使用多相乳濁液組合物，如水包油包水型。通常，這樣的單相或多相乳濁液含有水，潤(rùn)膚劑和乳化劑作為必要組分。
另一種可以使用的乳濁液載體系統(tǒng)是微乳濁液載體系統(tǒng)。這樣的系統(tǒng)包括約9％至約15％的角鯊?fù)?；約25％至約40％的硅油；約8％至約20％的脂肪醇；約15％至約30％的聚氧乙烯山梨聚糖單脂肪酸(在商品名吐溫下可購(gòu)得)或其他非離子表面活性劑；和約7％至約20％的水。
還可以使用脂質(zhì)體制劑。這些制劑可以穩(wěn)定活性物質(zhì)，還可以提高滲透不充分的活性物質(zhì)的傳送。可以首先將活性物質(zhì)與磷脂，如二棕櫚酰磷脂酰膽堿，膽固醇和水，根據(jù)描述于Mezei & Gulasekharam，Joural of Pharmaceutics and Pharmacology，Vol.34(1982)，pp.473-474中的方法，或其改進(jìn)混合來制得這樣的組合物。用于形成脂質(zhì)體的合適組成的表皮類脂可以替代磷脂。然后將脂質(zhì)體制劑摻入一種上述的局部載體系統(tǒng)中(例如，凝膠或水包油型乳濁液)來產(chǎn)生脂質(zhì)體制劑。局部應(yīng)用脂質(zhì)體的其他組成和化妝品/藥物用途描述于Mezei，M.，“Liposome as a Skin Drug Devery System”，Topics in PharmaceuticalSciences(D.D.Berimer and P.Speiser，eds.)，Elsevier Science Publishers B.V.，New York，N.Y.，1985，pp.345-358。
如果將局部組合物配制成凝膠或美容棒，可通過將合適量的增稠劑加入霜?jiǎng)┗蛳磩┲衼砼渲七@樣的組合物。
還可以將局部組合物配制成化妝品，如粉底。粉底是基于溶液或洗液的，具有合適量的增稠劑，色素和香料。
組合物中還可以存在各種水溶性物質(zhì)。這些包括潤(rùn)濕劑，蛋白質(zhì)和多肽以及防腐劑。此外，在此有用的局部組合物可以含有常規(guī)的化妝品佐劑，如染料，遮光劑(例如，二氧化鈦)，色素和香料。
本發(fā)明中有用的局部組合物還可以包括安全而有效量的滲透促進(jìn)劑。滲透促進(jìn)劑的優(yōu)選含量為組合物的約1％至約5％。有用的滲透增強(qiáng)劑實(shí)例描述于US6,068,834中。組合物中還可包括其他常規(guī)的護(hù)膚產(chǎn)品添加劑。例如，可以使用膠原，透明質(zhì)酸，彈性蛋白，水解產(chǎn)物，櫻草油，霍霍巴油，表皮生長(zhǎng)因子，大豆皂草苷，粘多糖，及其混合物。
理想的是本發(fā)明的組合物中包括一種或多種防曬劑。多種常用的防曬劑公開于，例如，Cosmetics，Science and Technology，第2版(1972)，Vol.1，第VIII章，第189頁(yè)及以下的。還參見US6,068,834。
防曬劑必須與活性物質(zhì)相容。組合物優(yōu)選包括約1％至約20％，更優(yōu)選約2％至約10％的防曬劑。提取物含量將根據(jù)所選的防曬劑和所需的防曬指數(shù)(SPF)而改變。
還可以將試劑加入本發(fā)明的任一種組合物中來提高這些組合物的皮膚直接性，尤其來提高它們對(duì)水洗或擦拭的抗性。提供該益處的優(yōu)選試劑是乙烯和丙烯酸的共聚物。含有這些共聚物的組合物公開于U.S.4,663,157中。
本發(fā)明涉及抑制哺乳動(dòng)物通常是人皮膚中黑色素產(chǎn)生的方法。一實(shí)施方案中，這樣的方法包括將安全而有效量的本發(fā)明產(chǎn)品或組合物給予皮膚或其部位?；钚晕镔|(zhì)的含量和應(yīng)用的頻率將根據(jù)皮膚的初始狀況和所需的最終結(jié)果而改變。通常，以足以明顯增白皮膚的數(shù)量和時(shí)間段來給予組合物。
可以使用低于毒性水平的任何劑量，因此考慮對(duì)于特定劑型，尤其是局部劑型，“劑量”是提供所需效果的任何數(shù)量，并且由于應(yīng)用頻率和所用的數(shù)量，所述數(shù)量可以非常大以至最大有效數(shù)量是無關(guān)緊要的。
施加局部組合物中安全而有效量的活性物質(zhì)，通常為每次應(yīng)用約1μg至約1mg每cm2皮膚，優(yōu)選為每次應(yīng)用約2μg至約800μg/cm2皮膚，更優(yōu)選約30μg至約700μg/cm2皮膚，最優(yōu)選約75μg至約250μg/cm2皮膚。應(yīng)用的頻率通常為約一天四次至約一周兩次，更優(yōu)選約一天三次至約隔天一次，更優(yōu)選至少每天兩次。通常優(yōu)選至少一次應(yīng)用發(fā)生在晚上。
全身組合物活性劑可以結(jié)合藥物學(xué)上可接受的載體或稀釋劑來產(chǎn)生全身劑型。適用于這樣組合物的藥物學(xué)上可接受的稀釋劑或載體是藥學(xué)領(lǐng)域公知的。本發(fā)明的全身劑型通常含有1至90％重量的活性物質(zhì)，如1至50％重量的活性物質(zhì)，更優(yōu)選至少10或20wt％的活性物質(zhì)。
全身劑型可以包括固體劑型如藥物的片劑，硬明膠膠囊，軟明膠膠囊，散粉和微膠囊?；蛘撸梢园ㄒ后w劑型，如水溶液或非水溶液，乳濁液或懸浮液。
本發(fā)明的組合物優(yōu)選是用于口服的固體劑型。優(yōu)選以單位劑型制得固體劑型，如片劑和膠囊的形式。可以通過已知的方法在崩解劑例如玉米淀粉，和潤(rùn)滑劑例如硬脂酸鎂的存在下，將活性物質(zhì)組合與惰性稀釋劑如磷酸鈣混合，并將混合物成片，來制得合適的片劑。如果需要，可以通過已知方法給這樣的片劑提供腸溶衣，例如通過使用醋酸鄰苯二甲酸纖維素。相似地，膠囊，例如，硬或軟明膠膠囊，含有活性物質(zhì)組合(任選地為微珠形式)，含有或不含添加的賦形劑，可以通過常規(guī)方法制得，且如果需要，以已知的方式提供腸溶衣?？梢砸员绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來配制片劑，使得獲得本發(fā)明化合物的受控釋放。
本發(fā)明劑型的受控釋放形式包括快速釋放制劑如可溶性顆?；蛉诨锾畛涞目焖籴尫拍z囊，延遲釋放制劑如提供腸溶衣例如醋酸鄰苯二甲酸纖維素腸溶衣的片劑，尤其是持續(xù)釋放制劑。多種持續(xù)釋放的制劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。通常，可以將活性物質(zhì)組合包膠于釋放延遲的包衣內(nèi)，例如，纖維素醚和丙烯酸酯的共聚物，或可以結(jié)合到小顆粒如，例如，離子交換樹脂珠子上。或者，將活性物質(zhì)組合摻入含有釋放延遲劑的基質(zhì)中，所述釋放延遲劑如親水性膠例如黃原膠，纖維素衍生物，例如，羥丙基甲基纖維素，或多糖，蠟或塑料材料。
可以將活性物質(zhì)組合配制成其中兩種活性成分保持分開的固體劑型。例如，劑型可以是雙層片劑，其中活性成分包含于不同的層中?？梢耘渲撇煌膶邮沟锰峁┟糠N活性物質(zhì)的最佳釋放特征。
液體填充組合物例如粘性液體填充物，液體糊狀填充物或觸變液體填充物也適于口服給予?？梢酝ㄟ^將活性物質(zhì)組合與特定的天然植物油脂肪酸的酯，例如GelucireTM，從Gattefosse獲得，混合來獲得融化物填充的組合物以提供各種釋放速率。合適的融化物填充的膠囊包括10至80％的活性物質(zhì)和20％至90％的脂肪酸酯賦形劑，所述脂肪酸酯包括一種或多種天然植物油脂肪酸的多元醇酯和甘油三酯。
優(yōu)選的口服液體組合物包括1至10wt％的活性物質(zhì)和1至50wt％的稀釋劑，剩余部分由無菌水構(gòu)成。任意地，組合物可以含有懸浮劑，增稠劑，助溶劑如乙醇和/或防腐劑。合適的稀釋劑包括甜味劑例如山梨糖醇，木糖醇或蔗糖。合適的懸浮劑或增稠劑包括纖維素膠，瓊脂或天然膠，例如黃原膠。可以加入本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的調(diào)味劑或其他口味遮掩劑，例如糖精，糖精鈉，acesulpham K或阿斯巴甜。
通過將活性物質(zhì)與已知的用于這樣給予的藥物形式混合來制得適于非腸道給予的劑型，例如活性物質(zhì)在合適溶劑如鹽水中的無菌懸浮液或無菌溶液。
優(yōu)選的給予方式是口服。
通常，以明顯增白皮膚的足夠量和足夠的時(shí)間段來給予所述劑型。
給予的活性物質(zhì)的量取決于組合物中化合物的生物利用率，尤其是使用口服給予時(shí)。然而，通常，本發(fā)明化合物的劑量為約0.01mg/kg體重至約100mg/kg，優(yōu)選約0.1至約30mg/kg體重。組合物的量取決于該制劑中化合物的百分比，其是每劑所需化合物量、化合物穩(wěn)定性、釋放特征和其他藥物參數(shù)的函數(shù)。通常給予的劑量為每周一次或兩次至每日一次或兩次。
認(rèn)為所述的給予途徑和劑量只是指導(dǎo)，因?yàn)橛薪?jīng)驗(yàn)的醫(yī)師能夠容易地決定任一特定個(gè)體的最佳給予途徑和劑量。
全身給予的另一種方式包括在食品中給予任一種上述組合物，因此不必使用藥物學(xué)上可接受的載體。
如在此所用的，術(shù)語“食品”包括如所指的食品和飲料。如所指的食品包括涂抹料，乳制品(包括牛奶和酸奶)，甜點(diǎn)，方便食品/快餐，早餐谷類食品和谷物棒，熟肉，面包和冷凍甜食如冰淇淋，冰糕和清涼果汁飲料以及酸奶冰淇淋。食品還包括膳食/營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。合適的飲料包括茶，茶風(fēng)味的飲料，咖啡，軟飲(例如，充了碳酸氣的檸檬水等)和果汁。
通常用本發(fā)明的活性成分補(bǔ)充食品，使得它們含有的活性物質(zhì)數(shù)量比通常它們所含的高。
使用分開給予時(shí)，可以在大概相同的時(shí)間或不同的時(shí)間給予不同的劑型。例如，全身劑型可以和食品一起給予或作為食品給予，而局部劑型可以在睡前例如作為晚霜給予。
用途本發(fā)明的產(chǎn)品和組合物可用于調(diào)控哺乳動(dòng)物尤其是人皮膚中的黑色素產(chǎn)生。更具體地，它們可以用于提高皮膚中淺黑色素深黑色素的比例，例如，通過抑制皮膚中深黑色素(真黑素)的產(chǎn)生和/或提高皮膚中淺黑色素的產(chǎn)生。因此，本發(fā)明的組合物可用于誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物如人的皮膚增白。提高皮膚中淺黑色素深黑色素比例而不是簡(jiǎn)單抑制兩種黑色素產(chǎn)生的優(yōu)勢(shì)，在于產(chǎn)生了更好的膚色。通常，本發(fā)明的方法用于美容目的。
此外，老年斑和高度色素沉積的部位，影響了膚色并呈現(xiàn)不均勻的外觀。通過提高淺黑色素部分，可以通過提高老年斑中淺黑色素對(duì)深黑色素的比例而獲得更均勻的膚色。這隨后使皮膚呈現(xiàn)整體更淺的外觀。
優(yōu)選將淺黑色素深黑色素的比例相對(duì)于對(duì)照提高至少兩倍(以相對(duì)于對(duì)照的淺黑色素的百分比除以相對(duì)于對(duì)照的深黑色素的百分比來測(cè)量，例如，淺黑色素提高至對(duì)照的150％，而深黑色素降低至對(duì)照的50％，則相對(duì)于對(duì)照比例為3∶1)。
現(xiàn)在參照以下的實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，這些實(shí)施例只是說明性的且是非限制性的。
實(shí)施例這些實(shí)施例中，使用可購(gòu)得的MelanodermTM系統(tǒng)，測(cè)試評(píng)價(jià)各種試劑影響深黑色素和淺黑色素水平的能力。
MelanodermsTM的處理方案MelanodermTMMatTeks系統(tǒng)包括正常的，源自人的表皮角質(zhì)化細(xì)胞(NHEK)和黑素細(xì)胞(NHM)，已經(jīng)將其培養(yǎng)形成多層的，高度分化的人表皮模型。共培養(yǎng)物中的NHM經(jīng)歷自發(fā)的黑素形成導(dǎo)致具有不同色素水平的組織。使用無血清培養(yǎng)基來生產(chǎn)該組織，沒有使用黑素形成的人工刺激物如TPA和IBMX。培養(yǎng)物在空氣-液體交界面的細(xì)胞培養(yǎng)嵌入物上生長(zhǎng)，使得可進(jìn)行待測(cè)試試劑的模擬局部應(yīng)用。將試劑引入培養(yǎng)基中來模擬全身應(yīng)用。因此，該模型提供了有用的體外方式來評(píng)價(jià)為調(diào)控皮膚色素沉積而設(shè)計(jì)的試劑。其還使得我們可以比較全身給予對(duì)局部給予的效果。
傳送時(shí)，按照MatTek’s的實(shí)驗(yàn)方案使用無菌技術(shù)，將melanoderms(MatTek MEL-300-B)放置于在含有5ml預(yù)熱維持培養(yǎng)基(EPI-100-MM-PRF)的6孔平板中的金屬環(huán)支持物上。在37℃和4％CO2培養(yǎng)過夜使得melanoderms完全復(fù)原并平衡。一旦置于這些條件下，MEL-300組織將經(jīng)受黑素形成和分化。
在第二天早晨開始處理。將待測(cè)試的試劑溶解于合適的溶劑中并以預(yù)先確定的對(duì)黑素細(xì)胞毒性的最終濃度加入溫?zé)岬呐囵B(yǎng)基中。每次改變培養(yǎng)基，從melanoderms吸出用過的培養(yǎng)基并保存用來測(cè)試毒性(Lactate Dehydrogenase(Promega)和白細(xì)胞介素-1釋放(R&D系統(tǒng))并用加上測(cè)試試劑的新鮮劑量培養(yǎng)基替換，不管是否在melanoderm的培養(yǎng)基內(nèi)。將melanoderms返回培養(yǎng)箱中。每48小時(shí)重復(fù)該處理方案，直至觀察到對(duì)照和測(cè)試試劑之間相對(duì)的變黑差異。
表1
在觀察變黑的差異時(shí)，用攝影來記錄微觀和宏觀變黑。melanoderm組織的收集包括從塑料支持物上切除組織，接著相對(duì)于未處理的組織，進(jìn)行對(duì)存在的黑色素的定量后處理。
Melanoderm組織的黑色素的選擇性增溶(1)定量堿可溶性的黑色素(淺黑色素)從塑料支持物上切下Melanoderm樣品并測(cè)量組織的濕重。將200μl的1M NaOH/8M脲加入melanoderm樣品中，將組織在微離心管中均質(zhì)。將樣品在RT斷斷續(xù)續(xù)地渦旋混合30分鐘來釋放可溶性黑色素。將樣品在13,000rpm離心10分鐘，并將含有可溶性黑色素的上清液轉(zhuǎn)移至新管中。
通過加入200μl氯仿，然后劇烈混合1分鐘從上清液中提取蛋白質(zhì)。通過在13,000rpm離心10分鐘來將各相分離。將150μl上清液加入微量滴定板(雙份)中并確定340nm的OD。
(2)堿不溶性黑色素(深黑色素)的定量將1M NaOH加入剩余的含有不溶性黑色素的沉淀中，并將樣品渦旋一分鐘。然后將樣品在37℃水浴中培養(yǎng)96小時(shí)，每日進(jìn)行混合來釋放不溶性黑色素。將樣品與200μl氯仿在13,000rpm離心10分鐘，并將190μl上清液轉(zhuǎn)移至新管中。將上清液再次離心并將150μl轉(zhuǎn)移至微量滴定板來用于分析340nm處的吸收。
絕對(duì)黑色素濃度的計(jì)算從之前測(cè)定的淺黑色素標(biāo)準(zhǔn)曲線作為實(shí)際黑色素量來計(jì)算絕對(duì)黑色素x＝(y-0.003)/4.76423(其中x＝黑色素的濃度，且y＝340nm處的光密度)。
對(duì)于深黑色素，曲線是x＝(y-0.00553)/3.70312。
結(jié)果表2
我們已經(jīng)表明用Pycnogenol(10μg/ml)+維生素C(30μg/ml)+維生素E(1μM)處理melanoderms能夠抑制深黑色素產(chǎn)生并提高淺黑色素對(duì)深黑色素的比例，因此能夠降低或?qū)股爻林^度和/或誘導(dǎo)皮膚增白。
然而，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)給予方式是重要的。當(dāng)Pycnogenol(10μg/ml)+維生素C(30μg/ml)+維生素E(1μM)全部局部給予時(shí)，處理看來似乎對(duì)細(xì)胞是毒性的。這可能是由于組分局部給予且是促氧化劑(prooxidant)。當(dāng)維生素C或維生素C和Pycnogenol的組合局部給予而剩余的治療劑全身給予時(shí)，也觀察到顯著的毒性。
然而，當(dāng)Pycnogenol(10μg/ml)+維生素C(30μg/ml)+維生素E(1μM)全部全身給予時(shí)(即，在培養(yǎng)基中)，存在顯著降低的深黑色素產(chǎn)生和提高的淺黑色素產(chǎn)生(獲得了淺黑色素對(duì)深黑色素比例的提高)。一種可替換的給予方式尤其有效當(dāng)Pycnogenol(10μg/ml)+維生素C(30μg/ml)全身給予而維生素E(1μM)局部給予時(shí)，淺黑色素對(duì)深黑色素的比例顯著提高。
用其他類黃酮替代Pycnogenol來進(jìn)行測(cè)試，所述其它類黃酮即橙皮素，一種黃烷酮和櫟精，一種黃酮醇，獲得了相似的結(jié)果
涉及以上單個(gè)部分的本發(fā)明的各種特征和實(shí)施方案可以加以必要的變更適當(dāng)?shù)貞?yīng)用至其他部分。因此，一個(gè)部分中的特定特征可以適當(dāng)?shù)亟Y(jié)合另一部分中的特定特征。
上述說明書中提及的所有出版物在此引入作為參考。所述的本發(fā)明的方法和產(chǎn)品的各種改進(jìn)和改變是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的，并沒有脫離本發(fā)明的范圍。盡管已經(jīng)結(jié)合特定的優(yōu)選實(shí)施方案描述了本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)理解所要求的本發(fā)明不應(yīng)當(dāng)不適當(dāng)?shù)厥芟抻谶@樣的特定實(shí)施方案。實(shí)際上，相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的所述本發(fā)明實(shí)施方式的各種改進(jìn)在以下權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.皮膚增白產(chǎn)品，包括組分(a)類黃酮、(b)維生素C和(c)維生素E，其中至少組分(b)以適于全身給予的形式來提供，和其他組分以適于局部給予的形式來提供。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的皮膚增白產(chǎn)品，其中(a)和(b)以適于全身給予的形式來提供，和(c)以適于局部給予的形式來提供。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的皮膚增白產(chǎn)品，其中組分(a)、(b)和(c)以適于全身給予的形式來提供。
4.根據(jù)之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的皮膚增白產(chǎn)品，其中適于全身給予的形式是口服劑型。
5.根據(jù)之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的皮膚增白產(chǎn)品，其中作為植物提取物來提供類黃酮。
6.根據(jù)之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的皮膚增白產(chǎn)品，其中類黃酮選自櫟精，橙皮素，葡萄籽提取物和法國(guó)海岸松樹皮提取物。
7.皮膚增白產(chǎn)品，含有用于口服的第一組合物，該第一組合物包括類黃酮和維生素C，和用于局部給予的第二組合物，該第二組合物包括維生素E。
8.提高哺乳動(dòng)物皮膚中淺黑色素對(duì)深黑色素比例的方法，該方法包括將有效量的(a)類黃酮、(b)維生素C和(c)維生素E給予所述的哺乳動(dòng)物，其中至少組分(b)是全身給予，和其他組分局部給予。
9.提高哺乳動(dòng)物皮膚中淺黑色素對(duì)深黑色素比例的方法，該方法包括將有效量的(a)類黃酮、(b)維生素C和(c)維生素E給予所述的哺乳動(dòng)物，其中組分(a)和(b)全身給予，和組分(c)局部給予。
10.提高哺乳動(dòng)物皮膚中淺黑色素對(duì)深黑色素比例的方法，該方法包括將有效量的(a)類黃酮、(b)維生素C和(c)維生素E全身給予所述的哺乳動(dòng)物。
11.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的產(chǎn)品，其用于提高哺乳動(dòng)物皮膚中淺黑色素對(duì)深黑色素的比例。
12.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的產(chǎn)品用于提高哺乳動(dòng)物皮膚中淺黑色素對(duì)深黑色素比例的用途。
13.調(diào)控哺乳動(dòng)物皮膚中黑色素產(chǎn)生的方法，其包括將(a)類黃酮、(b)維生素C和(c)維生素E給予所述的哺乳動(dòng)物，其中至少組分(b)是全身給予，和其他組分局部給予。
14.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的產(chǎn)品，其用于調(diào)控哺乳動(dòng)物皮膚中黑色素的產(chǎn)生。
15.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的產(chǎn)品用于調(diào)控哺乳動(dòng)物皮膚中黑色素的產(chǎn)生的用途。
全文摘要
提供了一種皮膚增白組合物，其包括組分(a)類黃酮、(b)維生素C和(c)維生素E，其中至少組分(b)以適于全身給予的形式來提供，和其他組分以適于局部給予的形式來提供。
文檔編號(hào)A61K8/49GK1905855SQ200480040913
公開日2007年1月31日 申請(qǐng)日期2004年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月24日
發(fā)明者R·L·查爾斯尼紐沙姆, P·R·耶茨 申請(qǐng)人:荷蘭聯(lián)合利華有限公司