專利名稱：治療或預(yù)防肥胖和胰島素抗性病癥的組合物的制作方法
治療或預(yù)防肥胖和胰烏素抗性病癥的組合物 相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2003年12月29日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)no. 60/533,712和2004年7月16日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)no. 60/588,643 的優(yōu)先權(quán)；在此全文引入這兩個(gè)申請(qǐng).背景肥胖是一種慢性狀況，其特征在于體重指數(shù)(BMI)超過(guò)25.先 天和環(huán)境因素，如運(yùn)動(dòng)和飲食習(xí)慣，都導(dǎo)致該疾病.例如，已經(jīng)證明 一種激素，即瘦蛋白，參與脂肪積累并且調(diào)節(jié)飲食習(xí)慣.肥胖的一些 動(dòng)物模型是由瘦蛋白和/或瘦蛋白受體基因中的突變導(dǎo)致.除了影響個(gè) 體的生活方式，肥胖可以導(dǎo)致多種并發(fā)癥和疾病，包括胰烏素抗性、 II型糖尿病、膽囊疾病、高血壓、心血管疾病、高脂血癥、睡眠呼吸 障礙、冠狀動(dòng)脈疾病、膝骨關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、不育、乳腺癌、子宮內(nèi)膜 癌、結(jié)腸癌和下背痛.糖尿病是這樣一種疾病，它表現(xiàn)出由于顯著高的血糖或酮酸中毒 導(dǎo)致的急性癥狀，或由于長(zhǎng)期高血糖狀態(tài)或糖耐重低減導(dǎo)致的慢性 的、普遍的代謝異常.先天和環(huán)境因素，如運(yùn)動(dòng)和飲食習(xí)慣，都導(dǎo)致 該疾病.糖尿病的病因是胰烏素產(chǎn)生陣礙、分泌陣礙或分泌的胰烏素 的活性和敏感性降低.糖尿病粗分為以下兩種類型胰烏素依賴性糖 尿病(也稱作I型糖尿病)和非胰島素依賴性糖尿病(也稱作II型糖 尿病).肥胖患者中II型糖尿病的發(fā)病率顯著增加.糖尿病的治療通常涉及抑制患者的食欲.盡管有許多抑制食欲的 藥物(鹽酸安非拉嗣、嗎吲哚、奧利司他、苯雙甲嗎啡、苯丁胺、西 布茶明)，這些化合物并不是在所有受試者中都有效，或者效果可能 是有限的.因此，需要糖尿病的新療法.糖尿病的許多療法是公知的，包括口服降糖刑，如增加胰島素分 泌的橫脲類(例如，甲苯磺丁脲、氯磺丙脲和格列苯脲)、增加葡萄 糖攝取和利用的雙胍類(例如，二甲雙胍和丁雙胍)，和a-糖苷醉抑 制劑(例如，阿卡波糖和伏格列波糖).此外，噻唑烷二酮類，如 troglitazone、羅格列嗣和吡格列稱，也被用于改善胰烏素抗性.但是，漆唑烷二稱類攝取通常伴隨體重增長(zhǎng).因此，仍然需要更有效的糖尿 病療法.目前，美國(guó)分別有大約8%和15%的成人是糖尿病或肥胖.隨著 受糖尿病，特別是II型糖尿病和肥胖影響的個(gè)體數(shù)目增加，非常需要 預(yù)防和治療這些狀況的藥物.概述此處提供了治療或預(yù)防受試者中肥胖和/或胰烏素抗性病癥，如糖 尿病的方法.在一種實(shí)施方案中，該方法包括給有需要的受試者施用 治療有效童的增加sirtuin,如SIRT1或Sir2的活性和/或蛋白水平的 試劑.所述試刑可以是激活sirtuin的化合物，或其鹽或前藥.激活 sirtuin的化合物優(yōu)選刺激人類Sir2，即，SIRT1蛋白活性.激活sirtuin 的化合物優(yōu)選是具有選自式1 一 18的結(jié)構(gòu)式的化合物，或其鹽或前藥. 激活sirtuin的化合物可以是黃稱類、寬類、黃烷酮類、異黃嗣類、 兒茶酚類、查耳嗣類、單寧類和花色素類，或其類似物和衍生物.激 活sirtuin的化合物可以選自白蓁,醇、紫鉚因、piceatannol、異甘草 素、非瑟稱、籐黃菌素、3，6，3，，4'-四羥基黃嗣、櫟精，及其類似物和 衍生物，優(yōu)選的激活sirtuin的化合也增加5'-AMP-激活的蛋白激醉 (AMPK)的活性和/或蛋白水平.在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括給受試者施用治療有效量 的笫二試劑，所述笫二試刑(i)增加S'-AMP-激活的蛋白激酶(AMPK) 的活性和/或蛋白水平；(ii)增加sirtuin的活性和/或蛋白水平；(iii)是 抗糖尿病劑；或(iv)是抗肥胖刑.此處也提供了促進(jìn)受試者的體重增長(zhǎng)，例如，治療惡病質(zhì)的方法， 包括給有需要的受試者施用治療有效量的減少sirtuin，如SIRT1或 Sir2的活性和/或蛋白水平的試刑.抑制sirtuin的化合物優(yōu)選是選自 式19-21所示化合物的化合物，或其鹽或前藥.優(yōu)選的抑制sirtuin 的化合物也減少或抑制5'-AMP-激活的蛋白激酶(AMPK)的活性和/ 或蛋白水平.在某些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括給受試者施用治 療有效重的笫二試刑，所述第二試刑(i)減少sirtuin的活性和/或蛋 白水平；(ii)減少S'-AMP-激活的蛋白激醉(AMPK)的活性和/或蛋 白水平；或(iii)是促進(jìn)體重增長(zhǎng)的試劑.此處也提供了單獨(dú)的或與笫二試劑組合的激活sirtuin的化合物在制備用于治療或預(yù)防胰烏素抗性病癥的藥物中的用途，以及單獨(dú)的或與笫二試劑組合的抑制sirtiiin的化合物在制備用于促進(jìn)受試者的體重 增長(zhǎng)的藥物中的用途. 附困簡(jiǎn)述困l是一系列光學(xué)顯徵鏡照片，描述了如Nile Red染色的減少所 示，不同濃度的激活sirtuin的化合物白蘆藜醇誘導(dǎo)脂肪動(dòng)員的效果. 困2是一系列光學(xué)顯微鏡照片，描述了白蘆藜醇在胰島素信號(hào)傳遞破壞的突變?nèi)湎x中誘導(dǎo)脂肪動(dòng)員的效果.困3是一系列光學(xué)顯徵鏡照片，描述了抑制sirtuin的化合物煙耽 胺對(duì)脂肪積累的影響.A.白蘆藜醇刺激野生型動(dòng)物中的脂肪動(dòng)員. 用Nile Red對(duì)單獨(dú)的賦形刑或10^M、 50pM和100|xM白,藜醇存在 下的蠕蟲生長(zhǎng)進(jìn)行染色.B.煙跣胺促進(jìn)野生型動(dòng)物中的脂肪積累. 示出了單獨(dú)的PBS、 lmM、 5mM和lOmM煙酰胺存在下的Nile Red 染色.C.下困，白,藜醇和煙耽胺對(duì)脂肪含量有相反的影響.通過(guò) Nile Red染色評(píng)估的單獨(dú)的賦形劑、白,藜醇(25jliM )、煙酰胺(5mM) 或白,攀醇25|nM和煙耽胺SmM的組合對(duì)脂肪積累的影響.閨4a-b是一系列光學(xué)顯微鏡照片，顯示了用或不用Sir2.1 RNAi 處理，并且在白,審醇存在或不存在的條件下溫育的野生型秀麗新桿 線蟲的脂肪含量.困5Aa-d表示秀麗新桿線蟲的一系列光學(xué)顯微鏡照片，所述秀麗 新桿線蟲在白聲蓁醇存在或不存在的條件下與空RNAi栽體(困片a); AMPK RNAi (閨片b ); COT RNAi (困片c )和DAF-16 RNAi (困 片d) —起溫育.困5B表示困5A中所示秀麗新桿線蟲中Nile-Red染色的量.困6表示在存在或不存在(對(duì)照)500hM AICAR、賦形劑2 (DMSO)、 12.5jLiM、 25pM或50pM白,藜醇的條件下溫育，并且 對(duì)AMPK、 ACC或微管蛋白的存在進(jìn)行染色的秀麗新桿線蟲的蛋白 的Western印跡.閨7表示在存在或不存在(對(duì)照)500^M AICAR、 DMSO、 100 nM、 500 nM、 2.5jaM、 12.5 |liM、 25 或50 nM白,幕醇的條件 下溫育，并且對(duì)P-ACC、 P-AMPK、 AMPK或微管蛋白的存在進(jìn)行 染色的蛋白的Western印跡.困8是Western印跡，顯示用乙醇或白,幕醇處理，并且對(duì)P-ACC、 SIRT1或微管蛋白的存在進(jìn)行染色的3T3-L1脂肪細(xì)胞中ACC 的礴酸化.在標(biāo)有"SF"的泳道中，在收獲前將細(xì)胞置于無(wú)血清的培 養(yǎng)基中過(guò)夜.困9是Western印跡，顯示用乙醇或白聲蓁醇處理，并且對(duì)P-ACC、 SIRT1或微管蛋白的存在進(jìn)行染色的HEP3B人類肝細(xì)胞瘤細(xì) 胞中ACC的礴酸化.在左邊的泳道中，SIRT1是敲除的.在右邊的 4個(gè)泳道中，SIRTl是超量表達(dá)的.圖IO是來(lái)自用對(duì)照(GFP)逆轉(zhuǎn)錄病毒、SIRT1、 STRTlsiRNA 或SIRT1顯性失活(AHY)感染的3T3-L1脂肪細(xì)胞的蛋白的Western 印跡.在AICAR、乙醉或白蘆藜醇存在下溫育細(xì)胞，并且對(duì)P-ACC、 ACC、 SIRT1、 P-AMPK、 AMPK、微管蛋白或GAPDH的存在進(jìn)行染色.印跡的表右邊示出了刑量反應(yīng)曲線.

圖11是Western印跡，顯示在AMPK激酶LKB1存在或不存在 的條件下白蘆藜醇的作用.在AICAR、乙醇、50、 100、 200 |liM白 ,幕醇的存在下溫育小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，并且如左側(cè)所示，對(duì)P-ACC、 P-AMPK、 AMPK或微管蛋白的存在進(jìn)行染色.困12顯示白,藜醇抑制哺乳動(dòng)物脂肪生成過(guò)程中的脂質(zhì)積累.A. 在賦形刑(乙醇)中的25|LiM、12.5 viM或0nM白蘆藜醉存在下，3T3-L1 和NIH3T3細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞.分化10天后，固定細(xì)胞，并且用 Oil red O進(jìn)行染色.從染色的細(xì)胞中提取Oil red O，并且通過(guò)測(cè)量 520nm的吸光度而進(jìn)行定量.B.Oil red O定量表示為相對(duì)于用OjnM 白,蓁醇處理的3T3-L1樣品的改變倍數(shù).困13顯示白,禁醇抑制脂肪生成，并且該作用被PPARy挽救， 在白,藜醇處理的3T3-L1細(xì)胞中檢測(cè)到了 PPARy表達(dá)的顯著減少. 在一個(gè)分開的實(shí)驗(yàn)中，在編碼g印或PPARY和賦形刑(乙醇)中的 25pM、 12.5 pM或0nM白,蕃醇存在下，生長(zhǎng)3T3-L1細(xì)胞，分化8 天后，固定細(xì)胞，并且用Oil redO進(jìn)行染色，困14顯示白,藜醇抑制脂質(zhì)積累，并且該作用被脫乙跣酶缺陷 的SIRT1部分挽救.在編碼gfp、 SIRT1或脫乙耽蘇缺陷的SIRT1的 病毒存在下生長(zhǎng)NIH3T3細(xì)胞，在賦形刑(乙醇)中的25|iM、 12.5 |LiM 或OjaM白聲幕醇存在下，細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞.分化8天后，固定細(xì)胞，并且用Oil red O進(jìn)行染色.從染色的細(xì)胞中提取Oil red O， 并且進(jìn)行定量.困15顯示多酚對(duì)秀麗新桿線蟲脂肪儲(chǔ)存的影響.將 LI期的秀麗新桿線蟲暴露于Nile Red染料和賦形刑(A， 20% v/v DMSO，溶于PBS緩沖液)或100 mM白,藜醇、紫鉚因、非瑟嗣、 piceatannol或櫟精48小時(shí).在每一困像中，頭朝向困片底部，困16顯示櫟精對(duì)秀麗新桿線蟲脂肪儲(chǔ)存的影響.將LI期的秀麗 新桿線蟲暴露于Nile Red和賦形刑(20% v/v DMSO)或10pM、 50|uM 和100inM櫟精48小時(shí).在每一困像中，頭朝向困片底部.困17顯示非瑟嗣對(duì)秀麗新桿線蟲脂肪儲(chǔ)存的影響.將L1期的秀 麗新桿線蟲暴露于Nile Red和賦形劑(A， 20% v/v DMSO)或10|uM、 50nM和100inM非瑟稱48小時(shí).在每一困像中，頭朝向困片底部.田18顯示3，5-二鞋-4'-碟甲基-反式-寬對(duì)秀麗新桿線蟲脂肪儲(chǔ)存 的影響.將Ll期的動(dòng)物用Nile Red染料和(A) 1% v/v DMSO或(B) 3，5-二羥-4'-碟甲基-反式-寬處理24小時(shí).在每一困像中，頭朝向困 片底部.困19比較了白,藜醉和順式苜(一種白,藜醇類似物)對(duì)秀麗 新桿線蟲脂肪儲(chǔ)存的影響.將LI期的動(dòng)物暴露于Nile Red染料和(A) 2.5% v/v DMSO, (B) 100 nM白,幕醇或(C)順式繭48小時(shí).在 每一困像中，頭朝向困片底部.圖20顯示了白,幕醇對(duì)TNF-a處理的胰烏素抗性的脂肪細(xì)胞的 作用.第1道，無(wú)處理；第2道，TNF-ot處理；笫3道，TNF-a + 4^iM 羅格列嗣(陽(yáng)性對(duì)照)；笫4道，TNF-a + 5|LiM白蘆藜醇；和笫5道， TNF-a+15pM白聲幕醇.詳述定義此處使用的以下術(shù)語(yǔ)和短語(yǔ)具有下文所示的含義.除非另外定 義，此處使用的科學(xué)術(shù)語(yǔ)與本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義相同.單數(shù)形式"一個(gè)"、"一種"和"該"，包括復(fù)數(shù)含義，除非上下文 中明確指出相反的含義.此處用到的術(shù)語(yǔ)"試刑"表示化學(xué)化合物、化學(xué)化合物的混合物、 生物大分子(如核酸、抗體、蛋白或其部分，如肽)或從生物材料， 如細(xì)菌、植物、真菌或動(dòng)物(特別是哺乳動(dòng)物)細(xì)胞或組織制備的提取物.所迷試刑的活性可以使其適合作為"治療刑"，治療刑是在受 試者中局部或系統(tǒng)起作用的生物、生理或藥理活性物質(zhì)."激活sirtuin"是指使sirtuin蛋白的至少一種活性增加，優(yōu)選 增加至少大約10%、 50%、 100%或更多."激活sirtuin蛋白"是指 產(chǎn)生激活的sirtuin蛋白，即，能夠以增加至少大約10%、 50%、 2倍 或更多的活性行使其至少一種生物活性的sirtuin蛋白的作用.sirtuin 蛋白的生物活性包括脫乙酰作用，如使組蛋白和p53脫乙醜；延長(zhǎng)壽 命；增加基因組穗定牲；使轉(zhuǎn)錄沉默；和控制親代細(xì)胞和后代細(xì)胞之 間氣化的蛋白的分離."激活化合物"、"激活sirtuin的化合物"或"sirtuin激活劑"是 指激活sirtuin蛋白或刺激或增加sirtuin蛋白的至少一種活性的化合 物.在某些實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物可以具有選自式1-18 的結(jié)構(gòu)式，"抑制sirtuin"是指使sirtuin蛋白的至少一種活性減少，優(yōu)選 減少至少大約10%、 50%、 100%或更多."抑制性化合物"或"抑制化合物"或"抑制sirtuin的化合物" 是指抑制sirtuin蛋白的至少一種活性的化合物.在某些實(shí)施方案中， 抑制sirtuin的化合物可以具有選自式19 - 21的結(jié)構(gòu)式.當(dāng)提到化合物時(shí)，"天然存在的形式"表示以其天然被發(fā)現(xiàn)的形 式，如組合物形成存在的化合物.例如，由于白聲攀醇可在紅酒中被 發(fā)現(xiàn)，其以天然存在的形式存在于紅酒中.例如，如果化合物從天然 與化合物一起存在的至少一些其它分子純化或分離，則化合物不是天 然存在的形式."天然存在的化合物"是指可以在自然中發(fā)現(xiàn)的化合 物，即，不是由人類設(shè)計(jì)的化合物.天然存在的化合物可以人工或自 然制備，"sirtuin蛋白"是指sirtuin脫乙酰酶蛋白家族，或優(yōu)選Sir2家 族的成員，其包括酵母Sir2 (GenBank獲取號(hào)PS3685)、秀麗新桿線 蟲Sir-2.1 (GenBank獲取號(hào)NP一501912)以及人SIRT1 ( GenBank 獲取號(hào)NM—012238和NP—036370 (或AF083106),分別如SEQ ID NOs: 1和2所示)和SIRT2 ( GenBank獲取號(hào)NM0_30593和 AF083107)蛋白.其它家族成員包括四種類外的酵母Sir2樣基因， 稱作"HST基因"(Sir2的同源物)HST1、 HST2、 HST3和HST4,并且還包括5種其它的人類同源物hSIRT3、 hSIRT4、 hSIRT5、 hSIRT6 和hSIRT7 ( Brachmann et al. (1995) Genes Dev. 9: 2888 and Frye et al. (1999) BBRC 260: 273).優(yōu)選的sirtuin是與SIRT1，即hSIRTl 和/或Sir2的相似性比與SIRT2的相似性高的那些，如以下成員，它 們具有SIRT1中存在，但SIRT2中不存在，如SIRT3具有的N末端 序列的至少一部分.Sirtuin的"直接激活劑"是通過(guò)與sirtuin結(jié)合而激活sirtuin的 分子.Sirtuin的"直接抑制刑"是通過(guò)與sirtuin結(jié)合而抑制sirtuin 的分子."糖尿病"是指高血糖或稱酸中毒，以及由長(zhǎng)期高血糖狀態(tài)或糖 耐量低減導(dǎo)致的慢性的、普遍的代謝異常."糖尿病"包括該疾病的I 型和II型(非胰烏素依賴性糖尿病或NIDDM)形式.糖尿病的危險(xiǎn) 因素包括以下因素男性腰閨超過(guò)40英寸或女性腰閨超過(guò)35英寸， 血壓為130/85 mmHg或更高，甘油三酶高于150mg/dl，空腹血糖高 于100 mg/dl或男性高密度脂蛋白低于40 mg/dl或女性高密度脂蛋白 低于50 mg/dl,術(shù)語(yǔ)"高胰烏素血癥"是指?jìng)€(gè)體中血液中的胰烏素水平高于正常 值的狀態(tài).術(shù)語(yǔ)"胰烏素抗性"是指這樣一種狀態(tài)，其中正常童的胰烏素產(chǎn) 生相對(duì)于不具有胰烏素抗性的受試者中的生物反應(yīng)而言低于正常的生 物反應(yīng).此處討論的"胰烏素抗性病癥"是指由胰烏素抗性導(dǎo)致或歸因于 胰島素抗性的任何疾病或狀況.其實(shí)例包括糖尿病、肥胖、代謝綜 合征、胰島素抗性綜合征、X綜合征、胰島素抗性、高血壓、高壓、 血膽固醇高、血脂異常、高脂血癥、血脂異常、動(dòng)脈粥樣硬化疾病， 包括卒中、冠狀動(dòng)脈疾病或心肌梗塞、高血糖、高胰烏素血癥和/或高 胰烏素原血癥、糖耐量低減、胰島素釋放延遲、糖尿病合并癥，包括 冠心病、心絞痛、充血性心襲、卒中、癡呆中的認(rèn)知功能、視網(wǎng)膜病、 外周神經(jīng)病、腎病、腎小球腎炎、腎小球硬化、 <病綜合征、高血壓 性腎小球硬化、某些類型的癌癥(如子宮內(nèi)膜、乳腺、前列腺和結(jié)腸 癌)、妊娠合并癥、女性生殖健康不良(如月經(jīng)不規(guī)律、不育、排卵 不規(guī)律、多囊印巢綜合征(PCOS))、脂餘代謝陣礙、膽固醇相關(guān)病10癥，如膽結(jié)石、膽囊炎和膽石癥、痛風(fēng)、阻塞性睡眠呼吸陣礙和呼吸 問趙、骨關(guān)節(jié)炎和骨損失，如骨質(zhì)疏松的預(yù)防和治療."肥胖"個(gè)體和患有肥胖的個(gè)體通常是體重指數(shù)(BMI)至少為 25或更大的個(gè)體.肥胖可以與胰烏素抗性相關(guān)或者不相關(guān).術(shù)語(yǔ)"包含"和"含有"是包含式的，開放式的，表示可以包括 其它元素.術(shù)語(yǔ)"包括"用于表示"包括，但不限于"."包括"和"包括， 但不限于"可互換使用.術(shù)語(yǔ)"同一性百分比"是指兩個(gè)泉基酸序列或兩個(gè)核苷酸序列之 間的序列同 一性.可以通過(guò)比較用于比對(duì)以進(jìn)行比較的每個(gè)序列中的 位置而確定.當(dāng)進(jìn)行比較的序列中等同的位置被相同的械基或氨基酸 占據(jù)時(shí)，則所述分子在該位置具有同一性；當(dāng)?shù)韧奈稽c(diǎn)被相同或相 似的氨基酸殘基(如空間和/或電性質(zhì))占據(jù)，那么所述分子可以稱作 在該位置同源(相似).同源性、相似性或同一性這樣的表達(dá)方式是 指比較的序列共有的位置上相同或相似的氨基酸的數(shù)目.同源性、相 似性或同 一性這樣的表達(dá)方式是指比較的序列共有的位置上相同或相似的氨基酸的數(shù)目的函數(shù).可以采用多種比對(duì)算法和/或程序，包括 FASTA、 BLAST或ENTREZ. FASTA和BLAST是作為GCG程序 分析軟件包(University of Wisconsin, Madison, Wis.)的一部分獲 得的，并且可以采用，例如，缺省設(shè)里.通過(guò)National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, National Institutes of Health, Bethesda， Md可以獲得ENTREZ.在一個(gè)實(shí)施 方案中，可以通過(guò)空位權(quán)重為1的GCG程序確定兩個(gè)序列的同一性 百分比，例如，對(duì)每個(gè)氨基酸空位進(jìn)行加權(quán)，如同兩個(gè)序列之間存在單氨基酸或核苷酸錯(cuò)配.用于比對(duì)的其它技術(shù)描述于Methods in Enzymology, vol. 266:Computer Methods for Macromolecular Sequence Analysis (1996), ed. Doolittle， Academic Press, Inc., a division of Harcourt Brace & Co" San Diego， California, USA.優(yōu)選地，用允許序列中的空位的比對(duì) 程序?qū)π蛄羞M(jìn)行比對(duì).Smith-Waterman是允許序列比對(duì)中的空位的 一類算法.參見Meth. Mol. Biol. 70: 173-187 (1997),同樣，采用 Needleman和Wunsch比對(duì)方法的GAP程序可以用于對(duì)序列進(jìn)行比對(duì).另一種檢索策略采用在MASPAR計(jì)算機(jī)上運(yùn)行的MPSRCH軟 件，MPSRCH采用Smith-Waterman算法，以便對(duì)大型平行計(jì)算機(jī) 上的序列進(jìn)行評(píng)分.該方法改進(jìn)了挑選關(guān)系遠(yuǎn)的匹配的能力，并且特 別不容易出現(xiàn)小空位和核苷酸序列錯(cuò)誤.可以用核酸編碼的氨基酸序 列檢索蛋白和DNA數(shù)據(jù)庫(kù).術(shù)語(yǔ)"多核苷酸"和"核酸"可以互換使用.他們是指任何長(zhǎng)度其類似物.多核苷酸可以具有任何三維結(jié)構(gòu)，可以行使任何已知或未 知功能.以下是多核苷酸的非限制性的實(shí)例基因或基因片段的編碼 或非編碼區(qū)、通過(guò)連鎖分析確定的基因座、外顯子、內(nèi)含子、信使RNA (mRNA)、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA、核糖體RNA、核酶、cDNA、重組多核香酸、 分支的多核苷酸、質(zhì)粒、栽體、任何序列的分離DNA、任何序列的 分離RNA、核酸探針和引物.多核苷酸可以包括修飾的核苷酸，如 甲基化的核苷酸和核苷酸類似物.如果存在，可以在聚合物組裝之前 或之后對(duì)核苷酸結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾.核苷酸的序列可以間隔有非核苷酸成 分.可以通過(guò)例如與標(biāo)記成分偶聯(lián)而進(jìn)一步修飾多核苷酸，術(shù)語(yǔ)"童 組的"的多核苷酸表示基因組、cDNA、半合成或合成來(lái)源的多核苷 酸，其天然不存在，或以非天然排列與另一多核苷酸連接."患者"、"個(gè)體"、"受試者"或"宿主"是指人或非人動(dòng)物.當(dāng)針對(duì)氨基酸序列用到術(shù)語(yǔ)"基本同源的"，是指彼此之間序列 基本相同或相似的序列，所述序列的基本相同或相似導(dǎo)致了構(gòu)象的同 源性，因此導(dǎo)致了一種或多種生物(包括免疫)活性保留到有用的程 度.該術(shù)語(yǔ)不意欲表示序列的普通進(jìn)化.術(shù)語(yǔ)"調(diào)節(jié)"是本領(lǐng)域公知的，表示反應(yīng)的上調(diào)(即，激活或刺 激)、下調(diào)(即，抑制或阻抑)，或組合或分開的這兩者.術(shù)語(yǔ)"預(yù)防性"或"治療性"處理是本領(lǐng)域公知的，表示給宿主 施用藥物.如果在不良狀況(如宿主動(dòng)物的疾病或其它不良狀態(tài))的 臨床表現(xiàn)之前施用，那么該處理是預(yù)防性的，即，它保護(hù)宿主進(jìn)免發(fā) 生不良狀況，而如果在不良狀況的表現(xiàn)之后施用，那么該處理是治療 性的(即，它意欲減少、改善或維持存在的不良狀況或其導(dǎo)致的副作 用) 術(shù)語(yǔ)"哺乳動(dòng)物"是本領(lǐng)域公知的，示例的哺乳動(dòng)物包括人、靈長(zhǎng)類動(dòng)物、牛、豬、犬科動(dòng)物、貓科動(dòng)物和嚙齒類(如小鼠和大鼠).在提到化合物時(shí)，術(shù)語(yǔ)"生物可利用的"是本領(lǐng)域公知的，表示 使施用量的化合物或其部分能夠被施用其的受試者或患者吸收、整合 或生理利用的化合物形式.術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)可接受的"是本領(lǐng)域公知的，表示化合物的相對(duì)無(wú)毒 的無(wú)機(jī)和有機(jī)酸加成鹽，包括，例如，此處描迷的組合物中所含的那 些.術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)可接受栽體"是本領(lǐng)域公知的，表示藥學(xué)可接受的材 料、組合物或媒介物，如液體或固體填料、賦形刑、溶刑或包囊材料， 它們參與將任何目標(biāo)組合物或其部分從身體的一個(gè)器官或部分?jǐn)y帶或運(yùn)榆到身體的另一個(gè)器官或部分.每個(gè)栽體在與目標(biāo)組合物及其成分 相容的含義內(nèi)必須是"可接受的"，并且對(duì)患者沒有損傷.可以作為藥學(xué)可接受栽體的材料的一些實(shí)例包括U)糖類，如乳糖、葡萄糖 和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素，及其衍 生物，如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；(4)粉末狀黃 萊膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石粉；(8)賦形劑，如可可脂和 栓劑蠟；(9)油，如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉 米油和大豆油；(10)甘醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨 醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)醋，如油酸乙癍和月桂酸乙BI; (13) 瓊脂；(")緩沖刑，如氳氣化鎂和氫氣化鋁；(15)藻酸；(16)無(wú) 熱源的水；(17)等滲鹽水；(18) Ringer's溶液；(19)乙醇；(20) 褲酸緩沖液；和(21)藥物制劑中使用的其它無(wú)毒相容物質(zhì).術(shù)語(yǔ)"系統(tǒng)施用"和"外周施用"是本領(lǐng)域公知的，是指除直接 施用到中柩神經(jīng)系統(tǒng)之外的施用目標(biāo)組合物、治療或其它材料，因此， 它們進(jìn)入患者的系統(tǒng)，因而進(jìn)行代謝和其它相似的過(guò)程.術(shù)語(yǔ)"腸胃外施用"是本領(lǐng)域公知的，是指除煬道和表面施用之 外的施用方式，通常通過(guò)注射，包括，但不限于，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng) 脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表 皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)和胸骨內(nèi)注射和輸注."轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列"是貫穿說(shuō)明書使用的專業(yè)術(shù)語(yǔ)，表示DNA序 列，例如起始信號(hào)、增強(qiáng)子和啟動(dòng)子，其誘導(dǎo)或控制與其可操作性連 接的蛋白編碼序列的轉(zhuǎn)錄.在優(yōu)選實(shí)施方案中，在啟動(dòng)子序列(或其它轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列)的控制下轉(zhuǎn)錄重組基因之一，所述啟動(dòng)子序列控制 重組基因在要表達(dá)所述重組基因的細(xì)胞類型中的表達(dá).也可以理解，重組基因可以受轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列的控制，所迷轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列與控制此處 所述天然存在形式的基因的轉(zhuǎn)錄的序列相同或不同."栽體"是自我復(fù)制的核酸分子，其將插入的核酸分子轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞內(nèi)和/或之間.該術(shù)語(yǔ)包括主要起以下作用的栽體將核酸分子 插入細(xì)胞、復(fù)制主要在核酸復(fù)制中起作用的栽體和作用是轉(zhuǎn)錄和/或翻 譯DNA或RNA的表達(dá)栽體.同樣也包括提供一種以上上述功能的栽 體.此處用到的"表達(dá)栽體"定義為這樣的多核苷酸，當(dāng)導(dǎo)入合適的 宿主細(xì)胞中時(shí)，其能夠被轉(zhuǎn)錄和翻譯為多肽."表達(dá)系統(tǒng)"通常意味 著包含表達(dá)栽體的合適宿主細(xì)胞，所迷表達(dá)栽體可以用于產(chǎn)生需要的 表達(dá)產(chǎn)物."治療"狀況或疾病是指治愈并改善狀況或疾病的至少一種癥狀.術(shù)語(yǔ)"順式"是本領(lǐng)域公知的，是指圍繞雙鍵的兩個(gè)原子或基團(tuán) 的排列，所述排列使得所述原子或基團(tuán)位于雙鍵的同一側(cè).順式構(gòu)型 通常被標(biāo)為(Z)構(gòu)型.術(shù)語(yǔ)"反式"是本領(lǐng)域公知的，是指圍繞雙鍵的兩個(gè)原子或基團(tuán) 的排列，所述排列使得所述原子或基團(tuán)位于雙鍵的相反側(cè).反式構(gòu)型 通常被標(biāo)為(E)構(gòu)型.術(shù)語(yǔ)"共價(jià)鍵"是本領(lǐng)城公知的，是指兩個(gè)原子之間的鍵，其中 電子被靜電吸引到兩個(gè)原子的兩個(gè)核，核之間電子密度增加的凈效應(yīng) 平衡了核內(nèi)排斥.當(dāng)鍵是與金屬離子形成時(shí)，術(shù)語(yǔ)共價(jià)鍵包括配位鍵.術(shù)語(yǔ)"治療劑"是本領(lǐng)域公知的，是指在受試者中局部或系統(tǒng)起 作用的生物、生理或藥理活性物質(zhì).該術(shù)語(yǔ)也表示意欲用于疾病的診 斷、治愈、緩解、治療或預(yù)防，或用于增強(qiáng)動(dòng)物或人類中需要的身體 或精神發(fā)育和/或狀況的任何物質(zhì).術(shù)語(yǔ)"療效"是本領(lǐng)域公知的，是指藥理活性物質(zhì)在動(dòng)物，特別 是哺乳動(dòng)物，更特別是人類中導(dǎo)致的局部或全身效果.短語(yǔ)"治療有 效量"表示以適于任何治療的合理益處/危除比產(chǎn)生一些需要的局部或 全身效杲的所述物質(zhì)的量.所述物質(zhì)的治療有效重將根據(jù)受試者和治 療的疾病或狀況、受試者的體重和年齡、疾病或狀況的嚴(yán)重程度、施員可以容易確定.例如，可以以足 夠的量施用此處描述的某些組合物，從而以適于所述治療的合理益處/ 危險(xiǎn)比產(chǎn)生需要的效果.術(shù)語(yǔ)"合成的"是本領(lǐng)域公知的，是指通過(guò)體外化學(xué)或酶合成進(jìn) 行生產(chǎn).術(shù)語(yǔ)"內(nèi)消旋化合物"是本領(lǐng)域公知的，是指具有至少兩個(gè)手性 中心，但由于平面或點(diǎn)對(duì)稱而非手性的化學(xué)化合物.術(shù)語(yǔ)"手性"是本領(lǐng)域公知的，是指具有鏡像配偶體的非超疊加 能力的特性的分子，而"非手性"是指能夠在鏡像配偶體上超疊加的 分子."前手性分子"是具有在特定過(guò)程中轉(zhuǎn)化為手性分子的潛能的 分子.術(shù)語(yǔ)"立體異構(gòu)體"是本領(lǐng)域公知的，是指具有相同的化學(xué)組構(gòu)， 但是在原子或基團(tuán)的空間排列方面不同的化合物.具體地，"對(duì)映異 構(gòu)體"是指化合物的兩種空間異構(gòu)體，它們是彼此的不能疊加的鏡像. 另一方面，"非對(duì)映異構(gòu)體"是指具有兩個(gè)或更多不對(duì)稱中心的異構(gòu) 體，它們的分子不是彼此的鏡像.此外，"立體選擇過(guò)程"是這樣的一種過(guò)程，它對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物的一 種特定立體異構(gòu)體的產(chǎn)生優(yōu)先于該產(chǎn)物的其它可能的異構(gòu)體的產(chǎn)生."對(duì)映異構(gòu)選擇過(guò)程"是這樣一種過(guò)程，它有利于產(chǎn)生反應(yīng)產(chǎn)物的兩 種可能的對(duì)映異構(gòu)體中的一種.術(shù)語(yǔ)"區(qū)域異構(gòu)體"是本領(lǐng)域公知的，是指具有相同的分子式， 但原子的連接不同的化合物.因此，"區(qū)域選擇過(guò)程"是這樣一種過(guò) 程，它對(duì)特定區(qū)域異構(gòu)體的產(chǎn)生優(yōu)于其它異構(gòu)體，如，產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)顯 著的某種區(qū)域異構(gòu)體的產(chǎn)率增加的反應(yīng).術(shù)語(yǔ)"差向異構(gòu)體"是本領(lǐng)域公知的，是指具有相同的化學(xué)組構(gòu) 并且含有一個(gè)以上立體中心，但僅僅在這些立體中心之一具有不同構(gòu) 型的分子.術(shù)語(yǔ)"EDS "是本領(lǐng)域公知的.在某些實(shí)施方案中，EDs。表示產(chǎn) 生最大反應(yīng)或效果的50%的藥物刑重，或在50%測(cè)試的受試者或制 刑中產(chǎn)生預(yù)定反應(yīng)的刑量.術(shù)語(yǔ)"LDSD"是本領(lǐng)城公知的.在某些實(shí) 施方案中，LDs。表示在50%測(cè)試的受試者中致死的劑量.術(shù)語(yǔ)"治療 指數(shù)"是本領(lǐng)域公知的術(shù)語(yǔ)，是指藥物的治療指數(shù)，定義為L(zhǎng)DS(/EDS().術(shù)語(yǔ)"結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系"或"(SAR)"是本領(lǐng)域公知的，表示藥 物或其它化合物的分子結(jié)構(gòu)改變導(dǎo)致其生物活性改變的途徑，所述生 物活性例如與受體、醉、核酸或其它靶等的相互作用.術(shù)語(yǔ)"脂族"是本領(lǐng)域公知的，是指線性的、含支鏈的、環(huán)狀的 坑、烯或炔.在某些實(shí)施方案中，此處的化合物中的脂族基是線性或 分枝的，并且具有1-大約20個(gè)破原子.術(shù)語(yǔ)"烷基"是本領(lǐng)域公知的，包括飽和脂族基團(tuán)，包括直鏈坑 基、支鏈烷基、環(huán)坑(脂環(huán))基、烷基取代的環(huán)烷基和環(huán)烷基取代的 烷基.在某些實(shí)施方案中，支鏈或支鏈烷基在其主鏈上有大約30個(gè) 或更少的碳原子(如，對(duì)于直鏈?zhǔn)荂,-C3。，對(duì)于支鏈?zhǔn)荂3-C30)， 或者，有大約20個(gè)或更少的破原子.類似地，環(huán)烷基在其環(huán)結(jié)構(gòu)上 具有大約3-大約IO個(gè)碳原子，或者在環(huán)結(jié)構(gòu)中具有大約5、 6或7 個(gè)碳原子.術(shù)語(yǔ)"烷基"也定義為包括鹵素取代的坑基.術(shù)語(yǔ)"芳烷基"是本領(lǐng)域公知的，是指芳基(如芳基或雜芳基) 取代的烷基.術(shù)語(yǔ)"鏈烯基"和"炔基"是本領(lǐng)域公知的，是指與上文描述的 烷基長(zhǎng)度以及可能的取代類似的不飽和脂族基團(tuán)，但其分別含有至少 一個(gè)雙鍵或三鍵.除非特別指出碳的數(shù)目，"低級(jí)烷基"是指上文所述坑基，但在其主鏈結(jié)構(gòu)具有1 -大約10個(gè)碳原子，或者1 -大約6個(gè)碳原子.同 樣，"低級(jí)鏈烯基"和"低級(jí)炔基"具有相似的鏈長(zhǎng).術(shù)語(yǔ)"雜原子"是本領(lǐng)域公知的，是指除碳或氬以外的任意元素 的原子.示例的雜原子包括硼、氮、氣、磷、碟和硒.術(shù)語(yǔ)"芳基"是本領(lǐng)域公知的，是指可以包括0-4個(gè)雜原子的5、 6和7員單環(huán)芳族基團(tuán)，例如，苯、萘、蒽、芘、吡咯、呋喃、噻吩、 咪唑、喁唑、東唑、三唑、吡唑、吡啶、*&喚、噠噢和嘧啶等.在環(huán) 結(jié)構(gòu)中具有雜原子的芳基也可以稱作"芳雜環(huán)"或"雜芳族化合物". 可以用上文所述取代基在一個(gè)或多個(gè)環(huán)位置對(duì)芳環(huán)進(jìn)行取代，取代基 例如是，卣素、疊氮基、坑基、芳烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、羥 基、烷氣基、氨基、硝基、就基、亞氨基、酰氨基、膊酸酯、亞膊酸 酯、羰基、羧基、甲硅烷基、酸、坑碟基、磺?；喕轻G氨基、稱、 瘙、醋、雜環(huán)基、芳族或雜芳部分、-CF3、 -CN，等等.術(shù)語(yǔ)"芳基"也包括多環(huán)體系，其具有兩個(gè)或多個(gè)環(huán)，其中兩個(gè)或多個(gè)碳原子是兩 個(gè)連接的環(huán)共有的(所述環(huán)是"稠合環(huán)")，其中至少一個(gè)環(huán)是芳環(huán)， 例如，另一個(gè)環(huán)可以是環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基和/或雜環(huán)基.術(shù)語(yǔ)鄰、間和對(duì)是本領(lǐng)域公知的，分別是指l，2-、 1，3-和1，4-二取 代的苯.例如，1，2-二甲苯和鄰-二甲苯是同義的.術(shù)語(yǔ)"雜環(huán)基"或"雜環(huán)基團(tuán)"是本領(lǐng)域公知的，是指3-大約 IO員環(huán)結(jié)構(gòu)，或者3-大約7員環(huán)，其環(huán)結(jié)構(gòu)包括l到4個(gè)雜原子. 雜環(huán)也可以是多環(huán).雜環(huán)基團(tuán)包括，例如，噻吩、噱嗯、呋喃、吡喃、 異苯并呋喃、色烯、卩占噸、苯咕噸、吡咯、咪唑、吡唑、異噻唑、異 哺唑、吡啶、吡嚷、嘧啶、噠喚、中氮茚、異吲哚、吲哚(indole)、 吲哚(indazole)、嘌呤、喹嗪、異喹琳、全琳、2，3-二氮雜萘、萘啶、 喹喔啉、喹唑啉、嘈啉、喋啶、呼唑、咔啉、菲啶、吖啶、嘧啶、菲 咯淋、喻喚、吟呔喚、汾漆漆、吹響、汾喝*、耽咯烷、oxolane、 thiolane、 嗜唑、哌啶、哌喚、嗎啉、內(nèi)醋、內(nèi)酰胺，如氮雜環(huán)丁烯酮和吡咯烷 二稱、磺內(nèi)酰胺、磺內(nèi)酶等.雜環(huán)可以在一個(gè)或多個(gè)位置被上文所述 的取代基取代，所述取代基例如卣素、烷基、芳烷基、鏈烯基、炔基、 環(huán)烷基、羥基、氨基、硝基、巰基、亞氨基、酰氨基、膦酸酯、亞膊 酸酯、羰基、羧基、甲硅烷基、醚、烷碟基、磺?；?、酮、搭、酯、 雜環(huán)基、芳族或雜芳部分、-CF3、 -CN，等等.術(shù)語(yǔ)"多環(huán)基"或"多環(huán)基團(tuán)"是本領(lǐng)域公知的，是指兩個(gè)或更 多個(gè)環(huán)(例如，環(huán)烷基、環(huán)烯基、環(huán)炔基、芳基和/或雜環(huán)基)，其中 兩個(gè)或多個(gè)碳原子是兩個(gè)鄰接的環(huán)共有的，例如，所述環(huán)是"稠合環(huán)". 通過(guò)非鄰接的原子連接的環(huán)稱作"橋環(huán)".多環(huán)的每個(gè)環(huán)可以被上文 所述的取代基取代，所迷取代基例如齒素、烷基、芳烷基、鏈烯基、 炔基、環(huán)烷基、羥基、氨基、硝基、巰基、亞氛基、酰氨基、膊酸酯、 亞鱗酸酴、羰基、羧基、甲硅烷基、鍵、烷碟基、磺酰基、稱、搭、 癍、雜環(huán)基、芳族或雜芳部分、-CF3、 -CN，等等.術(shù)語(yǔ)"碳環(huán)"是本領(lǐng)域公知的，是指芳環(huán)或非芳環(huán)，其中環(huán)的每 個(gè)原子都是碳.術(shù)語(yǔ)"硝基"是本領(lǐng)域公知的，是指-N(V,術(shù)語(yǔ)"卣素"是本領(lǐng) 域公知的，是指-F、 -Cl、 -Br或-I;術(shù)語(yǔ)"巰基"是本領(lǐng)城公知的， 是指-SH;術(shù)語(yǔ)"羥基"表示-OH;術(shù)語(yǔ)"橫?；?是本領(lǐng)域公知的，是指-scv."齒化物"表示卣素的相應(yīng)陰離子，"擬齒化物"的定義闡述于Cotton和Wilkinson的"Advanced Inorganic Chemistry"的笫560 頁(yè).術(shù)語(yǔ)"胺"和"氨基"是本領(lǐng)域公知的，表示取代和未取代的胺， 如可以由以下通式表示的部分<formula>formula see original document page 18</formula>其中R50、 R51和R52各自獨(dú)立地代表氬、烷基、鏈烯基、-(CH2)m-R61，或R50和R51與它們連接的N原子一起構(gòu)成在環(huán)結(jié)構(gòu) 中具有4-8個(gè)原子的雜環(huán)；R61代表芳基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、雜環(huán) 或多環(huán)；并且m是O或者1-8的整數(shù).在某些實(shí)施方案中，R50或 R51中僅有一個(gè)可以是羰基，如RS0、 R51和氮一起不構(gòu)成二酰亞胺. 在另一種實(shí)施方案中，R50和R51 (任選R52)各自獨(dú)立地代表氳、 烷基、鏈烯基或-(CH2)^-R61.這樣，術(shù)語(yǔ)"烷基胺"包括上文定義的 胺，其連接了取代或未取代的烷基，即，R50和RS1中的至少一個(gè)是 烷基.術(shù)語(yǔ)"酰基氛基"是本領(lǐng)域公知的，是指可以由以下通式表示的 部分<formula>formula see original document page 18</formula>其中R50如上文所定義，R54代表氬、烷基、鏈烯基、-(CH2)ra-R61，其中R61如上文所定義.術(shù)語(yǔ)"酰氨基"在本領(lǐng)域被認(rèn)為是氨基取代的羰基，并且包括可 以由以下通式表示的部分其中R50如上文所定義.耽胺的某行實(shí)施方案可以不包括可能不 穗定的二酰亞胺.術(shù)語(yǔ)"烷硫基"是指與硫基連接的如上文所定義的坑基.在某些 實(shí)施方案中，"烷碟基"是以下之一-S-烷基、-S-鏈烯基、-S-炔基和 -S-(CH2)m-R61，其中m和R61如上文所定義.代表性的烷碟基包括甲碟基、乙碟基,等等.術(shù)語(yǔ)"羰基"是本領(lǐng)域公知的，并且包括可以由以下通式表示的 部分<formula>formula see original document page 19</formula>其中X50是一個(gè)鍵或代表氣或碟，R55和R56代表氯、坑基、鏈 烯基、-(CH2)m-R61或其藥學(xué)可接受的鹽，RS6代表氬、烷基、鏈烯 基或-(CH"^R61,其中m和R61如上文所定義.當(dāng)X50是氣，并且 R55或R56不是氬時(shí)，該式代表當(dāng)X50是氣，并且R55如上 文所定義時(shí)，該部分在此被稱作羧基，并且特別是當(dāng)R5S是氣時(shí)，該 式代表"羧酸".當(dāng)X50是氣，并且R56是氣時(shí)，該式代表"甲酸酯". 概言之，當(dāng)上式的氣原子被碟取代時(shí)，該式表示"硫代破基".當(dāng)X50 是碟，R55或R56不是氬時(shí)，該式代表"碟羥酸酯".當(dāng)X50是硅， 并且R5S是氣時(shí)，該式代表"破幾羧酸".當(dāng)X50是碟，并且R56是 氣時(shí)，該式代表"硤羥甲酸糖".另一方面，當(dāng)XSO是一個(gè)鍵，并且 R55不是氦時(shí)，該式代表"鵬"基團(tuán).當(dāng)X50是一個(gè)鍵，并且R5S是 氦時(shí)，上式代表"ft"基罔.術(shù)語(yǔ)"烷氣基"是本領(lǐng)域公知的，是指與氧基連接的如上文所定說(shuō)明書第17/82頁(yè)義的烷基.代表性的坑氣基包括甲氣基、乙氣基、丙氧基、叔丁氧基 等."酸"是由氣共價(jià)連接的兩個(gè)烴.因此，使烷基成為癍的烷基的取代基是或者類似于烷氣基，例如可以是-o-烷基、-o-鏈烯基、-o-炔基和-0-(CH2)m-R61，其中m和R61如上文所定義.術(shù)語(yǔ)"磺酸酯"是本領(lǐng)域公知的，是指可以由以下通式表示的部分<formula>formula see original document page 20</formula>其中R57是電子對(duì)、氬、烷基、環(huán)烷基或芳基.術(shù)語(yǔ)"碟酸癍"是本領(lǐng)域公知的，包括可以由以下通式表示的部分<formula>formula see original document page 20</formula>其中R57如上文所定義.術(shù)語(yǔ)"亞碌跣氨基"是本領(lǐng)域公知的，包括可以由以下通式表示 的部分<formula>formula see original document page 20</formula>其中R50和RS6如上文所定義.術(shù)語(yǔ)"氦磺酞"是本領(lǐng)域公知的，包括可以由以下通式表示的部分<formula>formula see original document page 21</formula>其中R50和R51如上文所定義.術(shù)語(yǔ)"橫跣基"是本領(lǐng)域公知的，包括可以由以下通式表示的部分:其中R58是以下之一氬、烷基、鏈烯基、塊基、環(huán)烷基、雜環(huán) 基、芳基或雜芳基.術(shù)語(yǔ)"亞颯基"是本領(lǐng)域公知的，包括可以由以下通式表示的部分\R58其中R58如上文所定義.術(shù)語(yǔ)"褲?；?是本領(lǐng)域公知的，包括可以由以下通式表示的部分<formula>formula see original document page 21</formula>其中Q50代表S或O， R59代表氬、低級(jí)坑基或芳基.當(dāng)用于取 代例如烷基時(shí)，褲酰烷基的磷酜基可以是以下通式表示的部分<formula>formula see original document page 22</formula>
其中Q50和R59各自獨(dú)立地如上文所定義，Q51代表O、 S或N. 當(dāng)QS0是S時(shí)，磷?；糠质?碟代磷酸醋"."亞褲跣胺"是本領(lǐng)域公知的，并且可以用以下通式表示<formula>formula see original document page 22</formula>
其中Q51、 R50、 R51和R59如上文所定義.術(shù)語(yǔ)"亞辨酰胺"是本領(lǐng)域公知的，并且可以用以下通式表示<formula>formula see original document page 22</formula>
其中Q51、 R50、 R51和R59如上文所定義，并且R60代表低級(jí)坑基或芳基,可以對(duì)鏈蜂基和炔基進(jìn)行類似取代，以產(chǎn)生例如氨基鏈烯基、氣 基炔基、酰氨基鏈烯基、酰氡基炔基、亞氛基鏈烯基、亞氨基炔基、 硫代鏈烯基、碟代炔基、羰基取代的鏈烯基或炔基.當(dāng)每個(gè)表達(dá)的定 義，如烷基、m、 n等的定義在任何結(jié)構(gòu)中出現(xiàn)一次以上時(shí)，是獨(dú)立于在別處相同結(jié)構(gòu)中的定義.
術(shù)語(yǔ)"硒代坑基"是本領(lǐng)域公知的，是指連接了取代的硒基的烷
基.可以在烷基上取代的示例的"硒醚"選自Se-烷基、-Se-鏈烯基、 -Se-炔基和-Se-(CH丄-R61 ，其中m和R61如上文所定義.
術(shù)語(yǔ)triflyl、甲苯橫?；⒓讬M?；蚽onaflyl是本領(lǐng)域公知的，
分別是指三氣甲磺?；?、對(duì)-甲苯磺耽基、甲磺跣基和九氣丁磺?；? 術(shù)語(yǔ)triflate、甲苯磺酰酯、甲橫酰酶和nonaflate是本領(lǐng)域公知的，
分別是指三氟甲磺跣酯、對(duì)-甲苯磺酰酯、甲磺酰酯和九氟丁磺跣酯 官能團(tuán)和含有所述基團(tuán)的分子.
縮寫Me、 Et、 Ph、 Tf、 Nf、 Ts和Ms分別代表甲基、乙基、苯 基、三氟甲磺酰基、九氟丁橫?；?、對(duì)-甲苯磺酰基和甲磺跣基.本 領(lǐng)域的有機(jī)化學(xué)人員使用的縮寫的更全面列表參見Journal of Organic Chemistry每一巻的笫一期；該列表一般存在于稱作縮寫標(biāo)準(zhǔn)列表的 表中.
包含在此處描述的組合物中的某些化合物可以以特定的幾何或立 體異構(gòu)形式存在.此外，化合物也可以任選是有活性的，此處考慮的 都是這樣的化合物，包括順式和反式異構(gòu)體、R-和S-對(duì)映異構(gòu)體、非 對(duì)映異構(gòu)體、(DK異構(gòu)體、(Lh異構(gòu)體、其外消旋混合物及它們的其 它混合物.類外的不對(duì)稱碳原子可以存在于取代基，如烷基中.這里 包括所有這樣的異構(gòu)體及其混合物.
例如，如果需要化合物的特定對(duì)映異構(gòu)體，可以通過(guò)非對(duì)稱合成， 或通過(guò)用手性輔助基團(tuán)衍生而制備，其中分離得到的非對(duì)映異構(gòu)體混 合物，并且切除輔助基團(tuán)以提供純的所需對(duì)映異構(gòu)體.或者，當(dāng)分子 含有堿性官能團(tuán)，如氨基，或酸性官能團(tuán)，如羧基時(shí)，與合適的任逸 具有活性的酸或堿形成非對(duì)映異構(gòu)鹽，然后通過(guò)本領(lǐng)域公知的分級(jí)結(jié) 晶或色譜方法對(duì)這樣形成的非對(duì)映異構(gòu)體進(jìn)行拆分，隨后回收純的對(duì) 映異構(gòu)體.
可以理解，"取代"或"被…取代"包括隱含的前提，即，所述 取代符合被取代的原子和取代基允許的價(jià)，并且取代得到的是穩(wěn)定的 化合物，如不通過(guò)例如重排、環(huán)化、消除或其它反應(yīng)進(jìn)行轉(zhuǎn)化.
術(shù)語(yǔ)"取代的"也意欲包括有機(jī)化合物的所有允許的取代基.在 寬的方面，允許的取代基包括有機(jī)化合物的非環(huán)狀和環(huán)狀、分枝和不
23分枝的、碳環(huán)和雜環(huán)、芳族和非芳族取代基.示例的取代基包括，例 如，上文描述的那些.允許的取代基可以是一個(gè)或多個(gè)，對(duì)于合適的 有機(jī)化合物是相同或不同的.雜原子，如氮可以具有氳取代基和/或此 處描述的滿足雜原子的價(jià)的有機(jī)化合物的任何允許的取代基.不意欲 通過(guò)有機(jī)化合物的允許的取代基以任何方式對(duì)化合物進(jìn)行限制.
根據(jù)Handbook of Chemistry and Physics, 67th Ed., 1986-87內(nèi) 封皮的CAS版元素周期表鑒定化學(xué)元素.
術(shù)語(yǔ)"保護(hù)基"是本領(lǐng)城公知的，是指保護(hù)潛在反應(yīng)性官能團(tuán)免 受不需要的化學(xué)轉(zhuǎn)化的臨時(shí)取代基.所迷保護(hù)基的例子包括羧酸的 酯、醉的甲硅坑基酴和瘙和擁各自的縮搭和縮酮.保護(hù)基化學(xué)領(lǐng)域綜 述于Greene and Wuts in Protective Groups in Organic Synthesis (2nd ed" Wiley: New York, 1991).
術(shù)語(yǔ)"羥基保護(hù)基"是本領(lǐng)域公知的，是指目的在于保護(hù)羥基免 受合成程序中不需要的反應(yīng)的基團(tuán)，包括，例如芐基或本領(lǐng)域公知的 其它合適的酯或醚基團(tuán).
術(shù)語(yǔ)"羧基保護(hù)基"是本領(lǐng)域公知的，是指目的在于保護(hù)羧酸基 團(tuán)，例如氨基酸或肽的C末端或酸性或羥基氮雜環(huán)取代基免受合成程
序中不需要的反應(yīng)的基團(tuán).羧基保護(hù)基的實(shí)例包括，例如，芐基酯、 環(huán)己基酯、4-硝基芐基酯、叔-丁基醋、4-吡啶基甲基酯等.
術(shù)語(yǔ)"氨基封端基團(tuán)"是本領(lǐng)域公知，是指阻止氨基參與在某些 其它官能團(tuán)上進(jìn)行的反應(yīng)，但需要時(shí)可以從胺除去的基團(tuán).所述基團(tuán) 討論于上文引用的Greene and Wuts的笫7章，并且討論于Barton, Protective Groups in Organic Chemistry ch. 2 (McOmie， e d., Plenum Press, New York, 1973).合適的所迷基團(tuán)的例子包括酰基保護(hù)基， 如，舉例說(shuō)明，甲耽基、丹跣基、乙?；?、苯甲?；?、三氟乙酰基、 琥珀酰基、甲氣基琥珀酰基、卡基和取代的芐基，如3，4-二甲氣基芐 基、鄰-硝基爺基和三苯基甲基；式-COOR的那些，其中R包括以下 基團(tuán)，如甲基、乙基、丙基、異丙基、2，2，2-三氯乙基、l-甲基-l-苯基 乙基、異丁基、叔-丁基、叔-戊基、乙烯基、烯丙基、苯基、芐基、 對(duì)-硝基苯基、鄰-硝基苯基和2，4-二氯爺基；?；腿〈牡⒒?，如 甲酰基、乙?；?、氣乙酰基、二氣乙酰基、三氣乙?；⑷姨K基、 苯甲酰基和對(duì)-甲氣基苯甲酰基；以及其它基團(tuán)，如甲磺跣基、對(duì)-甲苯橫酰基、對(duì)-溴苯橫?；?、對(duì)-硝基苯基乙基和對(duì)-甲苯橫?；?氨基羰基.優(yōu)選的氨基封端基團(tuán)是芐基(-CH2C6Hs)、?；鵞C(O)RJ或SiRl3， 其中Rl是CVC4烷基、自甲基或2-卣代-(C2-Q坑氣基)、芳族尿坑保 護(hù)基，如，羰基芐氣基(Cbz);和脂族尿坑保護(hù)基，如叔-丁氣羰基 (Boc)或9-芴基甲氣基羰基(FMOC).當(dāng)每個(gè)表達(dá)，如低級(jí)烷基、m、 n、 p等的定義在任何結(jié)構(gòu)中出現(xiàn) 一次以上時(shí)，是獨(dú)立于在別處相同結(jié)構(gòu)中的定義.術(shù)語(yǔ)"吸電子基團(tuán)"是本領(lǐng)域公知的，是指取代基從鄰近的原子 吸引價(jià)電子的傾向，即，取代基對(duì)于鄰近的原子是電負(fù)性的.吸電子 能力的水平的定量由Hammett sig邁a (cj)常數(shù)給出，這個(gè)公知的常 數(shù)描述于許多參考文獻(xiàn)中，例如，March, Advanced Organic Chemistry 251-59 (McGraw Hill Book Company: New York, 1977),給電子基 團(tuán)的Ham邁ett常數(shù)通常是負(fù)的(NH2的a(P) - -0.66 ),吸電子基團(tuán)的 Hammett常數(shù)通常是正的(硝基的cr(P) - 0.78 )， (j(P)表示對(duì)位取代. 示例的吸電子基團(tuán)包括硝基、?；?、甲跣基、磺酰基、三氟甲基、氛 基、氟等.示例的給電子基團(tuán)包括氨基、甲氧基等.示例的激活sirtuin的化合物和使用方法以下實(shí)施例表明，sirtuin的激活劑，如白蘆蓼醇、紫鉚因、非瑟 稱、piceatannol、櫟精和3，5-二羥基-4'-硫甲基-反式-絮通過(guò)減少脂肪 積累(參見實(shí)施例l、 8和9)而刺激脂肪代謝，并且抑制脂肪生成(參 見實(shí)施例6); Sir2和AMPK是白蘆藜醇介導(dǎo)的脂肪動(dòng)員所必須的(參 見實(shí)施例3和4);白,藜醇刺激AMPK和ACC磷酸化(參見實(shí)施 例5);白^蓁醇增強(qiáng)脂肪細(xì)胞的胰烏素敏感性(參見實(shí)施例10)，并 且白,藜醇與其它AMPK激活刑一樣，可以刺激脂肪生成細(xì)胞中的 脂肪酸氣化(參見實(shí)施例11).激活sirtuin的示例的化合物描述于Howitz et al. (2003) Nature 425: 191，并且包括，例如，白,攀醇(3，5，4'-三羥基-反式-苢)、紫 鉚因(3，4，2'，4'-四輕基查耳酮)、piceatannol (3，5，3,，4'-四羥基-反式-苢)、 異甘革素(4，2'，4，-三羥基查耳新)、非瑟稱(3，7，3，，4，-四羥基黃 稱)、櫟精(3，5，7，3,，4'-五羥基黃稱)、Deoxyrhapontin (3，5-二羥基-4'-甲氣基苢3-0-P-D歸葡糖苷)；反式苢；Rhapontin (3，3,，5-三羥基-4'-甲氧基某-3-0-|3-D-葡糖苷 )； 順式某；紫鉚因(3,4，2'，4'-四羥基查耳稱)；3，4，2'4，6，-五幾基查耳酮、查耳嗣、7，8，3，，4，-四羥基黃稱；3，6，2，，3，-四羥基黃嗣、4，-羥基黃酮、5，4，-二羥基黃酮；5，7-二羥基黃酮；桑色 素(3，5，7，2，4，-五羥基黃稱)；黃稱；5-羥基黃嗣；(-)-表兒茶精(羥基 位點(diǎn)3,5，7，3，，4，)；(-)-兒茶精(幾基位點(diǎn):3，5，7，3，，4，);(-)-沒食子兒 茶精(羥基位點(diǎn)3，5，7，3，，4，，5， ); (+)-兒茶精(羥基位點(diǎn):3，5，7，3，，4，); 5，7，3，，4，，5，，-五幾基黃嗣、蕃黃菌素(5，7,3，，4，-四幾基黃稱)；3，6，3，，4，-四羥基黃酮、7，3，，4，，5，-四羥基黃嗣；山奈素(3，5，7，4，-四羥基黃嗣)； 6-羥基芹菜配基(5，6，7，4，-四羥基黃稱)；黃芩配基)；芹菜配基(S，7，4，-三羥基黃嗣)；3，6，2，，4，-四羥基黃嗣；7,4，-二羥基黃酮；大豆黃素(7，4，-二羥基異黃嗣)、染料木黃稱(5，7，4，-三羥基黃坑稱)；柚皮素(S，7，4，-三羥基黃烷稱)；3，5，7，3，，4，-五羥基黃烷嗣；黃坑酮；氯化花葵素(氯 化3，5，7，4，-四鞋基黃鋝)、扁柏盼(b-金鐘柏素；2-幾基-4-異丙基-2，4，6-環(huán)庚三烯-l-稱)；L-(+)-麥角碟因((8)-8-羧基-2，3-二氣- 1^，^三甲基-2-碟氣-lH-咪唑-4乙銨內(nèi)鹽)；咖啡酸苯基酯；MCI-186 (3-甲基-l-苯 基-2-itfc唑啉-5-嗣)；HBED ( N，N，-二-(2-羥基節(jié)基)乙二胺-N，N，-二乙 酸'H20); Ambroxol (反式-4-(2-氨基-3，5-二溴爺基氨基)環(huán)己烷'HCl; 和U-3836E((-)-2-((4-(2，6-二-l-吡咯烷基-4-嘧啶基)-l-哌喚基)甲基)-3，4-二氬-2，5，7，8-四甲基-2H-l-苯并吡喃-6-醇'2HC1.也可以使用其類似物 和衍生物.其它激活sirtuin的化合物可以具有以下式1 - 18中的任何一個(gè). 在一種實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是式1的苜或查耳嗣化合物其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)，R" R2、 R3、 R4、 Rj、 R',、 R，2、 R'3、 R'4和R，s代表H、烷基、芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳坑基、鹵化物、N02、 SR、 OR、 N(R)2 或欺基;R代表H、烷基或芳基；M代表O、 NR或S;A-B代表二價(jià)烷基、鏈烯基、炔基、酰氨基、亞橫酰氨基、重 氮基、酸、烷基氨基、烷基碟或肼；并且 n是0或l; 前提是當(dāng)n是0時(shí)當(dāng)R2和R4是OR,并且R^ R3、 Rs、 R、、 R，2、 R、和R's是H， 并且A-B是鏈烯基時(shí)，R'3不是C1、 F、 -CH3、 -CH2CH3、 -SMe、 N02、 異丙基、-OMe或羧基；當(dāng)A-B是烷基或酰氨基時(shí)，R2和R4都不是OH;當(dāng)113是OR時(shí)，RV R'2、 R'3、 R、或R、的至少一個(gè)不是H;并且R4不是羧基.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是具有附帶定義的式1所示的化合物，其中n是O.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附 帶定義所示的化合物，其中n是1.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合 物是式1和附帶定義所示的化合物，其中A-B是乙烯基.在進(jìn)一步 的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所示的化合物，其中A-B是-CH2CH(Me)CH(Me)CH2-,在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是 式1和附帶定義所示的化合物，其中M是O.在進(jìn)一步的實(shí)施方案 中，該化合物是式1和附帶定義所示的化合物，其中Rp R2、 R3、 R4、 Rj、 RV R'2、 R'3、 R'4和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所示的化合物，其中R^、 R4和R、是OH。在進(jìn) 一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所示的化合物，其中 R2、 R4、 R'2和R'3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1 和附帶定義所示的化合物，其中Rs、 R5、 R，2和R'3是OH,在進(jìn)一步 的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所示的化合物，其中R,、 R3、 Rs、 R、和R、是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1 和附帶定義所示的化合物，其中Rj和R'2是OH; R4是0-p-D-葡糖苷， 并且R、是OCH3.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所示的化合物，其中R2是OH; R4是0-P-D-葡糖苷，并且R、是 OCH3,在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所示的化合 物，其中n是0; A-B是乙烯基；并且Rp A、 R3、 R4、 1^、 R'" R'2、 R，3、 R、和R's是H (反式苜).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化 合物是式1和附帶定義所示的化合物，其中n是l; A-B是乙烯基； M是O;并且R2、 R3、 1^、 Rj、 R',、 R'2、 R，3、 R、和R、是H (查耳稱) 在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所 示的化合物，其中n是O; A-B是乙烯基；A、 R4和R、是OH;并 且R3、 R^、 RV R'2、 R、和R's是H (白蘆藜醇).在進(jìn)一步的 實(shí)施方案中，該化合物是式l和附帶定義所示的化合物，其中n是O; A-B是乙烯基；R2、 R4、 R,2和R'3是OH;并且R,、 R3、 R、、 化4和R's是H (piceatannol).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是 式1和附帶定義所示的化合物，其中n是l; A-B是乙烯基；M是 O; R3、 Rs、 R、和R、是OH;并且R^、 R4、 R、、 R、和R、是 H(紫鉀因).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所 示的化合物，其中n是l; A-B是乙烯基；M是O; Rt、 R3、 1^、 R'2 和R、是OH;并且112、 R4、 R、、 R、和R、是H (3，4，2，，4，，6，-五鞋基 查耳稱).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所示 的化合物，其中n是0; A-B是乙烯基；112和11'2是0狂；R4是0-卩-D-葡糖脊；R、是OCH3;并且Rp R3、 1^、 R、、 R、和R'-是H( rhapontin). 在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所示的化合物， 其中n是0; A-B是乙烯基；A是OH; R-是O-P-D-葡糖苷；R、是 OCH3;并且R,、 R3、 Rs、 R、、 R'2、 R'4和R's是H (deoxyrhapontin ) 在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式1和附帶定義所示的化合物， 其中n是0; A - B是-CH2CH(Me)CH(Me)CH2-; 1^、 R3、 R'2和R，3 是OH;并且R,、 R4、 Rs、 R'p R、和R、是H (NDGA ) 在另一種實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是式2的黃垸酮化合物<formula>formula see original document page 29</formula>其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)，R!、 R2、 R3、 R4、 Rs、 R、、 R，2、 R,3、 R'4、 R's和R"代表H、坑 基、芳基、雜芳基、坑芳基、雜芳烷基、卣化物、N02、 SR、 OR、 N(R)2或羧基；R代表H、烷基或芳基； M代表H2、 O、 NR或S; Z代表CR、 O、 NR或S;并且 X代表CR或N;并且 Y代表CR或N.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式2和附帶定義所示的化合 物，其中X和Y都是CH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式2 和附帶定義所示的化合物，其中M是O.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中， 該化合物是式2和附帶定義所示的化合物，其中M是H2.在進(jìn)一步 的實(shí)施方案中，該化合物是式2和附帶定義所示的化合物，其中Z是 O.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式2和附帶定義所示的化合 物，其中R"是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式2和附帶 定義所示的化合物，其中R"是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合 物是式2和附帶定義所示的化合物，其中R"是酶.在進(jìn)一步的實(shí)施 方案中，該化合物是式2和附帶定義所示的化合物，其中R,是<formula>formula see original document page 29</formula>".在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式2和附帶定義所示的化合物，其中R,、 R2、 R3、 R4、 R'p R'2、 R'3、 R'4、 R's和R" 是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式2和附帶定義所示的化合物，其中A、 R4和R'3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物 是式2和附帶定義所示的化合物，其中R4、 R'2、 R'3和R"是OH.在 進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式2和附帶定義所示的化合物，其 中R2、 R4、 R'2、 R，3、和R"是OH,在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合 物是式2和附帶定義所示的化合物，其中R2、 R4、 R'2、 R'3、 R'4、和 R"是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式2和附帶定義所示的化合 物，其中X和Y是CH; M是O; Z是O; R"是H;并且I^、 R2、 R3、 R4、 R'p R'2、 R，3、 R'4、 R'5和R"是H (黃烷新).在進(jìn)一步的 實(shí)施方案中，該化合物是式2和附帶定義所示的化合物，其中X和Y 是CH; M是O; Z是O; R"是H; R2、 ！^和R'3是OH;并且Rp R3、 RV R，2、 R，4和R's是H (柚皮素)，在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該 化合物是式2和附帶定義所示的化合物，其中X和Y是CH; M是O; Z是O; R"是OH; R2、 R4、 R'2和R'3是OH;并且Rn、 R3、 R、、 R'4 和R's是H (3，5，7，3'，4'-五幾基黃烷新).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該 化合物是式2和附帶定義所示的化合物，其中X和Y是CH; M是H2; Z是O; R"是OH; R2、 R4、 R'2和R'3是OH;并且R，、 R3、 R、、 R'4 和R's是H (表兒茶精).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式2和 附帶定義所示的化合物，其中X和Y是CH; M是H" Z是O; R" 是OH; R2、 R4、 R'2、 R'3和R、是OH;并且R,、 R3、 R、和R、是 H(沒食子兒茶精).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式2和附帶 定義所示的化合物，其中X和Y是CH; M是H2; Z是O; R"是oh ; R2、 R4、 R'2、 R'3、 R,4和R"是OH;并且R" R3、 R、和R's是H (沒食子酸表兒茶精).在另一種實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是式3的黃烷稱化合物其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)，R" R2、 R3、 R4、 Rs、 R、、 R'2、 R'3、 R'4、 R's和R/'代表H、 烷基、芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳烷基、鹵化物、N02、 SR、 OR、 N(R^或羧基；R代表H、烷基或芳基；M代表Ha、 O、 NR或S;Z代表CR、 O、 NR或S;并且X代表CR或N;并且Y代表CR或N.在另一種實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是式4的黃酮化合物:其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)，Rp R2、 R3、 R4、 Rj、 RV R'2、 R'3、 R'4和R's代表H、坑基、 芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳烷基、鹵化物、N02、 SR、 OR、 N(R)2R"不存在或代表H、烷基、芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳坑基、或羧基;由素、N02、 SR、 OR、 N(R)2或羧基； R代表H、烷基或芳基； M代表Hr O、 NR或S; Z代表CR、 O、 NR或S;并且當(dāng)R"不存在時(shí)，X代表CR或N,或當(dāng)R"存在時(shí)，X代表C.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合 物，其中X是C.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定 義所示的化合物，其中X是CR,在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物 是式4和附帶定義所示的化合物，其中Z是O.在進(jìn)一步的實(shí)施方案 中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中M是O,在進(jìn) 一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中 R"是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的 化合物，其中R"是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和 附帶定義所示的化合物，其中R,、 Ra、 R3、 R4、 R5、 R'" R'2、 R'3、 R，4和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義 所示的化合物，其中R2、 R'2和R'3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中， 該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中A、 R4、 R，2、 R、和 R'4是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示 的化合物，其中R2、 R4、 R'2和R，3是OH,在進(jìn)一步的實(shí)施方案中， 該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中R3、 R'2和R'3是OH. 在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物， 其中R2、 R4、 R'2和R'3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是 式4和附帶定義所示的化合物，其中R2、 R'2、 R、和R、是OH.在 進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其 中其中R2、 R4和R'3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式 4和附帶定義所示的化合物，其中A、 R3、 &和R、是OH.在進(jìn)一 步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中R^ R4和R'3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定 義所示的化合物，其中R3、 R、和R'3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中， 該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中R2和R'3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其 中Rp R2、 R'2和R，3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中R3、 R、和R，2是OH.在進(jìn)一步的 實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中R、是 OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化 合物，其中R4和R'3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式 4和附帶定義所示的化合物，其中R2和R4是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方 案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中R2、 R4、 R、 和R、是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義 所示的化合物，其中R4是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是 式4和附帶定義所示的化合物，其中R2、 R4、 R，2、 R，3和R'4是OH. 在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物， 其中R^、 R，2、 R、和R、是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物 是式4和附帶定義所示的化合物，其中R,、 A、 R4、 R'2和R'3是OH, 在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合 物，其中X是CH; R"不存在；Z是O; M是O;并且R" R3、 R4、 Rs、 R、、 R'2、 R'3、 R、和R's是H (黃嗣).在進(jìn)一步的實(shí)施方 案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中X是C; R" 是OH; Z是O; M是O; R2、 R、和R'3是OH;并且R，、 R3、 R4、 RV R、和R's是H (非瑟稱).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是 式4和附帶定義所示的化合物，其中X是CH; R"不存在；Z是O; M是O; R2、 R4、 R'2、 R'3和R'4是OH;并且R" R3、 R 和R，s是 H ( 5，7，3'，4'，5，-五羥基黃酮).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式 4和附帶定義所示的化合物，其中X是CH; R"不存在；Z是O; M 是O; R2、 R4、 R,2和R'3是OH;并且R,、 R3、 R、、 R、和R、是H (藤黃菌素).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義 所示的化合物，其中X是C; R"是OH; Z是O; M是O; R3、 R'2 和R、是OH;并且R" R2、 R4、 RV R、和R、是H (3，6，3，，4，-四羥 基黃嗣).在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示 的化合物，其中X是C; R"是OH; Z是O; M是O; R4、 R'2 和R、是OH;并且R,、 R3、 R、、 R、和R、是H (櫟精)，在進(jìn)一步 的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中X是 CH; R"不存在；Z是O; M是O; Rj、 R'2、 R，3和R'4是OH;并且 R,、 R3、 R4、 R、和R，s是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中X是C; R"是OH; Z是O; M是 O; Rj、 R4和R'3是OH;并且R,、 R3、 R、、 R'2、 R、和R、是H. 在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物， 其中X是CH; R"不存在；Z是O; M是O; 1^、 R3、 R4和R、是OH; 并且R,、 R，" R'2、 R'4和R's是H,在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合 物是式4和附帶定義所示的化合物，其中X是CH; R"不存在；Z是 O; M是O; 1^、 R4和R、是OH;并且I^、 R3、 R、、 R，2、 R、和R's 是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化 合物，其中X是C; R"是OH; Z是O; M是O; R3、 R、和R、是 OH;并且Rp R2、 R4、 R'2、 R'4和R's是H.進(jìn)一步的實(shí)施方案中， 該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中X是CH; R"不存在； Z是O; M是O; R2和R，3是OH;并且R" R3、 R4、 R、、 R'2、 R'4 和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所 示的化合物，其中X是C; R"是OH; Z是O; M是O; R,、 R2、 R'2 和R、是OH;并且Rp R4、 R'3、 R、和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí) 施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中X是C; R"是OH; Z是O; M是O; R3、 R、和R、是OH;并且R,、 R2、 R4、 R，3、化4和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附 帶定義所示的化合物，其中X是CH; R"不存在；Z是O; M是O; R、是OH;并且R!、 R2、 R3、 R4、 R、、 R,2、 R'4和R、是H,在進(jìn)一 步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中X 是CH; R"不存在；Z是O; M是O; R4和R、是OH;并且R,、 1^、 R3、 R'p R'2、 R、和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是 式4和附帶定義所示的化合物，其中X是CH; R"不存在；Z是O; M是O; Rz和R4是OH;并且R，、 R3、 R',、 R'2、 R'3、 R'4和R's是 H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合 物，其中X是C; R"是OH; Z是O; M是O; 1^、 1^、 R、和R'3 是OH;并且Rp R3、 R'2、 R，4和R、是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中， 該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中X是CH; R"不存在； Z是O; M是O; 1^是OH;并且R，、 R^、 R3、 R、、 R'2、 R,3、 R，4 和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義所 示的化合物，其中X是C; R"是OH; Z是O; M是O; A、 R4、 R'2、R'3和R，4是OH;并且R,、 R3、 R'，和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案 中，該化合物是式4和附帶定義所示的化合物，其中X是C; R"是 OH; Z是O; M是O; R^、 R'2、 R'3和R，4是OH;并且Rp R3、 R4、 R、和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式4和附帶定義 所示的化合物，其中X是C; R"是OH; Z是O; M是O; 1^、 R4、 R'2和R'3是OH;并且R3、 R、、 R、和R's是H,在另一種實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是式5的異黃酮化合物5其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)，R，、 R2、 R3、 R4、 Rs、 R'p R'2、 R'3、 R、和R's代表H、烷基、 芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳烷基、鹵化物、N02、 SR、 OR、 N(R)2或羧基；R"不存在或代表H、烷基、芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳烷基、 囟素、N02、 SR、 OR、 N(R)2或羧基； R代表H、坑基或芳基j M代表Ha、 O、 NR或S; Z代表CR、 O、 NR或S;并且當(dāng)R"不存在時(shí)，Y代表CR或N，或當(dāng)R"存在時(shí)，Y代表C.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式5和附帶定義所示的化合 物，其中Y是CR.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式5和附帶 定義所示的化合物，其中Y是CH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合 物是式5和附帶定義所示的化合物，其中Z是O.在進(jìn)一步的實(shí)施方 案中，該化合物是式5和附帶定義所示的化合物，其中M是O,在 進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式5和附帶定義所示的化合物，其中R2和R'3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式5和附帶 定義所示的化合物，其中R2、 R4和R，3是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式5和附帶定義所示的化合 物，其中Y是CH; R"不存在；Z是O; M是O; !^和R'3是OH; 并且Ri、 R3、 R4、 R',、 R，2、 R'4和R's是H,在進(jìn)一步的實(shí)施方案中， 該化合物是式5和附帶定義所示的化合物，其中Y是CH; R"不存在； Z是O; M是O; 1^、 R4和R、是OH;并且R,、 R3、 R、、 R'2、 R,4 和R's是H.在另一種實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是式6的花色素化合物<formula>formula see original document page 36</formula>其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)，R3、 R4、 Rs、 A、 R7、 R8、 R'2、 R'3、 R'4, R's和R'6代表H、烷 基、芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳烷基、鹵化物、N02、 SR、 OR、 N(R)2 或羧基；R代表H、烷基或芳基；并且A代表選自下組的陰離子Cl-、 Br或I-.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式6和附帶定義所示的化合 物，其中A是CI.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式6和附帶 定義所示的化合物，其中R3、 R5、 R7和R'4是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施 方案中，該化合物是式6和附帶定義所示的化合物，其中R3、 R5、 A、 R'3和R'4是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式6和附帶定 義所示的化合物，其中Rs、 A、 R7、 R'3、 R'4和R's是OH,在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式6和附帶定義所示的化合 物，其中A是C1; R3、 R5、 R7和R'4是OH;并且R4、 R6、 Rg、 R'2、R'3、 R's和R、是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式6和附 帶定義所示的化合物，其中A是Cl-; R3、 Rs、 A、 R，3和R'4是OH; 并且R4、 A、 R 、 R，2、 R，s和R、是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該 化合物是式6和附帶定義所示的化合物，其中A-是Cl'， R3、 Rs、 R7、 R,3、 R，4和R's是OH;并且R4、 R 、 Rg、 R'2和R'6是H.激活sirtuin蛋白家族成員的方法也可以包括使細(xì)胞接觸式7所示 的龍、查耳酮或黃稱化合物<formula>formula see original document page 37</formula>7其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)，Rp R2、 R3、 R4、 Rs、 RV R'2、 R'3、 R'4和R's代表H、烷基、 芳基、雜芳基、烷芳基、雜芳烷基、鹵化物、N02、 SR、 OR、 N(R)2或羧基；A代表H,或兩個(gè)&形成一個(gè)鍵； R代表H、烷基或芳基；并且 n是0或l; 前提是當(dāng)n是0時(shí)當(dāng)A和R4是OR，并且Rp R3、 Rs、 RV R'2、 R、和R、是H 時(shí)，R,3不是Cl、 F、 -CH3、 -CH2CH3、 -SMe、 N02、異丙基、-OMe 或羧基；當(dāng)R3是OR時(shí)，R，p R'2、 R'3、 R'4和R's中的至少一個(gè)不是H;并且R4不是羧基.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式7和附帶定義所示的化合 物，其中n是0.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式7和附帶定義所示的化合物，其中n是1.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是 式7和附帶定義所示的化合物，其中M不存在.在進(jìn)一步的實(shí)施方 案中，該化合物是式7和附帶定義所示的化合物，其中M是O.在 進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式7和附帶定義所示的化合物，其 中&是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式7和附帶定義所 示的化合物，其中M是O，并且兩個(gè)R^形成一個(gè)鍵.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式7和附帶定義所示的化合 物，其中Rs是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式7和附帶 定義所示的化合物，其中Rs是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合 物是式7和附帶定義所示的化合物，其中R，、 R3和R'3是OH。在進(jìn) 一步的實(shí)施方案中，該化合物是式7和附帶定義所示的化合物，其中 A、 R4、 R、和R、是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式7和附帶定義所示的化合物，其中議2、 R'2和R'3是OH,在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式7和附帶定義所示的化合物，其中議2和R4 是OH.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該化合物是式7和附帶定義所示的化合 物，其中n是0; M不存在；R,是H; Rj是H; R,、 R3和R、是OH; 并且R2、 R4、 R'p R'2、 R'4和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該 激活化合物是式7和附帶定義所示的化合物，其中n是l; M不存在； R3是H; Rj是H; R2、 R4、 R、和R'3是OH;并且R4、 R3、 R、、 R'4 和R's是H.在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該激活化合物是式7和附帶定 義所示的化合物，其中n是l; M是O;兩個(gè)R,形成一個(gè)鍵；&是 OH; R2、 R'2和R'3是OH;并且I^、 R3、 R4、 R、、 R'4和R,s是H.其它激活sirtuin的化合物包括具有選自下文所示式8-10的結(jié)構(gòu) 式的化合物.R-H、坑基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基R'-H、離素、N02、 SR、 OR、 NR2、坑基、芳基或羧基其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)，R'-H、齒素、N02、 SR、 OR、 NR2、烷基、芳基或羧基 R-H、烷基、芳基、雜環(huán)基或雜芳基在另一實(shí)施方案中，示例的激活sirtuin的化合物是異煙酰胺類似 物，例如，描述于美國(guó)專利Nos. 5,985,848; 6,066,722; 6,228,847; 6,492,347 ; 6,803,455和美國(guó)專利開Nos. 2001/0019823 ; 2002/0061898 ; 2002/0132783 ; 2003/0149261 ; 2003/0229033 ; 2003/0096830; 2004/0053944; 2004/0110772和2004/0181063,在此 全文引入其公開內(nèi)容作為參考.在示例的實(shí)施方案中，激活sirtuin的 化合物可以是具有下文式11-14的任意一個(gè)的異煙酰胺類似物.在 一種實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是具有式11的異煙酰胺類似 物化合物R = H、烷基、芳基雜環(huán)基或雜芳基3911其中A是氮連接的、氣連接的或碟連接的芳基、烷基、環(huán)或雜環(huán) 基團(tuán).這樣描迷的A部分任選具有離去基團(tuán)特征.在此處包含的實(shí)施 方案中，A進(jìn)一步被給電子部分取代.B和C都是氳，或B或C之 一是鹵素、氨基或硫羥基，B或C的另一個(gè)是氬；并且D是伯醇、氛 或通過(guò)礴酸二酯或碳取代的、氮取代的或碟取代的褲酸二酯橋與礴酸 酯、磷酰基、焦褲耽基或一砩酸腺苷連接或通過(guò)褲酸二癍或碳取代的、 氮取代的或碟取代的焦褲酸二酯橋與二褲酸腺苷連接的氣、氮、破或在一個(gè)例子中，A是取代的N連接的芳基或雜環(huán)基團(tuán)、O連接的 芳基或具有式-O-Y的雜環(huán)基團(tuán)或S連接的芳基或具有式-O-Y的雜環(huán) 基團(tuán)；B和C都是氬，或B或C之一是鹵素、氨基或疏羥基，B或C 的另一個(gè)是氬；并且D是伯醇或氳.A的非限制性的優(yōu)選實(shí)例如下文 所示，其中每個(gè)R是H或給電子部分，并且Z是烷基、芳基、羥基、 OZ'(其中Z'是烷基或芳基)、氨基、NHZ'(其中Z'是烷基或芳基) 或NHZ'Z"(其中Z'和Z"獨(dú)立地是坑基或芳基).A的實(shí)例包括以下i-xiv:ii iii iv<formula>formula see original document page 41</formula>其中Y"具有離去功能的基團(tuán). Y的實(shí)例包括，但不限于，以下xv-xxvii:<formula>formula see original document page 42</formula>其中，對(duì)于i-xxvii， X是氫、碟羥基或取代的破羥基、氨基或取 代的氨基、氣或取代的氣、或芳基或坑基、或雜環(huán).在某些實(shí)施方案中，A是取代的煙酰胺基團(tuán)(上文i，其中Z是 H)、取代的吡唑基團(tuán)(上文vii)或取代的(carboxamid)-咪唑基團(tuán)(上文x，其中Z是H).此外，B和C可以都是氫，或B 或C之一是鹵素、氨基或硤羥基，B或C的另一個(gè)是氬；并且D是 伯醇或氬.在其它實(shí)施方案中，B或C之一可以是鹵素、氨基或碟羥基，B 或C的另一個(gè)是氫.此外，D可以是氳或通過(guò)褲酸二酯或碳取代的、 氮取代的或碟取代的褲酸二醋橋與砩酸癍、礴?；⒔贡；蛞豁伤嵯佘者B接或通過(guò)褲酸二癍或碳取代的、氮取代的或碟取代的焦鱗酸 二酯橋與二褲酸腺苷連接的氣、氮、破或硤. 一褲酸腺苷或二褲酸腺苷的類似物也可以取代一褲酸腺苷或二磷酸腺苷基團(tuán).在一些實(shí)施方案中，A具有兩個(gè)或多個(gè)給電子部分. 在其它實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是下文式12、 13或14 的異煙酰胺類似物化合物.其中Z是烷基、芳基、羥基、OZ'(其中Z'是烷基或芳基)、氨 基、NHZ，(其中Z'是烷基或芳基)或NHZ'Z"(其中Z'和Z"獨(dú)立地 是烷基或芳基)；E和F獨(dú)立地是H、 CH3、 OCH3、 CH2CH3、 NH2、 OH、 NHCOH、 NHCOCH3、 N(CH3)2、 C(CH3)2、芳基或CVCw烷基， 優(yōu)選地，前提是當(dāng)E或F之一是H時(shí)，E或F中的另一個(gè)不是H;其中G、 J或K是CONHZ， Z是坑基、芳基、鞋基、OZ'(其 中Z'是烷基或芳基)、氨基、NHZ'(其中Z'是坑基或芳基)或NHZ'Z" (其中Z'和Z"獨(dú)立地是烷基或芳基)，并且G、 J和K中的其它兩個(gè)獨(dú)立地是CH3、 OCH3、 CH2CH3、 NH2、 OH、 NHCOH、 NHCOCH3;其中z是烷基、芳基、羥基、oz'(其中z'是烷基或芳基)、氨基、NHZ'(其中Z'是烷基或芳基)或NHZ，Z"(其中Z'和Z"獨(dú)立地 是烷基或芳基)；并且L是CH3、 OCH3、 CH2CH3、 NH2、 OH、 NHCOH、 NHCOCH3.在示例的實(shí)施方案中，該化合物是上文式12的化合物，其中E 和F獨(dú)立地是H、 CH3、 OCHs和OH，優(yōu)選地，前提是當(dāng)E或F之 一是H時(shí)，E或F中的另一個(gè)不是H.在另 一種示例的實(shí)施方案中，該化合物是p-l'-5-甲基-煙酰胺-2'-脫氣核糖、P-D-l'-5-甲基-煙酰胺-2'-脫氧呋喃核糖苷、|3-1'-4，5-二甲基 -煙酰胺-2'-脫氧核糖或p-D-l '-4，5-二甲基-煙酰胺-2'-脫氣呋鳴核糖苷.在另一實(shí)施方案中，該化合物是|3-1'-5-甲基-煙耽胺-2'-脫氧核糖，不受任何特定機(jī)制的限制，認(rèn)為A上的給電子部分穩(wěn)定了本發(fā)明 的化合物，使得它們不容易受到其余化合物的水解.這種改進(jìn)的化學(xué) 穩(wěn)定性使化合物的價(jià)值得到了改進(jìn)，因?yàn)橛捎趯?duì)水解破壞的抗性，它 可以在生物系統(tǒng)內(nèi)作用更長(zhǎng)的時(shí)間.本領(lǐng)域技術(shù)人員可以預(yù)見許多預(yù) 計(jì)能夠起這種穗定作用的給電子部分.合適的給電子部分的非限制性 實(shí)例是甲基、乙基、O-甲基、氦基、NMe2、羥基、CMe3、芳基和烷 基.優(yōu)選地，給電子部分是甲基、乙基、O-甲基、氨基.在最優(yōu)選的 實(shí)施方案中，給電子部分是甲基.式11-14的化合物可以以游離形式和鹽形式使用.術(shù)語(yǔ)"藥學(xué) 可接受鹽"意欲適用于衍生自無(wú)機(jī)或有機(jī)酸的無(wú)毒鹽，包括，例如，衍生自以下酸的鹽鹽酸、碟酸、褲酸、乙酸、乳酸、富馬酸、琥珀 酸、酒石酸、葡糖酸、檸檬酸、甲橫酸、和對(duì)-甲苯磺酸.也提供了作為此處公開的抑制劑化合物的互變異構(gòu)體、藥學(xué)可接 受鹽、酯和前藥的式11-14的化合物.可以通過(guò)轉(zhuǎn)化為前藥形式，提高式U-14的化合物的生物利用 度.所述前藥可以具有相對(duì)于未轉(zhuǎn)化的化合物的改進(jìn)的親脂性，這可 以導(dǎo)致膜通透性增強(qiáng).前藥的一種特別有用的形式是醋衍生物.其用 途依賴于一種或多種遍在的細(xì)胞內(nèi)脂肪酵催化酶基團(tuán)水解的作用，以 便在作用位點(diǎn)上或作用位點(diǎn)附近釋放活性化合物.在前藥的一種形式 中，化合物中的一個(gè)或多個(gè)幾基可以是O-乙跣化的，以制備?；苌?物.也可以制備式11-14的化合物的5-砩酸酯衍生物.這些可以特 別有用，因?yàn)?-砩酸酶的陰離子性質(zhì)可以限制其跨細(xì)胞膜的能力。方 便地，這樣的5-礴酸酶衍生物可以轉(zhuǎn)化為不帶電的雙(酰氣基甲基) 酯衍生物.所述前藥的用途依賴于一種或多種遍在的細(xì)胞內(nèi)脂肪酶催 化酶基團(tuán)水解的作用，以便在作用位點(diǎn)上或作用位點(diǎn)附近釋放一分子 的甲S^和本發(fā)明的化合物.已經(jīng)描述了制備所述酰氧基甲基酯前藥形 式的轔酸化碳水化合物衍生物的用途和普遍方法的特定實(shí)例(Kang et al" 1998; Jiang etal" 1998; Uetal" 1997; Kr叫paetal.， 1997)。在另一實(shí)施方案中，示例的激活sirtuin的化合物是O-乙酰基-ADP-核糖類似物，包括2'-0-乙?；?ADP-核糖和3'-0-乙酰基-ADP-核糖,及它們的類似物.示例的O-乙?；?ADP-核糖類似物描述于， 例如，美國(guó)專利公開Nos.2004/0053944 ; 2002/0061898和 2003/0149261,在此引入其完整內(nèi)容作為參考.在示例的實(shí)施方案中， 激活sirtuin的化合物可以是具有下文式15-18的O-乙跣基-ADP-核 糖類似物.在一種實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是式15的O-乙 ?；?ADP-核糖類似物；或其互變異構(gòu)體；或其藥學(xué)可接受鹽；或其 酯；或其前藥<formula>formula see original document page 46</formula>其中A選自N、 CH和CR，其中R選自任選被烷基、芳烷基和芳基 取代的卣素、OH、 NH2、 NHR1、 NR1R2和SR3,其中Rl、 R2和R3各自是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；B選自O(shè)H、 NH2、 NHR4、 H和卣素，其中R4是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；D逸自O(shè)H、 NH2、 NHR5、 H、由素和SCH3,其中R5是任選取代的烷基、芳坑基或芳基；X和Y獨(dú)立地選自H、 OH和齒素，前提是，當(dāng)X和Y之一是羥基或卣素時(shí)，另一個(gè)是氫；Z是OH,或，當(dāng)X是羥基時(shí)，Z選自氨、鹵素、羥基、SQ和OQ,其中Q是任選取代的烷基、芳烷基或芳基；并且W是OH或H，前提是，當(dāng)W是OH時(shí)，A是CR，其中R如 上文所定義.在某些實(shí)施方案中，當(dāng)B是NHR4和/或D是NHR5時(shí)，R4和/ 或R5是Cl-C4烷基.在其它實(shí)施方案中，當(dāng)存在一個(gè)或多個(gè)鹵素時(shí)，它們選自氣和氟.在另一種實(shí)施方案中，當(dāng)Z是SQ或OQ時(shí)，Q是C1-C5烷基或 苯基.在一種示例的實(shí)施方案中，D是H，或當(dāng)D不是H時(shí)，B是OH. 在另一種實(shí)施方案中，B是OH、 D是H、 OH或NH2， X是OH 或H， Y是H，最優(yōu)選地，Z是OH、 H或甲碟基，特別是OH.在某些實(shí)施方案中，W是OH、 Y是H、 X是OH，并且A是CR，其中R是甲基或鹵素，優(yōu)選氣.在其它實(shí)施方案中，W是H， Y是H, X是OH,并且A是CH, 在其它實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是式16的O-乙酰基-ADP-核糖類似物化合物；或其互變異構(gòu)體；或其藥學(xué)可接受鹽；或其酶；或其前藥其中A、 X、 Y、 Z和R如在上文式(15)的化合物中笫一次出 現(xiàn)時(shí)的定義；E選自C02H或其相應(yīng)的鹽形式、C02R、 CN、 CONH2、 CONHR或CONR2; G選自NH2 、 NHCOR 、 NHCONHR或 NHCSN肌在某些實(shí)施方案中，E是CONH2并且G是NH2.在其它實(shí)施方案中，E是CONH2， G是NH2， X是OH或H, 是H,最優(yōu)選地，Z是OH、 H或甲碟基，特別是OH.示例的激活sirtuin的化合物包括以下化合物(lS)-l，4-二脫氣小C-(4-羥基吡咯并3，2-dl嘧啶-7-基)-l，4-亞氨基-D-核糖醇(18)-1-0(2-氨基-4-羥基吡咯并13，2-(11嘧啶-7-基)-1，4-二脫氣-1，4-亞氨基-D-核糖醇(lR)-l-C-(4-羥基吡咯并3，2-dl嘧啶-7-基)-l，4-亞氨基-l，2，4-三脫氧 -D-赤型-戊糖醇(lS)小C-(4-羥基吡咯并3，2-d嘧啶-7-基)-l，4-亞氡基-l，4，5-三脫氣 -D-核糖醇(18)-1,4-二脫氣-1-0(4-羥基吡咯并13，2-<1嘧啶-7-基)-1，4-亞氨基-S-甲碟基-D-核糖醇(lS)-l，4-二脫氣-l-C-(2，4-二幾基吡咯并3，2-d嘧咬-7-基)-l，4-亞氨基-D核糖醇(lR)-l-C-(2，4-二幾基吡咯并〖3,2-d嘧啶-7-基)-l，4-亞氨基-l，2，4-三 脫氣-D-赤型-戊糖醉(lS)小C-(2,4-二幾基吡咯并3，2-d嘧啶-7-基)-l，4-亞氨基-l，4，5-三 脫氣-D-核糖醇(1S)-l，4-二脫氣-l-C-(2，4-二羥基吡咯并3，2-d嘧啶-7-基)-l，4-亞氨 基-5-乙碟基-D-核糖醇(lR)-l-C-(2-氛基-4-羥基吡咯并3，2-d嘧啶-7-基)-1，4-亞氨基-1 ，2，4-三脫氣-D-赤型-戊糖醇(lS)-l-C-(2-氨基-4-羥基吡咯并3，2-d嘧啶-7-基H，4"亞氨基-l，4，5-三脫氣-D-核糖醇(18)-1-<:-(2-氨基-4-羥基^咯并3，2-(11嘧啶-7-基)-1，4-二脫氣-1，4-亞氨基-5-甲碟基-D-核糖醉(18)-1，4-二脫氣-1-<:-(7-羥基吡唑并4，3-(11嘧啶-3-基)-1，4-亞氛基-D-核糖醇(1R)-l-C-(7-羥基吡唑并4，3-dl嘧啶-3-基)-l，4-亞氨基-l，2， 4-三脫 氧-D-赤型-戊糖醉(1S)-l-C-(7-幾基吡唑并4，3-dl嘧啶-3-基)-l，4-亞氡基-l ， 4，5-三脫 氣-D-核糖醇(1S)-l，4-二脫氣-l-C-(7-羥基吡唑并4，3-dl嘧啶-3-基)-l，4-亞氨基-5-乙碟基-D-核糖醇(lS)-l，4-二脫氣-l-C-(5,7-二幾基吡唑并4，3-d嘧咬-3-基)-l，4-亞氨 基-D-核糖醇(lR)-l-C-(S，7-二鞋基吡唑并4，3-dl嘧啶-3-基)-l，4-亞氨基-l，2，4-三 脫氣-D-赤型-戊糖醇(lS)-l-0(5，7-二幾基吡唑并4，3-d嘧啶-3-基)-l，4-亞氨基-l，4，5-三 脫氧-D-核糖醇(lS)-l，4-二脫氣-l-C-(5，7-二幾基^唑并14，3-d嘧咬-3-基)-l，4-亞氨 基-5-甲碟基-D-核糖醇(18)-1-0(5-氨基-7-羥基吡唑并4，3-|1嘧啶-3-基)-1，4-二脫氣-1，4-亞氨基-D-核糖醇(IR)-I-C-(S-氨基-7-羥基吡唑并4，3-d嘧啶-3-基)-1，4-亞氨基-1，2，4-三脫氣-D-赤型-戊糖酵(18)-1-0(5-氨基-7-羥基吡唑并4，3- 11嘧啶-3-基)-1，4-亞氨基-1，4，5-三脫氣-D-核糖醇(18)-1-0(5-氨基-7-鞋基吡唑并4，3-司嘧啶-3-基)-1,4-二脫氣-1，4-亞氨基-5-甲硤基-D-核糖醇(1S)-l-C-P-氨基-2-跣胺基-4-吡咯基)-l—二脫氣-l，4-亞氨基-D-核糖醇(1S)-1 ， 4-二脫氣-l-C-(4-幾基吡咯并3，2-d嘧啶-7-基)-l，4-亞氨基 -D-核糖醉(lS)-l-C-(2-氨基-4-羥基吡咯并3，2-d嘧啶-7-基)-l，4-亞氨基-D-核 糖醉5-褲酸酯(lS)小C-(3-氨基-2-酰胺基-4-吡咯基)-l，4-二脫氧-l，4-亞氨基-D-核糖醇在另一種實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物是式17和18的O-乙酕基-ADP-核糖類似物化合物、其互變異構(gòu)體或其藥學(xué)可接受鹽.可以通過(guò)轉(zhuǎn)化為前藥形式，提高式(15)或式(16)的化合物的生物利用度.所述前藥可以具有相對(duì)于式(15)或式(16)的化合物 的改進(jìn)的親脂性，這可以導(dǎo)致膜通透性增強(qiáng).前藥的一種特別有用的 形式是酶衍生物.其用途依賴于一種或多種遍在的細(xì)胞內(nèi)脂肪酶催化 BS基團(tuán)水解的作用，以便在作用位點(diǎn)上或作用位點(diǎn)附近釋放式(15) 或式(16)的化合物.在前藥的一種形式中，式(15)或式(16)的化合物中的一個(gè)或 多個(gè)羥基可以是O-乙跣化的，以制備例如5-0-丁酸酯或2,3-二-0-丁 酸酯衍生物.可以制備式(15)或式(16)的化合物的5一酸酶衍生物.這些 可以特別有用，因?yàn)?-磷酸癍的陰離子性質(zhì)可以限制其跨細(xì)胞膜的能 力，方便地，這樣的5-鱗酸酯衍生物可以轉(zhuǎn)化為不帶電的雙(酰氧基 甲基)癍衍生物.所述前藥的用途依賴于一種或多種遍在的細(xì)胞內(nèi)脂 肪酶催化這些癍基團(tuán)水解的作用，以便在作用位點(diǎn)上或作用位點(diǎn)附近 釋放一分子的甲搭和式(15)或式(16)的化合物.在一種示例的實(shí)施方案中，設(shè)計(jì)了 2'-AADPR或3'-AADPR的類 似物，使其具有增加的抗酶醉作用的穩(wěn)定性，這是通過(guò)采用公知的取 代基取代受癍酶攻擊的醋氣原子而實(shí)現(xiàn)的，可以理解，2'-AADPR和 3，-AADPR中對(duì)醋酶不穩(wěn)定的氧原子是連接乙酸基團(tuán)與核糖的酯氧和 兩個(gè)礴原子之間的癍氣.如本領(lǐng)域公知的，用CF2、 NH或S取代這 些酶氣原子中的一個(gè)或兩個(gè)，將提供顯著更穩(wěn)定的2'-AADPR或3'-AADPR類似物，這是由于對(duì)醋酶活性的抗性增加.這樣，在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及表現(xiàn)出在細(xì)胞中的穩(wěn)定性 增加的類似物2'-0-乙?；?ADP-核糖或3'-0-乙跣基-ADP-核糖.優(yōu)選 的類似物包含CF2、 NH或S代替乙酰酯氣或兩個(gè)磷原子之間的氣. 最優(yōu)選的取代基是CF2.取代乙酰酯氣是特別優(yōu)選的.在其它優(yōu)選實(shí) 施方案中，醋氣和兩個(gè)磷原子之間的氣都獨(dú)立地被CF2、 NH或S取 代.也包括此處描述的式1 _ 10的激活sirtuin的化合物的藥學(xué)可接受 鹽和復(fù)合物.當(dāng)化合物可以具有一個(gè)或多個(gè)手性中心時(shí)，除非特別指 出，此處考慮的化合物可以是單立體異構(gòu)體，或立體異構(gòu)體的外消旋 混合物.當(dāng)激活sirtuin的化合物具有不飽和碳—碳雙鍵時(shí)，此處既考慮順式(Z)也考慮反式(E)異構(gòu)體.當(dāng)化合物可以以互變異構(gòu)形式，例如嗣-烯醉互變異構(gòu)體，如入和:的形式存在時(shí)，每一種互變異構(gòu)形式都考慮包含在此處的方法中，不論是以平衡形式存在還是通過(guò) 合適的W取代而銷定在一種形式.任意一次出現(xiàn)時(shí)的任何取代基的 含義不依賴于其含義或任意其它次出現(xiàn)時(shí)的任意其它取代基的含義.此處的方法中也包含式1 - 10的激活sirtuin的化合物的前藥.前 藥被認(rèn)為是體內(nèi)釋放活性母體化合物的任何共價(jià)鍵合的栽體.此處描述的上述激活sirtuin的化合物的類似物和衍生物也可以用 于激活sirtuin蛋白家族的成員.例如，衍生物或類似物可以使化合物 更穩(wěn)定，或改善它們通過(guò)細(xì)胞膜或被胞吞或胞飲的能力.示例的衍生 物包括糖基化的衍生物，例如，美國(guó)專利6,361,815描述的白聲藜醇 的衍生物.白,藜醇的其它衍生物包括順式和反式白,藜醉及其與糖 類的綴合物，如形成葡糖苷(參見，例如美國(guó)專利6,414,037).也可 以使用稱作云杉新苷或白,藜醇3-0-p-D-吡喃葡糖苷的葡糖苷虎杖 脊.可以與化合物綴合的糖類包括葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖和 蔗糖.糖基化的寬類進(jìn)一步描述于Regev-Shoshani et al. Biochemical J. (4/16/03公開為BJ20030141).此處描述的化合物的其它衍生物是 酯、酰胺和前藥.白,攀醇的酯描述于，例如美國(guó)專利6,572,882.可 以按照本領(lǐng)域的描述，例如美國(guó)專利6,414,037; 6，361，81S; 6,270,780; 6，572，882和Brandolini et al. (2002 ) J. Agric. Food, Chem. 50: 7407 中的描述制備白,幕醇及其衍生物.羥基黃稱的衍生物描述于，例如 美國(guó)專利4,591,600.白聲藜醇和其它的激活化合物也可以商購(gòu)，例如， 購(gòu)自Sigma.在某些實(shí)施方案中，如果激活sirtuin的化合物是天然存在的，它 可以在使用前至少部分分離自其天然環(huán)境.例如，可以在用于此處描 述的方法之前從植物分離，并且部分或顯著純化.也可以合成制備激 活化合物，在此情況下它可以不含與其天然締合的其它化合物.在示 例的實(shí)施方案中，激活組合物包含少于大約50%、 10°/。、 1%、 0.1°/。、 10-2%或10-3%與其天然締合的化合物，或激活化合物與少于大約 50%、 10%、 1%、 0.1%、 10-2%或10-3%與其天然締合的化合物締合.在某些實(shí)施方案中，通過(guò)一類化合物(如具有式1)中任意一種激活sirtuin的化合物調(diào)節(jié)某些生物功能，如減輕體重，前提是該類化 合物不包括一種或多種特定化合物.例如，在某些實(shí)施方案中，sirtuin 激活刑-激活化合物可以是能夠增加sirtuin蛋白表達(dá)和/或活性的任 何化合物，前提是該化合物不是白,幕醇、黃稱或此處特別提到的其 它化合物，或在本申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)日之前證明對(duì)sirtuin蛋白具有激活作 用的任何其它化合物.在示例的實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物可 以是式1-18的任意一個(gè)的化合物，前提是該化合物不是白蘆藜醇、 黃嗣或此處特別提到的其它化合物，或在本申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)日之前證明 對(duì)sirtuin蛋白具有激活作用的任何其它化合物.在示例的實(shí)施方案 中，激活sirtuin的化合物不包括美國(guó)專利6,410,596或6,552,085中 提到的任意化合物，在此全文引入其公開內(nèi)容作為參考.例如，在一 種實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物不包括具有以下式22的化合物其中，A選自單鍵和反式構(gòu)象的雙鍵；Rl選自H、 OH、 Cl-6烷氣基、COOH和COOC1-6烷基； R2選自H、 OH和C1-10烷氣基；R3選自H、 C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C2-10炔基和Cl-8環(huán) 烷基；R4選自H、 OH和C1-10烷氧基；R5選自H、 C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C2-10炔基和Cl-8環(huán) 烷基；R6選自H、 OH、 Cl隱6烷氣基、COOH和COOC1-6烷基； R7選自H、 OH、 Cl-6烷氣基、COOH和COOC1-6烷基；并且其中R3和R5中的至少一個(gè)選自C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C2-10 炔基和Cl-8環(huán)烷基.在某些實(shí)施方案中，目標(biāo)sirtuin激活刑，如SIRT1激活刑，在 有效激活sirtuin，如SIRT1的脫乙統(tǒng)醉活性的濃度下(例如，體內(nèi)) 不具有任何顯著的抑制PI3-激蘇、抑制搭還原睞和/或抑制酪氨酸蛋白 激蘇的能力.例如，在優(yōu)選實(shí)施方案中，選擇激活sirtuin脫乙跣醉活 性的EC50比抑制搭還原酶和/或賂氨酸蛋白激酶中的一種或多種的 EC50小至少5倍，甚至更優(yōu)選至少10倍、100倍或甚至1000倍的sirtuin 激活刑.測(cè)定PI3-激酶活性、搭還原蘇活性和酪氨酸激醉活性的方法 是本領(lǐng)域公知，進(jìn)行所述測(cè)定的試刑盒是可商購(gòu)的.對(duì)于PI3激蘇測(cè) 定，參見，例如美國(guó)專利公開No.2003/0158212,對(duì)于搭還原酶測(cè)定， 參見，例如美國(guó)專利/^開No.2002/20143017;酪氨酸激醉測(cè)定試刑盒 可以商購(gòu)，例如，購(gòu)自Promega( Madison, WI;網(wǎng)址是promega.com )、 Invitrogen (Carlsbad, CA; 網(wǎng)址是invitrogen.com)或Molecular Devices ( Sunnyvale, CA; 網(wǎng)址是moleculardevices.com )。在某些實(shí)施方案中，目標(biāo)sirtuin激活劑在有效激活sirtuin的脫 乙跣酶活性的濃度下(例如，體內(nèi))不具有任何顯著的反式激活EGFR 酪氨酸激醉活性的能力.例如，在優(yōu)選實(shí)施方案中，選擇激活sirtuin 脫乙酰酶活性的EC50比反式激活EGFR酪氨酸激蘇活性的EC50小 至少5倍，甚至更優(yōu)選至少10倍、100倍或甚至1000倍的sirtuin激 活劑.測(cè)定反式激活EGFR酪氨酸激蘇活性的方法是本領(lǐng)域公知的， 參見，例如，Pai et al. Nat. Med. 8: 289-93( 2002 )和Vacca et al. Cancer Research 60: 5310-5317 ( 2000),在某些實(shí)施方案中，目標(biāo)sirtuin激活刑在有效激活sirtuin的脫 乙酰酶活性的濃度下(例如，體內(nèi))不具有任何顯著的導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈 擴(kuò)張的能力.例如，在優(yōu)選實(shí)施方案中，選擇激活sirtuin脫乙酰酶活 性的EC50比冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張的EC50小至少5倍，甚至更優(yōu)選至少10 倍、100倍或甚至1000倍的sirtuin激活劑.測(cè)定血管擴(kuò)張的方法是 本領(lǐng)域公知的，參見，例如，美閨專利公開No. 2004/0236153.在某些實(shí)施方案中，目標(biāo)sirtuin激活劑在有效激活sirtuin的脫 乙酰酶活性的濃度下(例如，體內(nèi))不具有任何顯著的解痙能力.例 如，在優(yōu)選實(shí)施方案中，選摔激活sirtuin脫乙耽醉活性的EC50比解痙作用(如對(duì)胃腸道肌肉)的ECS0小至少5倍，甚至更優(yōu)選至少10 倍、100倍或甚至1000倍的sirtuin激活劑.測(cè)定解痙活性的方法是 本領(lǐng)域公知的，參見，例如，美國(guó)專利公開No. 2004/0248987.在某些實(shí)施方案中，目標(biāo)sirtuin激活劑在有效激活sirtuin的脫 乙酰醃活性的濃度下(例如，體內(nèi))不具有任何顯著的抑制肝細(xì)胞色 素P450 IBI( CYP )的能力.例如，在優(yōu)選實(shí)施方案中，選擇激活sirtuin 脫乙跣蘇活性的EC50比抑制P450 1B1的EC50小至少5倍，甚至更 優(yōu)選至少10倍、100倍或甚至1000倍的sirtuin激活刑.測(cè)定細(xì)胞色 素P450的活性的方法是本領(lǐng)域公知的，進(jìn)行所述測(cè)定的試劑盒是可 商購(gòu)的.參見，例如，美國(guó)專利6,420,131和6,335,428以及Promega (Madison, WI; 網(wǎng)址是promega. Com ) 在某些實(shí)施方案中，目標(biāo)sirtuin激活劑在有效激活sirtuin的脫 乙耽醉活性的濃度下(例如，體內(nèi))不具有任何顯著的抑制核因子-kb (NF-kB)的能力.例如，在優(yōu)選實(shí)施方案中，選摔激活sirtuin脫乙 酰蘇活性的EC50比抑制NF-kB的ECSO小至少S倍，甚至更優(yōu)選至 少10倍、100倍或甚至1000倍的sirtuin激活劑.測(cè)定NF-kB活性 的方法是本領(lǐng)域公知的，進(jìn)行所述測(cè)定的試刑盒是可商購(gòu)的(例如， 購(gòu)自 Oxford Biomedical Research ( Ann Arbor , MI; 網(wǎng)址是 oxfordbiomed. com ) ) 在某些實(shí)施方案中，目標(biāo)sirtuin激活刑在有效激活sirtuin的脫 乙耽酴活性的濃度下(例如，體內(nèi))不具有任何顯著的抑制I類組蛋 白脫乙酰酶(HDACs)、 II類HDAC或l和II類HDACs的能力，例 如，在優(yōu)選實(shí)施方案中，選擇激活sirtuin脫乙酖蘇活性的EC50比抑 制HDAC I和/或HDAC II的EC50小至少5倍，甚至更優(yōu)選至少10 倍、100倍或甚至1000倍的sirtuin激活劑.測(cè)定HDAC I和/或HDAC II活性的方法是本領(lǐng)域公知的，進(jìn)行所述測(cè)定的試劑盒是可商購(gòu)的. 參見,例如,Bio Vision, Inc. (Mountain View, CA;網(wǎng)址是biovision. com)和Thomas Scientific ( Swedesboro， NJ;網(wǎng)址是tomassci. com ).在某些實(shí)施方案中，目標(biāo)SIRT1激活刑在有效激活人類SIRT1 的脫乙酰睞活性的濃度下(例如，體內(nèi))不具有任何顯著的激活低等 真核動(dòng)物，特別是酵母或人類病原體中的SIRT1直向同源物的能力. 例如，在優(yōu)選實(shí)施方案中，選摔激活人類SIRT1脫乙酰醉活性的ECSO比激活酵母Sir2 (如假絲酵母、啤酒糖酵母等)的ECS0小至少5倍， 甚至更優(yōu)選至少10倍、100倍或甚至1000倍的SIRT1激活刑.在某些實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物可以具有激活一種或多 種situin蛋白同源物，如，激活人類SIRT1、 SIRT2、 SIRT3、 SIRT4、 SIRT5、 SIRT6或SIRT7中的一種或多種的能力.在其它實(shí)施方案中， SIRT1激活刑在有效激活人類SIRT1的脫乙酰醉活性的濃度下(例 如，體內(nèi))不具有任何顯著的激活其它sirtuin蛋白同源物，例如，激 活人類SIRT2、 SIRT3、 SIRT4、 SIRT5、 SIRT6或SIRT7中的一種 或多種的能力.例如，可以選擇激活人類SIRT1脫乙酰酶活性的EC50 比激活人類SIRT2、 SIRT3、 SIRT4、 SIRT5、 SIRT6或SIRT7中的 一種或多種的ECSO小至少5倍，甚至更優(yōu)選至少10倍、100倍或甚 至1000倍的SIRT1激活劑 在某些實(shí)施方案中，可以用SIRT3和SIRT4調(diào)節(jié)劑來(lái)調(diào)節(jié)脂肪 動(dòng)員.例如，可以用SIRT3和/或SIRT4激活劑來(lái)誘導(dǎo)脂肪動(dòng)員，并 且可以用于治療，例如，肥胖和胰烏素抗性病癥.在其它實(shí)施方案中，目標(biāo)sirtuin激活劑在有效激活sirtuin的脫 乙酰酶活性的濃度下(例如，體內(nèi))不具有任何顯著的以下能力抑 制蛋白激酵；對(duì)有絲分裂原激活的蛋白(MAP)激酶進(jìn)行磷酸化；抑 制環(huán)加氣睞，例如COX-2的催化或轉(zhuǎn)錄活性；抑制一氣化氮合酶 (iNOS);或抑制血小板對(duì)I型膠原的粘附.例如，在優(yōu)選實(shí)施方案 中，選擇激活sirtuin脫乙gfc酶活性的EC50比實(shí)施上迷任何活性的 EC50小至少5倍，甚至更優(yōu)選至少10倍、100倍或甚至1000倍的sirtuin 激活劑.測(cè)定蛋白激蘇活性、壞加氧酶活性、 一氣化氮合酶活性和血 小板粘附活性的方法是本領(lǐng)域公知的，進(jìn)行所述測(cè)定的試刑盒是可商 購(gòu)的.對(duì)于蛋白激醉測(cè)定試刑盒參見，例如，Promega (Madison, WI; 網(wǎng)址是promega.com); Invitrogen ( Carlsbad, CA; 網(wǎng)址是 invitogen.com ); Molecular Devices ( Sunnyvale ， CA ; 網(wǎng)址是 moleculardevices.coiii)或Assay Designs ( Ann Arbor MI; 網(wǎng)址是 assaydesigns.com);對(duì)于環(huán)加氣酵測(cè)定試刑盒，參見，例如，Amersham Biosciences (Piscataway, NJ; 網(wǎng)址是amershamobiosciences, com ); 對(duì)于一氧化氮合蘇測(cè)定試劑盒，參見，例如Amersham Biosciences (Piscataway， NJ; 網(wǎng)址是amershamobioscieiices.com)和R & DSystems (Minneapolis, 網(wǎng)址是rndsystems.com); 對(duì)于血小板枯附承J 定，參見，例如美國(guó)專利Nos. 5,321,010; 6,849,290和6,774,107.此處描述的激活sirtuin的化合物可以單獨(dú)施用，或者與其它化合 物聯(lián)合施用.其它化合物可以是其它sirtuin和/或AMPK激活劑.例 如，紅酒的提取物L(fēng)ongevinexTM,除了白,蕃醇外，它還含有其它 sirtuin激活劑，如櫟精，它是特別強(qiáng)效的動(dòng)員脂肪的試劑.可以在網(wǎng) 上獲得LongevinexTM, 網(wǎng)址是www. longevinex.com.聯(lián)合藥物方案也可以包括用于治療肥胖和/或糖尿病的藥物或化合物.在示例的實(shí)施方案中，激活sirtuin的化合物可以作為聯(lián)合治療而 施用.例如，對(duì)于減輕體重、防止體重增長(zhǎng)，或治療或預(yù)防肥胖，可 以將式1 - 10的一種或多種激活sirtuin的化合物與以下"抗肥胖刑" 聯(lián)合使用苯基丙醇胺、麻黃定、擬麻黃定、苯丁胺、縮膽囊肽-A激 動(dòng)劑、單胺再攝取抑制劑(如西布茶明)、交感模擬劑、5-羥色胺能試 刑(如右旋盼氣拉明或酴象拉明)、多巴胺拮抗劑(如溴隱亭)、黑色 素細(xì)胞刺激激素受體激動(dòng)劑或模擬物、黑色素細(xì)胞刺激激素類似物、 大麻類受體拮抗刑、黑色素濃集激素拮抗劑、OB蛋白(瘦蛋白)、瘦 蛋白類似物、瘦蛋白受體激動(dòng)劑、甘丙氨菌素拮抗劑或GI脂肪醉抑 制刑或降低劑(如奧利司他).其它控制食欲的試刑包括鈴蟾肽激動(dòng) 劑、脫氫表雄酮或其類似物、糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)刑和拮抗刑、orexin 受體拮抗刑、urocortin結(jié)合蛋白拮抗刑、胰髙血糖素樣肽-1受體的 激動(dòng)劑，如Exendin和睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，如Axokine.或者，可以將式1 - 10的一種或多種激活sirtuin的化合物與以下 "抗糖尿病刑"聯(lián)合使用搭還原醉抑制刑、糖原褲酸化醉抑制刑、 山梨糖醇脫氬醉抑制刑、蛋白酪氨酸褲酸化睞IB抑制劑、二肽基蛋 白醃抑制劑、胰烏素(包括口服胰烏素制劑)、胰烏素模擬物、二甲 雙胍、阿卡波糖、過(guò)氣化物酶體增殖物激活的受體y (PPAR-y)配體， 如troglhazone、羅格列酮、吡格列稱或GW-1929,橫脲類、格列吡 漆、格列苯脲或氣磺丙脲，其中笫一和笫二化合物的量導(dǎo)致療效.其 它抗糖尿病劑包括葡糖苷睞抑制刑、胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)、胰 烏素、PPARa/y雙激動(dòng)刑、氯茴苯酸和aP2抑制桐.在示例的實(shí)施方 案中，抗糖尿病刑可以是二肽基肽酶IV ( DP-IV或DPP-IV)抑制劑，LAF237 ( NVP DPP728; 1-[2-(5-氛基吡啶-2-基)氨基乙基氨基乙?；?/b>-2-氛基-(S)-吡咯烷)或來(lái)自Merck的 MK-04301 (參見，例如，Hughes etal" Biochemistry 38: 11597-603 (1999)),在某些實(shí)施方案中， 一種或多種激活sirtuin的化合物可以特異性 針對(duì)某些組織(如肝臟)，而不是全身.可以采用組織特異性療法來(lái) 治療，例如，肥胖和胰烏素抗性病癥.在某些實(shí)施方案中，所述方法可以用于防止具有脂肪生成能力的 細(xì)胞，例如肝細(xì)胞、胰細(xì)胞和肌細(xì)胞中的脂肪積累.用于減少或防止細(xì)胞中的脂肪積累的方法也可以包括增加 sirtuin，例如人類細(xì)胞中的SIRT1、酵母細(xì)胞中的Sir2、秀麗新桿線 蟲中的Sir2.1或其它生物中任意所述sirtuin的同源物的蛋白水平， 可以通過(guò)將編碼sirtum的一個(gè)或多個(gè)拷貝的核酸導(dǎo)入細(xì)胞而增加蛋白 水平.例如，通過(guò)將編碼例如具有SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列的 SIRT1的核酸導(dǎo)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞，可以增加哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的SIRT1 水平.該核酸可以受到調(diào)節(jié)SIRTl核酸表達(dá)的啟動(dòng)子的控制.或者， 可以將核酸導(dǎo)入細(xì)胞中基因組中啟動(dòng)子下游的位置.通過(guò)這些方法增 加蛋白水平的方法是本領(lǐng)域公知的.示例的方法描述于實(shí)施例中.導(dǎo)入細(xì)胞中以增加sirtuin的蛋白水平的核酸可以編碼與sirtum 的序列，例如SEQIDNO: 2具有至少大約80%、 85%、 90%、 95%、 98%或99%的同一性的蛋白.例如，編碼蛋白的核酸可以與SEQ ID NO: 1具有至少大約80%、 85%、 90%、 95%、 98%或99%的同一 性.所述核酸也可以是優(yōu)選在嚴(yán)格條件下與編碼野生型sirtuin的核 酸，如SEQ ID NO: 1雜交的核酸.嚴(yán)格雜交條件可以包括65。C下 在0.2 x SSC中雜交和洗滌.當(dāng)采用編碼與野生型sirtuin蛋白不同的 蛋白，如作為野生型sirtuin的片段的蛋白的核酸時(shí)，所述蛋白優(yōu)選是 具有生物活性的，例如能夠脫乙酰.僅僅需要在細(xì)胞中表達(dá)具有生物 活性的sirtuin的部分。例如，不同于具有SEQ ID NO: 2的野生型SIRT1 的蛋白優(yōu)選含有其核心結(jié)構(gòu).核心結(jié)構(gòu)有時(shí)是指SEQ ID NO: 2的氨 基酸62-293，它們由SEQIDNO: 1的核苦酸237 - 932編碼，其包 括NAD結(jié)合和底物結(jié)合域.SIRT1的核心結(jié)構(gòu)域也可以指SEQ ID NO: 2的氨基酸大約261 - 447，它們由SEQIDNO: l的核苷酸834-1394編碼；SEQ ID NO: 2的氨基酸大約242腸493，它們由SEQ ID NO: 1的核苷酸777 - 1532編碼；或SEQ ID NO: 2的氨基酸大約254 -495，它們由SEQ ID NO: 1的核苷酸813-1538編碼.無(wú)論蛋白 是否保留了生物功能，如脫乙酰能力，可以根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法對(duì) 其進(jìn)行確定.增加sirtuin蛋白水平的方法也包括刺激編碼sirtuin的基因轉(zhuǎn)錄 的方法，穗定相應(yīng)mRNA的方法和其它本領(lǐng)城公知的方法. 示例的sirtuin抑制化合物和使用方法實(shí)施例表明sirtuin抑制刑，如煙耽胺，增加秀麗新桿線蟲中的脂 肪積累(參見實(shí)施例2).Sirtuin抑制性化合物包括抑制III類組蛋白脫乙酰酶如sirtuin的 活性的化合物，包括，例如，煙酰胺(NAM); suranim; NF023 (G 蛋白拮抗刑)；NF279 (嚷呤能受體拮抗刑)；Trolox ( 6-幾基-2，5,7，8， 四甲基苯并二氣吡喃-2-羧酸)；(-)-表沒食子兒茶精(羥基在3，5，7，3'，4，,5 位)；(-)-表沒食子兒茶精(羥基在3，5，7，3'，4'，S'位)；(-)-表沒食子兒茶 精沒食子酸酯(羥基在5，7，3'，4，，S，，沒食子酸癍在3位)；氯化氛定(氣 化3,5，7，3，，4'-五羥基黃鋝)；氣化翠雀素(氣化3，5，7，3',4'，5'-六羥基黃 锝)；楊梅黃酮(大麻雙稱；3，5，7，3'，4'，5，-六羥基黃稱);3，7，3，，4',5'五 羥基黃稱和棉花皮素(3，5，7，8，3，，4，-六羥基黃稱)，這些都進(jìn)一步描迷 于Howitz et al. (2003) Nature 425: 191.其它抑制刑，如sirtinol 和splitomicin，描迷于Grozinger et al. (2001) J. BioL Chem 276: 38837， Dedalov et al. (2001) PNAS 98: 15113和Hirao et al. (2003) J. Biol. Chem 278: 52773.也可以使用這些化合物的類似物和衍生物.其它sirtuin抑制性化合物可以具有以下任一結(jié)構(gòu)式:1958其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)，L代表O、 NR或S;R代表H、坑基、芳基、芳坑基或雜芳烷基；R'代表H、離素、N02、 SR、 S03、 OR、 NR2、烷基、芳基或羧基；a代表從l-7的整數(shù)，包括1和7;并且 b代表從l-4的整數(shù)，包括1和4.<formula>formula see original document page 59</formula>其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)， L代表O、 NR或S;R代表H、坑基、芳基、芳烷基或雜芳烷基； R'代表H、卣素、N02、 SR、 S03、 OR、 NR2、烷基、芳基或 羧基；a代表從l-7的整數(shù)，包括1和7;并且 b代表從l-4的整數(shù)，包括1和4.<formula>formula see original document page 59</formula>其中，獨(dú)立地對(duì)于每一次出現(xiàn)， L代表O、 NR或S;R代表H、烷基、芳基、芳烷基或雜芳垸基;R'代表H、自素、N02、 SR、 S03、 OR、 NR2、烷基、芳基或羧基；a代表從l-7的整數(shù)，包括1和7;并且 b代表從l-4的整數(shù)，包括1和4.也包括此處描述的式19-21的sirtuin抑制性化合物的藥學(xué)可接 受的加成鹽和復(fù)合物.當(dāng)化合物可以具有一個(gè)或多個(gè)手性中心時(shí)，除 非特別指出，此處考慮的化合物可以是單立體異構(gòu)體，或立體異構(gòu)體 的外消旋混合物.當(dāng)sirtuin抑制性化合物具有不飽和碳-碳雙鍵時(shí)，此處既考慮順 式(Z)也考慮反式(E)異構(gòu)體.當(dāng)化合物可以以互變異構(gòu)形式，例如稱-烯醇互變異構(gòu)體，如工和-^的形式存在時(shí)，每一種互變異構(gòu)形式都考慮包含在此處的方法中，不論是以平衡形式存在還是通過(guò) 合適的Rt取代而鎖定在一種形式.任意一次出現(xiàn)時(shí)的任何取代基的 含義不依賴于其含義或任意其它次出現(xiàn)時(shí)的任意其它取代基的含義.此處的方法中也包含式19-21的sirtuin抑制性化合物的前藥. 前藥被認(rèn)為是體內(nèi)釋放活性母體化合物的任何共價(jià)鍵合的栽體.不論是體外還是體內(nèi)，sirtuin抑制性化合物也可以單獨(dú)或與其它 治療劑組合與細(xì)胞接觸或被施用.在一種實(shí)施方案中， 一種以上的 sirtuin抑制性化合物可以接觸細(xì)胞或被施用.例如，至少2、 3、 5或 10種不同的sirtuin抑制性化合物可以與細(xì)胞接觸或被施用.在另一 種實(shí)施方案中，sirtuin抑制性化合物可以作為與其它治療刑的聯(lián)合治 療的一部分被施用.所述聯(lián)合治療可以同時(shí)施用(如一種以上的治療 刑同時(shí)施用)或與，例如在治療方案中不同時(shí)間施用的不同化合物或治療刑序貫施用.為了促進(jìn)體重增長(zhǎng)， 一種或多種式19-21的sirtuin抑制性化合 物可以與以下"體重增長(zhǎng)促進(jìn)刑"聯(lián)合使用P阻斷刑(如普萘洛爾)、 a阻斷刑(如可樂定、哌唑嗪和特拉唑嗪)；胰烏素、磺脲類(如格列 吡喚和格列苯脲)、噻唑烷二酮類(如吡格列稱和羅格列酮)、氯茴苯酸、納格列奈、瑞格列奈、碳酸鋰、丙戊酸、卡馬西平、抗抑郁藥， 包括，例如，三環(huán)類(如阿米替林和丙咪漆)、單胺氣化酶抑制劑、 選擇性5-幾色胺再攝取抑制刑(SSRIs)、 丁氨苯丙嗣、帕羅西丁和mirtazapine、氯丙噢、漆沃漆辛、甾體類(如強(qiáng)的松)、口服避孕藥 (控制生育的藥片)或其它含有雌激素和/或孕激素的遊孕藥(Depo-Provera， Norplant, Ortho)、雄嗣或甲地孕酮.在另一種實(shí)施方案中， 一種或多種sirtuin抑制性化合物可以特異 性針對(duì)某些組織(如肝臟)，而不是全身.組織特異性療法可以用于 治療，例如高血糖.刺激細(xì)胞中的脂肪積累的方法也可以包括降低細(xì)胞中sirtuin的蛋 白水平.可以根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法降低蛋白水平.例如，可以在細(xì) 胞中表達(dá)靶定sirtuin的siRNA和反義物或核酶.可以使用顯性失活 突變體，如不能脫乙酰的突變體.例如，可以使用Luoetal. (2001) Cell 107: 137中描迷的SIRT1的突變體H363Y,或者，可以使用抑 制轉(zhuǎn)錄的試刑.在其它實(shí)施方案中，此處描述的化合物，如sirtuin激活劑或抑制 刑不具有通過(guò)本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定法確定的顯著的或可檢測(cè)的抗氣 化劑活性.例如，化合物不顯著清除自由基，如02自由基.化合物 相對(duì)于另一種化合物，如白蘆藜醇，可以具有小于約2、 3、 5、 10、 30 或IOO倍的抗氣化活性.化合物也可以具有約IO力M、 10lftM、 IO"M、 1012M或更小的對(duì) sirtuin的結(jié)合親和力.化合物可以使sirtuin對(duì)其底物或NAD+的Km 減少至少大約2、 3、 4、 5、 10、 20、 30、 50或100的因數(shù).化合物 可以使sirtuin的Vmax增加至少大約2、 3、 4、 5、 10、 20、 30、 50 或100的因數(shù).可以增加sirtuin的Vmax的示例化合物包括，例如， 異煙酰胺的類似物，如，式11-14的化合物和/或O-乙酰基-ADP-核 糖的類似物，如式15-18的化合物.化合物激活sirtuin的脫乙酰酶 活性的EC50可以小于大約lnM、小于大約10nM、小于大約100nM、 小于大約lpM、小于大約l(HiM、小于大約100pM、或大約1 - 10nM、 大約10 — 100nM、大約0.1 - ljnM、大約1 - 10pM或大約10 - 100|uM. 如實(shí)施例中描述的無(wú)細(xì)胞測(cè)定或基于細(xì)胞的測(cè)定中所測(cè)量的，化合物 可以使sirtuin的脫乙酰躊活性激活至少大約5、 10、 20、 30、 50或100 的因數(shù).該化合物導(dǎo)致的SIRT1的脫乙酰睞活性的誘導(dǎo)比相同濃度的 白,幕醇或此處描述的其它化合物導(dǎo)致的SIRT1的脫乙酰醃活性的誘 導(dǎo)高至少10%、 30%、 50%、 80%、 2倍、5倍、10倍、50倍或100倍.該化合物激活SIRT5的EC50以可以比激活SIRT1的EC50高至 少大約10倍、20倍、30倍、50倍.在示例的實(shí)施方案中，此處描述的方法和組合物可以包括含有以 下成分的聯(lián)合療法(i)至少一種激活sirtuin的化合物，該化合物使 sirtuin對(duì)其底物或NAD+的Km減少至少大約2、 3、 4、 5、 10、 20、 30、 50或100的因數(shù)，和(ii)至少一種激活sirtuin的化合物，該化合 物使sirtuin的Vmax增加至少大約2、 3、 4、 5、 10、 20、 30、 50或 100的因數(shù).在一種實(shí)施方案中，該聯(lián)合療法可以包含(i)至少一種式 1 - 10的激活sirtuin的化合物，和(ii)至少一種式11 - 18的激活sirtuin 的化合物.化合物可以通過(guò)細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)膜.例如，化合物可以具有至少大 約20%、 50°/。、 75%、 80%、卯％或95%的細(xì)胞通透性.此處描述的化合物也可以具有一種或多種以下特征該化合物可 以基本對(duì)細(xì)胞或受試者無(wú)毒；該化合物可以是有機(jī)分子或2000 amu 或更小、1000amu或更小的小分子；該化合物在標(biāo)準(zhǔn)大氣條件下的半 衰期是至少大約30天、60天、120天、6個(gè)月或1年；該化合物在溶 液中的半衰期可以是至少大約30天、60天、120天、6個(gè)月或1年； 該化合物在溶液中可能比白,藜醇穩(wěn)定至少大約50%、 2倍、5倍、10 倍、30倍、50倍或100倍的因數(shù)；該化合物可以促進(jìn)DNA修復(fù)因子 Ku70的脫乙酰；該化合物可以促進(jìn)RelA/p65的脫乙酰；該化合物可 以增加細(xì)胞的總更新速度，并且增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)TNF誘導(dǎo)的凋亡的敏感 性.可以按照例如上文Howitz等的文獻(xiàn)和下文的描述確定化合物對(duì) sirtuin,如SIRT1的活性的影響.例如，sirtuin蛋白可以在體外，例 如，在溶液或細(xì)胞中接觸化合物.在一種實(shí)施方案中，sirtuin蛋白在 溶液中接觸化合物，并且確定sirtuin的活性，如，它使蛋白脫乙酰的 能力，所述蛋白如組蛋白或p53或其部分.通常，當(dāng)sirtuin的至少 一種生物活性在化合物存在時(shí)比化合物不存在時(shí)高或低，則sirtuin分 別被激活或抑制.可以激活或抑制至少大約10%、 30%、 S0%、 100% (即，因數(shù)是2)、 3、 10、 30或100的因數(shù).可以通過(guò)使sirtuin或含有sirtuin的細(xì)胞或細(xì)胞提取物接觸脫乙 耽作用靶，如組蛋白或p53蛋白或其部分，并且確定脫乙跣作用靶的乙?；?，確定sirtuin是被激活還是被抑制.相對(duì)于對(duì)照sirtuin 的脫乙耽作用水平，與檢測(cè)的sirtuin溫育的靶的脫乙酰水平更高，則 表明檢測(cè)的sirtuin是被激活的.相反，相對(duì)于對(duì)照sirtuin的脫乙酰 作用水平，與檢測(cè)的sirtuin溫育的靶的脫乙酰水平更低，則表明檢測(cè) 的sirtuin是被抑制的.對(duì)照sirtuin可以是重組產(chǎn)生的sirtuin,其未 與激活sirtuin的化合物或抑制sirtuin的化合物接觸過(guò). 額外的示例的方法此處描述了治療或預(yù)防受試者中肥胖或通常的體重增長(zhǎng)的方法， 例如減輕受試者體重或減少體重增長(zhǎng)的方法.該方法可以包括給受試 者，例如有需要的受試者施用藥學(xué)有效重的增加sirtuin,如SIRT1 或Sir2的活性或蛋白水平的試刑.需要所述治療的受試者可以是肥胖 或容易發(fā)胖、或體重增長(zhǎng)過(guò)度，或例如從家族史預(yù)測(cè)容易體重增長(zhǎng)過(guò) 度的受試者.示例的試刑是此處描述的那些.可以施用試刑的組合. 該方法可以進(jìn)一步包括監(jiān)測(cè)受試者的體重和/或例如脂肪組織中 sortuin激活的水平.此處也描述了治療或預(yù)防代謝障礙，如胰烏素抗性或II型糖尿病 的其它前期癥狀、II型糖尿病或其并發(fā)癥的方法.該方法可以增加受 試者中的胰島素敏感性或降低胰烏素水平.該方法可以包括給受試 者，如有需要的受試者施用藥學(xué)有效量的增加sirtuin,如SIRT1或Sir2 的活性或蛋白水平的試刑.需要所述治療的受試者可以是具有胰烏素 抗性或II型糖尿病的其它前期癥狀的受試者、患有II型糖尿病的受 試者或容易發(fā)生上述任何狀況的受試者.例如，該受試者可以是具有 胰烏素抗性，如具有高的胰烏素循環(huán)水平和/或相關(guān)狀況的受試者，所 述相關(guān)狀況如高脂血癥、脂生成異常、高膽固醇血癥、糖耐量低減、 高血糖水平、X綜合征的其它表現(xiàn)、高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化和脂肪營(yíng) 養(yǎng)陣礙.示例的試刑是此處描述的那些.也可以施用試刑的組合.該方法可以進(jìn)一步包括監(jiān)測(cè)受試者中任 何這些狀況的狀態(tài)和/或例如脂肪組織中sirtuin的激活水平.其它方法包括給受試者施用增加sirtuin的活性或蛋白水平的試劑 和增加AMPK的活性或蛋白水平的試刑，如除激活sirtuin的試劑以 外的試劑的組合.AMPK的激活劑包括AICAR或二甲雙胍.或者， 可以通過(guò)將編碼AMPK的核酸導(dǎo)入細(xì)胞而增加AMPK的蛋白水平.人類AMPK的催化結(jié)構(gòu)域(al)的核苷酸序列具有GenBank獲取號(hào) NM—206907所示的核苷酸序列，并且編碼具有GenBank獲取號(hào) NP一996790所示氨基酸序列的蛋白.人類AMPK的非催化結(jié)構(gòu)域(|31) 的核苷酸序列具有GenBank獲取號(hào)NM_006253所示的核苷酸序列， 并且編碼具有GenBank獲取號(hào)NP_006244所示氨基酸序列的蛋白. 人類AMPK的非催化結(jié)構(gòu)域(yl)的核苷酸序列具有GenBank獲取 號(hào)NM_212461所示的核苷酸序列，并且編碼具有GenBank獲取號(hào) NP一997626所示氨基酸序列的蛋白.為了增加細(xì)胞中人類AMPK的 蛋白水平，可能需要導(dǎo)入編碼蛋白的每個(gè)亞基的核酸.編碼不同亞基 的核酸序列可能包含在相同或不同的核酸分子上.可以通過(guò)施用增加sirtuin和/或AMPK活性或蛋白水平的試劑而 治療的其它疾病包括某些腎疾病，包括腎小球腎炎、腎小球硬化、腎 病綜合征、高血壓腎硬化，這些化合物也可以用于改進(jìn)癡呆中的認(rèn)知 功能、治療糖尿病合并癥、牛皮褲、多囊印巢綜合征(PCOS)和預(yù) 防及治療骨損失，如骨質(zhì)疏松.將從體重減輕獲益并且可以按照此處的描述治療的其它疾病和狀 況包括高血糖、髙血壓、高血膽固醉、血脂異常、II型糖尿病、胰 島素抗性、糖耐量低減、高狹島素血癥、冠心病、心絞痛、充血性心 衰、卒中、膽結(jié)石、膽囊炎和膽石癥、痛風(fēng)、骨關(guān)節(jié)炎、阻塞性睡眠 呼吸陣礙和呼吸問題、某些類型的癌癥(如子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、前 列腺癌和結(jié)腸癌)、妊娠的合并癥、女性生殖健康不良(如月經(jīng)不規(guī) 律、不育、排印不規(guī)律)、膀胱控制問趙(如充溢性尿失禁)、尿酸腎 結(jié)石、心理陣礙(如抑郁、進(jìn)食障礙、體型扭曲和自卑).StunkardAJ， Wadded TA. (Editors) Obesity: theory and therapy, Second Edition. New York: Raven Press, 1993.最后，艾滋病患者可以反應(yīng)于艾滋 病治療而產(chǎn)生脂質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良或胰烏素抗性.因此，通過(guò)此處描迷的減 輕體重或防止體重增長(zhǎng)的方法可以治療或預(yù)防這些狀況中的任一種.此處還提供了刺激體重增長(zhǎng)的方法.該方法可以包括給受試者， 例如有需要的受試者施用藥學(xué)有效量的減少sirtuin,如SIRT1或Sir2 的活性或蛋白水平的試刑.需要所述治療的受試者可以是患有惡病質(zhì) 或容易發(fā)生惡病質(zhì)的受試者.示例的試刑是此處描迷的那些.可以施 用試劑的組合.該方法可以進(jìn)一步包括監(jiān)測(cè)受試者的疾病狀態(tài)或例如脂肪組織中sortuin的激活.可以體外使用刺激脂肪積累的方法，以建立體重增長(zhǎng)的細(xì)胞模 型，該模型可以用于，例如，姿定防止體重增長(zhǎng)的其它藥物.刺激細(xì)胞或受試者中的體重增長(zhǎng)的方法可以進(jìn)一步包括減少 AMPK的活性或蛋白水平.例如，這可以通過(guò)抑制AMPK的三個(gè)亞 基中的至少一個(gè)，例如，催化亞基的表達(dá)、轉(zhuǎn)錄、翻譯或翻譯后修飾 而實(shí)現(xiàn).可以使用本領(lǐng)域公知的技術(shù)，如RNAi、反義物和核醉.此 外，可以在細(xì)胞中表達(dá)顯性失活突變體.顯性失活突變體，如具有突 變的AMPKoc亞基的突變體描述于，例如，Minokoshi et al. (2004) Nature 428: 569; Xing et al.( 2003 ) J. Biol. Chem.278: 28372和Woods et al. (2000) Mol. Cell Biol. 20: 6704.也可以使用抑制AMPK表達(dá) 或活性的化合物.示例的化合物描述于Zhou et al.( 2001 )J. Clin. Invest 108: 1167.此處也提供了體外或體內(nèi)調(diào)節(jié)脂肪生成或脂肪細(xì)胞分化的方法. 具體地，將阻止高循環(huán)水平的胰烏素和/或胰鳥素樣生長(zhǎng)因子(IGF) 1募集前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞.所迷方法可用于調(diào)節(jié)肥胖.抑制 脂肪生成的方法可以包括使細(xì)胞接觸增加sirtuin的活性或蛋白水平的 試刑，如激活sirtuin的化合物，如此處描述的化合物.刺激脂肪生成 的方法可以包括使細(xì)胞接觸減少sirtuin的活性或蛋白水平的試刑，如 抑制sirtuin的化合物，如此處描述的化合物.至少基于此處證明的白蘆藜醇激活A(yù)MPK的事實(shí)，可以用白蘆 藜醇和其它激活sirtuin的化合物來(lái)治療或預(yù)防可以從AMPK調(diào)節(jié)獲 益的狀況，如與AMPK相關(guān)和/或受AMPK調(diào)節(jié)的狀況，以及上文描 述的那些.示例的狀況包括與缺氣或局部缺血(心肌梗塞、卒中)相 關(guān)的臨床癥狀和營(yíng)養(yǎng)陣礙(參見美國(guó)專利6,124,125).相似地，可以使用任何與激活sirtuin的化合物目的相同的激活 AMPK的化合物，例如，用于延長(zhǎng)半衰期，使細(xì)胞更抗應(yīng)激和保護(hù)細(xì) 胞免受凋亡.此處提供的其它方法是減少食欲或增加飽感，從而導(dǎo)致體重減輕 或避免體重增加的方法.所述方法包括給受試者，例如有需要的受試 者施用一定量的sirtuin激活刑或增加受試者中sirtuin蛋白水平的試 刑.需要所迷治療的受試者可以是超重、肥胖或容易超重或肥胖的受試者.該方法可以包括每天、每隔一天、或每周給患者施用一刑，如 藥丸形式.刑量可以是"食欲減少劑量".所述刑量可以是，例如，每天一丸LongevinexTM.也提供了確定受試者患有或?qū)l(fā)生體重增長(zhǎng)、肥胖、胰烏素抗性、 糖尿病或前期癥狀或由其導(dǎo)致的狀況的可能性的測(cè)定方法.所述測(cè)定 方法可以包括確定受試者中sirtuin，如SIRT1或AMPK的活性或表 達(dá)(如mRNA、前mRNA或蛋白)水平.受試者中低水平的sirtuin 活性或表達(dá)很可能表明受試者患有或容易發(fā)生體重增長(zhǎng)、肥胖、胰烏 素抗性、糖尿病、其前期癥狀或其繼發(fā)狀況.或者，受試者中較高水 平的sirtuin活性或表達(dá)很可能表明受試者患有或容易發(fā)生體重減輕并 且不容易發(fā)生高體重相關(guān)的疾病，如胰島素抗性和肥胖.其它測(cè)定方 法包括確定sirtuin和AMPK的活性或表達(dá)水平.此處也提供了鑒定調(diào)節(jié)體重增長(zhǎng)和/或治療或預(yù)防胰烏素抗性(或 敏感性)或糖尿病的化合物的方法.該方法可以包括鑒定調(diào)節(jié)sirtuin 的活性或蛋白水平的試劑，并且測(cè)試該測(cè)試試劑是否調(diào)節(jié)體重增長(zhǎng)和/ 或可以用于治療或預(yù)防胰烏素抗性或糖尿病.該方法的笫一步可以包 括使sirtuin接觸測(cè)試試劑，并且確定測(cè)試試刑對(duì)sirtuin,如S1RT1 的活性的影響，如上文引用的Howitz等的文獻(xiàn)的描述.該方法的第 一步也可以包括使包含sirtuin的細(xì)胞接觸測(cè)試試刑，并且確定測(cè)試試 劑對(duì)sirtuin的活性或表達(dá)水平的影響.可以速過(guò)測(cè)量sirtuin的 mRNA、前mRNA或蛋白水平而確定sirtuin的表達(dá)水平.該方法的 笫二步可以包括在肥胖、胰烏素抗性和/或糖尿病的動(dòng)物模型中測(cè)試該試劑.所述動(dòng)物模型是本領(lǐng)域公知的.篩選方法可以進(jìn)一步包括確定 試劑的毒性或副作用的步驟.其它篩選測(cè)定包括鑒定調(diào)節(jié)AMPK活性或蛋白水平的試刑.需 要激活A(yù)MPK,但不具有公知的AMPK激活刑，如二甲雙胍/苯乙雙 胍的毒性或副作用.藥物制刑和施用方式根據(jù)本發(fā)明使用的藥物組合物可以采用一種或多種生理學(xué)可接受 的栽體或附形刑以常規(guī)方式制刑化.因此，可以對(duì)激活sirtuin或抑制 sirtuin的化合物及其生理學(xué)可接受的鹽和溶劑合物進(jìn)行制刑化，以便 通過(guò)以下方式施用，例如，注射、吸入或吹入(通過(guò)口或鼻)或口服、經(jīng)頰、腸胃外或直腸施用.在一種實(shí)施方案中，該化合物是在存在靶 細(xì)胞，例如脂肪細(xì)胞的部位，即，在脂肪組織局部施用.可以將化合物制劑化以用于多種施用負(fù)荷，包括全身、表面或局部施用，技術(shù)和制劑通常可以參見Remmington's Pharmaceutical Sciences, Meade Publishing Co" Easton， PA.對(duì)于全身施用，注射 是優(yōu)選的，包括肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和皮下.對(duì)于注射，化合物可 以在液體溶液，優(yōu)選在生理相容的緩沖液，如Hank，s溶液或Ringer's 溶液中制刑化.此外，化合物可以以固體形式制刑化，并且在即將使 用之前重新溶解或懸浮.也包括凍干的形式.對(duì)于口服施用，藥物組合物可以采用通過(guò)常規(guī)方法，用藥學(xué)可接 受的附形刑制備的例如片刑、錠刑或膠嚢的形式，所述附形劑如粘合 劑(如預(yù)凝膠化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷稱或鞋丙基甲基纖維素)； 填料(如乳糖、微晶纖維素或褲酸氬鈣)；潤(rùn)滑劑(如硬脂酸鎂、滑 石粉或二氧化硅)；崩解劑(如馬鈴茅淀粉或乙醇酸淀粉鈉)；或潤(rùn)濕 劑(如十二烷基碟酸鈉).可以通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法對(duì)片劑進(jìn)行包 衣.用于口服的液體制刑可以采取例如溶液、糖漿或懸浮液的形式， 或者它們可以以干產(chǎn)品形式存在，用于在使用前用水或合適的媒介物 重配.可以通過(guò)常規(guī)方法，用藥物可接受的添加刑制備所述液體制劑， 所述添加劑如懸浮劑(如山梨糖醇漿、纖維素衍生物或氬化的可食用 脂肪)；乳化刑(如卵褲脂或阿拉伯膠)；非水性栽體(如ationd油、 油性酯、乙醇或分級(jí)分離的植物油)；和防腐刑(如對(duì)-羥基苯甲酸 甲醋或丙酯或山梨酸).所述制劑也可以含有合適的緩沖鹽、調(diào)味劑、 色素和增甜劑.可以合適地對(duì)口服施用的制刑進(jìn)行制刑化，以實(shí)現(xiàn)活 性化合物的控制釋放.多盼類，如白,幕醇可以氧化，并且失去sirtuin刺激活性，特別 是以液體或半液體形式存在時(shí).為了防止氣化和保護(hù)含多盼化合物的 sirtuin刺激活性，可以將化合物儲(chǔ)存在氮?dú)夥罩?，或密封在排除氧?一類膠囊和/或箔包裝(如CapsugdTM)中.為了通過(guò)吸入而施用，化合物可以方便地在由加壓包裝或噴霧器 提供的氣溶膠噴霧的形式中送遞，同時(shí)使用合適的推進(jìn)刑，如二氯二 氟甲烷、三氟氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氣化破或其它合適的氣體. 在加壓氣溶膠的情況下，可以通過(guò)提供閥門而確定刑量單位，從而送遞計(jì)量的量.可以配制用于吸入器或吹入器中的明膠膠囊和藥筒，使 其含有化合物和合適的粉基如乳糖或淀粉的粉末混合物.可以將化合物制劑化以用于通過(guò)注射，例如，通過(guò)快速濃注或連 續(xù)輸注而進(jìn)行腸胃外施用.用于注射的制劑可以以單位刑型存在，如 存在于安瓿或多刑容器中，其中添加了防腐劑.組合物的形式可以是 例如油性或水性媒介物中的懸浮液、溶液或乳狀液，并且可以含有制 劑化試劑，如懸浮刑、穩(wěn)定劑和/或分散劑.或者，活性成分可以是粉 末形式，用于在使用前用合適的媒介物，如無(wú)菌無(wú)熱源的水進(jìn)行重配.化合物也可以制刑化在直腸組合物，如栓劑或保留灌腸刑中，其 中含有常規(guī)的栓刑基，如可可脂或其它甘油醋.除了上文描述的制劑，化合物也可以制刑化為儲(chǔ)存制刑.可以通 過(guò)植入(例如皮下或肌內(nèi))或通過(guò)肌內(nèi)注射而施用所述長(zhǎng)效制劑.因 此，例如，可以用合適的聚合材料或疏水材料(例如作為可接受油中 的乳狀液)或離子交換樹脂而對(duì)化合物制刑化，或作為微溶的衍生物， 如作為微溶的衍生物，例如，作為微溶的鹽.控釋制刑也包括貼刑.藥物組合物(包括美容制刑)可以包括約0.00001 -100重量％， 如0.001-10重量％或0.1-5重量％的一種或多種此處描述的化合物.在一種實(shí)施方案中，將此處描述的化合物摻入含有通常適于表面 施用藥物，并且包含任意所述本領(lǐng)域公知的材料的表面制刑中.可以 選擇表面栽體，以便以需要的形式提供組合物，如作為油貪、洗刑、 乳骨、微乳狀液、凝膠、油、溶液等，并且可以包含天然存在或合成 來(lái)源的材料.選擇的栽體優(yōu)選不會(huì)不利地影響表面制刑中的活性劑或 其它成分.用于此處的表面栽體的例子包括水、醇和其它無(wú)毒的有機(jī) 溶刑、甘油、礦物油、硅酮、石油骨、脂肪酸、植物油、對(duì)幾基苯甲 酸酯、蠟等.制刑可以是無(wú)色、無(wú)氣味的油骨、洗刑、乳骨、微乳狀液和凝膠.可以將化合物摻入油骨，其通常是半固體制刑，典型地基于石油 或其它石油衍生物.如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，要使用的特定油貪 基是提供最佳的藥物送遞的那些，并且優(yōu)選也辨供其它需要的特征， 例如，潤(rùn)滑性等.至于其它栽體或媒介物，油骨基應(yīng)該是情性的、穩(wěn)定的、無(wú)刺激的和不致敏的.如前面的章節(jié)中引用的Remington's中的解釋，油骨基可以分為四類含油基；可乳化基；乳狀液基；和水 溶基.含油的油骨基包括，例如，植物油、獲自動(dòng)物的脂肪，和獲自 石油的半固體烴.可乳化的油骨基也稱作吸附的油骨基，其含有很少 的水或不含水，并且包含，例如，碟酸羥基硬脂B&、無(wú)水羊毛酴和親 水石油.乳狀液油骨基是油包水(W/O)乳狀液或水包油(OAV)乳 狀液，并且包括，例如，鯨蠟醇、 一硬脂酸甘油酯、羊毛醋和硬脂酸. 示例的水溶性油奮基是從各種分子量的聚乙二醉(PEGs)制備的， 再次參考上文引用的Remington's中的進(jìn)一步信息.可以將化合物摻入洗刑，其通常是不需要摩擦而施用到皮膚表面 的制劑，并且通常是液體或半液體制劑，其中固體顆粒，包括活性刑， 存在于水或油基中.洗刑通常是固體的懸浮液，可以包含水包油型液 體油性乳狀液.洗劑是用于處理大的體表的優(yōu)選制刑，因?yàn)槿菀资┯?更多的液體組合物.洗刑中的不溶物質(zhì)精細(xì)分割通常是必要的.洗劑 通常含有懸浮刑以產(chǎn)生更好的分散體并且含有用于將活性刑定位于皮 膚并且使其與皮膚接觸的化合物，如甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉等. 用于本發(fā)明的方法的示例的洗劑包含與親水石油混合的丙二醇，如可 以獲自Beiersdorf， Inc. (Norwalk， Conn.)的商標(biāo)為AquaphorRTM 的那種.可以將化合物摻入乳骨，其通常是粘性液體或半固體乳狀液，是 水包油或油包水乳狀液.乳骨基是可水洗的，并且含有油相、乳化刑 和水相.油相通常包含石油和脂肪醇，如鯨蠟醇或硬脂醇；盡管不是 必須，水相的體積通常超過(guò)油相，并且通常含有保濕劑.如上文引用 的Remington's中的解釋，乳奮制刑中的乳化刑通常是非離子、陰離 子、陽(yáng)離子或兩親表面活性刑.可以將化合物棒入微乳狀液中，其通常是通過(guò)表面活性分子的界 面膜穗定的兩種不混溶的液體，如油和水的熱動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定的各向同性 澄清分散體(Encyclopedia of Pharmaceutical Technology (New York: Marcel Dekker, 1992),笫9巻).為了制備微乳狀液，表面活性刑 (乳化劑)、輔助表面活性劑(輔助乳化刑)、油相和水相是必須的. 合適的表面活性劑包括任何用于制備乳狀液的表面活性刑，如通常用 于制備乳奮的乳化刑.輔助表面活性刑(或"輔助乳化刑")通常選 自聚甘油衍生物、甘油衍生物和脂肪醇.優(yōu)選的乳化刑/輔助乳化刑組合通常(盡管不是必須)選自 一硬脂酸甘油酯和聚氣乙烯硬脂酸醋； 聚乙二醇和乙二醇棕櫚硬脂酸酶；以及辛酸和辛酸甘油三醋和oleoyl macrogolglycerides.水相不僅包含水，通常也包含援沖液、葡萄糖、 丙二醇、聚乙二醇，優(yōu)選低分子量聚乙二醇(如PEG300和PEG400) 和/或甘油等，而油相通常包含，例如，脂肪酸酯、改性的植物油、聚 硅氧烷油、甘油一、二和三癍的混合物、PEG的單癍和二癍(如oleoyl macrogol glycerides)等，可以將化合物摻入凝膠制劑中，其通常是由小分子有機(jī)顆粒構(gòu)成 的懸浮液(兩相體系)或基本均勻分散在栽體液體中的大有機(jī)分子(單 相凝膠)組成的半固體體系.例如，可以將活性刑、栽體液體和合適 的膠凝刑如黃芪膠(2-5%)、藻酸鈉(2-10%)、明膠(2-15%)、 甲基纖維素(3-5%)、羧甲基纖維素鈉(2-5%)、卡波姆(0.3-5%) 或聚乙烯醇(0-20%)合并在一起并且混合直到產(chǎn)生特征性半固體產(chǎn) 物，從而制備單相凝膠.其它合適的膠凝刑包括甲基羥基纖維素、聚 氣乙烯-聚氣丙烯、羥乙基纖維素和明膠.盡管凝膠通常使用水性栽 體液體，也可以將醇和油用作栽體液體.制刑，如表面制劑中可以包含本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的多種添加 劑.添加劑的例子包括，但不限于，增溶劑、皮膚通透增強(qiáng)劑、遮光 刑、防腐劑(如抗氣化刑)、膠凝刑、緩沖劑、表面活性劑(特別是 非離子和兩親表面活性刑)、乳化刑、潤(rùn)滑刑、增稠刑、穩(wěn)定刑、保濕劑、著色刑、香味刑等.特別優(yōu)選的是引入穩(wěn)定劑和/或皮膚通透增 強(qiáng)劑，并且引入乳化刑、潤(rùn)滑劑和防腐劑.優(yōu)選的表面制劑包含大約 2 wt.% - 60 wt.%，優(yōu)選2 wt.% - 50 wt。/。增溶刑和/或皮膚通透增強(qiáng) 刑；2 wt.% - 50 wt.%，優(yōu)選2 wt.% - 20 wt.。/o乳化劑；2 wt.% - 20 wt.% 潤(rùn)滑刑；和0.01-0.2 wt。/o防腐刑，并且活性刑和栽體(如水)構(gòu)成制劑的其余部分.皮膚通透增強(qiáng)劑的作用是促進(jìn)治療水平的活性刑通過(guò)未破損的皮 膚的合理大小的面積.合適的增強(qiáng)刑是本領(lǐng)域公知的，包括，例如 低級(jí)坑醇，如甲醇、乙醇和2-丙醇；烷基甲基亞砜，如二甲亞砜 (DMSO)、癸基甲基亞砜(C10MSO)和四癸基甲基亞砜；吡咯坑稱， 如2-吡咯烷酮、N-甲基-2-吡咯坑酬和N-(-羥乙基)吡咯坑稱；尿素；N，N-二乙基-間-甲苯酰胺；<:2-<:6鏈烷雙醇；混雜溶刑，如二甲基甲酰胺70(DMF)、 N，N-二甲基乙酰胺(DMA)和四氣呋喃醇；以及1-取代 的氮雜環(huán)庚烷-2-稱，特別是l-n-十二烷基環(huán)庚烷-2-酮(氮酮；可以從 Whitby Research Incorporated ， Richmond ， Va.購(gòu)買，其商標(biāo)是 AzoneRTM from).增溶劑的例子包括，但不限于以下物質(zhì)親水醋，如二乙二醇一 乙酸(乙氣基二乙二醇，可商購(gòu)，商標(biāo)是TranscutolRTM)和二乙二 醇一乙瞇油酸酯(可商購(gòu)，商標(biāo)是SoftcutolRTM);聚乙烯蓖麻油衍 生物，如聚氣35蓖麻油、聚氣40氬化蓖麻油，等；聚乙二醇，特別 是低分子重聚乙二醇，如PDG300和PEG400,以及聚乙二醇衍生物， 如PEG"8辛酸/癸酸甘油酹(可商購(gòu)，商標(biāo)是LabrasolRTM);坑基 甲基亞砜，如DMSO;吡咯烷稱，如2-吡咯烷稱和N-甲基-2-吡咯烷 稱；和DMA.很多增溶刑也可以作為吸收增強(qiáng)刑.可以將單一增溶 刑摻入制刑中，或者可以將增溶刑的混合物摻入其中.合適的乳化劑和輔助乳化刑包括，但不限于，針對(duì)微乳狀液制刑 描述的那些乳化劑和輔助乳化劑.潤(rùn)滑刑包括，例如，丙二醇、甘油、 豆蔻酸異丙酯、聚丙二醇-2 (PP&2)豆寇酸丙酸酯等.制刑中也可以包含其它活性劑，如抗炎劑、鎮(zhèn)痛劑、抗微生物劑、 抗真菌劑、抗生素、維生素、抗氧化劑和通常存在于防曬制刑中的防 敏劑，包括，但不限于，氡茴酸癍、二苯甲酮(特別是二苯甲稱-3)、 樟腦衍生物、肉桂酸醋(如甲氧基肉桂酸辛B&)、聯(lián)苯曱跣基甲坑(如 丁基甲氧基聯(lián)苯甲?；淄?、對(duì)-泉基苯甲酸(PABA)及其衍生物 和水楊酸酯(如水楊酸辛酶).在某些表面制刑中，活性劑存在的量是制刑的大約0.25wt.%-75 wt.%，優(yōu)選是制劑的大約0.25 wt.%-30 wt.%,更優(yōu)選是制刑的大 約0.5 wt.% - 15 wt.%,最優(yōu)選是制劑的大約1.0 wt.% - 10 wt.%.可以將表面的皮膚處理組合物包裝在合適的容器中，以適合其粘 度以及消費(fèi)者的用途.例如，可以將洗劑或乳骨包裝在瓶子或滾球涂 藥器中，或推進(jìn)刑驅(qū)動(dòng)的氣溶膠裝置，或裝有適于手指搮作的崩的容 器中.當(dāng)組合物是乳奮時(shí)，可以將其簡(jiǎn)單地儲(chǔ)存在不變形的瓶子或擠 壓容器，如管或有蓋的罐中.也可以將組合物包含在如美國(guó)專利No. 5,063,507中描述的膠囊中.因此，也提供了封閉的容器，其中含有此 處定義的美容可接受的組合物.在替代的實(shí)施方案中，提供了用于口服或腸胃外施用的藥物制 劑，在此情況下該制刑可以包含上文描述的含有激活化合物的微乳狀 液，并且可以含有特別適于口服或腸胃外給藥的替代的藥物可接受栽 體、媒介物、添加刑等.或者，可以按照上文所述口服或施用含活性 化合物的微乳狀液，而不需要改動(dòng).在施用sirtuin激活刑或抑制劑后可以測(cè)量受試者中的因子，如測(cè) 量sirtiiin的活性.在示例的實(shí)施方案中，在給受試者施用激活或抑制 性化合物之后，通過(guò)例如獲得活檢物而從受試者獲得細(xì)胞，并且確定 活檢物中的sirtuin活性或sirtuin表達(dá)水平.或者，可以測(cè)重生物標(biāo) 記物，如血漿生物標(biāo)記物.生物標(biāo)記物可以是脂肪細(xì)胞衍生的分泌蛋 白，如瘦蛋白、脂連蛋白和抗性蛋白.細(xì)胞可以是受試者的任何細(xì)胞， 但在局部施用激活性化合物的情況下，細(xì)胞優(yōu)選是位于施用位點(diǎn)附近 的細(xì)胞.細(xì)胞可以是脂肪細(xì)胞，可以監(jiān)測(cè)的其它因子包括體重、體型、血液葡萄糖水平、血脂水 平和可以測(cè)量用于監(jiān)測(cè)此處描述的疾病或狀況的其它因子.可以采用表達(dá)栽體誘導(dǎo)和表達(dá)編碼sirtuin、 AMPK或減少細(xì)胞中 sirtuin或AMPK的蛋白水平的分子，如siRNA的核酸.示例的表達(dá) 栽體包括腺病毒栽體或腺病毒伴隨病毒(AAV).這些栽體以及其它 栽體和感染靶細(xì)胞的方法是本領(lǐng)域公知的.或者，也可以采用脂質(zhì)體 或類似技術(shù)將核酸導(dǎo)入細(xì)胞.試劑盒此處也提供了試刑盒，如用于治療目的的試刑盒，包括用于調(diào)節(jié) 脂肪積累的試刑盒.試劑盒可以包含一種或多種調(diào)節(jié)sirtuin或AMPK 蛋白活性或水平的試刑，如激活或抑制sirtuin的化合物，如此處描述 的那些，并且任選包含使細(xì)胞與試刑接觸的裝置.裝置包括注射器、 支架和用于將化合物引入受試者中或?qū)⑵涫┯玫绞茉囌咂つw上的其它 裝置.此外，試刑盒也可以包含用于測(cè)量組織樣品中的因子的成份，所 述因子如上文描述的那些.其它試刑盒包括用于診斷患有或發(fā)生體重增長(zhǎng)、肥胖、胰烏素抗 性、糖尿病、其前期狀況或激發(fā)狀況的可能性的試劑盒.試刑盒可以 包含用于測(cè)量sirtuin或AMPK的活性或表達(dá)水平的試刑.也提供了用于篩選測(cè)定的試刑盒.示例的試刑盒包含一種或多種用于進(jìn)行篩選測(cè)定的試刑，如sirtuin、 AMPK或其生物活性部分，或 包含這些的細(xì)胞或細(xì)胞提取物.任何試刑盒都可以包含使用說(shuō)明書.通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例說(shuō)明本說(shuō)明書，所述實(shí)施例不應(yīng)該解 釋為以任何方式進(jìn)行限制.在此特別引入所有引用的參考文獻(xiàn)(包括 在本申請(qǐng)中引用的文獻(xiàn)、授權(quán)的專利、公開的專利申請(qǐng)和Genbank 獲取號(hào))的內(nèi)容作為參考.除非特別指出，本發(fā)明方法的實(shí)施將使用細(xì)胞生物、細(xì)胞培養(yǎng)、 分子生物、轉(zhuǎn)基因生物、微生物、重組DNA和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)， 這些技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的.所述技術(shù)在文獻(xiàn)中有完整的解 釋.參見，例如,Sambrook，F(xiàn)ritsch和Maniatis編的Moleciilar Cloning A Laboratory Manual笫二版(Cold Spring Harbor Laboratory Press: 1989); DNA Cloning, I和II巻(D. N. Glover ed" 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed" 1984); Mullis et al.美國(guó) 專利No: 4,683,195; Nucleic Acid Hybridization (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984); Culture Of Animal Cells( R.I. Freshney， Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzy邁es(IRL Press, 1986); B. Perbal， A Practical Guide To Molecular Cloning ( 1984); the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N. Y.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J, H. Miller and M. P. Calos eds. ， 1987 ， Cold Spring Harbor Laboratory ); Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155 ( Wu et al. eds,), Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer and Walker, eds.， Academic Press ， London ， 1987 ); Handbook Of Experimental Immunology, VoluMes I-IV ( D. M. Weir and C. C.Blackwell， eds" 1986 ); Manipulating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y" 1986).實(shí)施例實(shí)施例l:白,藜醇促進(jìn)脂肪動(dòng)員該實(shí)施例表明，激活sirtuin的化合物白,蕃醇通過(guò)減少秀麗新桿線蟲中的脂肪積累而剌激脂肪代謝.在OP50細(xì)菌上生長(zhǎng)野生型N2秀麗新桿線蟲蜞蟲，并且暴露于 單獨(dú)的賦形刑(0.1%乙醇)或10、 50或100 pM白蘆蓼醇(在乙醇 中)過(guò)夜.用Nile Red染色顯現(xiàn)脂肪積累，如下文和Ashrafi K, et al. Nature 421: 268-27 (2003)中的進(jìn)一步描迷.困1中示出的結(jié)果表明用100 pM白聲藜醇處理，導(dǎo)致脂肪積累 減少卯％.類似地，10 pM或50 jiM白蘆藜醇存在下溫育蠕蟲，表 現(xiàn)出脂肪積累的顯著減少.脂肪積累的減少與用AICAR處理同樣顯 著或更顯著，AICAR是公知的AMPK和脂肪酸氣化激活刑 由白,攀醉激活的Sir2.1通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子DAF-16延遲酵母的壽命 (Tissenbaum and Guarente (2001) Nature 410: 227),與野生型秀 麗新桿線蟲相似，在胰鳥素信號(hào)傳遞缺陷的DAF-16突變?nèi)湎x (mgDf47) (Wolkow， et al. Science 290: 147， 2000)中，白,藜醇 刺激脂肪動(dòng)員并且減少脂肪積累(困2).這表明成年蠕蟲中白蘆蓁醇 對(duì)脂肪代謝的信號(hào)傳遞是通過(guò)不依賴于DAF-16的途徑發(fā)生的.因此，刺激sirtuin蛋白的白,蕃醇類型中的化合物可以促進(jìn)野生 型和突變麗新桿線蟲中的脂肪動(dòng)員.實(shí)施例2:煙跣胺促進(jìn)脂肪積累如果sirtuin蛋白的刺激劑減少脂肪積累，那么sirtuin蛋白的抑 制刑，如煙跣胺，應(yīng)該增加脂肪積累.在0、 1或10mM煙酰胺存在溫育秀麗新桿線蟲蠕蟲過(guò)夜，按上 文所述用Nile-Red染色.困3中所示的結(jié)果表明，蠕蟲表現(xiàn)出脂肪積 系的煙耽胺濃度依賴性增加.實(shí)施例3: Sir2是白,藜醇介導(dǎo)的脂肪動(dòng)員所必須的 在秀麗新桿線蟲蠕蟲中示出了 Sir2.1在脂肪代謝中的作用，其中 Sir2.1是RNA滅活的.在攜帶單獨(dú)的RNAi栽體或下文描述的編碼 Sir2.1 RNAi的栽體(R11A8.4)的細(xì)菌存在下使幼年成蟲生長(zhǎng)至成年. 在存在或缺乏白,幕醇的條件下生長(zhǎng)這些蠕蟲，用下文所述的Nile-Red 染色.困4中示出的結(jié)果表明，在攜帶Sir2.1 RNAi的細(xì)菌存在 下培養(yǎng)的蠕蟲沒有表現(xiàn)出白聲幕醇誘導(dǎo)的脂肪積累.這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)Sir2是介導(dǎo)白,幕醉的脂肪動(dòng)員作用所必須的.實(shí)施例4: AMPK是白,攀醇介導(dǎo)的脂脒動(dòng)員所必須的 上文已經(jīng)表明了 Sir2是介導(dǎo)白,藜醇對(duì)脂肪動(dòng)員的作用所必須 的.本實(shí)施例表明AMPK也是介導(dǎo)該作用所必須的.AMPK調(diào)節(jié)細(xì) 胞代謝、葡萄糖攝取和脂肪酸氧化的多個(gè)方面.已知很多改進(jìn)胰烏素 敏感性的治療劑和激素，如5-氨基咪唑-4-跣胺-l-p-D-呋喃核糖苷 (AICAR)和二甲雙胍(降低循環(huán)胰烏素水平)，激活對(duì)葡萄糖攝取 和脂肪酸氣化的AMPK信號(hào)傳遞.在哺乳動(dòng)物中，AMPK通過(guò)一系列復(fù)雜的步驟刺激脂肪酸氧化，從而調(diào)節(jié)脂肪代謝，所述步驟包括乙 酰輔醉A羧化蘇的確酸化/滅活，通過(guò)丙二耽輔躊A從終產(chǎn)物抑制中 釋放肉堿-棕櫚酰轉(zhuǎn)移蘇-1 (CPT-1)和肉堿辛酰轉(zhuǎn)移醉(COT)，以 及將脂肪酸轉(zhuǎn)移到線粒體中進(jìn)行氧化.我們檢索了秀麗新桿線蟲數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)基因產(chǎn)物與哺乳動(dòng)物 AMPK密切相關(guān)，即，TOC1.8和Par2,3; 5種基因編碼CPT-1的同 源物， 一種基因編碼COT的閎源物.在AICAR存在或不存在的條件 下，將秀麗新桿線蟲蠕蟲與攜帶單獨(dú)的RNAi栽體或抗TOC1.8或 F41E7.3的干擾RNA的細(xì)菌一起溫育，F(xiàn)41E7,3是COT的秀麗新桿 線蟲同源物.如下文所述，用Nile-Red顯現(xiàn)脂肪積累.結(jié)果表明， TOC1.8或COT的RNA滅活抑制了 AICAR刺激的脂肪動(dòng)員.因此， 對(duì)脂肪酸氣化的AICAR/AMPK信號(hào)傳遞在蠕蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞中是 保守的.然后在與白,藜醇一起溫育的秀麗新桿線蟲中研究TOC1.8和 COT滅活的作用.在白,攀醇存在或不存在的條件下，將秀麗新桿 線蟲蠕蟲與攜帶單獨(dú)的RNAi栽體或編碼TOCl,8的栽體或COT干 擾RNA的細(xì)菌一起溫育.如下文所述，用Nile-Red顯現(xiàn)脂肪積累，結(jié)果示于困5.在單獨(dú)的RNAi栽體存在下，白聲藜醇使正常蠕 蟲中的脂肪含重減少了 75% (困5， a).但是，哺乳動(dòng)物AMPK的 同源物TOC1.8的RNA滅活，或哺乳動(dòng)物COT的同源物F41E7.3的 RNA滅活，阻斷了白,攀醇刺激的脂肪動(dòng)員(參見困5的b和c). 這樣，AMPK是白聲幕醉誘導(dǎo)的脂肪動(dòng)員所必須的.這樣，我們得出 結(jié)論，類似于直接的AMPK激活劑A1CAR，白聲蓁醇剌激蠕蟲中對(duì)脂肪代謝的AMPK信號(hào)傳遞級(jí)聯(lián).相反，對(duì)壽命的胰烏素信號(hào)傳遞 下游的轉(zhuǎn)錄因子DAF-16的RNA滅活，或通過(guò)突變導(dǎo)致的DAF-16的 滅活，對(duì)白,蓉醇刺激的脂肪動(dòng)員沒有影響(參見困5， d).因此，通過(guò)AMPK和COT的RNA滅活抑制白,蕃酵的作用， 提示脂肪動(dòng)員需要激活對(duì)脂肪酸氣化的AMPK信號(hào)傳遞級(jí)聯(lián).實(shí)施例5: AICAR和白,藜醇刺激AMPK和ACC褲酸化 AMPK和COT的RNA滅活提示，白聲藜醇和AICAR在蠕蟲中 動(dòng)員脂肪的作用，依賴于對(duì)脂肪酸氧化的AMPK信號(hào)傳遞級(jí)聯(lián)的激 活.為了獲得AMPK激活的直接證據(jù)，我們檢驗(yàn)了白聲藜醇刺激的 細(xì)胞是否表現(xiàn)出AMPK中蘇氨酸殘基172的礴酸化增加或絲氨酸79 的乙酰輔醉A羧化酶(ACC)的鱗酸化增加，它們分別是與AMPK 的激活和ACC的滅活相關(guān)的修飾，在PBS中洗涂CHO-HIR哺乳動(dòng)物細(xì)胞，并且在無(wú)血清的DMEM 中溫育過(guò)夜，然后用500 AICAR (陽(yáng)性對(duì)照)或12.5 pM、 25 或50 白,藜醇處理.30分鐘后收獲細(xì)胞，立即將裂解物在SDS 中煮沸，并且用位點(diǎn)特異性抗體進(jìn)行Western分析.Thrl72的AMPK 礴酸化表明了該激酶的激活.活性AMPK在絲泉酸79對(duì)ACC進(jìn)行 礴酸化和滅活.困6中示出的結(jié)果表明AMPK在172位的蘇氨酸砩酸化，ACC 在笫79位的絲氨酸鱗酸化，因此，同AICAR類似，白,藜醇刺激AMPK 和ACC的褲酸化.因此，白聲藜醇從脂肪生成組織動(dòng)員脂肪的能力 至少部分是由于激活了脂肪酸氧化的AMPK信號(hào)傳遞.也用500 )LiM AICAR (陽(yáng)性對(duì)照)、DMSO、 100nM、 500 nM、 2.5 HM、 12.5 jiM、 25pM或50jiM白,幕醇處理CHO細(xì)胞，并且按上 文所述進(jìn)行Western印跡分析。切下Western印跡，并且對(duì)砩酸化的 (活性)AMPK、總AMPK、褲酸化的乙酰輔酶A羧化酶(ACC )(它 是AMPK的下游靶)和微管蛋白(它作為加樣對(duì)照)進(jìn)行重新探測(cè). 圖7表示CHO細(xì)胞中濃度增加的白,藜醇對(duì)AMPK的激活.也在用乙醇或白,藜醇處理的3T3-L1脂肪細(xì)胞中觀察到了反映 AMPK活性的ACC褲酸化.用乙醇或白,蓁酵溫育3T3-L1細(xì)胞， 然后在誘導(dǎo)它們從親代3T3成纖維細(xì)胞系分化為脂肪細(xì)胞后6天或10天收獲.困8顯示白,藜醇在笫6天和笫IO天都剌激ACC的磷酸化. 當(dāng)在收獲前在無(wú)血清的培養(yǎng)基中溫育細(xì)胞過(guò)夜時(shí)，ACC也被褲酸化 (泳道標(biāo)為"SF").笫6天的S1RT1印跡中多余一條帶的原因未知， 但我們假設(shè)它可能是SIRT1的修飾形式.微管蛋白作為加樣對(duì)照.對(duì)HEP3B人類肝細(xì)胞瘸細(xì)胞也觀察到了相似的結(jié)果.在這種情 況下，在超量表達(dá)SIRT1的細(xì)胞中(見困9，右邊的4個(gè)泳道)和SIRT1 敲除的細(xì)胞中(困9,左邊的泳道)測(cè)量了 ACC的褲酸化.ACC的 褲酸化沒有受影響，表明在此情況下，白,蓁醇可能不是通過(guò)SIRT1 起作用.微管蛋白作為加樣對(duì)照.為了進(jìn)一步研究白,幕醇是否是通過(guò)SIRT1起作用，用對(duì)照 (GFP)逆轉(zhuǎn)錄病毒、SIRT1、 SIRT1 siRNA或SIRT1顯性失活物 (SHY)感染3T3-L1脂肪細(xì)胞.用AICAR、乙醉或白,藜醇處理細(xì) 胞.如上文所述，收獲細(xì)胞，并且制備裂解物，用于采用位點(diǎn)特異性 抗體進(jìn)行Western印跡分析，困10顯示了 ACC和AMPK的褲酸化， 這反映了 AMPK活性.也示出了每種情況的總蛋白.也注意到加樣 對(duì)照，即GAPDH和微管蛋白也在這些細(xì)胞中表達(dá)，但水平極低，可 能僅僅反映了未分化3T3細(xì)胞的存在.困IO也在最右邊顯示了獨(dú)立 的劑量-反應(yīng)曲線.在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEFs)中也觀察到了相似的結(jié)果.困11 表明，在已知的AMPK激醉LKB1不存在的條件下，白,藜醇仍然 具有作用.左倒困片中的細(xì)胞在收獲前在不存在血清的條件下溫育過(guò) 夜；右側(cè)困片中的細(xì)胞不在無(wú)血清的條件下溫育.盡管LKB1 -/-細(xì)胞 的加樣較低，白,蓁醇仍然導(dǎo)致AMPK和ACC礴酸化的上調(diào).微管 蛋白作為加樣對(duì)照.實(shí)施例6:白,蓼醉在脂肪細(xì)胞中刺激脂肪動(dòng)員并抑制脂肪生成 為了獲得白,蓁醇在生理相關(guān)的細(xì)胞中影響脂肪代謝的證據(jù)，我 們檢驗(yàn)了增加白蘆攀醇的濃度對(duì)3T3-L1和NIH3T3細(xì)胞分化和脂肪 含童的影響.使3T3-L1或NIH3T3細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合，并且使其包裝 2天，此時(shí)通過(guò)在濃度為0、 12,5和25|nM賦形刑(單獨(dú)的乙醇)或 白蘆藜醇存在下加入異丁基甲基黃嘌呤、地塞米松和胰烏素而起始分 化.分化10天后，通過(guò)如下文所述的OilRedO染色評(píng)估脂肪含量.困12中所示的結(jié)果表明25 pM或更高的白,蓁醇濃度減少了 3T3H 和NIH3T3細(xì)胞中細(xì)胞脂肪的量.NIHJT3細(xì)胞中的結(jié)果證實(shí)了在秀 麗新桿線蟲中獲得的結(jié)果.這些結(jié)果表明，白聲攀醇抑制脂肪生成(或 脂肪細(xì)胞分化).AICAR在3T3細(xì)胞中剌激AMPK信號(hào)傳遞并且抑制脂肪生成. 為了區(qū)分白,藜醇的作用是抑制3T3細(xì)胞分化還是從3T3細(xì)胞動(dòng)員脂 肪，我們檢驗(yàn)了白聲幕醉是否抑制脂肪生成轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)刑，如PPAR-y 的表達(dá).我們發(fā)現(xiàn)暴露于白,藜醇的細(xì)胞沒有表現(xiàn)出典型地伴隨細(xì)胞 分化為脂肪細(xì)胞的PPAR-y RNA的增加.這表示白,蕃醇抑制細(xì)胞分 化為脂肪細(xì)胞.這也可能提示白,藜醇抑制PPAR-r活性或表達(dá).然后，我們用單獨(dú)的pMX或編碼PPAR-y的pMX感染3T3前脂 肪細(xì)胞/脂肪細(xì)胞，并且檢驗(yàn)了白,蓁醇對(duì)3T3細(xì)胞分化的影響.用 表達(dá)GFP或PPAR-y的質(zhì)粒感染3T3-L1和NIH3T3細(xì)胞，并且生長(zhǎng) 至匯合，按照下文所迷，在賦形刑(乙醇)中的0 pM、 25 或50 pM 白蘆藜醇存在下，細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞.分化8天后，固定細(xì)胞，并 且用Oil red O染色.如預(yù)期的，PPAR-丫的超量表達(dá)部分抵消了白, 蓁醇對(duì)3T3前脂肪細(xì)胞分化的抑制(困13).該觀察結(jié)果表明，白, 藜醇抑制PPAR-y激活的脂肪細(xì)胞分化.為了進(jìn)一步檢驗(yàn)白,藜醉對(duì)sir2的激活是否可以促進(jìn)哺乳動(dòng)物細(xì) 胞中的脂肪動(dòng)員或抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的分化，我們用野生型SIRT1 或SIRT1的脫乙酰蘇缺陷形式感染了生長(zhǎng)的細(xì)胞.在編碼GFP、SIRT1 或SIRT1的脫乙跣酶缺陷形式(SIRT1SHY)(描述于Vaziri et al. (2001) Cell 107: 149)的病毒存在下生長(zhǎng)NIH3T3細(xì)胞.在賦形刑 (乙醇)中的0 ^M、 12.5 ^M或25 nM白蘆藜醇存在下，細(xì)胞分化 為脂肪細(xì)胞.分化8天后，固定細(xì)胞，用OilredO染色.困14示出 的結(jié)果表明，與編碼GFP的病毒感染的細(xì)胞(陰性對(duì)照)相比，脂 肪含量減少，而超童表達(dá)SIRT1的脫乙酰蘇缺陷形式的3T3細(xì)胞表 現(xiàn)出脂肪含量增加.這些結(jié)果證實(shí)了在蠕蟲中觀察到的效果，即，白 ,攀醇導(dǎo)致的SIRT1激活似乎減少了脂肪含童，并且，煙酰胺導(dǎo)致的 SIRT1滅活似乎增加了脂肪含量.這樣，我們得出結(jié)論，sirtuin在調(diào) 節(jié)脂肪細(xì)胞分化和含量中起直接作用.用SIRT1超量表達(dá)觀察到的Oil Red O染色的減少接近于用白/藜醇刺激細(xì)胞時(shí)觀察到的水平.該觀察結(jié)果提出了 一個(gè)問趙，即，SIRT1 脫乙酰酶缺陷的突變體是否會(huì)逆轉(zhuǎn)白,藜醇的作用.我們發(fā)現(xiàn)，在 SIRT1脫乙酰酶缺陷的突變體中，正常情況下由白,蓽醇誘導(dǎo)的脂肪 含量減少實(shí)際上部分減少了.因此，這些結(jié)果表明，除了減少脂肪積累，白,攀醇抑制脂肪生 成，該抑制也至少部分是Sir2介導(dǎo)的.實(shí)施例7:實(shí)施例3-6的材料和方法 林除特別指出，按照文獻(xiàn)中的描述在25°C維持秀麗新桿線蟲林 (Brenner ( 1974) Genetics 77: 71).野生型參照抹是N2 Bristol; 突變林是sir-2.1 (ok434)、 T01C8.1 (ok524)和daf-16 (邁gDf47), Daf-16 (mgDf47)是從Ruvkun laboratory, MGH獲得的；所有其 它抹是從Caenorhabditis Genetics Center獲得的(來(lái)自秀麗新桿線蟲基因敲除共生體).生長(zhǎng)條件和白蘆藜醉暴露在Nile Red存在下生長(zhǎng)同步饑俄的Ll墦蟲.25°C下在NGM平 板上使蠕蟲抹生長(zhǎng)大約48小時(shí)，直到達(dá)到幼年成蟲階段.然后用M9 緩沖液洗滌20 - 30只幼年成蟲2次，轉(zhuǎn)移到含有OP50或攜帶L4440 RNAi對(duì)照栽體的HTT5大腸桿菌的新的NGM/Nile red實(shí)驗(yàn)平板上. 對(duì)于比較煙酰胺和白,攀醇對(duì)脂肪動(dòng)員的影響的實(shí)驗(yàn)，用單獨(dú)的賦形 刑或煙跣胺(PBS中)或單獨(dú)的賦形劑和白,藜醇(乙醇或DMSO 中)包被OP50板.在100|LiM白,攀醇存在或不存在的條件下，用攜帶L4440 RNAi 栽體對(duì)照或特定的RNAi克隆T01C8.1、 AMPK; R11A8.4、 sir-2.1; 或F41E7.6 COT的HTT5大腸桿菌接種RNAi平板.將幼年成蟲轉(zhuǎn) 移到含有合適的栽體、Nile Red染料和藥物的平板上，然后在25°C 下維持.白,藜醇處理后24小時(shí)，通過(guò)UV顯微鏡評(píng)估Nile Red染 色.白,藜醇/煙酰胺稀釋物將白蘆藜醉(Indofine #0249")溶解于乙醉或DMSO中，制成 10mM的儲(chǔ)存液.將白蘆藜醇加入含有OP50或RNAi表達(dá)細(xì)菌79(HT11S)的60mm NGM瓊脂培養(yǎng)皿，達(dá)到IOjliM、 SOpM和lOOjaM 的終濃度.也將Nile Red加入平板，達(dá)到0.05|Lig/ml的終濃度.在包 含Nile Red的PBS中稀釋煙酰胺(Supelco#; 47865-U),并且加入 到含有OP50的60mM培養(yǎng)贓，達(dá)到lmM、 lOmM或lOOmM的終濃 度.脂肪染色Nile Red:將Nile Red粉末(Sigma #N-3013 )以500fag/ml溶解 在丙嗣中，在包含合適藥物的IX褲酸緩沖的鹽水(PBS)中稀釋， 并且涂抹在亊先以0.05pg/ni1的終濃度接種了 OP50或RNAi細(xì)菌的 線蟲生長(zhǎng)培養(yǎng)基(NGM)平板的表面.監(jiān)測(cè)脂肪含量，并且通過(guò)熒 光顯微鏡記錄.熒光顯微術(shù)和困像采集采用裝有CY3濾光器的Nikon TE2000S顯微鏡(發(fā)射535-685nm)顯現(xiàn)Nile Red染色.采用連接于Nikon顯微鏡的SPOT RT 單色數(shù)碼照相機(jī)，用SPOT RT軟件3.5版捕獲困像，用相同的設(shè)置 和詠光時(shí)間，然后改變?yōu)榧t色調(diào)色板，從而采集所有Nile red圖像.飼養(yǎng)RNAi將攜帶RNAi栽體L4440的HT115大腸桿菌用于維持飼養(yǎng)，在 含有50jLig/ml氨節(jié)青審素的10ml LB培養(yǎng)基中將含有實(shí)驗(yàn)RNAi克隆 的細(xì)菌培養(yǎng)18小時(shí).將350^1每種培養(yǎng)物點(diǎn)樣到含有NGM瓊脂、6mM IPTG和25pg/ml羧千青審素的60mm培養(yǎng)亞中.溫育過(guò)夜(室溫下) 后，與困標(biāo)中指出的實(shí)驗(yàn)化合物一起將Nile Red加在每個(gè)培養(yǎng)皿頂 部，達(dá)到0.05ng/ml的終濃度.24小時(shí)后，通過(guò)UV顯微鏡評(píng)估Nile Red 染色.對(duì)于檢驗(yàn)的每一批RNAi克隆，包括了 L4440 (單獨(dú)的栽體). 僅僅當(dāng)大多數(shù)動(dòng)物表現(xiàn)出某種表型時(shí)，確定該表型.通過(guò)至少3輪額 外的測(cè)試證實(shí)所有表型.細(xì)胞培養(yǎng)和Oil red O染色在DMEM + 10%牛血清中維持3T3-L1和NIH3T3細(xì)胞.按照以 前的描述進(jìn)行3T3-L1細(xì)胞的脂肪細(xì)胞分化(MacDougald， O. A. and Lane, M. D. (1995) . Transcriptional regulation of gene expression during adipocyte differentiation. An肌.Rev. Biochem. 64， 345-373). 在與3T3-L1相同的條件下誘導(dǎo)NIH3T3細(xì)胞形成脂肪細(xì)胞，區(qū)別在牛血清中用胰烏素、地塞米松和異丁基甲基 黃嘌呤處理6天.按照以前的描述用Oil Red-O對(duì)脂肪細(xì)胞染色并且 進(jìn)行定量(Ramirez-Zacarias JL， Castro-Munozledo F， Kuri-Harcuch W. Histochemistry'1992 Jul; 97 (6): 493-7). 逆轉(zhuǎn)錄病毒產(chǎn)生和感染用哺乳動(dòng)物逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)栽體pMX (描述于Tontonoz et al. (1994) Genes Dev. 8: 1224，并且由Gary Nolan提供)構(gòu)建并表達(dá) 全長(zhǎng)鼠PPAR丫2 (上文引用的Tontonoz等人的文獻(xiàn))、人SIRT1、人 SIRT1SHY (Vaziri et al" supra)和eGFP.通過(guò)將逆轉(zhuǎn)錄病毒構(gòu)建 體褲酸鈣轉(zhuǎn)染到Phoenix親嗜性包裝細(xì)胞(描述于上文引用的Tontonoz 等人的文獻(xiàn)，并且由Gary Nolan提供)而產(chǎn)生重組逆轉(zhuǎn)錄病毒，將 所述病毒維持在DMEM + 10。/o胎牛血清中.笫二天，更換培養(yǎng)基， 在包裝細(xì)胞轉(zhuǎn)染后48和72小時(shí)收獲病毒上清液兩次.將病毒上清液 通過(guò)0.2^iM注射器濾膜，并且在加入polybrene后涂布到預(yù)先匯合的 3T3-L1和NIH3T3細(xì)胞，達(dá)到6叫/ml的終濃度.笫二天，更換培養(yǎng) 基，使細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合，然后分化為脂肪細(xì)胞.實(shí)施例8:其它的sirtuin激活刑刺激脂肪動(dòng)員在lOO)iM SIRT1激活刑紫鉚因、非瑟嗣、piceatannol和櫟精存 在或不存在的條件下溫育秀麗新桿線蟲蜞蟲，按照上文所述測(cè)量蠕蟲 的脂肪含量.困15中示出的結(jié)果表明，這些SIRT1激活刑與白蘆藜 醉具有相似的作用，即，它們刺激脂肪動(dòng)員.此外，如困16和17所 示，櫟精和非瑟稱在低至lOnM的濃度減少脂肪積累.實(shí)施例9:白,藜醇類似物對(duì)秀麗新桿線蟲中脂肪積累的作用 在不存在(1% v/v DMSO)或存在IOO^iM 3，5-二羥基-4'-碟甲基-反式絮的條件下將秀麗新桿線蟲蠕蟲溫育24小時(shí).觀察到了 3，5-二幾基-4'-碟甲基-反式寬使脂肪染色顯著減少(困18).也在不存在 (2.5% v/v DMSO)或存在lOOuM白,藜醇或lOOpM順式寬的條件下溫育LI期的動(dòng)物48小時(shí).觀察到了白產(chǎn)藜醇顯著減少脂肪積系.與對(duì)照相比，用順式寬觀察對(duì)蝶蟲的脂肪染色沒有顯著影響(困19).按照Ashrafi et al" Nature 421: 268-27 (2003)中的描述，用抑制親脂染料Nile Red觀察脂肪積累.實(shí)施例10:白,幕醇對(duì)TNF-a處理的胰島素抗性脂肪細(xì)胞的作用本實(shí)施例表明白,藜醇增強(qiáng)脂肪細(xì)胞的胰島素敏感性.如 Kabayama et al.， Glycobiology 15: 21-29( 2005 )和Wu et al., Mol. Cell 3: 151-8 (1999)的描述，用TNF-oc處理脂肪細(xì)胞.用陽(yáng)性對(duì)照羅格 列酮處理，增加了放射性葡萄糖的攝取，表明增加了 TNF-a處理的脂 肪細(xì)胞的胰烏素敏感性.如困20中所示，用5 mM或15 白聲蕃 醇處理，部分挽救了 TNF-oc處理的脂肪細(xì)胞，使處理細(xì)胞中的胰烏素 敏感性恢復(fù).困20中的箭頭表明需要的增加的放射性葡萄糖攝取的 效果.實(shí)施例11:白,幕醇與其它AMPK激活刑一樣，可以刺激脂肪 生成細(xì)胞中的脂肪酸氣化胰烏素是促進(jìn)多余的能量?jī)?chǔ)存為脂肪的主要激素.在具有脂肪生 成能力的細(xì)胞中，胰島素信號(hào)傳遞促進(jìn)了脂肪沉積.當(dāng)脂肪沉積在該 過(guò)程中變得過(guò)量時(shí)，稱作脂肪生成異常.脂肪生成異常與胰烏素抗性 以及循環(huán)胰島素和甘油三癍水平的進(jìn)行'汰增加、高血壓傾向和作為代 謝綜合征的特征的動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)[Muller-Wieland， D. and J. Kotzka, SREBP-1: gene regulatory key to syndrome X Aim N Y Acad Sci， 2002.967: p. 19-27.胰烏素增敏劑，如AICAR (5-氨基咪唑-4-酰胺-l-(3-D-呋喃核糖苷)和二甲雙胍，激活A(yù)MP激醉，并且從非脂 肪細(xì)胞動(dòng)員脂肪，從而減少胰烏素抗性和血清脂質(zhì)水平Lin， H. Z.， et al" Metformin reverses fatty liver disease in obese, leptin- deficient mice. Nat Med, 2000.6(9): p. 998-1003; Bergeron, R" etal" Effect of 5-aminoimidazole-4-carboxamide-l-beta-D-ribofuranoside infusion on in vivo glucose and lipid metabolism in lean and obese Zucker rats. Diabetes, 2001.50 (5): p, 1076-82.存在充分的證據(jù)表明衍生自酒 的多酚化合物減少血清脂質(zhì)水平和動(dòng)脈粥樣硬化斑[Waddington， E.， I. B. Puddey, and K. D. Croft, Red wine polyphenolic compounds inhibitatherosclerosisinapolipoproteinE-deficient miceindependently of effects on lipid peroxidation. Am J Clin Nutr, 2004.79 (1): p. 54-61.我們的觀察結(jié)果，即，白蘆藜醇激活A(yù)MP激酶， 表明該藥物與AICAR和二甲雙胍，可能可以有效減少脂肪生成異常并增加胰烏素敏感性.很多報(bào)道表明，AICAR和二甲雙胍激活A(yù)MPK，而AMPK又使 得乙酰輔蘇A羧化醃(ACC )磷酸化并抑制該醉(綜述于Kemp, B. E., et al" Dealing with energy demand: the AMP-activated protein kinase. Trends Biochem Sci, 1999.24 (1): p. 22-5; Kemp, B. E.， et al" AMP-activated protein kinase, super metabolic regulator. Biochem Soc Trans, 2003.31 ( Ptl): p. 162-8; Viollet， B.， et al" The AMP- activated protein kinase alpha2 catalytic subunit controls whole-body insulin sensitivity. J Clin Invest, 2003.111 (1): p.91-8; Viollet， B.， et al., Physiological role of AMP-activated protein kinase (AMPK): insights from knockout mouse models. Biochem Soc Trans, 2003. 31 (Pt 1 ): p. 216-9; Ruderman， N. B" et al" Malonyl-CoA， fuel sensing, and insulin resistance. Am J Physiol, 1999.276 (1 Pt 1): p. El-E18; Mu， J., E. R. Barton, and M. J, Birnbaum, Selective suppression of AMP-activated protein kinase in skeletal muscle: updated on'lazy mice'. Biochem Soc Trans, 2003, 3 (Pt I): p. 236-41;和Zhou, G.， et al. ， Role of AMP-activated protein kinase in mechanism of metformin action. J Clin Invest, 2001.108 (8): p. 1167-74 ) 滅活A(yù)CC具有雙重效果，即抑制從頭脂肪生物合成和通過(guò)丙二酰輔醉A從終產(chǎn) 物抑制中釋放脂肪酸轉(zhuǎn)移酶，即肉堿-丙二酰轉(zhuǎn)移醉(CPT-1)和肉堿 辛跣轉(zhuǎn)移酶(COT)Morillas, M" et al" Identification of the two histidine residue responsible for the inhibition by malonyl-CoA in peroxisomal carnitine octanoyltransferase from rat liver. FEES Lett, 2000. 466 (1): p. 183-6.結(jié)果是減少了從頭脂肪生物合成，并且增 加了脂肪酸氣化FAO，隨后減少了細(xì)胞脂肪含量.證明了白,蓁醇增加AMP激蘇和ACC的鱗酸化，參見困7，我 們證實(shí)了白,幕醇在兩種肝細(xì)胞瘤細(xì)胞系中刺激從棕桐酸生成C02 (表l). C02生成增加了 3-6倍，反映了用AICAR獲得了刺激. 總之，我們的數(shù)據(jù)表明，白,藜醇可以激活對(duì)脂肪生成醉ACC的AMPK信號(hào)傳遞，減少丙二酰輔醉A的生成，以便刺激脂肪代謝. 后一事件抑制了底物流入從頭脂肪生物合成，并且刺激脂肪酸氧化.表l:如同其它AMPK激活刑，白,藜醇可以刺激脂肪酸氧化. 按照方法部分的描述用賦形刑對(duì)照(合適的1% DMSO或H20)、白 ,藜醇(IOjiM,溶于1% DMSO)、 AICAR (500 溶于H20)或二甲雙胍(lmM，溶于H20)刺激肝細(xì)胞瘤細(xì)胞中的14C-棕櫚酸 氣化4小時(shí).示出了白,幕醇對(duì)C02生成的倍數(shù)效果.14C -C02生成(nmol/hr/106個(gè)細(xì)胞)(倍數(shù)效果)化合物 賦形劑白,藜醇 ALCAR 二甲雙胍H4HEC3細(xì)胞 1 2.3 2.3 2HepG2細(xì)胞 1 6 5 3.5方法將14C-棕櫚酸氣化為酸可溶的產(chǎn)物(改進(jìn)自H4IIEC3細(xì)胞)Witters， L. A. and B. E. Kemp, Insulin activation of acetyl-CoA carboxylase accompanied by inhibition of the S'-AMP-activated protein kinase. J Biol Chem， 1992.267 (5): p. 2864-7，并且按照上 文所述維持H印G2細(xì)胞.在實(shí)驗(yàn)前一天將細(xì)胞(106個(gè)細(xì)胞/T25)種 植在T25燒瓶中.實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，用測(cè)定緩沖液(U4mMNaCl、 4.7 mM KCL、 1,2 mM KH2P04、 1.2 mM MgS04、 11 mM葡萄糖)洗滌細(xì) 胞，然后在賦形刑或白,蓁醉(10 nM)或AICAR (500nM)存在下 用14C-棕桐酸(0.4nCi/ml)標(biāo)記4小時(shí).溫育結(jié)束時(shí)，用塞子和浸漬了 250 jnl 2N NaOH的l'x 1.5"Whatman濾紙代替每個(gè)T25燒瓶的蓋子.用2 ml 6N HCL注射 每個(gè)燒瓶，并且放置在水平位置10分鐘，靜置過(guò)夜.笫二天早晨， 將1 ml H20和61|il NaOH加入玻璃閃爍瓶中，將每個(gè)T25燒瓶的濾 紙轉(zhuǎn)移到各自的閃爍瓶中.將10 ml Aquasol加入每個(gè)閃爍瓶中，靜 置2小時(shí)，隨后渦旋閃爍瓶以溶解NaH"C02，并且在閃爍計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù).結(jié)果表示為nmols/h/106個(gè)細(xì)胞，并且顯示為倍數(shù)效果.14C02 生成是0.3 一 1.8nmols/h/106個(gè)細(xì)胞.重復(fù)實(shí)驗(yàn)三次. 等同方案本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，或采用常規(guī)實(shí)驗(yàn)就能夠確定此處描述 的特定實(shí)施方案的許多等同方案.所述等同方案意欲包括在權(quán)利要求 中.
權(quán)利要求
1. 治療或預(yù)防有需要的受試者中的胰島素抗性病癥的方法，包括給有需要的受試者施用治療有效量的增加細(xì)胞中sirtuin的活性和/或蛋白水平的試劑。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中所述試刑是激活sirtuin的化合物， 或其鹽或前藥.
3. 權(quán)利要求1的方法，其中所述激活sirtuin的化合物包括選自 式1-18的化合物的化合物.
4. 權(quán)利要求3的方法，其中所述激活sirtuin的化合物是白聲藜 醇、非瑟稱、紫鉚因、piceatannol或櫟精.
5. 權(quán)利要求1的方法，進(jìn)一步包括給受試者施用笫二試刑，所 述笫二試刑(i)增加細(xì)胞中sirtuin的活性或蛋白水平；增加細(xì)胞中 5'-AMP-激活的蛋白激酶(AMPK)的活性或蛋白水平；或是抗糖尿 病劑.
6. 權(quán)利要求5的方法，其中所述第二試劑是抗糖尿病劑.
7. 減輕受試者體重或防止受試者體重增長(zhǎng)的方法，包括給有需 要的受試者施用治療有效量的增加細(xì)胞中sirtuin的活性或蛋白水平的 試劑.
8. 權(quán)利要求7的方法，其中所述試刑是激活sirtuin的化合物， 或其鹽或前藥.
9. 權(quán)利要求7的方法，其中所述激活sirtuin的化合物包括選自 式1-18的化合物的化合物.
10. 權(quán)利要求9的方法，其中所述激活sirtuin的化合物是白蘆藜 醇、非瑟稱、紫鉚因、piceatannol或櫟精.
11. 權(quán)利要求7的方法，進(jìn)一步包括給受試者施用笫二試刑，所 述笫二試劑(i)增加細(xì)胞中sirtuin的活性或蛋白水平；增加細(xì)胞中 5'-AMP-激活的蛋白激蘇(AMPK)的活性或蛋白水平；或是抗肥胖 刑.
12. 權(quán)利要求ll的方法，其中所述笫二試刑是抗肥胖劑.
13. 促進(jìn)有需要的受試者中體重增長(zhǎng)的方法，包括給有需要的受 試者施用治療有效量的減少細(xì)胞中sirtuin的活性或蛋白水平的試劑.
14. 權(quán)利要求13的方法，其中所述試刑是抑制sirtuin的化合物.
15. 權(quán)利要求13的方法，其中所述抑制sirtuin的化合物包括選 自式19-21的結(jié)構(gòu)式.
16. 權(quán)利要求13的方法，其中所迷抑制sirtuin的化合物是煙酰胺.
17. 權(quán)利要求13的方法，進(jìn)一步包括給受試者施用笫二試劑.
18. 權(quán)利要求13的方法，其中所述笫二試劑是體重增長(zhǎng)促進(jìn)刑.
19. 權(quán)利要求l的方法，其中所述受試者是人.
20. 權(quán)利要求7的方法，其中所述受試者是人.
21. 權(quán)利要求13的方法，其中所述受試者是人.
22. 防止具有脂肪生成能力的細(xì)胞中的脂肪積累的方法，包括使 細(xì)胞接觸增加sirtuin的活性或蛋白水平的試劑.
23. 增強(qiáng)細(xì)胞中的脂肪積累或脂肪生成的方法，包括使細(xì)胞接觸 減少sirtuin的活性或蛋白水平的試刑.
24. 權(quán)利要求22的方法，其中所述具有脂肪生成能力的細(xì)胞是肝 細(xì)胞、胰細(xì)胞或肌細(xì)胞.
25. 權(quán)利要求23的方法，其中所述細(xì)胞是脂肪細(xì)胞.
26. 防止前脂肪細(xì)胞分化的方法，包括使前脂肪細(xì)胞接觸增加細(xì) 胞中sirtuin的活性或蛋白水平的試劑，使得前脂肪細(xì)胞的分化被抑 制.
27. 權(quán)利要求26的方法，其中所述細(xì)胞是體外細(xì)胞.
28. 鑒定調(diào)節(jié)體重或體重增長(zhǎng)的試刑的方法，包括(i) 鑒定調(diào)節(jié)sirtuin的試刑；和(ii) 確定所述試刑對(duì)體重增長(zhǎng)的影響，其中所迷試劑對(duì)體重或體重 增長(zhǎng)的影響的存在，表明所述試劑調(diào)節(jié)體重或體重增長(zhǎng).
29. 鑒定治療或預(yù)防受試者中肥胖、胰烏素抗性、代謝綜合征或 糖尿病的試刑的方法，包括(i) 鑒定激活sirtuin的試刑；和(ii) 確定所述試劑對(duì)肥胖、胰烏素抗性、代謝綜合征或糖尿病的影 響，其中肥胖、胰烏素抗性、代謝綜合征或糖尿病的存在、程度或發(fā) 生的減少，表明所迷試刑是治療或預(yù)防所述狀況的試劑.
全文摘要
此處提供了用于調(diào)節(jié)sirtuin的活性或水平，從而治療或預(yù)防受試者中的肥胖或胰島素抗性病癥，如糖尿病的方法和組合物。示例的方法包括使細(xì)胞接觸激活或抑制sirtuin的化合物，從而分別增加或減少脂肪積累。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK101247793SQ200480039345
公開日2008年8月20日 申請(qǐng)日期2004年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月29日
發(fā)明者D·A·辛克萊爾, M·亞歷山大-布里奇斯 申請(qǐng)人:哈佛大學(xué)校長(zhǎng)及研究員協(xié)會(huì);綜合醫(yī)院公司